SA517381720B1 - تركيبة وسط لتحضير سم البتيلينيوم - Google Patents
تركيبة وسط لتحضير سم البتيلينيوم Download PDFInfo
- Publication number
- SA517381720B1 SA517381720B1 SA517381720A SA517381720A SA517381720B1 SA 517381720 B1 SA517381720 B1 SA 517381720B1 SA 517381720 A SA517381720 A SA 517381720A SA 517381720 A SA517381720 A SA 517381720A SA 517381720 B1 SA517381720 B1 SA 517381720B1
- Authority
- SA
- Saudi Arabia
- Prior art keywords
- medium
- apf
- eee
- haha
- rrr
- Prior art date
Links
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 title claims abstract description 13
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 title claims abstract description 13
- 239000013028 medium composition Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 claims abstract description 65
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims abstract description 65
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims abstract description 65
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 62
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 37
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 claims abstract description 37
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims abstract description 31
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims abstract description 31
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims abstract description 20
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 108010068370 Glutens Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 241000209140 Triticum Species 0.000 claims abstract description 8
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 235000021312 gluten Nutrition 0.000 claims abstract description 8
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims abstract description 7
- 240000004713 Pisum sativum Species 0.000 claims abstract description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 36
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 19
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 14
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 14
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 claims description 14
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 12
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 12
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 claims description 4
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 claims description 4
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 claims description 3
- 101100234002 Drosophila melanogaster Shal gene Proteins 0.000 claims description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 244000166071 Shorea robusta Species 0.000 claims description 2
- 235000015076 Shorea robusta Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940096118 ella Drugs 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N ulipristal acetate Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1[C@@H]1C2=C3CCC(=O)C=C3CC[C@H]2[C@H](CC[C@]2(OC(C)=O)C(C)=O)[C@]2(C)C1 OOLLAFOLCSJHRE-ZHAKMVSLSA-N 0.000 claims description 2
- 241000270299 Boa Species 0.000 claims 2
- IWDQPCIQCXRBQP-UHFFFAOYSA-M Fenaminosulf Chemical compound [Na+].CN(C)C1=CC=C(N=NS([O-])(=O)=O)C=C1 IWDQPCIQCXRBQP-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 241001556567 Acanthamoeba polyphaga mimivirus Species 0.000 claims 1
- 101100309713 Arabidopsis thaliana SD129 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100123850 Caenorhabditis elegans her-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100148729 Caenorhabditis elegans sar-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101100478314 Caenorhabditis elegans sre-1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 102100022928 DNA repair protein RAD51 homolog 1 Human genes 0.000 claims 1
- 244000089409 Erythrina poeppigiana Species 0.000 claims 1
- 241000989913 Gunnera petaloidea Species 0.000 claims 1
- 101150092640 HES1 gene Proteins 0.000 claims 1
- 101000620735 Homo sapiens DNA repair protein RAD51 homolog 1 Proteins 0.000 claims 1
- 206010027783 Moaning Diseases 0.000 claims 1
- 101100284799 Mus musculus Hesx1 gene Proteins 0.000 claims 1
- DYAHQFWOVKZOOW-UHFFFAOYSA-N Sarin Chemical compound CC(C)OP(C)(F)=O DYAHQFWOVKZOOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 206010051379 Systemic Inflammatory Response Syndrome Diseases 0.000 claims 1
- 102100033121 Transcription factor 21 Human genes 0.000 claims 1
- 101710119687 Transcription factor 21 Proteins 0.000 claims 1
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 claims 1
- 238000005430 electron energy loss spectroscopy Methods 0.000 claims 1
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 claims 1
- PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N medroxyprogesterone acetate Chemical compound C([C@@]12C)CC(=O)C=C1[C@@H](C)C[C@@H]1[C@@H]2CC[C@]2(C)[C@@](OC(C)=O)(C(C)=O)CC[C@H]21 PSGAAPLEWMOORI-PEINSRQWSA-N 0.000 claims 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims 1
- 239000012896 selective serotonin reuptake inhibitor Substances 0.000 claims 1
- 229940124834 selective serotonin reuptake inhibitor Drugs 0.000 claims 1
- 239000004071 soot Substances 0.000 claims 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 37
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 30
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 18
- 208000024777 Prion disease Diseases 0.000 abstract description 18
- 208000010544 human prion disease Diseases 0.000 abstract description 17
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 8
- 241000193464 Clostridium sp. Species 0.000 abstract 1
- 235000016816 Pisum sativum subsp sativum Nutrition 0.000 abstract 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 abstract 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 162
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 81
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 44
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 43
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 43
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 41
- 239000000306 component Substances 0.000 description 31
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 28
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 24
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 21
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 21
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 21
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 21
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 15
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 14
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 14
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 14
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 13
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 11
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 11
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 10
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 9
- 235000010582 Pisum sativum Nutrition 0.000 description 9
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 9
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 9
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 9
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 9
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 9
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 8
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 8
- 229940071127 thioglycolate Drugs 0.000 description 8
- 239000002435 venom Substances 0.000 description 8
- 231100000611 venom Toxicity 0.000 description 8
- 210000001048 venom Anatomy 0.000 description 8
- 241000219843 Pisum Species 0.000 description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 7
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- 208000020406 Creutzfeldt Jacob disease Diseases 0.000 description 5
- 208000003407 Creutzfeldt-Jakob Syndrome Diseases 0.000 description 5
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 5
- 239000007143 thioglycolate medium Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 208000018756 Variant Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 4
- 208000005881 bovine spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000012343 cottonseed oil Nutrition 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 229960004716 idoxuridine Drugs 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000002581 neurotoxin Substances 0.000 description 4
- 231100000618 neurotoxin Toxicity 0.000 description 4
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 4
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 101710138657 Neurotoxin Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 230000004992 fission Effects 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007773 growth pattern Effects 0.000 description 3
- 239000012533 medium component Substances 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 3
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- 101710117542 Botulinum neurotoxin type A Proteins 0.000 description 2
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 2
- 101100412446 Caenorhabditis elegans rer-1 gene Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 208000032274 Encephalopathy Diseases 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical group CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 108010010469 Qa-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000050389 Syntaxin Human genes 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 235000021120 animal protein Nutrition 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 229940089093 botox Drugs 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- 235000021118 plant-derived protein Nutrition 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M sodium thioglycolate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)CS GNBVPFITFYNRCN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229940046307 sodium thioglycolate Drugs 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- PJVXUVWGSCCGHT-ZPYZYFCMSA-N (2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;(3s,4r,5r)-1,3,4,5,6-pentahydroxyhexan-2-one Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C(=O)CO PJVXUVWGSCCGHT-ZPYZYFCMSA-N 0.000 description 1
- HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 1-[4-[2-(2,3-dihydro-1H-inden-2-ylamino)pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethanone Chemical compound C1C(CC2=CC=CC=C12)NC1=NC=C(C=N1)N1CCN(CC1)C(CN1CC2=C(CC1)NN=N2)=O HMUNWXXNJPVALC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 3',5'-di-O-methyltricetin Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 HRGUSFBJBOKSML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010019468 Hemiplegia Diseases 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 229910002570 KH2PO4-Na2HPO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001103596 Lelia Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 240000000233 Melia azedarach Species 0.000 description 1
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 1
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N Piscigenin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2)=O)=C1 IDDMFNIRSJVBHE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005730 R-SNARE Proteins Proteins 0.000 description 1
- 244000097202 Rathbunia alamosensis Species 0.000 description 1
- 235000009776 Rathbunia alamosensis Nutrition 0.000 description 1
- PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N Resazurin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3[N+]([O-])=C21 PLXBWHJQWKZRKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102000002215 Synaptobrevin Human genes 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108010057266 Type A Botulinum Toxins Proteins 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 101710099833 Venom protein Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 208000010399 Wasting Syndrome Diseases 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 108010079650 abobotulinumtoxinA Proteins 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 238000005054 agglomeration Methods 0.000 description 1
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- LKDRXBCSQODPBY-ZXXMMSQZSA-N alpha-D-fructopyranose Chemical compound OC[C@]1(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O LKDRXBCSQODPBY-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003131 biological toxin Substances 0.000 description 1
- 210000005013 brain tissue Anatomy 0.000 description 1
- 206010008129 cerebral palsy Diseases 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000001713 cholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 1
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N dihydrochrysin Natural products COC1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 KCFYHBSOLOXZIF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 229940098753 dysport Drugs 0.000 description 1
- 230000012202 endocytosis Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 230000028023 exocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 208000037957 feline spongiform encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 230000001631 hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229940102223 injectable solution Drugs 0.000 description 1
- 206010023497 kuru Diseases 0.000 description 1
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 1
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012092 media component Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 238000003801 milling Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 229940112646 myobloc Drugs 0.000 description 1
- 210000000715 neuromuscular junction Anatomy 0.000 description 1
- 231100000189 neurotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002887 neurotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 101150029755 park gene Proteins 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 108010074523 rimabotulinumtoxinB Proteins 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical compound O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008864 scrapie Diseases 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 1
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 1
- 201000007770 spastic cerebral palsy Diseases 0.000 description 1
- 201000008417 spastic hemiplegia Diseases 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000000383 tetramethylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N tricin Natural products COc1cc(OC)c(O)c(c1)C2=CC(=O)c3c(O)cc(O)cc3O2 BMCJATLPEJCACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/33—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Clostridium (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0025—Culture media for plant cell or plant tissue culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24069—Bontoxilysin (3.4.24.69), i.e. botulinum neurotoxin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
- C12N2500/70—Undefined extracts
- C12N2500/76—Undefined extracts from plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
يتعلق الاختراع الحالي بتركيبة وسط لإنتاج سم البتيلينيوم botulinum toxin و، على الأخص، بتركيبة وسط لزراعة Clostridium sp. قادر على إنتاج سم البتيلينيوم. تشتمل تركيبة الوسط من الاختراع الحالي على ببتون peptone واحد على الأقل مشتق من نبات يُختار من المجموعة التي تتكون من ناتج تحلل البازلاء pea hydrolysate ، ناتج تحلل بذرة القطن cotton seed hydrolysate وناتج تحلل جلوتين القمح wheat gluten hydrolysate . عند استخدام الوسط medium وفقاً للاختراع الحالي، الذي يحتوي على ببتونات مشتقة derived peptones من نبات ومعادن، لزراعة Clostridium botulinum، يبلغ معدل نمو البكتريا bacterium في الوسط نحو 1.5-2 مرة أكبر من ذلك الموجود في الوسط المستخدم حالياً. بالإضافة إلى ذلك، عند إنتاج سم البتيلينيوم botulinum toxin بواسطة زراعة البكتريا في الوسط، يمكن الوقاية من العدوى باعتلال الدماغ الاسفنجي المُعدي transmissible spongiform encephalopathy (TSE) أو ما إلى ذلك بواسطة منع إدخال مكونات مشتقة من الحيوان.
Description
تركيبة وسط لتحضير سم البتيلينيوم Medium Composition for Preparing Botulinum Toxin الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع Jad) بتركيبة Jaws لإنتاج سم البتيلينيوم botulinum toxin و؛ على الأخص؛ بتركيبة وسط لزراعة سلالات من Clostridium قادرة على إنتاج سم البتيلينيوم. تشتمل تركيبة الوسط من الاختراع الحالي على ببتون peptone واحد على الأقل مشتق من نبات يُختار من المجموعة التي تتكون من ناتج تحلل البازلاء pea hydrolysate ؛ ناتج تحلل بذرة القطن cotton seed hydrolysate وناتج تحلل جلوتين القمح gluten hydrolysate 11/0681. تم اكتشاف مجموعة متنوعة من سلالات Clostridium sp التي تفرز السموم العصبية السامة secrete neurotoxic toxins منذ 1890 وتم تمييز السموم التي يتم إفرازها من هذه البكتيريا 38 على مدى السنوات ال 70 الماضية ) Schant, E.
J. et al., Microbiol.
Rev., 0 56:50,1992). يتم تصنيف السموم العصبية المشتقة من «Clostridium sp أي؛ سموم بتيلينيوم؛ إلى 7 أنماط مصلية ؛ الأنماط المصلية serotypes من أ إلى ز بناءًة على خصائصها المصلية. يحتوي كل من السموم على بروتين السم الذي يتسم بحجم يبلغ نحو 150 كيلو دالتون ويحتوي بشكل طبيعي على معقد من عدة بروتينات غير سامة مرتبطة به. ويتكون المركب المتوسط (300 كيلو دالتون) من بروتين سام وبروتين غير سام بخلاف dual) دموية؛ ويتكون معقد كبير (450 كيلو دالتون) (Sugiyama, H., Microbiol.
Rev., 44:419, 1980) ويُعرف أن بروتينات الراصة الدموية هذه غير السامة non-toxic hemagglutinin proteins تعمل على حماية السموم من الرقم الهيدروجيني pH المنخفض وإنزيمات بروتياز proteases المختلفة في الأمعاء intestines 0 .
يتم تخليق السم في صورة عديد ببتيد polypeptide فردي يتسم بوزن جزيئي يبلغ نحو 150 كيلو دالتون في الخلاياء ثم ينشطر عند الموضع 3/1 بدءًا من طرف النهاية N بواسطة تأثير البروتياز داخل LIAN أو العلاج بإنزيم صناعي Jie تريسين trypsin في وحدتين: سلسلة خفيفة (ا؛ الوزن الجزيئي يبلغ: 50 كيلو دالتون) وسلسلة ثقيلة eH) الوزن الجزيئي يبلغ: 100 كيلو دالتون). تسبب السم المنشطر بصورة كبيرة في زيادة السمية مقارنةٌ بالبتيد الفردي. يتم ربط اثنين من الوحدات مع بعضها البعض بواسطة daly ثنائي كبريتيد disulfide وتتسم بوظائف مختلفة. ترتبط السلسلة الثقيلة بمستقبلات الخلية المستهدفة Park.
M.K. et al., )target cell (FEMS Microbiol.
Lett, 72:243, 1990 ووظائف للتفاعل مع غشاء (gpa عند PH منخفض pH) يبلغ 4( لتشكيل «(Mantecucco, C. et al., TIBS., 18:324, 1993) sls 0 وتتسم السلسلة الخفيفة بنشاط دوائي للتدخل في إفراز الناقلات العصبية neurotransmitters « عندما تكون منفذة للخلايا أو يتم إدخالها بواسطة التوصيل الكهربي 6160000018101 أو ما إلى ذلك )1988 ,85:4090 .(Poulain, 8. et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA., يعمل السم على تثبيط الالتقام الخلوي الخارجي أسيتيل الكولين acetylcholine في التشابك العصبي الكوليني cholinergic presynapse المسبق لوصلة عصبية عضلية ليسبب الوهن. 5 وروعي أنه حتى المعالجة بكمية صغيرة جدًا من السم تعمل على تثبيط السمية؛ مما يشير إلى أن السم ليس له أي نشاط إنزيمي ) et al., Ann.
