KR20150130352A - 지방간 질환을 치료하는 방법 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 지방간 질환의 치료, 억제 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 유효량의 하기 화학식 (I)의 사이클로헥세논 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에게서 지방간 질환을 치료, 억제, 및/또는 예방하는 방법을 제공한다:
Description
상호 참조
본 출원은 2013년 3월 13일에 출원된 미국출원 일련번호 제13/801,697호의 계속출원으로서, 이러한 문헌은 전문이 참고로 포함된다.
본 발명의 분야
본 발명은 지방간 질환(fatty liver disease)을 치료하는 방법, 및 보다 특히, 사이클로헥세논 화합물을 투여하는 방법에 관한 것이다.
지방간(fatty liver)은 지방이 간 전체 중량의 5% 이상을 차지하는 병원성 병태(pathogenic condition)를 지칭한다. 지방간 및 지방간염(steatohepatitis)은 과도한 알코올을 섭취하고 비만, 당뇨병, 고지질혈증, 등에 걸린 사람들에게서 흔히 발견된다. 비알코올성 지방간 질환(NAFLD)은 단순 지방간(지방증) 내지 비알코올성 지방간염(NASH), 간경화증(간의 비가역적, 발전성 반흔) 범위의 넓은 스펙트럼의 간 질환을 지칭한다. 모든 단계의 NAFLD는 일반적으로 간 세포(hepatocyte)에 지방의 축적(지방 침윤)을 갖는다. NASH에서, 지방 축적은 간의 다양한 정도의 염증 (간염) 및 반흔 (섬유증)과 관련이 있다. NAFLD 스펙트럼은 단순 지방간 (지방증)이라 불리워지는, 이의 가장 단순한 단계에서 개시하고 이로부터 진행하는 것으로 사료된다. 즉, 지방간은 NAFLD의 스펙트럼의 초기 이상이다. 단순 지방간은 염증 또는 반흔이 존재하지 않는 간 세포에서 단지 지방의 축적을 수반한다. 지방은 실제적으로 간 세포 내에 축적하는 특정 타입의 지방 (트리글리세라이드)으로 이루어진다. 지방간은 무해한 (양성) 병태이다. NAFLD 스펙트럼의 다음 단계 및 중증도는 NASH이다. 언급하는 바와 같이, NASH는 간 세포에서 지방의 축적 뿐만 아니라 간의 염증을 수반한다. 염증 세포는 간 세포를 파괴시킬 수 있다 (간세포 괴사). 용어 "지방간염" 및 "지방괴사," 지방(steato)은 지방 침윤을 지칭하며, 간염은 간에서의 염증을 지칭하며, 괴사는 파괴된 간 세포를 지칭한다. 강력한 증거는, 단순 지방간과는 반대로, NASH가 무해한 병태가 아님을 시사하다. 이는, NASH가 궁극적으로 간의 반흔 (섬유증) 및 이후 비가역적인, 발전성 반흔 (간경화증)을 야기시킬 수 있음을 의미한다. NASH에 의해 야기되는 간경화증은 NAFLD 스펙트럼에서 최종 및 가장 심각한 단계이다.
지방간을 치료하기 위한 몇몇 치료학적으로 효과적인 약물들이 존재한다. 운동 및 조절된 식사가 제안되지만, 이러한 것들은 지방간을 치료하는데 그렇게 효과적이지는 않다. 이에 따라, 부작용이 없으면서 우수한 효과 및 안전성을 지닌 지방간 치료의 개발이 요구되고 있다.
본 발명은 지방간 질환의 치료, 억제 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 유효량의 본원에 기술된 바와 같은 화학식 (I)의 사이클로헥세논 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에게서 지방간 질환을 치료, 억제 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 예시적인 구체예에서, 사이클로헥세논 화합물은 제2 성분으로 투여된다.
일 양태에서, 본 발명은 지방간 질환의 치료, 억제 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 유효량의 하기 화학식 (I)의 사이클로헥세논 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사물, 용매화물 또는 프로드러그(prodrug)를 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에게서 지방간 질환을 치료, 억제 및/또는 예방하는 방법을 제공한다:
상기 식에서, X 및 Y 각각은 독립적으로 산소, NR5 또는 황이며;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8알킬이며;
R1, R2 및 R3 각각은 독립적으로 수소, 메틸 또는 (CH2)m-CH3이며;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 글루코실이며, 여기서, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 및 글루코실은 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환되며;
R5 및 R6 각각은 독립적으로 수소 또는 C1-C8알킬이며;
R7은 C1-C8알킬, OR5 또는 NR5R6이며;
m은 1 내지 12이며;
n은 1 내지 12이다.
참고문헌의 포함
본 명세서에서 언급된 모든 공개문, 특허 및 특허출원은 각 개개의 공개문, 특허, 또는 특허출원이 상세하게 그리고 개별적으로 참고로 포함되도록 명시되는 경우와 동일한 정도로 본원에 참고로 포함된다.
도 1(A-D)는 지방간 질환 모델에서 그룹 A (비히클 대조군) 및 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1)의 간의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 1(A) 및 1(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 1(C) 및 1(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 2(A-D)는 그룹 A 및 그룹 B 지방간 질환 모델의 간의 시리우스-레드(Sirius-red) 염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 2(A) 및 2(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 2(C) 및 2(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 3(A-D)는 그룹 A 및 그룹 B 지방간 질환 모델의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 3(A) 및 3(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 3(C) 및 3(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 4는 그룹 A 및 그룹 B의 전체 혈당 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 5는 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 트리글리세라이드 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 6 및 도 7은 각각 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 AST 및 혈장 ALT 농도(U/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 8(A-D)는 지방간염 간 세포의 섬유증에 관한 그룹 A 및 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 8(A) 및 8(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 8(C) 및 8(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 9(A-D)는 지방간염 간 세포의 섬유증에 관한 그룹 A 및 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 9(A) 및 9(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 9(C) 및 9(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 10(A-D)는 지방간염 간 세포의 섬유증에 관한 그룹 A 및 그룹 B의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 10(A) 및 10(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 10(C) 및 10(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 11은 그룹 A 및 그룹 B의 전체 혈당 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 12는 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 트리글리세라이드 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 13 및 도 14는 각각 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 AST 및 혈장 ALT 농도(U/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 15(A-F)는 그룹 A (비히클 대조군), 그룹 B (시험 화합물 및 에르고스테롤) 및 그룹 C (시험 화합물 단독)에서 지방간 병태 검정에서 간의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 15(A) 및 15(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 15(C) 및 15(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 15(E) 및 15(F)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 C의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 16(A-F)는 그룹 A 내지 그룹 C로부터의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 16(A) 및 16(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 16(C) 및 16(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 16(E) 및 16(F)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 C의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 17(A-F)는 그룹 A 내지 그룹 C로부터의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 17(A) 및 17(B)는 각각 50X의 확대율 400X의 확대율에서 그룹 A의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 17(C) 및 17(D)는 각각 50X의 확대율 400X의 확대율에서 그룹 B의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 17(E) 및 17(F)는 각각 50X의 확대율 400X의 확대율에서 그룹 C의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 2(A-D)는 그룹 A 및 그룹 B 지방간 질환 모델의 간의 시리우스-레드(Sirius-red) 염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 2(A) 및 2(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 2(C) 및 2(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 3(A-D)는 그룹 A 및 그룹 B 지방간 질환 모델의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 3(A) 및 3(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 3(C) 및 3(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 4는 그룹 A 및 그룹 B의 전체 혈당 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 5는 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 트리글리세라이드 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 6 및 도 7은 각각 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 AST 및 혈장 ALT 농도(U/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 8(A-D)는 지방간염 간 세포의 섬유증에 관한 그룹 A 및 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 8(A) 및 8(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 8(C) 및 8(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 9(A-D)는 지방간염 간 세포의 섬유증에 관한 그룹 A 및 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 9(A) 및 9(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 9(C) 및 9(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 10(A-D)는 지방간염 간 세포의 섬유증에 관한 그룹 A 및 그룹 B의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 10(A) 및 10(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 10(C) 및 10(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 11은 그룹 A 및 그룹 B의 전체 혈당 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 12는 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 트리글리세라이드 농도(mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 13 및 도 14는 각각 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 AST 및 혈장 ALT 농도(U/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다.
