RU2325178C2 - Применение гедерагенин 3-о-альфа-l-рамнопиранозил (1→2)-[бета-d-глюкопиранозил (1→4)]-альфа-l-арабинопиранозида или содержащего его экстракта из pulsatillae radix в качестве терапевтического средства для солидных опухолей - Google Patents
Применение гедерагенин 3-о-альфа-l-рамнопиранозил (1→2)-[бета-d-глюкопиранозил (1→4)]-альфа-l-арабинопиранозида или содержащего его экстракта из pulsatillae radix в качестве терапевтического средства для солидных опухолей Download PDFInfo
- Publication number
- RU2325178C2 RU2325178C2 RU2003122817/15A RU2003122817A RU2325178C2 RU 2325178 C2 RU2325178 C2 RU 2325178C2 RU 2003122817/15 A RU2003122817/15 A RU 2003122817/15A RU 2003122817 A RU2003122817 A RU 2003122817A RU 2325178 C2 RU2325178 C2 RU 2325178C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- fraction
- pulsatillae radix
- cells
- solution
- water
- Prior art date
Links
- 239000009806 pulsatillae Substances 0.000 title claims abstract description 34
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 26
- GCGBHJLBFAPRDB-KCVAUKQGSA-N Scutellaric acid Natural products CC1(C)CC[C@@]2(CC[C@@]3(C)[C@@H]4CC[C@H]5[C@@](C)(CO)[C@H](O)CC[C@]5(C)[C@H]4CC=C3[C@@H]2C1)C(=O)O GCGBHJLBFAPRDB-KCVAUKQGSA-N 0.000 title claims abstract description 20
- PGOYMURMZNDHNS-MYPRUECHSA-N hederagenin Chemical compound C1C[C@H](O)[C@@](C)(CO)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C PGOYMURMZNDHNS-MYPRUECHSA-N 0.000 title claims abstract description 20
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 title abstract description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 title 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 27
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- NTWLPZMPTFQYQI-UHFFFAOYSA-N (3alpha)-olean-12-ene-3,23-diol Natural products C1CC(O)C(C)(CO)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C NTWLPZMPTFQYQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- GCGBHJLBFAPRDB-UHFFFAOYSA-N Hederagenin Natural products CC1(C)CCC2(CCC3(C)C4CCC5C(C)(CO)C(O)CCC5(C)C4CC=C3C2C1)C(=O)O GCGBHJLBFAPRDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 230000037396 body weight Effects 0.000 claims description 12
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 7
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 6
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 2
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 22
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 16
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 20
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 20
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 14
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 14
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 12
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 12
- 238000011160 research Methods 0.000 description 10
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 7
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 7
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 101150100424 SPX4 gene Proteins 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940009456 adriamycin Drugs 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 6
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 101150056821 spx1 gene Proteins 0.000 description 5
- 101150091285 spx2 gene Proteins 0.000 description 5
- 238000001644 13C nuclear magnetic resonance spectroscopy Methods 0.000 description 4
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 4
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 4
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 4
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 208000037841 lung tumor Diseases 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- RNYZJZKPGHQTJR-UHFFFAOYSA-N protoanemonin Chemical compound C=C1OC(=O)C=C1 RNYZJZKPGHQTJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 4
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 4
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 3
- 239000002075 main ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 3beta-hydroxyolean-12-en-28-oic acid Chemical class C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000206469 Pulsatilla Species 0.000 description 2
- 241000554910 Pulsatilla cernua var. koreana Species 0.000 description 2
- TYWXNGXVSZRXNA-NVZSGMJQSA-N Ranunculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC[C@@H]1C=CC(=O)O1 TYWXNGXVSZRXNA-NVZSGMJQSA-N 0.000 description 2
- TYWXNGXVSZRXNA-UHFFFAOYSA-N Ranunculin Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C=CC(=O)O1 TYWXNGXVSZRXNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 2
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 3-Epi-Betulin-Saeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C QGJZLNKBHJESQX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 3beta-Hydroxy-20(29)-Lupen-3,27-oic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C(O)=O)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C CLOUCVRNYSHRCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010001986 Amoebic dysentery Diseases 0.000 description 1
- JLUQTCXCAFSSLD-NXEZZACHSA-N Anemonin Chemical compound C1=CC(=O)O[C@]11[C@@]2(C=CC(=O)O2)CC1 JLUQTCXCAFSSLD-NXEZZACHSA-N 0.000 description 1
- JLUQTCXCAFSSLD-UHFFFAOYSA-N Anemonin Natural products C1=CC(=O)OC11C2(C=CC(=O)O2)CC1 JLUQTCXCAFSSLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007772 Anthriscus sylvestris Species 0.000 description 1
- 235000005749 Anthriscus sylvestris Nutrition 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N Betulinic acid Natural products CC(=C)[C@@H]1C[C@H]([C@H]2CC[C@]3(C)[C@H](CC[C@@H]4[C@@]5(C)CC[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]5CC[C@@]34C)[C@@H]12)C(=O)O DIZWSDNSTNAYHK-XGWVBXMLSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091026815 Competing endogenous RNA (CeRNA) Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- ZGLXUQQMLLIKAN-UHFFFAOYSA-N Deoxypicropodophyllin Natural products COC1=C(OC)C(OC)=CC(C2C3=CC=4OCOC=4C=C3CC3C2C(OC3)=O)=C1 ZGLXUQQMLLIKAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical group C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 description 1
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 240000002853 Nelumbo nucifera Species 0.000 description 1
- 235000006508 Nelumbo nucifera Nutrition 0.000 description 1
- 235000006510 Nelumbo pentapetala Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical group N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 240000003109 Persicaria chinensis Species 0.000 description 1
- 241000123887 Pulsatilla chinensis Species 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 241000218201 Ranunculaceae Species 0.000 description 1
- 241000557729 Serjania Species 0.000 description 1
- 241000224526 Trichomonas Species 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003793 antidiarrheal agent Substances 0.000 description 1
- 239000003212 astringent agent Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N betulinic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C(=C)C)[C@@H]5[C@H]4CC[C@@H]3[C@]21C QGJZLNKBHJESQX-FZFNOLFKSA-N 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000027503 bloody stool Diseases 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000007444 cell Immobilization Methods 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- ZGLXUQQMLLIKAN-SVIJTADQSA-N deoxypodophyllotoxin Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3C[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 ZGLXUQQMLLIKAN-SVIJTADQSA-N 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N dihydrobetulinic acid Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C(C)C)C5C4CCC3C21C PZXJOHSZQAEJFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 208000001780 epistaxis Diseases 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002874 hemostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004029 hydroxymethyl group Chemical group [H]OC([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005918 in vitro anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N nepehinol Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C)CCC(C(=C)C)C5C4CCC3C21C MQYXUWHLBZFQQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021055 solid food Nutrition 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000012192 staining solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N teicoplanin aglycone Chemical compound N([C@H](C(N[C@@H](C1=CC(O)=CC(O)=C1C=1C(O)=CC=C2C=1)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)OC=1C=C3C=C(C=1O)OC1=CC=C(C=C1Cl)C[C@H](C(=O)N1)NC([C@H](N)C=4C=C(O5)C(O)=CC=4)=O)C(=O)[C@@H]2NC(=O)[C@@H]3NC(=O)[C@@H]1C1=CC5=CC(O)=C1 DKVBOUDTNWVDEP-NJCHZNEYSA-N 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
- A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
- A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/24—Condensed ring systems having three or more rings
- C07H15/256—Polyterpene radicals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J63/00—Steroids in which the cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton has been modified by expansion of only one ring by one or two atoms
- C07J63/008—Expansion of ring D by one atom, e.g. D homo steroids
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
Изобретение относится к фармакологии, а именно к применению гедерагенин 3-O-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[b-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозида или содержащего его экстракта Pulsatillae radix и к применению водорастроримой фракции экстракта Pulsatillae radix, содержащей гедерагенин 3-O-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[b-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозида в качестве терапевтического средства для солидных опухолей. Средства обладают высокой степенью ингибирования роста опухолей на клетках солидных опухолей, имеют достаточно низкую токсичность, снижая побочные эффекты известных противоопухолевых агентов. 2 н. и 6 з. п. ф-лы, 4 ил., 3 табл.
