CN107412248A - 三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在治疗血管炎症或改善血管内皮功能中的应用 - Google Patents

三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在治疗血管炎症或改善血管内皮功能中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了式(I)所示的三乙酰基‑3‑羟基苯基腺苷在制备预防和/或治疗血管炎症或/和改善内皮功能药物中的应用，具体而言，本发明公开了三乙酰基‑3‑羟基苯基腺苷抑制血管炎症，提高内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase，eNOS)活性，通过增加一氧化氮(nitric oxide，NO)途径改善血管内皮功能，进而减少动脉粥样硬化斑块的形成。

Description

三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在治疗血管炎症或改善血管内皮 功能中的应用
技术领域
本发明涉及三乙酰基-3-羟基苯基腺苷及含有其的药物组合物在制备预防和/或治疗血管炎症或/和改善内皮功能紊乱中的应用，属于医药卫生领域。
背景介绍
动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等心血管疾病发生、进展及最后靶器官的损伤与血管内炎症及内皮功能紊乱(Endothelial dysfunction，ED)高度相关。内皮细胞通过促进血管舒张、抑制平滑肌增生及抑制血管内炎症反应等一系列血管保护作用来调控血管内稳态的维持。而这些效应主要受内源性血管舒张物质一氧化氮(Nitric Oxide，NO)的影响。NO生成障碍会导致内皮功能紊乱，表现为内皮依赖性舒张功能受损。改善血管内皮功能紊乱对防治动脉粥样硬化、高血压、糖尿病的发生和进展极为重要。临床实验表明他汀类药物通过改善内皮功能障碍降低患者冠心病风险独立于其对血脂的影响，噻唑烷二酮类及血管紧张素转化酶抑制剂均通过独立的改善内皮功能紊乱的作用而降低心血管病风险，因此减轻血管炎症和改善内皮功能紊乱对于降低心血管病风险极为重要。
目前临床上能够改善血管内皮功能的药物主要有他汀类、二甲双胍、噻唑烷二酮、抗高血压药血管紧张素转化酶抑制剂等传统心血管疾病治疗药物，其主要是通过提高一氧化氮合酶活力，增加NO生成发挥作用。但是他汀类药物长期用药引起的肌痛等不良反应使患者很难长期耐受，双胍类药物会引起胃肠障碍或偶尔引起乳酸性酸中毒，噻唑烷衍生物则会引起体液贮留或体重增加、肝功能障碍等严重副作用，因此在使用时必须谨慎。
三乙酰基-3-羟基苯基腺苷(专利号ZL200980101131.6)是中国医学科学院药物研究所在虫草素衍生物中筛选出具有显著调血脂活性的新结构类型化合物，并且具有毒副作用小、药代动力学良好等特性，目前处于临床前研究阶段。目前尚无该化合物在减轻血管炎症和提高内皮型一氧化氮合酶活性改善血管内皮功能紊乱的相关疾病中应用的报道。
发明内容
本发明要解决的一个技术问题是提供如式(Ⅰ)所示的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备预防、缓解或治疗血管炎症或内皮功能紊乱药物中的应用。
为解决本发明的技术问题，提供如下技术方案：
本发明技术方案的第一方面是提供如式(Ⅰ)所示的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备预防和/或治疗血管炎症药物中的应用，
其中，所述的血管炎症包括急性血管炎症或慢性血管炎症；所述的慢性血管炎症包括高脂血症伴随的血管炎症。
本发明技术方案的第二方面是提供如式(Ⅰ)所示的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备预防和/或治疗血管内皮功能紊乱药物中的应用，
其中，所述的血管内皮功能紊乱包括高脂血症、动脉粥样硬化、高血压、冠心病、肥胖、胰岛素抵抗或2型糖尿病伴随的血管内皮功能紊乱。
