RU2143889C1 - Способ стабилизации полипептида, способы получения композиций полипептида и композиции - Google Patents
Способ стабилизации полипептида, способы получения композиций полипептида и композиции Download PDFInfo
- Publication number
- RU2143889C1 RU2143889C1 RU95118293A RU95118293A RU2143889C1 RU 2143889 C1 RU2143889 C1 RU 2143889C1 RU 95118293 A RU95118293 A RU 95118293A RU 95118293 A RU95118293 A RU 95118293A RU 2143889 C1 RU2143889 C1 RU 2143889C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- polypeptide
- trehalose
- organic solvent
- methylene chloride
- composition according
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 133
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims abstract description 132
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 132
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 111
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 title abstract description 15
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 title abstract description 15
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 46
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 claims abstract description 40
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 claims abstract description 21
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims abstract description 15
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims abstract description 5
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical group ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 159
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical group CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 48
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 22
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 14
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 claims description 7
- -1 trehalose polyol Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 5
- 102000018997 Growth Hormone Human genes 0.000 claims description 4
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 4
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 claims description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims description 3
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 claims description 2
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008362 succinate buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 67
- 239000000854 Human Growth Hormone Substances 0.000 description 58
- 102000002265 Human Growth Hormone Human genes 0.000 description 58
- 108010000521 Human Growth Hormone Proteins 0.000 description 58
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 40
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 40
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 40
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 40
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 25
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 25
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 16
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 15
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 15
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 15
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 14
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 12
- SEBPXHSZHLFWRL-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydro-2,2,5,7,8-pentamethyl-2h-1-benzopyran-6-ol Chemical compound O1C(C)(C)CCC2=C1C(C)=C(C)C(O)=C2C SEBPXHSZHLFWRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 11
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 11
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 11
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 10
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 10
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 10
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 10
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 9
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 9
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 8
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 6
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical class OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 6
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 6
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 6
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 6
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 6
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 6
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 5
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 5
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 4
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 4
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 4
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000013011 aqueous formulation Substances 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 3
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 3
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 2
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 2
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical compound COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000751 protein extraction Methods 0.000 description 2
- 229940074404 sodium succinate Drugs 0.000 description 2
- ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L sodium succinate (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)CCC([O-])=O ZDQYSKICYIVCPN-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-amino-5-ethoxy-5-oxopentanoic acid Chemical compound CCOC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O XMQUEQJCYRFIQS-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyacetic acid;2-hydroxypropanoic acid Chemical compound OCC(O)=O.CC(O)C(O)=O XBBVURRQGJPTHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 102000004411 Antithrombin III Human genes 0.000 description 1
- 108090000935 Antithrombin III Proteins 0.000 description 1
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 1
- 239000004381 Choline salt Substances 0.000 description 1
- ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L EDTA disodium salt (anhydrous) Chemical compound [Na+].[Na+].OC(=O)CN(CC([O-])=O)CCN(CC(O)=O)CC([O-])=O ZGTMUACCHSMWAC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 108010010369 HIV Protease Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241001460678 Napo <wasp> Species 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000007605 air drying Methods 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 229940124277 aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- WGYFACNYUJGZQO-UHFFFAOYSA-N aminomethanetriol Chemical class NC(O)(O)O WGYFACNYUJGZQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229960005348 antithrombin iii Drugs 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960003872 benzethonium Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 235000019417 choline salt Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 239000003405 delayed action preparation Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000013583 drug formulation Substances 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001600 hydrophobic polymer Polymers 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229940100630 metacresol Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000002663 nebulization Methods 0.000 description 1
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 1
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N pentaerythritol Chemical compound OCC(CO)(CO)CO WXZMFSXDPGVJKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N phencyclidine Chemical class C1CCCCN1C1(C=2C=CC=CC=2)CCCCC1 JTJMJGYZQZDUJJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 229940116406 poloxamer 184 Drugs 0.000 description 1
- 229940044519 poloxamer 188 Drugs 0.000 description 1
- 229920002338 polyhydroxyethylmethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000029983 protein stabilization Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 150000003248 quinolines Chemical class 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1682—Processes
- A61K9/1694—Processes resulting in granules or microspheres of the matrix type containing more than 5% of excipient
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине. Описаны способы и композиции для стабилизации наполнителями сухих и водных форм полипептидов, обрабатываемых органическими растворителями. Для этого полипептид смешивают с полиолом, представляющим собой трегалозу, а затем обрабатывают органическим растворителем и инкапсулируют в полимерную матрицу, где полимер представляет собой полилактид. Способ обеспечивает защиту полипептида от денатурации при обработке органическим растворителем. 4 с. и 26 з.п.ф-лы, 8 табл.
Description
Изобретение относится к применению наполнителей (основ) для стабилизации как сухих, так и водных препаратов полипептидов, обрабатываемых органическими растворителями.
Фармацевтические препараты полипептидов чувствительны к денатурации и деградации при изготовлении лекарственной формы и хранении. Для стабилизации белков и других макромолекул в водных препаратах и при воздушной сушке или лиофилизации из водных растворов использовались полиолы.
В патенте США 4297344 раскрывается стабилизация факторов коагуляции II и VIII, антитромбина III и плазминогена при нагревании путем добавления избранных аминокислот, таких как глицин, аланин, гидроксипролин, глютамин и аминомасляная кислота, и углевода, такого как моносахарид, олигосахарид или сахар-спирт.
В публикации Европейской патентной заявки N 0303746 раскрывается стабилизация гормонов, стимулирующих рост, с помощью полиолов, состоящих из невосстанавливающих cахаров, сахаров-спиртов, сахаров-кислот, пентаэритритола, лактозы, водорастворимых декстранов и фиколла, аминокислот, полимеров аминокислот, имеющих заряженные боковые группы при физиологическом pH, и солей холина.
В публикации Европейской патентной заявки N 0193917 раскрывается биологически активная композиция с медленным выделением активного вещества, отличающаяся тем, что представляет собой водный раствор комплекса, образованного белком и углеводом.
В Австралийской патентной заявке N AU-A-30771/89 раскрывается стабилизация гормона роста с использованием глицина и маннитола.
В патенте США 5096885 раскрывается рецептура человеческого гормона роста для лиофилизации, содержащая глицин, маннитол, неионный сурфактант и буфер.
Использование полиэтиленгликолей для стабилизации белков обобщается в Pharm. Res. 8:285-291, 1991.
Примеры использования трегалозы и других полиолов для стабилизации белков во время сушки в водных системах содержатся в следующих публикациях.
В патенте США N 4891319 раскрывается консервирование чувствительных протеинов и других макромолекул в водных системах с помощью высушивания при комнатной температуре и атмосферном давлении в присутствии трегалозы.
В патенте США 5149653 раскрывается метод консервирования живых вирусов в водной системе путем высушивания в замороженном состоянии или при комнатной температуре в присутствии трегалозы.
Полиолы также использовались для стабилизации сухих лекарственных форм, например, таких как в заявке WO 8903671, поданной 5 мая 1989, в котором раскрывается добавление стабилизатора, такого как желатин, альбумин, декстран или трегалоза, к смеси тонко измельченного лекарства, суспендированного в масляной среде.
Обработка полипептида органическим растворителем, таким как метиленхлорид, создает проблему денатурации интересующего полипептида. Таким образом, цель данного изобретения состоит в создании способа стабилизации полипептидов в водных препаратах, обрабатываемых органическими растворителями.
Другой целью этого изобретения является стабилизация сухих полипептидов, обрабатываемых органическими растворителями.
Дополнительной целью изобретения является создание способа стабилизации инкапсулированных полипептидов.
Еще одной целью изобретения является получение полипептида, стабилизированного наполнителем (основой) для применения в лекарственной форме с регулируемым выделением, причем полипептид обработан органическим растворителем.
В одном аспекте изобретение представляет способ стабилизации полипептида от денатурации, при обработке органическим растворителем, причем способ включает смешивание полипептида с полиолом, при этом молекулярный вес полиола меньше примерно 70000 kD.
В другом аспекте изобретение представляет способ получения композиции полипептида, включающий
а) смешивание полипептида в водном растворе с полиолом, имеющим молекулярный вес меньше примерно 70000kD, и
b) обработку полипептида в водном растворе органическим растворителем.
а) смешивание полипептида в водном растворе с полиолом, имеющим молекулярный вес меньше примерно 70000kD, и
b) обработку полипептида в водном растворе органическим растворителем.
В другом аспекте это изобретение представляет способ получения композиции сухого полипептида с регулируемым выделением, включающий
а) смешивание полипептида с наполнителем, причем указанный наполнитель является полиолом, имеющим молекулярный вес меньше примерно 70000 kD, и
b) обработку продукта со стадии а) органическим растворителем.
а) смешивание полипептида с наполнителем, причем указанный наполнитель является полиолом, имеющим молекулярный вес меньше примерно 70000 kD, и
b) обработку продукта со стадии а) органическим растворителем.
Еще в одном аспекте это изобретение представляет композицию с регулируемым выделением полипептида, содержащую полипептид, смешанный с наполнителем, причем наполнитель является полиолом, имеющим молекулярный вес меньше 70000 kD, при этом полипептид, смешанный с наполнителем, обрабатывается органическим растворителем и инкапсулируется в полимерную матрицу.
Термин "полиол", который используется в описании изобретения, обозначает углевод, содержащий по крайней мере два гидроксила, связанные с атомами углерода. Полиолы могут содержать другие функциональные группы. Примеры полиолов, применимых для практического осуществления данного изобретения, включают сахара-спирты, такие как маннитол и трегалоза, и полиэфиры.
Термин "полиэфир", который использован в описании, обозначает углевод, содержащий по крайней мере три эфирные связи. Полиэфиры могут включать другие функциональные группы. Полиэфиры, применимые для практического осуществления изобретения, включают полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Термин "сухой полипептид", который использован в описании, обозначает полипептид, который подвергался процедуре высушивания, такой как лиофилизация, так что по крайней мере 50% влаги удаляется.
Термин "инкапсулирование" обозначает способ получения лекарственной формы терапевтического вещества, такого как полипептид в виде композиции, применимой для регулируемого выделения терапевтического вещества. Примеры инкапсулирующих материалов, применимых в данном изобретении, включают полимеры или сополимеры молочной и гликолевой кислот, или смеси таких полимеров и/или сополимеров, обычно называемые "полилактидами".
Термин "смешивание", который использован в описании, обозначает добавление наполнителя к интересующему полипептиду, таким образом, как смешивание сухих реагентов или смешивание сухого реагента с реагентом в растворе или суспензии, или смешивание водных форм реагентов.
Термин "наполнитель" ("основа"), который использован в описании, обозначает нетерапевтическое вещество, добавляемое к фармацевтической композиции для придания желаемой консистенции или для стабилизирующего действия.
Термин "органический растворитель", который использован в описании, предназначен для обозначения любого растворителя, содержащего соединения углерода. Примеры "органических растворителей" включают метиленхлорид, этилацетат, диметилсульфоксид, тетрагидрофуран, диметилформамид и этанол.
