CN109481424A - 异甘草素、药物组合物及其在治疗糖尿病肾病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种改善炎症和氧化应激反应的药物组合物，所述组合物含有异甘草素；还提供了异甘草素在制备治疗慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病药物中的用途及异甘草素在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。异甘草素治疗糖尿病肾病无毒副作用，费用低，联合用药安全性高；有助于延缓病情进展恶化。
Description
技术领域
本发明涉及异甘草素或含有异甘草素的药物组合物在治疗糖尿病或高血糖导致的器官损害的治疗用途，特别涉及异甘草素在制备治疗糖尿病或高血糖诱导的肾脏损伤的药物中的用途。
背景技术
随着社会的发展，糖尿病(Diabetes Mellitus,DM)患病率显著增加，已成为影响人类健康的流行性疾病。糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病患者的主要微血管并发症之一，最终导致糖尿病的高致死率和高致残率。该病在代谢紊乱及微血管病变的基础上引发为肾小球滤过率减少，然后出现微量白蛋白尿、动脉血压升高、蛋白尿和体液潴留，最终导致肾衰竭，预后不良。
然而，目前临床上针对糖尿病肾病的治疗手段有限，主要依靠控制血糖、降血压、降尿蛋白等手段控制病程，并不能完全阻止糖尿病肾病患者向肾功能衰竭的方向发展。虽然DN是多因素综合作用引起的疾病，涉及多元醇代谢亢进、蛋白激酶C(PKC)激活、蛋白质非酶糖化及其终产物(AGEs)形成增加等多种因素，但是近年越来越多的证据显示炎症反应和氧化应激损伤与DN的发生发展密切相关。一般认为，高血糖激活了组织或胞内的损伤和应激相关信号通路，其中慢性炎症反应成为糖尿病并发症的重要病理因素之一。
甘草植物种G.uralensis(乌拉尔草)是日本最常用的植物之一，其中已经分离出各种成分，包括三萜皂苷，类黄酮，异黄酮和查耳酮。
异甘草素(Isoliquiritigenin，ISL)是乌拉尔草根中的另一种成分，是具有查尔酮结构的类黄酮。
异甘草素的分子量为256.25，结构式如下：
目前，异甘草素常常用于化妆品和食品添加剂中，对于开发和应用还很不成熟。它具有多种生物学特性，包括护肝、保护心血管和抗肿瘤生长活性等，目前对其生物学活性、药理活性和临床用途对于开发异甘草素的应用、发现新的医药化合物和适应症具有重要意义。
因此，本发明提供了异甘草素和含有异甘草素的组合物及其在治疗糖尿病肾病中的应用。
发明内容
为了解决上述问题，本发明人进行了锐意研究，结果发现：异甘草素能够治疗慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病，并通过抑制炎症反应和氧化应激反应缓解和治疗糖尿病肾病引起的病理性损伤，具有制备治疗糖尿病肾脏病的用途，可以单独地或者作为药物组合物中的有效活性成分进行使用，从而完成了本发明。
本发明的目的在于提供以下目的：
改善炎症和氧化应激反应的药物组合物，所述组合物含有异甘草素。
所述炎症为慢性炎症性疾病，所述氧化应激反应为与氧化应激性损伤相关的疾病，优选高糖介导的慢性炎症性疾病，更优选糖尿病肾病。
异甘草素单独使用，或作为活性成分与其他辅料共同使用；异甘草素的使用剂量为10-300mg/kg/d，优选为20-150mg/kg/d。
异甘草素以溶于溶剂的溶液形式使用；
异甘草素的浓度为0.05-4g/ml，优选为0.1-3.5g/ml，更优选为0.1-3g/ml。
异甘草素以固体形式使用，优选作为活性成分与辅料固态混合，所述辅料优选为填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种，异甘草素相对辅料的用量为1％-50％，优选为1％-40％，更优选为1％-30％，以重量计。
异甘草素在制备治疗慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病的药物中的用途。
进一步地，异甘草素在制备治疗高糖介导的慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病的药物中的用途。