Rev.
Pharmacol. .ا .ا Simpson, .(Toxicol., 26:427, 1986 وفقًا لتقرير صدر مؤخراً؛ يتسم السم بنشاط ميتالوبيبتيداز metallopeptidase « وتشتمل ركائزه على بروتين مرتبط بسينابتويريفين synaptobrevin ؛ سينتاكسين syntaxin ؛ سينابتوسومال synaptosomal 0 يبلغ 25 كيلو دالتون ((SNAP2S) وما إلى ذلك»؛ Allg تكون Ble عن بروتينات وحدة من معقد التقام خلوي خارجي آلي. يستخدم كل نوع من السم واحد من ثلاثة بروتينات من المذكورة أعلاه كركيزة eld ومن المعروف أن السموم من النوع F DB و6 يتسبب في انشطار سينابتويريفين عند موقع معين؛ تتسبب السموم من النوع 8/ و في انشطار 5 عند موقع معين؛ ويتسبب النوع © في انشطار سينتاكسين عند موقع معين ( Binz, .)٠١ etal., J.
Biol.
Chem., 265:9153, 1994 5
على وجه الخصوص؛ يعرف أن سم بتيلينيوم من النوع A قابلاً للذوبان في محلول Sle مخفف عند PH يتراوح من 6.8-4.0. ومن المعروف أن البروتين غير السام المستقر يتم فصله عن السم العصبي عند pH يبلغ نحو 7 أو أعلى؛ ونتيجة (UN يتم فقد السمية تدريجيًا. على dag الخصوص؛ من المعروف أن السمية تنخفض عند زيادة PH ودرجة الحرارة.
يُعد سم بتيلينيوم مميت لجسم الإنسان حتى بكميات صغيرة ويسهل إنتاجه بكميات كبيرة. وبالتالي؛ فهو يشكل 4 أسلحة إرهاب بيولوجية رئيسية مع عصيات الجمرة الخبيثة؛ Yersinia pestis وفيروس الجدري. ومع ذلك؛ اتضح أنه عندما يتم حقن سم بتيلينيوم من النوع A بجرعة لا تؤثر بشكل منهجي على جسم الإنسان؛ فإنه يمكن أن يتسبب في شلل العضلات الموضعية في موقع الحقن. واستنادا إلى هذه الخاصية؛ يمكن استخدام سم بتبلينيوم من النوع A في مجموعة واسعة من
0 التطبيقات؛ بما في ذلك عوامل إزالة وبنكل؛ وعوامل لعلاج شلل نصفي تشنجي وشلل دماغي؛ إلخ. وهكذا؛ زاد الطلب على سم بتيلينيوم من النوع A وتم إجراء دراسات حول طرق إنتاج سم البتيلينيوم وذلك لتلبية الطلب بنشاط. يتمثل المنتج التجاري النمطي الحالي في BOTOX® (معقد سم عصبي نقي من سم بتيلينيوم من النوع (A المتاح تجارياً من (Siig Allergan, Inc., USA قارورة 100 وحدة من BOTOX®
5 من حوالي 5 نانوجرام من معقد سم عصبي نقي من سم بتيلينيوم من النوع A 0.5 مجم من مصل زلالي بشري و0.9 مجم من كلوريد الصوديوم وتتم إعادة تشكيله باستخدام محلول ملحي معقم دون مادة حافظة (حقن 0.9 7 من كلوريد الصوديوم). وتشمل المنتجات التجارية الأخرى Dysport® معقد من سم بوتولينوم Clostridium من النوع A والراصة الدموية؛ الذي يحتوي على لاكتوز ومصل زلالي بشري في تركيبة صيدلانية تشتمل على سم بتيلينيوم ويتم إعادة تشكيله
0 باستخدام 70.9 من كلوريد الصوديوم sodium chloride قبل الاستخدام المتاح تجاريًا من Ltd., UK, MyoBloc® 10560 (محلول قابل للحقن pH) يبلغ نحو 5.6) يشتمل على سم بتيلينيوم من النوع 8؛ مصل MY) بشري؛ سكسينات صوديوم succinate 5001077وكلوريد صوديوم sodium chloride متاح Glas من .Solstice Neurosciences, Inc يحتوي وسط زراعة «Clostridium botulinum والذي يُستخدم عادةً في طريقة لإنتاج سم
5 بتيلينيوم كما هو مبين في براءة الاختراع الكورية رقم 1339349-10؛ على مكونات حيوانية.
وهكذاء إذا وُجد حيوان Osan غير طبيعي يعرف delay يسبب اعتلال الدماغ الاسفنجي المُعدي في
المكونات الحيوانية بسبب التلوث؛ فإنه يفرض مشاكل في عملية إنتاج سم بتيلينيوم.
ونُعرف اعتلال الدماغ الاسفنجي المُعدي Transmissible spongiform encephalopathy
(TSE) باسم اضطراب عصبي تنكسي يسبب تنكس خطير للخلايا العصبية؛ وتشتمل الأمثلة عليه على اعتلال الدماغ الإسفنجية البقري «(BSE) bovine spongiform encephalopathy
راعوش Scrapie ؛ مرض كروتزفيلد جاكوب «(CJD) Creutzfeldt-Jakob disease
متلازمة جيرستمان ستراوسلر ششينكر؛ كورو واعتلال الدماغ المنكي المُعدي؛ ومرض الهزال
المزمن؛ واعتلال الدماغ الإسفنجي في القطط؛ وما إلى ذلك؛ والذي يؤثر على البشر والحيوانات.
ورد بأن BSE يعبر حاجز الأنواع ويصيب حتى البشر.
0 يتسم العامل الذي يسبب اعتلال الدماغ الاسفنجي المُعدي (TSE) بأنه يتسم بأنه لا يولد مناعة وله فترة حضانة طويلة. من التحليل النسيجي المرضي لأنسجة المخ البقري المتضرر من مرض «BSE يمكن ملاحظة أن الفجوات الإسفنجية الخاصة تم تشكيلها في الدماغ بسبب تلف الخلايا العصبية وترسب ألياف البروتين غير الطبيعية. يرجع السبب في TSE إلى الجسيم البروتيني المعدي المعروفة باسم بريون غير الطبيعي. على
5 عكس الفيروسات العامة التي تتطلب حمض نوويء البريون غير الطبيعي عبارة عن جسيمات معدية تتكون من البروتين وحده دون الاحتواء على الحمض النووي. وفيما يتعلق بمرض TSE من المعروف أنه عندما يرتبط بريون غير (PrPsc) abnormal prion aukll أي الذي يكون عبارة عن جسيم معدي بالبريون الطبيعي00600 (PrPe) normal يتم تحويله إلى بربون مسبب للأمراض والذي يتراكم بعد ذلك في الدماغ ( Prusiner SB, Alzheimer Dis Assoc
.(Disord., 3:52-78, 1989 0 مرض كروتزفيلد جاكوب عبارة عن اضطراب تنكسي عصبي نادر من اعتلال الدماغ الاسفنجي (saad) في الإنسان (TSE) حيث يمثل العامل gail) بشكل واضح صورة متماثلة غير طبيعية من بروتين بريون. يمكن أن يتدهور الفرد المصاب بمرض كروتزفيلد جاكوب من الصحة المثالية الظاهرة إلى طفرات حركية في غضون ستة أشهر. ويالتالي؛ يمكن أن توجد مخاطر محتملة
للحصول على مرض بواسطة بريون؛ Jie مرض كروتزفيلد جاكوب؛ من إعطاء تركيبة صيدلانية تحتوي على سم بيولوجي؛ Jie بتيلينيوم؛ تم الحصول عليه باستخدام منتجات مشتقة من الحيوانات. وهكذاء إذا تم تحضير تركيبة صيدلانية بواسطة مادة عقار ناتجة باستخدام مكونات مشتقة من الحيوان؛ يمكن أن يخضع anal) لخطر محتمل يكمن في استقبال مسببات الأمراض المختلفة أو العوامل المعدية. في ظل هذه الخلفية التقنية؛ وجد المخترعون الحاليون أنه عندما يتم استخدام وسيط يحتوي على ببتون مشتق من نبات خالي من اعتلال الدماغ الإسفنجى Transmissible spongiform (TSE) encephalopathy المُعدي ومكون معدني لزراعة Clostridium botulinum لمنع 0 مخاطر تطور المرض المشتق من بريون الموصوف مسبقاً؛ يمكن استبعاد مخاطر تطور المرض المشتق من بريون التي يمكن أن تحدث في الوسط المستخدم حاليًا (الوسط الأصلي)؛ ويمكن زيادة معدل نمو Clostridium botulinum في الوسط مقارنة بذلك في الوسط المستخدم (Bla وبالتالى استكمال الاختراع الحالي. الوصف العام للاختراع 5 المشكلة التقنية: يهدف الاختراع الحالي إلى توفير تركيبة وسط تشتمل على ببتونات مشتقة من نبات لا تنطوي على مخاطر العدوى باعتلال الدماغ الاسفنجي المُعدي Transmissible spongiform encephalopathy (ا15)؛ وطريقة لإنتاج سم البتيلينيوم؛ تعمل على تحسين إنتاج سم البتيلينيوم بواسطة زراعة Clostridium botulinum في تركيبة الوسط. 0 الحل التقني: لتحقيق الهدف المذكور أعلاه؛ يوفر الاختراع الحالي تركيبة وسط تزراعة Clostridium botulinum تشتمل تركيبة الوسط على : ببتون واحد على الأقل مشتق من نبات يُختار من المجموعة التي تتكون من ناتج تحلل البازلاء» بذرة القطن ناتج تحلل وجلوتين القمح ناتج تحلل.
WS يوفر الاختراع الحالي طريقة لإنتاج سم البتيلينيوم» تشتمل على الخطوات التالية: )1( زراعة Clostridium botulinum باستخدام تركيبة الوسط الموصوفة مسبقاً لإنتاج سم البتيلينيوم؛ و(ب) استخلاص سم البتيلينيوم الناتج. شرح مختصر للرسومات الشكل 1 يوضح نمو Clostridium botulinum في وسط خالي من بروتين حيواني animal seis (APF) protein-free على ببتونات مشتقة من نبات. الشكل 2 يوضح نمو Clostridium botulinum في وسط يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات؛ (alae أحماض أمينية وفيتامينات. الشكل 3 يوضح نتائج فحص ما إذا تم تشكيل راسب بعد تعقيم وسط يحتوي على ببتونات مشتقة 0 .من نبات؛ معادن» أحماض أمينية وفيتامينات. الشكل 4 يوضح نتائج فحص ما إذا تم تشكيل راسب بعد تعقيم وسط يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن. الشكل 5 يوضح نمو Clostridium botulinum في أوساط تم الحصول عليها بواسطة إضافة فيتامينات بالإضافة إلى ذلك؛ أحماض أمينية و Recharge™ 80" بدون جلوكوز وا- 5 جلوتامين" إلى الأوساط لزراعة البكتريا؛ التى تحتوي على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن. الشكل 6 يوضح نمو Clostridium botulinum في أوساط لزراعة (LS التي تحتوي على أنواع مختلفة من ببتونات مشتقة من نبات. الشكل 7 يوضح مخططات محيطية من FFD لتصفية المعادن» وتحقيق أفضل استجابة. الشكل 7 مخطط محيطي لوضعية مرتفعة؛ الشكل 7 ب عبارة عن مخطط Jame لوضعية متوسطة؛ 0 الشكل 7 ج عبارة عن مخطط محيطي لوضعية منخفضة؛ والشكل 7د تحقيق أفضل استجابة لأقصى OD
الشكل 8 يوضح مخططات محيطية ل FFD لتصفية المعادن» وتحقيق أفضل استجابة. الشكل 8 عبارة عن مخطط محيطي لوضعية مرتفعة؛ الشكل 8 ب عبارة عن مخطط محيطي لوضعية متوسطة؛ الشكل 8 ج عبارة عن مخطط محيطي لوضعية منخفضة؛ والشكل 8د تحقيق أفضل استجابة لأقصى .optimization for maximum as
الشكل 9 يوضح مخططات محيطية لتصفية ببتون النباتي؛ وتحقيق أفضل استجابة. الشكل 9 عبارة عن مخطط محيطي لوضعية متوسطة؛ الشكل 9ب عبارة عن مخطط محيطي لوضعية منخفضة؛ والشكل 9ج تحقيق أفضل استجابة لأقصى حد .
