JPH05170799A - ヒトインターロイキン８の精製方法 - Google Patents
ヒトインターロイキン８の精製方法Info
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- JPH05170799A JPH05170799A JP34054191A JP34054191A JPH05170799A JP H05170799 A JPH05170799 A JP H05170799A JP 34054191 A JP34054191 A JP 34054191A JP 34054191 A JP34054191 A JP 34054191A JP H05170799 A JPH05170799 A JP H05170799A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 粗インターロイキン８原液をシリカ系吸着担
体を用いたクロマトグラフィーにより精製する。 【効果】 高純度のインターロイキン８を得ることがで
き、かつ大量精製が可能である。
体を用いたクロマトグラフィーにより精製する。 【効果】 高純度のインターロイキン８を得ることがで
き、かつ大量精製が可能である。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は粗インターロイキン８原
液から純度の高いインターロイキン８（以下、ＩＬ−８
と略す）を精製する方法に関する。
液から純度の高いインターロイキン８（以下、ＩＬ−８
と略す）を精製する方法に関する。
【０００２】本発明によればヒト細胞や動物細胞、大腸
菌由来のＩＬ−８を高純度にまで精製することができ
る。本発明に係るＩＬ−８は好中球遊走作用や、好中球
自身の活性化作用がある為、好中球減少患者や、免疫不
全患者の治療等に広く利用しうる有用な物質である。ま
た、血中などのＩＬ−８濃度を測定するための標準品と
しても利用できる。
菌由来のＩＬ−８を高純度にまで精製することができ
る。本発明に係るＩＬ−８は好中球遊走作用や、好中球
自身の活性化作用がある為、好中球減少患者や、免疫不
全患者の治療等に広く利用しうる有用な物質である。ま
た、血中などのＩＬ−８濃度を測定するための標準品と
しても利用できる。
【０００３】
【従来の技術】ＩＬ−８は、従来から知られる好中球の
遊走活性を持つ好中球遊走因子（neutrophil chemotact
ic facter: NCF）と同じもので、松島らや、吉村らを始
めとして広く研究されている（ Proc.Natl.Acad.Sci.US
A,84,9233,(1987), J.Exp.Med,167,1883,(1988), J.Ex
p.Med.169,1485,(1989),Biochem.Bophys.Res.Commun,15
9,249,1989, J.Exp.Med,169,1449,(1989), FEBS Lett,2
44,487,(1989)など）。
遊走活性を持つ好中球遊走因子（neutrophil chemotact
ic facter: NCF）と同じもので、松島らや、吉村らを始
めとして広く研究されている（ Proc.Natl.Acad.Sci.US
A,84,9233,(1987), J.Exp.Med,167,1883,(1988), J.Ex
p.Med.169,1485,(1989),Biochem.Bophys.Res.Commun,15
9,249,1989, J.Exp.Med,169,1449,(1989), FEBS Lett,2
44,487,(1989)など）。
【０００４】松島らはリポポリサッカライド（ＬＰＳ）
で刺激した末梢血単核球の培養上清を膜濃縮・透析し、
ジメチルエチル基が結合した陰イオン交換体を用いたク
ロマトグラフィー、ゲル濾過担体を用いたクロマトグラ
フィー、カルボキシルメチル基を結合した陽イオン交換
体の高速液体クロマトグラフィー、および逆相高速液体
クロマトグラフィーを用いて純粋なＩＬ−８を得ている
（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84,9233,(1987）) 。また、
同様に培養上清を濃縮後、透析し、ヘパリンを結合させ
た担体を用いたクロマトグラフィー、カルボキシルメチ
ル基を結合した陽イオン交換体の高速液体クロマトグラ
フィー、および逆相高速液体クロマトグラフィーを用い
る方法でも精製している（ Science,243,1464,(198
