RU2759916C2 - Применение триацетил-3-гидроксифениладенозина для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени - Google Patents
Применение триацетил-3-гидроксифениладенозина для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени Download PDFInfo
- Publication number
- RU2759916C2 RU2759916C2 RU2018126158A RU2018126158A RU2759916C2 RU 2759916 C2 RU2759916 C2 RU 2759916C2 RU 2018126158 A RU2018126158 A RU 2018126158A RU 2018126158 A RU2018126158 A RU 2018126158A RU 2759916 C2 RU2759916 C2 RU 2759916C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fatty liver
- liver disease
- alcoholic fatty
- liver
- treatment
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
- A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
- A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к применению триацетил-3-гидроксифениладенозина, представленного формулой (I), или его фармацевтически приемлемой соли, или их содержащей фармацевтической композиции для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени, где применение направлено на снижение веса тела, коэффициента печени, уровней ALT и AST. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 табл., 1 пр.
(I)
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Настоящее изобретение связано с применением триацетил-3-гидроксифениладенозина и фармацевтической композиции, содержащей его, в получении фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени, что относится к области медицины.
ПРЕДПОСЫЛКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Неалкогольная жировая болезнь печени (NAFLD) относится к группе клинических патологических синдромов, характеризующихся поражением паренхимных клеток печени и накоплением жира, вызванных причинами, отличными от чрезмерного потребления алкоголя и других факторов патогенеза поражения печени, которое представляет собой метаболически подверженное стрессу поражение печени, тесно связанное с инсулинорезистентностью (IR) и генетической предрасположенностью, и патологические изменения при которой сходны с изменениями при алкогольной болезни печени, но в анамнезе пациента отсутствует избыточное потребление алкоголя. Ее компоненты включают в себя неалкогольную простую жировую печень (NAFL), неалкогольный стеатогепатит (NASH), неалкогольный жировой фиброз печени, неалкогольный жировой цирроз печени и связанную карциному печени (HCC). С развитием экономики нашей страны содержимое и временной режим диеты людей сильно изменился, и частота возникновения неалкогольной жировой болезни печени постоянно растет и лидирует у молодых людей, при этом она стала распространенным заболеванием, серьезно угрожающим физическому и психологическому здоровью людей.
Точный патогенез NAFLD все еще неясен, и в целом объясняется в виде «двухударной» теории, первый удар в двух фазах теории заключается в том, что снижение уровня распада и избыточное потребление рациона с высоким содержанием жиров приводит к отложению липидов и формированию простой жировой печени. При втором ударе IR может ослабляться и приводить к нарушению регуляции инсулина в метаболизме жиров, увеличивать лизис липидов, повышать концентрацию неэтерифицированных свободных жирных кислот (FFA) и способствовать поглощению печенью FFA в крови. Окислительный стресс и нарушение перекисного окисления липидов играют важную роль в образовании и развитии жировой печени, что является важным фактором в дальнейшем развитии жировой печени посредством второго удара. Митохондрия представляет собой орган дыхания клеток, увеличение образования активных форм кислорода (ROS) повреждает митохондрию, дополнительно усиливая накопление липидов в печени. Кроме того, свободные радикалы, образующиеся посредством окислительного стресса, вызывают повреждающую реакцию перекисного окисления липидов (LPO), образуют серии липидных радикалов и продуктов разрушения - малондиальдегид (MDA), в то же самое время, нарушают структуру и функцию биомембраны, увеличивают проницаемость клеточной мембраны, вызывают отток цитохрома C, инициируют программу апоптоза и, наконец, приводят к образованию фиброза печени, цирроза печени и даже карциномы печени. В настоящее время все еще существует недостаток специфических лекарственных средств. Используемые обычно лекарственные средства, понижающие содержание липидов, такие как статины и фибраты, обладают низкой эффективностью и высоким токсическим и побочным эффектами.
Триацетил-3-гидроксифениладенозин (патент № ZL200980101131.6, публикация патентной заявки № CN101874036B, дата опубликования 25.01.2012) представляет собой соединение нового структурного типа со значительной активностью регуляции липидов, отобранное из производных кордицепина Институтом Materia Medica Китайской академии медицинских наук, и которое обладает характеристиками низких токсического и побочных эффектов и хорошей фармакокинетикой, и т. д., и оно в настоящее время находится на этапе проведения предклинического исследования. Отсутствуют сообщения относительно применения данного соединения в предупреждении или лечении неалкогольной жировой болезни печени.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая задача, решаемая посредством настоящего изобретения, заключается в обеспечении применении соединения, представляющего собой триацетил-3-гидроксифениладенозин, и фармацевтической композиции на его основе в получении фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени.
Для решения технической задачи по настоящему изобретению предусматривается следующее техническое решение.
Первый аспект технического решения по настоящему изобретению заключается в обеспечении применения триацетил-3-гидроксифениладенозина, представленного формулой (I), и его фармацевтически приемлемой соли в получении фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени,
(I),
при этом неалкогольная жировая болезнь печени представляет собой жировую болезнь печени, вызванную высококалорийным рационом.