本发明所述的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷通过抑制血管内白细胞-内皮细胞炎症反应，提高血管内皮型一氧化氮合酶活性，增加NO的生成，从而改善内皮功能障碍及其相关疾病。
本发明技术方案的第三方面是提供一种药物组合物在制备预防、缓解或治疗血管炎症或内皮功能紊乱药物中的应用，其特征在于，所述的药物组合物包含式(Ⅰ)所述的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷和药学上可接受的载体，
其中，所述的血管炎症包括急性血管炎症或慢性血管炎症；所述的血管内皮功能紊乱包括高脂血症、动脉粥样硬化、高血压、冠心病、肥胖、胰岛素抵抗或2型糖尿病伴随的血管内皮功能紊乱。
进一步的，所述的慢性血管炎症包括高脂血症伴随的血管炎症。
该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。
本发明所述药物组合物的剂型为片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或各种微粒给药系统。
有益的技术效果：
三乙酰基-3-羟基苯基腺苷可以减轻血管炎症和提高内皮型一氧化氮合酶活性，改善血管内皮功能紊乱或其相关疾病，该作用独立于其降脂作用，即和该化合物的降脂作用没有相关性。
附图说明
图1 IMM-H007抑制由TNF-α诱导急性小鼠血管内炎症反应
图2 IMM-H007减轻高脂喂养ApoE-/-小鼠血管炎症反应
图3 IMM-H007对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响
图4 IMM-H007对ApoE-/-小鼠血清炎症因子TNF-α、VCAM-1的影响
图5 IMM-H007对ApoE-/-小鼠肠系膜微血管内皮功能的影响
图6 IMM-H007对ApoE-/-小鼠主动脉血管内皮功能的影响
图7 IMM-H007通过AMPK-eNOS途径改善内皮功能
图8 IMM-H007减少ApoE-/-小鼠动脉斑块
图9 IMM-H007改善Ob/Ob肥胖小鼠微血管内皮功能
具体实施方式
下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
实施例1：三乙酰基-3-羟基苯基(IMM-H007)抑制小鼠内皮功能紊乱早期血管内炎症反应
1.IMM-H007抑制由TNF-α诱导的急性小鼠血管炎症(急性炎症模型)
实验材料及仪器
IMM-H007(中国医学科学院药物所自主研制)、盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司)、A769662(上海瀚香生物科技有限公司)、Murine TNF-α(Peprotech,INC)、Rhodamine-6G(sigma)、Pentobarbital Sodium(Serva)、羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司)；动态可视化微血管研究系统(Gene&Ⅰ-SMC1)
动物及实验设计
SPF级野生型(Wild Type，WT)C57BL/6J小鼠(雄性，6-8周龄，18-20g)购自北京华阜康生物科技有限公司。C57BL/6J小鼠60只按体重随机分为6组，分别为空白对照组、模型对照组、IMM-H007组、阳性对照AMPK激动剂组二甲双胍、A769662组及阿托伐他汀组，分别灌胃给予生理盐水、IMM-H007(100mg/kg)，二甲双胍(260mg/kg)，阿托伐他汀(lipitor,10mg/kg)，腹腔注射A769662(30mg/kg，口服难以吸收)，连续给药7天，第8天，除空白对照组腹腔注射生理盐水外，其它各组均腹腔注射TNF-α(0.3μg/只)诱导血管内急性炎症产生，注射TNF-α4小时后，视神经血管丛静脉注射0.05％Rhodamine-6G 100μl荧光标记白细胞。戊巴比妥钠麻醉小鼠，将小鼠右侧卧固定于观察台上，沿腹腔剪开一小口，将肠系膜血管床轻轻拉出，固定小鼠小肠于观察视窗，打开显微镜，从低倍镜下找到清晰的三阶肠系膜静脉，然后调整至20倍高倍镜下观察，调整亮度及焦距最佳后，关闭白光，打开荧光，采用动态可视化微血管研究系统(Gene&Ⅰ-SMC1)ToupView软件采集各血管段1min白细胞运动视频。白细胞运动速率与白细胞-内皮细胞粘附数量反应了血管内炎症情况，是内皮功能紊乱的早期标志。