"Обработка" полипептида органическим растворителем, как использовано в описании, относится к смешиванию сухого полипептида с органическим растворителем или приготовлению эмульсии полипептида в водной форме с помощью органического растворителя, создающего промежуточную поверхность между полипептидом в водной форме с помощью органического растворителя, или экстрагированию полипептида из водной формы органическим растворителем.
"Полипептид", как использовано в описании, относится в основном к пептидам и белкам, имеющим более 10 аминокислот.
Основные методы
В общем, как водные формы, так и сухие полипептиды могут смешиваться с основой для обеспечения стабилизирующего действия перед обработкой органическим растворителем. Водная форма полипептида может быть полипептидом в суспензии или в растворе. Обычно водная форма основы будет добавляться к водной форме полипептида, хотя может добавляться также и сухая основа, и наоборот. Водная форма полипептида и основы могут также высушиваться с помощью лиофилизации или другими способами. Такие высушенные формы могут восстанавливаться до водных композиций перед обработкой органическими растворителями.
В общем, как водные формы, так и сухие полипептиды могут смешиваться с основой для обеспечения стабилизирующего действия перед обработкой органическим растворителем. Водная форма полипептида может быть полипептидом в суспензии или в растворе. Обычно водная форма основы будет добавляться к водной форме полипептида, хотя может добавляться также и сухая основа, и наоборот. Водная форма полипептида и основы могут также высушиваться с помощью лиофилизации или другими способами. Такие высушенные формы могут восстанавливаться до водных композиций перед обработкой органическими растворителями.
Основа (или наполнитель), используемый для стабилизации полипептида, представляющего интерес, будет, обычно, полиолом с молекулярным весом менее примерно 70000 kD. Примеры полиолов, которые могут использоваться, включают трегалозу, маннит и полиэтиленгликоль. Обычно, массовое отношение трегалозы к полипептиду составляет от 100:1 до 1:100, предпочтительно от 1:1 до 1:10, более предпочтительно от 1:3 до 1:4. Типичное массовое соотношение маннит и полипептида составляет от 100:1 до 1:100, предпочтительно от 1:1 до 1:10, более предпочтительно от 1:1 до 1:2. Обычно массовое соотношение ПЭГ и полипептида составляет от 100:1 до 1:100, предпочтительно от 1:1 до 1:10. Оптимальные соотношения выбираются на основе концентрации наполнителя, которая дает максимальную растворимость пептида при минимальной денатурации полипептида.
Композиции данного изобретения могут содержать консервант, буфер или буферы, множественные наполнители, такие как полиэтиленгликоль (ПЭГ) в дополнение к трегалозе или маннит, или неионный сурфактант, такой как сурфактант Твин®. Неионные сурфактанты включают полисорбат, такой как полисорбат 20 или 80 и т.д., и полоксамеры, такие как полоксамер 184 или 188, полиолы Pluronic® и другие блоксополимеры этилена/полипропилена и т.д. Будут использоваться количества, эффективные для получения стабильной водной композиции, обычно в интервале от примерно 0,1% (вес/объем) до примерно 30%. (вес/объем).
Буферы включают фосфатный, Трис, нитратный, сукцинатный, ацетатный или гистидиновый буферы. Наиболее целесообразно, чтобы концентрация буфера находилась в интервале от примерно 2 мМ до примерно 100 мМ. Предпочтительные буферы включают буферы с сукцинатом натрия и фосфатом калия.
Консерванты включают фенол, бензиловый спирт, метакрезол, метилпарабен, пропилпарабен, бензалкония хлорид, бензетония хлорид. Предпочтительными консервантами являются 0,2-0,4% (вес/объем) фенол и 0,7-1% (вес/объем) бензиловый спирт, хотя тип консерванта и интервал концентраций не принципиальны.
Вообще лекарственные формы как предмет этого изобретения могут содержать другие компоненты в количествах, не уменьшающих возможность получения стабильных форм, и в количествах, соответствующих эффективному и безопасному фармацевтическому применению. Например, другие фармацевтически приемлемые наполнители, хорошо известные специалистам, могут использоваться для приготовления части композиций - предмета изобретения. Сюда включаются, например, различные массообразующие средства, дополнительные буферные средства, хелатирующие вещества, антиоксиданты, сорастворители и тому подобное; конкретные примеры этих веществ могли включать тригидроксиметиламинные соли ("Трис буфер") и динатрий-эдетат.
Рассматриваемые полипептиды включают гликозилированные и негликозилированные полипептиды, такие как гормон роста, интерфероны и вирусные белки, такие как протеаза ВИЧ и 9p 120.
Стабилизированный полипептид данного изобретения может быть приготовлен в виде лекарственной формы с длительным выделением, особенно потому, что экспозиция с органическими растворителями является обычной стадией при многих из таких процессов получения. Соответствующие примеры препаратов с длительным выделением включают полупроницаемые матрицы из твердых гидрофобных полимеров, содержащие полипептид, причем эти матрицы представлены в виде сформированных частиц, например, пленок или микрокапсул. Примеры матриц с длительным выделением включают полиэфиры, гидрогели [например, поли(2-гидроксиэтилметакрилат), который описан Langer, et al., J.Biomed. Mater Res., 15: 167-277 (1981) и Langer, Chem. Tech., 12:98-105 (1982) или поли(виниловый спирт)], полилактиды (патент США N 3773919, ЕР 58481), сополимеры L -глютаминовой кислоты и гамма-этил- L -глютамата (Sigman, et al., Biopolimers, 22: 547-556 |1983|), недеградируемый этиленвинилацетат (Langer et al, выше), деградируемые сополимеры молочной кислоты-гликолевой кислоты, такие как Lupton DepotTM (инъецируемые микросферы, образованные сополимером молочной кислоты-гликолевой кислоты и лейкопролид-ацетатом) и поли-D-(-)-3-гидроксимасляную кислоту (EP 133988). В то время как полимеры, такие как этилен-винилацетат и молочной кислоты-гликолевой кислоты, обеспечивают выделение молекул в течение 100 дней, некоторые гидрогели выделяют полипептиды в течение более коротких периодов времени. Когда инкапсулированные полипептиды остаются в организме в течение длительного времени, они могут денатурироваться или агрегироваться в результате контакта с влагой при 37oC, приводящего в результате к потере биологической активности и возможным изменениям иммуногенности. Рациональная стратегия может быть разработана для стабилизации полипептида в зависимости от задействованного механизма. Например, если установлен механизм агрегации, состоящий в образовании межмолекулярных S-S связей посредством тиодисульфидного обмена, стабилизация может быть достигнута путем модификации сульфгидрильных остатков, лиофилизации из кислых растворов, регулировки степени увлажнения с использованием соответствующих добавок и разработки конкретных полимерных матричных композиций.
Лигандные аналоги с длительным выделением или композиции с антителами также включают полипептиды, заключенные в липосомах. Липосомы, содержащие полипептиды, получают методами, известными per se: DE 3218121; Epstein, et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82:3688-3692 (1985); Hwang, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 4030-4034 (1980); EP 52322, EP 36676, EP 88046, EP 143949, EP 142641, Японская патентная заявка 83-118008, патент США N 4485045; и патент США N 4544545, и ЕР 102324. Обычно эти липосомы - мелкие (примерно 200-800 Ангстрем), однослойного типа, в которых содержание липида больше примерно 30 мол.% холестерина, причем выбранная пропорция доводится для оптимальной терапии лигандными аналогами. Липосомы с повышенным временем циркуляции раскрыты в патенте США N 5013556.
Пример I
Стабилизация водных форм препаратов
Были приготовлены композиции рекомбинантного человеческого гормона роста (чГР) и рекомбинантного человеческого гамма-интерферона (чIFN-γ ) с различными основами для анализа воздействий основы на стабилизацию в органическом растворителе, метиленхлориде. Оптимальными рецептурами были в основном те, которые давали максимальные концентрации растворимого полипептида и наибольший выход нативного полипептида после обработки метиленхлоридом. Максимальную растворимость чГР в каждом растворе определяли посредством непрерывного добавления лиофилизированного чГР в аммоний-бикарбонатном буфере к раствору, и предел растворимости определяли как концентрацию, при которой добавление полипептида приводило к преципитации. Максимальную растворимость ч lFN- γ определяли путем добавления концентрированного стандартного раствора (264 мг/мл xIFN- γ , 10 мМ сукцината натрия, pH 5) к концентрированному раствору основы. Видимый предел растворимости чIFN- γ не наблюдался для каких-либо из этих композиций при этих условиях, но длительное хранение стандартного раствора приводило к преципитации в результате повышения pH (конечный раствор, pH 6). Рецептуры препаратов обоих полипептидов испытывали на стабильность в метиленхлориде путем добавления 10 мкл раствора полипептида к 1 мл метиленхлорида. Эту смесь затем обрабатывали ультразвуком в течение 30 сек. После обработки ультразвуком полипептид экстрагировали из органической фазы путем разведения в 50 мл буфера без основы (50 мМ фосфатный буфер, pH 8 для чГР; 10 мМ сукцинатный буфер, pH 5 для ч IFN- γ ). Количество выделенного растворимого полипептида определяли путем измерения поглощения в ультрафиолетовой области и количество мономерного полипептида оценивали хроматографией исключения по размеру.
Стабилизация водных форм препаратов
Были приготовлены композиции рекомбинантного человеческого гормона роста (чГР) и рекомбинантного человеческого гамма-интерферона (чIFN-γ ) с различными основами для анализа воздействий основы на стабилизацию в органическом растворителе, метиленхлориде. Оптимальными рецептурами были в основном те, которые давали максимальные концентрации растворимого полипептида и наибольший выход нативного полипептида после обработки метиленхлоридом. Максимальную растворимость чГР в каждом растворе определяли посредством непрерывного добавления лиофилизированного чГР в аммоний-бикарбонатном буфере к раствору, и предел растворимости определяли как концентрацию, при которой добавление полипептида приводило к преципитации. Максимальную растворимость ч lFN- γ определяли путем добавления концентрированного стандартного раствора (264 мг/мл xIFN- γ , 10 мМ сукцината натрия, pH 5) к концентрированному раствору основы. Видимый предел растворимости чIFN- γ не наблюдался для каких-либо из этих композиций при этих условиях, но длительное хранение стандартного раствора приводило к преципитации в результате повышения pH (конечный раствор, pH 6). Рецептуры препаратов обоих полипептидов испытывали на стабильность в метиленхлориде путем добавления 10 мкл раствора полипептида к 1 мл метиленхлорида. Эту смесь затем обрабатывали ультразвуком в течение 30 сек. После обработки ультразвуком полипептид экстрагировали из органической фазы путем разведения в 50 мл буфера без основы (50 мМ фосфатный буфер, pH 8 для чГР; 10 мМ сукцинатный буфер, pH 5 для ч IFN- γ ). Количество выделенного растворимого полипептида определяли путем измерения поглощения в ультрафиолетовой области и количество мономерного полипептида оценивали хроматографией исключения по размеру.
