RU2004122420A - Способ получения гиалуронана в рекомбинантной клетке-хозяине - Google Patents

Способ получения гиалуронана в рекомбинантной клетке-хозяине Download PDF

Info

Publication number
RU2004122420A
RU2004122420A RU2004122420/13A RU2004122420A RU2004122420A RU 2004122420 A RU2004122420 A RU 2004122420A RU 2004122420/13 A RU2004122420/13 A RU 2004122420/13A RU 2004122420 A RU2004122420 A RU 2004122420A RU 2004122420 A RU2004122420 A RU 2004122420A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
seq
acid sequence
nucleic acid
gene
udp
Prior art date
Application number
RU2004122420/13A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2346049C2 (ru
Inventor
Алан СЛОМА (US)
Алан СЛОМА
Реджин БЕР (US)
Реджин БЕР
Уиль м УИДНЕР (US)
Уильям УИДНЕР
Мари ТАНГ (US)
Мария ТАНГ
Дэвид СТЕРНБЕРГ (умер)
Стивен БРАУН (US)
Стивен Браун
Original Assignee
Новозимс Биополимер А/С (Dk)
Новозимс Биополимер А/С
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Новозимс Биополимер А/С (Dk), Новозимс Биополимер А/С filed Critical Новозимс Биополимер А/С (Dk)
Publication of RU2004122420A publication Critical patent/RU2004122420A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2346049C2 publication Critical patent/RU2346049C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/10—Transferases (2.)
    • C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
    • C12N9/1051—Hexosyltransferases (2.4.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Claims (24)