Лечение неалкогольной жировой болезни печени с помощью триацетил-3-гидроксифениладенозина по настоящему изобретению может приводить к значительному сокращению уровней AST, ALT и TG в сыворотке крови, значительно улучшать функцию печени у золотистого хомячка с жировой инфильтрациуй печени, сокращать степень жировой инфильтрации печени, таким образом обеспечивая предупреждение или лечение неалкогольной жировой болезни печени. Второй аспект технического решения по настоящему изобретению заключается в применении фармацевтической композиции в получении фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени, характеризующейся тем, что фармацевтическая композиция содержит триацетил-3-гидроксифениладенозин, представленный формулой (I), и его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель,
(I),
при этом фармацевтическая композиция включает форму таблетки, капсулы, пилюли и раствора для инъекций, состава с замедленным высвобождением, состава с контролируемым высвобождением или различных систем доставки лекарственных средств на основе микрочастиц. Фармацевтическую композицию можно получать в соответствии со способами, известными в области техники. Любую лекарственную форму, подходящую для применения у людей или животных, можно изготовлять путем комбинирования соединения по настоящему изобретению с одним или более фармацевтически приемлемыми твердыми или жидкими вспомогательными веществами и/или адъювантами. Содержание соединения по настоящему изобретению в фармацевтической композиции на его основе обычно составляет от 0,1 до 95% по весу.
Соединение или фармацевтическую композицию, содержащую ее, по настоящему изобретению можно вводить в стандартной лекарственной форме, и путь введения может быть кишечным или парентеральным, таким как пероральный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, назальный, через слизистую оболочку полости рта, глаза, легкое и дыхательные пути, кожу, влагалище, прямую кишку и т. п.
Лекарственная форма для введения может представлять собой жидкую, твердую или полутвердую лекарственные формы. Жидкие лекарственные формы могут представлять собой растворы (включая истинные растворы и коллоидные растворы), эмульсии (включая тип м/в, тип в/м, и двойные эмульсии), суспензии, растворы для инъекций (включая водные растворы для инъекций, порошковые растворы для инъекций и растворы для инфузий), капли для глаз, капли для носа, лосьоны и жидкие мази и т. д.; твердые лекарственные формы могут представлять собой таблетки (включая обычные таблетки, таблетки с кишечнорастворимой оболочкой, таблетки для рассасывания, диспергируемые таблетки, жевательные таблетки, шипучие таблетки, таблетки, распадающиеся в полости рта), капсулы (включая твердые капсулы, мягкие капсулы, кишечнорастворимые капсулы), гранулы, порошки, минипилюли, капельные пилюли, суппозитории, пленки, пластыри, аэрозоли, спреи и т. п.; и полутвердые лекарственные формы могут представлять собой мази, гели, пасты и т. п. Предпочтительная лекарственная форма фармацевтической композиции выбрана из группы, состоящей из таблеток, капсул, пилюль и растворов для инъекций.
Соединение по настоящему изобретению можно получать в виде обычных препаратов, а также получать в виде препаратов с замедленным высвобождением, препаратов с контролируемым высвобождением, нацеливающих препаратов и различных систем доставки лекарственных средств на основе микрочастиц.
С целью получения соединения по настоящему изобретению в форме таблеток, можно широко применять различные вспомогательные вещества, известные из уровня техники, включая разбавители, связывающие средства, увлажняющие средства, разрыхлители, смазывающие средства и вещества, способствующие скольжению. Разбавитель может представлять собой крахмал, декстрин, сахарозу, глюкозу, лактозу, маннит, сорбит, ксилит, микрокристаллическую целлюлозу, сульфат кальция, гидрофосфат кальция, карбонат кальция и т. п.; увлажняющее средство может представлять собой воду, этанол, изопропанол и т. п.; связывающее средство может представлять собой крахмальную супензию, декстрин, сироп, мед, раствор глюкозы, микрокристаллическую целлюлозу, Mucilago acaciae, желатиновую суспензию, карбоксиметилцеллюлозу натрия, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу, этилцеллюлозу, акриловую смолу, карбомер, поливинилпирролидон, полиэтиленгликоль и т. п.; разрыхлитель может представлять собой сухой крахмал, микрокристаллическую целлюлозу, гидроксипропилцеллюлозу с низким уровнем замещения, кросполивинилпирролидон, кроскармеллозу натрия, карбоксиметилкрахмал натрия, гидрокарбонат натрия и лимонную кислоту, эфир полиоксиэтиленсорбита и жирной кислоты, додецилсульфат натрия и т. п.; и смазывающее вещество и вещество, способствующее скольжению, могут представлять собой тальк, кремнезем, стеарат, винную кислоту, жидкий парафин, полиэтиленгликоль и т. п.
Таблетки дополнительно можно получать в виде таблеток, покрытых оболочкой, таких как таблетки с сахарной оболочкой, таблетки с пленочной оболочкой, таблетки с кишечнорастворимой оболочкой или двухслойные таблетки и многослойные таблетки.
С целью составления дозированной единицы в капсулах активный ингредиент, соединение по настоящему изобретению, можно смешивать с разбавителем, веществом, способствующим скольжению, и смесь можно непосредственно помещать в твердую или мягкую капсулу. Активный ингредиент, соединение по настоящему изобретению, можно также сперва получать в форме гранул или минипилюль с разбавителем, связывающим средством или разрыхлителем, и затем помещать в твердую или мягкую капсулу. Широкий ряд разбавителей, связывающих средств, увлажняющих средств, разрыхлителей, веществ, способствующих скольжению для получения таблеток соединения по настоящему изобретению также можно применять в получении капсул соединения по настоящему изобретению.