Оба полипептида испытывали на стабильность с трегалозой, маннитом, карбоксиметилцеллюлозой (КМЦ), сурфактантом Твин ® 20, декстраном, желатином и полиэтиленгликолем. Предыдущие исследования с чГР показали, что составы, содержащие равное отношение масс полипептида и маннита, стабилизировали полипептид от денатурации и обеспечивали максимальную концентрацию растворимого полипептида, равную 200 мг/мл (100 мМ фосфата, 2 мг/мл маннита, pH 8). Лекарственные формы трегалозы, содержащие соотношения масс основы к полипептиду, равные 1:4 и 1:3, давали самые высокие концентрации растворимого полипептида, 400 мг/мл и 300 мг/мл соответственно. Кроме того, когда лиофилизированный полипептид в этих композициях обрабатывали метиленхлоридом, достигалось полное извлечение растворимого мономерного чГР. Композиции чГР, содержащие маннит или маннит с ПЭГ, давали в результате сходное выделение мономерного чГР, но соотношение масс (основа/полипептид), необходимое для предотвращения денатурации, было больше, чем соотношение в препаратах с трегалозой (маннит 1: 1, маннит/ПЭГ 1: 1 или 1:2, трегалоза 1:3 или 1:4) (таблица I). Поэтому трегалоза обеспечивала высокую растворимость чГР и защиту от денатурации в метиленхлориде при более низкой концентрации массы. В отсутствие наполнителей растворимость чГР была значительно ниже (примерно 106 мг/мл), и полипептид был более чувствителен к денатурации.
При исследованиях с чIFN- γ как маннит, так и трегалоза были наилучшими испытанными основами. Когда маннит использовали при массовом соотношении (наполнитель/полипептид), равном 1: 3, количество растворенного димера в растворе (что определено путем хроматографии исключения по размеру) после обработки метиленхлоридом было эквивалентно количеству в исходном материале. Однако рецептуры с маннитом давали менее 60% извлечения общего количества растворенного полипептида. Напротив, рецептуры с трегалозой с массовым отношением, равным 1:2,5, давали 80% извлечения общего количества полипептида и такую же фракцию растворенного димера (что определено по хроматографии исключения по размеру, обозначаемой нативная SEC-HPLC), что и в исходном материале (таблица II). Рецептуры с полипептидом без наполнителя, обработанные метиленхлоридом, сохраняли 10% первоначального количества растворенного димера (что определено ВЭЖХ исключения по размеру природного) после обработки метиленхлоридом, и в целом извлечение растворимого полипептида было менее 60%. При исследовании с помощью хроматографии исключения по размеру в 0,2 М NaPO4/ 0,1% додецилсульфате при pH 6,8 (обозначаемой SDS SEC-HPLC) во всех рецептурах было более 99% мономера до и после обработки метиленхлоридом.
Для обоих полипептидов наблюдалось заметно более низкое обнаружение мономерного полипептида после обработки метиленхлоридом во всех рецептурах, содержащих сурфактант Твин ® 20. Хотя другие сурфактанты не были изучены, вероятно, что гидрофобные молекулы, такие как сурфактант Твин ® 20, стабилизируют денатурируемые полипептиды, тогда как сахара, такие как маннит и трегалоза, стабилизируют природный полипептид.
Пример II
Стабилизация сухих и водных рецептур для инкапсулирования
В разработке рецептуры длительного действия для рекомбинатного человеческого гормона роста исследовали использование биодеградируемой полимерной матрицы для длительного выделения чГР. Полимер, использованный с этой целью, представлял собой сополимер молочной и гликолевой кислот, который часто называют поли(молочная/гликолевая кислота) или ПМГК (PLCA). Для включения чГР в этот полимер ПМГК должен быть растворен в несмешиваемом с водой растворителе. Наиболее часто используемый растворитель для растворения ПМГК - это метиленхлорид, который обеспечивает растворение ПМГК и не смешивается с водой. В основном, для получения микросфер чГР -ПМГК полипептид добавляли к раствору метиленхлорида, содержащему ПМГК. В первоначальных исследованиях полипептид добавляли в форме измолотого лиофилизированного порошка. После добавления полипептида метиленхлоридный раствор быстро гомогенизировали и этот раствор помещали в ванну для эмульгирования. Этот процесс приводил к экстракции метиленхлорида с одновременным образованием микросфер ПМГК, содержащих чГР. Затем исследовался полипептид, выделенный из этих микросфер, для определения целостности чГР после включения в микросферы. Оценку выделенного чГР осуществляли с помощью аналитической хроматографии исключения по размеру (SEC-HPLC), а также другими методами. Хроматография исключения по размеру показала, что чГР выделялся из микросфер ПМГК в форме природного мономера, агрегатов и неизвестной структуры, которая элюировалась между мономером и димером. Неизвестная полипептидная структура была интенсивно изучена, и как было показано, является конформационным вариантом чГР. Кроме того, те же самые агрегаты и конформационный вариант могут получаться при обработке чГР метиленхлоридом. Таким образом, использование метиленхлорида в процессе может вызывать денатурацию и агрегацию чГР.
Стабилизация сухих и водных рецептур для инкапсулирования
В разработке рецептуры длительного действия для рекомбинатного человеческого гормона роста исследовали использование биодеградируемой полимерной матрицы для длительного выделения чГР. Полимер, использованный с этой целью, представлял собой сополимер молочной и гликолевой кислот, который часто называют поли(молочная/гликолевая кислота) или ПМГК (PLCA). Для включения чГР в этот полимер ПМГК должен быть растворен в несмешиваемом с водой растворителе. Наиболее часто используемый растворитель для растворения ПМГК - это метиленхлорид, который обеспечивает растворение ПМГК и не смешивается с водой. В основном, для получения микросфер чГР -ПМГК полипептид добавляли к раствору метиленхлорида, содержащему ПМГК. В первоначальных исследованиях полипептид добавляли в форме измолотого лиофилизированного порошка. После добавления полипептида метиленхлоридный раствор быстро гомогенизировали и этот раствор помещали в ванну для эмульгирования. Этот процесс приводил к экстракции метиленхлорида с одновременным образованием микросфер ПМГК, содержащих чГР. Затем исследовался полипептид, выделенный из этих микросфер, для определения целостности чГР после включения в микросферы. Оценку выделенного чГР осуществляли с помощью аналитической хроматографии исключения по размеру (SEC-HPLC), а также другими методами. Хроматография исключения по размеру показала, что чГР выделялся из микросфер ПМГК в форме природного мономера, агрегатов и неизвестной структуры, которая элюировалась между мономером и димером. Неизвестная полипептидная структура была интенсивно изучена, и как было показано, является конформационным вариантом чГР. Кроме того, те же самые агрегаты и конформационный вариант могут получаться при обработке чГР метиленхлоридом. Таким образом, использование метиленхлорида в процессе может вызывать денатурацию и агрегацию чГР.
Выделение мономерного природного чГР из ПМГК микросфер необходимо для удачного состава длительно действующей лекарственной формы. В предшествующих исследованиях изучалось несколько органических растворителей в качестве альтернативы метиленхлориду. Это исследование показало, что чГР был чувствителен к разрушению несколькими органическими растворителями. Так как метиленхлорид обладал желаемыми свойствами растворителя (т.е. несмешиваемость с водой, растворение ПМГК и т.д.) для получения микросфер ПМГК, а другие растворители значительно не улучшали стабильность чГР, для производства микрокапсул ПМГК был выбран метиленхлорид. Полипептид, использованный для изучения растворителей и при процессе получения ПМГК, использовался в процессе приготовления лекарственной формы и лиофилизировался в аммоний-бикарбонатном буфере с pH 7. Таким образом это исследование было выполнено для разработки рецептуры лекарственной формы, которая стабилизировала бы чГР при получении микросфер ПМГК.
А. Методы
1. Получение композиций чГР
Для разработки рецептуры, устойчивой к метиленхлориду, чГР, лиофилизированный в аммоний-бикарбонатном буфере, растворяли в желаемом буфере и давали ему полностью раствориться. Нерастворившийся полипептид удаляли центрифугированием при 13000 об/мин в течение 1 мин.
1. Получение композиций чГР
Для разработки рецептуры, устойчивой к метиленхлориду, чГР, лиофилизированный в аммоний-бикарбонатном буфере, растворяли в желаемом буфере и давали ему полностью раствориться. Нерастворившийся полипептид удаляли центрифугированием при 13000 об/мин в течение 1 мин.
Для каждой лиофилизации, рассмотренной ниже, концентрация чГР составляла 10 мг/мл. Остаточная влажность этих препаратов не определялась, но использовался один и тот же цикл лиофилизации в каждом случае.
Размол лиофилизированного белка выполняли с помощью пневматической ударной мельницы и получали в результате тонкое измельчение чГР.
2. Испытание рецептур лекарственных форм чГР метиленхлоридом
Действие метиленхлорида на стабильность чГР определяли путем добавления чГР к раствору метиленхлорида. При условии твердого чГР отношение массы полипептида (мг) к объему органического растворителя (мл) составляло 40 мг/мл. При условии водной формы чГР 100 мкл чГР в буферном растворе добавляли к 1,0 мл метиленхлорида, чтобы оценить воздействие каждой буферной системы на стабилизацию чГР в метиленхлориде. После добавления полипептида образцы обрабатывали ультразвуком в течение 30 секунд в ванне ультразвукового аппарата при 47 кГц (Cole Parmer, модель 08849-00) для воспроизведения стадии гомогенизации при процессе производства микросфер. Если рецептура стабилизировала чГР от денатурации при этом испытании ее дополнительно оценивали по гомогенизации в метиленхлориде. После обработки ультразвуком и гомогенизации полипептид экстрагировали из метиленхлорида путем разведения в 50 раз избытком 5 мМ NaHPO4, pH 8. Количество и качество полипептида, экстрагированного на этой стадии, определяли с помощью измерения концентрации полипептида (поглощения при 278 нм) и в помощью ВЭЖХ исключения по размеру (SEC-HPLC). Предпочтительной стабильной рецептурой была рецептура, которая давала максимальный выход мономерного полипептида без образования конформационных вариантов или агрегатов больших, чем димеры.
Действие метиленхлорида на стабильность чГР определяли путем добавления чГР к раствору метиленхлорида. При условии твердого чГР отношение массы полипептида (мг) к объему органического растворителя (мл) составляло 40 мг/мл. При условии водной формы чГР 100 мкл чГР в буферном растворе добавляли к 1,0 мл метиленхлорида, чтобы оценить воздействие каждой буферной системы на стабилизацию чГР в метиленхлориде. После добавления полипептида образцы обрабатывали ультразвуком в течение 30 секунд в ванне ультразвукового аппарата при 47 кГц (Cole Parmer, модель 08849-00) для воспроизведения стадии гомогенизации при процессе производства микросфер. Если рецептура стабилизировала чГР от денатурации при этом испытании ее дополнительно оценивали по гомогенизации в метиленхлориде. После обработки ультразвуком и гомогенизации полипептид экстрагировали из метиленхлорида путем разведения в 50 раз избытком 5 мМ NaHPO4, pH 8. Количество и качество полипептида, экстрагированного на этой стадии, определяли с помощью измерения концентрации полипептида (поглощения при 278 нм) и в помощью ВЭЖХ исключения по размеру (SEC-HPLC). Предпочтительной стабильной рецептурой была рецептура, которая давала максимальный выход мономерного полипептида без образования конформационных вариантов или агрегатов больших, чем димеры.
