RU2009140146A - Элементы рекомбинантного вектора экспрессии (reves) для усиления экспрессии рекомбинантных белков в клетках-хозяевах - Google Patents

Элементы рекомбинантного вектора экспрессии (reves) для усиления экспрессии рекомбинантных белков в клетках-хозяевах Download PDF

Info

Publication number
RU2009140146A
RU2009140146A RU2009140146/04A RU2009140146A RU2009140146A RU 2009140146 A RU2009140146 A RU 2009140146A RU 2009140146/04 A RU2009140146/04 A RU 2009140146/04A RU 2009140146 A RU2009140146 A RU 2009140146A RU 2009140146 A RU2009140146 A RU 2009140146A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
host cell
recombinant
protein
expression vector
methotrexate
Prior art date
Application number
RU2009140146/04A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2518340C2 (ru
Inventor
Уэнди Р. ГИОН (US)
Уэнди Р. ГИОН
Джеральд Р. КАРСОН (US)
Джеральд Р. КАРСОН
Хун ГАО (US)
Хун ГАО
Юн З. КЬЮНЗ (US)
Юн З. КЬЮНЗ
Original Assignee
Эбботт Лэборетриз (Us)
Эбботт Лэборетриз
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Эбботт Лэборетриз (Us), Эбботт Лэборетриз filed Critical Эбботт Лэборетриз (Us)
Publication of RU2009140146A publication Critical patent/RU2009140146A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2518340C2 publication Critical patent/RU2518340C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
    • C07K16/2854—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72 against selectins, e.g. CD62
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells
    • C12N2510/02—Cells for production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/46—Vector systems having a special element relevant for transcription elements influencing chromatin structure, e.g. scaffold/matrix attachment region, methylation free island

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

1. Полинуклеотидная молекула выделенного элемента рекомбинантного вектора экспрессии (rEVE), содержащая последовательность нуклеотидных оснований, выбранную из группы, состоящей из последовательности нуклеотидных оснований SEQ ID NO:1, последовательности нуклеотидных оснований SEQ ID NO:2, последовательности, комплементарной любой из указанных выше последовательностей, усиливающей экспрессию части любой из указанных выше последовательностей, и их сочетания. ! 2. Выделенная полинуклеотидная молекула rEVE по п.1, где полинуклеотидная молекула rEVE содержит усиливающую экспрессию часть последовательности SEQ ID NO:2, выбранную из группы, состоящей из последовательности оснований 462-2422 последовательности SEQ ID NO:2 и последовательности оснований 1087-2422 последовательности SEQ ID NO:2. ! 3. Рекомбинантный вектор, содержащий полинуклеотидную молекулу rEVE, охарактеризованную в п.1 или 2. ! 4. Рекомбинантный вектор по п.3, где рекомбинантный вектор представляет собой рекомбинантный вектор экспрессии. ! 5. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.4, выбранный из группы, состоящей из рекомбинантного плазмидного вектора экспрессии, рекомбинантного эукариотического вирусного вектора экспрессии, рекомбинантного бактериофагального вектора экспрессии, рекомбинантной дрожжевой минихромосомы, рекомбинантной бактериальной искусственной хромосомы и рекомбинантного дрожжевого экспрессионного плазмидного вектора. ! 6. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.4, где рекомбинантный вектор экспрессии содержит один или несколько функциональных рекомбинантных генов, кодирующих один или несколько рекомбинантных белков. ! 7. Рекомбинантный вектор экспресс�

Claims (47)

