RU2096414C1 - Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда - Google Patents
Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда Download PDFInfo
- Publication number
- RU2096414C1 RU2096414C1 RU9394035758A RU94035758A RU2096414C1 RU 2096414 C1 RU2096414 C1 RU 2096414C1 RU 9394035758 A RU9394035758 A RU 9394035758A RU 94035758 A RU94035758 A RU 94035758A RU 2096414 C1 RU2096414 C1 RU 2096414C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- groups
- mono
- carbon atoms
- alkyl
- factor
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
Abstract
Назначение: изобретение относится к области высокоочищенного комплекса фактора VIII/фактора Виллебранда из плазмы крови или криопреципитата. Сущность изобретения: комплекс фактора VIII/фактора Виллебранда выделяют посредством анионообменной хроматографии. В качестве анионообменного материала используют материал на основе содержащих гидроксигрупп носителей, поверхности которых покрыты ковалентно связанными полимерами. 7 з.п.ф-лы, 1 табл.
Description
Данное изобретение касается способа выделения высокоочищенного фактора VIII, в котором инактивированы вирусы, из плазмы крови или криопреципитата при помощи анионообменной хроматографии.
Европейская патентная заявка N 88108458.6 описывает способ получения высокоочищенного не содержащего вирусов антигемофилического фактора, заключающийся в том, что криопреципитат, содержащий фактор VIII, обрабатывают гидроксидом алюминия и биологически совместимыми органическими растворителями/детергентами, в предпочтительном варианте с последующей гельпроникающей хроматографией с применением ионообменного материала. Европейская патентная заявка N 88118478.2 описывает хроматографический материал на основе сополимеров олигоэтиленгликолей, глицидилметакрилатов, и пентаэритритолдиметакрилатов, которые особенно пригодны для получения высокоочищенного, не содержащего вирусов фактора VIII.
ЕП 0343275 AI касается способа получения высокоочищенного антигемофилического фактора (AHF или фактора VIII), который в процессе очистки криопреципитата становился не содержащим вирусом факторов в результате обработки биологически совместимыми органическими растворителями/детергентами. Способ заключается в том, что криопреципитат перед удалением из него вирусов оттаивали, экстрагировали водой, содержащей 1-3 E/мл гепарина при pH 6,5-7,5, смешивали затем с суспензией гидроксида алюминия и после охлаждения до 10-18oC и доведения величины pH до 6-7 центрифугировали и фильтровали и затем обрабатывали далее известным способом. Предпочтительно, в частности, подвергать пробу после удаления вирусов гельпроникающей хроматографии на ионообменных материалах. Известен способ очистки фактора VIII, получение его с высоким выходом и сохранением всех его признаков из исходного материала, содержащего фактор VIII и другие белки и факторы, описанный в Европейском патенте ЕП 0209041, включающий стадии: адсорбирования фактора VIII на гидрофобную, интерактивную матрицу, отделение нежелательных белков от фактора VIII и вымывание фактора VIII раствором, содержащим поверхностное активное вещество.
Элюирование фактора VIII осуществляют с помощью раствора, содержащего хлорид кальция и 440% этиленгликоль, а его промывку с помощью буферного раствора, содержащего хлорид натрия, глицин, хлорид кальция и гистидин.
Далее в ЕП 0209041 указывается, что использование определенных поверхностных активных агентов (см. пункт Ig) в элюирующем буфере абсолютно необходимо. Таким образом достигается эффективное восстановление AHF (антигемофилический фактор) активности из гидрофобной интерактивной матрицы. Однако данный способ не раскрывает эффективного удаления нежелательных белков.
Задачей настоящего изобретения является создание способа, способного улучшить выделение биологически активного фактора VIII из таких источников, как криопреципитат и плазма крови, и обеспечить более экономичный технологический процесс.