도 15(A-F)는 그룹 A (비히클 대조군), 그룹 B (시험 화합물 및 에르고스테롤) 및 그룹 C (시험 화합물 단독)에서 지방간 병태 검정에서 간의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 15(A) 및 15(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 15(C) 및 15(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 15(E) 및 15(F)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 C의 간의 HE-염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 16(A-F)는 그룹 A 내지 그룹 C로부터의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 16(A) 및 16(B)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 A의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 16(C) 및 16(D)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 16(E) 및 16(F)는 각각 50X의 확대율 200X의 확대율에서 그룹 C의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
도 17(A-F)는 그룹 A 내지 그룹 C로부터의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것이다. 도 17(A) 및 17(B)는 각각 50X의 확대율 400X의 확대율에서 그룹 A의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 17(C) 및 17(D)는 각각 50X의 확대율 400X의 확대율에서 그룹 B의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션을 도시한 것이다. 도 17(E) 및 17(F)는 각각 50X의 확대율 400X의 확대율에서 그룹 C의 간의 시리우스-레드 염색된 섹션을 도시한 것이다.
일부 구체예에서, 본 발명은 놀랍게도, 본원에 기술된 사이클로헥세논 화합물이 지방간 질환을 효과적으로 치료, 억제 및/또는 예방한다는 것을 발견하였다.
단수 용어는 물품의 하나 또는 하나 초과의 (즉, 적어도 하나의) 문법적 대상을 지칭한다.
용어 "치료하다," "치료" 또는 "치료하는"은 지방간 질환의 증상이 환자에 의해 경험되는 횟수, 크기, 중증도 및/또는 기간을 감소시키는 것을 의미한다.
용어 "예방하다," "예방" 또는 "예방하는"은 지방간 질환과 관련된 증상의 억제, 위험 감소, 발병의 감소, 또는 증상의 방지를 의미한다.
용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 자유 염기의 생물학적 효과성 및 성질을 보유하고 무기산 또는 유기산, 예를 들어 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, p-톨루엔설폰산, 살리실산, 말산, 말레산, 숙신산, 타르타르산, 시트르산, 등과의 반응에 의해 얻어진 염을 지칭한다.
용어 "유효량"은 지방간 질환을 치료, 억제 및/또는 예방하기 위해 효과적인 본원에 기술된 화합물의 양을 의미한다. 예를 들어, 본원에 기술된 화합물의 유효량은 지방 세포의 수를 감소시키고/거나, 간 크기를 감소시키고/거나, 지방 세포 침윤을 억제하고/거나(즉, 어느 정도까지 늦추고, 바람직하게 정지시키고), 염증 (간염), 반흔 (간경화증) 또는 괴사를 억제하고/거나(즉, 적어도 어느 정도까지 늦추고, 바람직하게 정지시키고), 질환과 관련된 증상들 중 하나 이상을 어느 정도까지 완화시킨다.
식물 및 버섯은 암을 치료하기 위해 신규하고 천연 유래된 제제의 발견 및 개발을 위한 가치있는 자원이다. 안트로디아 캄포라타(Antrodia camphorata)는 또한 창-지(Chang-Zhi), 니우 창-구(Niu Chang-Gu), 레드 캄포르 머쉬룸(red camphor mushroom), 등으로 불리워지며, 이는 목(order) 아필로포랄레스(Aphyllophorales), 과(family) 폴리포라세아에(Polyporaceae)에 속하는 다년생 버섯이다. 이는 신나모뭄 카네히라에(Cinnamomum kanehirae) 건초(Hay)의 내부의 썩은 심재 벽에 성장하는 대만의 고유 종이다. C. 카네히라이 건초는 드물게 분포되어 있고, 불법적으로 과다 벌채되고 있는데, 이는 야생에서 나무 내측에서 성장하는 A. 캄포라타를 더욱 드물게 만든다. A. 캄포라타의 가격은 6월에서 10월 사이에만 성장하는 천연 A. 캄포라타의 매우 느린 성장속도로 인하여 매우 고가이다. 전통적으로, A. 캄포라타는 식품, 알코올, 및 약물 중독, 설사, 복통, 고혈압, 피부 가려움, 및 간암을 위한 한방제(Chinese remedy)로서 사용된다. 트리테르페노이드는 A. 캄포라타의 여러 조성물들 중 가장 연구된 성분이다.
US 7,385,088호는 신규한 화합물 및 이의 용도, 특히 특정의 암 세포의 성장을 효과적으로 억제하는 A. 캄포라타(A. camphorata) 추출물로부터 단리된 안트로퀴노놀 B 및 안트로퀴노놀 C에 관한 것이다. US 7,342,137호는 A. 캄포레이트(A. camphorate)로부터 단리되고 정제된 추출물인, 사이클로헥세논 화합물, 및 종양 성장 억제에서의 이의 용도, 특히 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논을 제공한다. 또한, 화합물, 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논의 여러 용도가 개발되었다. US 7,411,003호에는 HBV를 억제하는데 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논의 용도가 기재되어 있다. US 7,456,225호에는 화학물질에 의해 유도된 간 손상 및 섬유증을 완화시키고 알라닌 아미노전이효소(ALT) 및 아스파르테이트 아미노전이효소(AST)의 혈청 수준을 감소시키는 것과 같은, 간 보호에서의 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논의 용도가 기재되어 있다. US 7,468,392호에는 피로를 지연시키는데 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6-10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논의 용도가 기재되어 있다. US 7,501,454호는 자기면역 질환을 치료하는데 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐- )-사이클로헥스-2-에논의 용도에 관한 것이다. US 8,236,860호는 췌장암 세포의 생존을 억제하는데 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5-(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논의 용도를 제공한다. US 20110060055, US 20110060056, US 20110060057, US 20110060058 및 US 20110060059호에는 림프종, 위암, 피부암, 난소암 및 방광암 세포 각각의 생존을 억제하는데 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐- )-사이클로헥스-2-에논의 용도가 기재되어 있다.
그러나, 종래 참조문헌에는 상술된 사이클로헥세논 화합물이 지방간 질환, 특히 NAFLD의 치료 및/또는 예방에서 사용될 수 있다는 것에 대해 교시되거나 시사되어 있지 않다.
이에 따라, 본 발명은 지방간 질환의 치료, 억제 및/또는 예방을 필요로 하는 환자에게 유효량의 하기 화학식 (I)의 사이클로헥세논 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사물, 용매화물 또는 프로드러그를 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에게서 지방간 질환을 치료, 억제 및/또는 예방하는 방법을 제공한다:
상기 식에서, X 및 Y 각각은 독립적으로 산소, NR5 또는 황이며;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8알킬이며;
R1, R2 및 R3 각각은 독립적으로 수소, 메틸 또는 (CH2)m-CH3이며;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 글루코실이며, 여기서, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 및 글루코실은 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환되며;
R5 및 R6 각각은 독립적으로 수소 또는 C1-C8알킬이며;
R7은 C1-C8알킬, OR5 또는 NR5R6이며;
m은 1 내지 12이며;
n은 1 내지 12이다.
일부 구체예에서, 지방간 질환은 원발성 지방간 질환 또는 속발성 지방간 질환이다. 일부 구체예에서, 속발성 지방간 질환은 알코올 간 질환, 만성 간염 감염증, 총 비경구 영양 (TPN), 라이 증후군, 위장 질병, 또는 위마비와 관련된 지방간 및 과민성 대장 (IBS) 질병이다. 특정 구체예에서, 지방간 질환은 간경화증 또는 섬유증이다.
일부 구체예에서, 하기 구조를 갖는 사이클로헥세논 화합물은 임의의 적합한 출발 물질로부터 합성적으로 또는 반-합성적으로 제조된다:
다른 구체예에서, 사이클로헥세논 화합물은 발효, 등에 의해 제조된다. 예를 들어, 화합물 1 (또한, AntroquinonolTM 또는 "Antroq"로서 알려짐) 또는 화합물 3은 일부 경우에서, 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸사이클로헥사-2,5-디에논으로부터 제조된다. 비제한적인 예시적인 화합물은 하기에 예시된다.