本发明还提供了异甘草素在制备治疗糖尿病肾病的药物中的用途。
优选地，异甘草素在制备治疗慢性炎症和氧化应激引起的糖尿病肾病的药物中的用途。
进一步地，异甘草素在制备治疗高血糖或糖尿病引起的糖尿病肾病的药物中的用途。
根据本发明提供的改善炎症和氧化应激反应的药物组合物或异甘草素在制备治疗糖尿病或高血糖诱导的肾脏损伤的药物中的用途，具有以下有益效果：
(1)异甘草素可以单独地或作为活性成分治疗糖尿病肾病，无毒副作用，费用低，联合用药安全性高；
(2)异甘草素可以同时改善炎症和氧化应激反应，降低和缓解引起糖尿病肾病的病理因素的发病和进程，从而发挥治疗糖尿病肾病的作用，使用异甘草素治疗糖尿病肾病疗效好、性价比高；
(3)使用异甘草素治疗糖尿病肾病有助于延缓病情进展恶化，显著减少病死率和病残率，提高生存质量；治疗方法可操作性强，费用低，可以显著降低患者及医疗机构的诊疗费用。
附图说明
图1示出实验例1中组织染色图：A为肾脏组织HE染色效果图；B为肾脏结缔组织Sirus染色效果图；D为肾脏结缔组织Masson染色效果图；F为肾脏组织PAS染色效果图；H为肾脏组织TUNEL细胞凋亡图；
图2示出实验例1中检测结果统计图：C为图1中B的统计图；E为图1中D的统计图；G为图1中F的统计图；I为图1中H的统计图；
图3示出实验例2中组织免疫组化检测结果：A是肾脏组织中炎症因子TNF-α的效果图；A’为A中方框部分的放大图；C是肾脏组织中巨噬细胞标志物(F4/80)的效果图；E是肾脏中活性氧(ROS)的效果图；G是肾脏组织的氧化应激代谢产物3-NT的效果图；G’为G中方框部分的放大图；
图4示出实验例2中检测结果统计图：B为图3中A的统计图；D为图3中C的统计图；F为图3中E的统计图；H为图3中G的统计图；
图5示出实验例3中肾脏细胞检测结果图：A、B、C分别为NRK-52E肾脏细胞使用RT-qPCR法检测炎症因子TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA水平的表达量；D、E、F分别是NRK-52E肾脏细胞中MAPKs信号通路的JNK、p38和ERK的Western blot结果图；G、H分别为使用RT-qPCR法检测NRK-52E肾脏细胞中氧化应激通路中Nrf2和HO-1分子在mRNA水平的表达量；I为Nrf2和HO-1分子的Western blot结果图。
具体实施方式
下面通过对本发明进行详细说明，本发明的特点和优点将随着这些说明而变得更为清楚、明确。
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“第一”、“第二”、“第三”和“第四”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
以下详述本发明。
针对引起糖尿病肾病(DN)的病理性慢性炎症，我们发现，炎症信号通路中的MAPKs(丝裂原活化蛋白激酶)在介导引起DN在内的慢性炎症中发挥了关键作用。
MAPKs中包括4个主要亚族：细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulatedprotein kinases，ERK)、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase，JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和细胞外调节蛋白激酶5(ERK5)。其中ERK、JNK和p38MAPK在DN的发生发展过程中扮演了重要角色。
研究还发现，氧化应激反应也是引起糖尿病肾病的重要因素，其中，Nrf2(NF-E2-related factor 2)是细胞氧化应激反应中的关键因子，受Keap1蛋白的调控，通过与抗氧化反应元件ARE(antioxidant response element)相互作用，调节抗氧化蛋白和II相解毒酶的表达。其中，NF-κB和Nrf2在更是在LPS(脂多糖)诱导的炎症信号转导和氧化应激过程中发挥了重要的调控作用。
