CN109432096A

CN109432096A - 盐酸去亚甲基四氢小檗碱在制备预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病药物中的应用

Info

Publication number: CN109432096A
Application number: CN201811339367.0A
Authority: CN
Inventors: 张玉彬; 张元强; 朱倩倩; 邱贞; 李青霞; 张淼; 潘杉; 赵亚星; 闻婧
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2018-11-12
Filing date: 2018-11-12
Publication date: 2019-03-08
Anticipated expiration: 2038-11-12
Also published as: CN109432096B

Abstract

本发明涉及生物医药领域，具体涉及盐酸去亚甲基四氢小檗碱在制备预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病中的应用。由于盐酸去亚甲基四氢小檗碱吸收增强，抗炎、抗氧化活性增强，在给药治疗酒精性肝病与非酒精性脂肪肝病的过程中，可降低其给药剂量以及给药次数，提高病人依从性，增强病患的治疗效果。

Description

盐酸去亚甲基四氢小檗碱在制备预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病药物中的应用

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及盐酸去亚甲基四氢小檗碱在制备预防和/或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病中的应用。

背景技术

酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病是一类常见的肝病，如何预防/治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病成为肝病研究的热点。

酒精中毒导致全球每年约250万人死亡，占所有死亡人数的4％。尽管酒精中毒与60多种疾病有关，但大多数酒精中毒死亡是由酒精性肝病引起的。酒精性肝病(alcoholicliver disease ALD)是长期饮酒所导致，酒精性肝病为常见肝损伤疾病之一。酒精诱发肝脏的氧化应激，氧和氮的过量活性物质导致组织和器官的氧化损伤，从而导致严重的肝脏疾病，如酒精肝病。氧化应激被认为是一种联合的病理机制，它促进肝损伤的发生和发展。药物辅助抗氧化活性物质参与对酒精性肝病治疗成为可能。

非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是一种以肝细胞中脂肪过量积聚为特征的疾病。非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是慢性肝损伤的主要原因之一。NAFLD的组织学发现表明肝脏脂肪变性和炎症发生伴有特征性肝细胞损伤(例如，气球样变性)。实验研究表明氧化应激和脂质过氧化是导致非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)进一步发展的关键，非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的发生伴随的肝脏脂肪堆积，肝细胞累积的过多脂质会导致线粒体产生过量的活性氧，对肝脏进行进一步损伤。与酒精性肝损伤相似，抑制氧化应激、加速过氧化物的清除，同时也成为治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的途径之一。

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)并且是发达国家儿童和青少年最常见的肝脏疾病。此外，非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的严重程度和发展情况存在相当大的个体差异。迄今为止，除了生活方式的改变，饮食改变以及可能的减肥手术之外，还没有完全逆转疾病的有效医疗干预措施。

盐酸去亚甲基四氢小檗碱，如式(Ⅰ)所示。

盐酸去亚甲基四氢小檗碱(式Ⅰ)的英文名为DemethyleneTetrahydroberberine，CAS号为47346-21-4，学术名为6H-Dibenzo[a,g]quinolizine-2,3-diol, 5,8,13,13a-tetrahydro-9,10-dimethoxy；6H-二苯并[a，g]喹嗪-2,3-二醇，5,8,13,13a-四氢-9,10-二甲氧基。本发明专利将其简称为DMTHB。式(Ⅰ)中的结构式为盐酸去亚甲基四氢小檗碱，为盐酸去亚甲基小檗碱的还原产物，它的分子式：C19H21NO4,分子量为：327.2，盐酸去亚甲基四氢小檗碱可以与无机酸或者有机酸形成多种盐，如氯化盐、硫酸盐、磷酸盐、溴化盐、碘化盐、枸橼酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、苹果酸盐和琥珀酸盐等分子形式存在。迄今为止，现有技术中没有关于盐酸去亚甲基四氢小檗碱对酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病预防或治疗作用的记载和报道。

发明内容：

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病的化合物，特别是提供了如式(Ⅰ)所示的盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB) 作为预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病药物的应用。

本发明通过建立酒精性肝损伤动物模型与MCD非酒精性脂肪肝肝损伤模型，观察盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)对酒精性肝损伤与非酒精性脂肪肝病的预防与治疗作用。研究结果表明，盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)对酒精性肝损伤和非酒精性脂肪肝病均具有预防保护和治疗作用。

本发明通过建立酒精性肝损伤动物模型，在保持50mg/kg的灌胃给药剂量的条件下，观察盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)、盐酸小檗碱(BBR)和盐酸去亚甲基小檗碱(DMB)对酒精性肝损伤的预防与治疗作用。研究结果表明，盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB) 相对于盐酸小檗碱(BBR)和盐酸去亚甲基小檗碱(DMB)，对酒精性肝损伤具有预防保护和治疗作用效果更佳。

本发明通过比较盐酸小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱和盐酸去亚甲基四氢小檗碱的油水分配系数LogP数值去研究对比其脂溶性变化。研究过显示盐酸去亚甲基四氢小檗碱油水分配系数明显大于盐酸小檗碱与盐酸去亚甲基小檗碱油水分配系数,DMTHB logP＝0.01518323> BBR logP＝-2.320492475>DMB logP＝-2.388180171，盐酸去亚甲基四氢小檗碱的脂溶性更佳，更有利于胃肠道吸收。