Description
Данное изобретение относится к применению гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозида, который представлен следующей формулой (I):
или содержащего его экстракта из Pulsatillae radix в качестве терапевтического средства для солидных опухолей.
ПРОТОТИПЫ
Pulsatillae radix представляет высушенный корень вида Pulsatilla, принадлежащего к семейству Ranunculaceae (Ki Hwan Bae, Korean Medicinal Herbs, 1999). Согласно китайской медицине известно, что Pulsatillae radix обладает эффектами снятия повышенной температуры крови и детоксикации. Его также применяют в качестве противовоспалительного, вяжущего, кровоостанавливающего агента и агента против диареи и для лечения кровянистого стула, малярии, носового кровотечения и кровотечения из зубов. Его цветок называется Pulsatillae Flos и применяется для лечения малярии и оспы. Его листья называются Pulsatillae Folium и применяются для лечения боли в области талии, отеков или боли в сердце. Кроме того, сообщается, что отвар Pulsatillae radix оказывает антибактериальное действие против амебной дизентерии и пестицидное действие против Trichomonas.
Pulsatillae radix содержит около 9% сапонинов и к настоящему времени выделены такие ингредиенты, как протоанемонин, анемонин, ранункулин, гедерагенин, бетулиновая кислота, производные олеаноловой кислоты и их гликозиды, которые представлены следующими формулами (II):
Фармакологические эффекты указанных выше ингредиентов до сих пор широко не изучены, но сообщается, что протоанемонин обладает митотоксичностью (Vonderbank, F., Pharmazie 5, 210, 1950). Li и др. (Li, R. Z. и др., Yao Hsueh Hsueh Pao, 28, 326 31, 1993) сообщают также, что ранункулин обладает цитотоксичностью против КВ-клеток посредством ингибирования ДНК-полимеразы.
Гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид выделен из Pulsatilla cerna и P. koreana исследователями Shimozu и др. (Chem. Pharm. Bull., 26, 1666, 1978); из P. chinensis исследователями Yoshihiro и др. (J. Nat. Prod., 62, 1279, 1999) и из Serjania salzmanniana Schlecht исследователями Ekabo и др. (J. Nat. Prod., 59, 431, 1996). Kang и др. (Arch. Pharm. Res., 12(1), 42-47, 1989) также выделили его из P. koreana и подтвердили его структуру. Yoshihiro и др. в указанной выше статье сообщают, что гедерагенин и производные олеаноловой кислоты проявляют цитотоксичность против клеток HL-60 лейкемии человека. Они сообщают, что гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид, выделенный из китайского Pulsatillae radix (Pulsatilla chinensis) обладает слабой токсичностью, а именно 3,8 мкг/мл ED50, против клеток HL-60. Однако большинство сапонинов и многие виды природных продуктов обычно демонстрируют такой же уровень цитотоксичности, и, следовательно, нельзя сказать, что указанное выше соединение имеет основанную на этом противоопухолевую активность. Таким образом, не известно, что гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид обладает противоопухолевой активностью, в частности против солидных опухолей.
Заявители настоящего изобретения выделили деоксиподофиллотоксин из медицинских растений, включающих Anthriscus sylvestris Hoffman, Pulsatillae radix и др. и обнаружили, что данное вещество ингибирует рост клеток солидных опухолей посредством ингибирования ангиогенеза, и получили на него патент Кореи (патент Кореи №315200). Заявители настоящего изобретения провели широкие исследования по получению противоопухолевого средства из медицинских растений. В результате они получили из Pulsatillae radix фракцию, которая слабо растворима в органическом растворителе, но легко растворима в воде, и выделили из данной фракции противоопухолевое соединение, выполнив, таким образом, настоящее изобретение.
Таким образом, целью настоящего изобретения является обеспечение терапевтического средства для солидных опухолей, содержащего противоопухолевое соединение, выделенное из Pulsatillae radix, или фракцию из Pulsatillae radix, содержащую такое соединение в качестве активного ингредиента.
Один аспект настоящего изобретения обеспечивает терапевтическое средство для солидных опухолей, экстракт Pulsatillae radix, содержащий гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид в качестве активного ингредиента.
Используемое здесь выражение «солидные опухоли» обозначает любые опухоли за исключением раков крови, типичным примером которых является опухоль легких.
В настоящем изобретении экстракт Pulsatillae radix, содержащий гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид, можно получить экстракцией Pulsatillae radix водным раствором этанола и образованием осадков при добавлении туда ацетона с получением водорастворимой фракции (WT). Или его можно получить экстракцией Pulsatillae radix водным раствором этанола, образованием осадков при добавлении туда ацетона с получением водорастворимой фракции и пропусканием данной фракции через колонку Sephadex LH20 с получением фракции (SPX3), имеющей Rf 0,48-0,50 и дающей красное окрашивание, а затем синее окрашивание после опрыскивания серной кислотой с последующим нагреванием.
Другой аспект настоящего изобретения обеспечивает терапевтическое средство для солидных опухолей, включающее гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид в качестве активного ингредиента.
Здесь далее настоящее изобретение будет объяснено подробно.
