CN102125580A - 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷thpa在制药中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种三乙酰基-3-羟基苯基腺苷THPA在制备治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。本发明优点在于：提供了THPA的新的用途，首次揭示并量化分析了THPA多方面的抗动脉粥样硬化病变活性，提供了THPA抗动脉粥样硬化功能新的认识，并且表明THPA的使用将为动脉粥样硬化的治疗提供一新的治疗策略。

Description

三乙酰基-3-羟基苯基腺苷THPA在制药中的应用

技术领域

本发明涉及一种虫草素衍生物的新用途，具体地说，是一种虫草素衍生物三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制药中的应用。

背景技术

动脉粥样硬化是一可导致心血管疾病发生的由多因素引起的慢性血管炎性病变。动脉壁的炎性过程介导动脉粥样硬化的起始和进展。多个炎性因子和基因参与了动脉粥样硬化病变过程的各个阶段。单核细胞侵入动脉壁的损伤区并且增殖分化为巨噬细胞进而导致动脉粥样硬化斑块的形成。近年来动脉粥样硬化的治疗策略集中于抗炎和通过降低血浆低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)，减少胆固醇向动脉壁的浸润，从而抑制动脉粥样硬化的形成和发展。研究表明深度降低血浆LDL 的水平可以降低冠心病的死亡率，然而这种保护作用是不完全的，相当数量的病人其血浆LDL的水平不能降低到可以阻止动脉粥样硬化病变进展的水平。故如何增强胆固醇从动脉壁的流出并促进流出的胆固醇转运至肝并通过胆汁经肠道排出，即如何增强胆固醇的逆向转运是治疗动脉粥样硬化的另一重要治疗策略。

虫草素又叫3'-脱氧腺苷，是传统的中药蛹虫草的主要活性成分之一，其有广泛的生物学活性，包括免疫调节、抗炎、抗糖尿病和降低血糖的活性。近期的研究表明虫草素尚有降低胆固醇、抑制胆固醇在血管壁的沉积以及强心的功能。已有报道作为传统真菌类药物冬虫夏草的重要生物活性成分之一的虫草素，是一潜在的有开发前景的抗动脉粥样硬化的化合物，然而虫草素高昂的生产成本和体内的快速代谢限制了虫草素的进一步开发和应用。三乙酰基-3-羟基苯基腺苷(triacetyl-3-hydroxyphenyladenosine，THPA)(专利号WO/2010/040286)为中国医学科学院合成的一种虫草素的衍生物，其结构式为：

发明人声称该化合物有降脂活性，然而该化合物对动脉粥样硬化的作用尚未阐明。

中国专利文献CN：101874036A公开了一种三乙酰基-3-羟基苯基腺苷及其调血脂的用途。该发明公开了一个新的化合物三乙酰基-3-羟基苯基腺苷，其制备方法以次黄嘌呤核苷为原料，经醋酐乙酰化、氯化亚砜氯代、3-羟基苯胺取得，还公开了含有三乙酰基-3-羟基苯基腺苷的药物组合物，所述的药物组合物的剂型包括片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。该发明的药物组合物，具有调血脂活性明显、毒副作用小、体内代谢减慢的优点。但是关于三乙酰基-3-羟基苯基腺苷对动脉粥样硬化的作用目前还未见报道。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种三乙酰基-3-羟基苯基腺苷THPA在制备治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。

所述的治疗动脉粥样硬化的药物通过升高血浆载脂蛋白A-I (apoA-I)水平，增强血浆卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性，抑制血浆磷脂转运蛋白(PLTP)活性，促进胆固醇逆向转运相关转运子基因的表达，改善内皮细胞的功能以及减轻血管壁的炎性过程进行动脉粥样硬化的治疗。

所述的治疗动脉粥样硬化的药物的剂型为片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。

本发明优点在于：提供了THPA的新的用途，首次揭示并量化分析了THPA多方面的抗动脉粥样硬化病变活性，提供了THPA抗动脉粥样硬化功能新的认识，并且表明THPA的使用将为动脉粥样硬化的治疗提供一新的治疗策略。