Поставленная задача достигается способом выделения высокоочищенного комплекса фактора VIII/фактора Виллебранда, в котором инактивированы вирусы, из плазмы крови или криопреципитата с использованием анионообменной хроматографии, при этом в качестве анионообменного материала используют материал для разделения на основе содержащих гидроксигруппы носителей, поверхности которых покрыты ковалентно связанными полимерами, содержащими повторяющиеся единицы, которые одинаковы или различны и представлены формулой I
в которой
R' обозначает H или CH3,
Y обозначает
-CN, -CHO, -OH, -CH2, -NH2 или CH2NR2R3
R' и R'' каждый обозначает H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R'' может также обозначать -OH
X обозначает -OH, -NR2R3 или -OR4,
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n-SO2 - (CH2)n-S-(CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100, и
R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
в которой
R' обозначает H или CH3,
Y обозначает
R' и R'' каждый обозначает H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R'' может также обозначать -OH
X обозначает -OH, -NR2R3 или -OR4,
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n-SO2 - (CH2)n-S-(CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100, и
R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
Предпочтительно, когда в формуле I Y обозначает
где
X OH или -OR4, причем R4 имеет значение, определенное выше.
где
X OH или -OR4, причем R4 имеет значение, определенное выше.
Далее предпочтительны соединения, когда X обозначает - NR2R3, где R2 и R3 каждый обозначает алкил, алкоксиалкил, цианоалкил, аминоалкил, моно- или диалкиламиноалкил, триалкиламмонийалкил, карбоксиалкил, сульфоалкил, имеющие до 10 атомов углерода в алкильной части, фенил, который является незамещенным или моно- или полизамещенным алкилом, алкоксигруппой, алкоксиалкилом, цианогруппой, цианоалкилом, аминоалкилом, амино-, моно- или диалкиламиногруппой, моно- или диалкиламиноалкилом, триалкиламмонием, триалкиламмонийалкилом, карбоксигруппой, карбоксиалкилом, сульфоновой кислотой, сульфоалкилом, ацетокси- или ацетаминогруппой (группами), имеющими до 10 атомов углерода в алкильной части, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, или N или NH и O,
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
Наиболее предпочтительны соединения, когда Y обозначает - CH2NH2 или -CH2NR2R3, где
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100.
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбоксил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
(CH2)n SO2 (CH2)n S - (CH2)nOH,
где
n 2 6, и один из R2 и R3 может тоже обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, чтобы обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной,
n обозначает 2 100.
Также предпочтительны повторяющиеся единицы, представленные формулой I, в которых Y обозначает -CN, -CHO или OH.
Было показано, что очистку фактора VIII в способе настоящего изобретения предпочтительно проводить путем промывания и элюирования буферами, имеющими последовательно увеличивающуюся ионную силу, которую корректируют при помощи солей четвертичного аммония, имеющих, по меньшей мере, одну углеводородную цепь из 1 6 атомов углерода и несущих гидрофильный заместитель, или при помощи таких солей в сочетании с поваренной солью.
При этом наиболее предпочтительно, когда соль четвертичного аммония представляет собой холинхлорид, а солевой градиент, получаемый с применением буферных систем, равен 0,1 1М в виде общих концентраций хлорида натрия и/или соли четвертичного аммония, определенного выше.
При помощи способа согласно изобретения достигается выделение фактора VIII с высоким выходом и высокой стабильностью продукта. Предпочтительно, чтобы в способе, проводимом в соответствии с данным изобретением, не был удален так называемый фактор фон Виллебранда, который должен оставаться во фракциях фактора VIII. Поэтому препараты фактора VIII можно применять также для больных, страдающих от недостаточности фактора фон Виллебранда. Кроме того, фактор VIII можно также применять в способах непрерывного вливания благодаря присутствию фактора фон Виллебранда, который облегчает природную стабилизацию фактора VIII.
Далее способ иллюстрируется при помощи следующих примеров.