1. Полинуклеотидная молекула выделенного элемента рекомбинантного вектора экспрессии (rEVE), содержащая последовательность нуклеотидных оснований, выбранную из группы, состоящей из последовательности нуклеотидных оснований SEQ ID NO:1, последовательности нуклеотидных оснований SEQ ID NO:2, последовательности, комплементарной любой из указанных выше последовательностей, усиливающей экспрессию части любой из указанных выше последовательностей, и их сочетания.
2. Выделенная полинуклеотидная молекула rEVE по п.1, где полинуклеотидная молекула rEVE содержит усиливающую экспрессию часть последовательности SEQ ID NO:2, выбранную из группы, состоящей из последовательности оснований 462-2422 последовательности SEQ ID NO:2 и последовательности оснований 1087-2422 последовательности SEQ ID NO:2.
3. Рекомбинантный вектор, содержащий полинуклеотидную молекулу rEVE, охарактеризованную в п.1 или 2.
4. Рекомбинантный вектор по п.3, где рекомбинантный вектор представляет собой рекомбинантный вектор экспрессии.
5. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.4, выбранный из группы, состоящей из рекомбинантного плазмидного вектора экспрессии, рекомбинантного эукариотического вирусного вектора экспрессии, рекомбинантного бактериофагального вектора экспрессии, рекомбинантной дрожжевой минихромосомы, рекомбинантной бактериальной искусственной хромосомы и рекомбинантного дрожжевого экспрессионного плазмидного вектора.
6. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.4, где рекомбинантный вектор экспрессии содержит один или несколько функциональных рекомбинантных генов, кодирующих один или несколько рекомбинантных белков.
7. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.6, где указанные один или несколько рекомбинантных белков выбраны из группы, состоящей из растворимого белка, мембранного белка, структурного белка, рибосомального белка, фермента, зимогена, молекулы антитела, рецепторного белка клеточной поверхности, регуляторного белка транскрипции, белка хроматина, гормона, регуляторного белка клеточного цикла, G белка, нейроактивных пептидов, иммунорегуляторного белка, белкового компонента крови, белка ионного канала, белка теплового шока, дигидрофолатредуктазы (DHFR), белок резистентности к антибиотикам, функционального фрагмента любого из указанных выше белков, эпитоп-содержащего фрагмента любого из указанных выше белков, и их сочетания.
8. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.7, где молекула антитела выбрана из группы, состоящей из антитела к TNF-α, антитела к EL-селектину, антитела к IL-13, и двойного вариабельного домена молекулы иммуноглобулина.
9. Рекомбинантный вектор экспрессии по п.8, где антителом к TNF-α является адалимумаб.
10. Рекомбинантный вектор экспрессии по любому из пп.4-9, где указанный рекомбинантный вектор экспрессии содержит по меньшей мере одну копию гена, кодирующего дигидрофолатредуктазу.
11. Клетка-хозяин, содержащая вектор, охарактеризованный в любом из пп.3-10.
12. Клетка-хозяин по п.11, где клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку-хозяина или прокариотическую клетку-хозяина.
13. Клетка-хозяин по п.12, где клетка-хозяин представляет собой эукариотическую клетку-хозяина, выбранную из группы, состоящей из клетки-хозяина млекопитающего, клетки-хозяина насекомого, растительной клетки-хозяина, клетки-хозяина грибов, клетки-хозяина эукариотических водорослей, клетки-хозяина нематод, клетки-хозяина простейших и клетки-хозяина рыб.
14. Эукариотическая клетка-хозяин по п.13, где указанная эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина млекопитающего.
15. Клетка-хозяин млекопитающего по п.14, где клетка-хозяин млекопитающего выбрана из группы, состоящей из ооцита китайского хомяка Chinese (CHO), клетки COS, клетки Vero, клетки SP2/0, клетки миеломы NS/0, клетки почки эмбриона человека (HEK 293), клетки почки детеныша хомяка (BHK), клетки HeLa, В-клетки человека, клетки CV-1/EBNA, L-клетки, клетки 3T3, клетки HEPG2, клетки PerC6 и клетки MDCK.
16. Клетка-хозяин млекопитающего по п.15, где клетка-хозяин млекопитающего представляет собой клетку CHO.
17. Эукариотическая клетка-хозяин по п.13, где эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина грибов.
18. Клетка-хозяин грибов по п.17, где клетка-хозяин грибов выбрана из группы, состоящей из Aspergillus, Neurospora, Saccharomyces, Pichia, Hansenula, Schizosaccharomyces, Kluyveromyces, Yarrowia и Candida.
19. Клетка-хозяин Saccharomyces по п.18, которая представляет собой клетку-хозяина S. cerevisiae.
20. Эукариотическая клетка-хозяин по п.13, где эукариотическая клетка-хозяин представляет собой клетку-хозяина простейших.
21. Клетка-хозяин простейших по п.20, где клетка-хозяин простейших представляет собой клетку-хозяина Leishmania tarentolae.
22. Способ получения рекомбинантного белка, представляющего интерес, предусматривающий транскрипцию и трансляцию одного или нескольких генов, кодирующих рекомбинантный белок, представляющих интерес, находящихся в рекомбинантном векторе экспрессии, охарактеризованном в любом из пп.4-10.
23. Способ по п.22, где указанная транскрипция и трансляция происходит в бесклеточной системе транскрипции/трансляции или в клетке-хозяине.
24. Способ по п.23, где указанная транскрипция и трансляция происходит в клетке-хозяине.
25. Способ по п.24, где указанной клеткой-хозяином является клетка-хозяин CHO.
26. Способ получения клетки-хозяина, которая стабильно экспрессирует повышенные уровни рекомбинантного белка, представляющего интерес, предусматривающий:
вставку в клетки-хозяева рекомбинантного вектора экспрессии, охарактеризованного в п.10,
выращивание указанных клеток-хозяев в присутствии метотрексата для отбора метотрексат-резистентной клетки-хозяина, которая экспрессирует интересующий рекомбинантный белок, и
выделение указанной клетки-хозяина, резистентной к метотрексату,
где указанная выделенная метотрексат-резистентная клетка-хозяин экспрессирует интересующий рекомбинантный белок на уровне, который выше уровня чувствительной к метотрексату клетки-хозяина, и где указанная метотрексат-резистентная клетка-хозяин стабильно экспрессирует повышенный уровень рекомбинантного белка при выращивании в присутствии или в отсутствие метотрексата.
27. Способ по п.26, где указанный метотрексат присутствует в концентрации в диапазоне от 5 нМ до 10 мкМ.
28. Способ по п.26, где указанной клеткой-хозяином является клетка-хозяин CHO.