الشكل 10 يوضح منحنى نمو Clostridium botulinum في وسط خالي من بروتين حيواني
(APF) animal protein-free المختار في النهاية؛ وتغير في تركيز السم. 0 الوصف التفصيلى: في الاختراع الحالي؛ تمت محاولة تحضير وسط يعمل Load على زيادة معدل نمو Clostridium
TSE. مقارنة بالوسط المستخدم حالياً (الوسط الأصلي) ولا يوجد له مخاطر للعدوى botulinum animal protein-free أو ما إلى ذلك. بالتالي؛ تم استخدام وسط خالي من بروتين حيواني كنتيجة APF يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات؛ وتم فحص نمو البكتريا في الوسط (APF)
5 لذلك»؛ أوضح الوسط APF معدل نمو متزايد للبكتريا مقارنةٌ بالوسط المستخدم حالياً. بالتالي؛ إذا تم استخدام الوسط APF يمكن إنتاج تركيز مرتفع من سم البتيلينيوم بواسطة زراعة البكتريا بطريقة dud تحت ظروف خالية من TSE كما استخدم في هذه الوثيقة؛ يشير المصطلح “ الوسط المستخدم حالياً أو الوسط الأصلي ” إلى وسط يشتمل على ناتج تحلل casein ils مستخلص خميرة ووسط off جليكولات «thioglycollate 20 التى تمثل مكونات وسط مشتق من الحيوان . يشير المصطلح “(وسط خالى من بروتين حيواني)” إلى وسط لا يحتوي على بروتين مشتق من الحيوان والذي يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات؛ معادن وجلوكوز glucose في أحد أمثلة الاختراع الحالي» لإنتاج سم البتيلينيوم بواسطة زراعة Clostridium botulinum تحت ظروف خالية من اعتلال الدماغ الاسفنجي المُعدي ؛ تم تحضير وسط APF يشتمل على
ببتون مشتق من نبات خالي من TSE ومقارنته بالوسط المستخدم حالياً (يحتوي على مكون حيواني). كنتيجة لذلك» يمكن أن يتضح أن تركيبة وسط أمثل لزراعة Clostridium botulinum عبارة عن واحدة تشتمل على ببتون مشتق من نبات؛ معدن واحد على الأقل يُختار من المجموعة التي تتكون من فوسفات ثنائي البوتاسيوم K2HPO4) dipotassium phosphate )؛ فوسفات ثنائي الصوديوم Na2HPO4) disodium phosphate ) و فوسفات أحادي البوتاسيوم «((KH2PO4) monopotassium phosphate ومصدر كريون carbon source (على سبيل المثال» جلوكوز «(glucose ولوحظ gail) الأمتل للبكتريا في هذا الوسط. كنتيجة A على النحو الموضح في الجدول 13؛ تم تحديد أن المحتويات الأمثل لببتونات مشتقة من نبات في تركيبة الوسط المختارة في النهاية لزراعة Clostridium botulinum عبارة عن 5 جم/ لتر من 0 7404 "0887-لالا» 10 [as لتر من UltraPep™ Cotton و5 جم/ لتر من HyPep™ «4601N وتشتمل المحتويات الأمثل للمعادن في تركيبة الوسط على 5.5 جم/ لتر من K2ZHPO4 و3 جم/ لتر من Na2HPO4 في مثال آخر من الاختراع الحالي؛ تم قياس تركيز نمط نمو Clostridium botulinum في وسط APF المختار في النهاية الذي يشتمل على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن؛ وتركيز السم. 5 كتتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 12 والشكل 10؛ بدأت قيمة OD في الزيادة بعد 2 ساعة من من زراعة (Clostridium botulinum وعند 24 ساعة من الزراعة؛ أوضحت المزرعة 000540017 يبلغ 3.5465 5 n OD600NmM يبلغ 3.0695. ثم؛ انخفضت قيمة OD بالتدريج؛ وعند 48 ساعة من الزراعة؛ أوضحت المزرعة 00540017 يبلغ 0.792 OD600ONM 4 يبلغ 0.7224. بدا تركيز السم في المادة الطافية لمزرعة Clostridium botulinum 0 في الزيادة بعد 5 ساعات من الزراعة وأوضح قيمة نهائية تبلغ 31.41 ميكرو جرام/ مل. عندما تم قياس تركيز السم بعد تمزق البكترياء تم الاحتفاظ andl الذي بداً إنتاجه بعد 5 ساعات من الزراعة؛ واستمر تركيز السم في الزيادة؛ عند مستوى منتظم بعد 28 ساعة من cde) وأوضح قيمة نهائية تبلغ 38.39 ميكرو جرام/ مل.
sly على هذاء في أحد الجوانب»؛ يتعلق الاختراع الحالي بتركيبة وسط لزراعة Clostridium dbotulinum تشتمل تركيبة الوسط على : ببتون واحد على الأقل مشتق من نبات يُختار من المجموعة التي تتكون من ناتج تحلل البازلاء» بذرة القطن ناتج تحلل وجلوتين القمح ناتج تحلل. كما استخدم في هذه الوثيقة؛ يشير المصطلح ” ببتون مشتق من نبات ” إلى ببتون مستخلص من البازلاء؛ بذرة القطن أو جلوتين القمح. بشكل مفضل؛ يمكن أن يكون الببتون المشتق من نبات عبارة عن 7404 HyPep™ 7504 HyPep™ i (UltraPep™ Cotton (Hy-Pea™ (4601N متاح تجارياً ولكنه لا يقتصر عليه. كما استخدم في هذه الوثيقة؛ يشير المصطلح " ببتون مشتق من نبات " أو " ناتج تحلل مشتق من نبات " إلى منتج يتم الحصول عليه بواسطة تحلل بروتين معزول من نبات. على سبيل المثال؛ 0 يشير ببتون البازلاء (ناتج تحلل البازلاء) إلى منتج يتم الحصول عليه بواسطة تحلل بروتين إجمالي معزول من البازلاء . يتم تحلل البروتين المشتق من نبات بشكل مفضل بواسطة اهتضام جزئي. يتم تحلل البروتين بشكل مفضل بواسطة المعالجة بحمض» المعالجة بقاعدة؛ المعالجة بإنزيم؛ المعالجة عند ضغط مرتفع؛ المعالجة بالحرارة أو المعالجة الفيزيائية. بشكل مفضل أكثرء يمكن أن يكون الببتون المشتق من 5 نبات عبارة عن واحد يتم الحصول عليه بواسطة المعالجة بإنزيم. تتمثل المعالجة الفيزيائية على سبيل المثال؛ في الطحن. يكون الببتون المشتق من نبات الذي يتم استخدامه في الاختراع الحالي عبارة عن منتج تحلل جزئي من بروتين مشتق من نبات؛ عبارة عن خليط لا يشتمل فقط على أحماض أمينية عبارة عن cilia فردية؛ ولكن أيضاً ببتيدات مكونة من العديد إلى العديد من عشرات الأحماض الأمينية؛ 0 وجزبئات البروتين السليمة. في الاختراع الحالي؛ يمكن أن يبلغ محتوى الببتونات المشتقة من نبات في تركيبة الوسط 10-0.1 7 وزن/ حجم (100-1 جم/ لتر من)؛ بشكل مفضل 5-0.2 7 وزن/ حجم )50-2 fan لتر من)؛ بشكل مفضل أكثر 2-0.5 7 وزن/ حجم (20-5 جم/ لتر من).
— 1 1 —
في الاختراع الحالي» تحتوي تركيبة الوسط على كل ناتج تحلل البازلاء» ناتج تحلل بذرة القطن
وناتج تحلل جلوتين القمح» ويمكن أن تبلغ نسبة محتوى ناتج تحلل البازلاء» ناتج تحلل بذرة القطن
وناتج تحلل جلوتين القمح في تركيبة الوسط 1: 43.62-0.24: 50.57-0.01 بالوزن؛ بشكل
مفضل 9.87-0.09:14.46-0.68:1 بالوزنء بشكل مفضل أكثر 1.4-0.6:2.4-1.6:1
بالوزن.
في الاختراع الحالي» يمكن أن تحتوي تركيبة الوسط لزراعة Clostridium botulinum أيضاً
على مصدر كربون ومعدن واحد على الأقل يُختار من المجموعة التي تتكون من :
فوسفات ثنائي البوتاسيوم K2ZHPO4) dipotassium phosphate )؛ فوسفات ثنائي الصوديوم monopotassium و فوسفات أحادي البوتاسيوم ) Na2ZHPO4) disodium phosphate . (KH2PO4) phosphate 0
فى هذه الوثيقة؛ تتضمن أمثلة مصدر الكربون على سبيل المثال لا الحصر أحادي السكاريد gh » الخ. fructose ؛ فركتوز glucose سبيل المثال» جلوكوز Je monosaccharides
سكاريد disaccharides على سبيل المثال؛ مالتوز maltose ؛ سكروز sucrose « الخ. ؛
قليل السكاريد oligosaccharides ؛ عديد السكاريد JAepolysaccharides سبيل JE 5 دكسترين dextrin ؛ سيكلو دكسترين cyclodextrin ؛ نشاء الخ. » كحولات سكرية sugar
« erythritol إربثريتول « sorbitol سوربيتول « Xylitol زبليتول (Jil سبيل Je alcohols
الخ. .
[o> 35-0.5) لتر من)؛ بشكل مفضل 1.75-0.1 A وزن/ حجم )17.5-1 [o> لتر (oe 20 وشكل مفضل أكثر 0.7-0.25 7 وزن/ حجم (7-2.5 جم/ لتر من).
في جانب Al » يتعلق الاختراع الحالي بطريقة لإنتاج سم البتيلينيوم» تشتمل على الخطوات
التالية: (أ) زراعة Clostridium botulinum باستخدام الموصوف مسبقاً تركيبة وسط لإنتاج سم
البتيلينيوم؛ و(ب) استخلاص سم البتيلينيوم الناتج.
-2 1 — في الاختراع الحالي» يمكن shal الزراعة تحت ظروف لا هوائية؛ ويمكن أن يُختار سم البتيلينيوم من المجموعة التي تتكون من سم البتيلينيوم من الأنواع م GF ED CB الأمثلة فيما يلي في هذه الوثيقة؛ يتم وصف الاختراع الحالي بمزيد من التفصيل بالإشارة إلى الأمثلة.
يتضح لواحد من ذوي المهارة العادية في الفن أن هذه الأمثلة ترد لأغراض توضيحية فقط ولا تفسر على أنها مقيدة لنطاق الاختراع الحالي. Jal يتم تحديد النطاق الجوهري للاختراع الحالي بواسطة عناصر الحماية المرفقة ومكافئاتها.
المتال 1: زراعة Clostridium botulinum فى وسط يبتون مشتق من نبات 1-1: تركيبة من وط يستخدم حالياً في الزراعة 0 تم شراء الكواشف ومكونات الوسط المستخدم في الاختراع الحالي من : Gibco Life BD Biosciences (USA) «Kerry Inc. (USA) (Sigma (USA) .Quest (USA) 5 «Technologies (USA) تم استخدام الوسط المستخدم حالياً الذي يشتمل على تركيبة تشتمل على 72 ناتج تحلل كازين [o> 20) لتر من)؛ 71 مستخلص خميرة )10 [o> لتر من)؛ 71 جلوكوز )0 1 جم/ لتر من) 5 70.55 وسط ثيوجليكولات )5 جم/ لتر من) لزراعة المزرعة والزراعة الرئيسي ل Clostridium UY botulinum سم البتيلينيوم. يتكون 5 جم من وسط ثيوجليكولات لكل لتر من الوسط المستخدم حالياً من 2.52 جم من اهتضام إنزيمي لكازين» 0.84 جم من مستخلص خميرة؛ 0.925 جم من دكستروزء 0.085 جم من ثبوجليكولات صوديوم؛ 0.2 جم من «NaCl 0.085 جم من -ا سيستين» 0.00014 جم من ريسازورين و0.125 جم من أجار جرثومي. 2-1: تركيبة وسط ١ APF 3 لمستخدم فى الزراعة تم تحضير وسط مقارنة سالب بواسطة إزالة ناتج تحلل كازين 3 مستخلص خميرة ووسط ثيو جليكولات من الوسط المستخدم حالياً (الوسط الأصلي) لزراعة «Clostridium botulinum وتم
— 3 1 — تحضير وسط خالي من بروتين حيوانيى (APF) animal protein-free بواسطة إضافة 4 مرشحات ببتون مشتق من نبات )7404 HyPep™ (UltraPep™ Cotton (Hy-Pea™ (HyPep™ 4601N 5 (7504 إلى وسط المقارنة السالب (الجدول 1). الجدول 1 يوضح مكونات وسط APF يحتوي على الببتون المشتق من نبات لزراعة Clostridium botulinum 5 مقارنة مع الوسط المستخدم حالياً. الجدول 1 مكونات الوسط التركيز الوسط die أوسط (جم/ لتر) المستخدم لمقارنة APF| حالياً سالبة كلوريد صوديوم sodium 0.420 0.420 0 0.42 0 0.42 (NaClj chloride
IB
EEE نّ ب 1 he
ENE Pr rer 1
EEE > rer 1 -
Clostridium botulinum زراعة بذور :3-1
تم تطعيم 20 ميكرو لتر من the Korean Centers for ) Clostridium botulinum (Disease Control and Prevention Accession No.: 4-029-CBB-1S-(001 أنبوب زراعة يحتوي على 10 مل من وسط معقم له كل من التركيبات الموصوفة في الأمثلة 1-1 و2-1 وتم إخضاعه إلى مزرعة بذور أولية (مزرعة ثابتة) عند 35م لمدة 30-22 ساعة تحت
ظروف لا هوائية. عند تأكيد نمو البكتريا في مزرعة البذور الأولية؛ تم تطعيم 8 مل من مزرعة البذور الأولية في زجاجة زراعة سعتها 1 لتر تحتوي على 800 مل من وسط معقم له نفس تركيبة الوسط وتم إخضاعها إلى مزرعة بذور ثانوية (مزرعة ثابتة) عند 35 م لمدة 15-8 ساعة تحت ظروف لا هوائية. 4-1 : مزرعة رئيسية من Clostridium botulinum
0 لإنتاج سم بتيلينيوم بواسطة زراعة (Clostridium botulinum تم تأكيد الزراعة الرئيسي للبكتريا. على dag التحديد؛ تم تحضير 9.3 لتر من وسط به كل من التركيبات الموصوفة في الأمثلة 1-1 و2-1 ووضعه في وسيلة حضانة سعتها 10-لترء يليه تعقيم الوسط. تم إمداد النيتروجين لخلق ظروف لا هوائية؛ وتم تأكيد نمو البكتريا عند درجة حرارة تبلغ 35 م وسرعة تحريك تبلغ 50 دورة في الدقيقة.
5 "تم تطعيم مزرعة البذور الثانوية في dala) مزرعة سعتها 1 لتر في المثال 3-1 في وسيلة حضانة سعتها 10 لتر من خلال خط تطعيم متصل بمنفذ التطعيم الخاص بوسيلة الحضانة التي سعتها 10 لتر . تم زراعة Clostridium botulinum في وسيلة حضانة سعتها 10 لتر تحت ظروف 35 م و50 دورة في الدقيقة وتم رصد ظروف زراعة المجموعة وتسجيلها. عند زراعة البكتريا لمدة 100 ساعة أو أكثرء تم إنهاء المزرعة الرئيسية.
0 تمت مقارنة نمو Clostridium botulinum في وسط خالي من بروتين حيواني (APF) تم تحضيره بواسطة إضافة 4 مرشحات من ببتون مشتق من نبات )7404 (Hy-Pea™ (HyPep™ 4601N 5 (HyPep™ 7504 UltraPep™ Cotton إلى وسط المقارنة السالب بذلك الخاص بالبكتريا في وسط المقارنة السالب الذي تم تحضيره بواسطة إزالة ناتج تحلل كازين؛ مستخلص خميرة ووسط ثيو جليكولات من الوسط المستخدم حالياً (الوسط الأصلي) (الجدول 1).
— 1 5 —
كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 1 والشكل 1؛ لم ينمو Clostridium 0 في وسط المقارنة السالب؛ ولكنه بدا في النمو في الوسط الأصلي (الوسط المستخدم حالياً) عند 24 ساعة بعد تطعيم البكتريا ويد في النمو في الوسط الذي يحتوي على الببتون المشتق من نبات عند 30 ساعة بعد تطعيم البكتريا.