Пример 1
Накопление фактора VIII из криопреципитата
Коммерчески доступный криопреципитат делят на кусочки размером 1 2 см и оттаивают при комнатной температуре в течение 3 4 часов. Эти кусочки суспендируют при перемешивании в приблизительно двойном объеме воды, содержащей 2 Е/мл Na-гепарина при температурах 20 25oC, pH суспензии доводят до 7,0 7,1 0,1М уксусной кислотой. Перемешивание продолжают при 20 - 25oC в течение 30 минут. На 1 кг криопреципитата добавляют 108 г 2%-ной суспензии гидроксида алюминия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут. Затем 0,1 М. уксусной кислотой доводят величину pH до 6,5 - 6,6. Пробу охлаждают до 16 14oC, центрифугируют в центрифуге Sharples AS-16 (Cepa 61) при скорости 1,0 L/минут. Супернатант фильтруют через фильтр Pall AB-1 U010ZP.
Накопление фактора VIII из криопреципитата
Коммерчески доступный криопреципитат делят на кусочки размером 1 2 см и оттаивают при комнатной температуре в течение 3 4 часов. Эти кусочки суспендируют при перемешивании в приблизительно двойном объеме воды, содержащей 2 Е/мл Na-гепарина при температурах 20 25oC, pH суспензии доводят до 7,0 7,1 0,1М уксусной кислотой. Перемешивание продолжают при 20 - 25oC в течение 30 минут. На 1 кг криопреципитата добавляют 108 г 2%-ной суспензии гидроксида алюминия, и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5 минут. Затем 0,1 М. уксусной кислотой доводят величину pH до 6,5 - 6,6. Пробу охлаждают до 16 14oC, центрифугируют в центрифуге Sharples AS-16 (Cepa 61) при скорости 1,0 L/минут. Супернатант фильтруют через фильтр Pall AB-1 U010ZP.
Пример 2
Приготовление хроматографической колонки
Для разделения экстрагированного криопреципитата применяют не менее 0,5 л ионообменной смолы на 1 кг криопреципитата. Высота колонки должна быть ≅ диаметра. После наполнения колонки смолой колонку сначала промывают 5 объемами раствора 0,1 М хлорида натрия. После этого ее промывают буфером A, имеющим следующий состав:
120 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
величину pH доводят 1 М HCl до 6,5-7,0.
Приготовление хроматографической колонки
Для разделения экстрагированного криопреципитата применяют не менее 0,5 л ионообменной смолы на 1 кг криопреципитата. Высота колонки должна быть ≅ диаметра. После наполнения колонки смолой колонку сначала промывают 5 объемами раствора 0,1 М хлорида натрия. После этого ее промывают буфером A, имеющим следующий состав:
120 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
величину pH доводят 1 М HCl до 6,5-7,0.
Все буферы не должны содержать вирусов, так как последующие операции проводят с безвирусными экстрактами криопреципитата.
Пример 3
Пробу вносят в колонку и измеряют поглощение вытекающего из нее раствора при длине волны 280 нм. Фильтрат собирают и испытывают на активность фактора VIII, так как и продукт перед его внесением в колонку. Затем колонку промывают буфетом A до тех пор, пока поглощение вновь не достигнем его исходной величины. Затем колонку промывают буфером B, пока поглощение опять не вернется к базовой линии.
Пробу вносят в колонку и измеряют поглощение вытекающего из нее раствора при длине волны 280 нм. Фильтрат собирают и испытывают на активность фактора VIII, так как и продукт перед его внесением в колонку. Затем колонку промывают буфетом A до тех пор, пока поглощение вновь не достигнем его исходной величины. Затем колонку промывают буфером B, пока поглощение опять не вернется к базовой линии.
Буфер B имеет следующий состав:
180-200 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
180-200 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
Элюирование продукта проводили при помощи буфера C. Белковую фракцию, появляющуюся после добавления буфера C, собирали.
Буфер C имеет следующий состав:
400 мМ хлорида натрия,
1 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
400 мМ хлорида натрия,
1 мМ цитрата натрия • 5 H2O,
120 мМ глицина,
1 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,0.
После элюирования целевого продукта колонку промывали 5 объемами буфера D, который содержит 1 М раствора хлорида натрия.
Колонку регенерировали промыванием ее 0,1 N NaOH (3 объема колонки) с последующим промыванием 0,1N соляной кислоты (3 объема колонки) и промыванием колонки 5 объемами 25%-ного спирта в воде.