Согласно настоящему изобретению экстракт Pulsatillae radix является экстрагированным при помощи 50% этанола с получением фракции WT, слабо растворимой в ацетоне, и далее данную фракцию очищают на Sephadex LH20, получая фракцию SPX3, и из фракции SPX3 в заключение получают чистый SB365. Данное соединение представляет гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид и проявляет более высокую противоопухолевую активность против солидных опухолей, образованных опухолевыми клетками легких мыши, клетками LLC (карцинома легких Льюиса), или опухолевыми клетками легких человека, клетками NCI-H23, чем клиническое лекарство адриамицин.
В частности, настоящий процесс получения противоопухолевой фракции из Pulsatillae radix и выделения из нее противоопухолевого вещества является следующим.
(1) Получение противоопухолевой фракции WT из Pulsatillae radix
Порошок Pulsatillae radix экстрагируют 50% водным раствором этанола и сушат при пониженном давлении. К полученному высушенному веществу добавляют ацетон в 5-10-кратном количестве. Смесь встряхивают, центрифугируют при 3000 об/мин и супернатант декантируют, получая нерастворимую часть. Указанный выше процесс повторяют дважды. Оставшаяся нерастворенная часть легко растворяется в воде, ее обозначают «фракция WT». Данная фракция демонстрирует относительно высокую противоопухолевую активность на мышах BDF1 с трансплантированными клетками LLC и на голых мышах с трансплантированными клетками NCI-H23.
(2) Получение фракции SPX3 из фракции WT
Данное количество фракции WT растворяют в данном количестве водного раствора метанола с различными концентрациями и затем фракционируют на колонке Sephadex LH20, стабилизированной тем же растворителем. В данном случае лучшего выделения достигают при использовании 80% водного раствора метанола, а подходящий размер наполненной колонки составляет 60×4 см для 500 мг фракции WT. В результате получают фракции SPX1 (номера исследовательских пробирок 26-66), SPX2 (номера исследовательских пробирок 66-91), SPX3 (номера исследовательских пробирок 91-111) и SPX4 (номера исследовательских пробирок 111-138). После опрыскивания серной кислотой фракций, полученных на пластине с силикагелем, и нагревания пластины фракция SPX3 дает с течением времени сначала красное окрашивание, а затем синее окрашивание и содержит в качестве основного ингредиента проявленное соединение с Rf 0,48-0,50. Показано, что она имеет высокую противоопухолевую активность у мышей BDF1 с трансплантированными клетками LLC и у голых мышей с трансплантированными клетками NCI-H23.
(3) Выделение SB365 из фракции SPX3
Для выделения противоопухолевого вещества из фракции SPX3, демонстрирующей противоопухолевую активность, проводят ВЭЖХ, получая чистое соединение SB365. Для идентификации структуры SB365 проводят реакцию Liberman-Burchard, исследования ИК, 1Н-ЯМР, 13С-ЯМР и гидролиз смесью этанол/серная кислота. В результате подтверждают, что SB365 является гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозидом, который представляет сапониновый ингредиент, который был выделен из Pulsatillae radix.
Экстракты Pulsatillae radix настоящего изобретения или выделенное из них чистое соединение SB365 обладают слабой цитотоксичностью против клеток солидных опухолей, но неожиданно демонстрируют превосходную противоопухолевую активность в экспериментах на животных. Таким образом, они могут решить проблемы, вызываемые предыдущими противоопухолевыми средствами при клиническом применении, например снижение иммунных реакций вследствие уменьшения клеток крови. Ожидают также, что они демонстрируют низкую токсичность относительно быстро делящихся клеток, таких как кроветворные клетки и др.
Фракции Pulsatillae radix и SB365 согласно настоящему изобретению можно объединять с обычно используемыми фармацевтически приемлемыми носителями и производить в виде различных препаратов, обычных в фармацевтической области, например препаратов для перорального приема, таких как растворы, суспензии и др.; препаратов для инъекций, таких как растворы или суспензии для инъекций, готовые к применению сухие порошки для инъекций и др.; препаратов локального применения, таких как мази, кремы и растворы. В частности, активный ингредиент настоящего изобретения растворим в воде и может быть растворен в различных растворах, таких как физиологический раствор, раствор Рингера, питательный раствор и др. Такие фармацевтические препараты можно вводить внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно или локально.
Рекомендуемая дозировка активного ингредиента настоящего изобретения человеку составляет 3,5-8,0 мг/кг веса тела в случае SB365, 20-40 мг/кг веса тела в случае фракции SPX3 или 200-300 мг/кг в случае фракции WT. Оптимальная дозировка составляет 6,5 мг/кг веса тела в случае SB365, 25 мг/кг веса тела в случае фракции SPX3 или 250 мг/кг веса тела в случае фракции WT. Однако такую дозировку можно регулировать подходящим образом в зависимости от возраста, веса тела, здоровья, тяжести заболевания пациентов.
На фиг.1 показаны образцы ТСХ на силикагеле фракции WT.
На фиг.2 показаны образцы ТСХ на силикагеле фракции SPX3, очищенной на колонке Sephadex LH20.
На фиг.3 представлена ВЭЖХ-хроматограмма фракции SPX3.
На фиг.4 представлена ВЭЖХ-хроматограмма SB365.
ЛУЧШИЙ СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ДАННОГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Данное изобретение будет лучше понятно из следующих примеров. Специалист в данной области легко оценит, что описанные конкретные вещества и результаты являются только иллюстративными, не предназначены для ограничения и не должны ограничивать данное изобретение, которое описано более подробно в следующей далее формуле изобретения.
Пример 1. Получение фракции WT
50 г порошка Pulsatillae radix трижды экстрагируют 500 мл 50% водного раствора этанола и сушат экстракт при пониженном давлении, получая 22 г высушенных веществ. К полученным высушенным веществам добавляют 300 мл ацетона и смесь встряхивают и центрифугируют при 3000 об/мин. Супернатант удаляют, получая осадок. С данным осадком дважды повторяют обработку ацетоном. Ацетоновый слой отбрасывают и сушат нерастворенную часть, получая 17,8 г высушенных веществ (фракция WT). Полученную фракцию WT подвергают ТСХ на силикагеле (проявляющий растворитель: смесь бутанол:уксусная кислота:вода в соотношении 4:1:1, цветная реакция: опрыскивание серной кислотой с последующим нагреванием). Результат показан на фиг.1. На фиг.1 синее пятно, имеющее Rf в диапазоне от 0,48 до 0,50, соответствует активному ингредиенту настоящего изобретения, который описан выше. Как показано ниже в экспериментальном примере 1, фракция WT демонстрирует относительно высокую противоопухолевую активность (степень ингибирования роста опухоли: 57%) на мышах BDF1 с трансплантированными клетками LLC.