1. Способ получения гиалуроновой кислоты, включающий (a) культивирование клетки-хозяина Bacillus в условиях, подходящих для получения гиалуроновой кислоты, при этом клетка-хозяин Bacillus включает конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность, кодирующую гиалуронансинтазу, функционально связанную с промоторной последовательностью, чужеродной в отношении последовательности, кодирующей гиалуронансинтазу; и (b) извлечения гиалуроновой кислоты из среды культивирования.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что последовательность, кодирующая гиалуронансинтазу, (I) выбрана из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:93, или SEQ ID NO:103; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:92 или SEQ ID NO:102; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) выбрана из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающий идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:95; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:94; и (c) комплементарной цепи (a) или (b).
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что конструкция нуклеиновой кислоты дополнительно содержит один или более генов, кодирующих ферменты биосинтеза предшественника сахара гиалуроновой кислоты, или клетка-хозяин Bacillus дополнительно содержит одну или более вторых конструкций нуклеиновой кислоты, включающих один или более генов, кодирующих ферменты биосинтеза предшественника сахара гиалуроновой кислоты.
4. Способ по п.3, отличающийся тем, что один или более генов выбраны из группы, состоящей из гена UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы, гена UDP-глюкозопирофосфорилазы, гена UDP-N-ацетилгюкозаминпирофосфорилазы, гена глюкозо-6-фосфатизомеразы, гена гексокиназы, гена фосфоглюкомутазы, гена амидотрансферазы, гена мутазы и гена ацетилтрансферазы.
5. Способ по п.4, отличающийся тем, что ген UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы представляет собой (I) ген hasB, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:97, или SEQ ID NO:105; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:96 или SEQ ID NO:104; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) ген tuaD, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:12; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:11; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); при этом ген UDP-глюкозопирофосфорилазы представляет собой (I) ген hasC, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:99 или SEQ ID NO:107; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:42 или SEQ ID NO:98 или SEQ ID NO:106; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) ген gtaB, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO: 22; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:21; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); при этом ген UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы представляет собой (I) ген hasD, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO: 45; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:44; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) ген gcaD, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:30; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:29; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); и при этом ген глюкозо-6-фосфатизомеразы представляет собой ген hasE, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:101; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:100; и (c) комплементарной цепи (a) или (b).
6. Способ по п.3, отличающийся тем, что один или более генов, кодирующих предшественник сахара, находится под контролем того же или другого промотора (промоторов), что и последовательность, кодирующая гиалуронансинтазу.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что та же или другая промоторная последовательность содержит \консенсусный\ промотор, характеризующийся последовательностью TTGACA в качестве области \-35\ и TATAAT в качестве области \-10\.
8. Способ по п.6, отличающийся тем, что та же или другая промоторная последовательность (последовательности) представляет собой тандемный промотор, в котором каждый промотор тандемного промотора функционально связан с последовательностью, кодирующей гиалуронансинтазу.
9. Способ по п.1, отличающийся тем, что конструкция нуклеиновой кислоты дополнительно содержит последовательность мРНК процессинга/стабилизации, находящуюся (а) ниже промоторной последовательности и выше последовательности, кодирующей гиалуронансинтазу; (b) ниже другой промоторной последовательности (последовательностей) одного или более генов, кодирующих ферменты биосинтеза предшественника сахара гиалуроновой кислоты и выше одного или более генов; или (с) комбинацию (а) и (b).
10. Способ по п.1, отличающийся тем, что конструкция нуклеиновой кислоты содержит ген гиалуронансинтазы, ген UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы, и ген UDP-глюкозопирофосфорилазы, функционально связанные с коротким \консенсусным\ промотором amyQ, характеризующимся последовательностью TTGACA в качестве области \-35\ и TATAAT в качестве области \-10\.
11. Клетка-хозяин Bacillus, включающая конструкцию нуклеиновой кислоты, содержащую последовательность, кодирующую гиалуронансинтазу, функционально связанную с промоторной последовательностью, чужеродной в отношении последовательности, кодирующей гиалуронансинтазу.
12. Клетка-хозяин Bacillus по п.11, отличающаяся тем, что последовательность, кодирующая гиалуронансинтазу, (I) выбрана из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:93, или SEQ ID NO:103; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:92, или SEQ ID NO:102; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) выбрана из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:95; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:94; и (c) комплементарной цепи (a) или (b).
13. Клетка-хозяин Bacillus по п.11, отличающаяся тем, что конструкция нуклеиновой кислоты дополнительно содержит один или более генов, кодирующих ферменты биосинтеза предшественника сахара гиалуроновой кислоты, или клетка-хозяин Bacillus содержит одну или более вторых конструкций нуклеиновой кислоты, включающих один или более генов, кодирующих ферменты биосинтеза предшественника сахара гиалуроновой кислоты.
14. Клетка-хозяин Bacillus по п.13, отличающаяся тем, что один или более генов выбраны из группы, состоящей из гена UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы, гена UDP-глюкозопирофосфорилазы, гена UDP-N-ацетилгюкозаминпирофосфорилазы, гена глюкозо-6-фосфатизомеразы, гена гексокиназы, гена фосфоглюкомутазы, гена амидотрансферазы, гена мутазы и гена ацетилтрансферазы.