С целью получения соединения по настоящему изобретению в форме раствора для инъекций воду, этанол, изопропанол, пропиленгликоль или их смесь можно применять в качестве растворителя и добавлять с соответствующим количеством солюбилизаторов, средств для доведения pH, регуляторов осмотического давления, обычно применяемых в области техники. Солюбилизатор или вещество, способствующее скольжению, могут представлять собой полоксамер, лецитин, гидроксипропил-бета-циклодекстрин и т. п.; средство для доведения pH может представлять собой фосфат, ацетат, хлористоводородную кислоту, гидроксид натрия и т. п.; и регулятор осмотического давления может представлять собой хлорид натрия, маннит, глюкозу, фосфат, ацетат и т. п. Для получения лиофилизированных порошков для инъекций маннит, глюкозу и т. п. также можно добавлять в качестве проппанта.
Кроме того, также можно добавлять красители, консерванты, отдушки, ароматизаторы, корригирующие вещества или другие добавки к фармацевтическому препарату по необходимости.
Для достижения цели лечения и усиления терапевтического эффекта фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно вводить с помощью любого известного способа введения.
Дозировка фармацевтической композиции на основе соединения по настоящему изобретению может варьировать в зависимости от природы и тяжести заболевания, подлежащего предупреждению или лечению, индивидуального состояния пациента или животного, пути введения и лекарственной формы и т. п. В целом, подходящая суточная дозировка соединения по настоящему изобретению может варьировать от 0,001 до 150 мг/кг веса тела, предпочтительно от 0,1 до 100 мг/кг веса тела, более предпочтительно от 1 до 60 мг/кг веса тела и наиболее предпочтительно от 2 до 30 мг/кг веса тела. Вышеуказанные дозировки можно вводить в одной дозированной единице или разделенные на несколько дозированных единиц, в зависимости от клинического опыта врача и режима приема препарата, включая применение других средств лечения.
Соединение или композицию по настоящему изобретению можно вводить в отдельности или в комбинации с другими терапевтическими лекарственными средствами или симптоматическими лекарственными средствами. Если соединение по настоящему изобретению обладает синергетическим эффектом в отношении других терапевтических лекарственных средств, то его дозировку следует регулировать в соответствии с фактическими условиями.
Положительный технический эффект
В настоящем изобретении подтвержден значительный эффект триацетил-3-гидроксифениладенозина в предупреждении или лечении неалкогольной жировой болезни печени с применением способов исследования фармакодинамики, которое предусматривает новое лекарственное средство для предупреждения или терапии, триацетил-3-гидроксифениладенозин, в отношении данного хронического заболевания со сложным патогенезом и низким терапевтическим эффектом, характеризующееся выраженным лечебным эффектом, низкими токсическими и побочными эффектами и безопасностью в применении, и обеспечивает научную основу для клинического применения в предупреждении или лечении неалкогольной жировой болезни печени.
ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ
С целью сделать содержание настоящего изобретения более ясным для понимания, далее настоящее изобретение подробно описано со ссылкой на конкретные варианты осуществления настоящего изобретения и со ссылкой на сопутствующие графические материала, где:
на фиг. 1 представлено сравнение веса тела и коэффициента печени золотистых хомячков в каждой группе в экспериментальном примере по настоящему изобретению;
на фиг. 2 представлено сравнение результатов определения содержания холестерина, триглицеридов, липопротеинов высокой плотности, липопротеинов низкой плотности и свободной жирной кислоты в сыворотке крови золотистых хомячков в экспериментальном примере по настоящему изобретению;
на фиг. 3 представлено сравнение ферментной активности ALT и AST у золотистых хомячков в экспериментальном примере по настоящему изобретению;
на фиг. 4 представлено сравнение результатов определения значений содержания липидов в тканях печени у золотистых хомячков в каждой группе в экспериментальном примере по настоящему изобретению;
на фиг. 5 представлено изображение, полученное с помощью ядерно-магнитного резонанса, печени золотистых хомячков в экспериментальном примере по настоящему изобретению;
на фиг. 6 представлено сравнение результатов патологического окрашивания HE тканей печени золотистых хомячков в различных экспериментальных группах по настоящему изобретению;
на фиг. 7 представлено сравнение результатов окрашивания Oil Red O ткани печени золотистых хомячков в различных экспериментальных группах по настоящему изобретению.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Следующие примеры предназначены для того, чтобы дополнительно проиллюстрировать настоящее изобретение, но не предназначены для ограничения настоящего изобретения каким-либо образом.
Пример 1. Применение триацетил-3-гидроксифениладенозина (IMM-H007) для лечения неалкогольной жировой болезни печени
I. Экспериментальные материалы
1. Реагенты
Заливочное средство для замороженных срезов OCT, SAKURA Tissue-Tek®; пентобарбитал натрия, SIGMA; PEG6000, SIGMA; глицин, SIGMA; параформальдегид, Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd; Oil Red O, SIGMA; окрашивающий раствор HE, Taiwan Baso Corporation; набор для определения общего содержания холестерина (TC), Sekisui Medical Technology (China) LTD; набор для определения общего содержания триглицеридов, BioSino Bio-Technology & Science Inc.; набор для определения содержания свободных жирных кислот, Sekisui Medical Technology (China) LTD; набор для определения глутамат-пируват-трансаминазы (AST/ALT), Институт биоинженерии в Нанкине, Цзяньчэн; набор для определения глутамат-оксалацетат-трансаминазы (AST/GOT), Институт биоинженерии в Нанкине, Цзяньчэн.
