PT672158E - Adenovirus com fusao genetica de fibra pentao a peptido que alteram a especificidade de ligacao - Google Patents

Adenovirus com fusao genetica de fibra pentao a peptido que alteram a especificidade de ligacao Download PDF

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Description

85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ DESCR1CÃO "Adenovírus com fusão genética de fibra pentão a péptido que alteram a especificidade de ligação" O presente invento refere-se a veículos de entrega de genes a células alvo, especialmente nos campos da terapia génica e do tratamento do cancro. A entrega de genes a células alvo, especialmente às da estrutura principal dos mamíferos, tem muitas utilidades, por exemplo nos campos da terapia génica, tratamento do cancro e em áreas de manipulação genética ainda a determinar. O gene a ser entregue pode codificar uma molécula, tal como uma proteína ou ARN, que é citotóxica para a célula alvo ou pode codificar uma cópia funcional de um gene que é defeituoso na célula alvo. Neste último caso o produto da cópia funcional do gene anteriormente mencionada, substituirá o da cópia defeituosa e a célula alvo terá capacidade de realizar a sua função apropriada.
Foi descrito o uso de vírus ou de partículas semelhantes a vírus para a entrega de genes na terapia génica e no tratamento do cancro.
Contudo, na maior parte dos casos o direccionamento do vírus ou de partículas semelhantes a vírus que contêm o gene desejado para a célula tem dependido da especificidade natural hospedeiro-vírus ou da aplicação local do vírus às células a serem atingidas, por exemplo aplicação directa de vírus, por inalação, a células do pulmão. O genoma do adenovírus 5 humano (Ad5) consiste numa molécula de ADN linear, de cadeia dupla, com 36 quilo-pares de bases. O ciclo de replicação do vírus tem duas fases: uma fase precoce, durante a qual são expressas quatro unidades transcricionais E1, E2, E3 e E4 e uma fase tardia que ocorre depois do início da síntese do ADN virai quando são expressos transcritos tardios a partir do promotor tardio principal (“major [ate Qromoter”). Estas mensagens tardias codificam a maior parte das proteínas estruturais virais. Os produtos genéticos de E1, E2 e E4 de adenovírus humanos (Ad) estão envolvidos na activação transcricional, transformação celular e replicação do ADN virai, bem como em outras funções virais e são essenciais para o crescimento virai. Em contraste, 2 2 Ψ
85 659 EPO 672 158 / PT produtos genéticos de E3 não são necessários para a replicação virai em células em cultura ou para a infecção pulmonar aguda de rato do algodão, mas parecem estar envolvidos na evasão à vigilância imunitária in vivo.
Por "partícula semelhante a vírus" entendemos uma partícula de nucleoproteína contendo um núcleo de ácido nucleico rodeado por proteína que (i) não é iníecciosa e (ii) apenas pode ser propagada num sistema celular adequado, a seguir à transformação pelo seu ácido nucleico. Assim, uma partícula semelhante a vírus de origem mamífera pode ser propagada em Saccharomyces cerevisiae ou em células de insecto através de um sistema de expressão em baculovírus. A modificação de proteínas do revestimento de bacteriófagos filamentosos (vírus bacterianos), tais como M13 e fd, de modo a serem geradas novas propriedades de ligação, foi descrita por Cwirla et ai (1990) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87, 6378-6382 e por Scott & Smith (1990) Science 249, 386-390.
Foi anteriormente sugerido que partículas de retroelementos, incluindo vectores retrovirais, podem ser modificadas de modo a se dirigirem a células específicas, por exemplo, ver Kingsman et a! (1991) Tibtech 9, 303-309.
Russel et ai (1993) Nucl. Acids Res. 21, 1081-1085, publicada depois da data de prioridade deste pedido, mas antes da data de apresentação, descrevem vectores retrovirais que apresentam fragmentos de anticorpo funcionais e sugere que, em principio, a apresentação de fragmentos de anticorpo na superfície de partículas retrovirais recombinantes poderia ser usada para direccionar vírus a células para a entrega de genes. Contudo, não se sabe se pode ser montado um retrovírus no qual todas as sub-unidades da proteína do envelope virai estão fundidas com anticorpos e, mesmo neste caso, se o vírus infectaria as células
Foram testadas células humanas derivadas com NIP como um método para entrega direccionada de genes, mas tornou-se permissivo tanto para as partículas virais ecotrópicas modificadas (que apresentam um anticorpo anti-NIP) como para as não modificadas. NIP é ácido 4-hidroxi-3-iodo-5-nitrofenilacético. 3 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ
Michael et a! (1993) J. Bioí. Chem. 268, 6866-6869, publicado depois da data de prioridade deste pedido, mas antes da data de apresentação, descrevem conjugados moleculares entre adenovírus e um sistema vector compreendendo dois domínios ligados, um domínio de ligação a ADN e um domínio de ligando. Contudo, nesta configuração, afirma-se que a porção virai actua na condição de um domínio de ligando alternado do conjugado e, uma vez que um ligando adicional foi introduzido no desenho do conjugado, o potencial para o direccionamento específico para a célula alvo é minorado.
Curiel et aí (1992) Human Gene Therapy 3, 147-154 descrevem adenovírus em que foi introduzido um epitopo estranho na proteína hexão e ADN complexado com polilisina-anticorpo foi ligado a adenovírus devido à ligação do anticorpo ao epitopo estranho do hexão. O ADN estranho é transferido ligado ao exterior do virião. WO 92/06180 discute, em termos gerais, a adição de uma porção de ligação à superfície de um vírus e dá exemplos de vírus de leucemia murina de Moioney e de vírus da hepatite B, modificados. WO 92/14829 discute o facto de proteína associada a membrana, específica, de um vírus não relacionado, poder ser incorporada em partículas retrovirais para proporcionar uma gama de hospedeiros alterada. t EP 0 508 809 descreve uma partícula semelhante a vírus, contendo lípido, com base num retroelemento, tal como um retrovírus. WO 93/09221 discute, em termos gerais, modificações a um receptor de ligação a células de um vírus. São especialmente mencionados os vírus de Epstein-Barr, o vírus da gripe A, o paramixovírus e o retrovírus
Os vírus e partículas semelhantes a vírus, anteriormente referidos, podem ser capazes de atingir células alvo usando a porção de ligação apresentada na sua superfície, mas também podem, ainda, atingir as células suas hospedeiras naturais.
Concebemos agora novos vírus e partículas semelhantes a vírus, dos quais pelo menos alguns se podem ligar à célula alvo com elevada 4 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ especificidade e que podem entregar material genético à célula alvo; pelo menos alguns dos vírus e partículas semelhantes a vírus podem ligar-se e entregar material genético à célula alvo sem ligação substancial à célula hospedeira natural do vírus.
Um aspecto do presente invento proporciona um adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus, ou um seu derivado defeituoso na replicação compreendendo uma especificidade de ligação modificada conferida por uma porção de ligação que permite que o adenovírus ou a partícula semelhante a adenovírus se ligue a uma célula alvo, em que a porção de ligação é um péptido e está fundida com a fibra pentão (“penton fibre") do adenovírus ou da partícula semelhante a adenovírus. O vírus ou partícula semelhante a vírus pode ser substancialmente incapaz de se ligar à célula sua hospedeira.
Por "substancialmente incapaz de se ligar à célula sua hospedeira" entendemos que o vírus modificado tem não mais do que 1 % da afinidade de ligação do vírus não modificado para a célula hospedeira.
Em geral, a especificidade de ligação de um vírus natural ou de uma partícula semelhante a vírus é conferida pela interacção específica entre uma molécula semelhante a receptor expressa na superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus e uma molécula semelhante a receptor cognata, expressa na superfície da célula sua hospedeira. 0 invento proporciona uma modificação benéfica da especificidade de ligação de modo que o vírus ou a partícula semelhante a vírus se pode ligar a uma célula alvo específica diferente. A introdução da porção de ligação modificada pode ser tal que consiga a referida remoção da especificidade de ligação nativa.
Por "porção de ligação" entendemos uma molécula que está exposta sobre a superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus, que é capaz de se ligar a uma molécula na célula alvo. A "porção de ligação" pode ser uma molécula no vírus ou partícula semelhante a vírus, modificada de modo a que a sua especificidade de ligação seja modificada, ou pode ser uma molécula 5 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ adicionada a, e exposta sobre a superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus para proporcionar uma nova especificidade de ligação.
Prefere-se que a porção de ligação seja externa ao receptor para a célula sua hospedeira do vírus não modificado ingénuo <"naive").
Prefere-se ainda que a porção de ligação seja unida ou fundida ao vírus ou partícula semelhante a vírus, directa ou indirectamente, por um grupo espaçador.
Por "célula hospedeira" entendemos a célula à qual um vírus ingénuo, não modificado, se pode ligar usando a sua molécula semelhante a receptor e a molécula semelhante a receptor cognata na célula. Por "célula alvo" entendemos a célula à qual o vírus modificado se pode ligar usando a sua porção de ligação. Em algumas circunstâncias, no contexto do segundo aspecto do invento, tal como quando a porção de ligação reconhece uma entidade na célula hospedeira que não é a molécula semelhante a receptor cognata, então a célula hospedeira pode ser a célula alvo.
Espera-se que o invento tenha utilidade nas áreas da terapia génica e do tratamento do cancro. É também preferido que o vírus ou a partícula semelhante a vírus seja uma "réplica defeituosa". Por "réplica defeituosa" entendemos um vírus cujo material genético foi manipulado de modo a que não se possa dividir ou proliferar na célula que infecta. A porção de ligação do vírus ou da partícula semelhante a vírus do invento proporciona a especificidade de ligação à célula alvo. Qualquer proteína ou péptido de ligação a célula, pode ser útil para direccionar o vírus ou a partícula semelhante a vírus para a célula. Por exemplo, porções lineares curtas de aminoácidos, tais como aquelas que constituem uma hormona peptídica, são úteis, tal como o são domínios de polipéptidos que se podem dobrar independentemente numa estrutura que se pode ligar à célula alvo.
Numa concretização preferida a porção de ligação tem a propriedade de qualquer um de entre um anticorpo monoclonal, ScFv (fragmento Fv de cadeia 6 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ simples), um dAb (anticorpo de domínio único) ou uma unidade mínima de reconhecimento de um anticorpo. O local de ligação na célula alvo pode ser um antigénio específico da célula alvo. Estes antigénios estão listados na Tabela 1. Outras porções de ligação, alvos nas células e doenças que poderiam ser utilmente tratadas usando reagentes distribuídos pelos vírus ou partículas semelhantes a vírus, modificados, são apresentados na Tabela 2.
Tabela 1 1. Antioénios Associados a Tumores
Usos Existentes Imageologia & Terapia de tumores do cólon/recto
Antigénio Anticorpo
Antigénio Carcino- {C46 (Amersham) embrionário {85A12 (Unipath) H17E2 {ICRF, Travers & Bodmer) NR-LU-10 (NeoRx Corporation)
Fosfatase Alcalina de Placenta Carcinoma de Pan
Imageologia & Terapia dos cancros dos testículos e dos ovários.
Imageologia & Terapia de vários carcinomas incl. cancro de células pequenas do pulmão.
Mucina Epitelial Polimórfica (Glóbulo da Gordura do Leite humano) HMFG1 (Taylor— Imageologia & Terapia do
Papadimitriou, ICRF) cancro do ovário, efusões da pleura.
Direccionamento de enzima (CPG2) a coriocarcinoma de W14
Gonadotropina Coriónica-β humana xenoenxerto humano em ratinhos nús (Searle et al (1981) Br.J.Cancer 44, 137-144) 7 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ
Um hidrato de carbono em Carcinomas Humanos L6 (lgG2a)1
Direccionamento de fosfatase alcalina.(Senter et al (1988) P.N.A.S. 85, 4842-4846.
Antigénio CD20 em Linfoma B (normal e neoplásico) 1F5 (lgG2a)2
Direccionamento de fosfatase alcalina. (Senter et a/ (1988) P.N.A.S. 85, 4842-4846. 'Hellstrõm ef al (1986) Câncer Res. 46, 3917-3923 2Clarke eia/(1985) P.N.A.S. 82, 1766-1770 Outros antigénios incluem alfa-fetoproteína, Ca-125 e antigénio específico da próstata. 2.
Antigénios de Célula Imunitária
Antigénio de Superfície de Linfócito T de Pan (CD3) OKT-3 (Ortho)
Como terapia anti-rejeição para transplantes renais.
Antigénio de Superfície de Linfócitos B (CD22) RFB4 (Janossy, Free Hospital)
Royal Terapia por Imunotoxinas de linfoma de células B H65 (Bodmer, Knowles ICRF, Licenciado a Xoma Corp., EUA)
Antigénio de Superfície de Linfócitos T de Pan (CD5)
Tratamento por imunotoxinas de Doença Aguda de Enxerto versus Hospedeiro, Artrite Reumatóide
Antigénios Relacionados com Agentes Infecciosos
Anticorpo conjugado com a toxina da difteria para o tratamento da papeira Vírus relacionado com a papeira
Anticorpo policlonal anti-papeira
Ag Anti HBs
Imunotoxina contra Hepatoma
Antigénio de
Superfície da Hepatite B
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 8
Tabela 2: Porções de ligação para alvos específicos de tumores e antiqénios associados a tumores
Alvo Porção de ligação Doença Idiotipos EGFR Truncados mAb anti-EGFR Gliomas MAb anti-id Linfomas de célula B EGFR {c-erbB1) EGF, TGFa MAb anti-EGFR Cancro da mama c-erbB2 Mab Cancro da mama Receptor de IL-2 IL-2 Linfomas MAb anti-Tac e leucemias Receptor de IL-4 IL-4 Linfomas e leucemias Receptor de IL-6 IL-6 Linfomas e leucemias Receptor de MSH (Hormona estimuladora de melanócitos) a-MSH Melanomas Receptor de transferrina (TR) Transferrina mAb anti-TR Gliomas gp95/gp97 mAb Melanomas células de p-glicoproteína mAb resistente a drogas Antigénio de agregado-1 (N- mAb Carcinomas de célula pequena do CAM) pulmão agregado-w4 mAb Carcinomas de célula pequena do pulmão agregado-5A mAb Carcinomas de célula pequena do pulmão agregado-6 (LeY) mAb Carcinomas de célula pequena do pulmão PLAP {fosfatase alcalina de mAb Alguns seminomas placenta) Alguns cancros do ovário; alguns de célula não pequena do pulmão CA-125 mAb Carcinoma do pulmão, ovário ESA (antigénio epitelial específico) mAb CD 19, 22, 37 mAb Linfoma de células B Proteoglicano de 250 kDa mAb Melanoma p55 mAb Cancro da mama Fusão TCR-lgH mAb Leucemia de células T da infância Antigénio A de gp do sangue mAb Tumores gástricos e do cólon (em indivíduos B ou 0)
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 9 A porção de ligação pode ser um anticorpo monoclonal. São já conhecidos anticorpos monoclonais que se ligam a muitos destes antigénios, mas em qualquer caso, com as técnicas de hoje relativamente à tecnologia de anticorpos monoclonais, podem ser preparados anticorpos para a maior parte dos antigénios. A porção de ligação pode ser uma parte de um anticorpo (por exemplo um fragmento Fab) ou um fragmento de anticorpo sintético (por exemplo, ScFv). Podem ser preparados anticorpos monoclonais adequados para antigénios seleccionados, por técnicas conhecidas, por exemplo as divulgadas em "Monoclonal Antibodies: A manual of Techniques", H Zola (CRC Press, 1988) e em “Monoclonal Hybridoma Antibodies: Techniques and Applications", JGR H urrei (CRC Press. 1982).