В. Результаты
1. Изучение наполнителей по стабилизации чГР
При первоначальном изучении чГР, лиофилизированного в бикарбонате аммония, исследовали растворимость полипептида в различных буферах в условиях разных pH. При этих исследованиях было определено, что чГР обладает максимальной растворимостью и стабильностью в фосфатном буфере (5-10 мМ) при pH 8, и таким образом дополнительные исследования выполняли с чГР в этом буфере.
1. Изучение наполнителей по стабилизации чГР
При первоначальном изучении чГР, лиофилизированного в бикарбонате аммония, исследовали растворимость полипептида в различных буферах в условиях разных pH. При этих исследованиях было определено, что чГР обладает максимальной растворимостью и стабильностью в фосфатном буфере (5-10 мМ) при pH 8, и таким образом дополнительные исследования выполняли с чГР в этом буфере.
Первоначальные попытки предотвратить агрегацию чГР состояли в использовании сурфактанта Твин ® 80 в рецептуре буфера. Как показано в таблице III, испытание рецептур этих водных препаратов с метиленхлоридом показало, что низкие концентрации сурфактанта Твин ® (0,1% сурфактант Твин ® 80) с 10% маннита обеспечивали хорошее извлечение растворенного мономерного полипептида. Однако наилучшие результаты в этом эксперименте были получены для чГР, который готовило в форме раствора с 10 мг/мл маннита без сурфактанта Твин ® 80 (5 мМ NaHPO4, pH 8). Более высокие концентрации сурфактанта Твин ® в рецептуре буфера приводили к повышенной агрегации и сниженному извлечению растворенного полипептида. В каждом случае, представленном в таблице III, рецептуры обеспечивали более высокую стабилизацию чГР, чем в случае размолотого полипептида, который был лиофилизирован в бикарбонате аммония.
Испытание с метиленхлоридом твердых рецептур чГР представлено в таблице IV. Эти результаты показали, что рецептура, которая лучше всего стабилизировала белок, содержала 5 мМ KPO4, 2,5 мг/мл трегалозы.
Провели дополнительные исследования с целью определения, может ли сурфактант стабилизировать поверхность раздела метиленхлорида-полипептида. Так, сурфактант Твин ® добавляли к метиленхлоридной фазе и смешивали с твердым чГР (KPO4, pH 8). Добавление сурфактанта Твин ® к фазе метиленхлорида не улучшало стабильности твердого чГР (KPO4, pH 8), как показано в таблице IV. Кроме того, использование сурфактанта, суфaктанта Спэн ® 80, в метиленхлоридной фазе не улучшают стабильности твердого чГР (KPO4, pH 8). Дополнительные попытки по получению более стабильной твердой рецептуры чГР (маннит KPO4, pH 8) с помощью сурфактанта Твин ® в метиленхлоридной фазе были безуспешными. Эти результаты вместе с исследованиями водных рецептур показали, что предпочтительно не использовать сурфактант Твин ® с этими рецептурами, так как он вызывает агрегацию и снижает растворимость обработанного метиленхлоридом чГР.
Для увеличения количества полипептида, заключенного в микросферы, количество наполнителя должно быть сведено к минимуму. Поэтому использовали более низкие концентрации маннитола (2 и 5 мг/мл), с 10 мг/мл чГР использовали в буфере для рецептуры (10 мМ NaHPO4, рН 8,0) и водные растворы испытывали на стабильность в метиленхлориде.
Эти концентрации маннита давали на 20% менее растворенного мономера, чем рецептура с 10 мг/мл маннита. Значительное снижение концентрации маннита приводило бы к потере качества выделяемого полипептида. Предпринимались также попытки использования альтернативных наполнителей при более низких концентрациях. В рецептурах водных композиций (10 мг/мл чГР, 10 мМ NaHPO4, pH 8) использовали карбоксиметилцеллюлозу (КМЦ) при концентрациях 0,5, 2 и 5 мг/мл. КМЦ при концентрации 0,5 мг/мл обеспечивала такую же фракцию растворенного мономера, что и 10 мг/мл маннита в рецептуре, но количество полипептида, обнаруженного в водной фазе, было на 15% ниже. Смеси равных масс КМЦ и маннита (1 мг/мл и 2,5 мг/мл каждого) также применяли при попытке обеспечить стабильность при более низких концентрациях наполнителя. Использование 2,5 мг/мл каждого наполнителя давало сравнимые результаты с рецептурой с 10 мг/мл маннита. Поэтому лиофилизировали рецептуры с 0,5 мг/мл КМЦ и с 2,5 мг/мл каждого из КМЦ и маннита для оценки возможности их использования при микроинкапсулировании.
Для оценки рецептур для использования в водном препарате лиофилизированный материал воспроизводили до максимальной растворимости, которую определяли как концентрацию полипептида, при которой добавляемый полипептид не растворялся бы в растворе. Максимальная концентрация чГР в этом эксперименте достигалась с рецептурой, лиофилизированной с 10 мг/мл маннита. Эта рецептура успешно воссоздавалась с помощью 5 мМ NaHPO4 буфера, pH до концентрации 200 мг/мл чГР (200 мг/мл маннита, 100 мМ KPO4) без выпадения полипептида в осадок. Рецептура без наполнителей (КPO4, pH 8) давала вторую наилучшую растворимость чГР с 165 мг/мл. Однако попытки воспроизвести рецептуры с КМЦ и КМЦ/маннитолом с высокими концентрациями полипептида были безуспешными. В обоих случаях рецептура образовывала пасту с концентрацией более 100 мг/мл. Испытание с метиленхлоридом паст, образованных рецептурами с КМЦ и КМЦ/маннитом, выявило, что количество извлеченного полипептида было значительно снижено (менее 75% извлечения) по сравнению с маннитной рецептурой, но растворенная фракция представляла более 95% мономера. Так как гелеподобная рецептура может быть полезной для стабилизации водной фазы в ходе процесса, была предпринята попытка использовать другое уплотняющее средство, желатин. Чтобы сохранить низкую концентрацию наполнителя и в то же время все же получить гель для конечной рецептуры (200 мг/мл чГР), желатиновую рецептуру испытывали при концентрациях 0,5 мг/мл желатина, 10 мг/мл чГР, 10 мМ KPO4, pH 8. Испытание с метиленхлоридом этой рецептуры давало извлечение растворенного мономера, которое сравнимо с рецептурой 10 мг/мл маннита. Поэтому эту рецептуру также лиофилизировали для дальнейшего анализа. Воспроизведение лиофилизированного полипептида при концентрации 200 мг/мл чГР (10 мг/мл желатина, 100 мМ KPO4, pH 8) давало в результате образование пасты, которая обладала свойствами, сходными со свойствами рецептур с КМЦ/маннитом и КМЦ при той же самой концентрации чГР.
Пример III
Стабильность рецептур лекарственных форм рчГР в этилацетате
Микроинкапсулирование белков в биоразрушаемые полимеры часто требует использования органических растворителей для превращения полимера в растворимую форму. Полимер, обычно ПМГК, полилактид (ПМК) или полигликолид (ПГК) сначала растворяется в органическом растворителе, который полностью не смешивается с водой. Обычно используемыми органическими растворителями при этом процессе являются метиленхлорид и этилацетат. Эти два растворителя обладают разными физическими и химическими свойствами. Поэтому было необходимо оценить стабильность рецептур рчГР в обоих растворителях.
Стабильность рецептур лекарственных форм рчГР в этилацетате
Микроинкапсулирование белков в биоразрушаемые полимеры часто требует использования органических растворителей для превращения полимера в растворимую форму. Полимер, обычно ПМГК, полилактид (ПМК) или полигликолид (ПГК) сначала растворяется в органическом растворителе, который полностью не смешивается с водой. Обычно используемыми органическими растворителями при этом процессе являются метиленхлорид и этилацетат. Эти два растворителя обладают разными физическими и химическими свойствами. Поэтому было необходимо оценить стабильность рецептур рчГР в обоих растворителях.
Испытание рецептур лекарственных форм рчГР на стабильность в этилацетате выполняли методом, сходным со способом, использованным при исследованиях с метиленхлоридом в вышеприведенных примерах. Растворы рчГР с концентрацией 10 мг/мл готовили путем добавления лиофилизированного твердого рчГР (аммоний-бикарбонатная рецептура) к каждому составу. Как показано в таблице VI, составы готовили с 5 мМ KPO4, pH 8, и они содержали различные наполнители, ПЭГ (MB 3350), Маннит, трегалозу и Твин ® 20 или комбинации наполнителей. Каждую рецептуру рчГР (100 мкл) добавляли к 1 мл этилацетата и обрабатывали ультразвуком в течение 30 сек до образования эмульсии. Эту эмульсию затем смешивали с 10 мл 5 мМ KPO4, pH 8, что давало в результате общее разведение рчГР в 100 раз. Экстрагированный в буфер рчГР анализировали с помощью ВЭЖХ исключения по размеру. Некоторые рецептуры давали более чем 100% извлечение растворенного белка, показывая то, что количество белка, добавленное к эмульсии, было больше, чем установленное количество (0,1 мл х 10 мг/мл = 1 мг) в результате неточности измерений объема. Кроме того, извлечение растворимого белка и количество извлеченного мономера были в основном больше, чем количество рчГР в той же самой рецептуре, обработанной метиленхлоридом. В целом, извлечение растворенного белка было наибольшим для трегалозы (1 и 2 мг/мл), трегалозы с ПЭГ (10 мг/мл каждого), маннита с ПЭГ(10 мг/мл каждого) и маннита с Твин ® 20 (10 мг/мл каждого). Однако только трегалоза (1 и 2 мг/мл) и маннит с Твин ® 20 (10 мг/мл каждого) обеспечивали также высокое содержание мономера (более 97%). Рецептура с маннитом/Твин ® 20 не обеспечивает достаточной растворимости для процесса микроинкапсулирования двойной эмульсии, и это требует отношения наполнителя к белку (по массе) 4:1. Таким образом, оптимальной рецептурой в этих экспериментах была рецептура с 1 мг/мл трегалозы (1: 10 отношением наполнителя к белку и высокой растворимостью рчГР). Концентрацию контрольного рчГР определяли по поглощению при 278 нм и концентрацию рчГР в образце рассчитывали как 100-кратное разведение исходного материала на основе разведений, использованных в методе в целом (0,1 мл в 1 мл EtAc добавляли к 10 мл буфера).
Пример IM
Cтабильность высушенных распылением рецептур рчГР в органических растворителях
Методика двойной эмульсии (вода-в-масле-в-воде) для микроинкапсулирования единственная может обеспечить среднюю лекарственную нагрузку в конечном продукте. Лекарственная нагрузка ограничивается растворимостью лекарства в воде и объемом водной формы лекарства, который может быть добавлен к полимеру в органическом растворителе. Объемы более чем 0,5 мл лекарства на грамм полимера обычно приводят в результате к большому первоначальному выходу лекарства из микросфер. Чтобы исключить эти трудности, можно попользовать твердые лекарственные рецептуры вместо водного раствора лекарства. Таким образом, может использоваться процесс твердое-в-масле-в-воде для получения микросфер с высокой лекарственной нагрузкой (более 10%) с низким до умеренного первоначальным выходом.