2. Инструменты
Многоцелевая низкотемпературная высокоскоростная центрифуга, Eppendorff, Германия; микротом для парафинизированных тканей, Leica, Германия; микротом для замороженных тканей, Leica, Германия; многорежимное считывающее устройство En Vision, PerkinElmer, Inc., США; аппарат для проведения анестезии у мелких животных, Matrx Products, США; аппарат для получения изображений с помощью магнитного резонанса у мелких животных, Bruker PharmaScan 70T/16 US, Германия.
3. Экспериментальные животные
Сирийские золотистые хомячки возрастом 6-8 недель (хомяк LVG, импортированный из Charles River Laboratories), 20, весом 90-120 г, самцы, сорта SPF, приобретенные у Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd., и номер лицензии: SCXK (Пекин) 2012-0001.
II. Экспериментальные способы
1. Распределение по группам и содержание животных
Через 5 дней после адаптационного кормления животных случайным образом распределяли в нормальную контрольную группу (n=15), группу, получавшую рацион с высоким содержанием жиров (n=15), группу, получавшую низкую дозу IMMH007 (25 мг/кг, n=15), группу, получавшую среднюю дозу IMMH007 (50 мг/кг, n=15), и группу, получавшую высокую дозу IMMH007 (100 мг/кг, n=15), и обеспечивали внутрикишечное введение дважды в сутки. Животных содержали в Экспериментальном центре животных II Института Materia Medica Китайской академии медицинских наук, и условия содержания были следующими: SPF, температура 21±2°C, относительная влажность 50±5%, световой цикл 12/112 и по 5 животных в клетке. Нормальной группе давали нормальный основной рацион, и группе, получавшей рацион с высоким содержанием жиров, давали рацион с высоким содержанием жиров (к 79,8% основного рациона добавляли 20% свиного жира и 0,2% холестерина), и животным позволяли питаться и пить в свободном режиме. Корм был подготовлен Beijing HFK Bioscience Co., Ltd. Вес тела отмечали каждые 2 недели на протяжении эксперимента.
2. Показатели наблюдения и способы измерения
2.1 Биохимические показатели сыворотки крови
Животных подвергали голоданию в течение 12 часов и собирали 0,5 мл крови из угловой вены, и оставляли на 60 мин., и центрифугировали при 6000 g в течение 10 мин., а надосадочную жидкость отсасывали насколько возможно и затем центрифугировали при 6000 g в течение 10 мин. Значения поглощения измеряли в соответствии с инструкциями наборов TC, TG, AST и ALT, и рассчитывали концентрацию каждого показателя. 50 мкл сыворотки крови смешивали с 50 мкл PEG6000 в соотношении 1:1, встряхивали до однородности, оставляли на 10 мин. и центрифугировали при 1900 g в течение 20 мин. при комнатной температуре, и надосадочную жидкость осторожно пипетировали, хранили при 4°C и измеряли в отношении HDL-C в соответствии с инструкциями набора TC. Уровень LDL в плазме крови рассчитывали путем вычитания уровней HDL-C и 0,2-кратного TG из общего содержания холестерина TC в плазме крови, т. е., LDL=TC-HLD-0,2TG.
Животных подвергали голоданию в течение ночи перед окончанием эксперимента, проводили анестезию с помощью интраперитонеальной инъекции 3% пентобарбитала натрия, вскрывали брюшную полость и быстро отделяли печень после того, как брали кровь из брюшной аорты. Одну печеночную долю сохраняли и два куска 1×1 см3 вырезали в определенном месте, один кусок заливали в OCT, быстро замораживали в жидком азоте и хранили в жидком азоте или при -80°C; а другой кусок помещали в неподвижную жидкость 4% параформальдегида и хранили при 4°C.
2.2 Получение изображений с помощью магнитного резонанса
После подвергания голоданию в течение 12 часов животным проводили анестезию с помощью изофлурана, фиксировали их головы, помещали на спину и фиксировали на Rat's coil головой вперед, и определяли центр живота.
T2-взвешенное изображение (T2WI) последовательности быстрого спин-эха: TR/TE=200/3 мс, FA=30°. Область сканирования (FOV) = 3,6 × 3,6, матрица = 256 × 256, и число возбуждений = 2-кратное.
2.2 Анализ содержания липидов в ткани печени
100 мг ткани печени точно взвешивали и добавляли лизат для выявления триглицеридов, ткань гомогенизировали с помощью гомогенизатора на ледяной бане до отсутствия заметной тканевой массы, помещали на лед в течение 5 мин., переносили в 1,5 мл пробирку для центрифугирования и центрифугировали при 14000 g в течение 10 мин. при 4°C, надосадочную жидкость переносили, и часть надосадочной жидкости брали для количественного определения белков, и выявляли содержание липидов в ней в соответствии с инструкциями наборов для определения TC и TG.