15. Клетка-хозяин Bacillus по п.14, отличающаяся тем, что ген UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы представляет собой (I) ген hasB, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:97, или SEQ ID NO:105; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:96 или SEQ ID NO:104; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) ген tuaD, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:12; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:11; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); при этом ген UDP-глюкозопирофосфорилазы представляет собой (I) ген hasC, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 99 или SEQ ID NO: 107; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:42 или SEQ ID NO:98 или SEQ ID NO:106; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) ген gtaB, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:22; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:21; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); при этом ген UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы представляет собой (I) ген hasD, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90%, или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:45; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:44; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); или (II) ген gcaD, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:30; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:29; и (c) комплементарной цепи (a) или (b); и при этом ген глюкозо-6-фосфатизомеразы представляет собой ген hasE, выбранный из группы, состоящей из (a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:101; (b) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется при условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с SEQ ID NO:100; и (c) комплементарной цепи, (a) или (b).
16. Клетка-хозяин Bacillus по п.13, отличающаяся тем, что один или более генов, кодирующих предшественник сахара, находятся под контролем того же или другого промотора (промоторов), что и последовательность, кодирующая гиалуронансинтазу.
17. Клетка-хозяин Bacillus по п.16, отличающаяся тем, что та же или другая промоторная последовательность (последовательности) содержит \консенсусный\ промотор, характеризующийся последовательностью TTGACA в качестве области \-35\ и TATAAT в качестве области \-10\.
18. Клетка-хозяин Bacillus по п.16, отличающаяся тем, что тот же или другой промотор или другие промоторы представляют собой тандемный промотор, при этом каждый промотор тандемного промотора функционально связан с последовательностью, кодирующей гиалуронансинтазу.
19. Клетка-хозяин Bacillus по п.16, отличающаяся тем, что конструкция нуклеиновой кислоты дополнительно содержит последовательность мРНК процессинга/стабилизации, находящуюся (а) ниже промоторной последовательности и выше последовательности, кодирующей гиалуронансинтазу; (b) ниже другой промоторной последовательности (последовательностей) одного или более генов, кодирующих ферменты биосинтеза предшественника сахара гиалуроновой кислоты и выше одного или более генов; и (с) комбинацию (а) и (b).
20. Клетка-хозяин Bacillus по п.11, отличающаяся тем, что конструкция нуклеиновой кислоты дополнительно содержит ген гиалуронансинтазы, ген UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы и ген UDP-глюкозопирофосфорилазы, функционально связанные с коротким \консенсусным\ промотором amyQ, характеризующимся последовательностью TTGACA в качестве области \-35\ и TATAAT в качестве области \-10\.
21. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая оперон гиалуронансинтазы, содержащий ген гиалуронансинтазы или его часть, и ген UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы, и, необязательно, один или более генов, выбранных из группы, состоящей из гена UDP-глюкозопирофосфорилазы, гена UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы и гена глюкозо-6-фосфатизомеразы.
22. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая UDP-глюкозо-6-дегидрогеназу, выбранная из группы, состоящей из
(a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:41;
(b) последовательности нуклеиновой кислоты, обладающей гомологией, равной, по меньшей мере, примерно 75%, 80%, 85%, 90%, или 95%, по отношению к SEQ ID NO:40;
(c) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях средней или высокой степени жесткости с (i) последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:40, (ii) кДНК последовательностью, содержащейся в SEQ ID NO:40, или (iii) комплементарной цепью (i) или (ii); и
(d) субпоследовательности (a), (b), или (c), которая кодирует полипептидный фрагмент, который обладает активностью UDP-глюкозо-6-дегидрогеназы.
23. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая UDP-глюкозопирофосфорилазу, выбранная из группы, состоящей из
(a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, обладающей идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 90%, 95%, или 97%, по отношению к SEQ ID NO:43;
(b) последовательности нуклеиновой кислоты, обладающей гомологией, равной, по меньшей мере, примерно 90%, примерно 95% или примерно 97%, по отношению к SEQ ID NO:42;
(c) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях высокой или очень высокой степени жесткости с (i) последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:42, (ii) последовательностью кДНК, содержащейся в SEQ ID NO:42, или (iii) комплементарной цепью (i) или (ii); и
(d) субпоследовательности (a), (b), или (c), кодирующей полипептидный фрагмент, который обладает активностью UDP-глюкозопирофосфорилазы.
24. Выделенная последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазу, выбранная из группы, состоящей из
(a) последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей полипептид с аминокислотной последовательностью, характеризующейся идентичностью, равной, по меньшей мере, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95%, по отношению к SEQ ID NO:45;
(b) последовательности нуклеиновой кислоты, обладающей гомологией, равной, по меньшей мере, 75%, 80%, 85%, 90%, или 95%, по отношению к SEQ ID NO:44;
(c) последовательности нуклеиновой кислоты, которая гибридизуется в условиях низкой, средней или высокой степени жесткости с (i) последовательностью нуклеиновой кислоты SEQ ID NO:44, (ii) последовательностью кДНК, содержащейся в SEQ ID NO:44, или (iii) комплементарной цепью (i) или (ii); и
(d) субпоследовательности (a), (b), или (c), кодирующей полипептидный фрагмент, который обладает активностью UDP-N-ацетилглюкозаминпирофосфорилазы.
RU2004122420/13A 2001-12-21 2002-12-20 Способ получения гиалуронана в рекомбинантной клетке-хозяине RU2346049C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US34264401P 2001-12-21 2001-12-21
US60/342,644 2001-12-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2004122420A true RU2004122420A (ru) 2005-10-10
RU2346049C2 RU2346049C2 (ru) 2009-02-10