29. Способ дигидрофолатредуктаза (DHFR)-метотрексат для амплификации экспрессии рекомбинантного белка, представляющего интерес, кодируемого рекомбинантным вектором экспрессии, в клетке-хозяине, где указанный рекомбинантный вектор экспрессии содержит ген, кодирующий интересующий рекомбинантный белок, и ген, кодирующий DHFR, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный вектор экспрессии также содержит молекулу полинуклеотида rEVE, охарактеризованного в п.1 или 2, где выращивание клеток-хозяев, содержащих вектор экспрессии, в присутствии метотрексата отбирает и продуцирует метотрексат-резистентную клетку-хозяина, которая стабильно экспрессирует интересующий рекомбинантный белок на амплифицированном уровне при выращивании в присутствии или отсутствие метотрексата.
30. Способ по п.29, где указанный метотрексат присутствует в концентрации в диапазоне от 5 нМ до 10 мкМ.
31. Способ по п.29, где указанной клеткой-хозяином является клетка-хозяин CHO.
32. Способ улучшения или повышения способности популяции клеток-хозяев, которые экспрессируют рекомбинантный белок, адаптироваться к росту в присутствии метотрексата, предусматривающий стадии:
вставки в клетки-хозяева рекомбинантного вектора экспрессии, содержащего:
рекомбинантный ген, кодирующий интересующий рекомбинантный белок,
полинуклеотидную молекулу элемента рекомбинантного вектора экспрессии (rEVE), содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, части SEQ ID NO:1, части SEQ ID NO:2, и их сочетаний, и ген дигидрофолатредуктазы (DHFR);
где популяция клеток-хозяев, содержащих рекомбинантный вектор экспрессии, имеет более высокую жизнеспособность и/или более высокую скорость роста при выращивании в присутствии метотрексата по сравнению с популяцией клеток-хозяев, несущих тот же рекомбинантный вектор экспрессии, лишенный полинуклеотидной молекулы rEVE.
33. Способ по п.32, где указанный метотрексат присутствует в концентрации в диапазоне от 5 нМ до 10 мкМ.
34. Способ по п.32, где указанной клеткой-хозяином является клетка-хозяин CHO.
35. Способ получения клетки-хозяина, резистентной к метотрексату, которая экспрессирует повышенные уровни рекомбинантного белка, предусматривающий:
вставку в клетки-хозяева рекомбинантного вектора экспрессии, содержащего:
рекомбинантный ген, кодирующий интересующий рекомбинантный белок,
полинуклеотидную молекулу элемента рекомбинантного вектора экспрессии (rEVE), содержащую последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, части SEQ ID NO:1, части SEQ ID NO:2, и их сочетаний, и ген дигидрофолатредуктазы (DHFR);
выращивание клеток-хозяев в присутствии метотрексата для отбора резистентной к метотрексату клетки-хозяина, которая экспрессирует интересующий рекомбинантный белок; и
выделение указанной метотрексат-резистентной клетки-хозяина;
где указанная метотрексат-резистентная клетка-хозяин экспрессирует интересующий рекомбинантный белок в присутствии метотрексата на уровне, который выше уровня метотрексат-резистентной клетки-хозяина, содержащей вектор экспрессии, лишенный последовательности rEVE.
36. Способ по п.35, где указанный метотрексат присутствует в концентрации в диапазоне от 5 нМ до 10 мкМ.
37. Способ по п.35, где указанной клеткой-хозяином является клетка-хозяин CHO.
38. Способ увеличения количества последовательностей области присоединения матрикса (MAR), находящихся в первой молекуле нуклеиновой кислоты, предусматривающий вставку в указанную первую молекулу нуклеиновой кислоты второй молекулы нуклеиновой кислоты, содержащей нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, части SEQ ID NO:1, содержащей по меньшей мере одну последовательность MAR, SEQ ID NO:2, части SEQ ID NO:2 содержащей по меньшей мере одну последовательность MAR, и их сочетаний.
39. Способ по п.38, где указанная первая молекула нуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из векторной молекулы, хромосомы эукариотической клетки, эукариотического вирусного геном, хромосомы прокариотической клетки, прокариотического вирусного геном, искусственной хромосомы дрожжей, и искусственной хромосомы бактерий.
40. Способ по п.39, где указанная первая нуклеиновая кислота представляет собой векторную молекулу.
41. Способ по п.40, где указанная векторная молекула представляет собой молекулу рекомбинантного вектора экспрессии.
42. Способ по п.41, где указанный рекомбинантный вектор экспрессии содержит один или несколько функциональных генов.
43. Способ по п.42, где указанный один или несколько функциональных генов кодирует один или несколько белков, выбранных из группы, состоящей из растворимого белка, мембранного белка, структурного белка, рибосомального белка, фермента, зимогена, молекулы антитела, рецепторного белка клеточной поверхности, регуляторного белка транскрипции, регуляторного белка трансляции, белка хроматина, гормона, регуляторного белка клеточного цикла, белка G, нейроактивных пептидов, иммунорегуляторного белка, белкового компонента крови, белка ионного канала, белка теплового шока, дигидрофолатредуктазы (DHFR), белка резистентности к антибиотикам, функционального фрагмента любого из указанных выше белков, эпитоп-содержащего фрагмента любого из указанных выше белков, и их сочетаний.
44. Способ по п.43, где указанная молекула антитела выбрана из группы, состоящей из антитела к TNF-α, антитела к EL-селектину, антитела к IL-13 и двойного вариабельного домена молекулы иммуноглобулина.
45. Способ по п.44, где антителом к TNF-α является адалимумаб.
46. Способ снижения экспрессии, в основном подавления экспрессии, или, по существу, заглушения («silencing») экспрессии рекомбинантного белка из вектора экспрессии, предусматривающий:
вставку в вектор экспрессии, содержащий один или несколько рекомбинантных генов, кодирующих один или несколько рекомбинантных белков, молекулу нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеотидных оснований 1-461 последовательности SEQ ID NO:2 или оснований 1-1086 последовательности SEQ ID NO:2.
47. Способ по п.46, дополнительно предусматривающий вставку указанного вектора экспрессии в клетку-хозяина.
RU2009140146/10A 2007-03-30 2008-03-28 Элементы рекомбинантного вектора экспрессии (reves) для усиления экспрессии рекомбинантных белков в клетках-хозяевах RU2518340C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US92114107P 2007-03-30 2007-03-30
US60/921,141 2007-03-30
PCT/US2008/004063 WO2008121324A2 (en) 2007-03-30 2008-03-28 Recombinant expression vector elements (reves) for enhancing expression of recombinant proteins in host cells