本发明通过DPPH、ABTS、FRAP三种方法分析盐酸小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱和盐酸去亚甲基四氢小檗碱的体外抗氧化活性实验，实验结果显示，与盐酸小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱相比，盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗氧化能力最佳，并且明显优于阳性对照品Trolox(维生素c)。另外，本发明采用ROS探针法，利用荧光探针DCFH-DA与ROS结合产生荧光的性质，通过细胞培养、荧光显微镜分析盐酸去亚甲基四氢小檗碱对ROS的清除作用最佳。盐酸去亚甲基四氢小檗碱较强的抗氧化能力为其治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病奠定了重要的理论基础。

本发明通过MTT法，细胞水平分析盐酸去亚甲基四氢小檗碱毒性，并与盐酸小檗碱和盐酸去亚甲基小檗碱进行对比。研究结果表明:当盐酸去亚甲基四氢小檗碱浓度小于125μM 时，对正常细胞无促进或抑制作用，当盐酸去亚甲基小檗碱浓度小于62.5μM时，对正常细胞无促进或抑制作用，当盐酸小檗碱浓度小于125μM时，对正常细胞无促进或抑制作用。另外，在采用实验动物体内毒性试验研究发现，当小檗碱小鼠尾静脉注射量30mg/kg时，小鼠全部死亡；当盐酸去亚甲基小檗碱小鼠尾静脉注射量30mg/kg时，小鼠存活率为40％；当盐酸去亚甲基四氢小檗碱小鼠尾静脉注射量30mg/kg时，小鼠存活率为100％，无小鼠死亡。总结相对结果显示盐酸去亚甲基四氢小檗碱的毒性较低、安全性。

本发明通过ICR小鼠为动物模型，研究盐酸去亚甲基四氢小檗碱对酒精引起的小鼠急性肝损伤具有保护作用。盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组分别给予50mg/kg、100mg/kg、 150mg/kg灌胃预防1周，模型组给予相同剂量的赋形剂灌胃一周，再给小鼠灌胃酒精(6g/kg)，每12小时灌胃一次，共3次，使小鼠产生急性酒精肝损伤，末次灌胃酒精6小时后，处死动物小鼠。初次灌胃酒精4h后，观察小鼠睡眠情况。以翻正反射为标准，酒精中毒4h后模型组基本上都处于昏睡状态，翻正反射消失；而经过盐酸去亚甲基四氢小檗碱预防治疗组小鼠4h后均恢复翻正反射，状态清醒，小鼠反应灵敏。实验结果分析表明，盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组，无论剂量高低，均能显著降低小鼠酒精性肝损伤引起的ALT和AST升高作用，显示出盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗酒精性肝损伤和保护肝功能作用。此外，与模型组相比，盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药高中低组的MDA水平分别降低57％、64％、49％，而 GSH分别升高了82％、67％、75％。这些研究DMTHB具有降低脂质过氧化产物MDA水平，促进GSH再生，增强肝脏自由基的清除能力。根据HE染色分析，小鼠酒精性肝损伤模型组肝脏中出现明显的中央静脉周围肝细胞脂肪和水样变性。盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组可明显减轻上述肝细胞病变，使之恢复正常或接近正常水平。这些实验结果充分的说明了盐酸去亚甲基四氢小檗碱能有效的预防治疗酒精性肝病。

本发明通过ICR小鼠为动物模型，研究盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱对酒精引起的小鼠急性肝损伤治疗的对比药效作用。盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱给药组分别给予50mg/kg灌胃预防1周，模型组给予相同剂量的赋形剂灌胃一周，再给小鼠灌胃酒精(6g/kg)，每12小时灌胃一次，共3次，使小鼠产生急性酒精肝损伤，末次灌胃酒精6小时后，处死动物小鼠。初次灌胃酒精4h后，观察小鼠睡眠情况。以翻正反射为标准，酒精中毒4h后模型组基本上都处于昏睡状态，翻正反射消失；而经过盐酸去亚甲基四氢小檗碱预防治疗组小鼠4h后均恢复翻正反射，状态清醒，小鼠反应灵敏，盐酸小檗碱给药组与盐酸去亚甲基小檗碱给药组小鼠4h后基本上处于昏迷状态，个别出现翻正反应消失现象。实验结果分析表明，盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组能显著降低小鼠酒精性肝损伤引起的ALT和AST升高作用，盐酸小檗碱给药组与盐酸去亚甲基小檗碱给药组基本上没有对ALT和AST升高作用产生改善。结果显示盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗酒精性肝损伤和保护肝功能作用明显优于盐酸小檗碱给药组与盐酸去亚甲基小檗碱。