Family

ID=23342668

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2004122420/13A RU2346049C2 (ru) 2001-12-21 2002-12-20 Способ получения гиалуронана в рекомбинантной клетке-хозяине

Country Status (18)

Country Link
US (5) US7811806B2 (ru)
EP (1) EP1572895B1 (ru)
JP (1) JP2005525091A (ru)
KR (2) KR100885163B1 (ru)
CN (1) CN1636052B (ru)
AT (1) ATE502115T1 (ru)
AU (1) AU2002366711C1 (ru)
BR (1) BR0215220A (ru)
CA (2) CA2803931A1 (ru)
CZ (1) CZ2004765A3 (ru)
DE (1) DE60239495D1 (ru)
DK (1) DK1572895T3 (ru)
ES (1) ES2362354T3 (ru)
HU (2) HU228693B1 (ru)
IL (2) IL162302A0 (ru)
PL (2) PL399352A1 (ru)
RU (1) RU2346049C2 (ru)
WO (1) WO2003054163A2 (ru)

Families Citing this family (61)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7091008B1 (en) * 1994-07-01 2006-08-15 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronan synthase genes and expression thereof in Bacillus hosts
CA2307842C (en) * 1997-10-31 2010-10-19 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronan synthase gene and uses thereof
AU2002365206B2 (en) * 2001-06-13 2008-03-20 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronan synthase genes and expression thereof
EP1572895B1 (en) * 2001-12-21 2011-03-16 Novozymes Biopharma DK A/S Methods for producing hyaluronan in a recombinant host cell
AU2003223931A1 (en) * 2002-05-14 2003-11-11 Novozymes A/S Pectate lyase variants
EP1517994B1 (en) * 2002-06-20 2007-01-24 Novozymes Biopolymer A/S Flocculation with divalent salt
WO2004011609A2 (en) * 2002-07-26 2004-02-05 Novozymes Biotech, Inc. Methods for producing biological substances in pigment-deficient mutants of bacillus cells
WO2005069762A2 (en) * 2004-01-09 2005-08-04 Novozymes Inc. Bacillus licheniformis chromosome
EP1735455A2 (en) * 2004-03-31 2006-12-27 Novozymes Biopolymer A/S Methods for producing hyaluronic acid in a bacillus cell
US7002007B2 (en) * 2004-05-28 2006-02-21 Calcigen Corporation Production of high molecular weight hyaluronates
CN101006174B (zh) 2004-06-21 2010-05-26 诺维信公司 以相同取向稳定保持的至少两个orf的多拷贝
SI1805312T1 (sl) 2004-09-23 2009-12-31 Bayer Cropscience Ag Postopki in sredstva za izdelavo hialuronana
EP1640457A1 (de) * 2004-09-23 2006-03-29 Bayer CropScience GmbH Verfahren und Mittel zur Herstellung von Hyaluronan
PL1817347T3 (pl) * 2004-11-24 2017-10-31 Albumedix As Sposób sieciowania kwasu hialuronowego za pomocą diwinylosulfonu
JP2008527056A (ja) * 2004-12-30 2008-07-24 ノボザイムス バイオポリマー アクティーゼルスカブ αヒドロキシ酸のポリマーにより結合されたヒアルロン酸
EP1696032A1 (de) * 2005-02-23 2006-08-30 Bayer CropScience GmbH Verfahren und Mittel zur Herstellung von Hyaluronan in Pilzen
JP4639904B2 (ja) 2005-03-30 2011-02-23 チッソ株式会社 蛍光活性を有するルシフェラーゼの活性増強方法
JP4609177B2 (ja) 2005-04-28 2011-01-12 チッソ株式会社 カルシウム結合型発光蛋白質溶液の発光時間延長方法
US20060287512A1 (en) * 2005-05-04 2006-12-21 Novozymes Biopolymer A/S Method of controlling the content of selected component(s) from polymer(s) using molecular sieve(s)
EP1932909A4 (en) * 2005-08-25 2009-04-08 Toyo Boseki VEGETABLE PRODUCING HYALURONIC ACID
EP1772052A1 (de) 2005-10-05 2007-04-11 Bayer CropScience GmbH Verbesserte Verfahren und Mittel zur Herstellung von Hyaluronan
CA2624592C (en) * 2005-10-05 2016-07-19 Bayer Cropscience Ag Gfat-expressing plants with increased hyaluronan production
JP2007174957A (ja) * 2005-12-27 2007-07-12 Toyobo Co Ltd ヒアルロン酸生産酵母
US20080038780A1 (en) * 2006-02-15 2008-02-14 Novozymes Biopolymer A/S Production of low molecular weight hyaluronic acid
US20090118423A1 (en) * 2006-03-14 2009-05-07 Novozymes Biopolymer A/S Acrylated Hyaluronic Acid
JP2009545637A (ja) 2006-08-04 2009-12-24 ノボザイムス バイオファーマ デーコー アクティーゼルスカブ 分岐ヒアルロン酸及びその製造方法
ATE533838T1 (de) 2006-11-29 2011-12-15 Novozymes Inc Verfahren zur verbesserten einführung von dna in bakterienzellen
DK2104739T3 (da) 2006-12-21 2013-10-07 Novozymes Inc Modificerede messenger-RNA-stabiliseringssekvenser til ekspression af gener i bakterieceller