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2009140146A true RU2009140146A (ru) 2011-05-10
RU2518340C2 RU2518340C2 (ru) 2014-06-10

Family

ID=39795081

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2009140146/10A RU2518340C2 (ru) 2007-03-30 2008-03-28 Элементы рекомбинантного вектора экспрессии (reves) для усиления экспрессии рекомбинантных белков в клетках-хозяевах

Country Status (16)

Country Link
US (2) US7935808B2 (ru)
EP (1) EP2142560A4 (ru)
JP (2) JP5432117B2 (ru)
KR (2) KR20100014724A (ru)
CN (1) CN101652379B (ru)
AU (1) AU2008233196B2 (ru)
BR (1) BRPI0809361A2 (ru)
CA (1) CA2681581A1 (ru)
IL (1) IL201231A0 (ru)
MX (1) MX2009010492A (ru)
NZ (1) NZ580378A (ru)
RU (1) RU2518340C2 (ru)
SG (1) SG182953A1 (ru)
TW (1) TW200907059A (ru)
WO (1) WO2008121324A2 (ru)
ZA (1) ZA200906433B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2664862C2 (ru) * 2013-01-31 2018-08-23 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Рекомбинантный дрожжевой трансформант и способ получения с его использованием Fc-фрагмента иммуноглобулина