检测指标
(1)白细胞运动速率(白细胞运动速率减慢，反应血管内发生了炎症反应，给予相应药物后观察给药后白细胞运动速率的变化而反应药物对炎症反应的抑制作用。)：每只小鼠选择三段肠系膜小静脉观察，采用image pro 6.0分析白细胞运动速率，每段观察视野选择至少3个观察点，每只小鼠最终至少统计9个观察点，求取平均值，计算出白细胞平均运动速率。
(2)白细胞-内皮细胞粘附数量(白细胞粘附数量增多反应了血管内炎症反应加重，可能引起内皮功能障碍)：每段血管选择200μm观察白细胞粘附数量(30秒内粘附在内皮细胞不动即为粘附)。
数据统计
实验结果以平均值Χ±SD表示。采用Graphpad Prism软件进行t-student检验，组间差异进行one way-ANOVA参数方差分析或非参数LSD-t法检验。P<0.05表示有统计学差异，P<0.01有显著差异。
实验结果
由炎症因子如TNF-α引起血管内白细胞运动速率减慢，白细胞-内皮细胞粘附数量增加是引起内皮功能紊乱的重要诱因，内皮功能紊乱会加重血管损伤。结果表明，与正常对照组相比，腹腔注射TNF-α(0.3μg/只)4小时后血管内急性炎症产生，模型组白细胞运动速率减慢，白细胞粘附数量增加。给予IMM-H007(100mg/kg)后，与模型组相比，白细胞运动速率显著加快，内皮细胞粘附数量显著降低，说明IMM-H007可以减轻由炎症因子TNF-α诱导的血管内炎症反应(结果见表1、图1)
表1 IMM-H007抑制由TNF-α诱导急性小鼠血管内炎症反应
####P＜0.0001与正常对照组比；＊＊＊P＜0.001，＊＊＊P＜0.0001与模型对照组比
2.IMM-H007抑制高脂喂养ApoE-/-小鼠血管内炎症反应(慢性炎症模型)
实验材料及仪器
IMM-H007(中国医学科学院药物所自主研制)、盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司)、A769662(上海瀚香生物科技有限公司)、Rhodamine-6G(sigma)、Pentobarbital Sodium(Serva)、羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司)、MouseTNF-αELISA Kit(Andy gene)、Mouse VCAM-1ELISA Kit(Andy gene)；动态可视化微血管研究系统(Gene&Ⅰ-SMC1)、BioTeK Epoch酶标仪、
动物及实验设计
C57BL/6背景的ApoE-/-小鼠(雄性，6-8周龄，18-20g)及C57BL/6小鼠购自中国医学科学院动物研究所(北京华阜康生物科技股份有限公司)。动物适应性喂养1周后，按照体重随机分为四组：模型对照组、A769662(30mg/kg，ip)、二甲双胍(260mg/kg)IMM-H007(100mg/kg)给药组，每组7只，给予高脂饲料(78.6％基础饲料，10％猪油，1.00％胆固醇，10％蛋黄粉，0.4％胆盐)，同时按照0.1ml/10g体重灌胃给药，连续给药喂养8周。戊巴比妥钠(60mg/kg body weight)麻醉，将小鼠右侧卧固定于观察台上，沿腹腔剪开一小口，将肠系膜血管床轻轻拉出，固定小鼠小肠于观察视窗，打开显微镜，从低倍镜下找到清晰的三阶肠系膜静脉，然后调整至20倍高倍镜下观察，调整亮度及焦距最佳后，关闭白光，打开荧光，可见血管内白细胞运动，采用动态可视化微血管研究系统(Gene&Ⅰ-SMC1)ToupView软件采集各血管段1min白细胞运动视频。采用image pro 6.0分析白细胞运动速率及白细胞内皮细胞粘附数量。
检测指标
(1)白细胞运动速率(2)白细胞-内皮细胞粘附数量