Пример 2. Получение фракций SPX
560 мг фракции WT фракционируют далее на колонке Sephadex LH20 (200 г, 60×4 см), применяя смешанный раствор метанола и воды (80:20) со скоростью потока 1 мл/мин и объемом фракции 0,5 мл/пробирку. Данные фракции наносят на тонкий слой силикагеля по порядку и проявляют, получая фракции (проявляющий растворитель: смесь бутанол:уксусная кислота:вода в соотношении 4:1:1, цветная реакция: опрыскивание серной кислотой с последующим нагреванием). Результат показан на фиг.2. На фиг.2 SPX1 (139 мг, 24,8%) получена путем сбора исследовательских пробирок с номерами от 26 до 66 и состоит из 4 основных пятен, нижнее из которых дает желтое окрашивание после взаимодействия с серной кислотой. SPX2 (344 мг, 61,4%) получена путем сбора исследовательских пробирок с номерами от 66 до 91 и состоит из 2 основных пятен. SPX3 (61 мг, 10,9%) получена путем сбора исследовательских пробирок с номерами от 91 до 111 и дает с течением времени сначала красное окрашивание, а затем синее окрашивание после опрыскивания серной кислотой и последующего нагревания. Фракция SPX3 содержит пятно, имеющее Rf в диапазоне от 0,48 до 0,50, как основной ингредиент. SPX4 (15,7 мг, 2,8%) получена путем сбора исследовательских пробирок с номерами от 111 до 138. Фракции SPX3 и SPX4 имеют относительно высокую степень чистоты, демонстрируя одно пятно на тонком слое.
Как показано ниже в экспериментальном примере 1, фракция SPX3 демонстрирует 60% степень ингибирования роста опухоли через 15 дней после введения. В противоположность этому SPX1, SPX2 и SPX4 не демонстрируют никакого действия, и, таким образом, можно предположить, что вещество, дающее синее окрашивание с серной кислотой, представляет ингредиент с противоопухолевой активностью. Данную фракцию SPX3 можно применять в качестве противоопухолевого агента саму по себе.
Пример 3. Выделение SB365
Для выделения чистого вещества из фракции SPX3 проводят ВЭЖХ следующим образом.
В качестве неподвижной фазы применяют обращенно-фазный силикагель (RP-C18, 250×10 мм производства Metachem), а в качестве подвижной фазы применяют смешанный раствор метанола и воды (80:20). Длина волны детектирования составляет 210 нм, а скорость потока 1 мл/мин. Результат показан на фиг.3. Как показано на фиг.3, SPX3 состоит из 3 основных веществ. Из полученных фракционированных количеств пики при Rf 8,5 мин и 10,4 мин содержат небольшие количества ингредиентов, а пик при Rf 23,3 мин содержит основной ингредиент. Таким образом, предполагают, что последний обладает противоопухолевой активностью. Как описано выше, собирают вещество с Rf 23,3 мин, которое дает синее окрашивание с серной кислотой и является активным ингредиентом, для получения 2,8 мг SB365 из 31 мг SPX3. Собранную фракцию при Rf 23,3 мин сушат и подвергают ВЭЖХ при описанных выше условиях для определения чистоты. Результат показан на фиг.4. Фиг.4 подтверждает, что SB365 является чистым веществом. Полученное SB365 непосредственно применяют для структурной идентификации и исследования противоопухолевой активности, приведенного ниже.
Как показано ниже в экспериментальных примерах 1 и 2, SB365 демонстрирует 81% и 82,1% степень ингибирования роста опухоли на мышах BDF1 с трансплантированными клетками LLC и на голых мышах с трансплантированными клетками NCI-H23, соответственно, можно сказать, что это превосходная противоопухолевая активность.
Пример 4. Идентификация и подтверждение структуры активного соединения SB365
Выделенное выше соединение SB365 является белым аморфным веществом с т.пл. 239-241°С и [α]D+23,6° (c, 0,2, MeOH) и положительным в реакции Libermann-Buchard и, следовательно, подтверждено, что оно является гликозидом. Кроме того, в ИК-спектре (см-1) наблюдают пики при 3400 (широкий, -ОН), 2940 (широкий, С-Н), 1695 (С=О), 1455 и 1040 (С-О). Вещество считают гликозидом, исходя из пиков поглощения в диапазонах 1000-1100 и 3000-3400.
Согласно 1Н-ЯМР вещество имеет спектр ЯМР, типичный для сапонинов. Шесть групп -СН3 наблюдают при 0,91, 0,92, 0,98, 1,00, 1,07 и 1,21 м.д. и еще одну группу -СН3 наблюдают в виде дублета при 1,64 м.д. Из данного спектра можно видеть, что соединение содержит одну группу рамнозы в своих сахарных группах. Аномерные протоны наблюдают при 6,25 (широкий), 5,11 (1Н, J=7,80 Гц) и 4,97 м.д. (1Н, J=6,66 Гц). Таким образом, SB365 подтверждено как гликозид, имеющий три сахарных группы. Согласно 13С-ЯМР гидроксиметильную группу наблюдают при 65,4 м.д. (С-23) и три сигнала аномерных углеродов наблюдают при 104,2 (С-1'), 106,7 (C-1"') и 101,7 м.д. (С-1'). Два олефиновых углерода наблюдают при 122,5 м.д. (С-12) и 144,8 м.д. (С-13) и один карбоксильный углерод наблюдают при 180,2 м.д. (С-28). Вообще, если сахар связан по 28 положению (180,2 м.д. → 176,2 м.д.), то проявляется сильнопольный сдвиг гликозилирования около 4 Гц. В настоящем соединении указанное выше явление не наблюдается, и, следовательно, подтверждено, что соединение не имеет сахарной группы в 28 положении.
Затем соединение гидролизуют в смеси этанол/серная кислота для идентификации его сахарных групп и структуры агликона. SB365 подтверждают как гедерагенин после сравнения физико-химических данных продукта гидролиза агликона, данных 13С-ЯМР и 1Н-ЯМР. Кроме того, сравнительной ТСХ подтверждено, что гидролизованные сахара представляют рамнозу, арабинозу и глюкозу.
На основании приведенных выше результатов анализов и данных в опубликованной литературе подтверждают, что SB365 представляет гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид.