المثال 2: زراعة Clostridium botulinum في وسط يحتوي على ببتونات مشتقة من (ly معادن؛ أحماض أمينية وفيتامينات ولأن نمو Clostridium botulinum في الوسط الذي تم تحضيره بواسطة إضافة 4 ببتونات مشتقة من نبات في المثال 1 كان أبطأً منه في الوسط الأصلىء تم توفير محاليل له على النحو التالى.
0 1) لفحص تأثير وظيفة ثيو جليكولات لخلق ظروف لا هوائية» تمت إزالة ثيوجليكولات من الوسط الأصلي (الوسط المستخدم حالياً)؛ وتم تحليل التغير في معدل نمو البكتريا في وسط خالي من ثيو جليكولات.
2( ولأن معدل sell الأبطأ يمكن أن يرجع إلى نقص مصدر النيتروجين؛ تمت زيادة تركيز الببتون في الوسط المستخدم لزراعة البكتريا ضعفين.
5 3) تمت مقارنة نمو Clostridium botulinum في وسط تم الحصول عليه بواسطة إضافة معادن؛ أحماض أمينية وفيتامينات إلى الوسط الذي يحتوي على ببتون مشتق من نبات مع نمو Clostridium botulinum في وسط APF تم الكشف عنه في براءة الاختراع الأمريكية رقم (Allergan) 8.012.716 (الجدول 2).
الجدول 2 يوضح مكونات الوسط لزراعة «Clostridium botulinum الذي يحتوي على ببتونات
0 مشتقة من نبات؛ معادن» أحماض أمينية وفيتامينات.
الجدول 2
— 6 1 — مكونات الوسط الوسط | (APF| (APF| (APF| (APF أوسط APF المستخد Jas] الوسط الوسط الوسط أمن شركة م Lila |المرشح المرشح) المرشح) المرشح) Allergan] ( كلوريد صوديوم ]0.4 ]0.42 ]0.42 ]0.42 0.42 ]0.42 (NaCl) 2 EEN Ea EERE B B ) UltraPep™ 10 10 20 10 Cotton B B ) ِ ض ) BE B B ااا هن ل أ أ نا ا 0
— 7 1 — ل ا ا IEEE خليط حمض أميني IX 0 مرة ببتون Soy .32 32.5
كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 2 والشكل 2؛ عند زراعة البكتريا في الوسط المستخدم حالياً بدون ثيو جليكولات؛ كان معدل نمو البكتريا في الوسط أبطاً منه في الوسط الذي يحتوي على ثيو جليكولات؛ للإشارة إلى أن ثيو جليكولات يؤثر على معدل نمو البكتريا. عند زيادة تركيز الببتون في الوسط مرتين؛ لم تنمو البكتريا في الوسط. بينما في الحالة التي تمت فيها إضافة 5 مكونات معدنية؛ تمت إضافة أحماض أمينية وفيتامينات إلى الوسط الذي يحتوي على (sin تشابه معدل نمو البكتريا مع ذلك الموجود في الوسط المستخدم ella ولكن تم تشكيل راسب بعد تعقيم الوسط. بالإضافة إلى cally لوحظ أن معدل نمو البكتريا في وسط APF من Allergan’s مشابهاً لذلك الموجود في الوسط المستخدم حالياً. المثال 3: إنتاج راسب بواسطة تعقيم وسط يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات؛ معادن؛ حمض 0 أميني وفيتامين فى المثال 2؛ لوحظ أن معدل نمو Clostridium botulinum فى الوسط يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات؛ معادن؛ أحماض أمينية وفيتامينات؛ من بين مرشحات الوسط APF 2 إلى 4 الموضحة في الجدول 2 مشابهاً لذلك الوارد في الوسط المستخدم حالياً. مع ذلك؛ تم فحص تشكيل راسب تم تحضيره بعد تعقيم الوسطء ويالتالي سببه (الجدول 3). 5 الجدول 3 يوضح مكونات وسط لزراعة (Clostridium botulinum الذي تم استخدامه في التعقيم ويحتوي على ببتونات مشتقة من نبات؛ معادن؛ أحماض أمينية وفيتامينات.
الجدول 3 :
مكونات الوسط جم/ | الوسط (APF| (APF| اعطم) (APF| الوسط لتر المستخدم االوسط | الوسط | الوسط | المرشح) We المرشح) المرشح) المرشح) حدم 49 0 كك "8 47 ا تح ذا I < - a نل as م م IG IG OO Os مستت I I EE EES LL eee EE EEE IX IX IX Vitamin Kit 100X (الإضافة أن نه ان قات
— 9 1 — خليط حمض أمينى 50 IX IX كا (الإضافة مرة بعد التعقيم) كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 3 والشكل 3 فقط في الحالة التي تتم فيها إضافة معادن إلى الوسط الذي يحتوي على ببتون مشتق من نبات؛ تم تشكيل Bale مترسبة بعد تعقيم الوسطء لتشير إلى أن السبب الرئيسي لتشكيل الراسب هو المعادن. يُعتقد أن هذا يرجع إلى أن مكونات المعدن تفاعلت مع بعضها البعض تحت ظروف درجة حرارة مرتفعة وضغط مرتفع أثناء تعقيم الوسط. المثال 4 : تشكيل aly بواسطة تعقيم وسط يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن لتحديد مكونات المعدن الموجودة في تشكيل راسب يسببه التعقيم كما تم تأكيده في المثال 3؛ تمت إضافة توليفات مختلفة من مكونات مختلفة إلى الأوساط؛ يليها التعقيم (الجدول 4). الجدول 4 يوضح مكونات أوساط زراعة (Clostridium botulinum التي تحتوي على ببتونات 0 مشتقة من نبات ومعادن؛ ونتائج تعقيم الأوساط. الجدول 4 مكونات الوسط [o> وسط 1 الوسط 2 3 4 5 وسط (APF| Ua |مرشح امرشح | APF APF APF | APF كلوريد 0.5 |0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 صوديوم (NaCl)
٠ 2 0 ٠ 20 20 ناتج تحليل كازين 10 10 مستخلص 5 5 وسط ثيوجليكولات 20 20 20 20 20 20 Hy-Pea™ 7404 10 10 10 10 10| UltraPep™
Cotton 10 10 10 10 10 10 HyPep™ 7504 10 10 10 10 10 10 HyPep™ 4601N
TT
EE
- ها 10 10 10 10 10 MgSO4
TH20
X الترسيب؛ التكتل
— 1 2 — تابع الجدول 4 مكونات الوسط 6 7 8 9 10 11 12 (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح (APF (APF (APF (APF (APF (APF (APF كلوريد صوديوم 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 NaCl ) ( ا ee ا ا Hy-Pea™ 20 20 20 20 20 20 20 7404 UltraPep™ 10 10 10 10 10 10 10 Cotton HyPep™ 10 10 10 10 10 10 10 7504 HyPep™ 10 10 10 10 10 10 10 4601N
— 2 2 —
0 ا أن
ل اق
ل EER ا ا كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 4 والشكل 4؛ من بين الأوساط التي تحتوي على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن ؛» يحتوي الوسط على 10504720 ; (Saag K2HPO4 الوسط على MgSO47H20 و Na2HPO4 الذي كون راسب بعد التعقيم. المثال 5: زراعة Clostridium botulinum تحت ظروف لم يتم فيها تشكيل راسب في وسط
APF 5 تم إجراء تجرية لتحديد ما إذا كان Clostridium botulinum defy ممكناً عند إضافة الفيتامينات والأحماض الأمينى بالإضافة إلى ذلك إلى الوسط APF من المثال 4 الذي يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن. بالإضافة إلى ذلك؛ تم إجراء تجرية لفحص ما إذا كان زراعة البكتريا مكناً في وسط خالي من ببتون مشتق من نبات ومعدن ويحتوي على فيتامينات؛ 0 أحماض أمينية و/ أو "BD Recharge™ بدون جلوكوز وا- جلوتامين" ( Cat No. BD Bioscience ,670002( (مكون وسط أساسه مستخلص خميرة خالي من جلوكوز وا- جلوتامين) (الجدول 5). الجدول 5 يوضح مكونات أوساط تم الحصول عليها بواسطة إضافة فيتامينات بالإضافة إلى ذلك؛ أحماض أمينية 5 ™ Recharge 80 بدون جلوكوز وا- جلوتامين" إلى الوسط لزراعة (Clostridium botulinum 5 الذي يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن؛ ومعدلات نمو البكتريا فى الوسط. الجدول 5 :
مكونات الوسط fan االوسط |1 9 و3 40 5 لتر ult) أ(الوسط (الوسط ا (الوسط ا (الوسط ا (الوسط تخدم المرشح المرشح المرشح المرشح االمرشح حالياً (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| كلوريد صوديوم 0.50.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 كبو ب 7 0 الست نان EEE انكر ء 6 ا ا 5 9" EERE تيتا نا اا EEE EERE 0s فتك EN اسك ا ا انك ذا كا ما نا ا انا ا نك نكا 11[ 40111
— 2 4 —
EEEEENL
EELEEEE Ra خليط حمض أميني 50 x] Ix أل x| مرة w/o جلوكوز وا - . 45 جلوتامين 42 EEE EE التفاصيل ينمو في ينمو في اينمو في 24 24 24 ساعة ساعة اساعة تابع الجدول 5 مكونات الوسط 6 7 8 9 ]10 للد 12 (الوسط أ(الوسط (الوسط أ(الوسط أ(الوسط (الوسط | (الوسط المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF كلوريد صوديوم 0.5 0.5 0.5 [0.5 0.5 [0.5 اذ (NaCl) 1 [ 1 1 1 101
1[ 11111 ** | 0 ل 88 ينل نا ذا EE ic cc ممت ناا EEE i EE تك ذا 55 تتا 5 5 5 5 5 ES متفدة نا ذلا 5 نا ا نا
خليط حمض أميني 50 IX IX IX| IX] TT 0 جلوكوز وا- 45.42 45.42 |45.42 ]45.42 تجو و i 111133
— 6 2 — التفاصيل ينمو في ينمو في 24 48 de lu de Lu كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 5 والشكل 5؛ فقط في الحالة التي اشتمل فيها الوسط على ببتونات مشتقة من نبات وتوليفة من اثنين أو أكثر من معادن (KH2PO4 Na2HPO4 5 K2HPO4 واحتوت Lead على فيتامينات والأحماض الأمينية؛ نمت Clostridium botulinum في غضون 24 ساعة بعد تطعيم البكتريا. بالإضافة إلى ذلك؛ في الحالة التي كان فيها الوسط WIA من ببتون مشتق من نبات ومعدن واحتوى على فيتامينات؛ أحماض أمينية 5 ”™ BD Recharge بدون جلوكوز وا- جلوتامين" البكتريا نمت في غضون 8 ساعة بعد تطعيم البكتريا. (Lelia تشتمل التركيبة المناسبة أكثر لوسط لزراعة Clostridium Ae botulinum ببتونات مشتقة من نبات» (Na2HPO4 (K2HPO4 (KH2PO4 أحماض أمينية وفيتامينات. 0 المثال 6: زراعة Clostridium botulinum فى أوساط تحتوي على ببتونات مختلفة مشتقة من نبات تم إجراء تجرية لفحص ما إذا كان زراعة Clostridium botulinum ممكناً عند إضافة توليفات مختلفة من ببتونات مشتقة من نبات إلى الوسط APF من Jal 5. الجدول 6 يوضح مكونات الوسط لزراعة «Clostridium botulinum الذي يحتوي على ببتونات 5 مختلفة مشتقة من نبات؛ ونتائج فحص نمو البكتريا في الأوساط. الجدول 6
— 7 2 — مكونات الوسط [an االوسط 1 2 3 4 5 لتر المستخ ا(الوسط أ(الوسط أ(الوسط ا(الوسط ا(الوسط دم المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح (APF| (APF| (APF| (APF| (APF حالياً 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5] 0.5) 5 كلوريد صوديوم (NaCl)
CE
HERE 00 اخ 0.1 ثيوجليكولات صوديوم 10 10 10 Hy-Pea™ 7404 10 10 UltraPep™
Cotton 888818 © 10 10 10 HyPep™ 4601N
— 8 2 — IX IX IX IX Vitamin Kit 100X خليط حمض أميني IX IX IX IX X50 0 جلوكوز و-ا 45.1 جلوتامين 42 1 1 1 1 1 تابع الجدول 6 مكونات الوسط |6 7 8 9 0 11 122 132 (الوسط |(الوسط ا(الوسط |(الوسط |(الوسط ا(الوسط |(الوسط | Jas) المرشح |المرشح |المرشح |المرشح |المرشح |المرشح المرشح |المرشح (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF كلوريد صوديوم ]0.5 ]0.5 ]0.5 ]0.5 ]0.5 0.5 ]0.5 0.5 (NaCl)
٠ 2 9 ٠ ناتج تحليل كازين وسط ثيوجليكولات 0.1 ثيوجليكولات صوديوم 10 10 10 Hy—-Pea™ 7404 10 10 UltraPep™
Cotton 10 10 10 HyPep™ 7504 10 10 10 HyPep™ 4601N
— 3 0 —
MgSO4 7120 IX| Vitamin Kit كل صل IX] لآق لفق بر ا 100X خليط حمض ا IX] »ا ا »ا ا ا آلا X50 أميني 45.4] 4 جلوكوز W/o و-ا جلوتامين 2 2 كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 6 والشكل 6؛ حتى عند إضافة واحد فقط أو اثنين من ال 4 ببتونات المشتقة من نبات إلى الوسط؛ كان زراعة Clostridium botulinum ممكناً. بمراعاة نتائج الأمثلة 5 و6؛ يمكن أن يتضح أن ببتون واحد على الأقل مشتق من نبات ينبغي أن يوجد فى الوسط وأن الببتون المشتق من نبات لا يمكن استبداله ب "460181987 "BD بدون 5 جلوكوز وا- جلوتامين" (Cat No. 670002, BD Bioscience) (مكون وسط أساسه مستخلص خميرة - خالي من جلوكوز وا- جلوتامين). المثال 7: تجرية لاختيار اثنين من 3 أنواع من معادن موجودة في الوسط فى الأمثلة 1 إلى 7 تم تحديد أن تركيبة الوسط APF المستخدمة لزراعة Clostridium 0 تشتمل على جلوكوز؛ كلوريد صوديوم (NaCl) 4 ببتونات مشتقة من نبات؛ 3 0 معادن؛ الأحماض الأمينية؛ وفيتامينات. من بين مكونات الوسط هذه؛ تمت إزالة مكونات الوسط التي لا تتسم بأي تأثير كبير على نمو البكتريا لتقليل عدد مكونات الوسط. بالتالى؛ تم الحكم Ob الأحماض الأمينية والفيتامينات ليس لها تأثير يذكر على نمو «Clostridium botulinum وبموجب هذا الحكم؛ تمت Al) الأحماض الأمينية والفيتامينات من مكونات الوسط. بالإضافة إلى ذلك؛ لاختيار 2 من 3 أنواع من المعادن» تم زراعة البكتريا باستخدام تركيبات الوسط الموضحة
— 1 3 — في الجدول JT وتم قياس قيم OD (540 نانو متر و600 نانو متر) عند 24 ساعة 4 48 del بعد تطعيم البكتريا ومقارنته. الجدول 7 يوضح تركيبات الأوساط الناتجة من الاختيار في المرحلة الأولى للمعادن ونمو Clostridium botulinum في الأوساط. الجدول 7 مكونات الوسط . fan] لتر |الوسط 1١ 2 3 4 5 المستخد|(الوسط أ(الوسط أ(الوسط أ(الوسط أ(الوسط م حالياً |المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح (APF| (APF| (APF| (APF| (APF كلوريد صوديوم ]0.5 0.5 ]0.5 ]0.5 0.5 ]0.5 50 (NaCl) وسط 5 5 ثيوجليكولات Hy-Pea™ 10 10 10 10 10 10 7404 Ultra Pep™ 10 10 10 10 10 Cotton