通过细胞试验(体外试验)发现，对于高糖(HG)刺激的肾脏细胞，炎症因子水平显著增高，炎症通路重要信号分子MAPKs激活；氧化应激通路的重要信号分子Nrf2及HO-1活化。给与ISL治疗后能显著改善炎症与氧化应激信号通路。
因而，ISL可以用于治疗炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病；优选可以治疗高糖介导的肾脏组织炎症及氧化应激性损伤疾病；特别是可以用于改善和治疗糖尿病或高血糖介导的肾脏炎症及氧化应激性损伤疾病。
另外，通过体内研究进一步发现，STZ(链脲佐菌素)诱导的1型糖尿病小鼠的损伤肾脏组织在苏木素-伊红(HE)染色、天狼星红(Sirus)染色、马松(Masson)染色和PAS(Periodic Acid-Schiff stain)染色和TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)染色中显著可见损伤性病理改变。当单独给予异甘草素或给予含有异甘草素作为活性成分的组合物进行治疗后，能够显著抑制糖尿病所诱发的肾脏组织病理损伤性改变。
不受任何理论的束缚，本发明人认为，异甘草素中具有酚羟基官能团，可能具有抗炎抗氧化的作用，而糖尿病肾病一般伴随慢性炎症的病理因素，因此，异甘草素单独地或以其为活性成分的组合物作为药物能够在糖尿病肾病的治疗中发挥作用，并带来明显的治疗效果。
另外，通过TNFα免疫组化染色和F4/80荧光染色，发现异甘草素能显著抑制肾脏组织炎症反应及巨噬细胞浸润。
我们进一步对肾脏组织进行DHE染色(二氢乙锭超氧化物阴离子荧光探针)和3-NT(3-硝基酪氨酸)荧光染色，发现异甘草素能显著抑制肾脏组织氧化应激反应。
可见，ISL还能降低糖尿病或高血糖诱导的体内肾脏炎症及氧化应激反应，特别是在治疗糖尿病肾病中具有潜在疗效。
因此，本发明提供了一种改善炎症和氧化应激反应的药物组合物，所述组合物含有异甘草素。
其中，所述炎症为慢性炎症性疾病，所述氧化应激反应为与氧化应激性损伤相关的疾病，优选高糖介导的慢性炎症性疾病，更优选糖尿病肾病。
在使用组合物治疗时，异甘草素单独使用，或作为活性成分与其他辅料共同使用。异甘草素的使用剂量为10-300mg/kg/d，优选为20-150mg/kg/d，更优选为20-100mg/kg/d。
所述辅料为药学可接受的用于辅助或改善异甘草素使用或制备的非活性物质，包括但不限于溶剂、增溶剂和赋形剂中的一种或多种。
所述溶剂为水，优选为注射用水或去离子水；
所述增溶剂包括乙醇、羧甲基纤维素钠、十二烷基硫酸钠、聚乙二醇、吐温、丙二醇、异丙醇、甘油、泊洛沙姆中的一种或组合。
异甘草素可以以溶于溶剂的溶液形式使用，优选所述溶剂为去离子水，在增溶剂的作用下，异甘草素的浓度为0.05-4g/ml，优选为0.1-3.5g/ml，更优选为0.1-3g/ml。
在一种优选的实施方式中，所述异甘草素溶解于含有羧甲基纤维素钠的水中使用；更优选口服使用。
所述增溶剂的用量可以为溶剂质量的1％-50％，优选为1％-40％，最优选为1％-30％。
所述组合物中，异甘草素单独地，或作为活性成分与其他辅料共同地，以溶液形式使用时，可以制备为溶液剂、混悬剂、泡腾剂或冲剂后使用；按照本领域常规方法制备。
异甘草素可以以固体形式使用，优选作为活性成分与固态辅料混合，所述固态辅料优选为赋形剂，所述赋形剂包括填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。
其中，所述填充剂包括淀粉、微晶纤维素、蔗糖、乳糖、磷酸二氢钙中的一种或组合；所述粘合剂包括淀粉浆、羧甲基纤维素、聚维酮、羟丙基纤维素、乙基纤维素中的一种或组合；所述崩解剂包括羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮和海藻酸钠中的一种或组合；所述润滑剂包括微粉硅胶、气态硅胶、滑石粉、硬脂酸镁、聚乙二醇、月桂醇硫酸镁中的一种或组合。
当异甘草素作为活性成分与固态辅料混合使用时，填充剂在总物料中的质量分数为0-80％，优选为5％-80％；粘合剂在总物料中的质量分数为0-50％，优选为1％-40％；崩解剂在总物料中的质量分数为0-80％，优选为1％-70％；润滑剂在总物料中的质量分数为0-30％，优选为1％-20％。
进一步地，异甘草素相对辅料的用量为1％-50％，优选为1％-40％，更优选为1％-30％，以重量计。