9)）。
で刺激した末梢血単核球の培養上清を膜濃縮・透析し、
ジメチルエチル基が結合した陰イオン交換体を用いたク
ロマトグラフィー、ゲル濾過担体を用いたクロマトグラ
フィー、カルボキシルメチル基を結合した陽イオン交換
体の高速液体クロマトグラフィー、および逆相高速液体
クロマトグラフィーを用いて純粋なＩＬ−８を得ている
（Proc.Natl.Acad.Sci.USA,84,9233,(1987）) 。また、
同様に培養上清を濃縮後、透析し、ヘパリンを結合させ
た担体を用いたクロマトグラフィー、カルボキシルメチ
ル基を結合した陽イオン交換体の高速液体クロマトグラ
フィー、および逆相高速液体クロマトグラフィーを用い
る方法でも精製している（ Science,243,1464,(198
9)）。
【０００５】しかしながら、上記精製法では膜濃縮・透
析といった操作が入り、無菌性の確保、操作の繁雑性な
どに問題が残り、特に工業的生産のような大量精製には
不都合な点が多い。
析といった操作が入り、無菌性の確保、操作の繁雑性な
どに問題が残り、特に工業的生産のような大量精製には
不都合な点が多い。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】したがって本発明では
これらの課題を解決し、従来、大量精製が難しかったＩ
Ｌ−８を高純度の標品にまで効率よく精製しようとする
ものである。
これらの課題を解決し、従来、大量精製が難しかったＩ
Ｌ−８を高純度の標品にまで効率よく精製しようとする
ものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記問題点
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ＩＬ−８を産
生せしめた原液から高純度のＩＬ−８を精製することを
達成し、本発明を完成した。すなわち本発明は、粗イン
ターロイキン８溶液（原液）をシリカ系吸着担体を用い
たクロマトグラフィーにより処理することを特徴とする
ヒトインターロイキン８の精製方法である。以下に本発
明を詳細に説明する。
を解決するために鋭意研究を重ねた結果、ＩＬ−８を産
生せしめた原液から高純度のＩＬ−８を精製することを
達成し、本発明を完成した。すなわち本発明は、粗イン
ターロイキン８溶液（原液）をシリカ系吸着担体を用い
たクロマトグラフィーにより処理することを特徴とする
ヒトインターロイキン８の精製方法である。以下に本発
明を詳細に説明する。
【０００８】ＩＬ−８原液としては、ヒト細胞を刺激す
る方法、あるいは遺伝子工学的生産法、さらには化学合
成法など、いかなる方法で産生されたＩＬ−８でも適用
可能であるが、ヒト細胞を合成核酸などの誘導刺激剤を
用いて産生せしめたものが望ましい。特に好ましくは、
ヒト細胞の中でも線維芽細胞を用いたものが良い。
る方法、あるいは遺伝子工学的生産法、さらには化学合
成法など、いかなる方法で産生されたＩＬ−８でも適用
可能であるが、ヒト細胞を合成核酸などの誘導刺激剤を
用いて産生せしめたものが望ましい。特に好ましくは、
ヒト細胞の中でも線維芽細胞を用いたものが良い。
【０００９】本発明で用いるシリカ系吸着担体として
は、二酸化ケイ素（シリカ）、ケイ酸塩ガラスなどが用
いられるが、好ましくは、担体自身を微小球状に製した
マイクロビーズ状のシリカ系ゲルを用いるのが良い。さ
らに粒子径としては５０〜３２５メッシュのものが好ま
しく用いられる。例えば、“マイクロビーズシリカゲ
ル”やＣＰＧ（Controlled pore glass)等が用いられ
る。通常これらの担体には、ポアが存在するが、ポアサ
イズとしては２５〜５００オングストロームのものが好
ましい。
は、二酸化ケイ素（シリカ）、ケイ酸塩ガラスなどが用
いられるが、好ましくは、担体自身を微小球状に製した
マイクロビーズ状のシリカ系ゲルを用いるのが良い。さ
らに粒子径としては５０〜３２５メッシュのものが好ま
しく用いられる。例えば、“マイクロビーズシリカゲ
ル”やＣＰＧ（Controlled pore glass)等が用いられ
る。通常これらの担体には、ポアが存在するが、ポアサ
イズとしては２５〜５００オングストロームのものが好
ましい。
【００１０】本発明では、ＩＬ−８の純度を上昇させる
ために、さらに陽イオン交換体を用いたクロマトグラフ
ィーを組み合わせることが有利である。陽イオン交換体
としてはカルボキシル基やスルホン酸基、リン酸基を持
つものや、ヘパリンのような硫酸基を含む化合物を結合