Anticorpos não humanos preparados adequadamente podem ser "humanizados" de maneiras conhecidas, por exemplo por inserção das regiões CDR de anticorpos de ratinho na estrutura de anticorpos humanos.
Os domínios variável pesado (VH) e variável leve (VL) do anticorpo estão envolvidos no reconhecimento de antigénios, um facto primeiro reconhecido pelas primeiras experiências de digestão com protease. Foi conseguida confirmação adicional por "humanização" de anticorpos de roedor. Domínios variáveis de origem em roedor podem ser fundidos com domínios constantes de origem humana, de modo que o anticorpo resultante mantenha a especificidade antigénica do anticorpo progenitor de roedor (Morrison et a! (1984) Proc. Natl. Sei. USA 81, 6851-6855). 0 facto de a especificidade antigénica ser conferida por domínios variáveis e ser independente dos domínios constantes é conhecido de experiências que envolvem a expressão bacteriana de fragmentos de anticorpos, todos contendo um ou mais domínios variáveis. Estas moléculas incluem moléculas semelhantes a Fab (Better et al (1988) Science 240, 1041); moléculas Fv (Skerra et a! (1988) Science 240, 1038); moléculas ScFv nas quais os domínios parceiros, VH e VL estão ligados através de um oligopéptido flexível (Bird et a! (1988) Science 242, 423; Huston ef al (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85, 5879) e dAb compreendendo domínios V isolados (Ward et a! (1989) Nature 341, 544). Uma revisão geral das técnicas envolvidas na síntese de fragmentos de anticorpo que mantêm os seus locais de ligação específica é encontrada em Winter & Milstein (1991) Nature 349, 293-299. 10 85 659
EPO 672 158 / PT
Por "moléculas ScFv" entendemos moléculas nas quais os domínios parceiros VH e VL estão ligados através de um oligopéptido flexível.
Pode ser vantajoso utilizar fragmentos de anticorpos, em vez de anticorpos completos. São removidas funções efectoras dos anticorpos completos, tais como a ligação ao complemento. Os fragmentos de anticorpo ScFv e dAb podem ser expressos como fusões com outros polipéptidos.
Unidades mínimas de reconhecimento podem ser derivadas da sequência de uma ou mais das regiões determinantes da complementaridade (CDR) do fragmento Fv. Os anticorpos completos e fragmentos F(ab')2 são "bivalentes". Por "bivalente" entendemos que os referidos anticorpos e fragmentos F(ab')2 têm dois locais de combinação com antigénios. Em contraste, os fragmentos Fab, Fv, ScFv, dAb e unidades mínimas de reconhecimento são monovalentes, tendo apenas um local de combinação com antigénios.
Numa concretização adicional a porção de ligação é pelo menos parte de um ligando de um receptor específico da superfície celular de uma célula alvo. É preferido que o receptor específico da superfície celular da célula alvo seja o receptor da hormona de libertação de gonadotrofina humana (GnRH). Nesta concretização preferida a porção de ligação é GnRFI e a sua especificidade de ligação é para células de cancro humano que expressam os receptores de GnRH na sua superfície. Exemplos destas células de cancro humano são células de cancro da próstata, da mama e do endométrio. É também preferido que o receptor específico da superfície celular da célula alvo seja o receptor da hormona estimuladora de melanócitos (MSH) que é expresso em números elevados em células de melanoma. Nesta concretização preferida a porção de ligação é MSH e a sua especificidade de ligação é para células de melanoma. É também preferido que o receptor específico da superfície celular da célula alvo seja o receptor de somatostatina. 11 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ
Evidentemente, os receptores de GnRH, MSH e somatostatina podem, eles próprios, ser antigénios específicos para a célula alvo e podem ser reconhecidos por porções de ligação que têm a propriedade de qualquer de, um anticorpo monoclonal, um ScFv, um dAb ou uma unidade mínima de reconhecimento. Assim, embora o local de ligação na célula alvo possa ser um receptor da superfície celular ele também pode actuar como um antigénio específico da superfície celular da célula alvo para reconhecimento pela porção de ligação.
Será reconhecido pelos peritos na arte que porções de ligação que são polipéptidos podem ser convenientemente feitas usando técnicas de ADN recombinante. A porção de ligação pode ser fundida com uma proteína na superfície do vírus ou da proteína semelhante a vírus tal como descrito adiante ou podem ser sintetizadas independentemente do vírus ou da partícula semelhante a vírus, por expressão a partir de um vector adequado num hospedeiro adequado e depois juntas ao vírus ou à partícula semelhante a vírus tal como descrito adiante. São conhecidas sequências de ácido nucleico que codificam muitas das porções de direccionamento, por exemplo as de hormonas peptídicas, factores de crescimento, citóquinas e semelhantes, e podem ser prontamente encontradas por referência a bases de dados de sequências nucleotídicas acessíveis publicamente, tais como EMBL e GenBank. Uma vez conhecida a sequência nucleotídica é óbvio para o perito na arte o modo de preparar ADN que codifica a porção de ligação escolhida usando, por exemplo, técnicas de síntese química de ADN ou por utilização de reacção em cadeia com polimerase para a amplificação do ADN requerido a partir de ADN genómico ou a partir do ADNc específico de tecidos.
Muitos ADNc que codificam hormonas peptídicas, factores de crescimento, citóquinas e semelhantes, todos potencialmente úteis como porções de ligação, estão geralmente disponíveis de, por exemplo, British Biotechnology Ltd, Oxford, RU. É preferido que, quando o vírus ou a partícula semelhante a vírus do invento se liga à sua célula alvo, entregue o seu ácido nucleico na referida célula alvo ou seja que a célula alvo seja infectada pelo vírus ou pela partícula 12 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ semelhante a vírus. Células alvo, especialmente células de cancro, que são infectadas deste modo pelo vírus ou pela partícula semelhante a vírus, podem expressar moléculas virais na sua superfície e podem ser reconhecidas pelo sistema imunitário e destruídas. Obviamente, outras funções citotóxicas do vírus podem, também, matar a célula.
Numa concretização, o gene de E1B do adenovírus é substancialmente delecionado ou modificado de modo que o seu produto génico já não interactue com a proteína E1A. A proteína E1A estimula a apoptose celular, mas normalmente a sua acção é inibida pela E1B. Convenientemente, o gene de E1B é inactivado por inserção; preferivelmente um gene citotóxico, tal como definido adiante, é inserido no gene de E1B ou próximo dele. E1, E3 e um local a montante de E4 podem ser usados como locais para inserção de sequências de ADN estranho na geração de adenovírus recombinantes, por exemplo ver Berkner e Sharp (1984) NucJ. Acids Res. 12, 1925-1941; Chanda et a/(1990) Virology 175, 535-547; Haj-Ahmad e Graham (1986) J. Virol. 57, 267-274; Saito et al (1985) J. Viroi. 54, 711-719; todos aqui incorporados por referência. Uma vez que o limite superior para o tamanho das moléculas de ADN que podem ser empacotadas em partículas de adenovírus é aproximadamente 105% do genoma de tipo selvagem, apenas cerca de 2 kb de ADN adicional podem ser inseridas sem deleções de compensação no ADN virai. Apesar de E1 ser essencial para a replicação do vírus em cultura celular, o ADN estranho pode substituir sequências de E1 quando o vírus é desenvolvido em células 293 que são transformadas por ADN de Ad5 e expressam constitutivamente E1 (Graham et al (1977) J. Gen. Viroi 36, 59-72, aqui incorporado por referência). Vários vectores com 1,9 kb delecionadas de E3 de Ad5 foram construídos sem interferência na replicação do vírus em cultura celular (revisto por Graham e Prevec (1992) em "Vaccines: New Approaches to Immunological Problems" R.W. Ellis (Ed.), Butterworth-Heinemann, Boston, MA, páginas 364-390, aqui incorporado por referência). Estes vectores permitem a inserção de até 4 kb de ADN estranho. Adenovírus recombinantes contendo inserções em E3 replicam-se em todas as linhas celulares permissivas a Ad e mostrou-se que um certo número de vectores de adenovírus contendo inserções de E3, expressam eficientemente genes estranhos tanto in vitro como in vivo (Berkner (1988) Biotechniques 6, 616-629; Chanda et al (1990) Virology 175, 535-547; Dewar et al (1989) J. Viroi 63, 129-136; Graham (1990) Trends 13 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ
Biotechnol. 8, 85-87; Graham e Prevec (1992) em "Vaccines: New Approaches to Immunologica! Problems" R.W. Ellis (Ed.), Butterworth-Heinemann, Boston, MA, páginas 364-390; Jonhson et ai (1988) Virology 164, 1-14; Lubeck et aí (1989) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 86, 6763-6767; McDermott et aí (1989) Virology 169, 244-247; Morin et al (1987) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 84, 4626-4630; Prevec et ai (1989) J. Gen. Virol. 70, 429-434; Prevec et ai (1990) J. inf. Dis. 161, 27-30; Schneider et at (1989) J. Gen. Virol. 70, 417-427; Vernon et ai (1991) J. Gen. Virol. 72, 1243-1251; Yuasa et ai (1991) J. Gen. Virol. 72, 1 927-1 934) todos aqui incorporados por referência.
Podem ser preparados adenovírus substancialmente defeituosos na replicação por criação de uma deficiência na proteína E1A. Adequadamente, isto é conseguido por deleção do gene de E1A ou fazendo mutações no gene de E1A que impeçam a expressão da proteína E1A. Exemplos de mutações adequadas são deleções na região de codificação de E1A; mutações sem sentido; e mutações de desvio de estrutura de enquadramento.
Com preferência adicional, o vírus ou a partícula semelhante a vírus é adicionalmente modificado de modo a conter um gene adequado para terapia génica.
Numa concretização, o gene codifica uma molécula possuindo uma função directa ou indirectamente citotóxica. Por "directa ou indirectamente" citotóxica, entendemos que a molécula codificada pelo gene pode, ela própria, ser tóxica (por exemplo; ricina; factor de necrose tumoral; interleucina 2; gama-interferão; ribonuclease; desoxirribonuclease; exotoxina A de Pseudomonas) ou pode ser metabolizada para a formação de um produto tóxico, ou pode actuar sobre outra coisa para a formação de um produto tóxico. A sequência de ADNc de ricina é descrita em Lamb et a! (1985) Eur. J. Biochem. 148, 265-270, aqui incorporado por referência.
Por exemplo, seria desejável alvejar uma sequência de ADN que codificasse uma enzima usando o vírus ou a partícula semelhante a vírus do invento, sendo a enzima uma que converta uma prodroga relativamente não tóxica numa droga tóxica. A enzima citosina-desaminase converte a 5-flurocitosina (5FC) em 5-fluoro-uracilo (5FU) (Mullen et ai (1992) PNAS 89, 33); a enzima timidina-quinase de herpes simples sensibiliza células para 14 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ tratamento com ο agente antiviral ganciclovir {GVC) ou aciclovir (Moolten (1986) Câncer Res. 46, 5276; Ezzedine et al (1991) New Biol. 3, 608). Pode ser usada a citosina-desaminase de qualquer organismo, por exemplo de E. co/i ou de Saccharomyces cerevisiae.
Assim, numa concretização preferida do invento, o gene codifica uma citosina-desaminase e ao paciente é administrada concomitantemente 5FC. Por "concomitantemente", entendemos que a 5FC é administrada num momento tal que, relativamente à transformação das células tumorais, a 5FC é convertida em 5FU nas células alvo pela citosina-desaminase expressa a partir do referido gene. Uma dosagem de aproximadamente 0,001 a 100,0 mg 5FC/kg peso corporal/dia, preferivelmente de 0,1 a 10,0 mg/kg/dia é a adequada.
Componentes, tais como 5FC, que são convertidos a partir de uma forma relativamente não tóxica numa forma citotóxica, por acção de uma enzima, são designadas por "prodrogas".
Outros exemplos de combinações prodroga/enzima incluem as descritas por Bagshawe et al (W0 88/07378), nomeadamente vários agentes de alquilação e a enzima CPG2 de Pseudomonas spp. e as descritas por Epenetos & Rowlinson-Busza (WO 91/11201) nomeadamente prodrogas cianogénicas (por exemplo amigdalina) e β-glucosidases derivadas de plantas.