Cтабильность высушенных распылением рецептур рчГР в органических растворителях
Методика двойной эмульсии (вода-в-масле-в-воде) для микроинкапсулирования единственная может обеспечить среднюю лекарственную нагрузку в конечном продукте. Лекарственная нагрузка ограничивается растворимостью лекарства в воде и объемом водной формы лекарства, который может быть добавлен к полимеру в органическом растворителе. Объемы более чем 0,5 мл лекарства на грамм полимера обычно приводят в результате к большому первоначальному выходу лекарства из микросфер. Чтобы исключить эти трудности, можно попользовать твердые лекарственные рецептуры вместо водного раствора лекарства. Таким образом, может использоваться процесс твердое-в-масле-в-воде для получения микросфер с высокой лекарственной нагрузкой (более 10%) с низким до умеренного первоначальным выходом.
Твердая лекарственная рецептура, используемая для микроинкапсулирования, должна быть стабильной в органических растворителях и должна иметь небольшой размер частиц (1-5 мкм) относительно микросфер (30-100 мкм), чтобы дать возможность высокой нагрузки и низкого первоначального выхода лекарства. Для белковых препаратов один из методов получения мелких высушенных твердых частиц является сушка распылением. В недавнем сообщении Mammenthaler et al., Pharm. Res 11(1): 12-20 (1994) описан процесс сушки распылением препаратов рчГР. Так как рчГР легко денатурируется путем взаимодействий на поверхностях раздела, таких как воздух-жидкость, сушка распылением должна выполняться с сурфактантами в составе препаратов рчГР. Однако, как отмечено выше, присутствие некоторых сурфактантов может оказывать отрицательное действие на стабильность рчГР в метиленхлориде. Высушенные распылением препараты рчГР с разными сурфактантами и трегалозой, которые, как было рассмотрено выше, являются наилучшими для стабилизации водных рецептур препаратов рчГР, испытали на стабильность в метиленхлориде и этилацетате.
Высушенный распылением рчГР готовили для каждой из рецептур, перечисленных в таблице VII. Эти препараты распыляли при расходе 5 мл/мин с температурой на входе, равной 90oC, при скорости потока воздуха в сопле, равной 600 л/час, и скорости воздуха для сушки, равной 36000 л/час. Высушенный распылением рчГР затем собирали с фильтра и из циклонов распылительной сушилки. Конечные частицы твердого вещества обычно были примерно диаметром 5 мкм.
Порошок высушенного распылением рчГР затем испытывали на стабильность при обработке или этилацетатом, или метиленхлоридом. Высушенный распылением порошок массой, эквивалентной 10 мг рчГР, добавляли к 2 мл органического растворителя в 3 см3 стеклянной пробирке для испытания. Суспензию затем гомогенизировали при 10000 об/мин в течение 30 сек с наконечником для микротонкой гомогенизации. После перемешивания 20 мкл гомогенизированной суспензии добавляли к 980 мкл 5 мМ KPO4, pH 8,0 для экстракции белка. Концентрацию экстрагированного белка определяли по поглощению при 278 нм и образец также анализировали с помощью хроматографии исключения по размеру. Как показано в таблице VII, рецептура без сурфактанта давала наивысшую степень агрегации при обработке метиленхлоридом. Эта агрегация была, вероятно, результатом денатурации на поверхности рчГР во время процесса сушки, что ранее наблюдалось для сушки распылением рчГР. Путем добавления или Твин ® 20, или ПЭГ (MB 3350) в рецептуру уровень агрегации для образцов, образованных метиленхлоридом, был снижен, но общий выход извлечения был все еще низким, и содержание мономера было значительно менее 90%. В противоположность этому, если те же самые высушенные распылением композиции рчГР, содержащие сурфактант, были обработаны этилацетатом, уровень агрегации был ничтожным и достигалось полное извлечение мономерного рчГР. Следовательно, высушенные распылением рецептуры рчГР, включающие трегалозу и/или Твин ® для ПЭГ (MB 3350), были стабильны в этилацетате, но не защищали белок от денатурации в метиленхлориде.
Пример V
Стабильность высушенного распылением с замораживанием рецептур рчГР в метиленхлориде и этилацетате
Сушка распылением при высоких температурах может оказывать вредное действие на белок, и она дает белковые частицы, которые часто являются полыми сферами (Mummenthaler et al., Pharm. Res 11(1): 12-20 (1994). Кроме того, трудно собрать мелкие частицы (1-5 мкм), необходимые для микроинкапсулирования, и общий выход этих частиц обычно очень низок (менее 50%). Альтернативной сушке распылением при высокой температуре является сушка распылением с замораживанием. Сушка распылением с замораживанием рецептур рчГР дает в результате тонкие частицы (2-3 мкм), которые легко разбивались отдельно на очень мелкие твердые частички (менее 1 мкм). Этот тип твердого препарата предпочтителен для микроинкапсулирования в полимерную матрицу, так как он может обеспечить высокую нагрузку (возможно включить больше твердого вещества в микросферы размером 30-100 мкм) гомогенно диспергированного твердого белка (сниженный выброс благодаря тонкой суспензии).
Стабильность высушенного распылением с замораживанием рецептур рчГР в метиленхлориде и этилацетате
Сушка распылением при высоких температурах может оказывать вредное действие на белок, и она дает белковые частицы, которые часто являются полыми сферами (Mummenthaler et al., Pharm. Res 11(1): 12-20 (1994). Кроме того, трудно собрать мелкие частицы (1-5 мкм), необходимые для микроинкапсулирования, и общий выход этих частиц обычно очень низок (менее 50%). Альтернативной сушке распылением при высокой температуре является сушка распылением с замораживанием. Сушка распылением с замораживанием рецептур рчГР дает в результате тонкие частицы (2-3 мкм), которые легко разбивались отдельно на очень мелкие твердые частички (менее 1 мкм). Этот тип твердого препарата предпочтителен для микроинкапсулирования в полимерную матрицу, так как он может обеспечить высокую нагрузку (возможно включить больше твердого вещества в микросферы размером 30-100 мкм) гомогенно диспергированного твердого белка (сниженный выброс благодаря тонкой суспензии).
Сушку распылением с замораживанием рчГР выполняли с использованием рецептур, перечисленных в таблице VIII. Снова был необходим сурфактант для стабилизации рчГР во время процесса распыления, но другие белки, которые не так легко денатурируются путем взаимодействий на поверхности, возможно, не будут требовать применения сурфактанта. Высушенный распылением с замораживанием рчГР получали путем подачи рецептуры насосом со скоростью 5 мл/мин и работы воздушного сопла при скорости 600 л/час, как применялось и при сушке распылением при высокой температуре (Mummenthaler et al., Pharm. Res.,11(1): 12-20 (1994). Растворы распыляли на открытый металлический лоток с жидким азотом. После распыления лоток помещали в предварительно охлажденный лиофилизатор, установленный на - 30oC. Жидкому азоту давали испариться и затем белок лиофилизировали (первичное высушивание: -30oC, 100 мТорр, 52 часа; вторичное высушивание: 5oC, 100 мТорр, 18 часов). Конечный порошок затем удаляли и помещали в герметичные стеклянные сосуды до использования.
Высушенный распылением с замораживанием порошок рчГР затем испытывали на стабильность путем обработки этилацетатом и метиленхлоридом. Высушенный распылением с замораживанием порошок массой, эквивалентной 10 мг рчГР, добавляли к 2 мл органического растворителя в 3 см3 стеклянной пробирке для испытаний. Затем суспензию гомогенизировали при 10000 об/мин в течение 30 сек с помощью наконечника для микротонкой гомогенизации. После перемешивания 20 мкл гомогенной суспензии добавляли к 980 мкл 5 мМ KPO4, pH 8 для экстракции белка. Концентрацию экстрагированного белка определяли по поглощению при 278 нм и образец также анализировали с помощью хроматографии исключения по размеру. Как показано в таблице VIII, высушенная распылением с замораживанием рецептура, содержащая ПЭГ, была более стабильна в метиленхлориде, чем рецептура, содержащая Твин ® 20, что наблюдалось, как представлено выше, и для водных рецептур. Однако обе рецептуры не давали высокого извлечения мономерного рчГР. Когда те же самые рецептуры обрабатывали этилацетатом с обоими препаратами достигалось полное извлечение мономерного белка. Трегалоза в этих рецептурах обеспечивала стабилизацию от денатурации органическим растворителем (этилацетатом), тогда как сурфактанты, стабилизировали белок от денатурации на поверхности раздела во время сушки распылением с замораживанием. Таким образом, рецептуры, высушенные распылением с замораживанием, содержащие как трегалозу, так и сурфактант, будут обеспечивать полное извлечение рчГР из этилацетата.
Процент извлечения растворенного белка определяли как отношение концентраций из области общего пика образца и стандарта сравнения, умноженное на 100%. Концентрации рчГР в контроле и образце определяли по поглощению при 278 нм.
Claims (30)
1. Способ стабилизации полипептида от денатурации в органическом растворителе при обработке органическим растворителем, отличающийся тем, что включает смешивание полипептида с полиолом, причем полиол представляет собой трегалозу, для образования смеси и обработку смеси органическим растворителем.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что полипептид является гормоном роста.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что гормон роста является человеческим.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что полипептид является гамма-интерфероном.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что органический растворитель является метиленхлоридом.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что органический растворитель является этилацетатом.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что полипептид является сухим.
8. Способ по п.7, отличающийся тем, что полипептид является лиофилизированным.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 100 : 1 до 1 : 100.
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 1 : 1 до 1 : 10.
11. Способ по п.1, отличающийся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 1 : 3 до 1 : 4.
12. Способ получения композиции полипептида с использованием денатурирующего органического растворителя, включающий: а) смешивание полипептида в водном растворе с полиолом, который представляет собой трегалозу, а) обработку полипептида в водном растворе органическим растворителем.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что продукт стадии а) высушивают и повторно переводят в водную форму препарата.
14. Способ по п.12, отличающийся тем, что дополнительно включает получение композиции полипептида с регулируемым выделением.
15. Способ получения композиции сухого полипептида с регулируемым выделением с использованием денатурирующего органического растворителя, включающий: а) смешивание полипептида с наполнителем, причем указанный наполнитель является полиолом, представляющим собой трегалозу, б) обработку продукта со стадии а) органическим растворителем и с) инкапсулирование полипептида в полимерную матрицу.
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что органический растворитель представляет собой метиленхлорид или этилацетат.
17. Композиция с регулируемым выделением полипептида, содержащая полипептид, смешанный с наполнителем, отличающаяся тем, что наполнитель является полиолом, представляющим собой трегалозу, причем полипептид, смешанный с наполнителем, обрабатывается органическим растворителем и инкапсулируется в полимерную матрицу, где полимер представляет собой полилактид.
18. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что полипептид, смешанный с наполнителем, представляет собой водный препарат.
19. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что полипептид, смешанный с наполнителем, является сухим.
20. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что полипептид, смешанный с наполнителем, лиофилизируется.
21. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что дополнительно включает буфер.
22. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что буфер является фосфатным буфером.
23. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что буфер является сукцинатным буфером.
24. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что дополнительно включает консервант.
25. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 100 : 1 до 1 : 100.
26. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 1 : 1 до 1 : 10.
27. Композиция по п.17, отличающаяся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 1 : 3 до 1 : 4.
28. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 100 : 1 до 1 : 100.
29. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 1 : 1 до 1 : 10.
30. Композиция по п.21, отличающаяся тем, что массовое соотношение трегалозы и полипептида составляет от 1 : 3 до 1 : 4.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US2142193A | 1993-02-23 | 1993-02-23 | |
| US08/021,421 | 1993-02-23 | ||
| PCT/US1994/001666 WO1994019020A1 (en) | 1993-02-23 | 1994-02-17 | Excipient stabilization of polypeptides treated with organic solvents |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU95118293A RU95118293A (ru) | 1998-01-10 |
| RU2143889C1 true RU2143889C1 (ru) | 2000-01-10 |
Family
ID=21804127
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU95118293A RU2143889C1 (ru) | 1993-02-23 | 1994-02-17 | Способ стабилизации полипептида, способы получения композиций полипептида и композиции |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US5589167A (ru) |
| EP (1) | EP0686045B1 (ru) |
| JP (1) | JP3698721B2 (ru) |
| CN (1) | CN1108823C (ru) |
| AT (1) | ATE197550T1 (ru) |
| AU (1) | AU685784B2 (ru) |
| CZ (1) | CZ296649B6 (ru) |
| DE (1) | DE69426292T2 (ru) |
| DK (1) | DK0686045T3 (ru) |
| ES (1) | ES2153418T3 (ru) |
| GR (1) | GR3035383T3 (ru) |
| IL (1) | IL108713A (ru) |
| NZ (1) | NZ262634A (ru) |
| PT (1) | PT686045E (ru) |
| RU (1) | RU2143889C1 (ru) |
| WO (1) | WO1994019020A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA941239B (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011034464A1 (ru) * | 2009-09-15 | 2011-03-24 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Инъекционная лекарственная форма для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы, способ ее изготовления и применение |
| RU2522137C2 (ru) * | 2009-03-16 | 2014-07-10 | Родиа Операсьон | Стабилизированная биоцидная композиция |
Families Citing this family (136)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6290991B1 (en) * | 1994-12-02 | 2001-09-18 | Quandrant Holdings Cambridge Limited | Solid dose delivery vehicle and methods of making same |
| US6586006B2 (en) | 1994-08-04 | 2003-07-01 | Elan Drug Delivery Limited | Solid delivery systems for controlled release of molecules incorporated therein and methods of making same |
| WO1996008979A1 (en) | 1994-09-22 | 1996-03-28 | Quadrant Holdings Cambridge Limited | Compositions for use in rehydration and nutrition during athletic exercise and methods of making same |
| US6964771B1 (en) | 1995-06-07 | 2005-11-15 | Elan Drug Delivery Limited | Method for stably incorporating substances within dry, foamed glass matrices |
| BR9609743A (pt) * | 1995-07-27 | 1999-03-02 | Genentech Inc | Formulação reconstituída estável método para a preparação de uma formulação artigo manufaturado e uso da formação |
| US6685940B2 (en) | 1995-07-27 | 2004-02-03 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
| US6267958B1 (en) | 1995-07-27 | 2001-07-31 | Genentech, Inc. | Protein formulation |
| JP2014148555A (ja) * | 1995-07-27 | 2014-08-21 | Genentech Inc | タンパク質の処方 |
| US5762961A (en) * | 1996-02-09 | 1998-06-09 | Quadrant Holdings Cambridge Ltd. | Rapidly soluble oral solid dosage forms, methods of making same, and compositions thereof |
| US5958455A (en) * | 1996-02-09 | 1999-09-28 | Quadrant Holdings Cambridge Ltd | Oral solid dosage forms, methods of making same and compositions thereof |
| AUPN801296A0 (en) * | 1996-02-12 | 1996-03-07 | Csl Limited | Stabilised growth hormone formulation and method of preparation thereof |
| US6190702B1 (en) | 1996-03-28 | 2001-02-20 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Sustained-released material prepared by dispersing a lyophilized polypeptide in an oil phase |
| US6632648B1 (en) | 1996-05-14 | 2003-10-14 | Elan Drug Delivery Limited | Methods of terminal sterilization of fibrinogen |
| US5916582A (en) * | 1996-07-03 | 1999-06-29 | Alza Corporation | Aqueous formulations of peptides |
| US5932547A (en) | 1996-07-03 | 1999-08-03 | Alza Corporation | Non-aqueous polar aprotic peptide formulations |
| BR9710130A (pt) * | 1996-07-03 | 1999-08-10 | Alza Corp | Formulações de peptídeos próticas não-aquosas |
| US5861174A (en) * | 1996-07-12 | 1999-01-19 | University Technology Corporation | Temperature sensitive gel for sustained delivery of protein drugs |
| US5981489A (en) * | 1996-07-18 | 1999-11-09 | Alza Corporation | Non-aqueous protic peptide formulations |
| US6468782B1 (en) | 1996-12-05 | 2002-10-22 | Quadrant Healthcare (Uk) Limited | Methods of preserving prokaryotic cells and compositions obtained thereby |
| US6197350B1 (en) | 1996-12-20 | 2001-03-06 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method of producing a sustained-release preparation |
| US6171586B1 (en) | 1997-06-13 | 2001-01-09 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
| US6113947A (en) * | 1997-06-13 | 2000-09-05 | Genentech, Inc. | Controlled release microencapsulated NGF formulation |
| US6663899B2 (en) * | 1997-06-13 | 2003-12-16 | Genentech, Inc. | Controlled release microencapsulated NGF formulation |
| US6991790B1 (en) | 1997-06-13 | 2006-01-31 | Genentech, Inc. | Antibody formulation |
| EP1019031A4 (en) * | 1997-07-18 | 2003-02-05 | Infimed Inc | BIODEGRADABLE MACROMERS FOR THE REGULATED RELEASE OF BIOLOGICALLY ACTIVE SUBSTANCES |
| US20060165606A1 (en) | 1997-09-29 | 2006-07-27 | Nektar Therapeutics | Pulmonary delivery particles comprising water insoluble or crystalline active agents |
| US6565885B1 (en) | 1997-09-29 | 2003-05-20 | Inhale Therapeutic Systems, Inc. | Methods of spray drying pharmaceutical compositions |
| SE512663C2 (sv) | 1997-10-23 | 2000-04-17 | Biogram Ab | Inkapslingsförfarande för aktiv substans i en bionedbrytbar polymer |
| WO1999047174A1 (en) * | 1998-03-18 | 1999-09-23 | Cambridge Biostability Limited | Amorphous glasses for stabilising sensitive products |
| WO1999051272A1 (en) * | 1998-04-03 | 1999-10-14 | Chiron Corporation | Injectable igf-formulations containing succinate as buffering agent |
| BR9909717A (pt) * | 1998-04-17 | 2000-12-26 | Angiogenix Inc | Fatores angiogênicos terapêuticos e métodos para seu uso |
| US6284282B1 (en) * | 1998-04-29 | 2001-09-04 | Genentech, Inc. | Method of spray freeze drying proteins for pharmaceutical administration |
| US6190701B1 (en) | 1999-03-17 | 2001-02-20 | Peter M. Ronai | Composition and method for stable injectable liquids |
| GB9910975D0 (en) * | 1999-05-13 | 1999-07-14 | Univ Strathclyde | Rapid dehydration of proteins |
| US6566329B1 (en) * | 1999-06-28 | 2003-05-20 | Novo Nordisk A/S | Freeze-dried preparation of human growth hormone |
| US6102896A (en) * | 1999-09-08 | 2000-08-15 | Cambridge Biostability Limited | Disposable injector device |
| US7651703B2 (en) | 1999-10-15 | 2010-01-26 | Genentech, Inc. | Injection vehicle for polymer-based formulations |
| US7582311B1 (en) | 1999-10-15 | 2009-09-01 | Genentech, Inc. | Injection vehicle for polymer-based formulations |
| AU2001233180A1 (en) * | 2000-02-10 | 2001-08-20 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. | Method of preparing a sustained release composition |
| AU5911101A (en) | 2000-04-19 | 2001-10-30 | Genentech Inc | Sustained release formulations |
| US7871598B1 (en) | 2000-05-10 | 2011-01-18 | Novartis Ag | Stable metal ion-lipid powdered pharmaceutical compositions for drug delivery and methods of use |
| DK1280520T4 (en) | 2000-05-10 | 2018-06-25 | Novartis Ag | Phospholipid based powders for drug delivery |
| US8404217B2 (en) | 2000-05-10 | 2013-03-26 | Novartis Ag | Formulation for pulmonary administration of antifungal agents, and associated methods of manufacture and use |
| US6653062B1 (en) | 2000-07-26 | 2003-11-25 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Preservation and storage medium for biological materials |
| CA2418960A1 (en) | 2000-08-07 | 2002-02-14 | Inhale Therapeutic Systems, Inc. | Inhaleable spray dried 4-helix bundle protein powders having minimized aggregation |
| US6824822B2 (en) * | 2001-08-31 | 2004-11-30 | Alkermes Controlled Therapeutics Inc. Ii | Residual solvent extraction method and microparticles produced thereby |
| EP1452171B1 (en) * | 2000-10-13 | 2009-12-02 | Cambridge Biostability Limited | Pharmaceutical liquid suspensions |
| ATE420630T1 (de) * | 2000-11-29 | 2009-01-15 | Itoham Foods Inc | Pulverzubereitungen und verfahren zu ihrer herstellung |
| US20040022861A1 (en) * | 2001-01-30 | 2004-02-05 | Williams Robert O. | Process for production of nanoparticles and microparticles by spray freezing into liquid |
| DE60231862D1 (de) * | 2001-02-23 | 2009-05-20 | Genentech Inc | Erodierbare polymere zur injektion |