다른 구체예에서, 구조 
를 갖는 사이클로헥세논 화합물은 A, 캄포라타의 유기 용매 추출물로부터 단리된다. 일부 구체예에서, 유기 용매는 알코올 (예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 등), 에스테르 (예를 들어, 메틸 아세테이트, 에틸 아세테이트, 등), 알칸 (예를 들어, 펜탄, 헥산, 헵탄, 등), 할로겐화된 알칸 (예를 들어, 클로로메탄, 클로로에탄, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드, 등), 등으로부터 선택된다. 예를 들어, 예시적인 화합물 1 내지 7은 유기 용매 추출물로부터 단리된다. 특정 구체예에서, 유기 용매는 알코올이다. 특정 구체예에서, 알코올은 에탄올이다. 일부 구체예에서, 사이클로헥세논 화합물은 A. 캄포라타의 수성 추출물로부터 단리된다.
일부 구체예에서, R은 수소, C(=O)C3H8, C(=O)C2H5, 또는 C(=O)CH3이다. 일부 구체예에서, R1은 수소 또는 메틸이다. 특정 구체예에서, R2는 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실이다. 일부 구체예에서, R3은 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실이다. 일부 구체예에서, R4는 할로겐, NH2, NHCH3, N(CH3)2, OCH3, OC2H5, C(=O)CH3, C(=O)C2H5, C(=O)OCH3, C(=O)OC2H5, C(=O)NHCH3, C(=O)NHC2H5, C(=O)NH2, OC(=O)CH3, OC(=O)C2H5, OC(=O)OCH3, OC(=O)OC2H5, OC(=O)NHCH3, OC(=O)NHC2H5, 또는 OC(=O)NH2이다. 일부 구체예에서, R4는 C2H5C(CH3)2OH, C2H5C(CH3)2OCH3, CH2COOH, C2H5COOH, CH2OH, C2H5OH, CH2Ph, C2H5Ph, CH2CH=C(CH3)(CHO), CH2CH=C(CH3)(C(=O)CH3), 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 및 글루코실이며, 여기서, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 및 글루코실은 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 임의적으로 치환된다. 특정 구체예에서, R4는 CH2CH=C(CH3)2이다. 특정 구체예에서, 화합물은 
이다.
본 발명에 따르면, 일부 구체예에서, 본원에 제공된 화합물은 지방간 질환의 치료, 억제 및/또는 예방에서 사용된다. 지방간 질환 또는 간 질병의 예는 원발성 지방간 질환 NAFLD 및 NASH 및 속발성 지방간 질환 (예를 들어, 알코올성 간 질환 (ALD), 만성 간염 감염증, 총 비경구 영양 (TPN), 라이 증후군, 및 위장 질병과 관련된 지방간, 예를 들어 장 박테리아 과증식증 (IBO), 위마비, 과민성 대장 (IBS) 질병, 등)을 포함한다. 이러한 예는 단지 예로서 기술된 것으로서, 이러한 리스트(list)는 이러한 질환들에 대한 치료를 한정하는 것으로 의도되지 않는다.
병용 치료(combination treatment)
일부 구체예에서, 치료학적 유효 투약량은 약물이 치료 조합에서 사용될 때에 달라진다. 병용 치료는 환자의 임상 관리를 돕기 위하여 다양한 시간에 개시하고 정지하는 주기적인 치료를 추가로 포함한다. 본원에 기술된 병용 치료를 위하여, 동시에 투여되는 화합물의 투약량은 사용되는 보조-약물의 타입, 사용되는 특정 약물, 치료될 질환, 질병 또는 병태, 등에 따라 달라진다.
일부 구체예에서, 완화(relief)가 요구되는 병태(들)를 치료하거나, 예방하거나, 개선시키기 위한 투약 요법(dosage regimen)은 다양한 인자에 따라 변경된다. 이러한 인자는 피검체에게 고통을 주는 질병, 뿐만 아니라 피검체의 연령, 체중, 성별, 식사, 및 의학적 상태를 포함한다. 이에 따라, 다른 구체예에서, 투약 요법은 실제적으로 폭넓게 달라지고, 이에 따라 본원에 기술된 투약 요법에서 벗어난다.
화합물(즉, 본원에 기술된 사이클로헥세논 화합물)과 다른 지방간 질환 치료제의 조합이 포함되는 것으로 의도된다. 일부 구체예에서, 지방간 질환 치료제의 예는 하기를 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 에르고스테롤, 비타민 E, 셀레늄, 베타인, 인슐린 증감제 (예를 들어, 메트포르민, 피오글리타존, 로시글리타존, 티아졸리딘디온, 등), 및 스타틴, 등.
사이클로헥세논 화합물 및 본원에 기술된 다른 지방간 질환 치료제의 조합은 일부 구체예에서 다른 제제들과 함께 추가적인 치료 및 치료 요법을 포함한다. 이러한 추가적인 치료 및 치료 요법은 일부 구체예에서 다른 지방간 질환을 포함한다. 대안적으로, 다른 구체예에서, 추가적인 치료제 및 치료 요법은 지방간 질환과 관련된 부가 증상(adjunct condition) 또는 병용 치료에서 이러한 제제로부터의 부작용을 치료하기 위해 사용되는 다른 제제를 포함한다. 추가 구체예에서, 어주번트(adjuvant) 또는 인헨서(enhancer)는 본원에 기술된 병용 치료로 투여된다.
일부 구체예에서, 본 발명의 사이클로헥세논 화합물은 제2 성분으로 투여된다. 본 발명에 따르면, 제2 성분은 에르고스테롤이다. 에르고스테롤과 조합한 사이클로헥세논 화합물의 양은 각각 50% (w/w) 내지 90% (w/w) 및 50% (w/w) 내지 10% (w/w)의 범위이다. 일반적으로, 본원에 기술된 조성물, 및 본원에 기술된 작용 모드를 기초로 하여 병용 치료가 사용되는 구체예에서, 다른 제제는 동일한 약제 조성물에서 투여될 필요는 없으며, 일부 구체예에서, 상이한 물리적 및 화학적 특징으로 인하여, 상이한 경로에 의해 투여된다. 일부 구체예에서, 초기 투여는 설정된 프로토콜에 따라 이루어지며, 이후에, 관찰된 효과, 투약량, 투여 모드 및 투여 횟수를 기초로 하여, 숙련된 임상의에 의해 변형된다.
일부 구체예에서, 본원에 제공된 화합물은 경구, 비경구, 피하, 정맥내, 근육내, 복막내, 또는 경피를 포함하는 임의의 편리한 경로에 의해 투여된다. 투여되는 투약량은 수용체의 연령, 건강, 및 체중, 임의의 경우, 동시 치료의 부류, 및 요망되는 효과의 특성에 의존적이다.
일부 구체예에서, 투여를 위하여, 본원에 제공된 화합물은 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용되는 담체와 혼합되며, 이는 활성 화합물의 약제학적으로 하용되는 제조물로의 가공을 촉진시킨다. 적절한 제형은 선택된 투여의 경로에 의존적이다.
일부 구체예에서, 경구 투여를 위하여, 본원에 제공된 화합물은 별개의 유닛(unit), 예를 들어 각각이 사전 결정된 양의 본 발명의 화합물을 함유하는 캡슐, 사세트(cachet), 또는 정제로서; 분말 또는 과립으로서; 수성 액체 또는 비-수성 액체에서 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼으로서 제형화된다.
일부 구체예에서, 주사를 위하여, 본원에 제공된 화합물은 수용액에, 바람직하게 생리학적으로 혼화 가능한 완충제, 예를 들어 한크 용액, 링거 용액, 또는 생리학적 염수 완충제에서 제형화된다. 경점막 투여를 위하여, 침투될 배리어(barrier)에 대해 적절한 침투제(penetrant)는 제형에서 사용된다. 이러한 침투제, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜은 일반적으로 당해 분야에 공지되어 있다. 일부 구체예에서, 경구로 사용되는 약제 조성물은 푸시-피트(push-fit) 캡슐을 포함한다.
흡입에 의한 투여를 위하여, 본 발명에 따른 사용을 위한 분자는 편의상, 적합한 추진제, 예를 들어 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로-테트라플루오로에탄, 또는 이산화탄소를 사용하는 네불라이저 또는 가압 팩(pressurized pack)으로부터 에어로졸 스프레이 제공 형태로 전달된다. 가압 에어로졸의 경우에, 투약량 단위는 일부 구체예에서 계량된 양을 전달하기 위해 밸브를 제공함으로써 결정된다. 일부 구체예에서 폴리펩티드 및 적합한 분말 베이스, 예를 들어 락토오즈 또는 전분의 분말 혼합물을 함유한 예를 들어 흡입기 또는 취입기에서 사용하기 위한 젤라틴의 캡슐 및 카트리지가 제형화된다.
