KR950032623A - 효소를 인코우드하는 dna, 재조합 dna와 효소, 형질 전환체 및 이들의 제조 방법과 용도 - Google Patents

효소를 인코우드하는 dna, 재조합 dna와 효소, 형질 전환체 및 이들의 제조 방법과 용도 Download PDF

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Abstract

글루코오스 중합도가 3 이상인 전분질 당류로 부터 말단 단위로서 트레할로오스 구조를 가진 비환원성 당류를 생성하는 효소를 인코우드하는 DNA에 의해 이 효소의 활성을 가진 재조합 효소를 대규모로 제조할 수 있다. 재조합 효소에 의해 제조 가능한 비환원성 당류는 실질적으로 비환원성, 온화한 고품위의 감미, 적당한 점도 및 보습성을 가지고 있어서 식품, 화장품, 의약품 및 시료 등에 사용할 수 있다.

Description

효소를 인코우드하는 DNA, 재조합 DNA와 효소, 형질 전환체 및 이들의 제조방법과 용도
본 내용은 요부공개 건이므로 전문내용을 수록하지 않았음
제1도는 효소 M-11의 최적 온도를 나타내는 그래프, 제2도는 효소 Q36의 최적 온도를 나타내는 그래프, 제3도는 효소 M-11의 최적 pH를 나타내는 그래프.

Claims (46)