Enzimas que são úteis nesta concretização do invento incluem, mas sem lhes estarem limitados, fosfatase alcalina útil para a conversão de prodrogas contendo fosfato em drogas livres; arilsulfatase útil para a conversão de prodrogas contendo sulfato em drogas livres; citosina-desaminase útil para a conversão de 5-fluorocitosina não tóxica na droga anti-cancerigena, 5-fluoro-uracilo; proteases tais como protease de serratia, termolisina, subtilisina, carboxipeptidases e catepsinas (tais como as catepsinas B e L), que são úteis para a conversão de prodrogas contendo péptidos em drogas livres; D-alanilcarboxipeptidases úteis para a conversão de prodrogas que contêm substituintes D-aminoácido; enzimas que cindem hidratos de carbono, tais como β-galactosidase e neuraminidase, úteis para a conversão de prodrogas glicosadas em drogas livres; β-lactamase útil para a conversão de drogas derivatizadas com β-lactamas em drogas livres; e penicilina-amidases, tais como 15 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ penicilina V-amidase ou penicilina G-amidase, úteis para a conversão, respectivamente, de drogas derivatizadas nos seus azotos de amina com grupos fenoxi-acetilo ou grupos fenilacetilo, em drogas livres. Alternativamente, anticorpos com actividade enzimática, também conhecidos na arte como abzimas, podem ser usados para a conversão das prodrogas do invento em drogas activas livres [ver, e.g. R J Massey, Nature, 328, pp. 457-458 (1987)].
De modo semelhante, as prodrogas deste invento incluem, mas sem lhes estarem limitadas, as prodrogas listadas anteriormente, e.g. prodrogas contendo fosfato, prodrogas contendo tiofosfato, prodrogas contendo sulfato; prodrogas contendo péptido, prodrogas modificadas com D-aminoácidò, prodrogas glicosadas, prodrogas contendo β-lactama, prodrogas contendo fenoxi-acetamida opcionalmente substituída ou prodrogas contendo fenilacetamida opcionalmente substituída, 5-fluorocitosina e outras prodrogas de 5-fluoro-uridina que podem ser convertidas pela enzima do conjugado na droga livre citotóxica, mais activa. Exemplos de drogas citotóxicas que podem ser derivatizadas numa forma de prodroga para uso neste invento incluem, mas sem lhes estarem limitadas, etopósido, tenipósido, adriamicina, daunomocina, carminomicina, aminopterina, dactinomicina, mitomicinas, cis-platina e análogos de cis-platina, bleomicinas, esperamicinas [ver Pat. EUA n° 4 675 187], 5-fluoro-uracilo, melfalano e outras mostardas de azoto relacionadas.
Numa concretização adicional o gene entregue na célula alvo codifica uma ribozima capaz de clivar o ARN ou o ADN alvo. O ARN ou ADN alvo a ser clivado pode ser ARN ou ADN que é essencial à função da célula e a sua clivagem resulta na morte da célula ou o ARN ou ADN a ser clivado pode ser ARN ou ADN que codifica uma proteína indesejável, por exemplo um produto de oncogene, e a clivagem deste ARN ou ADN pode impedir que a célula se torne cancerosa.
As ribozimas que podem ser codificadas nos genomas dos vírus ou das partículas semelhantes a vírus aqui referidas são descritas em Cech e Herschlag "Site-specific cleavage of single stranded DNA" US 5 180 818; Altman et a/ "Cleavage of targeted ARN by RNAse P" US 5 168 053, Cantin et a! "Ribozyme cleavage of HIV-1 RNA" US 5 149 796; Cech et a! "RNA ribozyme restriction endoribonucleases and methods", US 5 116 742; Benn et aí "RNA ribozime polymerases, dephosphorylases, restriction endonucleases and methods, US
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 16 5 093 246; e Been et aI "ARN ribozyme polymerases, dephosphorylases, restriction endoribonucleases and methods; cleaves single-stranded ARN at specific site by transesterification", US 4 987 071 todas aqui incorporadas por referência.
Ainda numa concretização adicional o gene entregue na célula alvo codifica um ARN anti-sentido.
Por "ARN anti-sentido" entendemos uma molécula ARN que hibrida e interfere com a expressão a partir de uma molécula de ARNm que codifica uma proteína ou noutra molécula de ARN na célula, tal como pré-ARNm, ARNt, ARNr ou hibrida e interfere na expressão a partir de um gene.
Convenientemente, um gene que expressa um ARN anti-sentido pode ser construído por inserção de uma sequência de codificação que codifica uma proteína adjacente a um promotor na orientação adequada de modo que o ARN seja complementar ao ARNm. Adequadamente, o ARN anti-sentido bloqueia a expressão de polipéptidos indesejáveis, tais como oncogenes, por exemplo ras, bcí, src ou genes supressores de tumores, tais como p53 e Rb.
Será entendido que pode ser suficiente reduzir a expressão do polipéptido indesejável, em vez de abolir a expressão.
Será adicionalmente entendido que sequências de ADN adequadas para expressão como ARN anti-sentido, podem ser prontamente derivadas de bases de dados acessíveis publicamente, tais como GenBank e EMBL.
Numa outra concretização do invento, o gene substitui a função de um gene defeituoso na célula alvo.
Existem vários milhares de doenças genéticas hereditárias em mamíferos, incluindo humanos, que são causadas por genes defeituosos. Exemplos destas doenças genéticas incluem fibrose cística, em que se sabe existir uma mutação no gene de CFTR; distrofia muscular de Duchenne, onde se sabe existir uma mutação no gene da distrofina; doença de célula falciforme, onde se sabe existir uma mutação no gene de HbA. Muitos tipos de cancros são provocados por 17 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ genes defeituosos, especialmente proto-oncogenes e genes supressores de tumores que sofreram mutação.
Assim, é preferido que o vírus ou a partícula semelhante a vírus do invento que pode ser útil no tratamento da fibrose cística, contenha um gene de CFTR funcional para substituir a função do gene de CFTR defeituoso. De modo semelhante, é preferido que o vírus ou a partícula semelhante a vírus do invento que pode ser útil no tratamento do cancro, contenha um proto-oncogene ou gene supressor de tumor, para substituir a função do proto-oncogene ou gene supressor de tumor defeituoso.
Exemplos de proto-oncogenes são ras, src, bc! e assim sucessivamente; exemplos de genes supressores de tumores são p53 e Rb.
Por "gene" entendemos uma sequência de codificação de ácido nucleico que pode conter intrões, ou seus fragmentos, ou ADNc ou seus fragmentos.
Será evidente que o gene será introduzido num lugar conveniente no genoma do vírus ou da partícula semelhante a vírus e conterá um elemento promotor e/ou potenciador para dirigir a sua expressão. É preferido que o promotor e/ou potenciador seja selectivo para as células a serem alvejadas. Alguns exemplos de promotores específicos para tumores ou para tecidos são apresentados a seguir, mas estão a ser continuamente identificados outros novos que serão úteis nesta concretização do invento .
Os genes de tirosinase e de TRP-1 codificam, ambos, proteínas que desempenham papéis chave na síntese do pigmento melanina, um produto específico de células melanocíticas. As extremidades 5' dos genes da tirosinase e da proteína relacionada com a tirosinase (TRP-1) conferem especificidade tissular de expressão nos genes clonados a jusante destes elementos promotores.
As sequências 5' destes genes são descritas em Bradl, M. et a/ (1991) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88, 164-168 e Jackson, I.J. et aí (1991) Nucfeic Acids Res. 19, 3799-3804. 18 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ Ο antigénio específico da próstata (PSA) é um dos principais constituintes proteicos da secreção da próstata humana. Tornou-se um marcador útil para a detecção e monitorização do cancro da próstata. O gene que codifica a PSA e a sua região promotora que dirige a expressão específica na próstata de PSA foi descrito (Lundwall (1989) Biochem. Biophys. Res. Comm. 161, 1151-1159; Riegman et aI (1989) Biochem. Biophys. Res. Comm 159, 95-102; Brawer (1991) Acta Oncoi. 30, 161-168). 0 antigénio carcino-embrionário (CEA) é um marcador de tumores latamente usado especialmente na vigilância de pacientes com cancro no cólon. Embora o CEA esteja, também, presente em alguns tecidos normais, é aparentemente expresso em níveis mais elevados em tecidos de tumor, do que nos correspondentes tecidos normais. O gene completo que codifica CEA foi clonado e a sua região promotora foi analisada. Uma construção de promotor de gene de CEA, contendo aproximadamente 400 nucleótidos a montante do ponto de início da tradução, apresentou actividade nove vezes mais elevada na linha celular de adenocarcinoma SW303, quando comparada com a linha celular HeLa. Isto indica que estão contidas nesta região sequências de actuação cis que conferem expressão específica para o tipo celular (Schrewe et ai (1990) Moi. Cell. Bioi. 10, 2738-2748). 0 gene c-eróB-2 e o promotor já foram anteriormente caracterizados e o produto do gene mostrou ser sobre-expresso em linhas celulares tumorais (Kraus et ai (1987) EMBOJ. 6, 605-610). O gene da mucina, MUCI, contém sequências flanqueadoras a 5' que são capazes de dirigir selectivamente a expressão em linhas celulares da mama e pancreáticas, mas não em linhas celulares não epiteliais de acordo com o indicado em W091/09867. A porção de ligação que permite que o vírus ou a partícula semelhante a vírus se ligue a uma célula alvo pode ser um polipéptido capaz de se ligar especificamente à célula alvo. É preferido que a porção de ligação seja um polipéptido.
bb 659
EP 0 672 158 / PT 19 É preferido que a porção de ligação e a molécula na superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus sejam ambos polipéptidos que possam ser produzidos como uma fusão por técnicas de engenharia genética. O uso da engenharia genética permite o controlo preciso sobre a fusão destes polipéptidos.
Assim, uma concretização adicional do invento consiste numa sequência nucleotídica que codifica a fusão da porção de ligação e da proteína na superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus. A sequência nucleotídica que codifica a fusão da porção de ligação e da proteína na superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus é, preferivelmente, feita através de uma alteração do genoma virai. A sequência nucleotídica pode ser sintetizada de novo usando a química do fosforamidito em fase sólida, mas é mais usual que a sequência nucleotídica seja construída a partir de duas partes, a primeira codificando a porção de ligação e a segunda a proteína na superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus. As duas parte podem ser derivadas dos seus genes respectivos por digestão com endonucleases de restrição ou por outros métodos conhecidos pelos peritos na arte, tais como a reacção em cadeia com polimerase.
Foi desenvolvida uma variedade de métodos para ligar operativamente duas sequências nucleotídicas através de terminais coesivos complementares. Por exemplo, ligantes sintéticos contendo um ou mais locais de restrição proporcionam um método de união dos dois segmentos de ADN. Cada segmento de ADN, gerado por digestão com endonucleases de restrição, é tratado com ADN-polimerase de bacteriófago T4 de E. coli, ADN-polimerase I, enzimas que removem os terminais salientes em cadeia simples a 3' com as suas actividades exonucleolíticas 3'-5' e preenchem as extremidades recuadas 3' com as suas actividades de polimerase.
Consequentemente, a combinação destas actividades gera segmentos de ADN de extremidades lisas. Estes segmentos de extremidades lisas são depois incubados com um grande excesso molar de moléculas ligantes na presença de uma enzima que tem a capacidade de catalisar a ligação das moléculas de ADN de extremidades lisas, tal como a ADN-ligase de bacteriófago T4. Deste modo, 20 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ os produtos da reacção são segmentos de ADN comportando sequências de ligantes poliméricos nas suas extremidades. Estes segmentos de ADN são então clivados com a enzima de restrição adequada e levados a um vector de expressão que foi clivado com uma enzima que produz terminais compatíveis com os do segmento de ADN.
Estão disponíveis comercialmente ligantes sintéticos contendo uma variedade de locais para endonucleases de restrição, de várias fontes incluindo International Biotechnologies Inc, New Haven, CN, EUA.
Um modo desejável de gerar o ADN que codifica o polipéptido de fusão do invento consiste na utilização da reacção em cadeia de polimerase tal como descrito por Saiki et a! (1988) Science 239, 487-491.
Neste método cada uma das moléculas de ADN que codifica os dois polipéptidos a serem fundidos é amplificada enzimaticamente usando dois iniciadores olignonucleotídicos específicos que eles próprios se incorporaram no ADN amplificado. Os referidos iniciadores específicos podem conter locais de reconhecimento para endonucleases de restrição que podem, depois, ser usados para unir as referidas duas moléculas de ADN usando ADN-ligase de T4, tal como descrito.
Uma característica particular de um aspecto do presente invento consiste na modificação do vírus ou da partícula semelhante a vírus do invento, de modo que deixe de se ligar à célula sua hospedeira e de modo a se ligar à célula alvo devido à sua porção de ligação. A fibra pentão pode ser modificada por inserção, deleção ou substituição de resíduos de aminoácido que destroiem a sua função de ligação à célula hospedeira. Ê preferido que a porção de ligação para a célula alvo seja unida ao receptor da célula hospedeira de tal modo que a porção de ligação seja capaz de ligar a célula alvo, o receptor da célula hospedeira seja incapaz de se ligar à célula hospedeira e, assim, a especificidade da ligação do vírus ou da partícula semelhante a vírus seja modificada. Uma preferência adicional consiste em a porção da fibra pentão que está exposta na superfície do vírus ou da partícula semelhante a vírus, ser substituída pela porção de ligação e em a porção da fibra pentão que promove a captação do ADN virai pela célula alvo ser retida. 21 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ
Adequadamente, a porção de ligação é unida directa ou indirectamente ao receptor da célula hospedeira por um grupo espaçador.
Exemplos de grupos espaçadores são sequências polipeptídicas com entre 4 e 1000 resíduos de aminoácido.
Assim, numa concretização do invento o gene que codifica a fibra pentão no adenovírus é modificado de tal modo que o ADN que codifica a porção que é exposta à superfície é substituído por um fragmento de ADN que codifica um ScFv, sendo o ScFv derivado de um anticorpo que se liga a um antigénio de superfície da célula alvo.
Foram identificados locais de fusão potenciais na fibra pentão. A fibra de adenovírus é um trímero composto por três protómeros. A extremidade do terminal amino (aproximadamente 40 aminoácidos) de cada um, participa na formação de uma cauda que está estreitamente associada com a sub-unidade pentão (em oposição ao hexão) da cápside. É mantida uma conservação de aminoácidos elevada entre os diferentes serótipos caracterizados.