용량은 형성되는 화합물의 활성 및 피검체의 상태, 뿐만 아니라 치료될 피검체의 체중 또는 표면적에 의해 결정될 것이다. 용량의 크기 및 투약 요법(dosing regiment)은 또한, 특정 피검체에서 특정 화합물의 투여로 동반되는 부작용 효과의 존재, 특성, 및 크기에 의해 결정될 것이다. 투여될 화합물의 유효량을 결정함에 있어서, 전문의는 순환하는 혈장 수준, 독성, 및 질환의 진행을 평가할 필요가 있다.
실시예
실시예
1: 예시적인
사이클로헥세논
화합물의 단리
100 g의, A.캄포라타로부터의 균사, 자실체(fruiting body) 또는 둘 모두의 혼합물을 플라스크에 배치시켰다. 적절한 양의 물 및 알코올(70 내지 100% 알코올 용액)을 플라스크에 첨가하고, 20 내지 25℃에서 적어도 1시간 동안 교반하였다. 용액을 필터 및 0.45 ㎛(마이크로미터) 멤브레인을 통해 여과하고, 여액을 추출물로서 수집하였다. A. 캄포라타의 여액을 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 처리하였다. RP18 컬럼, 이동상으로서 메탄올 (A) 및 0.1 내지 0.5% 아세트산 (B), 1 ml/min의 유량에서, 95% 내지 20% B 중에서 0 내지 10분, 20% 내지 10% B 중에서 10 내지 20분, 10% 내지 10% B 중에서 20 내지 35분, 10% 내지 95% B 중에서 35 내지 40분의 구배를 사용하여 HPLC를 수행하였다. 유출액을 UV-가시광 검출기로 모니터링하였다.
25 내지 30분에서의 분획들을 수집하고, 농축시켜 화합물 1,4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5 (3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논, 엷은 황색 오일의 외관을 갖는 생성물을 수득하였다. 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5 (3,7,11-트리메틸-도데카-2,6,10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논의 분자식, 분자량 및 융점은 각각 C24H38O4, 390, 및 48℃ 내지 52℃이다. 화합물의 NMR 스펙트럼은 1H-NMR (CDCl3)δ(ppm)=1.51, 1.67, 1.71, 1.75, 1.94, 2.03, 2.07, 2.22, 2.25, 3.68, 4.05, 5.07, 및 5.14; 13C-NMR (CDCl3) δ(ppm)=12.31, 16.1, 16.12, 17.67, 25.67, 26.44, 26.74, 27.00, 39.71, 39.81, 4.027, 43.34, 59.22, 60.59, 120.97, 123.84, 124.30, 131.32, 135.35, 135.92, 138.05, 160.45, 및 197.12인 것으로 나타났다.
21.2 내지 21.4분에 수집된 분획들을 수집하고, 농축시켜 화합물 5, 엷은 황색 액체의 생성물을 수득하였다. 화합물 5는 408 (분자식: C24H40O5)의 분자량을 갖는 4-하이드록시-5-(11-하이드록시-3,7,11-트리메틸도데카-2,6-디에닐)-2,3-디메톡시-6-메틸사이클로헥스-2-에논인 것으로 분석되었다. 1H-NMR (CDCl3) δ (ppm)= 1.21, 1.36, 1.67, 1.71, 1.75, 1.94, 2.03, 2.07, 2.22, 2.25, 3.68, 4.05, 5.71 및 5.56. 13C-NMR(CDCl3) δ (ppm): 12.31, 16.1, 16.12, 17.67, 25.67, 26.44, 26.74, 27.00, 30.10, 40.27, 43.34, 59.22, 60.59, 71.8, 120.97, 123.84, 124.30, 131.32, 134.61, 135.92, 138.05, 160.45, 및 197.11.
화합물
5: 4
-하이드록시-5-(11-하이드록시-3,7,11-
트리메틸도데카
-2,6-
디에닐
)-2,3-디메톡시-6-메틸사이클로헥스-2-에논
23.7 내지 24.0분에서 수집된 분획들을 수집하고, 농축시켜, 화합물 7, 엷은 황색 액체의 생성물을 수득하였다. 화합물 7은 422 (C25H42O5)의 분자량을 갖는 4-하이드록시-2,3-디메톡시-5-(11-메톡시-3,7,11-트리메틸도데카-2,6-디에닐)-6-메틸사이클로헥스-2-에논인 것으로 분석되었다. 1H-NMR (CDCl3) δ (ppm) = 1.21, 1.36, 1.71, 1.75, 1.94, 2.03, 2.07, 2.22, 2.25, 3.24, 3.68, 4.05, 5.12, 5.50, 및 5.61. 13C-NMR(CDCl3)δ(ppm): 12.31, 16.1, 16.12, 17.67, 24.44, 26.44, 26.74, 27.00, 37.81, 39.81, 40.27, 43.34, 49.00, 59.22, 60.59, 120.97, 123.84, 124.30, 135.92, 138.05, 160.45 및 197.12.
화합물
7: 4
-하이드록시-2,3-
디메톡시
-5-(11-
메톡시
-3,7,11-
트리메틸도데카
-2,6-디에닐)-6-메틸사이클로헥스-2-에논
화합물 6, 화합물 1의 대사물을 동물 연구에서 화합물 1이 공급된 랫트들의 소변 샘플로부터 수득하였다. 화합물 6은 312 (C16H24O6)의 분자량을 갖는 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5-(3-메틸-2-헥센산)사이클로헥스-2-에논인 것으로 결정되었다. 3,4-디하이드록시-2-메톡시-6-메틸-5-(3,7,11-트리메틸도데카-2,6,10-트리에닐)사이클로헥스-2-에논 (376의 분자량, C23H36O4)으로서 결정된 화합물 4는, 화합물 1이 40℃ 이상의 조건 하에서 6시간 동안 있을 때에 수득되었다.
대안적으로, 예시적인 화합물들은 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸사이클로헥사-2,5-디에논, 등으로부터 제조될 수 있다.
유사하게, 구조 
를 갖는 다른 사이클로헥세논 화합물은 안트로디아 캄포라타로부터 단리되거나 적합한 출발 물질로부터 합성적으로 또는 반-합성적으로 제조된다. 당업자는 이러한 합성을 위한 적절한 조건을 용이하게 사용할 것이다.
실시예
2: 화합물 1 (4-하이드록시-2,3-
디메톡시
-6-
메틸
-5(3,7,11-
트리메틸
-
도데
카-2,6-10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논)에 의한 지방간 병태의 감소
고 칼로리 식품의 과도한 소비와 같은, 인간에서 건강치 않은 식사 경향을 시뮬레이션하기 위하여, 본 실시예는 고 지방 식사를 공급한 랫트를 사용하여 만성 간 손상의 효과를 평가하는 동물 모델을 구성한 것이다. 이후에, 효과는 화합물 1, 4-하이드록시-2,3-디메톡시-6-메틸-5(3,7,11-트리메틸-도데카-2,6-10-트리에닐)-사이클로헥스-2-에논(시험 화합물)과 같은 본원에 제공된 예시적 화합물의 지방간 감소를 입증하기 위한 생화학적 검정을 통해 나타낼 수 있다.
본 검정은 "대사 증후군(Metabolic Syndrome)" 모델을 통해 고 지방 식사에 의해 야기된 간 질환을 시뮬레이션한 것이다. 즉, 이러한 모델은 CCl4와 같은 독성 성분들에 의해 야기된 통상적인 화학물질 유도 모델과는 상이하다. 이러한 모델은 바이러스 또는 알코올에 의해 야기된 모델과는 구별될 수 있다.