させた担体をさし、担体の骨格としては、セルロース、
アガロース、デキストランなどを材料とする多糖類およ
びポリビニルアルコール系などの合成高分子系などいず
れでも良い。陽イオン交換体を使用する順序は、シリカ
系吸着担体の前でも後でも構わないが、シリカ系吸着担
体の後段に使用するのが好ましく、またくりかえし使用
しても良い。
ために、さらに陽イオン交換体を用いたクロマトグラフ
ィーを組み合わせることが有利である。陽イオン交換体
としてはカルボキシル基やスルホン酸基、リン酸基を持
つものや、ヘパリンのような硫酸基を含む化合物を結合
させた担体をさし、担体の骨格としては、セルロース、
アガロース、デキストランなどを材料とする多糖類およ
びポリビニルアルコール系などの合成高分子系などいず
れでも良い。陽イオン交換体を使用する順序は、シリカ
系吸着担体の前でも後でも構わないが、シリカ系吸着担
体の後段に使用するのが好ましく、またくりかえし使用
しても良い。
【００１１】本発明者らは、ＩＬ−８を産生させた原液
からＩＬ−８を濃縮する手法としては透析や膜濃縮とい
った工業的生産に不利である従来方法以外に各種担体を
用いたカラムクロマトグラフィーによる濃縮方法を検討
した結果、シリカ系吸着担体が原液を直接接触させるだ
けでＩＬー８を吸着し、適当な条件で溶出することを見
出だした。吸着方法としては、バッチ吸着あるいはカラ
ム吸着のいずれでも良い。吸着した夾雑蛋白質や培地由
来の色素を洗浄する目的で、リン酸ナトリウム緩衝液な
どの適当な溶液で処理した後、酸性溶液や、エチレング
リコール等の有機溶媒を含む回収液により精製されたＩ
Ｌ−８を溶出させる。酸性溶液で溶出させた場合に適当
な塩基性溶液で中性化することにより夾雑蛋白質の沈澱
が発生するため、沈殿を除くとＩＬ−８の純度を上げる
ことができる。
からＩＬ−８を濃縮する手法としては透析や膜濃縮とい
った工業的生産に不利である従来方法以外に各種担体を
用いたカラムクロマトグラフィーによる濃縮方法を検討
した結果、シリカ系吸着担体が原液を直接接触させるだ
けでＩＬー８を吸着し、適当な条件で溶出することを見
出だした。吸着方法としては、バッチ吸着あるいはカラ
ム吸着のいずれでも良い。吸着した夾雑蛋白質や培地由
来の色素を洗浄する目的で、リン酸ナトリウム緩衝液な
どの適当な溶液で処理した後、酸性溶液や、エチレング
リコール等の有機溶媒を含む回収液により精製されたＩ
Ｌ−８を溶出させる。酸性溶液で溶出させた場合に適当
な塩基性溶液で中性化することにより夾雑蛋白質の沈澱
が発生するため、沈殿を除くとＩＬ−８の純度を上げる
ことができる。
【００１２】陽イオン交換体に吸着させるためにはシリ
カ系吸着担体からの回収液は中性付近であることが望ま
しく、また、イオン強度はμ＝０．５以下が好ましい。
こうして陽イオン交換体に吸着させたＩＬ−８は適当に
イオン強度を上げた回収液を通じることでさらに精製さ
れたＩＬ−８を回収することができる。溶出のための塩
濃度はグラジエント式に増加させる方法でも、段階的に
増加させるステップワイズ式でも良い。溶出剤として
は、例えば、リン酸ナトリウム緩衝液に塩化ナトリウ
ム、硫酸アンモニウムなどの無機塩を添加したり、ま
た、ｐＨを変化させることで回収することができる。
カ系吸着担体からの回収液は中性付近であることが望ま
しく、また、イオン強度はμ＝０．５以下が好ましい。
こうして陽イオン交換体に吸着させたＩＬ−８は適当に
イオン強度を上げた回収液を通じることでさらに精製さ
れたＩＬ−８を回収することができる。溶出のための塩
濃度はグラジエント式に増加させる方法でも、段階的に
増加させるステップワイズ式でも良い。溶出剤として
は、例えば、リン酸ナトリウム緩衝液に塩化ナトリウ
ム、硫酸アンモニウムなどの無機塩を添加したり、ま
た、ｐＨを変化させることで回収することができる。
【００１３】このようにして得られたＩＬ−８精製標品
は通常十分に高純度で得られるが、必要に応じてさらに
純度を向上させるには、アルキル基（Ｃ1 〜Ｃ18）など
を有する担体をカラムに充填した逆相系高速液体クロマ
トグラフィーを用いることができたり、後段に他の精製
法を組み合わすこともできるが、本発明の方法によって
精製の目的の大部分が達成される。
は通常十分に高純度で得られるが、必要に応じてさらに
純度を向上させるには、アルキル基（Ｃ1 〜Ｃ18）など
を有する担体をカラムに充填した逆相系高速液体クロマ
トグラフィーを用いることができたり、後段に他の精製
法を組み合わすこともできるが、本発明の方法によって