附图说明

附图1是THPA抑制动脉粥样硬化病变的形成。

附图2是THPA对肝脏胆固醇代谢相关基因表达的影响。

附图3是THPA对腹腔巨噬细胞胆固醇流出相关转运子基因表达的影响。

附图4是THPA减轻动脉壁的炎性过程。

附图5是THPA诱导动脉壁eNOS的表达。

附图6是THPA减少动脉壁LOX-1的表达。

具体实施方式

下面结合附图对本发明提供的具体实施方式作详细说明。

实施例1

1. 材料和方法

1.1 动物和实验设计

来自中国医学科学院实验动物研究所41只雄性apoE^-/-小鼠用于本实验。5周龄时，将小鼠随机分成4组，模型组(n=11)；THPA 治疗组(2.5-10 mg/kg/d) (n=10，每组10只)。4组实验动物均喂养促动脉粥样硬化的高脂饮食(15.8%脂肪和1.25%胆固醇，本实验组的动物和高脂饮食均购自北京华阜康生物科技股份有限公司)，添加溶剂或THPA共6周。溶剂和THPA均通过每天灌胃给予实验动物。

1.2 血浆学分析

治疗6周后，禁食12小时并麻醉后，经内眦静脉取血。使用酶法(BioSino)测定血浆总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)。ApoA-I的血浆浓度使用ELISA 试剂盒 (BlueGene)测定。内源性卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)的活性采用Ly等提供的方法（Ly, H., Francone, O. L., Fielding, C. J., Shigenaga, J. K., Moser, A. H., Grunfeld, C. and Feingold, K. R., Endotoxin and TNF lead to reduced plasma LCAT activity and decreased hepatic LCAT mRNA levels in Syrian hamsters, J Lipid Res, 1995, 36: 1254-1263.），用游离胆固醇的酶化率来测定，游离胆固醇的含量用试剂盒(Biovision)采用分光光度法测量获得，使用酶标仪(Tecan)在37℃下，开始时间和1小时后分别测定。LCAT的活性表示为每小时每ml 的血浆中游离胆固醇的酶化量。磷脂转运蛋白(PLTP)的活性测定采用文献报道的方法（Schlitt, A., Bickel, C., Thumma, P., Blankenberg, S., Rupprecht, H. J., Meyer, J. and Jiang, X. C., High plasma phospholipid transfer protein levels as a risk factor for coronary artery disease, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2003, 23: 1857-1862.）。Non-HDL-C的含量为TC减去HDL-C。

1.3 病变分析

主动脉根部靠近心底的部位用于连续冰冻切片的制作。冰冻切片的厚度为8μm,切片开始的部位为主动脉根部主动脉瓣开始出现处，每间隔16μm收集一张切片，直至主动脉瓣膜完全消失，每只鼠收集5张切片，用油红O染色和亮绿复染。脂质染色阳性面积(μm²)计算每只鼠5张冰冻切片。为获取主动脉弓动脉粥样硬化斑块的面积，先解剖和分离主动脉弓，然后油红O染色内膜。斑块面积的量化统计分析由两位观测者用Image-Pro Plus software 4.5 (Media Cybernetics)进行盲测和统计学处理。

1.4 免疫印记

组织和细胞的获取以及蛋白的提取和制备依据以前的文献描述方法（Ayaori, M., Sawada, S., Yonemura, A., Iwamoto, N., Ogura, M., Tanaka, N., Nakaya, K., Kusuhara, M., Nakamura, H. and Ohsuzu, F., Glucocorticoid receptor regulates ATP-binding cassette transporter-A1 expression and apolipoprotein-mediated cholesterol efflux from macrophages, Arterioscler Thromb Vasc Biol, 2006, 26: 163-168.）。采用anti-lectin-like oxidized LDL receptor(LOX-1)抗体(Abcam)，anti-ABCA1，ABCG1，SR-BI，apoA-I，and β-actin抗体(Santa Cruz)进行各相关蛋白的免疫印记（western blot）分析。各蛋白的观察和量化分析采用化学发光法(Pierce)和Quantity One (Bio-Rad)软件系统。

1.5 免疫组织化学分析

主动脉根部的连续冰冻切片分别用特异性抗体(VCAM-1抗体、TF抗体、eNOS抗体、iNOS抗体等皆来自Santa Cruz；而NF-κB-p65抗体和LOX-1抗体则来自Abcam）进行染色，二氨基联苯胺(Vector Laboratories)终止反应，迈尔苏木素(Richard Allen)复染。所有图像均用Olympus显微镜采集。数据定量分析中使用颜色设定和面积求法。所有的定量分析数据均使用Image-Pro Plus软件并用抗体的阳性面积和血管总的横断面积的百分比显示数据结果。