Данные 1Н-ЯМР и 13С-ЯМР соединения SB365 показаны в следующей таблице 1.
| Таблица 1 | |||||||
 |
|||||||
| Положение | 1Н (м.д.) | J (Гц) | 13С (м.д.) | Положение | 1Н (м.д.) | J (Гц) | 13С (м.д.) |
| С-1 | 38,9 | Арабиноза | |||||
| С-2 | 26,1 | С-1' | 4,97 д | 6,66 | 104,2 | ||
| С-3 | 3,28 д | 10,9 | 81,0 | С-2' | 80,4 | ||
| С-4 | 43,5 | С-3' | 75,4 | ||||
| С-5 | 48,1 | С-4' | 76,2 | ||||
| С-6 | 18,1 | С-5' | 63,9 | ||||
| С-7 | 32,8 | Рамноза | |||||
| С-8 | 39,7 | С-1" | 6,25 шир. | 101,7 | |||
| С-9 | 47,8 | С-2" | 72,3 | ||||
| С-10 | 36,9 | С-3" | 72,4 | ||||
| С-11 | 23,9 | С-4" | 74,1 | ||||
| С-12 | 5,45 с | 122,5 | С-5" | 69,6 | |||
| С-13 | 144,8 | С-6" | 1,64 | 5,94 | 18,6 | ||
| С-14 | 42,1 | Глюкоза | |||||
| С-15 | 28,3 | С-1"' | 5,11 д | 7,80 | 106,7 | ||
| С-16 | 23,8 | С-2"' | 75,0 | ||||
| С-17 | 46,2 | С-3"' | 78,5 | ||||
| С-18 | 41,9 | С-4"' | 71,2 | ||||
| С-19 | 46,4 | С-5"' | 78,8 | ||||
| С-20 | 30,9 | С-6"' | 62,5 | ||||
| С-21 | 34,2 | ||||||
| С-22 | 33,2 | ||||||
| С-23 | 4,36, 3,67 | Перекрывание | 65,4 | ||||
| С-24 | 1,07 с | 14,0 | |||||
| С-25 | 0,91 с | 16,0 | |||||
| С-26 | 0,98 с | 17,4 | |||||
| С-27 | 1,21 с | 26,3 | |||||
| С-28 | - | 180,2 | |||||
| С-29 | 0,92 с | 32,8 | |||||
| С-30 | 1,00 с | 23,7 | |||||
Пример 5: противоопухолевая активность на мышах BDF1 с трансплантированными клетками LLC
В данном эксперименте используют мышей BDF1, здоровых самцов мышей с весом тела 18-25 г. Данных животных снабжают водой и пищей без ограничения на месте с температурой, регулируемой в диапазоне 23-24°С, и кормят кормом для мышей без антибиотиков. Клетки LLC культивируют подкожно на мышах C57BL/6 в течение 14 дней. Отбирают ткань, содержащую клетки LLC, и добавляют туда стерилизованный холодный физиологический раствор (5 мл/г ткани), получая суспензию клеток. 0,2 мл суспензии клеток трансплантируют подкожно в паховую область мышей BDF1.
Через 24 ч после трансплантации указанных выше мышей делят на несколько групп, состоящих из 5 мышей. Затем образцы фракции WT, фракций SPX и SB365 растворяют в физиологическом растворе и вводят внутрибрюшинно при концентрации 280 мг/кг (WT), 70 мг/кг (SPX1), 171 мг/кг (SPX2), 30,5 мг/кг (SPX3), 8,1 мг/кг (SPX4) и 6,4 мг/кг (SB365). Отрицательной контрольной группе вводят только физиологический раствор, а положительной контрольной группе вводят адриамицин (0,5 мг/кг). Инъекции назначают, начиная от 24 ч после трансплантации опухоли, вводят образцы последовательно один раз в день в течение 7 дней, прекращают введение на один день и затем продолжают в течение 6 последующих дней.
Для оценки токсичности SB365 на мышах экспериментальных мышей взвешивают дважды в неделю. Противоопухолевую активность рассчитывают после измерения объема опухолей в контрольных и исследуемых группах на 14-й и 15-й день после введения образца следующим образом:
Объем опухоли (мм3) = длина (мм) × ширина2 (мм2)/2.
Степень ингибирования роста опухоли (%) = (С-Т) × 100/С.
(С: средний объем опухоли в контрольной группе; Т: средний объем опухоли в исследуемой группе). Результаты представлены в следующей таблице 2.
| Таблица 2 Степень ингибирования роста опухолей (IR, %) фракциями Pulsatillae radix и SB365 на мышах BDF1 с трансплантированными клетками LLC |
|||
| Фракции соединений | Количество мышей | Степень ингибирования роста опухоли (%) | |
| 14-й деньа) | 15-й деньа) | ||
| WT | 5 | 56 | 55 |
| SPX1 | 5 | 10 | 12 |
| SPX2 | 5 | 25 | 30 |
| SPX3 | 5 | 57 | 60 |
| SPX4 | 5 | 8 | 10 |
| SВ365 | 5 | 82 | 79 |
| Адриамицин | 5 | 60 | 64 |
| а) Дни после трансплантации опухолевых клеток | |||
Как показано выше в таблице 2, на 15-й день после трансплантации опухолевых клеток фракции WT и SPX3 демонстрируют степень ингибирования роста опухоли 55% и 60% соответственно, а SB365 демонстрирует степень ингибирования роста опухоли 79%, выше, чем адриамицин - 64%.
Пример 6. Противоопухолевая активность на голых мышах с трансплантированными клетками NCI-H23
В данном эксперименте используют в качестве подопытных животных самок голых мышей 5-недельного возраста весом 16-25 г, полученных от Harlan Co. (USA). Мышей используют после аклиматизации в течение 1 недели в асептической комнате для животных. В данной комнате для животных поддерживают температуру 22±2°С, влажность 55±5% и 12-часовой цикл свет-темнота, которые регулируются автоматически. Твердый корм для подопытных животных радиоактивно стерилизуют, а питьевую воду стерилизуют в автоклаве. Животных снабжают пищей и питьевой водой без ограничений. Используют клеточную линию опухоли человека из National Cancer Institute (NCI), USA и хранящуюся в Korean Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KRIBB), Korea. Из опухолевых клеток человека мышам трансплантируют опухолевые клетки легких, клетки NCI-H23. Опухолевые клетки с концентрацией 3×107 клеток/мл трансплантируют мышам подкожно при объеме 0,3 мл/20 г веса тела. Образцы вводят мышам внутрибрюшинно каждый день в течение 13 дней, а именно с 1-го по 14-й день, исключая 8-й день после трансплантации опухолевых клеток. Определяют размер образованной во время инъекции опухоли у каждого животного и также определяют любые изменения веса тела. На 16-й день после трансплантации опухолевых клеток голых мышей умерщвляют, а опухоль выделяют и взвешивают. Животным положительной контрольной группы вводят внутрибрюшинно адриамицин 0,5 мг/кг веса тела на 1-й, 5-й, 9-й и 14-й день. Результат показан далее в таблице 3.
| Таблица 3 Степень ингибирования роста опухоли (IR, %) посредством SB365 у голых мышей с трансплантированными клетками NCI-H23 |
|||||
| Группа | Степень ингибирования роста опухоли (%) у NCI-H23 | ||||
| Отриц. контроль | Адриамицин (0,5 мг/кг) | SB365 (1,6 мг/кг) | SB365 (3,2 мг/кг) | SB365 (6,4 мг/кг) | |
| 16-й деньа) | - | 61,5 | 40,1 | 52,3 | 82,1 |
| а) Дни после трансплантации опухолевых клеток | |||||
Как показано выше в таблице 3, SB365 в количестве 6,4 мг/кг демонстрирует высокую степень ингибирования роста опухоли 82,1% на 16-й день после трансплантации опухолевых клеток.