数据统计
实验结果以平均值Χ±SD表示。采用Graphpad Prism软件进行t-student检验，组间差异进行one way-ANOVA参数方差分析或非参数LSD-t法检验。P<0.05表示有统计学差异，P<0.01有显著差异。
实验结果
高脂饮食使血中低密度脂蛋白胆固醇增加，刺激内皮细胞引起炎症反应，导致白细胞运动速率减慢、白细胞-内皮细胞粘附数量增加，引起内皮功能紊乱，进而可能导致动脉粥样硬化的发生。给予IMM-H007(100mg/kg)后，与模型组相比，白细胞运动速率显著加快，内皮细胞粘附数量显著降低，说明IMM-H007显著抑制高脂喂养ApoE-/-小鼠白细胞-内皮细胞炎症反应，减轻由高脂引起的血管炎症(结果见表2、图2)。
表2 IMM-H007减轻高脂喂养ApoE-/-小鼠血管炎症反应
＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001与模型对照组比
实施例2：三乙酰基-3-羟基苯基(IMM-H007)改善血管内皮功能
实验材料与仪器
IMM-H007(中国医学科学院药物所自主研制)、A769662(上海瀚香生物科技有限公司)、盐酸二甲双胍片(中美上海施贵宝制药有限公司)、、Pentobarbital Sodium(Serva)、羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司)、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、碳酸氢钠、葡萄糖、EDTA、乙酰胆碱(sigma)、硝普钠(VETEC)、R-(-)去氧肾上腺素(北京百灵威科技有限公司)、Mouse TNF-αELISA Kit(Andy gene)、Mouse VCAM-1ELISA Kit(Andy gene)、甘油三酯测定试剂盒、总胆固醇测定试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)、游离脂肪酸检测试剂盒(日本积水医疗株式会社)；分析天平、Olympus SZ51体式显微镜、摇床、摊片机、离体微血管压力-直径测量灌流系统(Pressure Myography system-120CP)、精细显微手术镊子、精细显微手术剪刀、95％O2与5％CO2混合气、手术操作硅胶盘。
动物及实验设计
C57BL/6背景的ApoE-/-小鼠(雄性，6-8周龄，18-20g)及C57BL/6小鼠购自北京华阜康生物科技股份有限公司。动物适应性喂养1周后，按照体重随机分为七组：正常对照组、模型对照组、IMM-H007低、中、高给药组(50、100、200mg/kg)，每组8只，给予高脂饲料(78.6％基础饲料，10％猪油，1.00％胆固醇，10％蛋黄粉，0.4％胆盐)，同时按照0.1ml/10g体重灌胃给药，连续给药喂养8周，建立动脉粥样硬化模型。
检测指标：
(1)IMM-H007对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响：总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)、游离脂肪酸(FFA)
按试剂盒说明书操作
(2)IMM-H007对ApoE-/-小鼠血清炎症因子TNF-α、VCAM-1的影响
按试剂盒说明书操作
(3)IMM-H007对ApoE-/-小鼠肠系膜微血管内皮功能的影响
按说明书配置PSS及KPSS溶液，当日使用当日配置。实验开始之前先取出PSS溶液，预充氧20min左右。高脂喂养同时给药10周的ApoE-/-小鼠，戊巴比妥钠麻醉，将小鼠仰卧固定，沿正中线打开腹腔，分离肠系膜血管床，置于预通氧20分钟的PSS缓冲液中，体视显微镜下，仔细分离一段约3mm长的三阶肠系膜小动脉。首先将血管固定于P1端玻璃插管，扎紧线圈。注意近心端连接在P1端，固定P2端血管，扎紧线圈。将Chamber放置于显微镜载物台上，查收Chamber与Interface之间的数据连接线。盖上浴槽盖，打开通氧。排除管道内空气。