| WO2003000282A1 (en) * | 2001-06-21 | 2003-01-03 | Genentech, Inc. | Sustained release formulation |
| GB0116074D0 (en) * | 2001-06-29 | 2001-08-22 | Univ Strathclyde | Nanoparticle structures |
| GB2391480B (en) | 2002-08-05 | 2007-02-28 | Caretek Medical Ltd | Drug delivery system |
| GB2379390B (en) * | 2001-09-11 | 2005-01-26 | Caretek Medical Ltd | A novel drug delivery technology |
| US7615234B2 (en) * | 2001-09-11 | 2009-11-10 | Glide Pharmaceutical Technologies Limited | Drug delivery technology |
| EP1458360B1 (en) | 2001-12-19 | 2011-05-11 | Novartis AG | Pulmonary delivery of aminoglycosides |
| JP2005522692A (ja) * | 2002-04-05 | 2005-07-28 | パワーザイム，インコーポレイテッド | 分析物センサー |
| AU2003230320A1 (en) * | 2002-05-09 | 2003-11-11 | Peptron Co., Ltd | Sustained release formulation of protein and preparation method thereof |
| CN100444848C (zh) * | 2002-09-27 | 2008-12-24 | 特里梅里斯公司 | HIV gp41-衍生肽的改善用药的药物组合物 |
| US7045552B2 (en) * | 2002-09-27 | 2006-05-16 | Trimeris, Inc. | Pharmaceutical composition for improved administration of HIV gp41-derived peptides, and its use in therapy |
| AU2003282955A1 (en) | 2002-10-17 | 2004-05-04 | Alkermes Controlled Therapeutics, Inc. Ii | Microencapsulation and sustained release of biologically active polypeptides |
| BR0317896A (pt) * | 2002-12-31 | 2005-12-06 | Altus Pharmaceuticals Inc | Complexos de cristais de proteìna e polìmeros iÈnicos |
| BR0317888A (pt) * | 2002-12-31 | 2005-12-06 | Altus Pharmaceuticals Inc | Cristais do hormÈnio do crescimento humano e processos para preparação dos mesmos |
| US20040197413A1 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-07 | Genteric, Inc. | Spray dry coacervation systems and methods |
| DE10320609A1 (de) * | 2003-05-08 | 2004-12-02 | Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. | Sprühgefriergranulate mit verbesserter Homogenität der Eigenschaftsverteilung und Verfahren zu deren Herstellung |
| US7090433B2 (en) * | 2003-10-07 | 2006-08-15 | Steve Searby | Underground cable laying apparatus |
| US20050095320A1 (en) * | 2003-10-29 | 2005-05-05 | Richard Botteri | [An Isotonic Sports Drink for Female Athletes Fortified with Iron, Calcium and Essential Vitamins for Use in Rehydration and Nutrition During Execise and Competition] |
| US20050100636A1 (en) * | 2003-11-10 | 2005-05-12 | Megan Botteri | [A Low-Calorie Sports Drink For Physically Active Women That is Fortified with Iron, Calcium and Essential Vitamins for Use in Rehydration and Replacing Electrolytes Lost During Periods of Physical Activity] |
| CN1901931A (zh) * | 2004-01-07 | 2007-01-24 | 特里梅里斯公司 | HIV gp41 HR2－来源的合成肽,及其在抑制人类免疫缺陷性病毒传递的治疗中的用途 |
| EP2409707B8 (en) | 2004-04-15 | 2015-05-06 | Alkermes Pharma Ireland Limited | Polymer-based sustained release device |
| US7456254B2 (en) * | 2004-04-15 | 2008-11-25 | Alkermes, Inc. | Polymer-based sustained release device |
| JP2007277094A (ja) * | 2004-06-29 | 2007-10-25 | Chemo Sero Therapeut Res Inst | 改変ダニ主要アレルゲン含有医薬組成物 |
| US7133638B2 (en) * | 2004-11-18 | 2006-11-07 | Xerox Corporation | Scanning method and an image-processing device including the same |
| US11246913B2 (en) | 2005-02-03 | 2022-02-15 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Suspension formulation comprising an insulinotropic peptide |
| GB2422784A (en) * | 2005-02-07 | 2006-08-09 | Caretek Medical Ltd | Disposable assembly comprising a needle or stylet |
| US20090110681A1 (en) * | 2005-03-08 | 2009-04-30 | Pfizer, Inc. | Anti-M-CSF Antibody Compositions |
| CN100337684C (zh) * | 2005-05-11 | 2007-09-19 | 北京双鹭药业股份有限公司 | 一种胸腺五肽的水溶液制剂、其制备方法及应用 |
| CN100336557C (zh) * | 2005-05-11 | 2007-09-12 | 北京双鹭药业股份有限公司 | 一种生长抑素的水溶液制剂、其制备方法及应用 |
| CN100342909C (zh) * | 2005-05-11 | 2007-10-17 | 北京双鹭药业股份有限公司 | 一种胸腺素α1的水溶液制剂、其制备方法及应用 |
| GB0517688D0 (en) * | 2005-08-31 | 2005-10-05 | Cambridge Biostability Ltd | Improvements in the stabilisation of biological materials |
| US9309316B2 (en) * | 2005-12-20 | 2016-04-12 | Bristol-Myers Squibb Company | Stable subcutaneous protein formulations and uses thereof |
| HRP20131196T4 (hr) * | 2005-12-20 | 2022-06-10 | Bristol-Myers Squibb Company | Stabilne formulacije proteina |
| JP2009521486A (ja) * | 2005-12-23 | 2009-06-04 | アルタス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | ポリカチオン錯化タンパク質結晶を含む組成物およびこれを使用した治療法 |
| EP1989220B1 (en) | 2006-02-02 | 2011-12-14 | Trimeris, Inc. | Hiv fusion inhibitor peptides with improved biological properties |
| WO2007104322A1 (en) * | 2006-03-13 | 2007-09-20 | Naturin Gmbh & Co | Collagen powder and collagen-based thermoplastic composition por preparing conformed articles |
| EP2359808B1 (en) | 2006-08-09 | 2013-05-22 | Intarcia Therapeutics, Inc | Osmotic delivery systems and piston assemblies |
| US20100028451A1 (en) | 2006-09-26 | 2010-02-04 | Trustees Of Tufts College | Silk microspheres for encapsulation and controlled release |
| US8946200B2 (en) * | 2006-11-02 | 2015-02-03 | Southwest Research Institute | Pharmaceutically active nanosuspensions |
| AU2007234612B2 (en) * | 2006-12-14 | 2013-06-27 | Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc | Protein stabilization formulations |
| US8071544B2 (en) * | 2006-12-18 | 2011-12-06 | Althea Technologies, Inc. | Crystallized recombinant human growth factor formulations |
| EP2111228B1 (en) * | 2007-02-02 | 2011-07-20 | Bristol-Myers Squibb Company | 10Fn3 domain for use in treating diseases associated with inappropriate angiogenesis |
| ES2545775T3 (es) | 2007-02-05 | 2015-09-15 | Apellis Pharmaceuticals, Inc. | Análogos de compstatina para uso en el tratamiento de afecciones inflamatorias del sistema respiratorio |
| US20090068243A1 (en) * | 2007-04-03 | 2009-03-12 | Brian Bray | Novel formulations for delivery of antiviral peptide therapeutics |
| EP2157967B1 (en) | 2007-04-23 | 2013-01-16 | Intarcia Therapeutics, Inc | Suspension formulations of insulinotropic peptides and uses thereof |
| KR20100017667A (ko) * | 2007-06-01 | 2010-02-16 | 노보 노르디스크 에이/에스 | 안정한 비-수성의 약학 조성물 |
| US7678764B2 (en) | 2007-06-29 | 2010-03-16 | Johnson & Johnson Regenerative Therapeutics, Llc | Protein formulations for use at elevated temperatures |
| JP5323832B2 (ja) | 2007-08-07 | 2013-10-23 | アドバンスト・テクノロジーズ・アンド・リジェネレイティブ・メディスン・エルエルシー | 酸性水溶液中にｇｄｆ−５を含むタンパク質製剤 |
| CA2700354A1 (en) * | 2007-09-25 | 2009-04-02 | Trimeris, Inc. | Novel methods of synthesis for therapeutic antiviral peptides |
| CA2726861C (en) | 2008-02-13 | 2014-05-27 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Devices, formulations, and methods for delivery of multiple beneficial agents |
| US8404850B2 (en) * | 2008-03-13 | 2013-03-26 | Southwest Research Institute | Bis-quaternary pyridinium-aldoxime salts and treatment of exposure to cholinesterase inhibitors |
| PL2254906T3 (pl) | 2008-03-18 | 2017-04-28 | Novo Nordisk A/S | Stabilizowane względem proteaz, acylowane analogi insuliny |
| CA2720845A1 (en) * | 2008-04-14 | 2009-10-22 | Advanced Technologies And Regenerative Medicine, Llc | Liquid buffered gdf-5 formulations |
| US8722706B2 (en) * | 2008-08-15 | 2014-05-13 | Southwest Research Institute | Two phase bioactive formulations of bis-quaternary pyridinium oxime sulfonate salts |
| US8309134B2 (en) * | 2008-10-03 | 2012-11-13 | Southwest Research Institute | Modified calcium phosphate nanoparticle formation |
| WO2011005381A2 (en) | 2009-06-01 | 2011-01-13 | Trustees Of Tufts College | Vortex-induced silk fibroin gelation for encapsulation and delivery |
| EP3323423B1 (en) | 2009-09-28 | 2020-06-17 | Intarcia Therapeutics, Inc | Rapid establishment and/or termination of substantial steady-state drug delivery |
| US9028873B2 (en) * | 2010-02-08 | 2015-05-12 | Southwest Research Institute | Nanoparticles for drug delivery to the central nervous system |
| LT2542257T (lt) | 2010-03-01 | 2017-11-27 | Bayer Healthcare Llc | Optimizuoti monokloniniai antikūnai prieš audinių faktoriaus kelio slopiklį (tfpi) |
| US9603971B2 (en) | 2010-03-05 | 2017-03-28 | Trustees Of Tufts College | Silk-based ionomeric compositions |
| GB201004072D0 (en) | 2010-03-11 | 2010-04-28 | Turzi Antoine | Process, tube and device for the preparation of wound healant composition |
| US20120208755A1 (en) | 2011-02-16 | 2012-08-16 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Compositions, Devices and Methods of Use Thereof for the Treatment of Cancers |
| CN104023743B (zh) | 2011-10-25 | 2017-05-03 | 普罗西纳治疗有限公司 | 抗体制剂和方法 |
| WO2013096835A1 (en) * | 2011-12-23 | 2013-06-27 | Abbvie Inc. | Stable protein formulations |
| WO2013112897A1 (en) | 2012-01-27 | 2013-08-01 | The Regents Of The University Of California | Stabilization of biomolecules using sugar polymers |
| MX2014012096A (es) | 2012-04-11 | 2014-11-21 | Novo Nordisk As | Formulaciones de insulina. |
| WO2014035798A1 (en) | 2012-08-30 | 2014-03-06 | Sanofi | Silk lyogels for sustained release of protein therapeutics and methods of making and uses |
| US9592297B2 (en) | 2012-08-31 | 2017-03-14 | Bayer Healthcare Llc | Antibody and protein formulations |
| US8613919B1 (en) | 2012-08-31 | 2013-12-24 | Bayer Healthcare, Llc | High concentration antibody and protein formulations |
| US11547743B2 (en) * | 2014-04-28 | 2023-01-10 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Lyophilized formulation of HGF |
| US9889085B1 (en) | 2014-09-30 | 2018-02-13 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Therapeutic methods for the treatment of diabetes and related conditions for patients with high baseline HbA1c |
| MA44390A (fr) | 2015-06-03 | 2019-01-23 | Intarcia Therapeutics Inc | Systèmes de mise en place et de retrait d'implant |