所述组合物中，异甘草素单独地，或作为活性成分与其他辅料共同地，以固体形式使用时，可以制备为片剂、胶囊剂、固体分散体或颗粒剂后使用；按照本领域常规方法制备。
所述组合物中，异甘草素单独地或作为活性成分与其他辅料共同地，口服使用，或者注射使用，优选口服使用。
因此，本发明提供了异甘草素在制备治疗慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病的药物中的用途；另外，ISL可以缓解和治疗由慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病导致的纤维化、细胞凋亡以及心功能不全等疾病，例如扩张性心肌病(DCM)。
其中，ISL可以显著降低糖尿病机体中肾脏细胞的凋亡数目，从而缓解由此导致的纤维化、细胞凋亡以及心功能不全等症状。ISL还可以显著降低糖尿病机体肾脏组织的氧化应激代谢产物3-NT含量。
本发明还提供了ISL在制备治疗糖尿病肾病的药物中的用途；其可以降低和缓解引起糖尿病肾病的病理因素的发病和进程，从而发挥治疗糖尿病肾病的作用。
特别地，本发明还提供了ISL在制备治疗慢性炎症和氧化应激引起的糖尿病肾病的药物中的用途。
使用异甘草素治疗糖尿病肾病有助于延缓病情进展恶化，显著减少病死率和病残率，提高生存质量；治疗方法可操作性强，费用低，可以显著降低患者及医疗机构的诊疗费用。
其中，ISL在治疗糖尿病肾病时可以降低肾脏细胞中炎症因子TNF-α和IL-1β以及趋化因子MCP-1在mRNA水平的表达。
ISL在治疗糖尿病肾病时还可以降低肾脏细胞中MAPKs信号通路的JNK、p38和ERK的磷酸化；
进一步地，ISL在治疗糖尿病肾病时还可以提高肾脏细胞中Nrf-2蛋白和HO-1蛋白的表达。
ISL是一种具有开发前景的抗炎抗氧化药物，单独地或作为药物组合物中的活性成分用于治疗DCM具有潜在的临床价值。另外，ISL通过抑制炎症和氧化应激改善和治疗糖尿病肾脏病，单独应用或者与传统治疗药物联合用药治疗DN，联合用药安全性高。
实验例
实验例1
ISL对STZ诱导的1型糖尿病小鼠脏器并发症的影响
雄性C57BL/6小鼠从温州医科大学动物实验中心获得。小鼠用标准啮齿类动物食物和水饲养在恒温昼夜12-12h节律的动物房内。动物在实验开始前经过大于一周时间的环境适应性生长。
8-10周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组：正常对照组(ctrl组)、糖尿病组(STZ-DM1组)、糖尿病组联合ISL(STZ-DM1+ISL组)处理组(10、20mg/kg/d两个剂量)，灌胃给药；每组8只。
低剂量50mg/kg/d链脲佐菌素腹腔注射，连续注射5天造模1型糖尿病模型，72小时后，血糖仪测定空腹血糖(禁食4-6小时)，血糖值≥12mmol/L时认为1型糖尿病小鼠模型已建立。
按照分组给药或不给药进行饲养，每周监测血糖和体重，连续喂养4个月，处死，取肾脏组织，石蜡包埋肾脏组织各部分，通过HE染色(H&E)、Sirus染色(Sirus red)、Masson染色和PAS染色检测肾脏形态学改变，通过TUNEL技术检测肾脏细胞凋亡改变。结果如图1和图2所示，其中，
图1中A为肾脏组织通过HE染色得到的效果图，可以发现，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏组织结构紊乱和肾小管上皮空泡样变性的比例。
图1中B为肾脏结缔组织通过Sirus染色得到的效果图，图2中C为图1中B的统计图，由图1B和图2C可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏结缔组织的比例。
图1中D为肾脏结缔组织通过Masson染色得到的效果图，图2中E为图1中D的统计图，纵坐标为结缔组织的比例，由图1D和图2E可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏结缔组织的比例。
图1中F为肾脏组织通过PAS染色得到的效果图，图2中G为图1中F的统计图，纵坐标为糖原附着组织的比例，由图1F和图2G可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏组织糖原累积的比例。