显微镜下找到血管图像，然后将显微镜调至相机模式。(目镜边的旋钮旋转至graph即可)。打开MyoVIEW软件。点击Camera窗口Capture开始显示血管图像。平衡血管从10mmHg缓慢升至60mmHg，每一步为300s。待平衡程序全部结束之后，排掉浴槽内的溶液，使用37℃预热的KPSS溶液对血管进行刺激(10ml)2min，观察血管收缩变化，然后使用PSS溶液洗脱血管至基线。60mmHg 37℃平衡45分钟，期间每20分钟换液一次。开始实验：观察给予2μM去氧肾上腺素预收缩后，10-10～10-5M Ach引起的血管舒张反应，评价药物对血管内皮功能的影响。实验结束后，换新鲜37℃预热的PSS缓冲液平衡30min，给予2μM去氧肾上腺素预收缩后10-10～10-3M硝普钠引起的血管舒张反应，评价药物对血管平滑肌功能的影响。LD1为给予不同浓度Ach或硝普钠后血管舒张后直径，LD2为给予去氧肾上腺素预收缩后的血管直径，LD3表示不加任何刺激剂时血管的最大舒张直径。
去氧肾上腺素预收缩后给予Ach和硝普钠的舒张反应以血管外径增加百分率表示：％Relaxation＝(LD1-LD2)/(LD3-LD2)×100。
(4)IMM-H007对ApoE-/-小鼠胸主动脉内皮功能的影响
小鼠麻醉，迅速胸取胸主动脉，仔细剥除周围组织，剪成3mm左右长的血管环，小心将血管环挂到张力换能器上，给予初张力0.5g，平衡90分钟以上。在平衡过程中，每20分钟换液一次，保持通气，维持温度在37℃。平衡1小时左右，用饱和KC1(60mM)刺激两次以检测血管是否具有活性。血管收缩稳定后，立即洗掉KCl。最后一次换液后，平衡20分钟，给予苯氧肾上腺素1μM刺激血管收缩，血管收缩稳定后，累积给予乙酰胆碱(Ach，1×10-10～1×10-5)及硝普钠(SNP，10-10～10-4M)记录血管舒张曲线。
血管舒张率＝[PE引起的血管张力(g)－加ACh后血管的张力(g)]÷[PE收缩引起的张力(g)-血管基础张力(g)]×100％。
(5)IMM-H007对改善内皮功能的机制探讨
Western Blotting分析检测AMPK、pAMPK、peNOS、eNOS、Caveolin-1蛋白表达量，测定是血清中总一氧化氮合酶活力
(6)IMM-H007对ApoE-/-小鼠斑块面积的影响
主动脉根部油红O染色及主动脉全长油红O染色，病理图片采用Photoshop、ImageJ、Image-Pro Plus软件分析，病理学分级数据使用卡方检验进行统计分析，经比较P<0.05，P<0.01具有统计学差异。
数据统计
实验结果以平均值Χ±SD表示。采用Graphpad Prism软件进行t-student检验，组间差异进行one way-ANOVA参数方差分析或非参数LSD-t法检验。P<0.05表示有统计学差异，P<0.01有显著差异。
实验结果
(1)IMM-H007对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响
结果表明，给予高脂饲料喂养8周后，模型对照组与正常对照组比较总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇及游离脂肪酸均升高，高密度脂蛋白胆固醇降低。IMM-H007给药50mg/kg剂量组对总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、游离脂肪酸均、高密度脂蛋白胆固醇均无影响；IMM-H007给药100mg/kg剂量组对胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇无影响，
对游离脂肪酸有一定程度的降低；IMM-H007给药200mg/kg剂量组与模型组比较，总胆固醇、低密度脂蛋白、游离脂肪酸降低(结果见表3，图3)
表3 IMM-H007对ApoE-/-小鼠血脂水平的影响
#P＜0.05，##P＜0.01，##＃P＜0.001，###＃P＜0.0001与正常对照照组比；＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001与模型对照组比