— 3 2 —
10 10 10 10 10 HyPep™ 7504 10 10 10 10 10 10 HyPep™ 4601N قن قن ا 6 ا نت قا 4.218 3.2266 6 - -١1 0.942 540] 24 مزرعة لمدة 0.0246) 7 انو متر OD ساعة
3.593 2.691| 2 - -1 0.780 600
نانو 6 0.020
متر مزرعة sad 48 540 |12.459— - 6 5.220 |3.502 ساعة OD انو متر 0.014 (0.019
2.989 4.288 2 - -[2.057| 600
نانو 0.015 0.018
متر
تابع الجدول 7 مكونات Laugh 6 7 8 9 10 11 (الوسط (الوسط أ(الوسط ا(الوسط (الوسط أ(الوسط
— 3 3 — المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح (APF (APF (APF (APF (APF (APF كلوريد صوديوم 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 NaCl ) ( 7 ا Pe أ وسط ثيوجليكولات - بر 10 10 10 10 10 10 7404 Ultra Pep™ |10 10 10 10 10 10 Cotton HyPep™ 10 10 10 10 10 10 7504 HyPep™ 10 10 10 10 10 10 4601N متا 07 5 I نكا مان ا ا نذا ذا نكا نكا I 1556 es نكا نذا نا
— 4 3 — مزرعة لمدة 24 ]3.214 |4.964 ]3.991 3.951 |3.938 3.594 ساعة OD 2.680 |4.304 |3.351 |3.341 ]3.335 |3.036 مزرعة لمدة 48 5.4601 2.056 2.603 5.726 |5.682 5.434 ساعة 00 4.480 1.587 2.020 4.688 4.647 4.459 كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 7؛ عند 24 ساعة بعد تطعيم (LS أوضح الوسط المستخدم حالياً قيمة OD )540 نانو متر) تبلغ 0.942 وأوضح الوسط APF الذي sins على K2HPO4 و8211004ل! lef قمية ل OD (540 نانو متر) تبلغ 4.964 من بين الأوساط APF بالإضافة إلى ذلك؛ عند 48 ساعة بعد تطعيم البكترياء أوضح الوسط APF الذي يحتوي على KH2PO4 و el Na2HPO4 قيمة ل OD والنمو البكتيري النشط. في الوقت نفسه؛ على النحو الموضح في الشكل 7 إلى الشكل 7د؛ تم رسم مخططات محيطية ل 1»2104 و1182/1004 توضح تأثيرات رئيسية كبيرة. كنتيجة لذلك؛ عند زيادة تركيزات (Na2HPO4 3 K2HPO4 زادت قيمة .OD وأوضح el Clostridium botulinum نمو عند إضافة المعادن إلى الوسط عند تركيزات تبلغ =KH2PO4 0 جم/ لتر من» =K2HPO4 [o> 5.5 10 لتر من ؛ و [o> 5= Na2HPO4 لتر . في الوقت نفسه؛ لتأكيد نتائج المزرعة البكتيرية وفقاً لمزيد من الإضافة الدقيقة للمعادن» تم shal تجرية عند المرحلة الثانية باستخدام طريقة سطح الاستجابة. ولأن تركيبة الوسط لا يمكن أن تتخذ dod سالبة؛ تم تخطيط التجرية باستخدام تصميم COF (مركب مركزي موجه) وإجرائها بواسطة زراعة البكتريا في تركيبات الوسط الموضحة في الجدول 8. ثم؛ تم إقران النتائج التجريبية مع نتائج FFD 5 التي تم إجرائها مسبقاً وإخضاعها إلى تحليل إحصائي.
الجدول 8 يوضح تركيبات أوساط تم الحصول عليها بواسطة الاختيار في المرحلة الثانية للمعادن
ونمو Clostridium botulinum في الأوساط.
الجدول 8 مكونات الوسط جم/ لتر |1 (الوسط أ2 (الوسط أ3 (الوسط أ4 (الوسط |5 (الوسط
endl asa المرشح oa المرشح ل 0 كلوريد صوديوم ]0.5 ]05 50 500 sol 50 م Tr HE HE UltraPep ™ 10 10 10 10 10 10
وات ِ
OD 24 ساعة 0نانو |4.408 3.587 2.233 ]4.639 1.778 متر 1.503١ 4.068] 1.896] 3.086 3.836 600 نانو متر OD 48 ساعة 40كنانو ا5.021 5.760 ]4.359 |3.594 ]4.529 متر 00نانو ]4.284 4.925 ]3.695 3.049 ]3.832 متر تابع الجدول 8 مكونات الوسط 6 (الوسط أ7 (الوسط |8 (الوسط Of (الوسط |الوسط dial المرشح. المرشح. المرشح. المستخدم Ws| (APF| (APF| (APF| (APF كلوريد صوديوم 50 50 0.5 0.5 (NaCl) امسا ا ا نا حم | | FC ل 5 FE 0 1
— 3 7 — 10 10 10 10 UltraPep™
Cotton
EERE rer 1 5 ١ ا - 1 re تم ةك نا ">" ">" IB 1.556 4.046] 3.907 3.904| 4.332 ساعة 24 OD 3.777 |3.366 |3.368 |3.505 |1.307 OD 48 ساعة 4.054 ]6.492 5.621 5.473 3.622 3.457 |5.603 4.830 4.677 |3.062 تم رسم مخططات محيطية واستخدامها للمقارنة. على النحو الموضح في الأشكال 8اً إلى 8د؛ زادت قيمة OD بانخفاض تركيز .KH2PO4 عند مقارنة الظروف الأمثل؛ كانت النتائج مختلفة عن نتائج FFD بسبب تأثير الانحناء؛ وكانت قيمة K2HPO4 متشابهة؛ ولكن تغيرت قيمة Na2HPO4 من 5 جم/ لتر إلى 3.1313 جم/ لتر. بالتالي؛ تم التأكيد بأن الظروف المعدنية الأمثل للوسط بواسطة التحليل الإحصائي هي 5.5 جم/ لتر من KZHPO4 و3 جم/ لتر من .Na2HPO4 المتال 8: تجرية لاختيار ببتونات مشتقة من نبات موجودة في وسط
— 8 3 — على النحو الموضح في الجداول 9 و10؛ تم إقران ببتونات مشتقة من نبات وفقاً لتصميم dad وتم فحص نمو Clostridium botulinum في وسط يحتوي على الببتونات المقترنة المشتقة من نبات. الجدول 9 يوضح تركيبات أوساط تم الحصول عليها بواسطة الاختيار في المرحلة الأولى لببتونات مشتقة من نبات ونمو Clostridium botulinum باستخدام الأوساط. الجدول 9 مكونات الوسط جم/ لتر |1 (الوسط 2 (الوسط |3 (الوسط |4 (الوسط 5 (الوسط المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح (APF| (APF| (APF -طح) (APF| كلوريد صوديوم 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (NaCl) Hy-Pea™ 10 5 10 5 5 7404 UltraPep ™ 10 5 5 5 10 Cotton
oo 5ق HyPep™ 10 5 5 5 10 4601N J 3 | ***<* OD 24 ساعة 40كنانو |3.541 2.440 3.345 ]3.305 3.317 متر 51600 |3.058 2.066 2.868 2.831 |2.853 متر OD 46 ساعة 40كنانوا0.811 ]0.935 ]0.731 ا0.799 1.400١ متر 600 0.714 0.795 0.647 |0.694 1.199 نانو متر تابع الجدول 9 مكونات الوسط |6 7 8 9 10 11 الوسط (الوسط أ(الوسط أ(الوسط أ(الوسط أ(الوسط ا(الوسط المستخد المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح آم حالياً (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF
كلوريد صوديوم ]0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 |0.5 TTT T= الس ان نا أن أن أن ا ا EERE وسط 5 شا ا Hy-Pea™ 7 6.667 10 اط UltraPep ™ 7 |6.667 20 10 و 85 HyPep™ 10 6.667 20 10 7 8 HyPep™ 10 6.667 10 7 889 i تتا ا I I لاا نضا ذا ذا خا نذا i TTT ا Fi
— 1 4 — 0.680 ]1.403 ]0.929 ]1.548 ]1.210 ]1.764 |2.812 الجدول 10 يوضح تركيبات أوساط تم الحصول عليها بواسطة الاختيار في المرحلة الثانية لببتونات مشتقة من نبات ونمو Clostridium botulinum باستخدام الأوساط. الجدول 10 مكونات الوسط جم/ |1 2 3 4 5 6 لتر Lusi (الوسط (الوسط (الوسط Lud) bug) المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح المرشح (APF| (APF| (APF| (APF -طح) (APF| كلوريد صوديوم 0.5 ]0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 (NaCl) EEE J I | 0 855 UltraPep™ 10 10 6.667 ]10 Cotton
م ل BEES oo 0 85 هت 33 0 3 3 3 1 OD 24 ساعة 3.425|540 3.640 2.349 |2.581 ]3.272 1.289 JRE مولار 2.969|600 ا3.159 2.029 2.244 1.096 1.096 JRE مولار OD 48 ساعة 0.769540 0.836١ 1.633 0.961 1.501 ]1.148 JRE مولار 600 0.675 ]0.732 1.420 0.854 ]1.270 0.982 JRE مولار تابع الجدول 10
— 3 4 — مكونات الوسط |7 8 9 10 11 12 13 الوسط (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط (الوسط المستخ المرشح |المرشح |المرشح |المرشح |المرشح المرشح |المرشح |دم (APF (APF (APF (APF (APF (APF (APF حالياً كلوريد صوديوم 0.5 ]0.5 اذ 0.5 !0.5 ]0.5 ]0.5 (NaCl) ناتج تحليل 20 كازين وسط ثيوجليكولات Hy-Pea™ 20 10 10 10 7404 UltraPep™ 10 10 10 Cotton HyPep™ 6 10 10 10 7504 7
HyPep™ 20 6.66 ا10 10 10 4601N 7 OD 24 ساعة 3.51 |0.77 ]1.25 |3.45 5.37 5.23 ]4.80 2.20 4 6 7 7 6 5 9 8 3.03 0.64 ]1.09 2.95 4.68 4.53 4.24 1.66 2 9 8 0 9 4 6 3 OD 48 ساعة 0.80 |0.88 |1.27 |0.96 |1.98 ا1.99 ]2.01 3.18 3 0 8 2 6 4 0 5 9 |0.74 ]1.12 |0.81 ]1.70 {1.71 )1.71 2.70 8 4 4 8 8 0 7 8 كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الأشكال (N19 9ج؛ تم رسم مخططات محيطية واستخدامها للتحليل. تم تحديد أن 7504 HyPep™ المناظر للمكون © له أدنى تأثير على نمو Clostridium botulinum بناءً على هذا التحديد؛ تم استبعاد 7504 HYPep™ من مكونات الوسط. ختاماً»؛ تم تحديد أن تركيبة الببتونات المشتقة من نبات المختارة في النهاية الموجودة في الوسط تشتمل على 5 [aa لتر من 7504 "1/0801 10 جم/ لتر من UltraPep™ Cotton و5 [an لتر من 460111 7م11/06. المثال 9: زراعة Clostridium botulinum في وسط يحتوي أو لا يحتوي على NaCl
— 5 4 — اشتملت تركيبات الوسط المستخدمة في الأمثلة 1 إلى 8 على كميات صغيرة )0.5 جم/ لتر) من .NaCl لفحص نمو Clostridium botulinum وفقاً لتغير تركيز (NaCl تم تعديل Sina NaCl في الوسط إلى نطاق يتراوح من 0 إلى 1 جم/ لتر من» يليه زراعة البكتريا في الوسط. الجدول 11 يوضح مكونات أوساط تحتوي على -ا80ل لزراعة Clostridium botulinum ونمو Clostridium botulinum في الأوساط. الجدول 11 مكونات جم/ |1 2 3 4 5 6 7 8 9 الوسط لتر (الوسطا(الوسط | (الوسط|(الوسط |(الوسط أ|(الوسطا(الوسط|(الوسطا (الوسط المرشح المرشح |المرشح |المرشح |المرشح |المرشح |المرشح |المرشح |المرشح (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF| (APF
كلوريد 0.5 0.5 ]0.5 0.5 11 1 1 صوديوم
(NaCl)
5 5 Hy-Pea™ 7404
10 10} 10 10 10] 10 10 10] 10] UltraPep
™ Cotton
5 5 5 5 5 5 5 5 5 5| HyPep™ 4601N
OD 24 |540 ]2.16 2.15 |2.15 ]2.14 2.11 |2.12 ]2.14 ]2.14 2.14 ساعة sb |6 4 1 8 5 0 5 7 0 مولار 600 ]1.94 ]1.92 ا1.92 ]1.92 ا1.89 1.89 1.91 ]1.92 ]1.91 sb ]0 3 2 2 2 6 9 2 7 مولار كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الشكل 11( لم يوجد أي اختلاف في نمو البكتريا سواء اشتمل الوسط على NaCl أو لم يشتمل عليه. بالتالي؛ تم استبعاد NaCl من مكونات وسط APF النهائية. المثال 10: قياس نمو نمط Clostridium botulinum في وسط APF المختار في النهاية وتركيز السم تم تطعيم Clostridium botulinum في وسط مزرعة Clostridium botulinum المختار في النهايية )10 جم/ لتر من جلوكوز» 5 جم/ لتر من 7404 (Hy-Pea™ 10 جم/ لتر من UltraPep™ Cotton 5 جم/ لتر من (HyPep™ 4601IN 5.5 جم/ لتر من 211004ما و3 جم/ لتر من (Na2HPO4 الذي تم تحديده بناءً على نتائج الأمثلة 1 إلى 9؛ ثم تم قياس نمط نمو البكتريا وتركيز السم. الجدول 12 يوضح OD dad المعتمدة على الزمن وتركيز السم ل Clostridium botulinum الذي تم إنمائه في وسط ]80 المختار في النهاية. الجدول 12
زمن المزرعة ES تركيز السم؛ في ala أتركيز السم الإجمالي؛ (ساعة) 0 5 ]600 الطافية (ميكرو [fabs ابعد تمزق ADL (ميكرو I ااا اا من سنن سل I i BI ل EL I I a — كنتيجة لذلك؛ على النحو الموضح في الجدول 12 والشكل 10( بدأت قيمة OD في الزيادة بعد 2 ساعة من زراعة Clostridium botulinum وعند 24 ساعة من الزراعة؛ أوضحت المزرعة
— 8 4 — 70 تبلغ 3.5465 5 OD600NM تبلغ 3.0695. ثم؛ انخفضت قيمة OD بالتدريج؛ وعند 48 ساعة من cel) أوضحت المزرعة 00540017 تبلغ 0.792 5 OD600NM تبلغ 4 بدا تركيز السم في المادة الطافية من Clostridium botulinum started في الزيادة بعد 24 ساعة من الزراعة وأوضح قيمة نهائية تبلغ 31.41 ميكرو جرام/ مل. عند قياس تركيز السم بعد تمزق (LAS تم الاحتفاظ بالسم الذي بدأ إنتاجه بعد 5 ساعات من الزراعة؛ واستمر تركيز السم في الزيادة؛ عند مستوى منتظم بعد 28 ساعة من الزراعة؛ وأوضح قيمة نهائية تبلغ 9 ميكرو [aha مل. ختاماً؛ يتم تلخيص تركيبة APF المختار في النهائية (وسط خالي من بروتين حيواني) التي تم تحديدها بناءً على نتائج الأمثلة 1 إلى 10 في الجدول 13. 0 الجدول 13 مصدر نيتروجين (ببتون نباتي) | 7404 Hy-Pea™ UltraPep™ Cotton HyPep™ 4601N معدن K2HPO4 Na2HPO4 قابلية التطبيق الصناعي كما تم وصه أعلاه؛ عند استخدام الوسط وفقاً للإختراع الحالي؛ الذي يحتوي على ببتونات مشتقة من نبات ومعادن؛ لزراعة Clostridium botulinum يبلغ معدل نمو البكتريا في الوسط نحو 2-5 مرة أكبر من ذلك الموجود في الوسط المستخدم حالياً. بالإضافة إلى ذلك؛ عند إنتاج سم 5 البتيلينيوم بواسطة زراعة البكتريا في الوسط» يمكن الوقاية من العدوى باعتلال الدماغ الاسفنجي
— 9 4 — المعدي (TSE) transmissible spongiform encephalopathy أو ما إلى ذلك بواسطة منع إدخال مكونات مشتقة من الحيوان. على الرغم من وصف الاختراع الحالي بالتفصيل بالإشارة إلى الأشكال المحددة؛ يتضح لهؤلاء المهرة في الفن أن هذا الوصف يوجد فقط لنموذج مفضل ولا يقيد نطاق الاختراع الحالي. بالتالي؛ يتم تحديد النطاق الجوهري للاختراع الحالي في عناصر لحماية المرفقة ومكافثاتها.