장기간 고 지방 식사의 확립은 하기와 같이 기술된다. 첫째로, C57BL/6 마우스를 Charles River Laboratories Japan (Kanagawa, Japan)으로부터 획득하였다. 동물들을 특정-병원체-부재 (SPF) 조건들 하에서 하우징하였다. 생후 2일(2일째)에 스트렙토조톡신(streptozotocin; STZ)을 피하 주사함으로써 18마리의 수컷 마우스에서 간 손상을 발달시켰다. 4주 후에, 상업적인 고 지방 설치류 식사(CLEA JAPAN)를 임의로 공급하였다. 이러한 마우스들을 치료 전에 3개의 그룹으로 무작위화하였다. 시험 화합물을 3주 동안 하루에 두번씩 10 ml/kg의 용량으로 투여하였다. 대조군 (그룹 A)에서, 6마리의 랫트에 비히클 (Sigma Chemical Co.로부터의 옥수수 오일)을 삽관법으로 공급하였다. 그룹 B에서의 6마리의 랫트에 비히클 및 시험 화합물을 하루에 두번씩 48 mg/kg (하루에 96 mg/kg)의 용량으로 경구 투여하였다. 표 1은 연구 시간표를 요약한 것이다.
표 2는 치료 스케줄을 요약한 것이다.
조직학 분석
(1) HE 염색. HE 염색 방법은 하기와 같이 수행된다: 간 슬라이스(slice)들을 간 좌측으로부터 절단하고, Tissue-Tek® OCT™ Compoiunds(Sakura Finetek, Japan)에 엠베딩하고, 액체 질소에서 스냅 냉동시키고, -80℃에서 저장하였다. 5 ㎛ 섹션들로 절단하고, 공기-건조시키고, 아세톤에서 고정시키고, 다시 공기 건조시키고, 마지막으로 포스페이트 완충 염수(PBS)로 세척하였다. 이후에, 헤마톡실린 및 에오신 염색 방법에서, 간 섹션들을 1주일 동안 보우인(Bouin) 용액 (포르말린-아세트산)에서 사전고정하고, 이후에 릴리-마이어(Lillie-Mayer)의 헤마톡실린(Muto Pure Chemicals, Japan) 및 에오신 용액(Wako, Japan)으로 염색하여 지질 침착, 염증, 세포 괴사 및 섬유증을 시각화하거나 마손(Masson)의 트리크로믹 용액(trichromic solution)으로 염색하여 간 섬유증 발달의 세포외 기질 및 콜라겔 섬유를 시각화할 것이다.
(2) 시리우스 레드 염색. 시리우스 레드 염색 방법을 하기와 같이 수행한다: 간 슬라이스들을 간 좌측으로부터 절단하고, Tissue-Tek® OCT™ Compounds (Sakura Finetek, Japan)에서 엠베딩하고, 액체 질소에서 스냅 냉동시키고, -80℃에서 저장하였다. 5 ㎛ 섹션들로 절단하고, 공기-건조시키고, 아세톤에서 고정시키고, 다시 공기 건조시키고, 마지막으로 포스페이트 완충 염수(PBS)로 세척하였다. 이후에, 간 섹션들을 Picro-Sirius Red Solution(Waldeck GmbH & KG, Germany)으로 염색하여 콜라겐 침착을 관찰하였다.
(3) 콜라겐 타입 3의 면역조직 화학. 콜라겐 타입 3에 대한 면역조직 화학 검정을 하기와 같이 수행한다: 간 슬라이스들을 간 좌측으로부터 절단하고, Tissue-Tek® OCT™ Compounds (Sakura Finetek, Japan)에서 엠베딩하고, 액체 질소에서 스냅 냉동시키고, -80℃에서 저장하였다. 5 ㎛ 섹션들로 절단하고, 공기-건조시키고, 아세톤에서 고정시키고, 다시 공기 건조시키고, 마지막으로 포스페이트 완충 염수(PBS)로 세척하였다. 면역조직 화학을 위하여, 5분 동안 0.03% H2O2를 사용하고 이후에 10분 동안 Block Ace (Dainippon Sumitomo Pharm, Japan)와 함께 인큐베이션하여 내인성 퍼옥시다제 활성을 차단할 것이다. 이러한 섹션들을 4℃에서 밤새, 항-타입 3 콜라겐 항체의 최적의 희석액과 함께 인큐베이션할 것이다. 적절한 제2 항체와 함께 인큐베이션한 후에, 기질 반응들을 DAB/H202 용액(Nichirei, Japan)을 사용하여 수행한다.
전혈
및 혈장 생화학
(1) 전체 혈당. 혈액 샘플들을 심장 천자(cardiac puncture)에 의해 헤파린 처리된 시린지(Novo-Heparin 5,000 units/5 ml, Mochida Pharmaceutical, Japan)로 수집하고, 얼음 상에서 유지시키고, 4℃, 1,000 x g에서 15분 동안 원심분리하였다. 상청액을 수집하고, 사용할 때까지 -80℃에서 저장하였다. 혈당을 G Checker(Sanko Junyaku Co. Ltd., Japan)를 이용하여 전혈 샘플에서 측정하였다.
(2) 혈장 아스파르테이트 아미노전이효소(AST) 및 알라닌 아미노전이효소 (ALT). 혈장 AST 및 ALT의 검출을 하기와 같이 수행한다: 혈액 샘플들을 심장 천자에 의해 헤파린 처리된 시린지(Novo-Heparin 5,000 units/5 ml, Mochida Pharmaceutical, Japan)로 수집하고, 얼음 상에서 유지시키고, 4℃, 1,000 x g에서 15분 동안 원심분리하였다. 상청액을 수집하고, 사용할 때까지 -80℃에서 저장하였다. AST, ALT 수준을 FUJI DRY CHEM 7000 (Fuji Film, Japan)으로 측정하였다.
비-화학물질 손상에 의해 야기된 지방간 질환
도 1 내지 도 7은 A. 캄포라타 (화합물 1)로부터 추출된 예시적인 화합물이 비-화학물질 손상에 의해 야기된 지방간 질환의 정도를 효과적으로 감소시킨다는 것을 입증하는 것이다. 이러한 감소는 HE 염색, 시리우스 레드 염색 및 콜라겐 면역염색과 같은 조직학적 분석에 의한 그리고 추가로 혈당, 혈장 트리글리세라이드, 혈장 ALT 및 혈장 AST와 같은 혈장 생화학적 마커에 의해 지방 침착의 간 손상의 정도를 평가함으로써 평가된다.
HE 염색은 염증 세포 침윤, 및 거대- 및 미세-소포성 지방 침착 하에서 간 세포의 모폴로지(morphology)를 나타낸다. 도 1(A-D)는 그룹 A 및 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 여기서, 도 1(A) 및 1(C)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 1(B) 및 1(D)는 200X의 확대율을 도시한 것이다. 도 1(A) 및 1(B)에 도시된 바와 같이, 그룹 A (비히클) 다이아그램은 간 섹션에서 염증 세포의 침윤, 거대- 및 미세-소포성 지방 침착, 증식된 담관 및 간세포 벌루닝(hepato-cellular ballooning)을 나타낸다. 도 1(C) 및 1(D)에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 그룹 A와 비교하여 염증 세포의 침윤을 감소시키는 경향이 있고, 또한, 거대-소포성 지방 침착을 감소시키는 경향이 있다.
시리우스 레드 염색은 콜라겐 침착을 검출하기 위해 사용된다. 도 2는 그룹 A 및 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 여기서 도 2(A) 및 2(C)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 2(B) 및 2(D)는 200X의 확대율을 도시한 것이다. 도 2(A) 및 2(B)에 도시된 바와 같이, 그룹 A에서, 시리우스 레드 염색은 중심 정맥, 담관 및 퇴행성 간세포 주변에 콜라겐 침착을 나타낸다. 도 2(C) 및 2(D)에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료에서, 중심 정맥 및 담관 주변의 콜라겐 침착이 감소되었다.
콜라겐 타입 3 염색은 콜라겐 섬유의 분포를 검색하기 위해 사용된다. 도 3은 그룹 A 및 그룹 B의 간의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 여기서, 도 3(A) 및 3(C)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 3(B) 및 3(D)는 400X의 확대율을 도시한 것이다. 도 3(A) 및 3(B)에 도시된 바와 같이, 콜라겐 타입 3 염색은 비히클 대조군 그룹 A에서 담관 및 중심 정맥 둘레 및 유동 구역에서 콜라겐 섬유의 축적을 도시한 것이다. 도 3(C) 및 3(D)에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 유동 구역에서 콜라겐 섬유의 두께 및/또는 길이를 감소시키는 경향이 있다.