精製の目的の大部分が達成される。
【００１４】本発明で得られたＩＬ−８は、ヒト血清ア
ルブミンなどの安定化剤や、塩などを添加したのち、凍
結乾燥などの処理を施して治療用の薬剤と製することが
できる。
ルブミンなどの安定化剤や、塩などを添加したのち、凍
結乾燥などの処理を施して治療用の薬剤と製することが
できる。
【００１５】本発明で対象とするＩＬ−８は次の方法に
より定量することができる。すなわち、１次抗体として
ヤギ抗ＩＬ−８ポリクローナル抗体、２次抗体としてペ
ルオキシダーゼ標識したマウス抗ＩＬ−８モノクローナ
ル抗体の組み合わせるサンドイッチ法による酵素免疫測
定法により定量した。
より定量することができる。すなわち、１次抗体として
ヤギ抗ＩＬ−８ポリクローナル抗体、２次抗体としてペ
ルオキシダーゼ標識したマウス抗ＩＬ−８モノクローナ
ル抗体の組み合わせるサンドイッチ法による酵素免疫測
定法により定量した。
【００１６】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を具体的に説明す
るが、本発明はこれに限定するものではない。 実施例１ ２０リットルのガラス製培養槽を用いて１６リットルの
５％新生子牛血清を含むイーグルＭＥＭ培地中で細胞数
がおよそ１０6 個／mlになるようにヒト線維芽細胞を培
養した［使用したマイクロキャリア：”サイトデックス
１”（ファルマシア社），３７℃］。その後、培地を
０．１％カルボキシメチルセルロースを含む無血清イー
グルＭＥＭ培地１６リットルに交換し、１００国際単位
／mlのヒト天然型インターフェロンβを添加した。翌日
さらにポリＩ：ポリＣ １０mg／リットルを添加した。
その２時間後、産生培地として１％のメチルセルロース
を含むイーグルＭＥＭ培地に置換し、６日間さらに培養
を続けた。攪拌を停止してマイクロキャリアを沈降させ
た後、上清を得た。この上清中には好中球遊走活性が存
在しており、また、抗ＩＬ−８抗体を用いた酵素免疫測
定法により約５μｇ／ｍｌのＩＬ−８の存在が確認され
たので、粗ＩＬ−８原液とした。
るが、本発明はこれに限定するものではない。 実施例１ ２０リットルのガラス製培養槽を用いて１６リットルの
５％新生子牛血清を含むイーグルＭＥＭ培地中で細胞数
がおよそ１０6 個／mlになるようにヒト線維芽細胞を培
養した［使用したマイクロキャリア：”サイトデックス
１”（ファルマシア社），３７℃］。その後、培地を
０．１％カルボキシメチルセルロースを含む無血清イー
グルＭＥＭ培地１６リットルに交換し、１００国際単位
／mlのヒト天然型インターフェロンβを添加した。翌日
さらにポリＩ：ポリＣ １０mg／リットルを添加した。
その２時間後、産生培地として１％のメチルセルロース
を含むイーグルＭＥＭ培地に置換し、６日間さらに培養
を続けた。攪拌を停止してマイクロキャリアを沈降させ
た後、上清を得た。この上清中には好中球遊走活性が存
在しており、また、抗ＩＬ−８抗体を用いた酵素免疫測
定法により約５μｇ／ｍｌのＩＬ−８の存在が確認され
たので、粗ＩＬ−８原液とした。
【００１７】シリカ系無機吸着担体としては、マイクロ
ビーズシリカゲル（富士デビソン製、ポアサイズ：１０
０オングストローム）を１００ml用いた。シリカ担体は
あらかじめ、リン酸ナトリウム緩衝液中で高圧蒸気滅菌
（１２１℃、３０分）した後、内径２６mmのガラスカラ
ムに充填した。これに細胞片を除去する目的でフィルタ
ーで濾過しながら、粗ＩＬ−８原液を流速２５０ml／ｈ
ｒで流し、吸着させた。全量流した後、１Ｍ ＮａＣｌ
を含むリン酸ナトリウム緩衝液４００mlおよび０．１３
５Ｍ ＮａＣｌを含む１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
５００ｍｌで順次洗浄を行ってから、２０ｍＭのＨＣｌ
（ｐＨ２）を通じることでＩＬ−８を含む画分を回収し
た。この画分を０．３Ｍ リン酸水素三ナトリウム水溶
液を添加してｐＨ７．０に調節した。この時の液量は２
７０mlでＩＬ−８の純度は５２％であった。またこの時
生成する沈澱物を濾過しながらスルホプロピル基を有す
る“Ｓ−セファロースＦＦ”（ファルマシア製）２mlの
カラムに流速３０ml／ｈｒの速さで流した。次に１０ｍ
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１０mlで洗浄
後、２Ｍ ＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ７．２）２３mlを通液したところこの画分に