Пример 7. Исследование цитотоксичности
Опухолевые клетки A549, SK-MEL-2 и MCF-7 получают от KRIBB и используют в данном эксперименте. Питательную среду готовят, добавляя к стерилизованной дистиллированной воде для инъекций одну упаковку L-глутамин-содержащей среды RPMI1640, 100 мл сыворотки плода коровы (FBS), инактивированной нагреванием на водяной бане с температурой 50°С в течение 30 мин, 2 г NaHCO3, 100000 единиц пенициллина и 100 мг стрептомицина, регулируя рН смеси посредством 0,1 н. HCl, доводя общий объем до 1 л и дезинфицируя смесь фильтрованием, и хранят до использования при температуре 4°С. Клетки сохраняют посредством размножения один раз в три дня и для отделения клеток от стенок используют раствор, содержащий 0,5% трипсина и 2% ЭДТА в физиологическом буферном растворе (PBS).
Цитотоксичность опухолевых клеток определяют согласно способу с применением сульфородамина-В (SRB), разработанному NCI в 1989 г для определения in vitro противоопухолевой активности лекарств.
В частности, клетки отделяют от стенок при помощи 0,5% раствора трипсин-ЭДТА и затем готовят суспензию клеток 3-5×104 клеток/мл. Далее суспензию клеток добавляют к ячейкам 96-ячеечного планшета (180 мкл/ячейка) и инкубируют планшет в инкубаторе при 37оС, 5% СО2 в течение 24 ч.
Образец растворяют в диметилсульфоксиде (ДМСО) и разбавляют питательной средой или трижды дистиллированной водой, получая необходимые для эксперимента концентрации, и производят серийные разведения до конечной концентрации ДМСО 0,2% или менее. К каждой ячейке 96-ячеечного планшета добавляют 20 мкл серийно разведенных растворов образцов и затем инкубируют планшет в инкубаторе при 37°С, 5% СО2 в течение 48 ч. В момент Tz (нулевое время) при добавлении раствора образца собирают клетки на планшете. Удаляют среду из Tz-планшета и из каждого планшета по завершении инкубации и добавляют к планшетам 10% трихлоруксусную кислоту (ТСА) (50 мкл/ячейка). Полученные планшеты оставляют стоять в течение 1 ч при 4°С для иммобилизации клеток на дне планшетов. По завершении иммобилизации клеток планшеты промывают 5-6 раз водой для полного удаления оставшегося раствора ТСА и полученные пластины сушат при комнатной температуре, чтобы они не содержали воды.
К полностью высушенным планшетам добавляют 50 мкл окрашивающего раствора с 0,4% SRB в 1% уксусной кислоте, окрашивая клетки в течение 30 мин. Затем планшет промывают 5-6 раз 1% раствором уксусной кислоты для полного удаления SRB, не связанного с клетками. Планшеты сушат при комнатной температуре. Добавляют туда 100 мкл 10 мМ раствора Tris для растворения красителя. Затем измеряют OD (оптическую плотность) при помощи считывателя для микропланшетов при длине волны 520 нм.
Величину ED50 образца на опухолевых клетках [50% эффективная доза (нг/мл): концентрация, при которой рост опухолевых клеток ингибируется на 50%] рассчитывают следующим образом. Величину Tz определяют как значение OD в момент начала инкубации после добавления образца, величину С (контроль) определяют как значение OD ячейки, не обработанной образцом, и величину Т (тест) определяют как значение OD ячейки, обработанной образцом. Из величин Tz, С и Т определяют цитотоксичность агента по следующей формуле:
в случае Tz≥T, (T-Tz)/(C-Tz)×100,
в случае Tz<T, (T-Tz)/Tz×100.
Из рассчитанных выше величин получают значение ED50 образца, используя данные регрессионной функции программы Lotus.
В результате значение ED50 для SB365 на опухолевых клетках легких человека А549, клетках меланомы человека SK-MEL2 и опухолевых клетках молочной железы человека MCF7 составляет >20 мкг/мл, >10 мкг/мл и >10 мкг/мл соответственно. Следовательно, SB365 имеет низкую цитотоксичность на клетках солидных опухолей.
Пример 8. Получение раствора для инъекций, содержащего фракцию WT
250 мг фракции WT, полученной в примере 1, растворяют в 10 мл физиологического раствора, получая раствор для инъекций.
Пример 9. Получение сухого порошка для инъекций, содержащего фракцию SPX3
25 мг фракции SPX3, полученной в примере 2, растворяют в 10 мл раствора Рингера, стерилизуют и затем сушат вымораживанием, получая готовый к применению сухой порошок для инъекций. Перед применением данный порошок восстанавливают в дистиллированной воде для инъекций.
Пример 10. Получение раствора для инъекций, содержащего SВ365
6,5 мг SВ365, полученного в примере 3, растворяют в 10 мл раствора Рингера и стерилизуют, получая раствор для инъекций.
ПРОМЫШЛЕННАЯ ПРИМЕНИМОСТЬ
Фракции WT и SPX3 Pulsatillae radix и SB365, гедерагенин 3-О-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид, выделенный из фракций согласно настоящему изобретению, не только обладают высокой степенью ингибирования роста опухолей на клетках солидных опухолей, но также могут быть использованы обычным образом с растворением в различных растворах, включая физиологический раствор, раствор Рингера или питательный раствор, так как они легко растворимы в воде и имеют достаточно низкую токсичность, снижая побочные эффекты разработанных ранее противоопухолевых агентов. Таким образом, ожидается, что они очень полезны в качестве терапевтических средств для солидных опухолей.
Claims (8)
1. Применение водорастворимой фракции экстракта Pulsatillae radix, содержащей гедерагенин 3-O-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид, в качестве средства для лечения солидных опухолей.
2. Применение по п.1, где суточная доза средства, из расчета на действующее вещество, составляет от 200 до 300 мг/кг веса тела.
3. Применение по п.1, где экстракт Pulsatillae radix представляет фракцию с Rf в диапазоне от 0,48 до 0,50 и дает красное окрашивание, а затем синее окрашивание после опрыскивания серной кислотой с последующим нагреванием, и указанную фракцию получают путем экстракции Pulsatillae radix водным раствором этанола, с последующим осаждением осадка ацетоном с получением водорастворимой фракции и пропускания данной фракции через колонку Sephadex LH20.