本发明结果表明盐酸去亚甲基四氢小檗碱对高剂量酒精引起的中毒反应具有良好的保护作用。

本发明通过CCK-8检测细胞水平PA诱导的L02细胞损伤模型的建立。在日常实验过程中，科研人员常采用PA(棕榈酸)诱导肝细胞损伤模拟非酒精性肝损伤，将正常肝细胞株(L02)分别按细胞数4×104/cm2接种于96孔板中，培养24小时，当细胞处于生长旺盛期。分别设置0μmol/l、50μmol/l、100μmol/l、150μmol/l、200μmol/l的PA诱导非酒精性脂肪肝损伤。PA诱导损伤24h后，200μmol/l PA诱导对L02细胞产生显著的损伤。则在后期PA诱导L02细胞造模过程中选用200μmol/l PA。

本发明通过CCK-8检测DMTHB在细胞水平对PA诱导的L02细胞损伤的治疗。本实验采用CCK-8法，细胞水平检测DMTHB对PA诱导肝损伤模拟非酒精性肝损伤的治疗效果进行探究。将正常肝细胞株(L02)分别按细胞数4×104/cm2接种于6孔板中，培养24小时，当细胞处于生长旺盛期。模型组与给药治疗组每孔保持200μmol/l PA，诱导损伤4小时后，给药组分别给药20μmol/l、40μmol/l DMTHB治疗，20小时后油红染色，显微镜观察拍照分析。

本发明通过C57小鼠为模型动物，采用胆碱-蛋氨酸缺乏的高脂饲料(MCD饲料)喂养造模，研究盐酸去亚甲基四氢小檗碱对MCD饲料引起的小鼠脂肪肝损伤的保护作用。本次实验分组为正常对照组、MCD模型组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量治疗组(50mg/kg，ig)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量治疗组(150mg/kg、ig)。MCD饲料喂养30天，每天灌胃给药一次。末次给药后，禁食16小时，处理动物，检测生化指标。实验结果分析表明，盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组，无论剂量高低，均能显著降低MCD模型小鼠非酒精性脂肪肝损伤引起的ALT和AST升高作用，显示出盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗非酒精性脂肪肝损伤和保护肝功能作用。此外，与模型组相比，盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药高低组的MDA 水平分别降低41％、58％，而GSH分别升高了103％、101％。同时，甘油三酯与总胆固醇的含量与模型组相比，盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药高低组的甘油三酯水平分别降低了25％、 31％，总胆固醇水平分别降低了50％、38％。

本发明所用盐酸去亚甲基四氢小檗碱产品采用常规化学与分离纯化制得。本实验室采用高效液相色谱(HPLC)分析检测，其纯度达99％以上，并经过化学法、质谱法和核磁共振法分析鉴定，表明本实验室所用的盐酸去亚甲基四氢小檗碱产品化学结构正确。此项研究表明盐酸去亚甲基四氢小檗碱其纯度和化学结构符合开展体内、体外生物学活性和药理作用研究要求。

根据本发明还涉及含有作为活性成份的盐酸去亚甲基四氢小檗碱和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1～95％重量％的盐酸去亚甲基四氢小檗碱。在单元剂型中本发明化合物一般含量为0.1～100mg。

本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。

本发明化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油脂、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂如琼脂粉、干燥粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。

例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成份本发明化合物盐酸去亚甲基小檗碱与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。例如，将本发明化合物盐酸去亚甲基小檗碱制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂、分散剂、渗透压调节剂、增溶剂和 pH调节剂。如稀释可选用水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂、脂肪酸酯等。渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、甘油、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等；增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基β-环糊精等；pH调节剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等。如制备冻干粉针剂，还可以加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或香料等。这些辅料是本领域常用的。

本发明所用的无菌介质都可以通过本领域技术人员众所周知的标准技术制得。可将它们灭菌，例如通过经由细菌过虑器过滤、通过向组合物中加入灭菌剂、通过将组合物放射处理、或通过将组合物加热灭菌。还可以在临用前将它们制成无菌可注射介质。

为了达到用药目的，增加治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。当然用于实施本发明化合物的给药途径取决于疾病和需要治疗的部位。因为本发明化合物的药动学和药效学特征会有某种程度的不同，因此在组织中获得治疗浓度的最优选方法是逐渐增加剂量并监测临床效果。对于这样的逐渐增加治疗剂量，初始剂量将取决于给药途径。

对于任何特定患者，本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有较大范围的变化。根据所治疗患者的病症，可能必须对剂量作出某些改变，并且在任何情况下，都由医师决定个体患者的合适剂量。给药剂量是指不包括载体重量在内(当使用载体时)的化合物的重量。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。可以是单一剂量形式给药或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药；这受限于给药医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用并调整剂量。

有益效果

1、亚甲基四氢小檗碱，为盐酸去亚甲基小檗碱的还原产物，相比于盐酸去亚甲基小檗碱，盐酸去亚甲基四氢小檗碱水溶性较佳，本发明首次发现其具有比盐酸小檗碱和盐酸去亚甲基小檗碱更低的毒性、抗炎以及抗氧化活性。

2、本实验室曾经报道过盐酸去亚甲基小檗碱和盐酸小檗碱对酒精性肝病进行治疗。但盐酸去亚甲基小檗碱与盐酸小檗碱为季铵盐形式，药物溶解度极低。盐酸去亚甲基四氢小檗碱为去亚甲基小檗碱的还原结构，不具有季铵盐的结构，药物溶解度以及药物吸收相较于去亚甲基小檗碱都得到明显的改善。

盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组，无论剂量高低，均能显著降低小鼠酒精性肝损伤引起的 ALT和AST升高作用，显示出盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗酒精性肝损伤和保护肝功能作用。此外，与模型组相比，盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药高中低组的MDA水平分别降低57％、 64％、49％，而GSH分别升高了82％、67％、75％。这些研究DMTHB具有降低脂质过氧化产物MDA水平，促进GSH再生，增强肝脏自由基的清除能力。根据HE染色分析，小鼠酒精性肝损伤模型组肝脏中出现明显的中央静脉周围肝细胞脂肪和水样变性。盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组可明显减轻上述肝细胞病变，使之恢复正常或接近正常水平。

盐酸去亚甲基四氢小檗碱给药组能显著降低小鼠酒精性肝损伤引起的ALT和AST升高作用，盐酸小檗碱给药组与盐酸去亚甲基小檗碱给药组基本上没有对ALT和AST升高作用产生改善。结果显示盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗酒精性肝损伤和保护肝功能作用明显优于盐酸小檗碱给药组与盐酸去亚甲基小檗碱。

由于药物吸收增强，抗炎、抗氧化活性增强，在给药治疗酒精性肝病与非酒精性脂肪肝病的过程中，可降低其给药剂量以及给药次数，提高病人依从性，增强病患的治疗效果。

3、本发明采用采用灌胃的方式给药，而盐酸去亚甲基小檗碱和盐酸小檗碱一般采用静脉的注射方式，从给药角度来说，提高患者的顺应性，特别适合于解酒药的口服。

附图说明

图1盐酸去亚甲基四氢小檗碱的HPLC分析图

图2盐酸去亚甲基四氢小檗碱的质谱图

图3盐酸去亚甲基四氢小檗碱的氢谱图

图4盐酸去亚甲基四氢小檗碱、小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱的HPLC出峰位置对比图

图5 DPPH分析法检测盐酸去亚甲基四氢小檗碱的抗氧化活性

图6 ABTS分析法检测盐酸去亚甲基四氢小檗碱的抗氧化活性

图7 FRAP分析法检测盐酸去亚甲基四氢小檗碱的抗氧化活性

图8盐酸去亚甲基四氢小檗碱抑制HepG2细胞中由H2O2诱导产生ROS

图9盐酸去亚甲基四氢小檗碱细胞毒性分析

图10酒精性肝损伤小鼠肝组织病理形态变化

其中A代表正常小鼠肝组织HE染色图(×400)，B代表酒精损伤模型小鼠肝组织HE染色图(×400),C代表水飞蓟素阳性药组，D代表盐酸去亚甲基四氢小檗碱50mg/kg给药组，E代表盐酸去亚甲基四氢小檗碱100mg/kg给药组，F代表盐酸去亚甲基四氢小檗碱 150mg/kg给药组。

图11盐酸去亚甲基四氢小檗碱、小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱血药浓度分析

图12棕榈酸(PA)构建细胞水平非酒精性肝损伤

图13去亚甲基四氢小檗治疗棕榈酸(PA)诱导的肝细胞损伤

图14去亚甲基四氢小檗改善细胞水平的脂肪堆积

图15非酒精性脂肪肝肝损伤小鼠肝组织病理形态变化

其中A代表正常小鼠肝组织HE染色图(×200)，B代表MCD非酒精性脂肪肝肝损伤模型小鼠肝组织HE染色图(×200),C代表盐酸去亚甲基四氢小檗碱50mg/kg给药组， D代表盐酸去亚甲基四氢小檗碱150mg/kg给药组

图16非酒精性脂肪肝肝损伤小鼠肝照片

其中A代表正常小鼠肝，B代表MCD非酒精性脂肪肝肝损伤模型小鼠肝,C代表盐酸去亚甲基四氢小檗碱50mg/kg给药组，D代表盐酸去亚甲基四氢小檗碱150mg/kg给药组

具体实施方式

下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

术语

DMTHB：盐酸去亚甲基四氢小檗碱

BBR:盐酸小檗碱

DMB：盐酸去亚甲基小檗碱

ALT/AST:谷丙转氨酶/谷草转氨酶

MDA：丙二醛

GSH:谷胱甘肽

IP：腹腔注射

IG：灌胃

LogP:油水分配系数

TC:总胆固醇

TG：甘油三酯

PA：棕榈酸

MCD：胆碱-蛋氨酸缺乏的高脂饲料

实施例1.盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)纯度分析

方法：采用HPLC方法分析，将DMTHB用水溶解，并经0.22μm微孔滤膜过滤，配成终浓度200μg/ml样品，另外将DMTHB、BBR、DMB用甲醇溶解，并经0.22μm微孔滤膜过滤，配成终浓度200μg/ml，等体积混合后制备混合样品。HPLC色谱仪：Agilent 1100高效液相色谱仪。色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18(4.6×150mm，5μm)。流动相：A：20mM 磷酸盐缓冲液,B:乙腈。HPLC梯度洗脱条件：0-13min，20％B-55％B；13-14min，55％B； 14-15min，20％B；15-16min，20％B。检测波长：283nm。柱温：30℃，流速：1.0ml/min，进样体积1μl。