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP5432117B2 (ja) * 2007-03-30 2014-03-05 アッヴィ・インコーポレイテッド 宿主細胞中の組換えタンパク質の発現を増進するための組換え発現ベクター要素（ｒＥＶＥ）
AU2009347206C1 (en) * 2008-10-20 2016-12-08 Abbvie Inc. Isolation and purification of antibodies using Protein A affinity chromatography
BRPI1008762B8 (pt) 2009-02-27 2021-05-25 Novartis Ag métodos para seleção de células de mamífero expressando uma proteína heteróloga, para produzir um produto de interesse e uso de um meio de cultura seletivo
JP2013502217A (ja) * 2009-08-17 2013-01-24 ノックス テクノロジーズ インコーポレイテッド ａｒＮＯＸタンパク質９回膜貫通型スーパーファミリー（ＴＭ９ＳＦ）のクローニング及び発現、方法並びに利用
TW201124535A (en) 2009-10-30 2011-07-16 Abbott Lab SORF constructs and multiple gene expression
EP3816284A1 (en) 2011-12-22 2021-05-05 F. Hoffmann-La Roche AG Expression vector for antibody production in eukaryotic cells
CN113896787A (zh) * 2011-12-22 2022-01-07 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 表达载体元件组合、新的生产用细胞产生方法及其在重组产生多肽中的用途
US9752159B2 (en) * 2012-03-30 2017-09-05 Biogenomics Limited Stable expression system for eukaryotic cells
WO2015017823A1 (en) * 2013-08-02 2015-02-05 The Uab Research Foundation Tetravalent pneumococcal serogroup 6z
RU2546249C2 (ru) 2013-08-07 2015-04-10 Силезиа Груп Пте. Лтд. Композиция для усиления экспрессии трансгена в эукариотических клетках и способ увеличения продукции целевого белка, кодируемого трансгеном
EP3057616B1 (en) 2013-10-16 2020-03-11 Outlook Therapeutics, Inc. Buffer formulations for enhanced antibody stability
EP3247718B1 (en) 2015-01-21 2021-09-01 Outlook Therapeutics, Inc. Modulation of charge variants in a monoclonal antibody composition
WO2016151599A1 (en) 2015-03-25 2016-09-29 Biogenomics Limited A bigenic mammalian expression vector
CN109563161A (zh) 2016-02-03 2019-04-02 安口生物公司 用于提高抗体稳定性的缓冲制剂
WO2019055471A1 (en) * 2017-09-18 2019-03-21 Amyris, Inc. METHODS FOR PRODUCING FULL LENGTH ANTIBODIES
WO2020006486A1 (en) * 2018-06-29 2020-01-02 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for antibody delivery
PT115073A (pt) 2018-10-09 2020-05-29 Inst De Biologia Molecular E Celular Ibmc Ácido nucleico para ativar a expressão e a produção de proteínas
CN110592090A (zh) * 2019-10-30 2019-12-20 福建师范大学 Ssa4基因启动子及利用该启动子驱动外源基因转录的毕赤酵母表达载体

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE68913658T3 (de) 1988-11-11 2005-07-21 Stratagene, La Jolla Klonierung von Immunglobulin Sequenzen aus den variablen Domänen
US6596514B2 (en) 1996-01-11 2003-07-22 Immunex Corporation Expression augmenting sequence elements (EASE) for eukaryotic expression systems
DK0873405T3 (da) 1996-01-11 2005-01-17 Immunex Corp Ekspressionsforøgende sekvenselementer (EASE) til eukaryote ekspressionssystemer
US6197591B1 (en) * 1998-09-14 2001-03-06 Pfizer Inc. Streptomyces avermitilis regulatory genes for increased avermectin production
DK1395669T3 (da) 2001-01-26 2009-11-16 Selexis Sa Matriks bindingsregioner og fremgangsmåder til anvendelse af disse
DK1492874T3 (da) * 2002-03-29 2011-03-14 Xoma Technology Ltd Multigene vektorplasmider og fremgangsmåder til forøgelse af ekspressionen af rekombinante polypeptider
EP1694850B1 (en) * 2003-11-12 2011-06-29 Schering Corporation Plasmid system for multigene expression
MY169746A (en) 2005-08-19 2019-05-14 Abbvie Inc Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
ES2902063T3 (es) * 2006-09-08 2022-03-24 Abbvie Bahamas Ltd Proteínas de unión a interleucina-13
JP5432117B2 (ja) * 2007-03-30 2014-03-05 アッヴィ・インコーポレイテッド 宿主細胞中の組換えタンパク質の発現を増進するための組換え発現ベクター要素（ｒＥＶＥ）