(3)IMM-H007对ApoE-/-小鼠血清炎症因子TNF-α、VCAM-1的影响
结果表明，与模型组比较，IMM-H007的50、100、200mg/kg剂量均可减少ApoE-/-小鼠血清VCAM-1的水平，IMM-H007的50mg/kg剂量减少ApoE-/-小鼠血清TNF-α的表达，说明，给予IMM-H007可减轻血清中相关炎症因子的水平(结果见表4，图4)。
表4 IMM-H007对ApoE-/-小鼠血清炎症因子TNF-α、VCAM-1的影响
＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001与模型对照组比
(3)IMM-H007对ApoE-/-小鼠肠系膜微血管内皮功能的影响
结果表明，预给予2μM去氧肾上腺素预收缩血管后，给予不同浓度梯度的(10-10～10-5M)乙酰胆碱引起的血管舒张反应，可以评价药物对血管内皮功能的影响。与模型对照组相比，IMM-H007给药50mg/kg剂量组在不影响血脂水平的情况下，可显著改善由高脂引起的微血管内皮功能紊乱；IMM-H007给药100mg/kg剂量在不影响胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇的情况下可显著改善乙酰胆碱引起的内皮依赖性舒张反应，改善内皮功能紊乱，结果说明，IMM-H007可独立于其降脂作用而改善微血管内皮功能紊乱。(结果见表5、6及图5)
表5 IMM-H007对ApoE-/-小鼠微血管乙酰胆碱内皮依赖性舒张功能的影响
＊P＜0.05，＊＊P＜0.01模型对照组比
表6 IMM-H007对ApoE-/-小鼠微血筒硝普钠非内皮依赖性舒张功能的影响
(4)IMM-H007对ApoE-/-小鼠胸主动脉内皮功能的影响
结果表明，预给予1μM去甲肾上腺素预收缩血管后，给予不同浓度梯度的(10-10～10-5M)乙酰胆碱引起的血管舒张反应，可以评价药物对血管内皮功能的影响，与模型对照组相比，IMM-H007给药50mg/kg剂量组在不影响血脂水平的情况下，可显著改善由高脂引起的主动脉血管乙酰胆碱的内皮依赖性舒张反应，改善内皮功能紊乱，说明IMM-H007可独立于其降脂作用而改善血管内皮功能紊乱(结果表7、8及图6)。
表7 IMM-H007对ApoE-/-小鼠主动脉血管乙酰胆碱内皮依赖性舒张功能的影响
＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001与模型对照组比
表8 IMM-H007对ApoE-/-小鼠主动脉血管硝普钠非内皮依赖性舒张功能的影响
(5)IMM-H007通过AMPK-eNOS途径改善内皮功能
采用Western Blotting分析检测AMPK、pAMPK、peNOS、eNOS、Caveolin-1蛋白表达量，测定是血清中总一氧化氮合酶活力，分析IMM-H007独立于降血脂作用改善内皮功能的可能机制。实验发现：IMM-H007主要通过激活AMPK-eNOS通路，提高了一氧化氮合酶活力，增加NO生成改善血管功能(结果见图7)。
(6)IMM-H007减少ApoE-/-小鼠斑块面积
AMPK-eNOS蛋白水平升高，血管内皮功能紊乱的改善有利于缓解动脉粥样硬化的发生和发展。本研究采用动脉粥样硬化模型ApoE-/-小鼠，给予高脂饲料喂养10周，观察主动脉全长及动脉根部斑块堆积，进而观察IMM-H007对动脉粥样硬化的作用。实验结果发现：IMM-H007能够显著减少主动脉弓部和主动脉全长斑块的沉积，主动脉根部切片染色发现斑块部位脂质堆积减少、表明IMM-H007改善内皮功能紊乱可缓解动脉粥样硬化的进展(结果见表9及图8)
表9 IMM-H007减少ApoE-/-主动脉全长及主动脉根部斑块面积
＊P＜0.05，＊＊P＜0.01，＊＊＊P＜0.001与模型对照组比
实施例3三乙酰基-3-羟基苯基(IMM-H007)改善Ob/Ob肥胖小鼠血管内皮功能实验材料与仪器