Пример 4
Собранные фракции разбавляли буфером E, состоящим из:
20 мМ цитрата натрия,
80 мМ глицина,
2,5 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,1, до тех пор, пока не была достигнута активность 26 или 35 E/мл. После этого доводили pH, если требовалось, до 6,9-7,1 и фильтровали через 0,45 мкм фильтр Sealklean. Впоследствии проводили стерильное фильтрование.
Собранные фракции разбавляли буфером E, состоящим из:
20 мМ цитрата натрия,
80 мМ глицина,
2,5 мМ хлорида кальция • 2 H2O,
pH 6,9-7,1, до тех пор, пока не была достигнута активность 26 или 35 E/мл. После этого доводили pH, если требовалось, до 6,9-7,1 и фильтровали через 0,45 мкм фильтр Sealklean. Впоследствии проводили стерильное фильтрование.
Пример 5
Если в качестве источника фактора VIII используют плазму человека, то применяют следующую процедуру:
Свежую или глубокозамороженную плазму человека доводят до температуры 20oC, иногда с использованием водяной бани. Плазму разбавляют 50% по объему воды и затем фильтруют. Фильтрат плазмы вносят в ионообменную колонку, содержащую EMD IMAE Fractogel (М) 650, уравновешенную предварительно буфером следующего состава:
50 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия,
120 мМ глицина,
1000 E/л гепарина,
pH 6,5-6,9.
Если в качестве источника фактора VIII используют плазму человека, то применяют следующую процедуру:
Свежую или глубокозамороженную плазму человека доводят до температуры 20oC, иногда с использованием водяной бани. Плазму разбавляют 50% по объему воды и затем фильтруют. Фильтрат плазмы вносят в ионообменную колонку, содержащую EMD IMAE Fractogel (М) 650, уравновешенную предварительно буфером следующего состава:
50 мМ хлорида натрия,
10 мМ цитрата натрия,
120 мМ глицина,
1000 E/л гепарина,
pH 6,5-6,9.
После нанесения пробы, ионообменную смолу промывают несколько раз промывным буфером. Затем концентрацию поваренной соли увеличивают, промывая колонку сначала буфером, содержащим 100 мМ хлорида натрия, затем буфером, содержащим 160 мМ хлорида натрия, и после этого буфером, содержащим 200 мМ хлорида натрия. Фракции, содержащие фактор VIII, собирают и стабилизируют добавлением 1,0 мг/мл сывороточного альбумина человека. Полученный продукт обрабатывают далее так же, как в примерах 2-4, за исключением того, что коммерчески доступный криопреципитата здесь заменен полученными при помощи колонки фракциями.
Пример 6 Сравнительный эксперимент
В каждом из двух опытом обрабатывали 0,3 кг криопреципитата, полученного из одной и той же плазмы. Одну процедуру проводили в соответствии с данным изобретением, а другую в соответствии со способом ЕП 0343275 AI. Фракции подвергали анализу и результаты, относящиеся к этим двум опытам, представлены в следующей таблице.
В каждом из двух опытом обрабатывали 0,3 кг криопреципитата, полученного из одной и той же плазмы. Одну процедуру проводили в соответствии с данным изобретением, а другую в соответствии со способом ЕП 0343275 AI. Фракции подвергали анализу и результаты, относящиеся к этим двум опытам, представлены в следующей таблице.
Работа по способу в соответствии с ЕП 03443275 AI приводит к получению только 23 фракций, каждая из которых содержит 270 М E фактора VIII, что соответствует выходу 20700 М E фактора VIII на 1 кг криопреципитата или 207 М E на 1 кг плазмы. Отсюда можно сделать вывод о преимуществе работы по способу согласно изобретению, который дает выход почти на 51% выше выхода, полученного при применении способа ЕП 0343275 AI.
Нежелательные белки, также как фибриноген и иммуноглобулин М (IgM), более эффективно удаляются в способе, соответствующем данному изобретению.