US20110281817A1 (en) * 2007-08-31 2011-11-17 Sugar Industry Innovation Pty. Ltd. Production of hyaluronic acid
EP2031053A1 (en) * 2007-08-31 2009-03-04 The University Of Queensland Production of HA
EP2036983A1 (de) 2007-09-12 2009-03-18 Bayer CropScience AG Pflanzen, die erhöhte Mengen an Glucosaminglycanen synthetisieren
CN101878230B (zh) 2007-12-19 2012-11-21 赢创高施米特有限公司 乳液中的交联透明质酸
EP2376626A4 (en) * 2008-12-13 2012-10-17 Dna Microarray MICRO-ENVIRONMENTAL NICHE ASSAY FOR SCREENING OF INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS (CIPS)
EP2213315A1 (en) 2009-01-30 2010-08-04 Mero S.r.L. Antibacterial hydrogel and use thereof in orthopedics
CN102021213B (zh) * 2009-09-17 2014-07-09 上海佰加壹医药有限公司 一种发酵生产透明质酸发酵液的方法
EP2542673A2 (en) 2010-03-03 2013-01-09 Novozymes, Inc. Xylanase variants and polynucleotides encoding same
IT1401498B1 (it) 2010-07-30 2013-07-26 Mero Srl Idrogelo a base di acido ialuronico e suo uso in ortopedia
IT1402384B1 (it) 2010-09-09 2013-09-04 Fidia Farmaceutici Processo per la produzione di acido ialuronico in escherichia coli o bacillus megaterium
IT1402385B1 (it) 2010-09-09 2013-09-04 Fidia Farmaceutici Processo per la produzione di acido ialuronico in escherichia coli o bacillus subtilis
CN103562229A (zh) 2011-05-30 2014-02-05 诺维信生物制药丹麦公司 高分子量透明质酸的喷雾干燥
CN102911887A (zh) * 2011-08-02 2013-02-06 山东省生物药物研究院 一种利用毕赤酵母基因调控发酵生产不同分子量透明质酸的方法
KR20140058581A (ko) 2011-09-02 2014-05-14 노보자임스 바이오파마 디케이 에이/에스 지연된 약물 방출용 히알루론산 함유 경구 제형
DE102012201297A1 (de) * 2012-01-31 2013-08-01 Basf Se Expressionsverfahren
CN102559559A (zh) * 2012-02-21 2012-07-11 山东福瑞达生物医药有限公司 一种芽孢杆菌及采用该菌种生产透明质酸酶的方法
WO2013123791A1 (zh) * 2012-02-21 2013-08-29 华熙福瑞达生物医药有限公司 一种芽孢杆菌、一种透明质酸酶、以及其用途
US20150010899A1 (en) * 2012-02-22 2015-01-08 Novozymes A/S Advanced fermentation control
WO2014100837A1 (en) 2012-12-17 2014-06-26 Bui The Duy Computer aided implantation of body implants
AU2014352672B2 (en) 2013-11-25 2018-11-29 Deuteria Biomaterials, Llc Deuterium-enriched hyaluronan
CA2896038C (en) 2015-07-03 2022-08-09 Glycobiosciences Inc. Polymer matrix compositions comprising a high concentration of bio-fermented sodium hyaluronate and uses thereof
CN106755022B (zh) * 2015-11-25 2020-08-04 中国科学院大连化学物理研究所 乙酰葡萄糖胺磷酸变位酶AtAGM编码基因及其酶、制备、应用与酶活性检测方法
CN109715794A (zh) 2016-07-05 2019-05-03 诺维信公司 果胶裂解酶变体以及编码它们的多核苷酸
CN107653280B (zh) * 2016-07-25 2021-05-04 安琪酵母股份有限公司 透明质酸发酵用的组合物、培养基和方法及其应用
CN106381279B (zh) * 2016-08-29 2019-11-05 中国药科大学 一种细菌胞外多糖、其制备方法及其应用
KR102135044B1 (ko) * 2018-12-10 2020-07-17 대화제약 주식회사 히알루론산 합성효소 변이 단백질 및 이를 이용한 히알루론산 생산 방법
WO2020122429A1 (ko) * 2018-12-10 2020-06-18 대화제약 주식회사 히알루론산 합성효소 변이 단백질 및 이를 이용한 히알루론산 생산 방법
WO2020122430A1 (ko) * 2018-12-10 2020-06-18 대화제약 주식회사 비병원성 세균을 이용하여 히알루론산 생산을 위한 발현 시스템 및 상기 발현 시스템을 이용한 히알루론산 생산방법
CN110055201B (zh) * 2019-03-05 2021-05-28 江南大学 一种高产透明质酸寡糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法
RU2723722C1 (ru) * 2019-07-26 2020-06-17 Общество с ограниченной ответственностью "ЦЕНТР ТРАНСФЕРА БИОТЕХНОЛОГИЙ ОКА-Биотех" ТАНДЕМНЫЙ ПРОМОТОР, ФУНКЦИОНИРУЮЩИЙ В БАКТЕРИИ РОДА Bacillus, ТРАНСФОРМИРОВАННАЯ БАКТЕРИЯ РОДА Bacillus - ПРОДУЦЕНТ ЦЕЛЕВОГО ПРОДУКТА, СОДЕРЖАЩАЯ УКАЗАННЫЙ ПРОМОТОР, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЦЕЛЕВОГО ПРОДУКТА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ УКАЗАННОЙ БАКТЕРИИ
RU2719140C1 (ru) 2019-07-26 2020-04-17 Общество с ограниченной ответственностью "ЦЕНТР ТРАНСФЕРА БИОТЕХНОЛОГИЙ ОКА-Биотех" Бактерия рода bacillus, продуцирующая гиалуроновую кислоту, и способ получения гиалуроновой кислоты с использованием указанной бактерии
CN111518825B (zh) * 2020-04-30 2022-10-11 浙江工业大学 一种多基因组合表达制备蛹虫草多糖的方法
WO2022178432A1 (en) * 2021-02-22 2022-08-25 Danisco Us Inc. Methods and compositions for producing proteins of interest in pigment deficient bacillus cells