As porções médias de cada protómero formam a estrutura principal da proteína. Esta estrutura principal tem comprimento variável, dependendo do serótipo e é composto por unidades de repetição de 15 aminoácidos (por exemplo, foram identificados serótipos com 6, 15 e 21 unidades de repetição). Estas unidades de repetição não são duplicados: em vez de uma conservação rigorosa da estrutura de aminoácido, existe uma conservação geral da hidrofobicidade relativa. Alguns serótipos, por exemplo, 40 e 41, têm estruturas principais compostas por proteínas de fibra com comprimentos diferentes. Isto sugere uma certa flexibilidade nas restrições estruturais.
As extremidades do terminal carboxi (cerca de 200 aminoácidos) associam-se para formar uma saliência que é mantida erecta a grande distância (em termos moleculares) da cápside.
Embora o ou os receptores celulares e os mecanismos de ancoragem ("docking") não tenham sido firmemente identificados e elucidados, propomos 22 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ que a estrutura candidata mais provável para a ligação à célula, seja a saliência. Assim, numa concretização, toda a saliência da fibra pentão, foi substituída por domínios de anticorpo de cadeia simples (ScFv). A estrutura tripla implica que cada fibra terminará, deste modo, em três ScFv. Adicionalmente, as regiões ScFv podem ser substituídas por CDR, ou por péptidos derivados sem serem de anticorpos, com especificidade conhecida ou por outras moléculas que tenham a capacidade de interactuarem especificamente com a célula alvo.
Existem, portanto, locais de fusão adequados na junção nativa entre os domínios da estrutura principal e de saliência, ou (se a sequência de ADN provar ser mais acessível) em qualquer junção entre unidades repetitivas da estrutura principal. Preferivelmente o comprimento mínimo da estrutura principal não é reduzido para além do tamanho mais pequeno naturalmente identificado. Existem, assim, pelo menos 15 locais potenciais nos quais a fusão poderá ser contemplada.
Apesar de ser preferido que a porção de ligação forme a extremidade da fibra, substituindo deste modo a saliência, a porção de ligação também pode ser fundida dentro da sequência da fibra pentão, mas ainda apresentar as suas superfícies de ligação e ligar-se à célula alvo.
Adequadamente, a porção de ligação pode ser fundida com a saliência e prolongada externamente até à estrutura de saliência.
Um aspecto adicional do invento proporciona um método de produção em cultura celular, de um vírus ou partícula semelhante a vírus e depois unir a porção de ligação, tal como definido anteriormente, ao vírus ou partícula semelhante a vírus.
Um aspecto adicional do invento proporciona um método de produção, em cultura celular, de um vírus ou partícula semelhante a vírus que foram modificadas geneticamente para expressar uma porção de ligação na sua superfície. 0 vírus ou partícula semelhante a vírus é desenvolvido no seu hospedeiro antes da modificação, mas uma vez feita a modificação que altera a especificidade de ligação, o vírus ou partícula semelhante a vírus é desenvolvido na célula alvo. Assim, por exemplo, no caso em que porção de ligação 23 85 659
EPO 672 158/PT reconhece um antigénio de célula de tumor da mama, o vírus ou partícula semelhante a vírus é desenvolvido em cultura celular do tumor da mama. O vírus ou as partículas semelhantes a vírus do invento são administrados de qualquer modo adequado, usualmente por via parentérica, por exemplo intravenosa, intraperitoneal ou intravesical, em formulações de diluentes e transportadores estéreis, não pirogénicos, comuns, por exemplo solução salina isotónica (quando administrados intravenosamente).
Um aspecto adicional do invento proporciona um método de entrega do vírus ou da partícula semelhante a vírus que contém um gene que codifica uma molécula com uma função indirectamente citotóxica.
Adequadamente, a função indirectamente citotóxica é uma enzima que converte uma prodroga numa droga tóxica. Com este vírus ou partícula semelhante a vírus, uma vez que o vírus ou partícula semelhante a vírus se tenha ligado às células alvo, entregue o seu ácido nucleico às células e expressando as funções indirectamente citotóxicas, o que tipicamente demora mais ou menos um dia, a pró-droga está administrada. 0 tempo exacto entre a administração do vírus ou da partícula semelhante a vírus e da prodroga pode ser optimizado de um modo que não da invenção. A dosagem da prodroga será escolhida pelo médico de acordo com os critérios usuais. A dosagem do vírus ou da partícula semelhante a vírus será, de modo semelhante, escolhida de acordo com os critérios normais e, no caso de tratamento de tumor, particularmente com referência ao tipo, estado e localização do tumor e com o peso do paciente. A duração do tratamento dependerá em parte da rapidez e da extensão de qualquer reacção imunitária ao vírus ou à partícula semelhante a vírus.
Alguns dos vírus ou partículas semelhantes a vírus, por eles próprios, ou em conjunto com uma prodroga adequada, são em principio adequados para a destruição de células em qualquer tumor ou em outra classe de células definida que exiba selectivamente uma entidade reconhecível (na superfície). Exemplos de tipos de cancro que podem ser tratados usando os vírus ou partículas semelhantes a vírus são cancro da mama, da próstata, do cólon, do recto, do ovário, do testículo e do cérebro. Os compostos são destinados principalmente 24 85 559 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ a uso em humanos, mas podem ser usados para o tratamento de outros mamíferos incluindo cães, gatos, gado, cavalos, porcos e ovelhas. O invento será agora descrito em detalhe com referência às Figuras e Exemplos seguintes nos quais: A Figura 1 apresenta (a) um vírus ou partícula semelhante a vírus não modificado (i.e. "ingénuo") com capacidade de se ligar e de infectar a célula sua hospedeira, mas não uma célula não hospedeira, tal como uma célula alvo; e (b) um vírus ou partícula semelhante a vírus com uma especificidade de ligação modificada que não se liga nem infecta a célula sua hospedeira mas liga-se e infecta uma célula alvo; e (c) um vírus ou partícula semelhante a vírus tal como em (b), adicionalmente modificado de modo a conter um gene para terapia genética ou tratamento do cancro. A Figura 2 apresenta (a) adenovírus não modificado ("naive"); (b) adenovírus modificado de modo a que as suas fibras pentão, que reconhecem a célula hospedeira, sejam em parte substituídas por fragmentos de anticorpo que reconhecem a célula alvo; e (c) adenovírus tal como em (b) com material genético adicional, adicionado ao ADN virai para terapia géritca do cancro. A Figura 3 apresenta (a) vírus da gripe e (b) vírus da gripe geneticamente modificado em que pelo menos parte do local de ligação de hemaglutinina é substituído por um anticorpo com actividade de ligação a células anti-cancro. O vírus apresentado na Figura 3 não está no âmbito das reivindicações. A Figura 4 apresenta (a) um vírus retrovírus; e (b) de acordo com (a), com a excepção de o retrovírus ter sido adicionalmente modificado para expressar, na sua superfície, um fragmento de anticorpo de ligação a células anti-cancro ou um péptido de ligação a scélula anti-cancro. O vírus apresentado na Figura 4 não está no âmbito das reivindicações. A Figura 5 é uma representação diagramática de uma fibra pentão, indicando locais de fusão potenciais na fibra. A Figura 6 apresenta fusões entre o ADN que codifica a fibra de Ad5 e um ScFv. 25 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ A Figura 7 apresenta sequências de oligonucleótidos usadas para a amplificação de ScFv. Todos os oligonucleótidos são apresentadas de 5' para 3', o complemento inverso dos iniciadores FOR são apresentados e as sequências de aminoácidos derivadas são indicadas onde é relevante. A Figura 8 apresenta a construção do plasmídeo pRAS117. A Figura 9 apresenta a sequência de nucleótidos e de aminoácido derivada entre os locais de Hind\\\ e EcoRI de pRAS117. A Figura 10 apresenta um mapa do plasmídeo pRAS117. A Figura 11 é uma representação diagramática da construção do plasmídeo pRAS11 8. A Figura 12 apresenta as sequências de oligonucleótidos para a amplificação de fragmentos de ADN de fibra de Ad5. Todos os oligonucleótidos são apresentados de 5'-» 3'. São indicados os complementos inversos dos iniciadores FOR. São indicadas as sequências de aminoácidos derivadas onde é relevante. A Figura 13 apresenta a sequência de nucleótidos e a sequência de aminoácido deduzida entre o local Hiná\\\ e EcoRI de pRAS111. A Figura 14 apresenta uma representação diagramática de construção de adenovírus comportando um gene citotóxico. A Figura 15 apresenta sequências de nucleótidos e de aminoácidos de regiões variáveis de HMFG1 de ratinho e humanizadas .
Exemplo 1: Locais de fusão na fibra de adenovírus Ad5 para a ligação de porções incluindo Fv de cadela simples (ScFv)
As coordenadas da sequência de ADN de Ad5 aqui usadas foram obtidas de: ADRCOMPGE1: resíduos 1 a 32760 e ADRCOMPGE 2: resíduos 32761-35935 26 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ
Isto pode ser acedido usando o programa SEQ na base de dados Intelligenetics. A sequência da fibra de Ad5 também pode ser encontrada em Chroboczek, J. e Jacrot, B. (1987) "The sequence of adenovírus fiber: Similarities and diferences between serotypes 2 and 5" Virology 161, 549-554 e está disponível em EMBL Database, Heidelberg, Alemanha, com o nome de acesso ADEFIB.
As sequências de fusão entre a estrutura principal e o ScFv estão indicadas na Fig. 6. Os locais de fusão estão nas junções das unidades repetitivas da estrutura principal. As sequências da estrutura principal estão indicadas em caracteres de tipo normal; as sequências de ScFv estão indicadas em itálico. A sequência de ADN entre os locais PSt\ e Xho\ é única para a ScFv usada. A fusão A está na extremidade da primeira unidade repetitiva da estrutura principal (coordenadas 31218-9), a fusão B na extremidade da segunda (31266-7), a fusão C na terceira (31323-4), a fusão D na quarta (31368-9), a fusão E na quinta 31413-4), a fusão F na sexta (31458-9), a fusão G na sétima (31503-4), a fusão H na oitava (31551-2), a fusão I na nona (31596-7), a fusão J na décima (31641-2), a fusão K na décima primeira (31692-3), a fusão L na décima segunda (31737-8), a fusão M na décima terceira (31787-8), a fusão N na décima quarta (31836-7), a fusão 0 na décima quinta (31884-5), a fusão P na décima sexta (31929-30), a fusão Q na décima sétima (31995-6), a fusão R na décima oitava (32040-1), a fusão S na décima nona (32103-4), a fusão T na vigésima (32151-2), a fusão U na vigésima primeira (32199-200) e a fusão V está no final da vigésima segunda unidade repetitiva da estrutura principal (32244-5) a junção entre a estrutura principal e a saliência.
Exemplo 2: Preparação de adenovírus expressando uma ScFv na sua superfície A fibra geneticamente modificada é introduzida no genoma de Ad5 por: (a) substituição do gene da fibra do plasmídeo pE4 com a fibra modificada por tecnologia Standard de ADN recombinante e (b) reconstituição do vírus por recombinação. 27 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ Ο ρΕ4 é um plasmídeo contendo a metade direita do genoma de Ad5 e que actuou como a fonte do gene da fibra de Ad5 que usámos. Foi proporcionado pelo Dr. Keith Leppard, Biological Sciences, Universidade de Warwick, Coventry, CV4 7AL, que forneceu detalhes sobre a sua estrutura. Se for introduzido em células de mamífero que contêm o restante do genoma de Ad5, então é possível obter recombinantes que contêm a modificação. Podem ser usadas a maior parte das linhas celulares humanas para a recombinação, mas são preferidas as células HeLa. O plasmídeo pE4 é prontamente feito do modo seguinte: É feito um derivado de pBR322 por digestão com EsíNI e nova união usando ligantes Xho\ de modo que é removido o fragmento EsfNI correspondente às posições 1442-2502 da sequência de pBR322. O ADN do adenovírus Ad5, estirpe 309, descrito por Jones & Shenk (1979) Celf 17, 683-689 é isolado e desproteínizado. Este ADN é, depois ligado a ligantes C/al e cortado com EcoRI e Cia/. O fragmento C/al-EcoRI correspondente à região de 76% do genoma de Ad5 da extremidade direita é isolado e clonado nos locais EcoR\-Cla\ do derivado de pBR322 acima referido para a formação de pE4. 0 adenovírus Tipo 5 e as células HeLa estão disponíveis em American Type Culture Collection, 12301 Packlawn Drive, Rockville, Md 20852-1776, EUA com os números de acesso ATCC VR-5 e ATCC CCL-2.
Construção do plasmídeo pRAS117
Foram usados os iniciadores oligonucleótidicos LEADHBACK e LEADbFOR (Figura 7) para a amplificação mediada por PCR do segmento de ADN que se prolonga do local Hindlll de plasmídeo pRAS111, ao longo da sequência de Shine-Dalgarno e da sequência de comando pe/B até ao local Pst\ na ScFv. LEADbFOR dirige a incorporação de um local Bgl\\ imediatamente após a sequência de comando pe/B. O ADN (100 ng) do plasmídeo pRAS111 foi submetido a 24 ciclos de amplificação, (94UC, 1 min; 65°C, 1,5 min e 72°C, 2 min.) num volume de reacção de 50 μΙ contendo 25 pmol de cada iniciador, cada dNTP, a 250 mM, Tris-HCI 67 mM (pH 8,8), (NH4)2S04 17 mM, MgCI2 1,5 mM, 200 mg.ml'1 de gelatina e 5 unidades de polimerase de Thermus aquaticus (Taq) (Cetus) revestidos com 25 μΙ de óleo de parafina. Após a reacção, o óleo 28 8b 6b9 EP 0 672 158 / PT foi removido por extracção em 500 μΙ de clorofórmio. A amostra foi carregada num gel de agarose a 2% e o fragmento amplificado foi submetido a electroforese num pedaço de papel NA45 (Schleider and Schuell). O ADN ligado foi subsequentemente eluído por imersão, durante 30 min. a 70°C, em 400 μΙ de NaCI 1M feito em TE (Tris-HCI 10 mM pH 7,5, EDTA 1 mM). A isto foram adicionados 800 μΙ de etanol e após incubação (2h - 20°C) o ADN foi recolhido por centrifugação. As peletes foram retomadas em 50 μΙ de T/E.