结果：HPLC分析结果如图1所示，盐酸去亚甲基四氢小檗碱的保留时间为6.520min，纯度大于99％以上，符合生物活性和药理学实验研究要求。混合样品HPLC分析结果如图4所示，盐酸去亚甲基四氢小檗碱的保留时间为6.520min，小檗碱的保留时间为11.799min，盐酸去亚甲基小檗碱的保留时间为8.126min。

实施例2.盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)结构鉴定

方法：分子结构鉴定采用质谱和核磁共振波谱分析法。质谱仪器为waters Q-TOFMicroTM，离子化方式：ESI(+)，质量扫描范围：m/z80-1000，毛细管电压：2500v，锥孔电压：25v，离子源温度：100℃，雾化温度：200℃，锥孔气流速：50L/hr，雾化气流速：400L/hr。核磁共振波谱仪(¹H-NMR)为AVANCE AV-300，照射频率为300MHz，所用溶剂：氘代二甲基亚砜，所用标准物为四甲基硅烷(TMS)。

结果：盐酸去亚甲基四氢小檗碱的正离子质谱分析结果如图2所示，ESI-MS(m/z):分子离子峰[M+H]+＝328.1,这与盐酸去亚甲基四氢小檗碱的理论分子量保持一致。

盐酸去亚甲基四氢小檗碱的¹H-NMR(DMSO-d6)氢谱分析结果如图3所示，DMTHB分子中各种氢的归属见表1。

表1盐酸去亚甲基四氢小檗碱的化学位移和氢归属(1H-NMR，DMSO-d6)

我们还对盐酸去亚甲基四氢小檗碱分析检测，综合以上结果表明本研究所用样品盐酸去亚甲基四氢小檗碱结构正确，符合生物活性和药理学研究要求。

实施例3.DPPH法测定盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)体外抗氧化活性

方法：分别将盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱、盐酸小檗碱、Trolox分别配置成0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mM。称取DPPH粉末0.0012g，用6ml无水乙醇溶解，得母液，取母液3ml加3ml蒸馏水稀释配置成工作液。取一块96孔板，分别设空白组、对照组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱组、盐酸去亚甲基小檗碱组、盐酸小檗碱组、Trolox标准检测孔。首先，吸取10μl蒸馏水于空白孔，分别吸取10μl对应不同浓度的样品溶液于对照孔中，分别吸取10μl对应不同浓度的的Trolox标准溶液。混匀。其次加入150μl的DPPH工作液，混匀后，于37℃放置20min后，用酶标仪于517nm下检测各孔的OD值。结果如图5所示，盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗氧化能力>Trolox标准溶液＞盐酸去亚甲基小檗碱＞盐酸小檗碱。

实施例4.ABTS法测定盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)体外抗氧化活性

方法：分别将盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱、盐酸小檗碱、Trolox分别配置成0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mM。首先将20μl过氧化物酶应用液于各孔中。其次，吸取 10μl蒸馏水于空白孔，分别吸取10μl对应不同浓度的样品溶液于对照孔中，分别吸取10μl 对应不同浓度的的Trolox标准溶液。混匀。最后加入170μlABTS工作液，混匀后，室温放置6min后，用酶标仪于405nm下检测各孔的OD值。结果如图6所示，盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗氧化能力>Trolox标准溶液＞盐酸去亚甲基小檗碱＞盐酸小檗碱。

实施例5.FRAP法测定盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)体外抗氧化活性

分别将盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱、盐酸小檗碱、Trolox分别配置成 0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mM。取一块96孔板，分别设空白组、对照组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱组、盐酸去亚甲基小檗碱组、盐酸小檗碱组、Trolox标准检测孔。首先，吸取5μl蒸馏水于空白孔，分别吸取5μl对应不同浓度的样品溶液于对照孔中，分别吸取5μl对应不同浓度的的Trolox标准溶液。混匀。其次加入180μl的FRAP工作液，混匀后，于37℃放置2-3min后，用酶标仪于593nm下检测各孔的OD值。结果如图7所示，盐酸去亚甲基四氢小檗碱抗氧化能力>Trolox标准溶液＞盐酸去亚甲基小檗碱＞盐酸小檗碱。

实施例6.盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)细胞水平抗氧化活性

方法：用ROS探针法，细胞水平检测盐酸去亚甲基四氢小檗碱对ROS的清除作用。过氧化氢H2O2(1mM)刺激肝癌细胞株(HepG2)15min后即可产生大量的ROS损伤细胞。细胞培养中给予盐酸去亚甲基四氢小檗碱50μM、盐酸去亚甲基小檗碱50μM、盐酸小檗碱50μM 预处理2h，利用荧光探针DCFH-DA(50μM)与ROS结合产生荧光的性质，荧光显微镜下观察ROS的清除作用。