  1. 글루코오스 중합도가 3이상인 환원성인 전분질 당으로 부터 말단 단위로서 트레할로오스 구조를 가진 비환원성의 당를 생성하는 효소를 인코우드하는 DNA.
  2. 제1항에 있어서, 상기 효소는 아래와 같은 물리 화학적 성질을 가진 것인 DNA.
    (1)분자량 소디움 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동 (SDS-PAGE)에서 약 76,000~87,000돌턴, (2)등전점(pI) 등전점 전기 영동에서 약3.6~4.6
  3. 제1항에 있어서, 상기 효소는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트 (SEQ ID NO:4)에 나와 있는 바와 같은 N 말단에서 시작하는 아미노산 배열들과 이들 아미노산 배열에 대해 상동적인 아미노산 배열로 된 군으로 부터 선택되는 아미노산 배열을 가짐을 특징으로 하는 DNA.
  4. 제1항에 있어서, 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:1)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:3)에 나와있는 바와 같은 5′말단에서 시작하는 염기 배열들과 염기 배열에 대해 상동적인 염기 배열 및 이들 염기 배열에 대해 상보적인 염기 배열로 된 군으로부터 선택되는 염기 배열을 가진 DNA.
  5. 제4항에 있어서, 배열 리스트(SEQ ID NO:1) 또는 배열 리스트(SEQ ID NO:3)에서의 염기 하나 이상을 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)또는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)에서의 아미노산 배열을 바꾸지 않고 유전 코우드의 축중에 의해 다른 염기로 치환되는 DNA.
  6. 제1항에 있어서, 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:10) 또는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:11)에 있는 염기 배열을 가진 DNA.
  7. 제1항에 있어서, 리조븀속, 아르드로박터속, 브레비박테리움속, 플라보박테리움속, 마이크로코커스속, 쿠르토박테리움속, 마이코박테리움속 및 테라박터속의 미생물로 된 군으로 부터 선택되는 미생물 유래의 DNA.
  8. 제1항의 DNA와 자체 복제가 가능한 벡터를 함유하는 복제 가능한 재조합 DNA.
  9. 제8항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 물리 화학적 성질을 가진 효소를 인코우드하는 것인 복제가 가능한 재조합 DNA.
    (1)분자량 소디움 도데실 술페이트 폴리아크릴레이트 겔 전기 영동(SDS-PAGE)에서 약 76,000~87,000돌턴, (2)등전점(pI) 등전점 전기 영동에서 약 3.6~4.6
  10. 제8항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)에 나와 있는 바와 같은 N 말단에서 시작하는 아미노산 배열들과 이들 아미노산 배열에 대해 상동적인 염기 배열로 된 군으로 부터 선택되는 아미노산 배열을 가진 효소를 인코우드하는 복제가 가능한 재조합 DNA.
  11. 제8항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:1) 및 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:3)에 있는 염기 배열들과, 염기 배열에 대해 상동적인 염기 배열 및 이들 염기 배열에 대해 상보적인 염기 배열로 된 군으로 부터 선택되는 염기 배열을 가진 복제가 가능한 재조합 DNA.
  12. 제11항에 있어서, 배열 리스트 (SEQ ID NO:1)와 배열 리스트(SEQ ID NO:3)에서의 염기 하나 이상을 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)의 각기 상응한 아미노산 배열을 바꾸지 않고 유전 코우드의 축중에 의해 다른 염기로 치환하는 복제가 가능한 재조합 DNA.
    0
  13. 제8항에 있어서, 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:10)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:11)에 있는 염기 배열로 구성된 군으로 부터 선택되는 염기 배열을 가진 복제가 가능한 재조합 DNA.
  14. 제8항에 있어서, 상기 DNA는 리조븀속, 아르드로박터속, 브레비박테리움속, 플라보박테리움속, 마이크로코커스속, 쿠르토박테리움속, 마이코박테리움속 및 테라박터속의 미생물로 된 군으로 부터 선택되는 미생물 유래의 것인 복제가 가능한 재조합 DNA.
  15. 제8항에 있어서, 상기 자체 복제가 가능한 벡터가 플라스미드 벡터 블루우스크립트 Ⅱ SK(+)인 재조합 DNA.
  16. 적당한 숙주속에 자체 복제가 가능한 벡터와 제1항의 DNA를 함유한 재조합 DNA를 도입하여 수득되는 형질 전환체.
  17. 제16항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 물리 화학적 성질을 가진 효소를 인코우드하는 것인 형질 전환체.
    (1)분자량 소디움 도데실 술페이트 폴리아크릴어마드 겔 전기 영동(SDS-PAGE)에서 약76,000~87,000 돌턴, (2)등전점(pI) 등전점 전기 영동에서 약3.6~4.6
  18. 제16항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)에 있는 바와 같은 N 말단에서 시작하는 아미노산 배열들과 이들 아미노산 배열에 대해 상동적인 아미노산 배열로 된 군으로 부터 선택되는 아미노산 배열을 인코우드하는 것을 특징으로 하는 형질 전환체.
  19. 제16항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:1)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:3)에 있는 바와 같은 5′말단에서 시작하는 염기 배열들과, 염기 배열에 대해 상동적인 염기 배열 및 이들 염기 배열에 대해 상보적인 염기 배열로 된 군으로 부터 선택되는 염기 배열을 가짐을 특징으로 하는 형질 전환체.
  20. 제19항에 있어서, 배열 리스트(SEQ ID NO:1)와 배열 리스트(SEQ ID NO:3)의 염기 하나 이상을 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)에 있는 각기 상응한 아미노산 배열을 바꾸지 않고 유전 코우드의 축중에 의해 다른 염기로 치환하는 것을 특징으로 하는 형질 전환체.
  21. 제16항에 있어서, 상기 DNA가 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:10)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:11)에 있는 염기 배열로 구성된 군으로부터 선택되는 염기 배열을 가짐을 특징으로 하는 형질 전환체.
  22. 제16항에 있어서, 상기 DNA는 리조븀속, 아르드로박터속, 브레비박테리움속, 플라보박테리움속, 마이크로코커스속, 쿠르토박테리움속, 마이코박테리움속 및 테라박터속으로 된 군으로부터 선택되는 미생물 유래의 것인 형질 전환체.