1.6 腹腔巨噬细胞的分离和获取

THPA治疗6周后自apoE^-/-小鼠腹膜腔获取腹腔巨噬细胞。收集后的腹腔巨噬细胞快速冻存在-80℃的低温冰箱内直至RNA或蛋白的提取。

1.7 实时PCR定量

细胞总RNA通过TRIZOL试剂(Invitrogen)分离获得。cDNA的合成采用MuLV 反转录酶 (Applied Biosystems)合成。实时PCR 采用SYBR-green PCR master mix kit(TianGen Biotech)完成。实时PCR所用引物见表1。数据分析使用Rotor-gene Q software ver. 1.7 (Qiagen)。mRNA的相对水平采用2^-DDCt方法计算获得。

表1 荧光定量PCR引物

1.8 统计学分析

统计学分析用GraphPad Prism programme ver.4.0进行单因素方差分析检验。结果显示为means±SD。P值小于0.05为有显著性差异。

2. 结果

2.1 THPA减轻动脉粥样硬化病变的形成

请参照附图1，附图1是THPA抑制动脉粥样硬化病变的形成。其中A：主动脉根部冰冻切片油红O染色(10×放大倍数)；B：主动脉弓内膜油红O染色；C：主动脉根部连续切片油红O染色病变面积的量化分析；D：主动脉弓内膜油红O染色斑块面积的量化分析；** P < 0.01 和模型组对照。

与模型组相比，2.5、5.0和10mg/kg剂量的THPA均显著抑制主动脉瓣膜处动脉粥样硬化病变的形成，斑块面积分别减少40%、33%和35%(图1A和 1C)。主动脉弓油红O内膜染色，显示不同剂量的THPA治疗组均能显著抑制动脉粥样硬化斑块的形成，2.5、5.0和10mg/kg THPA治疗组病变面积分别减少47%、45% 和43%(图1B和1D)。

2.2 THPA对血浆脂蛋白、ApoA-I含量、血浆LCAT和PLTP活性的影响

如表2所示，THPA治疗6周后和模型组相比血浆总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇的水平未有显著性变化。而血浆HDL-C的水平在各剂量(2.5、5.0和10mg/kg) THPA治疗组较模型组均显著降低(p<0.01)。不同剂量的THPA(2.5、5.0和10mg/kg)均显著升高apoA-I(HDL的重要组成成分)的血浆水平和LCAT的血浆活性(p<0.01)。各剂量(2.5、5.0和10mg/kg) THPA治疗组PLTP的活性较模型组均显著降低(p<0.05)。

表2  THPA对血浆脂蛋白、ApoA-I含量、血浆LCAT和PLTP活性的影响

	Model	THPA 2.5	THPA 5	THPA 10
					Animalnumber (n)	11	10	10	10
TC (mmol/L)	20.40 ±5.27	16.10 ±4.00	18.69 ±4.15	18.10 ±2.76
					TG (mmol/L)	2.14 ±0.58	1.65 ± 0.58	1.80 ± 0.34	2.14 ± 0.43
HDL-C(mmol/L)	5.73 ± 1.53	4.20 ±0.65**	4.34 ±0.74**	3.99 ±0.71**
					Non-HDL(mmol/L)	14.67 ±4.38	11.20 ±4.00	13.60 ±3.47	14.11 ±2.66
ApoA-I(mg/dl)	4.24 ± 1.02	15.13 ±4.71**	13.80 ±3.05**	12.73 ±2.29**
					PLTPactivity (pmol/μl/hour)	211.8 ±36.5	179.7 ±36.8*	181.2 ±29.4*	179.9 ±30.8*
LCATactivity (nmol/ml.h)	294.4 ±85.32	1415.9 ±86.56**	1383.1 ±82.48**	1532.08 ±158.86**

Values are the means ± SD. *compared with model, p<0.05. **compared with model, p<0.01。

2.3 THPA对肝胆固醇代谢相关基因表达的影响

请参照附图2，附图2是THPA对肝脏胆固醇代谢相关基因表达的影响。其中A：THPA对肝脏相关基因mRNA表达的影响(实时PCR)，mRNA表达水平和模型组比较以倍数差别显示；B：THPA对肝脏相关基因蛋白表达的影响(western blot)；C：western blot数据的光密度定量分析(n = 5) 采用Quantity One软件；* P < 0.05，** P < 0.01 和模型组对照。