2.3 Патологическое окрашивание тканей печени
2.3.1 Получение парафиновых срезов
Печень, зафиксированную в параформальдегидной неподвижной жидкости, промывали водопроводной водой и обезвоживали с помощью следующих этапов, с помощью 70% этанола в течение ночи, 80% этанола в течение ночи, 90% этанола I в течение 30 мин., 90% этанола II в течение 30 мин., 95% этанола I в течение 60 мин., 95% этанола II в течение 60 мин., 100% этанола I в течение 60 мин. и 100% этанола II в течение 60 мин., и время обезвоживания для нормальных тканей можно соответственно увеличивать. После обезвоживания ткани придавали прозрачность с помощью средства для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection, применяли средство I для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection в течение 60 мин., средство II для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection в течение 60 мин. и средство III для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection в течение 60 мин., и время придания прозрачности в отношении нормальных тканей можно соответственно увеличивать. Ткань погружали в воск при 65°C, парафин I в течение 50 мин., парафин II в течение 50 мин. и парафин III в течение 50 мин., заливали, нарезали при толщине 7 мкм, подвергали воздействию 45°C и запекали в течение ночи при 50°C.
2.3.2 Получение замороженных срезов
Перед получением срезов ткани печени температуру морозильной камеры микротома устанавливали при -19°C и головки для образца устанавливали при -21°C. Печень, которую хранили в жидком азоте или при -80°C, предварительно уравновешивали при -20°C и затем ткань помещали на стойку для образца микротома для уравновешивания температуры. После того, как блок ткани обрезали, из блока ткани последовательно делали срезы толщиной 7 мкм и наносили на чистое покрытое полилизином стекло.
2.3.3 Окрашивание Oil Red O
Замороженный срез фиксировали в 4% физиологическом растворе параформальдегида в течение 10 мин., промывали водопроводной водой в течение 2 мин., промывали 60% изопропанолом в течение нескольких секунд, окрашивали с помощью 0,5% рабочего раствора Oil Red O в течение 10-15 мин. в светонепроницаемой камере для окрашивания, отделяли 60% изопропанолом в течение нескольких секунд, осторожно промывали водопроводной водой, докрашивали гематоксилином в течение 3-5 мин., дифференцировали с помощью 1% хлористоводородной кислоты в воде, промывали водопроводной водой в течение 2 мин. и обращали в синий цвет, запечатывали глицерином и наблюдали под микроскопом.
2.3.4 Окрашивание HE
Парафиновый срез обезвоживали в следующих этапах: применяли средство I для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection в течение 5 мин., средство II для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection в течение 5 мин., средство для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection в течение 5 мин., 100% этанол I в течение 3 мин., 100% этанол II в течение 3 мин., 95% этанол I в течение 3 мин., 95% этанол II в течение 3 мин. и 80% этанол в течение 3 мин., и промывали водопроводной водой в течение 1 мин., окрашивали гематоксилином в течение 5 мин., промывали водопроводной водой в течение 1 мин., дифференцировали с помощью 1% хлористоводородной кислоты в этаноле в течение нескольких секунд, промывали водопроводной водой и обращали в синий цвет, промывали в 80% этаноле в течение нескольких секунд, окрашивали эозином в течение 10 секунд, тонировали с помощью 80% этанола и 95% этанола, обезвоживали, т. е., с помощью 95% этанола, 100% этанола I, 100% этанола II, средства I для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection, средства II для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection и средства III 60 для придания прозрачности Super-safety and environmental-protection в течение 2 мин. каждое, запечатывали с помощью ультрачистого высококачественного покровного стекла и наблюдали под микроскопом.
3. Анализ данных
Данные выражали в виде среднего значения ± стандартная ошибка, и все данные статистически анализировали с помощью ONEWAY-ANOVA с применением программного обеспечения Graphpad Prism 5.0; изображения сравнивали и анализировали.
III. Результаты экспериментов
3.1 Эффект IMM-H007 в отношении веса тела и коэффициента печени у золотистого хомячка с неалкогольной жировой болезнью печени, вызванной рационом с высоким содержанием жиров
В таблице 1 и на фиг. 1 можно увидеть, что по сравнению с золотистыми хомячками в нормальной группе вес тела золотистых хомячков в модельной группе значительно увеличивался, и у них увеличивался коэффициент печени; и по сравнению с модельной группой и вес тела, и коэффициент печени снижались после лечения с помощью введения IMM-H007. Однако после лечения посредством введения симвастатина коэффициент печени у золотистых хомячков не снижался, а значительно увеличивался.
Таблица 1. Эффект IMM-H007 в отношении веса тела и коэффициента печени у золотистого хомячка с хронической жировой болезнью печени
***P<0,001, при сравнении с нормальной группой; ###P<0,001, ##P<0,01,#P<0,05 при сравнении с модельной группой
3.2 Эффект IMM-H007 в отношении показателей липидов в сыворотке крови у золотистого хомячка с неалкогольной жировой болезнью печени, вызванной рационом с высоким содержанием жиров
По сравнению с золотистыми хомячками в нормальной группе показатели TC, TG, LDL-C, HDL-C и FFA в сыворотке крови золотистых хомячков в модельной группе значительно увеличивались; и по сравнению с модельной группой показатели TC, TG, LDL-C, HDL-C и FFA значительно сокращались после введения IMM-H007 (таблица 2 и фиг. 2).