图1中H为肾脏组织通过TUNEL技术检测到肾脏细胞凋亡图，图2中I为图1中H的细胞图得到的统计图，其中，横坐标为各个测试组，纵坐标为凋亡细胞数，由图1H和图2I可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏细胞凋亡数，并且随着剂量加大，效果更明显。
在统计图中，**表示相对于正常对照组，p<0.01；***表示相对于正常对照组，p<0.001；###表示相对于糖尿病组，p<0.001。
可以发现，ISL显著缓解STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏组织中炎症，进而可以缓解由此导致的纤维化、细胞凋亡以及心功能不全。
实验例2
取实验例1中获得的肾脏组织，通过免疫组化检测肾脏组织的炎症因子(TNF-α)以及巨噬细胞标志物(F4/80)，通过DHE荧光染料检测肾脏中活性氧(ROS)的产生，通过免疫组化检测氧化应激相关因子(3-NT)。实验数据见图3和图4，其中，
图3中A是通过免疫组化检测肾脏组织的炎症因子TNF-α的效果图，A’为A中方框部分的放大图，图4中B为图3中A的统计图。由图3A、A’和图4B可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏组织的炎症因子TNF-α含量。
图3中C是通过免疫组化检测肾脏组织中巨噬细胞标志物(F4/80)的效果图，图4中D为图3中C的统计图。由图3C和图4D可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏组织中巨噬细胞标志物(F4/80)的含量。
图3中E是通过免疫组化检测肾脏中活性氧(ROS)的效果图，图4中F为图3中E的统计图。由图3E和图4F可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏中活性氧(ROS)含量。
图3中G是通过免疫组化检测肾脏组织的氧化应激代谢产物3-NT的效果图，图G’为图G中方框部分的放大图，图4中H为图3中G的统计图，由图3G、G’和图4H可知，ISL可以显著降低STZ诱导的1型糖尿病小鼠肾脏组织的氧化应激代谢产物3-NT含量。
在统计图中，***表示相对于正常对照组，p<0.001；###表示相对于糖尿病组，p<0.001。
研究发现，ISL显著缓解STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏组织中炎症和氧化应激，因而可以缓解和治疗由此导致的纤维化、细胞凋亡以及心功能不全。
实验例3
ISL可以缓解HG诱导的肾脏细胞炎症反应
采用ISL对HG刺激NRK-52E肾脏细胞中释放炎症因子(TNF-α和IL-1β)与趋化因子(MCP-1)抑制的方法测试了的体外抗炎活性，具体方法如下：
1.2×10^6个NRK-52E肾脏细胞用DMEM培养液培养于37℃，24小时后更新培养液，并加入ISL(终浓度为10及20μM)预处理1小时，再用高糖(HG 33mM葡萄糖)继续处理6小时，收集培养液用RT-qPCR法检测炎症因子TNF-α、IL-1β和MCP-1的mRNA表达量，每个化合物重复测试3次，计算平均值和误差值。
采用ISL对HG刺激NRK-52E肾脏细胞中炎症信号通路(MAPKs)激活抑制以及Nrf2信号通路激活的方法测试了ISL的体外抗炎抗氧化活性，具体方法如下：
分别用1.2×10^6个NRK-52E肾脏细胞用DMEM培养液培养于37℃，24小时后更新培养液，并加入ISL(终浓度为10及20μM)预处理1小时，再用高糖(HG 33mM葡萄糖)继续处理1小时，收集培养液用Western blot法检测MAPKs的JNK，p38和ERK磷酸化，每个化合物重复测试3次，计算平均值和误差值；
分别用1.2×10^6和5×10^5个NRK-52E肾脏细胞用DMEM培养液培养于37℃，24小时后更新培养液，并加入ISL(终浓度为10及20μM)预处理1小时，再用高糖(HG 33mM葡萄糖)继续处理12小时，收集培养液用Western blot法(细胞浓度为1.2×10^6个)和RT-qPCR法(细胞浓度为5×10^5个)检测Nrf2蛋白及其下游抗氧化蛋白HO-1在mRNA水平的表达量，每个化合物重复测试3次，计算平均值和误差值。