Claims (8)
1. Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора VIII/ фактора Виллебранда, в котором инактивированы вирусы, из плазмы крови или криопреципитата с использованием анионообменной хроматографии, отличающийся тем, что в качестве анионообменного материала используют материал для разделения на основе содержащих гидроксигруппы носителей, поверхности которых покрыты ковалентно связанными полимерами, содержащими повторяющиеся единицы, которые одинаковы или различны и представлены формулой I
в которой R' H или CH3;
Y
-CN, -CHO, -CH, -CH2 NH2 или CH2NR2R3;
R' и R2 каждый H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R2 может также обозначать OH
X обозначает OH, -NR2R3 или -OR4;
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбосил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2 групп замещены N или NH, N или NH и S,N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S- (CH2)nOH,
где n 2 6,
и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы либо одна из двух частей является нейтральной;
n 2 100, и R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
в которой R' H или CH3;
Y
R' и R2 каждый H или CH3, тогда как, если Y OH, один из R' и R2 может также обозначать OH
X обозначает OH, -NR2R3 или -OR4;
R2 и R3 каждый означает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут быть моно- или полизамещенными алкокси-, циано-, амино-, моно- или диалкиламино-, триалкиламмоний-, карбосил-, сульфоновая кислота, ацетокси- или ацетаминогруппами, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2 групп замещены N или NH, N или NH и S,N или NH и O, или сульфиносульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S- (CH2)nOH,
где n 2 6,
и один из R2 и R3 может также обозначать H, причем R2 и R3 расположены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы либо одна из двух частей является нейтральной;
n 2 100, и R4 обозначает алкильную, фенильную, фенилалкильную или алкилфенильную группу, имеющую до 10 атомов углерода в алкильной части, причем эти группы могут также быть моно- или полизамещены алкокси-, циано-, карбоксильной, сульфоновой кислотой или ацетоксигруппами.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что Y обозначает
где X -OH или -OR4, где R4 определено в п.1.
где X -OH или -OR4, где R4 определено в п.1.
3. Способ по пп.1 и 2, отличающийся тем, что в формуле I Y обозначает
с X -NR2R3,
где R2 и R3 каждый обозначает алкил, алкоксиалкил, цианоалкил, аминоалкил, моно- или диалкиламиноалкил, триалкиламмонийалкил, карбоксиалкил, сульфоалкил, имеющие до 10 атомов углерода в алкильной части, фенил, который является незамещенным или моно- или полизамещенным алкилом, алкоксигруппой, алкоксиалкилом, цианогруппой, цианоалкилом, аминоалкилом, амино-, моно- или диалкиламиногруппой, моно- или диалкиламиноалкилом, триалкиламмонием, триалкиламмонийалкилом, карбоксигруппой, карбоксиалкилом, сульфогруппой, сульфоалкилом, ацетокси- или ацетаминогруппой (группами), имеющими до 10 атомов углерода в алкильной части, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, или N или NH и O,
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S-(CH2)nOH,
где n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H,
причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
с X -NR2R3,
где R2 и R3 каждый обозначает алкил, алкоксиалкил, цианоалкил, аминоалкил, моно- или диалкиламиноалкил, триалкиламмонийалкил, карбоксиалкил, сульфоалкил, имеющие до 10 атомов углерода в алкильной части, фенил, который является незамещенным или моно- или полизамещенным алкилом, алкоксигруппой, алкоксиалкилом, цианогруппой, цианоалкилом, аминоалкилом, амино-, моно- или диалкиламиногруппой, моно- или диалкиламиноалкилом, триалкиламмонием, триалкиламмонийалкилом, карбоксигруппой, карбоксиалкилом, сульфогруппой, сульфоалкилом, ацетокси- или ацетаминогруппой (группами), имеющими до 10 атомов углерода в алкильной части, циклическую или бициклическую группу, имеющую 5 10 атомов углерода, в которой одна или несколько CH- или CH2-групп замещены N или NH, N или NH и S, или N или NH и O,
или сульфонсульфид, имеющий структуру
-(CH2)n-SO2-(CH2)n-S-(CH2)nOH,
где n 2 6, и один из R2 и R3 может также обозначать H,
причем R2 и R3 приспособлены друг к другу таким образом, что обе части молекулы либо содержат кислотные или основные группы, либо одна из двух частей является нейтральной.