4. Применение по п.3, где водорастворимую фракцию экстракта Pulsatillae radix вводят в суточной дозе от 20 до 40 мг/кг веса тела.
5. Применение по любому из пп.1-4, где водорастворимую фракцию экстракта Pulsatillae radix, предназначенную для введения, растворяют в растворе, выбранном из группы, состоящей из физиологического раствора, раствора Рингера и питательного раствора.
6. Применение гедерагенин 3-O-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозида в качестве действующего вещества лекарственного средства для лечения солидных опухолей.
7. Применение по п.6, где суточная доза гедерагенин 3-O-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозида составляет от 3,5 до 8 мг/кг веса тела.
8. Применение по п.6, где гедерагенин 3-O-α-L-рамнопиранозил(1→2)-[β-D-глюкопиранозил(1→4)]-α-L-арабинопиранозид, предназначенный для введения, растворяют в растворе, выбранном из группы, состоящей из физиологического раствора, раствора Рингера и питательного раствора.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR2002-43016 | 2002-07-22 | ||
| KR1020020043016A KR100568607B1 (ko) | 2002-07-22 | 2002-07-22 | 헤데라게닌3-Ｏ-α-Ｌ-람노피라노실(1→2)-[β-Ｄ-글루코피라노실(1→4)]-α-Ｌ-아라비노피라노사이드 또는 그를 함유하는백두옹 추출물의 고형암 치료제로서의 용도 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2003122817A RU2003122817A (ru) | 2005-01-27 |
| RU2325178C2 true RU2325178C2 (ru) | 2008-05-27 |
Family
ID=30439383
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2003122817/15A RU2325178C2 (ru) | 2002-07-22 | 2003-07-21 | Применение гедерагенин 3-о-альфа-l-рамнопиранозил (1→2)-[бета-d-глюкопиранозил (1→4)]-альфа-l-арабинопиранозида или содержащего его экстракта из pulsatillae radix в качестве терапевтического средства для солидных опухолей |
Country Status (15)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US20040082528A1 (ru) |
| EP (1) | EP1388542B1 (ru) |
| JP (1) | JP4642330B2 (ru) |
| KR (1) | KR100568607B1 (ru) |
| CN (1) | CN1308000C (ru) |
| AT (1) | ATE373670T1 (ru) |
| AU (1) | AU2003208120B2 (ru) |
| BR (1) | BR0302590A (ru) |
| CA (1) | CA2435524C (ru) |
| DE (1) | DE60316389T2 (ru) |
| DK (1) | DK1388542T3 (ru) |
| ES (1) | ES2292883T3 (ru) |
| MX (1) | MXPA03006473A (ru) |
| RU (1) | RU2325178C2 (ru) |
| TW (1) | TWI280881B (ru) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPP702498A0 (en) * | 1998-11-09 | 1998-12-03 | Silverbrook Research Pty Ltd | Image creation method and apparatus (ART77) |
| US20050163734A1 (en) * | 2002-09-23 | 2005-07-28 | Kim Jong S. | Cosmetic composition having whitening effect comprising extract of pulsatilla radix as main ingredient |
| KR100667955B1 (ko) * | 2004-05-07 | 2007-01-15 | 주식회사 에스비피 | 백두옹으로부터 분리된 트리터펜 사포닌 및 이를 포함하는항-고형암 조성물 |
| KR100628334B1 (ko) * | 2004-07-30 | 2006-09-27 | 김송배 | 백두옹의 항암효과를 증진시키는 방법 및 이 방법으로제조된 항암 조성물 |
| JP4892833B2 (ja) * | 2004-12-17 | 2012-03-07 | 大正製薬株式会社 | 脂肪吸収抑制剤 |
| JP5156394B2 (ja) * | 2005-02-03 | 2013-03-06 | エスケー ケミカルズ カンパニー リミテッド | 脳機能改善効果を有するオキナグサ抽出物 |
| KR100748248B1 (ko) * | 2006-06-26 | 2007-08-10 | 주식회사 에스비피 | 백두옹으로부터 분리된 트리터펜 사포닌 및 이를 포함하는항-고형암 조성물 |
| CN102199184B (zh) * | 2011-04-07 | 2013-03-06 | 江西本草天工科技有限责任公司 | 一种常春藤皂苷类衍生物、其盐的制备方法及其抗肿瘤的用途 |
| CN102178688B (zh) * | 2011-04-07 | 2012-11-21 | 江西本草天工科技有限责任公司 | 一种常春藤皂苷类成分的制备方法及其抗肿瘤的用途 |
| CN102633857A (zh) * | 2012-04-24 | 2012-08-15 | 吉林大学 | 一种常春藤皂苷元的提取方法 |
| JP2012246311A (ja) * | 2012-09-05 | 2012-12-13 | Sk Chemicals Co Ltd | 脳機能改善効果を有するオキナグサ抽出物 |
| CN104622880B (zh) * | 2015-02-09 | 2017-05-17 | 南京医科大学第一附属医院 | 一种抗肿瘤药物组合物 |
| CN104761610A (zh) * | 2015-02-10 | 2015-07-08 | 江西本草天工科技有限责任公司 | 一类新型的α-常春藤皂苷衍生物及其制备方法和用途 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| BE670523A (ru) * | 1964-10-09 | |||
| KR940000234B1 (ko) * | 1989-09-04 | 1994-01-12 | 김송배 | 신규 항암작용을 가지는 약학적 제제 및 제조방법 |
| US5098870A (en) * | 1990-07-12 | 1992-03-24 | Lanxide Technology Company, Lp | Process for preparing self-supporting bodies having controlled porosity and graded properties and products produced thereby |
| US5595756A (en) * | 1993-12-22 | 1997-01-21 | Inex Pharmaceuticals Corporation | Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents |
| KR0128494B1 (ko) * | 1994-07-26 | 1998-04-04 | 최무섭 | 색전이 없는 생약 추출물-함유 줄무늬 치약 조성물 |
| KR100205045B1 (ko) * | 1996-12-05 | 1999-06-15 | 김송배 | 신규한 트리테르펜 글리코사이드 화합물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 항암제 조성물 |
| WO1999001474A1 (en) * | 1997-07-02 | 1999-01-14 | Washington State University Research Foundation | Methods for the isolation of proteinase inhibitor proteins from potato tubers |
| KR19990016761A (ko) * | 1997-08-19 | 1999-03-15 | 김송배 | 신규한 트리테르펜 글리코사이드 화합물, 그의 제조방법 및 그를 함유하는 항암제 조성물 |
| KR100312622B1 (ko) * | 1998-11-03 | 2002-02-28 | 김송배 | 생약을주성분으로한안정화된항암제조성물및그제조방법 |
| KR100315200B1 (ko) | 1998-11-10 | 2002-03-21 | 김송배 | 데옥시포도필로톡신을유효성분으로함유하는고형암치료제조성물 |