结果如图5所示，其中，
图5中A～C为NRK-52E肾脏细胞中炎症因子(TNF-α和IL-1β)和趋化因子(MCP-1)在mRNA水平的表达量；ISL可以显著降低高糖诱导的NRK-52E肾脏细胞炎症因子(TNF-α和IL-1β)和趋化因子(MCP-1)在mRNA水平的表达量。
图5中D～F是NRK-52E肾脏细胞中MAPKs信号通路的JNK，p38和ERK的Western blot结果图；ISL可以显著降低高糖诱导的NRK-52E肾脏细胞MAPKs信号通路的JNK，p38和ERK的磷酸化表达量。
图5中G～H为NRK-52E肾脏细胞中氧化应激通路中Nrf2和HO-1分子在mRNA水平的表达量；ISL可以显著增加高糖诱导的NRK-52E肾脏细胞氧化应激相关因子Nrf-2和HO-1分子在mRNA水平的表达量。
图5中I为Nrf-2和HO-1分子的Western blot结果图，可见ISL可以有效激活Nrf-2信号通路，并激活其下游的HO-1抗氧化蛋白的表达。
由图5可知：ISL可以有效抑制HG诱导的NRK-52E肾脏细胞炎症信号通路MAPKs分子磷酸化，并抑制因此导致的炎症因子TNF-α和IL-1β以及趋化因子MCP-1的释放。ISL可以有效激活Nrf2信号通路，并激活其下游的HO-1抗氧化蛋白的表达。
以上结合具体实施方式和范例性实例对本发明进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本发明的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本发明精神和范围的情况下，可以对本发明技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本发明的范围内。本发明的保护范围以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.改善炎症和氧化应激反应的药物组合物，所述组合物含有异甘草素。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述炎症为慢性炎症性疾病，所述氧化应激反应为与氧化应激性损伤相关的疾病，优选高糖介导的慢性炎症性疾病，更优选糖尿病肾病。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，异甘草素单独使用，或作为活性成分与其他辅料共同使用；
异甘草素的使用剂量为10-300mg/kg/d，优选为20-150mg/kg/d。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，异甘草素以溶于溶剂的溶液形式使用；
异甘草素的浓度为0.05-4g/ml，优选为0.1-3.5g/ml，更优选为0.1-3g/ml。
5.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于，异甘草素以固体形式使用，优选作为活性成分与固态辅料混合，所述辅料优选为填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种；
异甘草素相对辅料的用量为1％-50％，优选为1％-40％，更优选为1％-30％，以重量计。
6.异甘草素在制备治疗慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于，异甘草素在制备治疗高糖介导的慢性炎症性疾病和氧化应激性损伤疾病的药物中的用途。
8.异甘草素在制备治疗糖尿病肾病的药物中的用途。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，异甘草素在制备治疗慢性炎症和氧化应激引起的糖尿病肾病的药物中的用途。
10.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，异甘草素在制备治疗高血糖或糖尿病引起的糖尿病肾病的药物中的用途。
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