4. Способ по пп.1 3, отличающийся тем, что в формуле I Y обозначает -CH2NH2 или CH2NR2R3, причем R2 и R3 имеют значения, определенные в п.1.
5. Способ по пп.1 4, отличающийся тем, что в формуле I Y обозначает -CN, -CHO или -OH.
6. Способ по пп.1 5, отличающийся тем, что очистку фактора VIII проводят путем промывания и элюирования буферами, имеющими последовательно увеличивающуюся ионную силу, характеризуется тем, что ионную силу буфера корректируют при помощи солей четвертичного аммония, имеющих по меньшей мере одну гидрокарбильную цепь из 1 6 атомов углерода и несущих гидрофильный заместитель, или при помощи таких солей в сочетании с поваренной солью.
7. Способ по пп.1 6, отличающийся тем, что соль четвертичного аммония представляет собой холинхлорид.
8. Способ по пп.1 7, отличающийся тем, что солевой градиент, получаемый с применением буферных систем, равен 0,1 1 М в виде общих концентраций хлорида натрия и/или соли четвертичного аммония.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4204694A DE4204694C3 (de) | 1992-02-01 | 1992-02-01 | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem Faktor VIII mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| DEP4204694.7 | 1992-02-01 | ||
| PCT/EP1993/000114 WO1993015105A1 (en) | 1992-02-01 | 1993-01-20 | Process for recovering a high-purity virus-inactivated factor viii by anion exchanger chromatography |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94035758A RU94035758A (ru) | 1996-01-27 |
| RU2096414C1 true RU2096414C1 (ru) | 1997-11-20 |
Family
ID=6451895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU9394035758A RU2096414C1 (ru) | 1992-02-01 | 1993-01-20 | Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5714590A (ru) |
| EP (1) | EP0625161B9 (ru) |
| JP (1) | JP3556947B2 (ru) |
| KR (1) | KR100240310B1 (ru) |
| AT (1) | ATE203249T1 (ru) |
| AU (1) | AU670776B2 (ru) |
| DE (2) | DE4204694C3 (ru) |
| DK (1) | DK0625161T4 (ru) |
| ES (1) | ES2157920T5 (ru) |
| FI (1) | FI109908B (ru) |
| GR (1) | GR3036849T3 (ru) |
| NO (1) | NO315426B1 (ru) |
| PT (1) | PT625161E (ru) |
| RU (1) | RU2096414C1 (ru) |
| TW (1) | TW362099B (ru) |
| WO (1) | WO1993015105A1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
| RU2579977C2 (ru) * | 2009-11-13 | 2016-04-10 | Грифольс Терапьютикс Инк. | СОДЕРЖАЩИЕ ФАКТОР ФОН ВИЛЛЕБРАНДА (vWF) ПРЕПАРАТЫ И СПОСОБЫ, НАБОРЫ И ПРИМЕНЕНИЯ, СВЯЗАННЫЕ С НИМИ |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1993005067A1 (en) * | 1991-09-05 | 1993-03-18 | Baxter International, Inc. | Topical fibrinogen complex |
| DE4342132C1 (de) * | 1993-12-10 | 1994-11-03 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung virusinaktivierte Vitamin K abhängige Plasmakomponenten sowie Protein C und Protein S enthaltender Mittel durch Membran-Chromatographie |
| DE4407837C1 (de) * | 1994-03-09 | 1995-08-17 | Octapharma Ag | Verfahren zur Gewinnung von hochreinem, virusinaktiviertem alpha¶1¶-Antitrypsin mittels Anionenaustauscher-Chromatographie |
| AT403764B (de) | 1996-03-15 | 1998-05-25 | Immuno Ag | Stabiler faktor viii/vwf-komplex |
| EP1148063A1 (de) * | 2000-04-18 | 2001-10-24 | Octapharma AG | Haemostatisch aktives vWF enthaltendes Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung |
| FR2874216B1 (fr) * | 2004-08-16 | 2006-11-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre de facteur von willebrand (fvw) par voie chromatographique et concentre de fvw susceptible d'etre ainsi obtenu |
| EP1739179A1 (en) | 2005-06-30 | 2007-01-03 | Octapharma AG | Serum-free stable transfection and production of recombinant human proteins in human cell lines |
| EP2652491B1 (en) | 2010-12-15 | 2017-11-29 | Baxalta GmbH | Eluate collection using conductivity gradient |
| BRPI1105317A2 (pt) | 2011-01-24 | 2013-04-30 | Fundacco Hemoct De Ribeirco Preto | produÇço estÁvel e em larga escala de fviii humano em linhagem celular humana sk-hep-1 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4876241A (en) * | 1987-05-22 | 1989-10-24 | Armour Pharmaceutical Company | Stabilization of biological and pharmaceutical products during thermal inactivation of viral and bacterial contaminants |
| DE3811042A1 (de) * | 1988-03-31 | 1989-10-19 | Merck Patent Gmbh | Ionenaustauscher |
| ES2053619T3 (es) * | 1988-05-27 | 1994-08-01 | Centre Regional De Transfusion | Procedimiento para la fabricacion de un factor antihemofilico de gran pureza y libre de virus mediante cromatografia. |
| FR2632309B1 (fr) * | 1988-06-07 | 1990-08-24 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de purification par voie chromatographique de proteines, notamment de facteur viii, et les produits obtenus |
| ATE85221T1 (de) * | 1988-11-05 | 1993-02-15 | Octapharma Ag | Verfahren zur herstellung eines hochreinen, nicht infektioesen antihaemophiliefaktors mittels chromatographie. |
| GB8913183D0 (en) * | 1989-06-08 | 1989-07-26 | Central Blood Lab Authority | Chemical products |
| FR2651437A1 (fr) * | 1989-09-05 | 1991-03-08 | Lille Transfusion Sanguine | Procede de preparation de concentre du complexe facteur viii-facteur von willebrand de la coagulation sanguine a partir de plasma total. |
-
1992
- 1992-02-01 DE DE4204694A patent/DE4204694C3/de not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-01-20 ES ES93902233T patent/ES2157920T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 JP JP51290293A patent/JP3556947B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 WO PCT/EP1993/000114 patent/WO1993015105A1/en active IP Right Grant
- 1993-01-20 AT AT93902233T patent/ATE203249T1/de active
- 1993-01-20 US US08/284,403 patent/US5714590A/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 DK DK93902233T patent/DK0625161T4/da active
- 1993-01-20 DE DE69330458T patent/DE69330458T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 EP EP93902233A patent/EP0625161B9/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-01-20 KR KR1019940702645A patent/KR100240310B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-01-20 PT PT93902233T patent/PT625161E/pt unknown
- 1993-01-20 AU AU33517/93A patent/AU670776B2/en not_active Expired
- 1993-01-20 RU RU9394035758A patent/RU2096414C1/ru not_active IP Right Cessation
- 1993-01-28 TW TW082100487A patent/TW362099B/zh not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-07-28 FI FI943545A patent/FI109908B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-07-29 NO NO19942832A patent/NO315426B1/no not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-10-09 GR GR20010401713T patent/GR3036849T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| EP, заявка, 0209041, кл. C 07 K 3/18, 1987. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2579977C2 (ru) * | 2009-11-13 | 2016-04-10 | Грифольс Терапьютикс Инк. | СОДЕРЖАЩИЕ ФАКТОР ФОН ВИЛЛЕБРАНДА (vWF) ПРЕПАРАТЫ И СПОСОБЫ, НАБОРЫ И ПРИМЕНЕНИЯ, СВЯЗАННЫЕ С НИМИ |