结果：荧光显微镜法显示50μM DMTHB能显著性抑制过氧化物在HepG2细胞中产生的ROS，结果如图8。

实施例7.盐酸去亚甲基四氢小檗碱细胞水平毒性试验

方法：采用MTT法，细胞水平检测盐酸去亚甲基四氢小檗碱毒性试验。将正常肝细胞株(L02) 分别按细胞数4×104/cm2接种于96孔板中，培养24小时，当细胞处于生长旺盛期，加入不同浓度的盐酸去亚甲基小檗碱，盐酸去亚甲基四氢小檗碱，盐酸小檗碱，分别给药处理 24h。后每孔加入20μl的MTT(5mg/ml)，继续孵育4h后取出，吸净培养基，每孔加150μlDMSO，摇床上震荡10min后，490nm处测吸光度。

结果：如图9所示，盐酸去亚甲基小檗碱，盐酸去亚甲基四氢小檗碱在低浓度时有促进L02 细胞生长的作用。当盐酸去亚甲基四氢小檗碱浓度大于125μM时，对正常L02细胞有抑制作用，当盐酸去亚甲基小檗碱浓度大于62.5μM时，对正常L02细胞有抑制作用，当盐酸小檗碱浓度小于125μM时，对正常L02细胞有抑制作用。总结相对结果显示盐酸去亚甲基四氢小檗碱的毒性较低、安全性。

实施例8.盐酸去亚甲基四氢小檗碱细胞动物毒性试验

方法：利用动物实验法体内水平分析盐酸去亚甲基四氢小檗碱的毒性试验。实验动物采用 ICR小鼠18-22g，雌雄各半。本发明研究所用老鼠均购于扬州大学动物比较中心，所有动物实验均按照江苏省和中国药科大学动物管理与操作要求进行。动物饲养于25℃、相对湿度 60-75％的条件下，适应性喂养一周后开始实验。本发明实验选用DMTHB药物浓度分别为 40mg/kg、60mg/kg、80mg/kg。BBR药物浓度分别为5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg。DMB药物浓度分别10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg。给药体积为10ml/kg。采用一次性大剂量尾静脉给药(iv)，记录发生中毒死亡的时间基本在5-10min内死亡，死亡前表现的特点浑身抽搐，呼吸短促，几分钟内死亡。

结果：如表2、3、4所示DMTHB的药物毒性明显低于BBR和DMB。

表2尾静脉注射盐酸去亚甲基四氢小檗碱(DMTHB)的毒性

组别	死亡数	存活数	死亡率
				40mg/kg	0	8	0％
60mg/kg	0	8	0％
				80mg/kg	0	8	0％

表3尾静脉注射小檗碱(BBR)的毒性

组别	死亡数	存活数	死亡率
				20mg/kg	8	8	100％
15mg/kg	8	8	100％
				10mg/kg	3	5	37.5％
5mg/kg	0	8	0％

表4尾静脉注射盐酸去亚甲基小檗碱(DMB)的毒性

组别	死亡数	存活数	死亡率
				40mg/kg	8	0	100％
30mg/kg	5	3	62.5％
				20mg/kg	2	6	25％
10mg/kg	0	8	0％

实施例9.盐酸去亚甲基四氢小檗碱对酒精性肝损伤的保护作用

方法：雄性ICR小鼠，体重22-24g，随机分为6组，每组8只。6组分别为正常对照组、模型组、水飞蓟素阳性药组(150mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱中剂量组(100mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组 (150mg/kg)。给药组连续给药一周预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。末次给药1h后，除正常对照组外，其余各组动物灌胃给予6g/kg酒精，每12h一次，共三次。末次酒精灌胃后6h处死动物，不同小鼠取同一部位肝组织，于冰浴上以PBS制成10％肝匀浆。按照试剂盒要求测定肝组织中的脂质过氧化物MDA水平，抗氧化物质GSH水平。

结果：如表5所示，与对照组相比，模型组小鼠肝脏脂质过氧化物MDA升高408％，GSH 降低了228％，水飞蓟素阳性药组MDA降低了52.45％，GSH升高了168％。盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱中剂量组(100mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)MDA水平分别降低了61.53％、67.86％、46.88％，GSH升高了167.7％、135.4％、197.7％。研究结果表明盐酸去亚甲基四氢小檗碱具有降低过氧化物MDA水平，促进GSH再生，增强肝脏自由基的清除能力。

表5盐酸去亚甲基四氢小檗碱对酒精性肝损伤肝脏抗氧化作用

(n＝8,mean±variance，#p<0.05、##p<0.01、###p<0.001VS control，*p<0.05、**p<0.01、 ***p<0.001VS model)

实施例10.盐酸去亚甲基四氢小檗碱对酒精性肝损伤病理改变的保护作用

方法：雄性ICR小鼠，体重22-24g，随机分为6组，每组8只。6组分别为正常对照组、模型组、水飞蓟素阳性药组(150mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱中剂量组(100mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组 (150mg/kg)。给药组连续给药一周预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。末次给药1h后，除正常对照组外，其余各组动物灌胃给予6g/kg酒精，每12h一次，共三次。末次酒精灌胃后6h处死动物，不同小鼠取同一部位肝组织，以10％甲醛固定，HE染色进行病理学检查。