如图2A所示，THPA治疗后肝apoA-I 和ABCA1 mRNA的表达水平分别为模型组的1.53±0.2倍(P<0.05)和1.93±0.26倍(P<0.05)。肝ABCG5和ABCB11 mRNA表达水平THPA治疗组和模型组相比亦明显升高。然而，ABCG1，apoA-II，SR-BI，LCAT和ABCG8 mRNA表达水平THPA治疗组较模型组未有明显的变化。肝LCAT mRNA表达水平的变化和血浆LCAT 活性的不一致，表明转录后水平的调节在THPA影响LCAT 活性过程中有重要作用。另外，如图2B和2C所示，肝ABCA1和apoA-I的蛋白表达水平THPA治疗组明显升高，而ABCG1和SR-BI的蛋白表达水平THPA治疗组未见明显影响。ABCA1和apoA-I蛋白表达水平的升高倍数较mRNA表达水平的升高倍数高，表明转录后调节亦部分影响了ABCA1和apoA-I 蛋白表达。

2.4 THPA对腹腔巨噬细胞胆固醇流出相关转运子基因表达的影响

我们检测了THPA对腹腔巨噬细胞转运子ABCA1，ABCG1和SR-BI表达的影响，这些转运子对胆固醇从周围组织的流出发挥重要的作用。请参照附图3，附图3是THPA对腹腔巨噬细胞胆固醇流出相关转运子基因表达的影响。其中A：THPA对巨噬细胞转运子蛋白表达的影响(western blot)；B：western blot数据的光密度定量分析(n = 5) 采用Quantity One软件；C：THPA对巨噬细胞转运子基因mRNA表达的影响(实时PCR)，mRNA表达水平和模型组比较以倍数差别显示；* P < 0.05，** P < 0.01和模型组对照。

免疫印记结果分析显示不同剂量THPA治疗组较模型组SR-BI的表达显著性增加，而ABCA1，ABCG1的表达THPA治疗组和模型组相比无显著性变化(图3A和3B)。同样，实时定量PCR结果分析显示THPA治疗组SR-BI mRNA的表达水平显著性增高，而ABCA1和ABCG1 mRNA的表达水平在4组实验动物之间无显著性差异。

2.5 THPA减轻动脉壁的炎性过程

请参照附图4，附图4是THPA减轻动脉壁的炎性过程。其中A、B、C、D分别为特异性抗体的免疫组织化学主动脉冰冻切片的染色结果，A为VCAM (10×放大倍数；blue=nuclei，brown = VCAM)，B为TF (10×放大倍数；blue = nuclei，brown = TF)，C为iNOS (20×放大倍数；blue = nuclei，brown = iNOS)，D为NF-κB (20×放大倍数；blue = nuclei，brown = NF-κB)；E、F、G、H分别为每个视野阳性细胞VCAM，TF，iNOS和NF-κB光密度量化分析；** P < 0.01 和模型组对照。

免疫组织化学图像分析结果表明病变区域VCAM-1和TF的阳性面积THPA治疗组较模型组分别减少68 %和66%(图4A、B、E、F)。另外，诱导型一氧化氮合酶（巨噬细胞活性的重要标志）的表达治疗组下降50%，表明THPA能抑制巨噬细胞的活性(图4C和4G)。图4D和4H结果显示，细胞核内NF-κB-p65阳性面积THPA治疗组减少59%，这些结果表明THPA抑制NF-κB活性，为THPA减轻炎性反应的一分子机制。

2.6 THPA对动脉壁eNOS 和 LOX-1表达的影响

免疫组织化学结果显示eNOS的表达THPA治疗组主动脉壁内皮细胞eNOS的表达为模型组的1.9倍，请参照附图5，附图5是THPA诱导动脉壁eNOS的表达。其中A：主动脉切片eNOS特异性抗体免疫组织化学染色(20×放大倍数；blue = nuclei，brown = eNOS)；B：每个视野内eNOS阳性细胞光密度量化分析；* P < 0.05，** P < 0.01 和模型组对照。

请参照附图6，附图6是THPA减少动脉壁LOX-1的表达。A：胸主动脉LOX-1蛋白表达的Western blot分析结果；B：胸主动脉LOX-1 mRNA表达的实时定量PCR分析结果，mRNA表达水平和模型组比较以倍数差别显示；C：LOX-1特异性抗体主动脉切片的免疫组织化学染色(20×放大倍数；blue = nuclei，brown = LOX-1)；* P < 0.05，** P < 0.01 和模型组对照。

免疫印记(图6A)和实时定量PCR (图6B)的结果表明LOX-1在主动脉的表达蛋白水平上降低75%，mRNA水平上降低77% THPA治疗组和模型组相比。免疫组织化学图像分析结果显示病变部位LOX-1的表达治疗组显著性降低(图6C)，和上述LOX-1的蛋白和基因检测结果相吻合。