도 4는 그룹 A 및 그룹 B의 전체 혈당 농도 (mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다. 도 4에 도시된 바와 같이, 그룹 B 치료 (시험 화합물, 화합물 1)는 그룹 A 치료의 결과와 비교하여 전체 혈당 수준의 감소를 나타내었다 (그룹 A: 636 ± 137 mg/dL, 그룹 B : 580 ± 122 mg/dL).
도 5는 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 트리글리세라이드 (TG) 농도 (mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다. 도 5에 도시된 바와 같이, 그룹 B 치료 (시험 화합물, 화합물 1)는 그룹 A 치료의 결과와 비교하여 혈장 TG의 유의미한 감소를 나타내었다 (그룹 A: 643 ± 402 mg/dL, 그룹 B : 229 ± 144 mg/dL).
아스파르테이트 아미노전이효소 (AST) 및 알라닌 아미노전이효소 (ALT)는 인간 기관, 예를 들어, 간, 심장, 근육 등을 위한 아미노산 합성에서 중요한 효소이다. AST 및 ALT는 통상적으로, 간 건강을 결정하기 위하여, 간세포 손상의 진단 평가의 일부로서 임상적으로 측정된다. 혈청에서의 이러한 효소의 함량은 정상 상태에서 낮다. AST 및 ALT의 유의미하게 상승된 수준은 종종 간 손상의 존재를 시사하는 것이다. 도 6 및 도 7은 그룹 A 및 그룹 B 각각에 대한 혈장 AST 및 혈장 ALT 농도 (U/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다. 도 6에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 그룹 A (비히클) 치료와 비교하여 혈장 AST 수준을 약간 감소시키는 것으로 보인다 (그룹 A: 202 ± 177 U/L, 그룹 B: 141 ± 35 U/L). 도 7에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 그룹 A (비히클) 치료와 비교하여 혈장 ALT 수준을 약간 감소시키는 것으로 보인다 (그룹 A: 64 ± 64 U/L, 그룹 B: 34 ± 10 U/L).
요약하면, 시험 화합물 치료는 혈장 TG 수준을 감소시켜, 혈당 수준을 억제하는 경향이 있고, 혈장 AST 및 ALT를 약간 감소시켰다. 시험 화합물 치료는 또한, 염증 세포의 침윤 및 간 소엽(liver lobule)에서의 지방 침착을 감소시켰다. 또한, 시험 화합물은 시리우스 레드 염색 및 콜라겐 타입 3 염색 둘 모두에서 나타낸, 콜라겐 침착을 억제하는 경향이 있고, 이는 시험 화합물이 간 섬유증 지방간염에 대해 항-섬유증 효과를 갖는다는 것을 시사한다.
비-화학물질 손상에 의해 야기된
지방간염의
섬유증
도 8 내지 도 14는, 시험 화합물, 화합물 1이 비-화학물질 손상에 의해 유도된 지방간염 간 세포의 섬유증을 효과적으로 감소시키는 것을 도시한 것이다. 이러한 감소는 HE 염색, 시리우스 레드 염색 및 콜라겐 면역염색과 같은 조직학적 분석에 의해, 그리고 추가로 혈당, 혈장 알라닌 아미노전이효소 및 혈장 아스파르테이트 아미노전이효소와 같은 혈장 생화학적 마커에 의해 간 섬유증에서 간 손상의 정도를 평가함으로써 평가된다.
도 8은 그룹 A 및 그룹 B의 간의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 여기서, 도 8(A) 및 8(C)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 8(B) 및 8(D)는 200X의 확대율을 도시한 것이다. 도 8(A) 및 8(B)에 도시된 바와 같이, 그룹 A (비히클) 다이아그램은 간 섹션에서 염증 세포의 침윤, 거대 및 미세 소포성 지방 침착, 증식된 담관, 및 간세포 벌루닝을 나타낸다. 도 8(C) 및 8(D)에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 그룹 A와 비교하여 거대-소포성 지방 침착을 감소시키는 경향이 있다.
도 9는 그룹 A 및 그룹 B의 간의 시리우스-레드 염색의 예시적인 현미경 사진으로서, 여기서 도 9(A) 및 9(C)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 9(B) 및 9(D)는 200X의 확대율을 도시한 것이다. 도 9(A) 및 9(B)에 도시된 바와 같이, 그룹 A에서, 시리우스 레드 염색은 중심 정맥, 담관 및 퇴행성 간세포 둘레에 콜라겐 침착을 나타낸다. 그룹 A 치료에서, 중앙-대-중앙 브릿징 섬유증(central-to-central bridging fibrosis)이 관찰되는데, 이는 간 세포에서 심각한 섬유증을 나타내는 것이다. 도 9(C) 및 9(D)에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료에서, 중심 정맥 및 담관 둘레에 콜라겐 침착이 감소되었다.
도 10은 그룹 A 및 그룹 B의 간들의 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 여기서 도 10(A) 및 10(C)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 10(B) 및 10(D)는 400X의 확대율을 도시한 것이다. 도 10(A) 및 10(B)에 도시된 바와 같이, 콜라겐 타입 3 염색은 비히클 대조군 그룹 A에서 유동 구역(sinusoidal area)에 그리고 담관 및 중심 정맥 둘레에 콜라겐 섬유의 축적을 나타낸다. 도 10(C) 및 10(D)에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 유동 구역에서 콜라겐 섬유의 두께 및/또는 길이를 감소시키는 경향이 있다.
도 11은 그룹 A 및 그룹 B의 전체 혈당 농도 (mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다. 도 11에 도시된 바와 같이, 그룹 B 치료 (시험 화합물, 화합물 1)는 그룹 A 치료의 결과와 비교하여 전체 혈당 수준의 유의미한 감소를 나타내었다 (그룹 A: 728 ± 109 mg/dL, 그룹 B : 566 ± 65 mg/dL).
도 12는 그룹 A 및 그룹 B의 혈장 트리글리세라이드 (TG) 농도 (mg/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다. 도 12에 도시된 바와 같이, 그룹 B 치료 (시험 화합물, 화합물 1)는 그룹 A 치료의 결과와 비교하여 혈장 TG의 약간의 감소를 나타낸다 (그룹 A: 758 ± 877 mg/dL, 그룹 B : 704 ± 450 mg/dL).
도 13 및 도 14는 각각 그룹 A 및 그룹 B에 대한 혈장 AST 및 혈장 ALT 농도 (U/dL)의 다이아그램을 도시한 것이다. 도 13에서, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 그룹 A (비히클) 치료와 비교하여 혈장 AST 수준을 약간 증가시키지만, 그 변화는 유의미하지 않다 (그룹 A: 143 ± 42 U/L, 그룹 B: 167 ± 87 U/L). 도 14에 도시된 바와 같이, 그룹 B (시험 화합물, 화합물 1) 치료는 그룹 A (비히클) 치료와 비교하여 혈장 ALT를 감소시킨다 (그룹 A: 47 ± 22 U/L, 그룹 B: 38 ± 11 U/L).
요약하면, 시험 화합물 (예를 들어, 화합물 1)로의 치료는 혈당 수준, 혈장 TG 수준을 감소시켰고, 간 소엽에서의 지방 침착 및 ALT 수준을 감소시키는 경향이 있는데, 이는 본원에 제공된 사이클로헥세논 화합물이 지질 및 탄수화물 대사에 대한 완화 효과, 및 고-지방 식사에 의해 야기된 간 손상에 대한 보호 효과를 가짐을 시사한다. 또한, 예시적인 사이클로헥세논 화합물 (예를 들어, 화합물 1)은 시리우스 레드 염색 및 콜라겐 타입 3 염색 둘 모두에서 나타낸, 콜라겐 침착을 억제하는 경향이 있는데, 이는 본원에 제공된 사이클로헥세논 화합물이 간 지방간염에 대한 항-섬유증 효과를 가짐을 시시한다.
함께 고려하여, 본 발명은, 시험 화합물 치료가 특히, 고-지방 식사 치료로부터, 대사 증후군에 의해 유발된 지방간 질환 및 간 섬유증의 정도를 효과적으로 감소시킴을 성공적으로 입증하였다.