Um quinto (10 μΐ) do fragmento amplificado, purificado, foi cortado com as enzimas de restrição Hind\\\ e Pst\, num volume total de 20 μΙ de Tris-HCI 50 mM, pH 7,5, MgCI2 10, NaCI 100 mM, ditioeritreitol 1 mM contendo 10 unidades de cada enzima. Após incubação (1 h, 37°C) a reacção foi parada por incubação a 70°C durante 15 minutos. 0 fragmento amplificado cortado foi clonado entre os locais Hinà\\\ e Pst\ de pUC8, para gerar o plasmídeo pRAS117. 0 plasmídeo pUC8 (1 μ9) foi cortado com Hiná\\\ e PstI num volume total de 20 μΙ de Tris-HCI 50 mM, pH 7,5, MgCI2 10, NaCI 100 mM, ditioeritreitol 1 mM contendo 10 unidades de cada enzima. Após incubação (1 h, 37°C) a reacção foi parada por incubação a 70°C durante 15 minutos. A reacção de ligação continha 1,5 μΙ de pUC8///rV?dlll, Psfl e 3 μΙ do comando/Hindll! amplificado, Pst\ num volume total de 15 μΙ contendo Tris-HCI 70 mM, pH 7,5, MgCI2 7 mM, ATPr 0,7 mM, ditiotreitol 4 mM, 0,5 mg.ml'1 de BSA e 10 unidades de ADN-ligase de T4. Após incubação (2h, à temperatura ambiente), a reacção foi parada por adição de 1 μΙ de EDTA 500 mM, pH 8,0 e 14 μΙ de H20.
Esta mistura de ligação foi usada para a transformação de E. Coli.
Uma alíquota (5 μΙ) desta mistura de ligação foi usada para transformar uma alíquota de 200 μΙ, de E.Coli K12 DH58, 7aF, competente, disponível comercialmente (Life Sciences Inc). Após incubação (30 min. 0°C), choque por calor (2 min. 42°C), adição de 800 μΙ caldo-L e recuperação (37°C, 1 h), as células (100 μΙ) foram espalhadas em placas de L-ágar contendo 100 pg.ml'1 de 29 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ ampicilina contendo IPTG (isopropil-p-D-galactopiranósido) 50 mM e 100 pg.ml'1 de X-Gal (5-bromo-4-cloro-3-indolil-p-D-galactopiranósido). As células foram desenvolvidas durante a noite a 37°C e foram transferidas colónias individuais para placas de L-ágar/ampicilina frescas. Após 6 h de desenvolvimento, foram usadas colónias para inocular alíquotas de 5 ml de caldo-L contendo 100 pg.ml'1 de ampicilina. Estas células foram desenvolvidas durante a noite, com agitação, a 37UC e foram usadas como uma fonte de ADN de plasmídeo.
Estas células foram usadas como uma fonte de ADN de plasmídeo.
As células colhidas foram suspensas em 360 μΙ de SET (sacarose 50 mM, EDTA 10 mM, Tris-HCl 100 mM, pH 7,5) contendo 2 mg.ml’1 de lisozima de ovo de galinha, transferidas para um tubo de microcentrifuga de 1,5 ml e diluídas por adição de 300 μΙ de Triton X-100 a 10%. Após flutuação em água a ferver durante 2 min e arrefecimento durante um minuto adicional em gelo/água, os detritos celulares desnaturados foram removidos por centrifugação (14 000 x g, 20 min) numa microcentrifuga. A maior parte das proteínas solúveis remanescentes foram removidas por adição de 300 μΙ de acetato de amónio 7,5 M e centrifugação (14 000 x g, 10 min.). Os ácidos nucleicos foram precipitados por adição de 720 μΙ de isopropanol frio (-20°C) e centrifugação (14 000 x g, 10 min.) Após lavagem as peletes com etanol e secagem, o ADN foi solubilizado em 60 μΙ de TE contendo 170 μg.mlΆRNase A.
As digestões com enzimas de restrição em alíquotas de 5 μΙ, usando as enzimas Hiná\\\ e BglII identificaram qual destes plasmídeos eram pRAS117. O esquema de construção é indicado na Fig. 8. As sequências nucleotídicas e de aminoácidos derivadas, entre os locais Hinú\\\ e fcoRI de pRAS117 são apresentadas na Fig. 9. É proporcionado um mapa do plasmídeo pRAS117 na Fig. 10. A sequência nucleotídica da porção relevante de pRAS111, entre o local Hind\\\ e fcoRI é apresentada na Figura 13.
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 30
Construção do plasmídeo pRAS118 (Figura 11) O fragmento de 130 pb /V//7c/d111-Psíi de pRAS117 foi usado para substituir o fragmento correspondente de pRAS111, para gerar o plasmídeo pRAS118. Uma alíquota (2 pg) de ADN de pRAS111 foi cortada com Hiná\\\ e Psfl nas condições usadas anteriormente, o fragmento grande foi isolado por electroforese em papel NA45, tal como descrito anteriormente e o ADN foi suspenso em 10 μΙ de TE. Uma alíquota (10 pg) de ADN de pRAS117 foi cortada com Mrcdlll e Pst\ nas condições usadas anteriormente e o fragmento pequeno foi isolado por electroforese em papel NA45, tal como descrito anteriormente e o ADN foi suspenso em 1 0 pl de TE. O fragmento grande de pRAS11 MHinà\\\Pst isolado (1,5 pl) e o fragmento pequeno de pRAS111 IHinú\\\Pst isolado (3 pl) foram misturados e ligados nas condições descritas anteriormente.
As transformações, o manuseamento das colónias e as preparações de ADN foram efectuadas de acordo com o descrito anteriormente.
Digestões com enzimas de restrição em alíquotas de 5 pl, usando as enzimas Hind\\\, Pst\ e Bg/ll, identificaram quais destes plasmídeos eram pRAS118. Este codifica um ScFv reactivo com N|P com um local de clonagem Bg!II imediatamente a jusante do comando pelB, adequado para a inserção de fragmentos de ADN da fibra de Ad5 (e também adequado para fusão de quaisquer outras funções desejadas de fusão).
Amplificação de fragmentos ADN de fibra de Ad5
Fragmentos de ADN de fibra de Ad5 foram amplificados por PCR usando o oligonucleótido TAILbBACK e o oligonucleótido FIBREPFOR, FIBRE3FOR, FIBRE6FOR, FIBRE9FOR, FIBRE12F0R, FIBRE15FOR, FIBRE18FOR, FIBRE21FOR ou FIBRE22FOR. As sequências oligonucleotídicas podem ser encontradas na Figura 12. O TAILdBACK dirige a incorporação de um local Bg!\\ na base da fibra e os iniciadores da série FIBREnFOR dirigem a incorporação de um local Asíl nas 31 85 859 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ junções das unidades repetitivas da estrutura principal 3-4 (FIBRE3FOR), 6-7 (FIBRE6FOR), 9-10 (FIBRE9F0R), 12-13 (FIBRE12F0R), 15-16 (FIBRE15F0R), 18-19 (FIBRE18F0R), 21-22 (FIBRE21 FOR), entre a unidade 22 e a saliência (FIBRE22FOR) ou no final da sequência saliente (FIBREPFOR).
Fusão de fibra e ScFv
Os segmentos amplificados da fibra são cortados com Bg!II e Pst\ e ligados entre os locais BglW e Pst\ do plasmfdeo pRAS118. Isto origina uma gama de fusões sob o controlo transcricional do promotor de T7. São recuperadas colónias após transformação de uma estirpe adequada de E. coli, tal como DH5, que não permite a expressão das fusões.
Selecção
As colónias contendo candidatos para fusão são identificadas por digestão de restrição dos seus ADN plasmídicos. Estes ADN candidatos são usados para a transformação de uma estirpe adequada de E. coli, tal como BL21 (DE3), que contém uma inserção cromossómica de polimerase de T7 sob o controlo de lac. Nestas células, a indução de expressão de polimerase de T7 usando o indutor gratuito IPTG, provoca a expressão das proteínas de fusão. O material solúvel reactivo com NIP é identificado em colónias com fusões correctamente montadas. O seu ADN é identificado e o ScFv que reage com NIP derivada de pRAS111 é substituído por um ScFv de ligação à célula.
Substituição da fibra: ScFv em plasmídeo pE4
Existe um local Hinà\\\ aproximadamente a meio do comprimento do gene da fibra. Fusões com fibras longas também contêm este local Hinú\\\. A fusão é introduzida neste local.
Recombinação in vivo do plasmídeo pE4-ScFv com o genoma de adenovírus
Para a obtenção de partículas de vírus que expressam a ScFv na fibra pentão são co-transfectadas células adequadas, tais como células 293, com o plasmídeo pE4-ScFv e o plasmídeo pFG173, tal como descrito em Mittal et a! (1993) Vírus Res. 28, 67-90, aqui incorporado por referência. Uma vez que nem 32 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ ο pFG173 nem ο pE4-ScFv são capazes, individualmente, de gerar descendência virai por transfecção de células 293 apenas é produzida descendência virai viável por recombinação in vivo entre estes dois plasmídeos resultando na recuperação da fusão da fibra pentão-ScFv no genoma de Ad5.
As células 293 são células embrionárias humanas primárias, transformadas, disponíveis em ATCC com o número de acesso ATCC CRL 1573.
As partículas de adenovírus feitas deste modo expressam na sua superfície um ScFv que liga NIP. Estas partículas são úteis numa abordagem de alvejamento em dois passos, em que uma porção de ligação específica à célula alvo, tais como as identificadas nas Tabelas 1 e 2, são unidas à molécula de NIP e dirigidas a uma célula. Uma vez tendo localizado a célula alvo no paciente, o adenovírus que apresenta ScFv que se liga NIP, é administrado ao paciente e liga-se ao NIP.
Exemplo 3: Inserção de um gene citotóxico na região E3 do adenovírus Ad5
Na preparação para a recuperação do gene citotóxico na região E3 de Ad5, as sequências citotóxicas de codificação foram, primeiro, inseridas numa cassete que contêm o promotor precoce de SV40 e sequências de adição poli A para originar o plasmídeo pTOX tal como indicado na Figura 14.
Para a obtenção do vírus com o gene citotóxico e sequências reguladoras de SV40 na região E3, são co-transfectadas células 293 com plasmídeos pTOX e pFG173 (Fig. 14). O plasmídeo pFG173 é construído a partir de pFG140, um plasmídeo infeccioso contendo o genoma de Ad5 d 1309 em forma circular por inserção de um gene Kanr no local EcoRI como 75,9 m.u. de acordo com o descrito em Graham (1984) EMBO J. 3, 2917-2922 e Mitall et af. (1993) Virus Res 28, 67-90.
Uma vez que nem o pFG173 nem o pTOX, individualmente, são capazes de gerar descendência virai infecciosa, por transfecção de células 293, apenas é produzida descendência virai viável por recombinação in vivo entre estes dois plasmídeos resultando na recuperação de E3 inserido no genoma de Ad5. 33 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ
As placas virais obtidas após co-transfecção são isoladas e expandidas em células 293 e o ADN virai foi analisado num gel de agarose após digestão com Hinà\\\. A estrutura recombinante do gene de Ad5 citotóxico desejado é verificada pela presença de fragmentos de diagnóstico. Um recombinante é purificado em placa e usado para estudos adicionais.
Legenda da Figura 14 O plasmídeo pFG173 contém a totalidade do genoma de Ad5, com a excepção de uma sequência de 3,2 kb delecionada expontaneamente entre m.u. 75,9-84,9. Foram usados plasmídeos pTOX e pFG173 para a co-transfecção de células 293 para a recuperação, por recombinação in vivo, do gene citotóxico flanqueado por sequências reguladoras SV40 na região E3 de Ad5. O recombinante do gene citotóxico Ad5 resultante foi denominado Ad5-TOX. São indicadas as posições relativas dos locais de restrição de Hind\\\ e Xba\ do genoma de Ad5-T0X. As posição e orientação do promotor de SV40, do gene citotóxico e do sinal de poli-adenilação de SV40 são apresentadas a seguir. Barras a cheio: gene de luciferase; barras a branco: promotor de SV40 e sinal de poli-adenilação de SV40; barras traçadas: genes ampr e kanr. O gene citotóxico é o ADNc para timidina-quinase.
Outros genes citotóxicos são inseridos na região E3 de Ad5, de um modo análogo.
Exemplo 4: Fv de cadeia simples do anticorpo monoclonal HMFG1 de ratinho e anticorpo monoclonal humanizado Hu HMFG1
As sequências nucleotídicas que codificam as cadeias pesadas VH e cadeias leves Vk de HMFG1 e de Hu HMFG1 são mostradas na Figura 15 e são apresentadas em Verhoeyen et aI (1993) Immunology 78, 364-370, aqui incorporadas por referência.
Legenda da Figura 15
Sequências nucleotídicas e de aminoácidos das regiões variáveis de HMFG de ratinho e reconfigurada, (a) Sequências da região variável da cadeia 34 85 GG9 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ pesada para HMFG1 de ratinho e reconfigurada (Mo Vh-HMFG1 e Hu VH_ HMFG1); (b) respectivamente regiões variáveis de cadeia leve de ratinho e reconfigurada (Mo Vk-HMFG1 e Hu Vk.HMFG1). As definição e numeração dos aminoácidos de CDR e das regiões de estrutura de enquadramento são de Kabat et a! (1987) Sequences of Proteins of Immonological Interest, Ed 4, US Dept. of Heath and Human Services, Public Health Service, NIH, Bethseda, MD 20892, EUA.
Os métodos descritos por Bird et al (1988) Science 242, 423 ou Huston et a! (1988) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85, 5879 são aplicados às sequências nucleotídicas descritas na Figura 1 5 para a geração de genes que codificam ScFv para HMFG1 e ScFv para Hu HMFG1. Estes genes são fundidos individualmente no gene da fibra pentão de adenovírus, de acordo com o descrito nos Exemplos 1 e 2.