我们的实验结果表明合成化合物THPA在apoE^-/-模型鼠上可以有效减轻动脉粥样硬化病变的形成并通过下述多种途径在病变形成的过程中发挥作用，即升高血浆apoA-I的水平，增强血浆LCAT的活性，抑制血浆PLTP的活性，促进和胆固醇逆向转运有关的转运子基因的表达，改善内皮细胞的功能以及减轻血管壁的炎性过程。

3.讨论

我们在易于发生动脉粥样硬化的模型鼠上研究了合成的虫草素的衍生物THPA抗动脉粥样硬化的药理活性。采用apoE^-/-小鼠首次揭示并量化分析了THPA多方面的抗动脉粥样硬化病变活性。THPA虽不影响apoE^-/-模型鼠血浆总胆固醇和甘油三酯的水平，而血浆高密度脂蛋白胆固醇的水平在THPA各治疗组均显著性下降，这种现象的可能解释是apoE^-/-小鼠有严重紊乱的脂质谱且其脂蛋白谱是以VLDL为主。本发明发现THPA能显著减少主动脉弓的斑块形成以及主动脉横断面切片上斑块的面积。THPA可能通过观察到的下述药理活性发挥抗动脉粥样硬化作用，即抑制血浆PLTP的活性，升高胆固醇逆向转运相关因子的表达水平 (巨噬细胞SR-BI的表达，血浆apoA-I和LCAT的活性，肝ABCG5 和ABCB11的表达)，促进内皮细胞的功能(促进eNOS产生，抑制LOX-1表达)，以及较强地抑制动脉壁炎性反应(抑制VCAM-1，TF， p65-NF-κB，iNOS的表达）。

本发明结果表明THPA的抗动脉粥样硬化功能除了对血浆脂蛋白谱的影响外，尚有内皮保护和抑制动脉壁的炎性反应，而且我们从分子水平上对该化合物的抗动脉粥样硬化活性进行了阐明。

血浆HDL-C和apoA-I的水平与动脉粥样硬化性心血管疾病的发生呈明显的负相关，且并非依赖于LDL-C的水平。ApoA-I是血浆中HDL-C的重要蛋白成分。HDL-C和apoA-I通过它们的抗炎、抗氧化、抗血栓形成、促进胆固醇的逆向转运以及扩张血管的活性而发挥它们的抗动脉粥样硬化的生理功能。HDL的代谢是一复杂的过程，在HDL的生成和成熟过程中其内的脂质和载脂蛋白成份经常发生重组，并且经常和其它的脂蛋白进行交换，在血浆转运的过程中HDL的组成亦不断发生变化，最终经肝和肾代谢清除。代谢研究结果表明HDL和apoA-I的血浆水平取决于它们的合成和代谢速度。在正常人群中HDL和apoA-I血浆水平的变化主要取决于它们清除或产生速率的差异。本发明首次发现THPA治疗后能明显升高血浆apoA-I水平，而HDL-C的血浆水平则并未升高甚至降低，这些实验结果表明THPA可促进apoA-I的产生并且增强HDL-C的代谢速率。

已有研究表明血浆PLTP可以介导单纯的磷脂转运和不同的脂蛋白之间的磷脂交换。实验结果表明PLTP基因敲除小鼠抗氧化能力增强、载脂蛋白B的产生减少并且动脉粥样硬化病变减轻。本发明结果显示THPA治疗组血浆PLTP的活性降低，可能与治疗组动脉粥样硬化病变面积的减少有关。另外，有报道PLTP参与HDL的重组，其可能的机制是颗粒的融合，大颗粒HDL形成过程中apoA-I转移至富含apoA-I的小颗粒HDL中。我们已知大颗粒的HDL在血循环中停留时间长。另有报道认为PLTP活性和HDL-C呈正相关，有心血管疾病且HDL较低的病人，PLTP的活性和HDL的水平呈正相关。故我们的发明中，血浆HDL水平的降低至少部分归因于THPA治疗组PLTP活性的下调。

ApoA-I主要由肝合成，肝ABCA1促进脂质从肝细胞流出至apoA-I，有利于HDL-C的合成，肝ABCA1通过HDL-C和apoA-I发挥抗动脉粥样硬化的活性。我们的在体实验结果表明THPA治疗组肝apoA-I 和ABCA1表达水平明显升高，这些实验数据进一步证实THPA既可增强apoA-I的合成，又同时促进HDL-C的代谢，其机制可能至少部分与PLTP的介导有关。