IMM-H007(中国医学科学院药物所自主研制)、羧甲基纤维素钠(国药集团化学试剂有限公司)、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、碳酸氢钠、葡萄糖、EDTA、乙酰胆碱(sigma)、硝普钠(VETEC)、R-(-)去氧肾上腺素(北京百灵威科技有限公司)、甘油三酯测定试剂盒、总胆固醇测定试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒、低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司)、游离脂肪酸检测试剂盒(日本积水医疗株式会社)；胰岛素、葡萄糖、罗氏血糖测定试纸、分析天平、Olympus SZ51体式显微镜、摇床、摊片机、离体微血管压力-直径测量灌流系统(Pressure Myography system-120CP)、精细显微手术镊子、精细显微手术剪刀、95％O2与5％CO2混合气、手术操作硅胶盘。
动物及实验设计
Ob/Ob肥胖小鼠(雄性，4周龄)小鼠购自南京模式动物研究所。动物适应性喂养1周后，按照体重随机分为两组：模型对照组、IMM-H007组(400mg/kg)，每组10只，给予普通饲料喂养，同时按照0.1ml/10g体重灌胃给药，连续给药喂养9周。记录摄食、体重的变化，测定血脂、血糖等常规生化指标，9周取材后，每组取3只动物，取肠系膜小动脉测定血管内皮功能，方法与实施例2相同。
检测指标：(1)常规生化指标(2)血管内皮功能
数据统计
实验结果以平均值Χ±SD表示。采用Graphpad Prism软件进行t-student检验，组间差异进行one way-ANOVA参数方差分析或非参数LSD-t法检验。P<0.05表示有统计学差异，P<0.01有显著差异。
实验结果
结果表明，Ob/Ob肥胖小鼠普通饲料喂养9周后，血糖与胰岛素水平测定表明形成胰岛素抵抗模型，胰岛素抵抗是导致内皮功能紊乱的重要诱因，因此，我们测定9周Ob/Ob小鼠的微血管内皮功能，研究发现：IMM-H007(400mg/kg)剂量组可以改善微血管内皮功能(实验结果见表10、11、12及图9)。
表10 IMM-H007对Ob/Ob肥胖小鼠生化指标的影响
＊P＜0.05，＊＊＊P＜0.001与模型组相比
表11 IMM-H007对Ob/Ob肥胖小鼠微血管乙酰胆碱内皮依赖性舒张功能的影响
＊P＜0.05，与模型对照组比
表12 IMM-H007对Ob/Ob肥胖小鼠微血管硝普钠非内皮依赖性舒张功能的影响

Claims (10)

1.如式(Ⅰ)所示的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备预防和/或治疗血管炎症药物中的应用，
2.如式(Ⅰ)所示的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷在制备预防和/或治疗血管内皮功能紊乱药物中的应用，
3.根据权利要求1的应用，其特征在于，所述的血管炎症包括急性血管炎症或慢性血管炎症。
4.根据权利要求3的应用，其特征在于，所述的慢性血管炎症包括高脂血症伴随的血管炎症。
5.根据权利要求2的应用，其特征在于，所述的血管内皮功能紊乱包括高脂血症、动脉粥样硬化、高血压、冠心病、肥胖、胰岛素抵抗或2型糖尿病伴随的血管内皮功能紊乱。
6.一种药物组合物在制备预防、缓解或治疗血管炎症或内皮功能紊乱药物中的应用，其特征在于，所述的药物组合物包含式(Ⅰ)所述的三乙酰基-3-羟基苯基腺苷和药学上可接受的载体，
7.根据权利要求6的应用，其特征在于，所述的血管炎症包括急性血管炎症或慢性血管炎症；所述的血管内皮功能紊乱包括高脂血症、动脉粥样硬化、高血压、冠心病、肥胖、胰岛素抵抗或2型糖尿病伴随的血管内皮功能紊乱。
8.根据权利要求7的应用，其特征在于，所述的慢性血管炎症包括高脂血症伴随的血管炎症。
9.根据权利要求6-8任一项的应用，其特征在于，所述的药物组合物为片剂、胶囊、丸剂、注射剂。
10.根据权利要求5-8任一项的应用，其特征在于，所述的药物组合物为缓释制剂、控释制剂或各种微粒给药系统。
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