| RU2445974C2 (ru) * | 2010-04-26 | 2012-03-27 | Учреждение Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр ГНЦ РАМН | Способ получения концентрата фактора viii из плазмы крови человека |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU670776B2 (en) | 1996-08-01 |
| JPH07503241A (ja) | 1995-04-06 |
| WO1993015105A1 (en) | 1993-08-05 |
| EP0625161B9 (en) | 2007-09-19 |
| DE69330458T3 (de) | 2008-01-17 |
| NO942832L (no) | 1994-07-29 |
| KR100240310B1 (ko) | 2000-01-15 |
| EP0625161B2 (en) | 2007-05-16 |
| ATE203249T1 (de) | 2001-08-15 |
| DE4204694A1 (de) | 1993-08-12 |
| EP0625161B1 (en) | 2001-07-18 |
| FI943545A (fi) | 1994-07-28 |
| US5714590A (en) | 1998-02-03 |
| DE69330458T2 (de) | 2002-05-29 |
| AU3351793A (en) | 1993-09-01 |
| ES2157920T3 (es) | 2001-09-01 |
| DE69330458D1 (de) | 2001-08-23 |
| NO315426B1 (no) | 2003-09-01 |
| FI109908B (fi) | 2002-10-31 |
| FI943545A0 (fi) | 1994-07-28 |
| DE4204694C2 (de) | 1994-02-10 |
| PT625161E (pt) | 2001-10-31 |
| KR950700925A (ko) | 1995-02-20 |
| TW362099B (en) | 1999-06-21 |
| DK0625161T4 (da) | 2007-09-03 |
| DE4204694C3 (de) | 1995-10-12 |
| JP3556947B2 (ja) | 2004-08-25 |
| DK0625161T3 (da) | 2001-09-24 |
| EP0625161A1 (en) | 1994-11-23 |
| GR3036849T3 (en) | 2002-01-31 |
| ES2157920T5 (es) | 2007-12-16 |
| NO942832D0 (no) | 1994-07-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3094167B2 (ja) | 免疫血清グロブリンの精製方法 | |
| EP0083483B2 (en) | Ultrapurificated factor VIII : C preparation | |
| RU2096414C1 (ru) | Способ выделения высокоочищенного комплекса фактора viii фактора виллебранда | |
| CA2024667C (en) | Process for preparing a concentrate of blood coagulation factor viii-von willebrand factor complex from total plasma | |
| JP2000513377A (ja) | プリオンのクロマトグラフィー除去方法 | |
| JP2003530326A (ja) | ＩｇＧを製造する方法 | |
| JPS63503352A (ja) | タンパク質の精製 | |
| JP2002508388A (ja) | 新規なＴＧＦ−βタンパク質精製方法 | |
| AU599310B2 (en) | A preparation for the treatment of hemophilia a inhibitor patients and a process for producing such a preparation | |
| JPH0381290A (ja) | 精製されたアルブミン溶液の製造方法 | |
| JPH03502200A (ja) | クロマトグラフィーによる高純度の非感染性抗血友病因子の生産方法 | |
| HU222084B1 (hu) | Eljárás vírus-inaktivált K-vitamin-függő plazmakomponenseket tartalmazó szerek, így C-protein és S-protein előállítására kromatográfiával | |
| JPS6034916A (ja) | 第１ｘ因子および他のビタミンｋ依存性タンパク質の高純度精製 | |
| US6414125B1 (en) | Method of chromatographically purifying or fractionating, respectively, von Willebrand factor from a VWF-containing starting material | |
| US4189535A (en) | Serum cell growth promoting materials | |
| JPH07155194A (ja) | タンパク質の精製法 | |
| JPS6160050B2 (ru) | ||
| JPH09504532A (ja) | クロマトグラフィー法による第８因子を含むウィルス不活性化分画の製造方法 | |
| JPS61103895A (ja) | ＨＢｓＡｇの精製方法 | |
| DK173863B1 (da) | Immunosorbent | |
| FI73130B (fi) | Foerfarande foer framstaellning av renat insulin laempat foer beredning av foer kliniskt bruk anvaendbara injicerbara insulinberedningar. | |
| JPS59167519A (ja) | 不活化トロンビンゲルにより血漿タンパク質混合液からフイブリノ−ゲンを除去する方法 | |
| JPH02255698A (ja) | 血液凝固第８因子の製造法 | |
| JPH05170799A (ja) | ヒトインターロイキン８の精製方法 | |
| JPH03176499A (ja) | 人尿トリプシンインヒビターの精製方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110121 |