As sequências de aminoácidos das cadeias VH e VL de H17E2 são descritas em "Monoclonal antibodies - applications in clinicai oncology". páginas 37-43, 1991, A.A. Epenetos, ed., Chapman & Hall, Reino Unido.
As sequências nucleotídicas que codificam as cadeias VH e VL são prontamente derivadas da sequência de aminoácidos usando o código genético e pode ser feito um ScFv a partir das sequências usando os métodos de Bird et ai ou Huston et a! de acordo com o descrito anteriormente. 35 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ
Chave para a Listagem de Sequências ID SEQ N° Nome Sequência Nucleotídica Sequência Polipeptídica Fusão A 1 2 Fusão B 3 4 Fusão C 5 6 Fusão D 7 8 Fusão E 9 10 Fusão F 1 1 12 Fusão G 13 14 Fusão H 15 16 Fusão I 17 18 Fusão J 19 20 Fusão K 21 22 Fusão L 23 24 Fusão M 25 26 Fusão N 27 28 Fusão 0 29 30 Fusão P 31 32 Fusão Q 33 34 Fusão R 35 36 Fusão S 37 38 Fusão T 39 40 Fusão U 41 42 Fusão V 43 44 Xho-Eco 45 - LEADHBACK 46 - LEADbFOR 47 48 pRAS117 49 50 TAILbBACK 51 52 FIBRE3FOR 53 54 FIBRE6FOR 55 56 FIBRE9FOR 57 58 FIBRE12FOR 59 60 FIBRE15F0R 61 62 FIBRE18FOR 63 64 FIBRE21 FOR 65 66 FIBRE22FOR 67 68 FIBREPFOR 69 70 pRAS111 71 72 MoVh 73 74 MoVK 75 76 HuVh 77 78 HuVK 79 80 36 85 659
EPO 672 158 / PT
LISTAGEM DE SEQUÊNCIAS (1) INFORMAÇÃO GERAL: (i) REQUERENTE: (A) NOME: Imperial Câncer Research Technology Limited (B) RUA: Sardinia House, Sardinia Street (C) CIDADE: Londres (E) PAÍS: Reino Unido
(F) CÓDIGO POSTAL (Z): WC2A 3NL (ii) TÍTULO DA INVENÇÃO: Compostos para células alvo (iii) NÚMERO DE SEQUÊNCIAS: 80 (iv) FORMATO LEGÍVEL EM COMPUTADOR: (A) TIPO DE MEIO: Disquete
(B) COMPUTADOR: Compatível com PC IBM
(C) SISTEMA OPERATIVO: PC-DOS/MS-DOS (D) SUPORTE LÓGICO: Patentln Release #1.0, Versão #1.25 (EPO) (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 1: (1) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 1: CCT CTA GTT ACC TCC AAT GTG CAG CTG CAG 30
Pro Leu Vai Thr Ser Asn Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 37 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (Bi TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 2
Pro Leu Vai Thr Ser Asn Val Gin Leu Gln 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 3: CTC TCT CTG GAC GAG GCC GTG CAG CTG CAG 30
Leu Ser Leu Asp Glu Ala Val Gln Leu Gln 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 4: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 4:
Leu Ser Leu Asp Glu Ala Val Gln Léu Gln 15 10 38 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 5: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear iii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 5: CCT CTC AAA AAA ACC AAG GTG CAG CTG CAG 30
Pro Leu Lys Lys Thr Lys Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 6: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 6:
Pro Leu Lys Lys Thr Lys Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERÍS IICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases 39 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (Β) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 7: CCC °30 ACA GTT ACC TCA GTG CAG CTG caG Pro Leu Thr Vai Thr Ser Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 8: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 8:
Pro Leu Thr Vai Thr Ser Vai Gin Leu Gin 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 9: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO 40 ψ 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 9: CCT CTA ATG GTC GCG GGC GTG CAG CTG CAG 30
Pro Leu Met Vai Ala Gly Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 10: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 10:
Pro Leu Met Vai Ala Gly Vai Gin Leu Gin 1 5 io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 11: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 41 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 11: CCG CTA ACC GTG CAC GAC GTG CAG CTG CAG 30
Pro Leu Thr Vai Hi3 Asp Vai Gin Leu Gin 15 io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 12: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 12:
Pro Leu Thr Vai Hi3 Asp Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 13: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 42 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 13: CCC CTC ACA GTG TCA GAA GTG CAG CTG CAG 30
Pro Leu Thr Vai Ser Glu Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 14: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 14:
Pro Leu Thr Vai Ser Glu Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 15: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ií) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genõmico)
(Ui) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 15: CTC ACC ACC ACC GAT AGC GTG CAG CTG CAG 30
Leu Thr Thr Thr Aso Ser Vai Gin Leu Gin 15 10 43 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 16: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO; 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 16:
Leu Thr Thr Thr Asp Ser Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 17: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 17: CCT CTA ACT ACT GCC ACT GTG CAG CTG CAG 30
Pr o Leu Thr Thr Ala Thr Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 18: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear 44 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (ϊί) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (Xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 18:
Pro Leu Thr Thr Ala Thr Vai Gin Leu Gin 1 5 io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 19: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 19: CCC ATT TAT A CA CAA AAT GTG CAG CTG CAG 30
Pro Ile Tyr Thr Gin Asn Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 20: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: amínoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 20:
Pro Ile Tyr Thr Gin Asn Vai Gin Leu Gin 15 10 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 45 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 21: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 21: CAT GTA ACA GAC GAC CTA GTG CAG CTG CAG 30
Hxs Vai Thr Asp Asp Leu Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 22: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 22:
Hia Vai Thr Asp Asp Leu Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 23: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) I IPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ 46
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SFNTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1 ..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 23: GGT GTG ACT ATT AAT AAT GTG CAG CTG CAG 30
Gly Vai Thr Ile Asn Asn Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 24: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 24:
Gly Vai Thr Ile Asn Asn Vai Gin Leu Gin 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 25: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS
47 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (Β) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 25: GGT TTT GAT TCA CAA GGC GTG CAG CTG CAG 30
Gly Phe Asp Ser Gin Gly Vai Gin Leu Gin 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 26: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 26:
Gly Phe Asp Ser Gin Gly Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 27: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 27: AGG ATT GAT TCT CAA AAC GTG CAG CTG CAG 30
Arg He Asp ser Gin Asn Vai Gin Leu Gin 1 S 10 48 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 28: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 28:
Arg Ile Asp Ser Gin Asn Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 29: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 29: TTT GAT GCT CAA AAC CAA GTG CAG CTG CAG 30
Phe Asp Ala Gin Asn Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 30: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 49 (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 30:
Phe Aso Ala Gin Asn Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 31: <i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(íii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 31: CTT TTT ATA AAC TCA GCC GTG CAG CTG CAG 30
Leu Phe Ile Asn Ser Ala Vai Gin Leu Gin 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 32: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 32:
Leu Phe Ile Asn Ser Ala Vai Gin Leu Gin 15 IO 50 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 33: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 33: TCA AAC AAT TCC AAA AAC GTG CAG CTG CAG 30
Ser Asn Asn Ser Lys Asn Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 34: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 34:
Ser Asn Asn Ser Lys Asn Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 35: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 51 (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 35: GGG TTG ATG ΤΤΓ GAC GCT GTG CAG CTG CAG 30
Gly Leu Met Phe Asp Ala Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 36: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 36:
Gly Leu Met Phe Aso Ala Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 37: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NAO 52 8b 659
EP 0 672 158 / PT (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 37: CCT AAT GCA CCA AAC ACA GTG CAG CTG CAG 30
Pro Asn Ala Pro Asn Thr Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 38: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 38:
Pro Asn Ala Pro Asn Thr Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 39: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS 53 bb 6&9
EP 0 672 1 58 / PT (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 39: CTA GAA TTT GAT TCA AAC GTG CAG CTG CAG 30
Leu Glu Phe Asp Ser Asn Vai Gin Leu Gin 15 io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 40: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 40:
Leu Glu Phe Asp Ser Asp Vai Gin Leu Gin 1 5 io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 41: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 41: CTT AGT TTT GAC AGC ACA GTG CAG CTG CAG 30
Leu Ser Phe Asp Ser Thr Vai Gin Leu Gin 1 s 10 54 85 658 EP 0 672 1 58 / PT (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 42: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 42:
Leu ser Fhe Asp Ser Thr Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 43: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..30 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 43: ATT GAT AAG CTA ACT TTG GTG CAG CTG CAG 30
Ile Asp Lys Leu Thr Leu Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 44: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 44:
Ile Asp Lys Leu Thr 1 5
Leu Vai Gin Leu Gin 10
8b 659
EP 0 672 158 / PT 55 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 45: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 18 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
<iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Adenovírus (B) ESTIRPE: Ad5 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 45: CTCGAGTAAT AAGAATTC 18 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 46: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 22 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 46: AGCTAAGCTT GCATGCAAAT TC 22 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 47: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 31 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO
56 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOME/CHAVE: CDS (Β) I OCALIZAÇÃO: 1..27 {xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 47: CCA GCG ATG GCC AGA TCT CAG CTG CAG AGCT 31
Pro Ala Met Ala Arg Ser Gin Leu Gin 1 5 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 48: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 9 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 48
Pro Ala Met Ala Arg Ser Gin Leu Gin 1 5 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 49: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 132 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 40..132 57 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ Μ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 49: AAGCTTGCAT GCAAATTCTA TTTCAAGGAG ACAGTCATA ATG AAA TAC CTA TTG 54
Met Lys Tyr Leu Leu 1 5 CCT ACG GCA GCC GCT GGA TTG TTA TTA CTC GCT GCC CAA CCA GCG ATG Pro 102 Thr Ala Ala Ala 10 Gly Leu Leu Leu Leu 15 Ala Ala Gin Pro Ala Met 20 GCC AGA TCT CAG CTG CAG GTC GAC GGA TCC 132 Ala Arg Ser Gin 25 Leu Gin Vai Asp Gly 30 Ser (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 50: (i) CARACTERÍST1CAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 31 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 50:
Met 1 Lys Tyr Leu Leu 5 Pro Thr Ala Ala Ala Gly 10 Leu Leu Leu Leu Ala 15 Ala Gin Pro Ala 20 Met Ala Arg Ser Gin 25 Leu Gin Vai Asp Gly 30 Ser (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 51: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 28 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANT1-SENTIDO: NAO 58 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOME/CHAVE: CDS (R) LOCALIZAÇÃO: 5..28 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 51: AGCT AGA TCT ATG AAG CGC GCA AGA CCG 28
Arg Ser Met Lys Arg Ala Arg Pro 1 5 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 52: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 8 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 52:
Arg Ser Met Lys Arg Ala Arg Pro 1 5 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 53: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 41 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..33 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 53: CCT CTC AAA AAA ACC AAG CAG GTG CAG CTG CAG CAGCCTGG 41
Pro Leu Lys Lys Thr Lys Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 59 8b 659 EPO 672 158 / PT (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 54: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 11 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 54:
Pro Leu Lys Lys The Lys Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 55: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 42 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 2..34 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 55: C CCG CTA ACC GTG CAC GAC CAG GTG CAG CTG CAG CAGCCTGG 42
Pro Leu Thr Vai Hia Asp Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 56: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 11 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína 60 85 659
EPO 672 158 / PT (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 56:
Pro Leu Thr Vai Hia Asp Gin vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 57: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 41 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOME/CHAVE: CDS ÍB) LOCALIZAÇÃO: 1..33 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 57: CCT CTA ACT ACT GCC ACT CAG GTG CAG CTG CAG CAGCCTGG 41
Pro Leu Thr Thr Ala Thr Gin Vai Gin Leu Gin 15 io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 58: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 11 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 58:
Pro Leu Thr Thr Ala Thr Gin Vai Gin Leu Gin 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 59: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 41 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 61 (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..33 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 59: GGT GTG ACT ATT AAT AAT GAG GTG GAG CTG CAG GACGGTGG 41
Gly Vai Thr Ile Asn Asn Gin Vai Gin leu Gin 15 io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 60: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 11 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 60:
Gly Vai Thr Ile Asn Asn Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 61: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 41 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..36 62 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ (χϊ) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 61: CCG TTT GAT GCT CAA AAC CAA CAG GTG CAG CTG CAG CAGCC 41
Pro Phe Asp Ala Gin Asn Gin Gin Vai Gin Leu Gin 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 62: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 12 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 62:
Pro Phe Asp Ala Gin Asn Gin Gin Vai Gin Leu Gin 1 S io (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 63: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 38 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..33 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 63: GGG TTG ATG TTT GAC GCT CAG GTG CAG CTG CAG CAGCC 38
Gly Leu Met Phe Asp Ala Gin Vai Gin Leu Gin 1 5 10 63 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 64: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 11 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 64:
Gly Leu Met Phe Asp Ala Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 65: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 40 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 3..35 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 65: GC CTT AGT TTT GAC AGC ACA CAG GTG CAG CTG CAG CAGCC 40
Leu Ser Phe A3p Ser Thr Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 66: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 11 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 64
(xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ !D NO: 66:
Leu Ser Phe Asp Ser Thr Gin Vai Gin Leu Gin 1 5 10 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 67: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 50 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN {genómicol
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..45 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 67: GGA AAC AAA AAT AAT GAT AAG CTA ACT TTG CAG GTG CAG CTG CAG 45
Gly Asn Lys Asn Asn Asp Lys Leu Thr Leu Gin Vai Gin Leu Gin 15 10 IS
CAGCC 50 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 68: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 15 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 68:
Gly Asn Lys Asn Asn Asp Lys Leu Thr Leu Gin Vai Gin Leu Gin
1 s 10 IS 65 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 69: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 43 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: single (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 3..17 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 69: CA TAC ATT GCC CAA GAA TAACAGGTGC AGCTGCAGCA GCCTGG 43
Tyr Ile Ala Gin Glu 1 5 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 70: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 5 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 70:
Tyr Ile Ala Gin Glu 1 5 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 71: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 858 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO 66 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (ix) CARACTERÍSTICA: (A) NOME/CHAVE: CDS (Β) LOCALIZAÇÃO: 40..846 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 71:
AAGCTTGCAT GCAAATTCTA TTTCAAGGAG ACAGTCATA ATG AAA TAC CTA TTG 54
Het Lys Tyr Leu Leu 1 5 CCT ACG GCA GCC GCT GGA TTG TTA TTA CTC GCT GCC CAA CCA GCG ATG 102
Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gin Pro Ala Met 10 15 20 GCC CAG GTG CAG CTG CAG CAG CCT GGG GCT GAG CTT GTG AAG CCT GGG 150
Ala Gin Vai Gin Leu Gin Gin Pro Gly Ala Glu Leu Vai Lys Pro Gly 25 30 35 GCT TCA GTG AAG CTG TCC TGC AAG GCT TCT GCC TAC ACC TTC ACC AGÇ 198
Ala Ser Vai Lys Leu Ser Cvs Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser 40 45 50 TAC TGG ATG CAC TGG GTG AAG CAG AGG CCT GGA CGA GGC CTT GAG TGG 246
Tyr Trp Met His Trp Vai Lys Gin Arg Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp 55 60 65 ATT GGA AGG ATT GAT CCT AAT AGT GGT GGT ACT AAG TAC AAT GAG AAG 294
Ile Gly Arg Ile Asp Pro Asn Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys 70 75 80 85 TTC AAG AGC AAG GCC ACA CTG ACT GTA GAC AAA CCC TCC AGC ACA GCC 342
Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys Pro Ser Ser Thr Ala 90 95 100 TAC ATG CAG CTC AGC AGC CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCG GTC TAT TAT 390
Tyr Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr 105 110 115 TGT GCA AGA TAC GAT TAC TAC GGT AGT AGC TAC TTT GAC TAC TGG GGC 438
Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 120 125 130 CAA GGG ACC ACG GTC ACC GTC TCC TCA GGT GGA GGC GGT TCA GGC GGA 486
Gin Gly Thr Thr Vai Thr Vai Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly 135 140 145 GGT GGC TCT GGC GGT GGC GGA TCC CAG GCT GTT GTG ACT CAG GAA TCT 534
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gin Ala Vai Vai Thr Gin Glu Ser 150 155 160 165 GCA CTC ACC ACA TCA CCT GGT GAA ACA GTC ACA CTC ACT TGT CGC TCA 582
Ala Leu Thr Thr Ser Pro Gly Glu Thr Vai Thr Leu Thr Cys Arg Ser
85 689 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 67 170 175 180 AGT ACT GGG GCT GTT ACA ACT AGT AAC TAT GCC AAC TGG GTC CAA GAA 630 Ser Thr Gly Ala Vai Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn Trp Vai Gin Glu 133 190 19 S AAA CCA GAT CAT TTA TTC ACT GGT CTA ATA GGT GGT ACC AAC AAC CGA 678 Lys Pro Aso His Leu Phe Thr Gly Leu Ile Gly Gly Thr Asn Asn Arg 200 205 210 GCT CCA GGT GTT CCT GCC AGA TTC TCA GGC TCC CTG ATT GGA GAC AAG 726 Ala Pro Gly Vai Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Leu Ile Gly Asp Lys 215 220 225 GCT GCC CTC ACC ATC ACA GGG GCA CAG ACT GAG GAT GAG GCA ATA TAT 774 Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gin Thr Glu Asp Glu Ala Ile Tyr 230 235 240 245 TTC TGT GCT CTA TGG TAC AGC AAC CAC TGG GTG TTC GGT GGA GGA ACC 822 Phe Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn His Trp Vai Phe Gly Gly Gly Thr 250 255 260 AAA CTG ACT GTC CTA GGT CTC GAG TAATAAGAAT TC 358 Lys Leu Thr Vai Leu Gly Leu Glu 265 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 72: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 269 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 72:
Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala
1 5 10 IS
Ala Gin Pro Ala Met Ala Gin Vai Gin Leu Gin Gin Pro Gly Ala Glu 20 25 30
Leu Vai Ly3 Pro Gly Ala Ser Vai Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly 35 40 45
Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Met His Trp Vai Lys Gin Arg Pro Gly 50 55 só
Arg Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Xle Asp Pro Asn Ser Gly Gly Thr 65 70 75 80
Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Vai Asp Lys 85 90 95
Pro Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp 100 105 110
Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys Ala Arg Tyr Asp Tyr Tyr Gly Ser Ser Tyr
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 68 115 120 125
Phe Asp 130 Tyr Trp Gly Gin Gly 135 Thr Thr Vai Thr Vai 140 Ser Ser Gly Gly Gly 145 Gly Ser Gly Gly Gly 150 Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 155 Gin Ala Vai 160 Vai Thr Gin Glu Ser 165 Ala Leu Thr Thr Ser 170 Pro Gly Glu Thr Vai 175 Thr Leu Thr Cys Arg 180 Ser Ser Thr Gly Ala 185 Vai Thr Thr Ser Asn 190 Tyr Ala Asn Trp Vai 195 Gin Glu Lys Pro Asp 200 His Leu Phe Thr Gly 205 Leu Ile Gly Gly Thr 210 Asn Asn Arg Ala Pro 215 Gly Vai Pro Ala Arg 220 Phe Ser Gly Ser Leu 225 Ile Gly Asp Lys Ala 230 Ala Leu Thr Ile Thr 235 Gly Ala Gin Thr Glu 240 Asp Glu Ala Ile Tyr 245 Phe Cys Ala Leu Trp 250 Tyr Ser Asn His Trp 255 Vai Phe Gly Gly Gly 250 Thr Lys Leu Thr Vai 265 Leu Gly Leu Glu (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 73: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 354 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
<iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Mouse (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..354 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 73: CAG GTT CAG CTG CAG CAG TCT GGA GCT GAG CTG ATG AAG CCT GGG GCC 48
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 15 10 15 TCA GTG AAG ATA TCC TGC AAG GCT ACT GGC TAC ACA TTC AGT GCC TAC 96
Ser Vai Lys He Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 TGG ATA GAG TGG GTA AAG CAG AGG CCT GGA CAT GGC CTT GAG TGG ATT 144
Trp Ile Glu Trp Vai Lys Gin Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
69 85 659 ΕΡ Ο 672 1 58 / ΡΤ 35 40 45 GGA GAG ATT TTA CCT GGA AGT AAT AAT TCT AGA TAC AAT GAG AAG TTC 192 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asn Asn Ser Arg Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 AAG GGC AAG GCC ACA TTC ACT GCT GAT ACA TCC TCC AAC ACA GCC TAC 240 Lya Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ATG CAA CTC AGC AGC CTG ACA TCT GAG GAC TCT GCC GTC TAT TAC TGT 288 Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95 TCA AGG TCC TAC GAC TTT GCC TGG TTT GCT TAC TGG GGC CAA GGG ACT 336 Ser Arg ser Tyr Asp Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 CCG GTC ACT GTC TCT GCA 354 Pro Vai Thr Vai Ser Ala 115 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 74: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 118 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 74:
Gin Vai Gin Leu Gin Gin Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Vai Ly3 Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30
Trp Ile Glu Trp Vai Lys Gin Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45
Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asn Asn Ser Arg Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Gin Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ser Arg Ser Tyr Asp Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110
Pro Vai Thr Vai Ser Ala 115 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 75: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 70 (A) COMPRIMENTO: 342 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear <ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (vi) FONTE ORIGINAL: (A) ORGANISMO: Mouse (ix) CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..342 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 75: GAC ATT CTG ATG TCA CAG TCT CCA TCC TCC CTA GCT GTG TCA GTT GGA 48
Aso Xle Vai Met Ser Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ala Vai Ser Vai Gly i 5 10 15 GAG AAG GTT ACT ATG AGC TGC AAG TCC AGT CAG AGC CTT TTA TAT AGT 96
Glu Lys Vai Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30 AGC AAT CAA AAG ATC TAC TTG GCC TGG TAC CAG CAG AAA CCA GGG CAG 144
Ser Asn Gin Lys Xle Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin 35 40 45 TCT CCT AAA CTG CTG ATT TAC TGG GCA TCC ACT AGG GAA TCT GGG GTC 192
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tvr Tro Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 50 55 * 60 CCT GAT CGC TTC ACA GGC GGT GGA TCT GGG ACA GAT TTC ACT CTC ACC 240
Pro Aso Arg Phe Thr Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 65 70 75 80 ATC AGC AGT GTG AAG GCT GAA GAC CTG GCA GTT TAT TAC TGT CAG CAA 288
Ile Ser Ser Vai Ly3 Ala Glu Asp Leu Ala Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin 85 90 95 TAT TAT AGA TAT CCT CGG ACG TTC GGT GGA GGC ACC AAG CTG GAA ATC 336
Tyr xyr Arg Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Xle 100 105 110 AAA CGG 342 Lys Arg (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID N0: 76: (i) CARACTERÍS TICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 114 aminoácidos
71 85 659
ΕΡ Ο 672 158 /PT (Β) TIPO: aminoácido !D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína <xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 76:
Asp 1 Xle Vai Met Ser 5 Gin Ser Pro Ser Ser 10 I^u Ala Vai Ser Vai Gly 15 Glu Lys Vai Thr 20 Met Ser Cys Lys Ser 25 Ser Gin Ser Leu Leu 30 Tyr Ser Ser Asn Gin 35 Lys Xle Tyr Leu Ala Trp 40 Tyr Gin Gin Lys 45 Pro Gly Gin Ser Pro 50 Lys Leu Leu Xle Tyr 55 Trp Ala Ser Thr Arg Glu 60 Ser Gly Vai Pro 65 Asp Arg Phe Thr Gly Gly Gly Ser 70 Gly Thr 75 Asp Phe Thr Leu Thr 30 Xle Ser Ser Vai Lys 35 Ala Glu Asp Leu Ala 90 Vai Tyr Tyr Cys Gin Gin 95 Tyr Tyr Arg Tyr Pro 100 Arg Thr Phe Gly Gly Gly 105 Thr Lys Leu 110 Glu Ile Lys Arg (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 77: <i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 354 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO
(iii) ANTI-SENTIDO: NÃO (ix) CARACTERÍSTICA: (Aí NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..354 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 77: CAG GTG CAG CTG GTG CAG TCT GGG GCA GAG GTG AAA AAG CCT GGG GCC 48
Gin Vai Gin Leu Vai Gin Ser Gly Ala Glu Vai Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15 TCA GTG AAG GTG TCC TGC AAG GCT TCT GGC TAC ACC TTC AGT GCC TAC 96
Ser Vai Lys Vai Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30 TGG ATA GAG TGG GTG CGC CAG GCT CCA GGA AAG GCC CTC GAG TGG GTC 144
Trp Xle Glu Trp Vai Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai
85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 72
35 40 45 CGA GAC ATT TTA CCT GGA AGT AAT AAT TCT AGA TAC AAT GAG AAG TTC 192 Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asn Asn Ser Arg Tyr Asn Glu Lys Phe SO 55 60 AAG GGC CGA GTG ACA GTC ACT AGA GAC ACA TCC ACA AAC ACA GCC TAC 240 Lys Gly Arg Vai Thr Vai Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Ala Tyr €5 70 75 80 ATG GAG crc AGC AGC CTG AGG TCT GAG GAC ACA GCC GTC TAT TAC TGT 288 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys 85 90 95 GCA AGA TCC TAC GAC TTT GCC TGG TTT GCT TAC TGG GGC CAA GGG ACT 336 Ala Arg Ser Tyr Asp Phe Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110 CTG GTC ACA GTC TCC TCA 3S4 Leu Vai Thr Vai Ser Ser 115 (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 78: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 118 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 78:
Gin 1 Vai Gin Leu Val 5 Gin Ser Gly Ala Glu 10 Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 Ser val Lys Val 20 Ser Cys Lys Ala Ser 25 Gly Tyr Thr Phe Ser 30 Ala Tyr Trp Ile Glu 35 Trp Val Arg Gin Ala 40 Pro Gly Lys Gly Leu 45 Glu Trp val Gly Glu 50 Ile Leu Pro Gly Ser S5 Asn Asn Ser Arg Tyr Asn 60 Glu Lys Phe Lys 65 Gly Arg Val Thr Val 70 Thr Arg Asp Thr Ser 75 Thr Asn Thr Ala Tyr 80 Met Glu Leu Ser Ser 85 Leu Arg Ser Glu Asp 90 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 Ala Arg Ser Tyr 100 Asp Phe Ala Trp Phe 105 Ala Tyr Trp Gly Gin 110 Gly Thr Leu Val Thr 115 Val Ser Ser
(2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 79: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: 85 659ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ73 (A) COMPRIMENTO: 342 pares de bases (B) TIPO: ácido nucleico (C) TIPO DE CADEIA: dupla (D) TOPOLOGIA: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADN (genómico)
(iii) HIPOTÉTICA: NÃO (iii) ANTI-SENTIDO: NÃO {ix> CARACTERÍSTICA:
(A) NOME/CHAVE: CDS (B) LOCALIZAÇÃO: 1..342 (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 79: GAC ATC 48 CAG ATG ACC CAG AGC CCA AGC AGC CTG AGC GCC AGC GTG GGT Asp 1 Ile Gin Met Thr 5 Gin Ser Pro Ser Ser 10 Leu Ser Ala Ser Vai Gly 15 GAC AGA 96 GTG ACC ATC ACC TGT AAG TCC AGT CAG AGC CTT TTA TAT AGT Asp Arg Vai Thr 20 Ile Thr Cys Lys Ser 25 Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Ser 30 AGC AAT 144 CAA AAG ATC TAC GCC TGG TAC CAG CAG AAG CCA GGT AAG Ser Asn Gin 35 Lys Ile Tyr Leu Ala 40 Tr? Tyr Gin Gin Lye Pro Gly Lys 45 GCT CCA 192 AAG CTG CTG ATC TAC TGG GCA TCC ACT AGG GAA TCT GGT GTG Ala Pro 50 Lys Leu Leu Ile Tyr 5 5 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 60 CCA AGC 240 AGA TTC AGC GGT AGC GGT AGC GGT ACC GAC TTC ACC TTC ACC Pro 65 Ser Arg Phe Ser Gly 70 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr 75 80 ATC AGC 288 AGC CTC CAG CCA GAG GAC ATC GCC ACC TAC TAC TGC CAG CAA Xle Ser Ser Leu Gin 35 Pro Glu Asp Ile Ala 90 Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 95 TAT TAT 336 AGA TAT CCT CGG ACG TTC GGC CAA GGG ACC AAG GTG GAA ATC Tyr Tyr Arg Tyr 100 Pro Arg Thr Phe Gly Gin 105 Gly Thr Ly3 Vai Glu Ile 110 AAA CGT 342 Lys Arg (2) INFORMAÇÃO PARA SEQ ID NO: 80: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 114 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido
ID) TOPOLOGIA: linear 74 » 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DFSCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 80:
Asp Ila Gin 1 Asp Arg Vai Ser Asn Gin 35 Ala Pro Lys 50 Pro Ser Arg 65 Ile Ser Ser Tyr Tyr Arg Lys Arg
Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly 5 10 15
Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Ser 20 2S 30
Lys Ile Tyr Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 40 45
Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Vai 55 60
Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr 70 75 S0
Leu Gin Pro Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin 85 90 95
Tyr Pro Arg Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Vai Glu Ile 100 105 110
Lisboa, 20Q{
Por TRANSGENE S.A.