Claims (8)
- عناصر الحماية 1- تركيبة وسط لزراعة مطثية وشيقية Clostridium botulinum ؛ حيث تشتمل تركيبة الوسط medium medium على: ببتونات 06010165 مشتقة من نبات تشتمل على تحلل البازلاء بالماء pea hydrolysate « ناتج تحلل بذرة القطن cotton seed بالماء وناتج تحلل جلوتين القمح wheat gluten hydrolysate 5 بالماء بنسبة بين 1: 0.24 - 43.62: 0.01 - 50.57 بالوزن؛ مصدر كريبون carbon source « و معدن mineral واحد على الأقل يتم اختياره من المجموعة المكونة من فوسفات ثنائي البوتاسيوم K2ZHPO4) dipotassium phosphate )؛ فوسفات ثنائي الصوديوم disodium Na2HPO4) phosphate ) و فوسفات أحادي البوتاسيوم monopotassium phosphate (KH2PO4) 0 2- تركيبة الوسط medium وفقاً لعنصر الحماية رقم 1؛ حيث توجد الببتونات peptones المشتقة من نبات sina من 9010-0.1 وزن/ حجم. 3- تركيبة الوسط medium وفقاً لعنصر الحماية رقم 1؛ حيث يتم إخضاع الببتون peptone المشتق من نبات إلى المعالجة بإنزيم .enzyme treatment 4- تركيبة الوسط medium وفقاً لعنصر الحماية رقم 1؛ حيث sas المعدن mineral في تركيبة الوسط Medium بمحتوى من %3.5-0.05 وزن/ حجم.5- طريقة لإنتاج سم البتيلينيوم botulinum toxin ؛ تشتمل على الخطوات التالية: (أ) زراعة باستخدام تركيبة الوسط medium وفقاً لأي من عناصر الحماية رقم 1 إلى 4 لإنتاج سم البتيلينيوم botulinum toxin ؛ و (ب) استخلاص سم البتيلينيوم botulinum toxin الناتج.— 1 5 — 6- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 5( حيث يتم shal المزرعة تحت ظروف لا هوائية.anaerobic conditions 7- الطريقة وفقاً لعنصر الحماية رقم 5 حيث يُختار سم البتيلينيوم botulinum toxin من المجموعة التي تتكون من الأنواع المصلية لسم البتيلينيوم «E «D «C «B (A botulinum toxin GF— 5 2 —. ١ الشكل ا وسط صل | أوساط #به | عينة I /, اا ل we 1 ' is hn 1] | أyo. 1 ; Nin \ en = oo el Ol الا ا 0 ا ا ا اا /' 0 : سو اا اللا i : PA or ٍ ا 1 3 ا ا اا ,8 إْ deg | HH = 7 ا اا | «#ضاعة أ ا 2 ا ساق '/ ٍ ا Bi . | = 1 ا الشكل + سس دعر امسا الم ستيه تمن WE ركونات أخريين ا امتح تمس م Ea ْ —— نبا بس اا i اح ا ا I TY WN a DRA La NN | ا ا ا اا ااام : . N ا ْ CA NE gH NH Se NH NE ْ 0 ب \ : . . : اد إ ا ْ oe 1 | | ا ' 5 A | be a3 2 اال ل a. a 1. 1 | اد إ! Lo ْ ّ ٍ اا ' اد إْ | sR LL Xا الشكل ؟ المي ويس nd لم عي اللا ا ا ا !ٍ لي لي / ans اميتي رامين sai واس ال لجس اس ١ ١ ا با لس ا ا ع لل gl+ الحا 1 xX i 4 # ix 3 5 i § TRE SN ! 0 3. 1 N 8: 1 8 0 2 oa a ةا انوا الوط i لواب ety’ RETR ٍ dangle | Barly Vo Poe i Cw bo.Pow CTC TI Se CLE BEES EE رتح ا د \ i { Voie 1 ET ae I cae Lise RE 3 Vise N ERE 3 NE ] aa ا a اجاج اج ا مجه مج لج جح اك المح جه جا ا جل لمجت اميه اه ات مه اماد اج مه ل Ha Nn 1 Nn 8 ا و Ww اا \ Lo NN \ ل ا ا ا 8 NR an NE DN NN 8 EEE EA TE EEN THIN NE Ba Tana Ca ا ا سي ا a AEE اا حا الج ا ا و ا ا اام BEB ا ا Se ass haan EH SL ا ل ل ال ا ااا ل يست امبر حب Nana SEES Ting إٍْ 3 ia الج 1 4 ا 4 3 ] i 1 " i 0 oe بي |0 مط اوفط 01 زواع بيط Do Sed | Bed Sar 5 £3 Eat ; 3 i Fab) 1 ا 1 مب gets & 1 ENE كه ؟ N a de N NER A.EN نمم ميج ' at \ 2s ale ِْ لمر طح ارطخ \ رشح 8 امح HN 0 rr 1 الي i CAFE 1 + اج i SAE : {AEE CARE EE . 7" \ ni NNR a \\ gd NN اد ل أ ل ل ا ا ا aN wlll ا ا ا ااا Ea RY Nh Ala AE Es NE ae ا ا ااا ل اب اا لاد ا XN a a EE AE NRT ل NT Im م I MIMI LMM EY NN٠ 5 5 — + الشال ل SE و . Bgl gig | Se a3 | Beaty Show 1 والوسحة أ es alts «الوسعة | ie لمر شح : ْ ا Ted gud لمر شخ الي بتي ae el لس ْ مي د ب /' وي ْ AE وا ِْ ا ا ا ا ا ا ENE NaN 8 ا NN i RE Na XB ا ل a : CN a am YER Yq vy Be OOSE... NE. للللامة - لان * ْ 8 3 i an \ 4 لزاع ريط | Se |e Sei | en | deen | Ses TT] ريع | gee رشي IEP Ee | المرضع ase sass a CASE ا ات الإ اا الا ا اه تسن اط 8 8 ا 8 BN VEER 2 BEE > RR REN 8 1 NN ea إْ NEE a ae الدب IEE TT اد٠ 5 6 — م B® 30 i H i i ا 1 ؟. ا is i N i . ١ ا SJ : ة 1# ول اج | SS ا 1 لل + 0# ا os 8 eid < 0 1 1 1 SIA i 5 a ! dx ch 1 2 8 حا ٍ % & 1 8 ; 5 N : ا ل EE elt Fags Sod الم {sti ; Hegel : الم : Fergal ْ Salts a Sg ْ: لوبطحي 1 [IE الوم هد ل اب !ليه ١ ا ان المت id LE مد شرن ريع المرشوا مرج ِْ LR اضر ال رع Fo Fu et Sl : أ i SARE i TARE { Co Cay ; CAR يي 1 TARR إٍْ ا 1 واج 1 "0 i i CARE ; cy i LF N TAS 7 ; ٍ د 1 1 \ 1 i 1 2 H ; SRE 1 nN RR - SRE Sa — NT WN | إْ : ا EE EO Er TR ER § 1 اا ا / i La a a aN Ni NL a AA aaa § 1 A LL LL Ll ا ا ا ل 1 اد ا اا د i NN NNN TR EY nN NN 3 1 ا ا إْ ا i NL TR RN rh as RRR Nai ا 0 = 3 > 3 ANN NN ! aE ا > NE aaa NaN HEY الا i Lo BESET EE Cd a 0s a a eeeWald Be ٍْ = a EE hi 8 NL و فالومترع 01 evs ' 8: سن 3 ال ا : م : na 8 - tb الح EN En Red N : FERRE SR Sn ! a +1 > Nn و ال >». 0 nl 0 0 gp EEE NEE.WN + - oy N Tz ل BA Tol Gem Sa Sh NEE الم ! od AD 2 DN NE. ا ٍ 2 ددا =. te = || SEE so nN ASE pd إٍْ ل 3 coe ; ee oo ب 4ط ema 1 ّ ضAN اليka Sd Sogn : & nn SE ge : a A 4d SEE EEE 0 EE aaa i ل {RA 1 SRE EEE 1 SARIN طوف Li Na i SAnUARDeUnG : da > 1 Cr aaa 1 ٍ ا EE NI 4 ب" ل متت 1 ل ل ل اح ا احا i mmm ب ا ا الا =r oO on TE fo A 0 =e Tae | Ea 0 ٍ : Ha |b ا bd ل 4 الخ ل ip HES ENN 1 hy Na | 8 ٍ =i = I C1 Bd ع SEES aN 0 pel ا Cl HI 2# Li LR 5 88 FE EE ——— if لمحي + 1 a Na) NEE + ER8seeee 1 = NE Maa 1 سمج اللا Ne == a 0 ا EE مجح م لج Pi : LL ESS CoE ER —— 1 peste فيم bo Nh. 0 HT 0 EERIE SHE EE. | i HE Yoo mama 8 ا i 0 لي 1 5 ا 0 ب لع 1 ا اا تحط هر Li Fact حد : SINE الا الا ل ا ال ا و * 5 سار 1 8 i K2HPO4bi اي الي ay Feat 1 ty a haw 3 i ا لال مضي 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 : 0 8 0 SEER] = ب" JR 1 8 الإ _إ_ _ _ _ _ _ _ _ _ أ أ أ أ 1 2 EE vw Ss Sr 1 FELT RECA RANE RE 1 ا SEE EE \ ا 3 جا % الإ a ps 1 ا نش 8 الإ ا إ إ أ a ا“ Hes ١ ا Naa 5 لهب \ 0 ا : ٍّ 1 ل ا ا خخ : BF ne \ ¥ + أ ا :ّ ب 1 ل ا 8 : تعض 1 0 ' تت : a سا : SHON aS : 8 * 3 :0 1 ا N 1 ل : ridin © 1 Eee : D ane § 1 SRR. i ا 0 ل o ae IR NEE a Y i EY EEE NEE _- Ea \ oO Bema SHEE 2 \ 3 : ل 5 0 4 Rope RR 1 5 0 : 9 ou 1 0 a § 1 BE SN SHER. EERE 1 : TREE NS I 1 A Bat re I 3 ل CEN Hat. ASR ad 5 1 0 ال 1 Ea aS LIE fu \ a I A اا 8 ب 3 ل EER. 5 HE + On a 1 ل ARRAN 1 CE 2 SE 3 8 ٠ : BBR 3 ا 3 13 $n اشر SR : ال of 0 : & 1 : وذ ¥ 3 سق * 5 y gr . oo 1 1 1 : 0 1 KOHPO4 RE = (3 4 1 ON TRE Eg 1 Toile Boo RR Ne 1 * Aاج لحي2 امش ا ا ل ا ا ا i] REE 0 : مي تبحر RIES ا ل FEAR اد ال اد 0 : Set a : ارق لاد N » 1 5 4 مره : 1 د Ve جا > ل 0 ud TE JER | : 0 0 81 + i 4 +43 LESAN] 0 1 الجا * لاحك ا 1 لع“ ما حو : " مشت ال AS د لمجي سو مد سدس لد للا لد لد ل ا ا ا N x hE: + :0 } v 87 : ¥ NR 1 8 v 87 : ¥ NR 1 8 v 87 : ¥ v 87 : 8 NR 1 8 N 1 i NE 1 3 x v 2) 2 : RN Fd 5 i 3 ا v EAR & 1 3 3 = ؟ انم io 3 N 2 1 م Balk At FN N ERENS A 0+ 3 N 65 NR: a 3 1 > 1 ب NE: on : Pe 1 N 8 NE oF 1 Rion Salen ؟ إلى 1 0 NE م i 9 3 AY N 2 NE & 1 Sy 3 N & NE & 1 ارق عل 8 : N 2 NE 5 : 3 v 3 ب : 3 N م NE 3 1 : N & NE & 1 3 1 \ & 1 3 3 N # NE & 1 8 ل 1 il NR بن 3 N ب N S NE ol ] N N & NE 5 : EAN 1 5 NE & ! N fi i & NE oF 1 N ا ا الت PE EEE 1 ات الححح د ححا حت حت ححا جح د دح حت حت ححا ححا تحال حال حد جح حا اح حت ححا لجح احج 3 1 SE SI hic soot Goa snk a si So ak on, wR امم امسا ا i i io iri TN Ra > : 3 Sd oh 1 y ؟ اث a : م RN To 3 ty و NE 2 3 3 - NE a : 3 2 hE 2 1 3 8 يب hE ب 1 2 3 . & NR: ان : . N oF 1 ad : eit WY الج wi 8 3 Pa NE a 1 سملاية لالز 5 3 N 1 ا NE: od 3 8 1 ب NE ~ 2 اسن لحن N & با د 0 3 RE a ا BRR St RIN a BA ا ب LORE TE ERNE ا ل اا 2 A A RRR RRR or مكل Re pay BEES NE pe i ae ات ته الاج ا ل a a a RR Sth A A AT I RRR: At On EE I RRR: At ES له هه 4 0 NR :1. RX H 1 SH ny i. ١ مرح i ١ 1 ١ ا he ES ال انين $C a p EE H ا {Regent} Dgen v i EEE i BE] i ا اا SE ¥ : ال Es = i 2 2 ا aaa ا ال i : 8 ل ا 7 - ¥ : : O Ee ل ا i الا ا لس a : 0 x SE RRR: RN © J i HS : 81 i a aa ؟ i Reon NRE NN ¥ 1 1 x RE EE RE SN =~ 3 1 ممم EY مم * i BET, YE SS Ra ا ا ا ا 0 H as iB AE i : fan) RE RR حلي ال ا H BR he 0 ب ا ا ا ا ا 1 Ce CEE REE Men ع — LE SEY IEEE EEN REE : : 1 1: ا ل 3 . hb » EE EEN REE قد الثيات 1 REN 5 OR i 0 Eh.