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2664862C2 (ru) * 2013-01-31 2018-08-23 Ханми Фарм. Ко., Лтд. Рекомбинантный дрожжевой трансформант и способ получения с его использованием Fc-фрагмента иммуноглобулина

Also Published As

Publication number Publication date
JP5432117B2 (ja) 2014-03-05
SG182953A1 (en) 2012-08-30
US20080241883A1 (en) 2008-10-02
IL201231A0 (en) 2010-05-31
KR20100014724A (ko) 2010-02-10
EP2142560A4 (en) 2010-12-01
EP2142560A2 (en) 2010-01-13
US20110201053A1 (en) 2011-08-18
WO2008121324A2 (en) 2008-10-09
NZ580378A (en) 2012-11-30
ZA200906433B (en) 2014-03-26
US8410259B2 (en) 2013-04-02
CN101652379B (zh) 2014-05-14
JP2014012014A (ja) 2014-01-23
TW200907059A (en) 2009-02-16
KR20140001229A (ko) 2014-01-06
MX2009010492A (es) 2009-10-19
CN101652379A (zh) 2010-02-17
RU2518340C2 (ru) 2014-06-10
CA2681581A1 (en) 2008-10-09
WO2008121324A3 (en) 2008-12-11
BRPI0809361A2 (pt) 2014-09-02
JP2010523082A (ja) 2010-07-15
US7935808B2 (en) 2011-05-03
AU2008233196A1 (en) 2008-10-09
AU2008233196B2 (en) 2011-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2009140146A (ru) Элементы рекомбинантного вектора экспрессии (reves) для усиления экспрессии рекомбинантных белков в клетках-хозяевах
FI2213725T4 (fi) Eläinproteiinia sisältämätön elatusaine solujen viljelyä varten
CN106479986B (zh) 一种o型口蹄疫病毒样颗粒及其制备方法和用途
CN102333871B (zh) 包含两个选择标记的表达载体系统
CN109423496B (zh) 一种细胞中内源性表达rna聚合酶的核酸构建物
CN110408635B (zh) 一种含有链霉亲和素元件的核酸构建物在蛋白质表达、纯化中的应用
CN110408636B (zh) 多重标签串联的dna序列及其在蛋白质表达纯化系统的应用
KR102126985B1 (ko) 일종의 시험관 내 단백질 합성을 위한 단백질 합성시스템, 키트 및 이의 제조방법
CN104540950A (zh) Cho表达系统
CN110093284B (zh) 一种在细胞中提高蛋白合成效率的方法
CN107893073B (zh) 一种筛选谷氨酰胺合成酶缺陷型hek293细胞株的方法
CN104450785A (zh) 使用编码靶向核酸内切酶附着体载体的基因组编辑方法及试剂盒
CN104911152B (zh) 一株重组传染性造血器官坏死病毒rIHNV HLJ‑09株及其构建方法和应用
CN110551745A (zh) 一种多重组氨酸序列标签及其在蛋白质表达、纯化中的应用
Vopálenský et al. Messenger RNAs of yeast virus-like elements contain non-templated 5′ Poly (A) leaders, and their expression is independent of eIF4E and Pab1
CN110468155A (zh) 一种用于拯救猪肠道甲型冠状病毒的系统、方法及应用
CN110615832A (zh) 一种高效筛选异丁醇高产菌株的BmoR突变体
JP7028986B2 (ja) タンパク質合成効率を高めることができるタンデムｄｎａエレメント
CN116790466B (zh) 一种工程改造枯草芽孢杆菌发酵生产胞磷胆碱的方法
WO2018183848A1 (en) Media for microorgainsm culture and related compositions and methods
US9752159B2 (en) Stable expression system for eukaryotic cells
CN106636174B (zh) 表达外源蛋白的毕赤酵母的诱导表达方法
US11198871B2 (en) Riboswitch-mediated regulatory control of gene expression in thermophilic bacteria
CN112941105A (zh) 一种m6A“阅读器”YTHDF2基因改造方法及其应用
CN107603979B (zh) 一种高效表达外源蛋白的启动子样基因及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150329