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60251898A (ja) 1984-05-25 1985-12-12 Shiseido Co Ltd 醗酵法によるヒアルロン酸の製造方法
US6951743B2 (en) 1997-10-31 2005-10-04 University Of Oklahoma Board Of Regents Hyaluronan synthase genes and expression thereof in bacillus hosts
US6455304B1 (en) 1994-07-01 2002-09-24 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronate synthase gene and uses thereof
IT1271001B (it) 1994-07-26 1997-05-26 Poli Ind Chimica Spa Procedimento di preparazione di acido ialuronico mediante fermentazione con streptococcus
CA2307842C (en) 1997-10-31 2010-10-19 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronan synthase gene and uses thereof
US5955310A (en) * 1998-02-26 1999-09-21 Novo Nordisk Biotech, Inc. Methods for producing a polypeptide in a bacillus cell
WO1999051265A1 (en) 1998-04-02 1999-10-14 Board Of Regents Of The Universtiy Of Oklahoma Nucleic acid encoding hyaluronan synthase and methods of use
DE69940353D1 (en) 1998-11-11 2009-03-12 Univ Oklahoma Polymerpfropfung mittels polysaccharide-synthase
WO2002077183A2 (en) 2001-03-21 2002-10-03 Elitra Pharmaceuticals, Inc. Identification of essential genes in microorganisms
AU2002365206B2 (en) * 2001-06-13 2008-03-20 The Board Of Regents Of The University Of Oklahoma Hyaluronan synthase genes and expression thereof
EP1572895B1 (en) * 2001-12-21 2011-03-16 Novozymes Biopharma DK A/S Methods for producing hyaluronan in a recombinant host cell