结果：肝脏病理学研究结果表明，正常对照组的肝脏形态未见异常，酒精(6g/kg)模型组则出现肝脏中央静脉周围肝细胞脂肪和水样变性。水飞蓟素阳性药组(150mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱中剂量组(100mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)均可减轻上述肝细胞病变，使之恢复接近于正常水平，如图10所示。

实施例11.盐酸去亚甲基四氢小檗碱对酒精性肝功能的保护作用

方法：雄性ICR小鼠，体重22-24g，随机分为6组，每组8只。6组分别为正常对照组、模型组、水飞蓟素阳性药组(150mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱中剂量组(100mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组 (150mg/kg)。给药组连续给药一周预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。末次给药1h后，除正常对照组外，其余各组动物灌胃给予6g/kg酒精，每12h一次，共三次。末次酒精灌胃后6h处死动物，摘眼球取血，室温静置30min后，4℃离心3000rpm/min，常规分离血清，采用南京建成公司试剂盒分析测定血清中的ALT和AST。

结果：实验结果如表6所示，小鼠经过连续3次酒精灌胃后，与正常组相比模型组小鼠血清 ALT、AST分别升高了108％和96.64％，而水飞蓟素阳性药组(150mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(100mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(150mg/kg)均能显著的降低小鼠酒精性肝损伤引起的ALT、AST升高作用，并恢复到正常水平。由此可见盐酸去亚甲基四氢小檗碱具有明显的治疗酒精性肝损伤的作用。

表6盐酸去亚甲基四氢小檗碱治疗酒精性肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响

实施例12盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱的药效学对比方法：雄性ICR小鼠，体重22-24g，随机分为5组，每组8只。5组分别为正常对照组、模型组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基小檗组(50mg/kg)、盐酸小檗碱组(50mg/kg)。给药组连续给药一周预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。末次给药1h后，除正常对照组外，其余各组动物灌胃给予6g/kg酒精，每12h一次，共三次。末次酒精灌胃后6h处死动物，摘眼球取血，室温静置30min后，4℃离心3000rpm/min，常规分离血清，采用南京建成公司试剂盒分析测定血清中的ALT和AST。

结果：实验结果如表7所示小鼠经过连续3次酒精灌胃后，与正常组相比模型组小鼠血清 ALT、AST分别升高了89％、87％。盐酸去亚甲基四氢小檗碱组(50mg/kg)降低小鼠酒精性肝损伤引起的ALT、AST升高作用，并恢复到正常水平。盐酸去亚甲基小檗组(50mg/kg)、盐酸小檗碱组(50mg/kg)未能降低小鼠酒精性肝损伤引起的ALT、AST升高作用。故在治疗酒精性肝损伤过程中，等剂量的情况下，盐酸去亚甲基四氢小檗碱治疗效果明显优于盐酸去亚甲基小檗、盐酸小檗碱。

表7盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱的药效学对比

实施例13盐酸去亚甲基四氢小檗碱、盐酸去亚甲基小檗碱、盐酸小檗碱血药浓度分析雄性SD大鼠适应性饲养3天，选取体重量(220±2O)g的大鼠分为4组，分别为空白组、盐酸去亚甲基小檗碱组、盐酸小檗碱组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱组。实验前禁食12h胃排空，实验组大鼠ig给药剂量为300mg/kg。分别于大鼠ig给药5min、15min、30min、1h、 2h、6h眼眶取血0.2ml，将全血离心，取血浆100μl于-20℃冷冻备用。取100μl血浆样品，加200μl甲醇，涡旋5min，置离心机中以10000r/min离心30min，取上清，利用HPLC检测。

实验结果如图11，盐酸去亚甲基小檗碱DMB Cmax＝7.89μg×ml^-1，Tmax＝1h；盐酸小檗碱 BBR Cmax＝3.57μg×ml^-1，Tmax＝0.5h；盐酸去亚甲基四氢小檗碱DMTHB Cmax＝19.21μg×ml^-1， Tmax＝1h。根据实验结果计算得DMTHB_AUC＝15.61μg×ml^-1×h＞DMB_AUC＝5.85μg×ml^-1×h＞ BBR_AUC＝1.27μg×ml-1×h。

实施例14.棕榈酸(PA)构建细胞水平的非酒精性肝损伤模型

将正常肝细胞株(L02)分别按细胞数4×104/cm2接种于96孔板中，培养24小时，当细胞处于生长旺盛期。分别设置0μmol/l、50μmol/l、100μmol/l、150μmol/l、200μmol/l的PA诱导非酒精性脂肪肝损伤。PA诱导损伤24h后，结果如图12所示，200μmol/l PA诱导对 L02细胞产生显著的损损伤。则在后期PA诱导L02细胞造模过程中选用200μmol/l PA。

实施例15.DMTHB治疗细胞水平的非酒精性肝损伤

将正常肝细胞株(L02)分别按细胞数4×104/cm2接种于96孔板中，培养24小时，当细胞处于生长旺盛期。200μmol/l的PA诱导非酒精性脂肪肝损伤，造模成功后给予0、20、40、60μΜDMTHB治疗。结果如图13所示，DMTHB对PA诱导的肝细胞损伤有一定的治疗作用。