  23. 제16항에 있어서, 상기 자체 복제가 가능한 벡터가 플라스미드 벡터 블루우스크립트 Ⅱ SK(+)인 형질전환체.
  24. 제16항에 있어서, 상기 숙주가 대장균(Escherichia coli)종의 미생물인 형질 전환체.
  25. 글루코오스 중합도가 3이상인 환원성의 전분질 당으로 부터 말단 단위로서 트레할로오스 구조를 가진 비환원성 당류을 생성하는 재조합 효소.
  26. 제25항에 있어서, 아래의 물리 화학적 성질을 가진 재조합 효소.
    (1) 분자량 소디움 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(SDS-PAGE)에서 약 76,000~87,000돌턴, (2)등전점(pI) 등점점 전기 영동에서 약3.6~4.6
  27. 제25항에 있어서, 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)에 있는 바와 같은 N말단으로 시작하는 아미노산 배열들과 이들 아미노산 배열에 대해 상동적인 아미노산 배열로 된 군으로부터 선택되는 아미노산 배열을 가진 재조합 효소.
  28. 제25항의 제조합 효소를 생성할 수 있는 형질 전환체를 배양하고, 수득한 배양역으로부터 재조합 효소를 채취함을 특징으로 하는 재조합 효소의 제조방법.
  29. 제28항에 있어서, 상기 재조합 효소는 아래의 물리 화학적 성질을 가진 것인 재조 방법.
    (1)분자량 소디움 도데실 술페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(SDS-PAGE)에서 약 76000~87,000돌턴, (2)등전점(pI) 등점점 전기 영동에서 약3.6~4.6
  30. 제28항에 있어서, 상기 재조합 효소는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)에 있는 바와 같은 N말단에서 시작하는 아미노산 배열들과 이들 아미노산 배열에 대해 상동적인 아미노산 배열로 된 군으로부터 선택되는 아미노산 배열을 가지는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
  31. 제28항에 있어서, 상기 형질 전환체는 글루코오스 중합도가 3이상인 화원성의 전분질 당으로부터 말단 단위로서 트레할로오스 구조를 가진 비환원성 당을 생성하는 효소를 인코우드하는 DNA와 자체 복제가 가능한 벡터를 가진 재조합 DNA를 적당한 숙주속에 도입하여 수득하는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
  32. 제28항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:1)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:3)에 있는 바와 같은 5′말단에서 시작하는 염기 배열들과, 염기 배열에 대해 상동적인 염기 배열 및 이들 염기 배열에 대해 상보적인 염기 배열로 된 군으로부터 선택되는 염기 배열을 가짐을 특징으로 하는 제조 방법.
  33. 제 32항에서 있어서, 상기 DNA는 하나 이상의 염기가 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:4)에 있는 각기 상응한 아미노산 배열을 바꾸지 않고 유전 코우드의 축중에 의해 다른 염기로 치환되는 배열 리스트(SEQ ID NO:1)와 배열 리스트(SEQ ID NO:3)에 있는 염기 배열로 된 군으로부터 선택되는 염기 배열을 가지는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
  34. 제28항에 있어서, 상기 DNA는 아래의 배열 리스트(SEQ IN NO:10)와 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:11)에 있는 염기 배열로 된 군에서 부터 선택되는 염기 배열을 가지는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
  35. 제28항에 있어서, 상기 DNA는 리조븀속, 아르드로박터속, 브레비박테리움속, 플라보박테리움속, 마이크로코커스속, 쿠르토박테리움속, 마이코박테리움속 및 테라박터속으로 된 군으로 부터 선택되는 미생물 유래의 것인 제조 방법.
  36. 제28항에 있어서, 상기 숙주가 대장균(Escherichia coli)종의 미생물인 제조 방법.
  37. 제28항에 있어서, 상기 자체 복제가 가능한 벡터가 플라스미드 벡터 블루우 스크립트 Ⅱ SK(+)인 제조 방법.
  38. 제28항에 있어서, 상기 형질 전환체를 pH 2~8의 액상 배지에 접종하여 25~65℃의 온도에서 1~6일동안 배양함을 특징으로 하는 제조 방법.
  39. 제28항에 있어서, 배양액 중의 상기 재조합 효소를 원심 분리, 여과, 농축, 염석, 투석, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 전기 영동 및 등전점 전기 영동으로 된 군으로 부터 선택되는 한가지 이상의 방법으로 채취하는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
  40. 글루코오스 중합도가 3이상인 환원성의 전분질 당에 제25항의 재조합 효소를 작용시켜 전분질 당으로부터 말단 단위로서 트레할로오스 구조를 가진 비환원성 당을 생성시키는 단계를 포함하는 환원성의 전분질당의 전환 방법.
  41. 제40항에 있어서, 상기 재조합 효소가 아래의 물리 화학적 성질을 가진 것인 전환 방법.
    (1)분자량 소디움 도데실 슐페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기 영동(SDS-PAGE)에서 약76,000~87,000 돌턴, (2)등점점(pI) 등전점 전기 영동에서 약3.6~4.6
  42. 제40항에 있어서, 상기 재조합 효소는 아래의 배열 리스트(SEQ ID NO:2)와 아래의 배열 리스트(SEQ IN NO:4)에 있는 바와 같은 N 말단에서 시작하는 아미노산 배열들과 이들 아미노산 배열에 대해 상동적인 아미노산 배열로 된 군으로 부터 선택되는 아미노산 배열을 가짐을 특징으로 하는 전환 방법.
  43. 제40항에 있어서, 상기 환원성의 전분질 당은 전분 가스 분해물과, 아밀라아제에 의한 처리 또는 무처리된 전분 물질로 된 군으로 부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 전환 방법.
  44. 제40항에 있어서, 상기 환원성의 전분질 당은 말토트리오스, 말토테트라오스, 말토펜타오스, 말토헥사오스, 말토헵타오스 및 이들의 혼합물로 된 군으로 부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 전환 방법.
  45. 제40항에 있어서, 환원성 전분질 당은 농도가 50w/w%또는 그 이하인 용액형태이고, 40~55℃의 온도 및 pH 5~10에서 공정 단계를 실시함을 특징으로 하는 전환 방법.
  46. 제40항에 있어서, 상기 비환원성 당은 α-글루코실 트레할로오스, α-말토실 트레할로오스, α-말토트리오실 트레할로오스, α-말토테트라오실 트레할로오스, α-말토펜타오실 트레할로오스 및 이들의 혼합물로 된 군으로 부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 전환 방법.
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