- LEE, i 0 0 سحن ولا ا Ta Tt] 8 He EE en a ال امسا RE ا H fo bo RN LL HT ; . 3 3 co - BSR : ان BS oy 0: ai 4 * ا ا( i : Ll Sn NOTIN SRN v K2HPO4 ST من H
- 0. TNT Sb RRR Hy ل H Bs hie a i i الل
- لقتل حي 7 : 3 : i 1 ص Ea 1 1 1 : 1 a 5 3 i ااا ا :0 xX - EEE i EE 4 Le ee ee ! i : TS aN ROE a2 L343 Im 3 1 a : 3 Ne \ B ERR 5 1 1 يعن ا 8 ١ 1 جا EEE ا wi AR STE 3 3 ممخأ'إ إ إ_إ_[إ[إ[إ[إ[إ_ _إ_إ_إ_[إ[إ[إ[إ أ أ أ أ 3 d : تت hg FR EE RE 20-12 JR i 1 0 الإ أ أ on: ER i ee SER i 0 3 3 ا اج ا مج تج مج جح اج se Se eT \ ا —-— Na SEEN ¥ .0 Ni NN 1 : بلحي 1 9 ا ا 2 : » * ب 1 3 N - * ] ا Ni لم Oud LE Na RRR : i Boe TOR a SRN fal . i Ce EN HES m— og i VN 1 ا الإ 5 EEN 0 : Ra 1 ل See EEN En RR... 5 i = ااا ا ما ا Mere 0 Sh ال د اله gm : قيم الثبات ل ل 3 7 : ا ل : Poin EN Na 3 EE ERY FEN 3 ا EE nn RE SS SIRS i = 1 يبي يه جيجي بي يي يجيي وي يي ا يا جب بب), © الالكج 5 تا ساقي pal Ti Tan 0 1 a 1 TT EY Pa 8 ¥ 0 1 & \ vo x #4 : 3 7 صر ond : 1 ODI 2 اال ل 5 ا : KZ | 0 : : REP = 2 0 Fy 1 3 BIBS Ih I00HER A 3 لي ا BN: Sh AT Hs sett fous 3 ا 3 3 dS
- الح اع SA ذج ّ i i To 3 idle i
- Bie 8 ميخ i i i i i i i 2 ween bo اجاج ياب د —— NE fan iy AUT اا hy :
- 7 H 3 LL HN 8 a ; ; 3 8 > 4 اا : ا اا أ ل RE SEE — H 3 ال gg =F a paw =r Ed IE HN 5 3 ا og i سس ا : : 06 5 i 3 يا Se o i a VEE OX 0 RL A Ni 2 1 ; + ب ال ا 8 الا RA Bis Eo) EE N ¥ » H kona : ZN Na NA 8a Ee ذا aan المح Ta و aS a ل i a : اليد REE Naa SH = 8 08 : EEE EEN RE. ل 8 ام EE ER.BE Ba 8 = i Na SRR TN gE 0 : RR 1 0 1 مط yo 3 0 5 ARAN 7:١٠ ا Naa ال د vod Be Ca Rs Seid a i 2 0 ل 2 $ H EN 5 HN IN RR 0 ل Re ad TER H : amen . RE GE 1 ا pe ERE a | : 3 oY 0 : BN : : ) i B=] A} ¥ ¥ % 8 ; : : i K ee ا لحن H R RRS H 2HPO4 1 A Tn hoa ا H BR hs Ronen Bat H nm SH i i iFuge So J تع عسي المع جع ل CE مالك ات را اا IS: WEES EEL dvr REELS wy § [aha Ct ىالا ل SEES FRET مير i Re لي + . 1 ممع Ho الي dl 3 Noy Fs ¥ 2 Lh ا ما oe ey ch dE 3 So of FOE) ضوعب ا الكت فجي NES i i. متم © aa R رام معنا ٍ 3 : > ا الالح لح جح 3 TE Ny 88 HE 8 FE 8 1% 8 88 iE 8 8 hy dF i Ei i At STE 0 0 SF FA FO pi SE of Ny FERS hy Sok & 3 EE i Foi & 8 EY i ال § i 8 ROE ps J HE N HN ES mov ¥ H 1% 8 8 ب FS FRY hy N HS 0 3 ا FEE by 3 1% 8 HNI. NEY ¥ 9 HE § hy % Sh go لي ماذاة HN i 0 HIE A 8 1 we ga i 2 Hi 8 8 ل RI 1 by + if 8 8 1 85: 8 i 0 HE ; i 0 تخي 8 EX i § IE 8 : % E 88 3 8 HE 5 3 FO 5 ¥ 0 HE 0 hy : 8: 1 i { Hi 8 i x FN X i & 3: § H ا Woy y bi H RE 0 ky 88 pi N 1% 0 Ny i REN 8 i 3 IE § 3 H 88 0 if i 3 NN H § 7: 0 N x Woy b N RS H 3 wd : ¥ 3 1% N N IN ps 3) 1% 0 HN 8 3 ps 3 HE: 0 3 8 لحري UU ا لجح 8 wd = ¥ NE 8 1 0 ل ل ل ل ل ل ل ل (EECPPRPITEREEePrroree WY Th 8 ا ا ا ا ل Et أ د ل حا اح ان اد د ا ا ا 3 الحم الا H Ry
- 8 . a + " FY 1 ب FE ot 3 IN oF HE: 0 8 Ny FOR HE - HN 0 8 3 اقب RS 3 ا ل ل ل ل ا RS ا ل ا ا ا pe تاي وات لح RR تجا AR لكات لعا لحا RR ا ا ا ا ا ا ا ل ا ا ا ا ا ا ااه جاو يا ا ا ا اا ا ASSESSES RRA: LOR FRAN و ا ا 2 حي الح EEE EEE AE RARE 8 I EERE EERE RRRRRRRERRRRRRN RERERRRRRRRRRRRRRRRAS a] ER AY Naw 3 8 ا ل A TE Na SER ER ل ل SSRIS SRSA SORES SANSA ISS RR IS S RRO, HO RSH BEER RE RRERRRAN EEERRRRRRRRRRRRRRRRAS ena A ل E > 3 ا 1 ا ل اق RRS 0 at 0 ا مط ات ل ل اا لك اللا . hh hh hh hh ل ا #3 لحن SR at هه ا ا RRS ARSE لكا لا لكا لا ا لكا لا لكا لا لكا لا ل لك لا I SA Ls i مشي1 ا 3 \ 8 : ْ هط ل ا اا ال ل اا : ا ْ 1 " ُ . . 1 \ : { لكين gia 3 Begins dewarel Ld 1 3 # ب 1 A ee ERE fd ks ب 5 +x \ ; 25 8 Fs Pod 1 ال ا La neve ba : EX NN J boa 1 SER 5 A : SEE Fn 1 ANN Nie SEE nav Fon ا ف قم ا LA SHE ب RRR Ne Ni Fond H ARN 0 2 HER 1 NY Foo AN Fry 1 د ب ل ا MN ٠ بFy لمم اا 0 ا ا يج جلك AL Nx إٍْ 1 i 3 0 1 8 ّ HERR en ممع Be 5 0 or : i ~ ~ BE i Fil 1 ب يذ 1 ال اي 8 : oo 8 i = 0 2 > : ٍ ا A 8 i © /,[ Po ليو لبيك ل 4 1 Fy ا ب 1 CR a <a Fil : rag CAR # fit : i Fa & ٠ ; io Fn “ بع ARR + ال * i | ~ 8 0 يي ا0(0 ا Co | ةك L000 Po 83" اد مع الت وو د اا ; ٠ ١-١ ١ ! 2 9 I a ooo 0 i i 1 §ad شي Eo { aad ails 4 : 2 8 ْ & Ta a k ا i po الاك 3 Ale : A : A : I i ¥ 1 دس لا ٍ x A = ] a REA Va 1 ٍْ ا ب م NE y ١ 0 y gd +١ NY ee ' 8 0" Nak 2 Fl 8 ٍِ A & robo ET iba: LE: gs Thin i SRR . i هم 0ت م ee م oi 1 8 : ٍ : 8 : i < A A add : 2 = LN : San شق الل ا : 2 © الخ ا الا ٍ A ٠ 8" ' أ ّّ oe : ATEN EE 8 & An كحك Be 0 > x 8 ¥ 0 : i £5 إٍْ جبC8 be ا Fo الشكل 3 لاست ايلا : eo as own res ve 5 د § سخ EERE 5 Pia : م Sas 1 ادا ا 1 REEL REESE ae Pe 3 0 العا 1 ot 3 LE oy ا 0 م [ مرح Tom LA nS +? اج ا اج US اتاد تم ha x VEE i CI H Foam H ا ا يج $e i Pros hiy + "4 د Ne TER vay 5 3 ب -+ ل > المع raw ar امسو وديا ال ا Ee جديا تود امسج : 3 H 3 H H HN E 3 H H 3 NES H N E 3 H H 3 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33% N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N 33 N E 3 H H N RES N E 3 H H N NES N E i. 3 H H N NES N E Fa a 3 H N 3 E Soaks ار 3 H HS 3 NN 8 E Rit 3 a H 3 33 E 3 8 88 ؟: : E 3 REY HN FX 3d A E fe wa owe IW Hy EY NY 1 8 مركي Fr A REE HN pp N REE 3 a 8 1 FRY HN NE N 1 د T 1 H 8 § 3 NE] 3 3 IY ¥ NERY RE 3 NR 3 3 FY HN PEN 3 RNR E 3 HEE H Fy N NR k 3 33 $y د ا 1 RN 0 : 1 1 Pia H hE HN Py k ] 31 i EY i% Fi% E 3 : 05 8 8 IN ؟:؟: 3 3 8: 0! ؟ : ا + 3 1 * ؟ + hy NEE I ب ؟ ؟ ] ؟ ؟: 8 ؟ ؟: 8 1 RE 3 3 ؟ + ؟ ؟ 0 REY NE E ] : ؟: oN 8 0: + 3 3 FEE H EE 8 : ؟: k 3 NE H FE ES CEN 3 ل قدا J I JE CRN: 1 AA AA AAA) 3 3 3 H H E ب احا اا لجن امسج رحد ل حا د i ee | الرحينا MR HMM MM MMM CAN A A a a aR, HRM AR aa aad ا ON a LL AR AL YN ا ا ا pe EN Fe تت ال كن الإ لس ليه ا جد ل دجي م جل ل ل ا اه ا Rn Tn nn FERRER ERR aR a a a ER SRR SSRI BR I DR Eh hh Nora Baa oR ne EEE Ya ل ا 2 امت اا JARI LIISA. SUL, Hat Lh a A AAI: FSAI SSIS. ال 20 AE Ne TE a HEAR E ا ae ل hE hh اعد اي 1 SETA ل Somme Ne ال ل ١ 1 a Ba RR RRS BS RA ا AUTRES ل ENE PAT ed ا “ا EE RRS RT RRR Sm A A EE a حر اللا a ad 1 A 5 ل py ا ها له hh هه hh Re RN NR TE I Rn ا RRA SRR RAY NEN NN ne 3 Ta EE هه R RRR R RRR: ل hh hh 1 ال ل ل BE1 3 > ٠ WAR 3 i i 0 AAA A i 1 3 AES i > i 3 § i تا i Ky 3 3 3 3 fd 8 RR a = & N د > RR 1: Pa Pe ps 3 § N قد ب : ليس ¥ RF hi! Fed wa md 0 i S AN 8 Es ; Safad في العادة ait تركيز RY 3 03 oT o 0: RS 8 1 3 Fd ] FE 8 By اضرا Bn ال اج هال ا id يرد 3 0 LE SF 0 1# هر )ا Set 3 § 3 3 مال N H 5 3 ks 8 اا xX : 3 coco 3 iow i a % 8 محا 8 Coa مي ِ 8 اس ' ht Tx Pris gs Eis & 0 0 ا HE Se >“ & FE . RTI The 3 cud WE حي 1 N 88 3 & Rd 8 PEELE بك Raa $1 تركيز الج \ 8 i 0 p ا : : م 8B= . ps 88 ال“ : Na by PN قا FN A £0 alt 1 8 HEE TE BF 3 oR N 3 Fl 3 FE NX t 0 ل ا !اا يا 2 FRE 8 $i EE ميكر جر ادامل ا ؟* ا 8 8 § §3 N 8 و 0 Cts FEE § 8 ل حل J 5 neIE. AE" SUR امس لأسا ل سس أ ل سسا : i FR ’ 3 NE & X 3 ااا ا اب a سس لذ i Po i RN & X boyy باتو صر RE ( اسه i py 5 3 SF ل X حرا ا 4 8 J A | ; © حبث a 3 NE & x t ps io 3 & & EY i § 3 =g 3 8 م Ne 3 « i 1 : ل $ X ER i FERRE 1 rr NR 3 Pome 3+ 3 VETTE 5 : ا 3 3 To جا A H 8 : : FY ٍ : R & 3 3 i : SUD boas : 3 8 اا و ا ا ا 5 8 0 SI ل i § Ry 3 & N 3 bsRy . 3 < & NW H i i 1 an. Lo { Ky > = ER ا 0 3 Ky 3 8 5 1 3 3 sos x Ex = : Ry nw ps Ry EI oc a 3 3 bs RY ال ا اح نا لاحر دان VL J 3 3 3 i Ag Lak متيلا لإا > 8 Yi = 3 { 8 : نْْ "8 8 حج كلاس سس ا ااا ااا ااا الاله الهيلة السعودية الملضية الفكرية ا Sued Authority for intallentual Property RE .¥ + \ ا 0 § 8 Ss o + < م SNE اج > عي كي الج TE I UN BE Ca a ةا ww جيثة > Ld Ed H Ed - 2 Ld وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها of سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. Ad صادرة عن + ب ب ٠. ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > فهذا ص ب 101١ .| لريا 1*١ v= ؛ المملكة | لعربية | لسعودية SAIP@SAIP.GOV.SA
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020150059654A KR101723167B1 (ko) | 2015-04-28 | 2015-04-28 | 보툴리눔 독소의 제조를 위한 배지 조성물 |
| PCT/KR2016/004430 WO2016175565A1 (en) | 2015-04-28 | 2016-04-28 | Medium composition for preparing botulinum toxin |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SA517381720B1 true SA517381720B1 (ar) | 2021-03-07 |
Family
ID=57199460
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SA517381720A SA517381720B1 (ar) | 2015-04-28 | 2017-06-14 | تركيبة وسط لتحضير سم البتيلينيوم |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9926549B2 (ar) |
| EP (1) | EP3289069B1 (ar) |
| JP (2) | JP2018500880A (ar) |
| KR (1) | KR101723167B1 (ar) |
| CN (1) | CN107109354A (ar) |
| AR (1) | AR104419A1 (ar) |