实施例16.DMTHB在细胞水平对脂肪的清除能力检测

本实验通过细胞水平检测DMTHB对PA诱导肝损伤模拟非酒精性肝损伤的治疗效果进行探究。将正常肝细胞株(L02)分别按细胞数4×104/cm2接种于6孔板中，培养24小时，当细胞处于生长旺盛期。模型组与给药治疗组每孔保持200μmol/l PA，诱导损伤4小时后，给药组分别给药20μmol/l、40μmol/l治疗，20小时后油红染色，显微镜观察拍照分析。结果如图14所示，DMTHB对PA诱导肝损伤模拟非酒精性肝损伤具有明显的改善作用。

实施例17.盐酸去亚甲基四氢小檗碱对非酒精性脂肪肝损伤的保护作用

方法：雄性C56小鼠，体重22-24g，随机分为4组，每组8只。4组分别为正常对照组、模型组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)。给药组连续给药3天预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。MCD 饲料喂养30天，同时每天灌胃给药一次。末次给药后，禁食16小时，处理动物。不同小鼠取同一部位肝组织，于冰浴上以PBS制成10％肝匀浆。按照试剂盒要求测定肝组织中的脂质过氧化物MDA水平，抗氧化物质GSH水平。

结果：如表8所示，与对照组相比，模型组小鼠肝脏脂质过氧化物MDA升高39％，GSH降低了37％。盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)MDA水平分别降低了41％、58％，而GSH分别升高了103％、101％。研究结果表明盐酸去亚甲基四氢小檗碱具有降低过氧化物MDA水平，促进GSH再生，增强肝脏自由基的清除能力。

表8盐酸去亚甲基四氢小檗碱对非酒精性脂肪肝损伤肝脏抗氧化作用

实施例18.盐酸去亚甲基四氢小檗碱对非酒精性脂肪肝损伤的肝脏保护作用

方法：雄性C56小鼠，体重22-24g，随机分为4组，每组8只。4组分别为正常对照组、模型组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)。给药组连续给药3天预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。MCD 饲料喂养30天，同时每天灌胃给药一次。末次给药后，禁食16小时，处理动物。摘眼球取血，室温静置30min后，4℃离心3000rpm/min，常规分离血清，采用南京建成公司试剂盒分析测定血清中的ALT和AST。

结果：实验结果如表9所示，小鼠经过连续30天MCD饲料喂养造模后，与正常组相比模型组小鼠血清ALT、AST分别升高了482％和117％，盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)均能显著的降低小鼠酒精性肝损伤引起的ALT、AST升高作用，并恢复到正常水平。由此可见盐酸去亚甲基四氢小檗碱具有明显的治疗酒精性肝损伤的作用。

表9盐酸去亚甲基四氢小檗碱治疗酒精性肝损伤小鼠血清ALT和AST的影响

实施例19.盐酸去亚甲基四氢小檗碱对非酒精性脂肪肝脂代谢的调节

雄性C56小鼠，体重22-24g，随机分为4组，每组8只。4组分别为正常对照组、模型组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)。给药组连续给药3天预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。MCD 饲料喂养30天，同时每天灌胃给药一次。末次给药后，禁食16小时，处理动物。不同小鼠取同一部位肝组织，于冰浴上以PBS制成10％肝匀浆。按照试剂盒要求测定肝组织中的TG 水平，TC水平。

结果：如表10所示，与对照组相比，模型组小鼠肝脏TG、TC分别升高33％、233％。盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(150mg/kg)。甘油三酯水平分别降低了25％、31％，总胆固醇水平分别降低了50％、38％。。研究结果表明盐酸去亚甲基四氢小檗碱具有调节非酒精性脂肪肝脂代谢的作用，减弱肝脏脂肪堆积清除能力。

表10 DMTHB对非酒精性脂肪肝脂代谢的调节作用

实施例20盐酸去亚甲基四氢小檗碱对非酒精性脂肪肝损伤病理改变的保护作用.

雄性C56小鼠，体重22-24g，随机分为4组，每组8只。4组分别为正常对照组、模型组、盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)。给药组连续给药3天预防，每天一次，其余各组给予同体积赋形剂。MCD饲料喂养30天，同时每天灌胃给药一次。末次给药后，禁食16小时，处理动物。不同小鼠取同一部位肝组织，以10％甲醛固定，HE染色进行病理学检查。

结果：肝脏病理学研究结果表明，正常对照组的肝脏形态未见异常，MCD模型组则出现肝脏中央静脉周围肝细胞脂肪和水样变性。盐酸去亚甲基四氢小檗碱低剂量组(50mg/kg)、盐酸去亚甲基四氢小檗碱高剂量组(150mg/kg)均可减轻上述肝细胞病变，使之恢复接近于正常水平，如图15所示。

Claims

1.盐酸去亚甲基四氢小檗碱在制备预防或治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝病药物药物中的应用。

2.一种预防或者治疗酒精性肝病和非酒精性脂肪肝的药物组合物，其特征在于，含有如权利要求1所示盐酸去亚甲基四氢小檗碱及药用辅料。

3.根据权利要求2的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释剂及微粒给药系统。