胆固醇的逆向转运是将从周围组织流出的胆固醇运送至肝并进行代谢。近年来几个关键的分子被证实在胆固醇的逆向转运过程中发挥重要作用。巨噬细胞的ABCA1有利于胆固醇从细胞流出至乏脂的apoA-I，而不是至HDL。然而另两个巨噬细胞的转运子ABCG1和 SR-BI介导胆固醇从巨噬细胞流出至HDL，而不是至apoA-I。本实验结果表明THPA可以诱导巨噬细胞SR-BI的表达，故而可以促进HDL介导的胆固醇从巨噬细胞的流出。LCAT在血浆中和HDLs结合并且在胆固醇的逆向转运中起重要作用，该酶可将游离胆固醇转化为胆固醇酯在人和鼠的HDL的成熟和正常HDL的代谢过程中发挥关键作用。迄今，调节血浆LCAT浓度的分子机制尚未明了。LCAT的活性部分依赖于该酶的血浆浓度，部分依赖于该酶可以利用的底物以及该酶的辅助因子，如作为LCAT活化子的apoA-I和LCAT活性抑制剂的apoA-II。我们的实验结果表明，THPA的治疗不能影响肝LCAT 和apoA-II mRNA的表达，但是可显著升高血浆LCAT的活性，促进肝apoA-I mRNA的表达和升高血浆apoA-I浓度。肝LCAT的表达和血浆LCAT活性增强的不一致性可通过转录后LCAT活性的调节加以解释，或者THPA治疗后可以上调apoA-I和LCAT的活化子，进而增强血浆中LCAT的活性。

除了巨噬细胞的转运子和血浆LCAT外，几个肝组织的转运子亦介导了胆固醇的逆向转运过程。肝直接选择性摄取HDL-C是由SR-BI介导的。然而，本实验结果表明肝SR-BI的表达在THPA治疗的小鼠中并未发生变化。HDL相关的胆固醇由SR-BI介导被肝摄取后，胆固醇，胆酸和磷脂的分泌进入到胆汁分别通过转运子ABCG5，ABCG8和ABCB11的调节。本实验结果显示ABCG5和ABCB11 mRNA的表达水平THPA治疗组明显上调。这些实验结果表明THPA的抗动脉粥样硬化活性可能是通过促进胆固醇逆向转运过程中相关转运子的表达而发挥其功能的，这些转运子包括巨噬细胞的SR-BI，肝组织的ABCG5和ABCB11。

动脉粥样硬化先前曾被认为只是脂质堆积疾病，现已证明炎性过程在动脉粥样硬化的各个阶段均起到重要作用。我们的实验结果表明THPA在主动脉部位有直接的抗炎作用，免疫组织化学分析证实，VCAM-1，iNOS（巨噬细胞活化的标记物）TF (在动脉粥样硬化病变的脂质核心中发现的主要的促血栓形成刺激物)和NF-κB动脉壁的阳性面积THPA治疗组较模型组分别减少了68 %，50 %，66 %和59 %。其抗血管炎性的分子机制可能是通过THPA抑制NF-κB 的活化(图4)途径，因为NF-κB为重要的转录调节子可以调控粘附分子，组织因子和诱导型一氧化氮合酶的表达。另外，本实验发现THPA治疗组动脉壁上eNOS的表达增加和LOX-1的表达减少，这些结果表明THPA可促进内皮细胞的功能。

结论，我们的实验结果表明合成化合物THPA在apoE^-/-模型鼠上可以有效减轻动脉粥样硬化病变的形成并通过影响病变形成过程中的多条途径发挥作用，即升高血浆apoA-I水平，增强血浆LCAT活性，抑制血浆PLTP活性，促进胆固醇逆向转运相关转运子基因的表达，改善内皮细胞的功能以及减轻血管壁的炎性过程。我们的实验结果提供了THPA抗动脉粥样硬化功能新的认识，并且表明THPA的使用将为动脉粥样硬化的治疗提供一新的治疗策略。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.三乙酰基-3-羟基苯基腺苷THPA在制备治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗动脉粥样硬化的药物通过升高血浆载脂蛋白A-I (apoA-I)水平，增强血浆卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)活性，抑制血浆磷脂转运蛋白(PLTP)活性，促进胆固醇逆向转运相关转运子基因的表达，改善内皮细胞的功能以及减轻血管壁的炎性过程进行动脉粥样硬化的治疗。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的治疗动脉粥样硬化的药物的剂型为片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒给药系统。

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