| AU (1) | AU2016253788B2 (ar) |
| BR (1) | BR112017012885A2 (ar) |
| CA (1) | CA2968041A1 (ar) |
| DK (1) | DK3289069T3 (ar) |
| ES (1) | ES2846927T3 (ar) |
| HR (1) | HRP20210092T1 (ar) |
| HU (1) | HUE052935T2 (ar) |
| MX (1) | MX2017008197A (ar) |
| PL (1) | PL3289069T3 (ar) |
| PT (1) | PT3289069T (ar) |
| RU (1) | RU2663586C1 (ar) |
| SA (1) | SA517381720B1 (ar) |
| TW (1) | TWI592484B (ar) |
| WO (1) | WO2016175565A1 (ar) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR101723168B1 (ko) * | 2015-04-28 | 2017-04-05 | 주식회사 대웅 | 보툴리눔 독소의 제조를 위한 배지 조성물 |
| KR101723167B1 (ko) | 2015-04-28 | 2017-04-05 | 주식회사 대웅 | 보툴리눔 독소의 제조를 위한 배지 조성물 |
| KR102209159B1 (ko) * | 2019-03-29 | 2021-01-29 | (주)제테마 | 독소의 제조방법 |
| CA3158105A1 (en) * | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Ulf Stahl | Method of producing botulinum toxin |
| KR102581772B1 (ko) * | 2021-03-30 | 2023-09-22 | 강원대학교 산학협력단 | 식물 및 곤충 단백질 가수 분해물을 이용한 배양육 제조를 위한 최적 배양 방법 및 그 응용 |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000001840A1 (en) * | 1998-07-03 | 2000-01-13 | Dsm N.V. | Fermentation process to produce clavulanic acid at a low concentration of free amino acids |
| US6558926B1 (en) | 1999-07-16 | 2003-05-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Method for production of tetanus toxin using media substantially free of animal products |
| US7148041B2 (en) * | 2003-09-25 | 2006-12-12 | Allergan, Inc. | Animal product free media and processes for obtaining a botulinum toxin |
| US7160699B2 (en) * | 2003-09-25 | 2007-01-09 | Allergan, Inc. | Media for clostridium bacterium and processes for obtaining a clostridial toxin |
| RU2255761C1 (ru) * | 2004-07-01 | 2005-07-10 | Общество с ограниченной ответственностью "Токсины и сопутствующие продукты" | Препарат для лечения мышечных дистоний из токсина культуры clostridium botulinum и способ его получения |
| WO2006042542A2 (en) * | 2004-10-19 | 2006-04-27 | Statens Serum Institut | Production of tetanus, diphtheria, and pertussis toxins and toxoids using fermentation media containing no components of animal or soy origin |
| CA2556537A1 (en) * | 2005-03-03 | 2006-09-03 | Allergan, Inc. | Media for clostridium bacterium and processes for obtaining a clostridial toxin |
| NL1029059C2 (nl) | 2005-05-17 | 2006-11-20 | Noord Nl Oliemolen Holding B V | Peptidenpreparaat voor het groeien en/of kweken van micro-organismen en/of cellen. |
| FR2918671B1 (fr) * | 2007-07-10 | 2010-10-15 | Sanofi Pasteur | Milieu de culture d'haemophilus influenzae type b. |
| CN101698826A (zh) * | 2007-12-19 | 2010-04-28 | 杨宇 | 胰酪胨肉毒梭菌增菌肉汤 |
| KR20090120222A (ko) | 2008-05-19 | 2009-11-24 | (주)메디톡스 | 식물 유래 성분 함유 배지 및 가요성 폐쇄 용기를 이용하여클로스트리디움 보툴리눔 독소를 생산하는 방법 |
| US8236356B2 (en) | 2008-06-11 | 2012-08-07 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Growth medium for Clostridium histolyticum |
| BR102012013110A2 (pt) | 2012-05-31 | 2014-05-27 | Cristalia Prod Quimicos Farm | Meio de cultura para bactérias do gênero clostridium livre de componentes de origem animal e processo para produção de sobrenadante contendo uma ou mais proteases com atividade colagenolítica e gelatinolítica |
| BR122016023101B1 (pt) * | 2012-10-21 | 2022-03-22 | Pfizer Inc | Polipeptídeo, composição imunogênica que o compreende, bem como célula recombinante derivada de clostridium difficile |
| CN103215310B (zh) * | 2013-03-27 | 2015-01-21 | 中棉紫光生物科技（上海）有限公司 | 用于发酵的棉籽蛋白及其制备方法和应用 |
| KR101339349B1 (ko) | 2013-08-02 | 2013-12-09 | 주식회사 대웅 | 보툴리눔 독소의 제조방법 |
| KR101723168B1 (ko) * | 2015-04-28 | 2017-04-05 | 주식회사 대웅 | 보툴리눔 독소의 제조를 위한 배지 조성물 |
| KR101729251B1 (ko) * | 2015-04-28 | 2017-04-21 | 주식회사 대웅 | 보툴리눔 독소의 제조를 위한 배지 조성물 |
| KR101723167B1 (ko) | 2015-04-28 | 2017-04-05 | 주식회사 대웅 | 보툴리눔 독소의 제조를 위한 배지 조성물 |
-
2015
- 2015-04-28 KR KR1020150059654A patent/KR101723167B1/ko active IP Right Grant
-
2016
- 2016-04-27 AR ARP160101185A patent/AR104419A1/es unknown
- 2016-04-27 TW TW105113079A patent/TWI592484B/zh active
- 2016-04-28 CN CN201680004195.4A patent/CN107109354A/zh active Pending
- 2016-04-28 EP EP16786751.4A patent/EP3289069B1/en active Active
- 2016-04-28 PT PT167867514T patent/PT3289069T/pt unknown
- 2016-04-28 JP JP2017524476A patent/JP2018500880A/ja active Pending
- 2016-04-28 US US15/521,817 patent/US9926549B2/en active Active
- 2016-04-28 WO PCT/KR2016/004430 patent/WO2016175565A1/en active Application Filing
- 2016-04-28 BR BR112017012885A patent/BR112017012885A2/pt active Search and Examination
- 2016-04-28 PL PL16786751T patent/PL3289069T3/pl unknown
- 2016-04-28 DK DK16786751.4T patent/DK3289069T3/da active
- 2016-04-28 ES ES16786751T patent/ES2846927T3/es active Active
- 2016-04-28 RU RU2017120811A patent/RU2663586C1/ru active
- 2016-04-28 CA CA2968041A patent/CA2968041A1/en not_active Abandoned
- 2016-04-28 AU AU2016253788A patent/AU2016253788B2/en active Active
- 2016-04-28 HU HUE16786751A patent/HUE052935T2/hu unknown
- 2016-04-28 MX MX2017008197A patent/MX2017008197A/es unknown
-
2017
- 2017-06-14 SA SA517381720A patent/SA517381720B1/ar unknown
-
2018
- 2018-02-09 US US15/893,297 patent/US10465179B2/en active Active
-
2019
- 2019-06-05 JP JP2019105170A patent/JP6888049B2/ja active Active
-
2021
- 2021-01-19 HR HRP20210092TT patent/HRP20210092T1/hr unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2016253788B2 (en) | 2018-12-13 |
| EP3289069B1 (en) | 2020-12-09 |
| TWI592484B (zh) | 2017-07-21 |
| TW201638328A (zh) | 2016-11-01 |
| BR112017012885A2 (pt) | 2018-01-30 |
| HUE052935T2 (hu) | 2021-05-28 |
| US10465179B2 (en) | 2019-11-05 |
| PT3289069T (pt) | 2021-02-11 |
| JP2020022435A (ja) | 2020-02-13 |
| CA2968041A1 (en) | 2016-11-03 |
| RU2663586C1 (ru) | 2018-08-07 |
| PL3289069T3 (pl) | 2021-07-05 |
| EP3289069A1 (en) | 2018-03-07 |
| KR20160127997A (ko) | 2016-11-07 |
| EP3289069A4 (en) | 2018-10-03 |
| AR104419A1 (es) | 2017-07-19 |
| US9926549B2 (en) | 2018-03-27 |
| DK3289069T3 (da) | 2021-01-25 |
| AU2016253788A1 (en) | 2017-05-25 |
| JP2018500880A (ja) | 2018-01-18 |
| ES2846927T3 (es) | 2021-07-30 |
| WO2016175565A1 (en) | 2016-11-03 |
| US20170247675A1 (en) | 2017-08-31 |
| JP6888049B2 (ja) | 2021-06-16 |
| KR101723167B1 (ko) | 2017-04-05 |
| HRP20210092T1 (hr) | 2021-04-30 |
| US20180163193A1 (en) | 2018-06-14 |
| CN107109354A (zh) | 2017-08-29 |
| MX2017008197A (es) | 2017-09-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SA517381720B1 (ar) | تركيبة وسط لتحضير سم البتيلينيوم | |
| Rossi et al. | Exocellular polysaccharides in microalgae and cyanobacteria: chemical features, role and enzymes and genes involved in their biosynthesis | |
| CA3167318A1 (en) | Polypeptides, compositions, and their use to treat or limit development of an infection | |
| HUE033072T2 (hu) | Staphylococcus aureus antigének immunogén készítményei | |
| HU228374B1 (en) | Novel surfactants and aqueous pesticide formulations | |
| KR101262300B1 (ko) | 형질전환 식물 유래의 고병원성 조류독감 바이러스 단백질 백신 및 그 제조방법 | |
| CN104673765A (zh) | 一组在生理pH条件下有活力的草酸氧化酶及其应用 | |
| CN101842486A (zh) | 生物膜的免疫治疗 | |
| Martinez et al. | The use of lectins as tools to combat SARS-CoV-2 | |
| SA517381722B1 (ar) | تركيبة وسط لتحضير سم البتيلينيوم | |
| CN102481350B (zh) | 针对猪胸膜肺炎的疫苗和得到这样的疫苗的方法 | |
| ES2341362T3 (es) | Procedimiento de produccion de cepas de staphylococus aureus superproductoras. | |
| CN102348466A (zh) | 西尼罗病毒疫苗 | |
| CN104367996A (zh) | 一种用传代细胞源生产猪伪狂犬病活疫苗的方法及其制品 | |
| CN109803669A (zh) | 用于抑制生物膜沉积和产生的组合物和方法 | |
| EP2982683A1 (en) | Recombinant pasteurella multocida toxin and application thereof | |
| JP2020022436A (ja) | ボツリヌス毒素の製造のための培地組成物 | |
| Khan et al. | Anti-human immunodeficiency virus-1 activity of MoMo30 protein isolated from the traditional African medicinal plant Momordica balsamina | |
| Pereira et al. | Alternative method to assess the reaction of common bean lines to Pseudocercospora griseola | |
| CN106719849B (zh) | 一种苦参碱和蜡蚧轮枝菌联用的杀虫药 | |
| JP6689742B2 (ja) | 植物を基にした組換えブチリルコリンエステラーゼの製造方法 | |
| KR102532456B1 (ko) | 독성이 제거되고 용해성과 발현량이 향상된 리신 백신 및 이의 제조방법 | |
| CN103913578B (zh) | 一种蟑螂过敏原制剂的质量控制方法 | |
| Mohamed | Role of open quarantine in regional germplasm exchange | |
| CN104628853B (zh) | 人源抗炭疽保护性抗原PA的抗体IgG及其应用 |