실시예
3: 화합물 1 및 에르고스테롤을 포함하는 조성물에 의한 지방간
병태
의 감소
시험 그룹 및 치료 스케줄을 제외하고, 대사 증후군 모델, 조직학 분석, 전혈 및 혈장 생화학 및 비-화학물질 손상에 의해 야기된 지방간 질환의 물질 및 공정은 실시예 2에 기술된 것들과 유사하다.
대조군 (그룹 A), 6마리의 랫트에 위관에 의해 비히클 (Sigma chemical co.로부터의 옥수수 오일)을 공급하였다. 그룹 B에서 6마리의 랫트에 경구로 비히클 및 1일 2회 48 mg/kg (하루에 96 mg/kg)의 용량의 시험 화합물 (화합물 1), 1일 2회 12 mg/kg (하루에 24 mg/kg)의 용량의 에르고스테롤을 투여하였다. 그룹 C에서 6마리의 마우스에 경구로 비히클 및 1일 2회 48 mg/kg (하루에 96 mg/kg)의 용량의 시험 화합물 (화합물 1)을 투여하였다.
하기 표 1은 연구 시간표 요약을 도시한 것이다.
표 2는 치료 스케줄을 나타낸 것이다.
HE 염색
도 15는 그룹 A 내지 그룹 C로부터 간들의 HE-염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 여기서 도 15(A), 15(C), 15(E)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 15(B), 15(D), 15(F)는 200X의 확대율을 도시한 것이다. 도 15(A) 및 15(B)에 도시된 바와 같이, 그룹 A 상(figure)은 간 섹션에서 염증 세포의 침윤, 거대- 및 미세 소포성 지방 침착, 증식된 담관 및 간세포 벌루닝을 나타내었다. 도 15(C) 및 15(D)에 도시된 바와 같이, 시험 화합물 (화합물 1) 및 에르고스테롤의 조합으로 치료는 거대 소포성 지방 침착 및 염증 세포의 침윤을 감소시켰다. 간세포에서 분열상(mitotic figure)의 수는 그룹 A와 비교하여 그룹 B에서 더욱 높다. 도 15(E) 및 15(F)에 도시된 바와 같이, 시험 화합물 단독으로의 치료는 거대 소포성 지방 침착을 감소시키는 경향이 있지만, 염증 세포의 침윤에 영향을 미치지 않았다.
도 15로부터, 시험 화합물 (화합물 1) 및 에르고스테롤 (그룹 B)로의 치료가 거대 소포성 지방 침착을 감소시키는 능력을 갖는 것으로 인식된다. 시험 화합물 단독으로의 치료 (그룹 C)와 비교하여, 시험 화합물 및 에르고스테롤로의 치료 (그룹 B)는 추가로 염증 세포 침윤을 억제하여, 그룹 C에 대해 보다 양호한 항-염증 효과를 나타낸다.
시리우스
레드
염색
도 16은 그룹 A 내지 그룹 C로부터의 간들의 시리우스-레드 염색의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 도 16(A), 16(C), 16(E)는 50X의 확대율을 도시한 것이며, 도 16(B), 16(D), 16(F)는 200X의 확대율을 도시한 것이다 도 16(A) 및 16(B)에 도시된 바와 같이, 그룹 A에서, 시리우스 레드 염색은 중심 정맥, 담관 및 퇴행성 세포 둘레에 콜라겐 침착을 나타내는데, 이는 중앙-대-중앙 브릿징 섬유증을 나타내고 심각한 섬유증 지방간염을 지시하는 것이다. 도 16(C) 및 16(D)에 도시된 바와 같이, 시험 화합물 (화합물 1) 및 에르고스테롤의 조합으로의 치료는 콜라겐 침착을 감소시키는 경향이 있다. 도 16(E) 및 16(F)에 도시된 바와 같이, 사이클로헥세논 단독 치료는 대조군에서와 비교하여 콜라겐 침착을 단지 약간 감소시키는 경향이 있다.
요약하면, 본원에 제공된 사이클로헥세온 화합물 (예를 들어, 화합물 1)로의 치료 및 에르고스테롤 치료 (그룹 B) 및 시험 화합물 단독으로의 치료 (그룹 C)는 콜라겐 침착을 억제하고, 이에 따라 간 섬유증을 방지하는 경향이 있다. 보다 상세하게, 본원에 제공된 사이클로헥세논 화합물 (예를 들어, 화합물 1) 및 에르고스테롤의 조합으로의 치료는 시험 화합물 단독으로의 치료와 비교하여 보다 양호한 항-간-섬유증 능력을 제공한다.
콜라겐 타입 3의 면역조직 화학
도 17은 그룹 A 내지 그룹 C로부터 간들로부터 콜라겐 타입 3-면역염색된 섹션들의 예시적인 현미경 사진을 도시한 것으로서, 여기서 도 17(A), 17(C), 17(E)는 100X의 확대율을 도시한 것이며, 도 17(B), 17(D), 17(F)는 400X의 확대율을 도시한 것이다. 도 17(A) 및 17(B)에 도시된 바와 같이, 콜라겐 타입 3 염색은 비히클 대조군에서 유동 구역에서 그리고 담관 및 중심 정맥 둘레에 콜라겐 섬유의 축적을 도시한 것이다. 도 17(C), 17(D), 17(E) 및 17(F)에 도시된 바와 같이, 사이클로헥세논 (예를 들어, 화합물 1) 및 에르고스테롤 치료의 조합, 및 사이클로헥세논 단독 치료는 유동 구역에서 콜라겐 섬유 두께의 감소에 의해 입증된 콜라겐 침착을 감소시키는 경향이 있으며, 이는 이의 항-섬유증 능력을 지시하는 것이다.
실시예
4: 당뇨병 및 추정
NAFLD에
걸린 환자에서 화합물 1의 연구
이러한 연구의 주요 목적은 제2형 진성 당뇨병(DM) 및 추정 비알코올성 지방간 질환(NAFLD)에 걸린 환자에서, 하기를 평가하기 위한 것이다:
● 다중 용량의 화합물 1의 안전성 및 내성;
● 인슐린 내성 및 글루코오스 항상성에 대한 화합물 1의 2회 용량 수준 (50 mg 및 100 mg)의 효과;
● 간 및 대사 기능 및 염증의 간 효소 및 생화학적 마커의 평가에 의해 측정하는 경우에 간세포 기능에 대한 화합물 1의 효과.
연구 타입: 개입(Interventional)
연구 디자인: 배분: 무작위화된
종점 분류: 안전성/효능 연구
개입 모델: 병행 배치
마스킹: 이중 블라인드(피검체, 조사관)
1차 목적: 치료
1차 결과 수단:
인슐린 내성 및 글루코오즈 항상성 [시간 프레임: 베이스라인 및 6주][안전성 이슈로서 지정: 아니오]
인슐린 내성 및 글루코오즈 항상성에서의 변화를 평가하는 1차 목적은 베이스라인(0일째)에서 그리고 치료의 6주(43일)의 마지막에 유글리세믹 클램프(euglycemic clamp) 절차를 수행함으로써 달성될 것이다.
2차 결과 수단:
간세포 기능 [시간 프레임: 베이스라인 및 6주][안전성 이슈로서 지정: 예]
간 및 대사 기능의 간 효소 및 생화학적 마커의 평가에 의해 측정하는 경우의 간세포 기능
상세한 설명:
이는 다중-중심, 이중-블라인드, 무작위화된, 플라시보-조절된, 다중-용량, 병행-그룹 연구이다. 12 환자의 3 코호트 각각은 6주 동안 매일 구강으로 플라시보, 50 mg 화합물 1, 또는 100 mg 화합물 1 중 어느 하나를 수용할 것이다.
인슐린 내성 및 글루코오즈 항상성의 변화를 평가하는 1차 목적은 베이스라인 (0일째) 및 6주 치료 (43일)의 마지막에 유글리세믹 클램프 절차를 수행함으로써 달성될 것이다. 다른 종점은 부정적인 경험; 생체 신호; 임상적인 실험실 수치; 혈장 약물 및 대사물 농도; 및 일반 건강 및 웰-빙(well-being)을 모니터링함으로써 평가될 것이다.