ＩＬ−８が回収された。この画分中のＩＬ−８の純度は
高速液体クロマトグラフィー（Ｃ18カラム）による検定
で８５％であり、収率は約６０％であった。
ビーズシリカゲル（富士デビソン製、ポアサイズ：１０
０オングストローム）を１００ml用いた。シリカ担体は
あらかじめ、リン酸ナトリウム緩衝液中で高圧蒸気滅菌
（１２１℃、３０分）した後、内径２６mmのガラスカラ
ムに充填した。これに細胞片を除去する目的でフィルタ
ーで濾過しながら、粗ＩＬ−８原液を流速２５０ml／ｈ
ｒで流し、吸着させた。全量流した後、１Ｍ ＮａＣｌ
を含むリン酸ナトリウム緩衝液４００mlおよび０．１３
５Ｍ ＮａＣｌを含む１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
５００ｍｌで順次洗浄を行ってから、２０ｍＭのＨＣｌ
（ｐＨ２）を通じることでＩＬ−８を含む画分を回収し
た。この画分を０．３Ｍ リン酸水素三ナトリウム水溶
液を添加してｐＨ７．０に調節した。この時の液量は２
７０mlでＩＬ−８の純度は５２％であった。またこの時
生成する沈澱物を濾過しながらスルホプロピル基を有す
る“Ｓ−セファロースＦＦ”（ファルマシア製）２mlの
カラムに流速３０ml／ｈｒの速さで流した。次に１０ｍ
Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０）１０mlで洗浄
後、２Ｍ ＮａＣｌを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ７．２）２３mlを通液したところこの画分に
ＩＬ−８が回収された。この画分中のＩＬ−８の純度は
高速液体クロマトグラフィー（Ｃ18カラム）による検定
で８５％であり、収率は約６０％であった。
【００１８】得られたＩＬ−８画分の一部をさらにＣ18
逆相高速液体クロマトグラフィーにかけた。条件として
は０．１％トリフロロ酢酸を含む水と０．１％トリフロ
ロ酢酸を含むアセトニトリルの直線グラジエント方式を
用いた。これにより出現するＩＬ−８ピークを分取する
ことでほぼ９９％以上のＩＬ−８を得た。
逆相高速液体クロマトグラフィーにかけた。条件として
は０．１％トリフロロ酢酸を含む水と０．１％トリフロ
ロ酢酸を含むアセトニトリルの直線グラジエント方式を
用いた。これにより出現するＩＬ−８ピークを分取する
ことでほぼ９９％以上のＩＬ−８を得た。
【００１９】実施例２ 実施例１と同様にして得られたシリカクロマト回収液１
０mlにさらに０．３Ｍリン酸水素ナトリウム水溶液を添
加してｐＨを６．４に調節した。このとき生成する沈澱
物を３０００ｒｐｍ、３０分で遠心分離し（４℃）、除
去した。分離した上清をそのままヘパリンクロマトグラ
フィー用担体である”ＡＦ−ヘパリントヨパール６５０
Ｍ” １ml（東ソー製）を充填したカラムに流し、吸着
させた。このカラムを１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
ｐＨ６．４で洗浄した後、０．３ＭＮａＣｌを含む２０
ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液で洗浄し、続いて２ＭＮａ
Ｃｌを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
２）で回収し、２mlのＩＬ−８を含む画分を得た。この
時の純度は高速液体クロマトグラフィー（Ｃ18）による
純度検定では９６％であった。
０mlにさらに０．３Ｍリン酸水素ナトリウム水溶液を添
加してｐＨを６．４に調節した。このとき生成する沈澱
物を３０００ｒｐｍ、３０分で遠心分離し（４℃）、除
去した。分離した上清をそのままヘパリンクロマトグラ
フィー用担体である”ＡＦ−ヘパリントヨパール６５０
Ｍ” １ml（東ソー製）を充填したカラムに流し、吸着
させた。このカラムを１０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液
ｐＨ６．４で洗浄した後、０．３ＭＮａＣｌを含む２０
ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液で洗浄し、続いて２ＭＮａ
Ｃｌを含む２０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．
２）で回収し、２mlのＩＬ−８を含む画分を得た。この
時の純度は高速液体クロマトグラフィー（Ｃ18）による
純度検定では９６％であった。