Таблица 2. Эффект IMM-H007 в отношении показателей липидов в сыворотке крови у золотистого хомячка с неалкогольной жировой болезнью печени, вызванной рационом с высоким содержанием жиров
***P<0,001, при сравнении с нормальной группой; ###P<0,001, ##P<0,01,#P<0,05 при сравнении с модельной группой
3.3 Эффект IMM-H007 в отношении функции печени у золотистого хомячка с неалкогольной жировой болезнью печени, вызванной рационом с высоким содержанием жиров
Как можно видеть из таблицы 3, уровни глутамат-пируват-трансаминазы и глутамат-оксалацетат-трансаминазы в сыворотке крови у золотистых хомячков в модельной группе значительно увеличивались, и значения ALT и AST в сыворотке крови значительно снижались после лечения с помощью IMM-H007. Однако после лечения посредством введения симвастатина уровень глутамат-пируват-трансаминазы не снижался, а значительно увеличивался (таблица 3 и фиг. 3); при этом не было значительной разницы между уровнем глутамат-оксалацетат-трансаминазы и ее уровнем в модельной группе, что дает основания предполагать, что IMM-H007 обладает хорошим защитным эффектом в отношении печени, но симвастатин проявляет эффект, разрушительный для печени.
Таблица 3. Эффект IMM-H007 в отношении уровней ALT, AST в сыворотке крови у золотистого хомячка с неалкогольной жировой болезнью печени, вызванной рационом с высоким содержанием жиров
***P<0,001, при сравнении с нормальной группой; ###P<0,001, ##P<0,01,#P<0,05 при сравнении с модельной группой
3.4 Эффект IMM-H007 в отношении изменений показателей липидов в печени у золотистого хомячка с неалкогольной жировой болезнью печени, вызванной рационом с высоким содержанием жиров
В таблице 4 и на фиг. 4 можно увидеть, что по сравнению с золотистыми хомячками в нормальной группе показатели TC и TG в печени у золотистых хомячков в модельной группе значительно увеличивались; и по сравнению с модельной группой показатели TC и TG значительно сокращались после введения симвастатина и IMM-H007.
Таблица 4. Эффект IMM-H007 в отношении изменений показателей липидов в печени у золотистого хомячка с неалкогольной жировой болезнью печени, вызванной рационом с высоким содержанием жиров
***P<0,001, при сравнении с нормальной группой; ###P<0,001, ##P<0,01,#P<0,05 при сравнении с модельной группой
3.5 Анализ MRI печени
Результаты исследования MR показали, что количество подкожного и брюшного жира у золотистых хомячков в модельной группе значительно увеличивалось по сравнению с нормальной группой, и количество подкожного и брюшного жира сокращалось после введения симвастатина и IMM-H007 (фиг. 5).
3.6 Патологическое наблюдение ткани печени
Из результатов окрашивания HE, показанных на фиг. 6, видно, что у нормальных животных клетки печени были расположены радиально вокруг центральной вены и коллагеновые волокна регулярным образом распределены в стенках центральной вены и других кровеносных сосудов; у животных модельной группы клетки печени выглядели вакуолизированными и коллагеновые волокна, по-видимому, характеризовались нерегулярным распределением между клетками печени; и у животных группы введения симвастатина в клетках печени видны вакуоли, и коллагеновые волокна, по-видимому, характеризовались нерегулярным распределением между клетками печени. В каждой группе дозы IMM-H007 клетки печени были расположены радиально вокруг центральной вены и коллагеновые волокна регулярным образом распределены в центральной вене и краевой зоне долек печени.
Из результатов окрашивания Oil Red O (фиг. 7) видно, что у нормальных животных клетки печени были расположены радиально вокруг центральной вены и содержали меньше внутриклеточного нейтрального жира; у животных группы, получавшей рацион с высоким содержанием жиров, было большое количество отложений жира и вакуолизации клеток печени; и у животных группы введения симвастатина наблюдали отложения жира и большую степень некроза в клетках печени. У животных каждой группы дозы IMM-H007 также наблюдали отложения жира в клетках печени, но их количество было значительно сокращено по сравнению с модельной группой.
Таким образом, триацетил-3-гидроксифениладенозин (IMM-H007) может значительно сокращать уровень липидов в крови золотистых хомячков с неалкогольной жировой болезнью печени, значительно сокращать уровни AST и ALT и значительно улучшать функцию печени, что дает основания предполагать, что IMM -H007 можно применять для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени.
Claims (11)
1. Применение триацетил-3-гидроксифениладенозина, представленного формулой (I), и его фармацевтически приемлемой соли для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени,
(I),
где применение направлено на снижение веса тела, коэффициента печени, уровней ALT и AST.
2. Применение по п. 1, где неалкогольная жировая болезнь печени представляет собой жировую болезнь печени, вызванную употреблением высококалорийного рациона.
3. Применение фармацевтической композиции для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени, где фармацевтическая композиция содержит триацетил-3-гидроксифениладенозин, представленный формулой (I), и его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель,
(I),
где применение направлено на снижение веса тела, коэффициента печени, уровней ALT и AST.
4. Применение по п. 3, где фармацевтическую композицию применяют в форме таблетки, капсулы, пилюли или раствора для инъекций.