적격성(Eligibility)
연구를 위해 적격인 나이:18세 내지 75세
연구를 위해 적격인 성별: 둘 모두
건강한 지원자의 수용: 없음
포함 기준:
하기 기준들 중 하나로서, 미국 당뇨병 협회(ADA)에 의해 규정된 제2형 당뇨병:
75 g 경구 글루코오즈 내성 시험 (GTT) 동안 당뇨병의 증상 플러스 일반적인 혈장 글루코오즈 농도 >200 mg/dL (11.1 mmol/L) 또는 금식 혈장 글루코오즈 >126 mg/dL (7.0 mmol/L) 또는 2-시간 후-로드 글루코오즈 >200 mg/dL (11.1 mmol/L),
하기 기준들 중 하나에 의해 규정된 추정 NAFLD:
● 여성의 경우에 알라닌 아미노전이효소 (ALT) ≥47 U/L 및 남성의 경우에 ≥56 U/L
● 여성의 경우에 아스파르테이트 아미노전이효소 (AST) ≥47 U/L 및남성의 경우에 ≥60 U/L
● 적격화된 간(초음파 또는 다른 이미징 기술에 의해 구강으로)
● 종래 생검 상에서 나타낸 진단 조직학적 확인 (지난 5년에).
배제 기준:
빌리루빈 >2 × ULN
● 여성의 경우에 ALT >155 U/L 및 남성의 경우에 >185 U/L
● 여성의 경우에 AST >155 U/L 및 남성의 경우에 >200 U/L
● 메트포르민 및 설포닐우레아를 제외하고, 임의의 항당뇨병 약제를 섭취한 환자. HbA1c가 <11%인 경우에, 환자는 주요 주사관의 재량으로, 프로토콜에서 기술된 바와 같은 모든 다른 당뇨병 약제로부터 인출된 사람이 등록될 수 있다.
실시예
5: 경구 제형
경구 전달을 위한 약제 조성물을 제조하기 위하여, 100 mg의 예시적인 화합물 1을 100 mg의 옥수수 오일과 혼합하였다. 혼합물은 한 캡슐 중의 경구 투약량 단위로 도입되는데, 이는 경구 투여를 위해 적합하다.
일부 경우에, 100 mg의 본원에 제공된 화합물을 750 mg의 전분과 혼합하였다. 혼합물은 경질 젤라틴 캡슐과 같은, 경구 투약 단위로 도입되는데, 이는 경구 투여를 위해 적합하다.
실시예
6:
설하
(경질
로젠지
) 제형
협측 전달을 위한 약제 조성물, 예를 들어 경질 로젠지를 제조하기 위하여, 100 mg의 본원에 기술된 화합물을 1.6 mL의 연한 옥수수 시럽, 2.4 mL 증류수 및 0.42 mL 민트 추출물과 혼합된 420 mg의 분말화된 당과 혼합하였다. 혼합물을 온화하게 블렌딩하고, 모울드에 부어서 협측 투여를 위해 적합한 로젠지를 형성하였다.
실시예
7: 흡입 조성물
흡입 전달을 위한 약제 조성물을 제조하기 위하여, 20 mg의 본원에 기술된 화합물을 50 mg의 무수 시트르산, 및 100 mL의 0.9% 소듐 클로라이드 용액과 혼합하였다. 혼합물을 흡입 전달 유닛, 예를 들어 네불라이저로 도입하는데, 이는 흡입 투여를 위해 적합한 것이다.
본 발명의 바람직한 구체예들이 본원에 도시되고 기술되어 있지만, 이러한 구체예들이 단지 일 예로 제공되는 것은 당업자에게 자명할 것이다. 여러 변형, 변경, 및 치환은 본 발명으로부터 벗어나지 않으면서 당업자에게 일어날 것이다. 본원에 기술된 본 발명의 구체예들에 대한 다양한 변형예들이 본 발명르 실행시키는데 이용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 하기 청구항들이 본 발명의 범위를 규정하며, 이러한 청구범위 내의 방법 및 구조 및 이들의 균등물이 이에 의해 커버될 수 있는 것으로 의도된다.
Claims (18)
- 지방간 질환을 치료, 억제 및/또는 예방하는 것을 필요로 하는 환자에게 유효량의 하기 화학식 (I)의 사이클로헥세논 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사물, 용매화물 또는 프로드러그를 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 환자에게서 지방간 질환을 치료, 억제 및/또는 예방하는 방법:
상기 식에서, X 및 Y 각각은 독립적으로 산소, NR5 또는 황이며;
R은 수소 또는 C(=O)C1-C8알킬이며;
R1, R2 및 R3 각각은 독립적으로 수소, 메틸 또는 (CH2)m-CH3이며;
R4는 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, 할로겐, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 글루코실이며, 여기서, 5원 또는 6원 락톤, C1-C8알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 및 글루코실은 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환되며;
R5 및 R6 각각은 독립적으로 수소 또는 C1-C8알킬이며;
R7은 C1-C8알킬, OR5 또는 NR5R6이며;
m은 1 내지 12이며;
n은 1 내지 12이다. - 제1항에 있어서, 사이클로헥세논 화합물이 안트로디아 캄포라타(Antrodia camphorata)의 유기 용매 추출물들로부터 단리되는 방법.
- 제1항에 있어서, R이 수소, C(=O)C3H8, C(=O)C2H5, 또는 C(=O)CH3인 방법.
- 제1항에 있어서, R1이 수소 또는 메틸인 방법.
- 제1항에 있어서, R2가 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실인 방법.
- 제1항에 있어서, R4가 할로겐, NH2, NHCH3, N(CH3)2, OCH3, OC2H5, C(=O)CH3, C(=O)C2H5, C(=O)OCH3, C(=O)OC2H5, C(=O)NHCH3, C(=O)NHC2H5, C(=O)NH2, OC(=O)CH3, OC(=O)C2H5, OC(=O)OCH3, OC(=O)OC2H5, OC(=O)NHCH3, OC(=O)NHC2H5, 또는 OC(=O)NH2인 방법.
- 제1항에 있어서, R4가 C2H5C(CH3)2OH, C2H5C(CH3)2OCH3, CH2COOH, C2H5COOH, CH2OH, C2H5OH, CH2Ph, C2H5Ph, CH2CH=C(CH3)(CHO), CH2CH=C(CH3)(C(=O)CH3), 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 및 글루코실이며, 여기서 5원 또는 6원 락톤, C1-C8 알킬, C2-C8알케닐, C2-C8알키닐, 아릴, 및 글루코실이 NR5R6, OR5, OC(=O)R7, C(=O)OR5, C(=O)R5, C(=O)NR5R6, C1-C8 알킬, C2-C8 알케닐, C2-C8 알키닐, C3-C8 사이클로알킬, 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된 하나 이상의 치환체로 치환되거나 비치환된 방법.
- 제1항에 있어서, R4가 CH2CH=C(CH3)2인 방법.
- 제1항에 있어서, 화합물이 하기 화학식인 방법:
- 제1항에 있어서, 사이클로헥세논 화합물이 제2 성분으로 투여되는 방법.
- 제10항에 있어서, 제2 성분이 에르고스테롤인 방법.
- 제11항에 있어서, 에르고스테롤과 조합한 사이클로헥세논 화합물의 양이 각각 50% (w/w) 내지 90% (w/w), 및 50% (w/w) 내지 10% (w/w)의 범위인 방법.
- 제1항에 있어서, 지방간 질환이 원발성 지방간 질환 또는 속발성 지방간 질환인 방법.
- 제13항에 있어서, 원발성 지방간 질환이 비알코올성 지방간 질환 (NAFLD) 또는 비알코올성 지방간염 (NASH)인 방법.
- 제13항에 있어서, 속발성 지방간 질환이 알코올 간 질환, 만성 간염 감염증, 총 비경구 영양 (total parental nutrition; TPN), 라이 증후군, 위장 질병s 또는 위마비와 관련된 지방간 및 과민성 대장 (IBS) 질병인 방법.
- 제1항에 있어서, 지방간 질환이 간경화증 또는 섬유증인 방법.
- 제1항에 있어서, 사이클로헥세논 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사물, 용매화물 또는 프로드러그가 경구로, 비경구로 또는 정맥내로 투여되는 방법.
- 제17항에 있어서, 사이클로헥세논 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 대사물, 용매화물 또는 프로드러그가 경구로 투여되는 방법.
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