| KR100340941B1 (ko) * | 1999-05-14 | 2002-06-20 | 김일웅 | 항 종양 효과가 있는 화합물 및 그것을 함유하는 항종양제 |
| US6767566B2 (en) * | 2001-07-06 | 2004-07-27 | Kemin Consumer Care, L.C. | Method of enhancing the extraction of proteinase inhibitors |
| US6686456B2 (en) * | 2001-07-06 | 2004-02-03 | Kemin Foods, L.C. | Method for the elimination of Kunitz and Bowman-Birk trypsin inhibitors and carboxypeptidase inhibitor from potato proteins |
-
2002
- 2002-07-22 KR KR1020020043016A patent/KR100568607B1/ko active IP Right Grant
-
2003
- 2003-07-03 AU AU2003208120A patent/AU2003208120B2/en not_active Ceased
- 2003-07-03 EP EP03015114A patent/EP1388542B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-03 DK DK03015114T patent/DK1388542T3/da active
- 2003-07-03 ES ES03015114T patent/ES2292883T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-03 AT AT03015114T patent/ATE373670T1/de active
- 2003-07-03 DE DE60316389T patent/DE60316389T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2003-07-14 TW TW092119105A patent/TWI280881B/zh not_active IP Right Cessation
- 2003-07-15 US US10/620,709 patent/US20040082528A1/en not_active Abandoned
- 2003-07-17 BR BR0302590-0A patent/BR0302590A/pt not_active Application Discontinuation
- 2003-07-18 CA CA002435524A patent/CA2435524C/en not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-18 MX MXPA03006473A patent/MXPA03006473A/es active IP Right Grant
- 2003-07-21 RU RU2003122817/15A patent/RU2325178C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2003-07-22 JP JP2003277209A patent/JP4642330B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2003-07-22 CN CNB031787975A patent/CN1308000C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-04-15 US US11/107,665 patent/US7682638B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2010
- 2010-02-22 US US12/709,907 patent/US8075923B2/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Chem. Pharm. Bull, 26, 1666, 1978 J. Nat. Prod., 59, 431, 1996. Полный справочник лекарственных растений. - М., 2001, с.89-90. ТЕЛЯТЬЕВ В.В. Целебные клады. - Иркутск, 1991, с.111-113. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1388542A1 (en) | 2004-02-11 |
| DK1388542T3 (da) | 2008-01-02 |
| AU2003208120B2 (en) | 2008-09-11 |
| TW200410704A (en) | 2004-07-01 |
| ATE373670T1 (de) | 2007-10-15 |
| MXPA03006473A (es) | 2004-02-04 |
| US8075923B2 (en) | 2011-12-13 |
| TWI280881B (en) | 2007-05-11 |
| JP4642330B2 (ja) | 2011-03-02 |
| EP1388542B1 (en) | 2007-09-19 |
| JP2004051641A (ja) | 2004-02-19 |
| CA2435524C (en) | 2009-11-03 |
| CA2435524A1 (en) | 2004-01-22 |
| DE60316389D1 (de) | 2007-10-31 |
| CN1494910A (zh) | 2004-05-12 |
| ES2292883T3 (es) | 2008-03-16 |
| US20040082528A1 (en) | 2004-04-29 |
| AU2003208120A1 (en) | 2004-02-05 |
| KR100568607B1 (ko) | 2006-04-07 |
| CN1308000C (zh) | 2007-04-04 |
| US20050239718A1 (en) | 2005-10-27 |
| BR0302590A (pt) | 2004-08-24 |
| US7682638B2 (en) | 2010-03-23 |
| DE60316389T2 (de) | 2008-06-26 |
| RU2003122817A (ru) | 2005-01-27 |
| KR20040009172A (ko) | 2004-01-31 |
| US20100152124A1 (en) | 2010-06-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8075923B2 (en) | Use of hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4)-α-L-arabinopyranoside or an extract from pulsatillae radix containing the same as a therapeutic agent for solid tumors | |
| KR102432797B1 (ko) | 오리나무 추출물로부터 분리된 화합물 3-5를 함유하는 골격근 근육관련 질환의 예방 및 치료용 조성물 | |
| CN102219821A (zh) | 一类强心苷类化合物及其抗肿瘤用途 | |
| EP3156058B1 (en) | Anti-tumor pharmaceutical application of pentacyclic triterpene saponin compounds of szechuan melandium root | |
| KR102135797B1 (ko) | 아욱 유래 글리코실 글리세라이드를 포함하는 암 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN112979833B (zh) | 一种具有肿瘤微血管抑制作用的血红栓菌总多糖及其应用 | |
| CN101948453B (zh) | Neo-克罗烷型二萜化合物及其应用 | |
| CN1253464C (zh) | 安丝菌素苷类化合物及其药物组合物，其制备方法及其应用 | |
| KR100628209B1 (ko) | 헤데라게닌3-Ｏ-α-Ｌ-람노피라노실(1→2)-[β-Ｄ-글루코피라노실(1→4)]-α-Ｌ-아라비노피라노사이드 또는 그를 함유하는백두옹 추출물의 고형암 치료제로서의 용도 | |
| KR20200088231A (ko) | 차가버섯 추출물을 포함하는 방사선 내성 암 예방, 치료 또는 개선용 조성물 | |
| KR101021975B1 (ko) | 암에 대한 방사선 치료 증진용 조성물 | |
| KR100485936B1 (ko) | 진세노사이드 Rh2 및 Rg3 항암 조성물 | |
| CN1962684B (zh) | 一类三萜皂苷化合物、其制备方法及用途 | |
| CN116947794B (zh) | 一种四环环系重排桉烷型倍半萜类化合物及其制备方法和应用、药物组合物及其应用 | |
| KR20230116980A (ko) | 연교 추출물을 포함하는 염증성 장질환 개선용 조성물 | |
| KR20050011211A (ko) | 신생혈관 형성 저해 효과를 갖는 장생도라지 추출물 | |
| KR101655180B1 (ko) | 만병초 추출물 또는 이로부터 분리된 메가스티그메인 배당체를 함유하는 패혈증의 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR20220071521A (ko) | 오미자 열매 유래 디벤조사이클로옥타디엔 리그난을 포함하는 항암 조성물 | |
| KR20050011214A (ko) | 항암 및 암전이 억제효과를 갖는 장생도라지 추출물 | |
| CN114349723A (zh) | 多烯炔类化合物及其制备方法和应用 | |
| KR20150098599A (ko) | 만병초 추출물 또는 이로부터 분리된 메가스티그메인 배당체를 함유하는 패혈증의 예방 또는 치료용 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20180722 |