| WO2017104759A1 (ja) * | 2015-12-16 | 2017-06-22 | 株式会社 資生堂 | タブレット型凍結乾燥化粧料 |
| US11548926B2 (en) | 2016-03-17 | 2023-01-10 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Method for producing an active hepatocyte growth factor (HGF) |
| SG11201810102SA (en) | 2016-05-16 | 2018-12-28 | Intarcia Therapeutics Inc | Glucagon-receptor selective polypeptides and methods of use thereof |
| USD840030S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-02-05 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant placement guide |
| USD860451S1 (en) | 2016-06-02 | 2019-09-17 | Intarcia Therapeutics, Inc. | Implant removal tool |
| EP3484450A4 (en) * | 2016-07-18 | 2020-04-01 | Tissuegen, Inc. | METHODS AND COMPOSITIONS FOR MAINTAINING THE CONFORMATION AND STRUCTURAL INTEGRITY OF BIOMOLECULES |
| EP3554534B1 (en) | 2016-12-16 | 2021-06-23 | Novo Nordisk A/S | Insulin containing pharmaceutical compositions |
| CN110225762A (zh) | 2017-01-03 | 2019-09-10 | 因塔西亚制药公司 | 包括glp-1受体激动剂的连续施用和药物的共同施用的方法 |
| JP6404405B1 (ja) * | 2017-06-14 | 2018-10-10 | 株式会社 資生堂 | タブレット型凍結乾燥化粧料 |
| KR20200016878A (ko) * | 2017-06-19 | 2020-02-17 | 가부시키가이샤 시세이도 | 타블렛형 동결 건조 화장료 |
| TWI787186B (zh) * | 2017-06-19 | 2022-12-21 | 日商資生堂股份有限公司 | 錠型凍結乾燥化妝料 |
| CN108169499A (zh) * | 2017-11-30 | 2018-06-15 | 成都斯马特科技有限公司 | 一种基于生化试剂盘进行凝血分析的方法 |
| WO2020056249A1 (en) * | 2018-09-14 | 2020-03-19 | Cara Therapeutics, Inc. | Oral formulations of kappa opioid receptor agonists |
| US20220088589A1 (en) | 2019-01-21 | 2022-03-24 | Eclipse Medcorp, Llc | Methods, Systems and Apparatus for Separating Components of a Biological Sample |
| WO2023150580A2 (en) * | 2022-02-01 | 2023-08-10 | Ocular Therapeutix, Inc. | A controlled release implant for biologics and corresponding methods of treatment |
Family Cites Families (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3664963A (en) * | 1969-10-22 | 1972-05-23 | Balchem Corp | Encapsulation process |
| IT1103817B (it) * | 1978-06-27 | 1985-10-14 | Guaber Spa | Composizione deodorante granulare per posacenere |
| DE2916711A1 (de) * | 1979-04-25 | 1980-11-06 | Behringwerke Ag | Blutgerinnungsfaktoren und verfahren zu ihrer herstellung |
| JPS60100516A (ja) * | 1983-11-04 | 1985-06-04 | Takeda Chem Ind Ltd | 徐放型マイクロカプセルの製造法 |
| EP0193917A3 (en) * | 1985-03-06 | 1987-09-23 | American Cyanamid Company | Water dispersible and water soluble carbohydrate polymer compositions for parenteral administration |
| DE3682047D1 (de) * | 1985-07-09 | 1991-11-21 | Quadrant Bioresources Ltd | Beschuetzung von proteinen und aehnlichem. |
| GB8604983D0 (en) * | 1986-02-28 | 1986-04-09 | Biocompatibles Ltd | Protein preservation |
| US4816568A (en) * | 1986-05-16 | 1989-03-28 | International Minerals & Chemical Corp. | Stabilization of growth hormones |
| US4962091A (en) * | 1986-05-23 | 1990-10-09 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Controlled release of macromolecular polypeptides |
| JP2526589B2 (ja) * | 1986-08-08 | 1996-08-21 | 武田薬品工業株式会社 | ペプチド含有マイクロカプセルおよびその製造法 |
| US5312745A (en) * | 1987-06-18 | 1994-05-17 | Chromogenix Ab | Determination of components active in proteolysis |
| ES2044941T5 (es) * | 1987-08-21 | 1999-02-16 | Mallinckrodt Group Inc | Estabilizador de hormonas promotoras del crecimiento. |
| WO1989003671A1 (en) * | 1987-10-29 | 1989-05-05 | Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. | Sustained-release preparation |
| GB8801338D0 (en) * | 1988-01-21 | 1988-02-17 | Quadrant Bioresources Ltd | Preservation of viruses |
| JP2670680B2 (ja) * | 1988-02-24 | 1997-10-29 | 株式会社ビーエムジー | 生理活性物質含有ポリ乳酸系微小球およびその製造法 |
| AT392079B (de) * | 1988-03-11 | 1991-01-25 | Voest Alpine Ind Anlagen | Verfahren zum druckvergasen von kohle fuer den betrieb eines kraftwerkes |
| US5096885A (en) * | 1988-04-15 | 1992-03-17 | Genentech, Inc. | Human growth hormone formulation |
| US5039540A (en) * | 1989-08-14 | 1991-08-13 | Neophore Technologies, Inc. | Freeze dry composition and method for oral administration of drugs, biologicals, nutrients and foodstuffs |
| US5032405A (en) * | 1989-09-27 | 1991-07-16 | Warner-Lambert Company | Oral pharmaceutical composition for acid sensitive proteinaceous agents |
| US5312705A (en) * | 1990-07-27 | 1994-05-17 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Photosensitive materials for electrophotography having a double-layer structure of a charge generation layer and a charge transport layer |
| AU1442592A (en) * | 1991-02-20 | 1992-09-15 | Nova Pharmaceutical Corporation | Controlled release microparticulate delivery system for proteins |
| FR2673843B1 (fr) * | 1991-03-14 | 1995-01-13 | Centre Nat Rech Scient | Composition pharmaceutique implantable, bioresorbable a base de poly(acide lactique), destinee a mettre en óoeuvre une antibiotherapie interne locale. |
| DK0724433T3 (da) * | 1993-10-22 | 1999-08-30 | Genentech Inc | Fremgangsmåde til fremstilling af mikrosfærer med et tørringstrin i fluidiseret leje |
| ES2182850T3 (es) * | 1993-10-22 | 2003-03-16 | Genentech Inc | Procedimientos y composiciones para la microencapsulacion de adyuvantes. |
| JPH09504027A (ja) * | 1993-10-22 | 1997-04-22 | ジェネンテク，インコーポレイテッド | ワクチンとしての使用のための抗原のマイクロカプセル化のための方法および組成物 |
-
1994
- 1994-02-17 DE DE69426292T patent/DE69426292T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-17 DK DK94909647T patent/DK0686045T3/da active
- 1994-02-17 EP EP94909647A patent/EP0686045B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-17 WO PCT/US1994/001666 patent/WO1994019020A1/en active IP Right Grant
- 1994-02-17 CN CN94191235A patent/CN1108823C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-17 ES ES94909647T patent/ES2153418T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-17 CZ CZ0212795A patent/CZ296649B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-02-17 NZ NZ262634A patent/NZ262634A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-02-17 US US08/256,187 patent/US5589167A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-17 PT PT94909647T patent/PT686045E/pt unknown
- 1994-02-17 AU AU62412/94A patent/AU685784B2/en not_active Expired
- 1994-02-17 AT AT94909647T patent/ATE197550T1/de active
- 1994-02-17 RU RU95118293A patent/RU2143889C1/ru active
- 1994-02-17 JP JP51910094A patent/JP3698721B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-02-20 IL IL10871394A patent/IL108713A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-02-23 ZA ZA941239A patent/ZA941239B/xx unknown
-
1995
- 1995-05-15 US US08/442,241 patent/US5753219A/en not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-09-24 US US08/719,196 patent/US5804557A/en not_active Expired - Lifetime
-
2001
- 2001-02-07 GR GR20010400210T patent/GR3035383T3/el unknown
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2522137C2 (ru) * | 2009-03-16 | 2014-07-10 | Родиа Операсьон | Стабилизированная биоцидная композиция |
| WO2011034464A1 (ru) * | 2009-09-15 | 2011-03-24 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Инъекционная лекарственная форма для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы, способ ее изготовления и применение |
| EA019359B1 (ru) * | 2009-09-15 | 2014-03-31 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Герофарм" | Инъекционная лекарственная форма для лечения острого ишемического инсульта и черепно-мозговой травмы и ее применение |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CZ296649B6 (cs) | 2006-05-17 |
| ES2153418T3 (es) | 2001-03-01 |
| GR3035383T3 (en) | 2001-05-31 |
| NZ262634A (en) | 1997-02-24 |
| DE69426292T2 (de) | 2001-05-17 |
| DE69426292D1 (de) | 2000-12-21 |
| US5804557A (en) | 1998-09-08 |
| AU685784B2 (en) | 1998-01-29 |
| IL108713A (en) | 1999-12-22 |
| JPH08507064A (ja) | 1996-07-30 |
| AU6241294A (en) | 1994-09-14 |
| US5589167A (en) | 1996-12-31 |
| WO1994019020A1 (en) | 1994-09-01 |
| ATE197550T1 (de) | 2000-12-15 |
| PT686045E (pt) | 2001-04-30 |
| EP0686045B1 (en) | 2000-11-15 |
| ZA941239B (en) | 1995-08-23 |
| EP0686045A1 (en) | 1995-12-13 |
| CZ212795A3 (en) | 1996-02-14 |
| CN1108823C (zh) | 2003-05-21 |
| IL108713A0 (en) | 1994-05-30 |
| CN1118143A (zh) | 1996-03-06 |
| JP3698721B2 (ja) | 2005-09-21 |
| DK0686045T3 (da) | 2001-03-05 |
| US5753219A (en) | 1998-05-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2143889C1 (ru) | Способ стабилизации полипептида, способы получения композиций полипептида и композиции | |
| AU2003217367B2 (en) | Polymer-based compositions for sustained release | |
| US20030138491A1 (en) | Microencapsulation and sustained release of biologically active acid-stable or free sulfhydryl-containing proteins | |
| US6080429A (en) | Method for drying microspheres | |
| US8025900B2 (en) | Sustained release composition of protein drug | |
| CA2172508C (en) | Method for preparing microspheres comprising a fluidized bed drying step | |
| US20050158392A1 (en) | Lipophilic-coated microparticle containing a protein drug and formulation comprising same | |
| EP3434263A1 (en) | Method for preparing sustained release microparticle | |
| EP0869816B1 (en) | Dry compositions comprising hydrophobic stabilizers | |
| KR20040018434A (ko) | 서방성 주사제용 조성물 및 이의 제조방법 | |
| BG65976B1 (bg) | Фармацевтична форма на пептиди, методи за нейното получаване и приложение | |
| CA2291765A1 (en) | Pharmaceutical compositions of peptides having low solubility in physiological medium | |
| JP2007532519A (ja) | 皮下注射処方物または筋肉注射処方物中のタンパク質有効成分のバイオアベイラビリティを改良するためのジパルミトステアリン酸グリセロールの使用 | |
| CA2154164C (en) | Excipient stabilization of polypeptides treated with organic solvents |