Also Published As

Publication number Publication date
US8137951B2 (en) 2012-03-20
AU2002366711A1 (en) 2003-07-09
JP2005525091A (ja) 2005-08-25
ATE502115T1 (de) 2011-04-15
IL162302A0 (en) 2005-11-20
DE60239495D1 (de) 2011-04-28
US20110189737A1 (en) 2011-08-04
US20110014662A1 (en) 2011-01-20
US20030175902A1 (en) 2003-09-18
CN1636052B (zh) 2014-07-02
KR100879908B1 (ko) 2009-01-21
DK1572895T3 (da) 2011-07-11
AU2002366711C1 (en) 2009-01-22
CN1636052A (zh) 2005-07-06
CA2471148C (en) 2013-04-09
WO2003054163A2 (en) 2003-07-03
EP1572895A2 (en) 2005-09-14
PL399352A1 (pl) 2012-10-08
US8574886B2 (en) 2013-11-05
RU2346049C2 (ru) 2009-02-10
HU228693B1 (hu) 2013-05-28
WO2003054163A3 (en) 2005-10-27
IL162302A (en) 2011-01-31
KR20080018965A (ko) 2008-02-28
US8093036B2 (en) 2012-01-10
HU1300136D0 (hu) 2007-05-29
CA2471148A1 (en) 2003-07-03
ES2362354T3 (es) 2011-07-04
AU2002366711B2 (en) 2007-11-29
EP1572895A4 (en) 2007-07-25
CA2803931A1 (en) 2003-07-03
PL375190A1 (en) 2005-11-28
KR20040085142A (ko) 2004-10-07
PL212928B1 (pl) 2012-12-31
KR100885163B1 (ko) 2009-02-23
US20140038235A1 (en) 2014-02-06
HUP0700154A2 (en) 2007-05-29
CZ2004765A3 (cs) 2004-12-15
US20120149067A1 (en) 2012-06-14
EP1572895B1 (en) 2011-03-16
US7811806B2 (en) 2010-10-12
BR0215220A (pt) 2007-01-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2004122420A (ru) Способ получения гиалуронана в рекомбинантной клетке-хозяине
US9938549B2 (en) Process for producing monosaccharides
CA2309133A1 (en) Nucleic acid molecules which encode proteins having fructosyl transferase activity and methods for producing long-chain inulin
CA2348366A1 (en) Nucleic acid molecules from rice and their use for the production of modified starch
CN113151211B (zh) 一种α-1,3-岩藻糖基转移酶突变体及利用该突变体制备3-岩藻糖基乳糖的应用
CN112210549A (zh) 腈水解酶突变蛋白及其在催化合成(r)-3-取代-4-氰基丁酸类化合物中的应用
EP2591127A1 (en) Biotechnological production of chondroitin
CN115948307A (zh) 一株无质粒、以葡萄糖等廉价碳源为底物从头高效合成胞苷的基因工程菌、方法和应用
KR950032624A (ko) 효소를 인코우드하는 dna, 재조합 dna와 효소, 형질 전환체 및 이들의 제조 방법과 용도
KR950032623A (ko) 효소를 인코우드하는 dna, 재조합 dna와 효소, 형질 전환체 및 이들의 제조 방법과 용도
CN103119152B (zh) Spnk菌株
CN109402080B (zh) 蛋白质ugt142及其编码基因与应用
KR100387302B1 (ko) 말토오스를 트레할로오스로 변환하는 재조합형 효소
CA2384122A1 (en) Cyclic depsipeptide synthetase and gene thereof, and mass production system for cyclic depsipeptide
CN108728457B (zh) 一种海藻糖合成酶基因优化序列及其应用
US20220267746A1 (en) Heparin skeleton synthase and its mutants and application
KR100379672B1 (ko) 어위니아 라폰티치 유래 유전자를 통한 이소말툴로스합성효소의 발현 생산방법
JPH11313683A (ja) 新規キシロシダーゼ遺伝子、ベクター、それを用いた形質転換体及びその利用
JP2003512046A5 (ru)
KR100629773B1 (ko) 대장균에서 발현가능한 ｇｕａＡ 유전자를 포함하는 벡터,이를 포함하는 에스케리키아 속 미생물, 및 상기 미생물을이용하여 ５＇－구아닐산 합성효소를 배지 중에축적시키는 방법
CN116144624A (zh) 穿心莲糖基转移酶apugt74l2及其编码基因与应用
EP3802832A1 (en) Promoter for yeast
CN118272400A (zh) 一种与芡实类黄酮C-糖苷合成相关的EfCGT3基因及应用
Archaea et al. 26 Expression of Ribosomal
CN116426501A (zh) 一种gdp-d-甘露糖水解酶突变体及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
HK4A Changes in a published invention
PD4A Correction of name of patent owner
PC41 Official registration of the transfer of exclusive right

Effective date: 20170216