5. Применение по п. 3, где фармацевтическую композицию применяют в виде препарата с замедленным высвобождением, препарата с контролируемым высвобождением или различных систем доставки лекарственных средств на основе микрочастиц.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201511034199 | 2015-12-31 | ||
| CN201511034199.0 | 2015-12-31 | ||
| PCT/CN2016/112623 WO2017114413A1 (zh) | 2015-12-31 | 2016-12-28 | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备预防或者治疗非酒精性脂肪肝药物中的应用 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2018126158A RU2018126158A (ru) | 2020-01-31 |
| RU2018126158A3 RU2018126158A3 (ru) | 2020-03-11 |
| RU2759916C2 true RU2759916C2 (ru) | 2021-11-18 |
Family
ID=59224622
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2018126158A RU2759916C2 (ru) | 2015-12-31 | 2016-12-28 | Применение триацетил-3-гидроксифениладенозина для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11058703B2 (ru) |
| EP (1) | EP3398604A4 (ru) |
| JP (1) | JP7382716B2 (ru) |
| KR (1) | KR102676056B1 (ru) |
| CN (2) | CN118178446A (ru) |
| AU (1) | AU2016383376B2 (ru) |
| CA (1) | CA3010097C (ru) |
| HK (1) | HK1255689A1 (ru) |
| RU (1) | RU2759916C2 (ru) |
| WO (1) | WO2017114413A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201805080B (ru) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107334775A (zh) * | 2016-03-14 | 2017-11-10 | 中国医学科学院药物研究所 | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用 |
| EP3801496A4 (en) | 2018-06-05 | 2022-07-06 | Flagship Pioneering Innovations V, Inc. | ACTIVE AGENTS AND METHODS OF USE THEREOF FOR TREATING METABOLIC DISORDERS AND NAFLD |
| CN111821313A (zh) * | 2019-04-17 | 2020-10-27 | 江苏天士力帝益药业有限公司 | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备抑制心脏纤维化的药物中的应用 |
| CN114869901B (zh) * | 2022-05-06 | 2023-10-27 | 安徽医科大学 | 马鞭草苷在治疗酒精性肝损伤药物中的应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102125580A (zh) * | 2011-01-17 | 2011-07-20 | 泰山医学院 | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷thpa在制药中的应用 |
| EP2407474B1 (en) * | 2008-10-06 | 2013-08-14 | Institute of Mataria Medica, Chinese Academy of Medical Sciences | Triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine and its use for regulating blood fat |
| CN104546887A (zh) * | 2013-10-09 | 2015-04-29 | 中国医学科学院药物研究所 | 虫草素衍生物治疗炎症疾病的用途 |
| EA022375B1 (ru) * | 2011-04-22 | 2015-12-30 | Пфайзер Инк. | ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛОСПИРОКЕТОНОВ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ АЦЕТИЛ-КоА-КАРБОКСИЛАЗ |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005132812A (ja) | 2003-10-08 | 2005-05-26 | Kobayashi Pharmaceut Co Ltd | シイタケ菌糸体抽出物の分画物およびその用途 |
| CN100427534C (zh) * | 2004-03-19 | 2008-10-22 | 四川大学 | 聚合物型含磷阻燃剂及其制备方法和用途 |
| JP2007210926A (ja) | 2006-02-08 | 2007-08-23 | Tokyo Univ Of Pharmacy & Life Science | ピラジンカルボン酸化合物からなる薬剤、及び食餌 |
| JP5688229B2 (ja) | 2010-03-19 | 2015-03-25 | 国立大学法人名古屋大学 | 肝保護作用を有するタンパク質、肝障害予防・保護用化合物のスクリーニング方法 |
| AU2013204489A1 (en) | 2012-09-21 | 2014-04-10 | Barbara Jane Badenoch-Jones | Novel AMPK agonist compositions and methods of use |
| CN103191145A (zh) | 2013-03-27 | 2013-07-10 | 南京理工大学 | 腺苷及其衍生物在防治药物性肝损伤中的应用 |
| CN104211747B (zh) * | 2013-05-29 | 2018-09-25 | 中国医学科学院药物研究所 | 5’-磷酸-n6-（3-羟基苯基）腺苷的制备及医药用途 |
| WO2015002818A1 (en) | 2013-07-01 | 2015-01-08 | Emory University | Treating or preventing nephrogenic diabetes insipidus |
| CN105663152A (zh) | 2014-11-19 | 2016-06-15 | 中国医学科学院药物研究所 | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备改善胰岛素抵抗及相关疾病中的应用 |
| CN107334775A (zh) * | 2016-03-14 | 2017-11-10 | 中国医学科学院药物研究所 | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用 |
-
2016
- 2016-12-28 RU RU2018126158A patent/RU2759916C2/ru active
- 2016-12-28 KR KR1020187021547A patent/KR102676056B1/ko active IP Right Grant
- 2016-12-28 EP EP16881202.2A patent/EP3398604A4/en active Pending
- 2016-12-28 JP JP2018533743A patent/JP7382716B2/ja active Active
- 2016-12-28 AU AU2016383376A patent/AU2016383376B2/en active Active
- 2016-12-28 WO PCT/CN2016/112623 patent/WO2017114413A1/zh active Application Filing