【００２０】実施例３ 実施例１のＣ18逆相高速液体クロマトグラフィーにより
調製したサンプルを一旦凍結乾燥した後、純水に再溶解
させ、１００ｐｍｏｌ相当の蛋白質をアミノ酸配列シー
ケンサーにかけた。使用した分析装置としてはアプライ
ド バイオシステムズ 477A型、とＰＴＨ−アミノ酸同
定用ＨＰＬＣにはアプライド バイオシステムズ 120A
型を用いた。各サイクルで３つのアミノ酸が検出され、
ＰＴＨ−アミノ酸の定量値より、次の３つのＮ末端を主
に持つことが推定された。
調製したサンプルを一旦凍結乾燥した後、純水に再溶解
させ、１００ｐｍｏｌ相当の蛋白質をアミノ酸配列シー
ケンサーにかけた。使用した分析装置としてはアプライ
ド バイオシステムズ 477A型、とＰＴＨ−アミノ酸同
定用ＨＰＬＣにはアプライド バイオシステムズ 120A
型を用いた。各サイクルで３つのアミノ酸が検出され、
ＰＴＨ−アミノ酸の定量値より、次の３つのＮ末端を主
に持つことが推定された。
【００２１】 Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−・・・ （１） Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｐｒｏ−・・・ （２） Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｖａｌ−・・・ （３） この配列は松島らの報告（Medical Immunology vol.20,
No.3,(1990) ）による構造遺伝子から推定されるアミノ
酸配列内に含まれ、成熟型は（１）と同じ配列を示し、
（２），（３）のＮ末端配列も知られている。以上のよ
うに本発明で得られた標品は公知のＩＬ−８と同じＮ末
端配列を有することが確認された。
No.3,(1990) ）による構造遺伝子から推定されるアミノ
酸配列内に含まれ、成熟型は（１）と同じ配列を示し、
（２），（３）のＮ末端配列も知られている。以上のよ
うに本発明で得られた標品は公知のＩＬ−８と同じＮ末
端配列を有することが確認された。
【００２２】
【発明の効果】本発明の精製方法により、高純度のＩＬ
−８が提供できるようになった。また、本発明法はスケ
ールアップが容易であり、工業的規模の生産が可能とな
った。
−８が提供できるようになった。また、本発明法はスケ
ールアップが容易であり、工業的規模の生産が可能とな
った。
Claims (2)
- 【請求項１】 粗インターロイキン８溶液を、シリカ系
吸着担体を用いたクロマトグラフィーにより処理するこ
とを特徴とするヒトインターロイキン８の精製方法。 - 【請求項２】 粗インターロイキン８溶液を、シリカ系
吸着担体を用いたクロマトグラフィーおよび陽イオン交
換体を用いたクロマトグラフィーにより処理することを
特徴とするヒトインターロイキン８の精製方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34054191A JPH05170799A (ja) | 1991-12-24 | 1991-12-24 | ヒトインターロイキン８の精製方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34054191A JPH05170799A (ja) | 1991-12-24 | 1991-12-24 | ヒトインターロイキン８の精製方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05170799A true JPH05170799A (ja) | 1993-07-09 |
Family
ID=18337973
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34054191A Pending JPH05170799A (ja) | 1991-12-24 | 1991-12-24 | ヒトインターロイキン８の精製方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05170799A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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1991
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