- 2016-12-28 US US16/067,228 patent/US11058703B2/en active Active
- 2016-12-28 CA CA3010097A patent/CA3010097C/en active Active
- 2016-12-31 CN CN202410227642.9A patent/CN118178446A/zh active Pending
- 2016-12-31 CN CN201611266703.4A patent/CN106943420A/zh active Pending
-
2018
- 2018-07-27 ZA ZA201805080A patent/ZA201805080B/en unknown
- 2018-11-20 HK HK18114837.8A patent/HK1255689A1/zh unknown
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2407474B1 (en) * | 2008-10-06 | 2013-08-14 | Institute of Mataria Medica, Chinese Academy of Medical Sciences | Triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine and its use for regulating blood fat |
| CN102125580A (zh) * | 2011-01-17 | 2011-07-20 | 泰山医学院 | 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷thpa在制药中的应用 |
| EA022375B1 (ru) * | 2011-04-22 | 2015-12-30 | Пфайзер Инк. | ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛОСПИРОКЕТОНОВ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ АЦЕТИЛ-КоА-КАРБОКСИЛАЗ |
| CN104546887A (zh) * | 2013-10-09 | 2015-04-29 | 中国医学科学院药物研究所 | 虫草素衍生物治疗炎症疾病的用途 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Lian Zequin et al, "A novel AMPK activator, WS070117, improves lipid metabolism discords in hamsters and HepG2 cells", Lipids in Health and Disease, 2011, Vol. 10(1):67. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20180100152A (ko) | 2018-09-07 |
| CN106943420A (zh) | 2017-07-14 |
| AU2016383376B2 (en) | 2022-07-28 |
| EP3398604A1 (en) | 2018-11-07 |
| RU2018126158A (ru) | 2020-01-31 |
| WO2017114413A1 (zh) | 2017-07-06 |
| HK1255689A1 (zh) | 2019-08-23 |
| JP7382716B2 (ja) | 2023-11-17 |
| AU2016383376A1 (en) | 2018-07-12 |
| EP3398604A4 (en) | 2019-06-19 |
| US11058703B2 (en) | 2021-07-13 |
| US20190022120A1 (en) | 2019-01-24 |
| CA3010097A1 (en) | 2017-07-06 |
| ZA201805080B (en) | 2019-10-30 |
| CA3010097C (en) | 2023-08-22 |
| CN118178446A (zh) | 2024-06-14 |
| JP2019500379A (ja) | 2019-01-10 |
| KR102676056B1 (ko) | 2024-06-19 |
| RU2018126158A3 (ru) | 2020-03-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2759916C2 (ru) | Применение триацетил-3-гидроксифениладенозина для получения фармацевтического лекарственного средства для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени | |
| CZ20023121A3 (cs) | Farmaceutické prostředky pro léčení diabetických komplikací a neuropatie a jejich použití | |
| US10959963B2 (en) | Method for the treatment of fatty liver disease | |
| CN109432096A (zh) | 盐酸去亚甲基四氢小檗碱在制备预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病药物中的应用 | |
| KR20010101616A (ko) | 진세노사이드 Ｒｂ₁을 함유하는 뇌혈관 재생ㆍ재구축촉진제 및 신경조직 이차변성 억제제 | |
| CN108653296B (zh) | 榄香桐酸的应用及治疗胰腺炎的药物 | |
| WO2005002568A1 (en) | The application of l-n-butylphthlide in preventing and treating dementia | |
| AU2017233089B2 (en) | Use of triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine in preparing pharmaceuticals for treatment of atherosclerosis | |
| CN105477636A (zh) | 使用阿维菌素及其衍生物治疗代谢疾病的方法 | |
| CN109771411A (zh) | 二氢槲皮素用于制备治疗脂肪肝的药物中的用途 | |
| CN104490876A (zh) | 盐酸小檗碱在制备预防和/或治疗急性肝衰竭药物中的应用 | |
| CN111686239B (zh) | 抗真菌化合物的应用 | |
| CN110169971A (zh) | 一种包含3乙酰-α、β乳香酸的药物及其在预防、治疗胰腺炎中的应用 | |
| CN103735549A (zh) | 盐酸去亚甲基小檗碱在制备治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用 | |
| CN109481424A (zh) | 异甘草素、药物组合物及其在治疗糖尿病肾病中的应用 | |
| RU2795163C2 (ru) | Триацетил-3-гидроксифениладенозин для получения фармацевтических препаратов для уменьшения количества циркулирующих в крови моноцитов | |
| US20100291154A1 (en) | Composition for inhibition of transplant rejection containing the cordyceps mycellia extract as an active ingredient | |
| TWI797455B (zh) | 安卓錠化合物用於預防或治療非酒精性脂肪肝病的用途 | |
| CN117599036A (zh) | 隐绿原酸在制备治疗和/或预防非酒精性脂肪肝产品中的用途 | |
| CN100496538C (zh) | 具有协同作用的药物组合物 | |
| CN115590847A (zh) | 戈米辛d在制备治疗或预防心肌缺血性疾病药物中的应用 | |
| CN113143922A (zh) | Dhc在制备动脉粥样硬化治疗制剂中的应用 | |
| TWI419686B (zh) | 左旋正丁基苯酞的預防和治療癡呆的用途 | |
| CN113082033A (zh) | Fr180204在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病或肝炎药物中的应用 | |
| CN113041248A (zh) | Ravoxertinib在制备预防和/或治疗非酒精性脂肪性肝病或肝炎药物中的应用 |