Eng." ANTÓNIO JOÃO DA CUNHA FERREIRA
Ag. Of. Pr. Ind.
Rua das Flores, 74-4.° 1200-195 LISBOA

Claims (25)

  1. 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 1/4 REIVINDICAÇÕES 1 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus ou um seu derivado defeituoso na replicação compreendendo uma especificidade de ligação modificada conferida por uma porção de ligação que permite que o adenovírus ou a partícula semelhante a adenovírus se ligue a uma célula alvo, em que a porção de ligação é um péptido e está fundida com a fibra pentão do adenovírus ou da partícula semelhante a adenovírus.
  2. 2 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 1 em que a porção de ligação é um anticorpo monoclonal, um ScFv, um dAb ou uma unidade de reconhecimento mínima de um anticorpo.
  3. 3 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 1 em que a porção de ligação é pelo menos parte de um ligando de um receptor específico da superfície celular de uma célula alvo.
  4. 4 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 2 ou 3 em que a porção de ligação reconhece um antigénio específico da superfície da célula alvo.
  5. 5 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 3 em que o receptor específico da superfície celular da célula alvo é qualquer um de, um receptor de GnRH, um receptor de MSH e um receptor de somatostatina.
  6. 6 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5 contendo um gene adequado para terapia génica.
  7. 7 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 6 em que o gene codifica uma molécula com uma função directa ou indirectamente citotóxica.
  8. 8 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 7 em que o gene codifica qualquer um de interleucina 2, factor de necrose tumoral, gama-interferão, ribonuclease e desoxirribonuclease. 85 659 ΕΡ Ο 672 158 /ΡΤ 2/4
  9. 9 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 7 em que o gene codifica uma enzima capaz de converter uma prodroga relativamente não tóxica numa droga citotóxica.
  10. 10 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 9 em que o gene é citosina-desaminase ou timidina-cínase.
  11. 11 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 6 em que o gene supera um defeito num gene na célula alvo.
  12. 12 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 11 em que o gene é qualquer um de CFTR, distrofina e hemoglobina A.
  13. 13 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9 contendo adicionalmente ácido nucleico em que o referido adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus está adaptado para entrega do referido ácido nucleico à célula alvo.
  14. 14 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 1 em que a porção de ligação está fundida com a proteína de fibra pentão numa ou mais das junções das unidades repetitivas da estrutura principal.
  15. 15 - Adenovírus de acordo com a reivindicação 14 em que a porção de ligação é um ScFv. 6 - Adenovírus de acordo com a reivindicação 1 5 em que o ScFv se liga a um antigénio de célula tumoral.
  16. 17 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16 em que a porção de ligação é um polipéptido.
  17. 18 - Adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 para uso em medicina. 85 659 ΕΡ Ο 672 158 / ΡΤ 3/4 9 - Sequência nucleotídica que codifica a fusão da porção de ligação e da fibra pentão, estando a referida fusão presente no adenovírus ou na partícula semelhante a adenovírus tal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 17.
  18. 20 - Sequência nucleotídica definida na reivindicação 19 compreendendo adicionalmente o remanescente do genoma do adenovírus ou da partícula semelhante a adenovírus.
  19. 21 - Sequência nucleotídica que codifica um vírus ou partícula semelhante a vírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17.
  20. 22 - Sistema de componentes para uso num método terapêutico compreendendo um adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 14 ou 15 e uma prodroga.
  21. 23 - Método para a produção de um adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 em cultura celular, compreendendo o método (1) a modificação genética do adenovírus ou de partículas semelhantes a adenovírus para produzirem uma porção de ligação, (2) infecção de células com o adenovírus ou com a partícula semelhante a adenovírus geneticamente modificados, (3) cultura das células até o adenovírus ou a partícula semelhante a adenovírus atingir um título suficientemente elevado e (4) recolha e purificação substancial do adenovírus ou a partícula de adenovírus geneticamente modificado.
  22. 24 - Composição farmacêutica compreendendo um adenovírus ou uma partícula semelhante a adenovírus de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 17 e um transportador farmacêutico.
  23. 25 - Utilização de um adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 7 no fabrico de um medicamento para a destruição de células alvo num mamífero.
  24. 26 - Utilização de um adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 9 ou 10 no fabrico de um medicamento para a 8b 6b9 EP 0 672 1 58 / PT 4/4 destruição de células alvo num mamífero em que ao referido mamífero será administrada a referida prodroga.
  25. 27 - Utilização de um adenovírus ou partícula semelhante a adenovírus de acordo com a reivindicação 11 ou 12 no fabrico dum medicamento para o tratamento de um mamífero com um gene defeituoso. Lisboa, 1/· ΛΒί?. 2001 Por TRANSGENE S.A. - O AGENTE OFICIAL -
    Eng." ANTÓNIO JOÃO DA CUNHA FERREIRA Ag. Of. Pr. Ind. Rua das Flores, 74-4.° 1200-195 LISBOA
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Families Citing this family (233)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6410010B1 (en) 1992-10-13 2002-06-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant P53 adenovirus compositions
WO1992015680A1 (en) * 1991-03-06 1992-09-17 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions for the selective inhibition of gene expression
US5747469A (en) 1991-03-06 1998-05-05 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and compositions comprising DNA damaging agents and p53
DE4311651A1 (de) * 1993-04-08 1994-10-13 Boehringer Ingelheim Int Virus für den Transport von Fremd-DNA in höhere eukaryotische Zellen
FR2704234B1 (fr) * 1993-04-22 1995-07-21 Centre Nat Rech Scient Virus recombinants, preparation et utilisation en therapie genique.
US5543328A (en) * 1993-08-13 1996-08-06 Genetic Therapy, Inc. Adenoviruses having modified fiber proteins
US6312699B1 (en) * 1994-03-28 2001-11-06 Uab Research Foundation Ligands added to adenovirus fiber
US7252989B1 (en) 1994-04-04 2007-08-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Adenovirus supervector system
GB9410922D0 (en) * 1994-06-01 1994-07-20 Townsend Alain R M Vaccines
US5846782A (en) 1995-11-28 1998-12-08 Genvec, Inc. Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs
US5965541A (en) * 1995-11-28 1999-10-12 Genvec, Inc. Vectors and methods for gene transfer to cells
US6465253B1 (en) 1994-09-08 2002-10-15 Genvec, Inc. Vectors and methods for gene transfer to cells
US5559099A (en) * 1994-09-08 1996-09-24 Genvec, Inc. Penton base protein and methods of using same
US5962311A (en) * 1994-09-08 1999-10-05 Genvec, Inc. Short-shafted adenoviral fiber and its use
AU780164B2 (en) * 1994-09-13 2005-03-03 Transgene S.A. Novel implant and novel vector for the treatment of acquired diseases
FR2724320B1 (fr) 1994-09-13 1996-12-20 Transgene Sa Nouvel implant pour le traitement des maladies acquises
US5518042A (en) * 1994-09-16 1996-05-21 Huyck Licensco, Inc. Papermaker's forming fabric with additional cross machine direction locator and fiber supporting yarns
US6127525A (en) * 1995-02-21 2000-10-03 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same
US5770442A (en) * 1995-02-21 1998-06-23 Cornell Research Foundation, Inc. Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same
US6379669B1 (en) * 1995-08-04 2002-04-30 Akhouri A. Sinha Targeting of organs by immunoconjugates
EA003195B1 (ru) * 1995-11-13 2003-02-27 Такара Сузо Ко., Лтд. Способ повышения эффективности генного переноса в клетки-мишени с помощью ретровируса
IL124654A0 (en) * 1995-11-28 1998-12-06 Genvec Inc Vectors and method for gene transfer to cells
JP2001520511A (ja) * 1995-12-08 2001-10-30 ザ ユーナヴァーサティ オブ アラバマ アト バーミングハム リサーチ ファンデーション 向標的性アデノウイルス・ベクター
US20020193580A1 (en) * 1995-12-15 2002-12-19 Mitchell Lloyd G. Methods and compositions for use in spliceosome mediated RNA trans-splicing
US20060088938A1 (en) * 1995-12-15 2006-04-27 Mitchell Lloyd G Methods and compositions for use in spliceosome mediated RNA trans-splicing in plants
US20030027250A1 (en) * 1995-12-15 2003-02-06 Mitchell Lloyd G. Methods and compositions for use in spliceosome mediated RNA trans-splicing
WO1997023608A1 (en) * 1995-12-22 1997-07-03 Chiron Corporation Compositions and methods for targeting gene delivery vehicles using covalently bound targeting elements
CA2251738A1 (en) * 1996-04-16 1997-10-23 Immusol Incorporated Targeted viral vectors
US5958892A (en) 1996-07-30 1999-09-28 Board Of Regents, The University Of Texas System 2-methoxyestradiol-induced apoptosis in cancer cells
AU742018B2 (en) * 1996-08-21 2001-12-13 Genvec, Inc. Alternatively targeted adenovirus
JP2001515493A (ja) * 1997-03-14 2001-09-18 セレクティブ ジェネティックス，インコーポレイテッド 改変された親和性を有するアデノウイルスベクター
EP0973538B1 (en) 1997-04-10 2008-03-12 University of Southern California Modified proteins which bind extracellular matrix components
WO1998049195A1 (en) * 1997-04-29 1998-11-05 Universiteit Utrecht Corona virus-like particles as tools for vaccination and therapy
GB9709421D0 (en) 1997-05-10 1997-07-02 Zeneca Ltd Chemical compounds
US6004798A (en) * 1997-05-14 1999-12-21 University Of Southern California Retroviral envelopes having modified hypervariable polyproline regions
EP0988390A1 (en) * 1997-05-28 2000-03-29 Genvec, Inc. Alternatively targeted adenovirus
WO1999006583A1 (en) * 1997-07-31 1999-02-11 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Targeted hsv vectors
US6706693B1 (en) 1997-08-13 2004-03-16 The Uab Research Foundation Vaccination by topical application of genetic vectors
US6716823B1 (en) 1997-08-13 2004-04-06 The Uab Research Foundation Noninvasive genetic immunization, expression products therefrom, and uses thereof
US6348450B1 (en) 1997-08-13 2002-02-19 The Uab Research Foundation Noninvasive genetic immunization, expression products therefrom and uses thereof
US20030045492A1 (en) * 1997-08-13 2003-03-06 Tang De-Chu C. Vaccination by topical application of recombinant vectors
US20030125278A1 (en) * 1997-08-13 2003-07-03 Tang De-Chu C. Immunization of animals by topical applications of a salmonella-based vector
JP2002507544A (ja) * 1997-11-14 2002-03-12 ユーロ−セルティーク，エス．エイ． 抗イディオタイプ応答を引き出す能力が増強された改変型の抗体
WO1999039734A1 (en) * 1998-02-06 1999-08-12 The Uab Research Foundation Adenovirus vector containing a heterologous peptide epitope in the hi loop of the fiber knob
KR20010074429A (ko) 1998-02-17 2001-08-04 피터 브이. 오`네일 섬유 교체 단백질을 함유하는 변형된 아데노바이러스
US20050095231A1 (en) * 1998-02-17 2005-05-05 Curiel David T. Modified adenovirus containing a fiber replacement protein
US6815200B1 (en) 1998-02-17 2004-11-09 The Uab Research Foundation Modified adenovirus containing a fiber replacement protein
AU3358999A (en) * 1998-03-20 1999-10-11 Genzyme Corporation Chimeric adenoviral vectors for targeted gene delivery
US7078483B2 (en) 1998-04-29 2006-07-18 University Of Southern California Retroviral vectors including modified envelope escort proteins
WO1999055365A1 (en) 1998-04-30 1999-11-04 Cornell Research Foundation, Inc. Adenoviral vectors with tandem fiber proteins
US20030017138A1 (en) 1998-07-08 2003-01-23 Menzo Havenga Chimeric adenoviruses
EP1112372A1 (en) 1998-09-11 2001-07-04 Genvec, Inc. Alternatively targeted adenovirus
US6524571B1 (en) * 1998-10-16 2003-02-25 Anticancer, Inc. Methioninase gene therapy for tumor treatment
US6303362B1 (en) 1998-11-19 2001-10-16 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Adenoviral vector and methods for making and using the same
US6929946B1 (en) 1998-11-20 2005-08-16 Crucell Holland B.V. Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells
US6380364B1 (en) 1998-11-23 2002-04-30 Loyola University Of Chicago Chimeric biotin-binding papillomavirus protein
JP2000279178A (ja) * 1999-02-24 2000-10-10 Japan Found Cancer Res ウイルスベクター
US20040009936A1 (en) * 1999-05-03 2004-01-15 Tang De-Chu C. Vaccine and drug delivery by topical application of vectors and vector extracts
US6492169B1 (en) 1999-05-18 2002-12-10 Crucell Holland, B.V. Complementing cell lines
US6913922B1 (en) 1999-05-18 2005-07-05 Crucell Holland B.V. Serotype of adenovirus and uses thereof
US7476517B2 (en) 1999-06-30 2009-01-13 Evotec Ag Virus like particles, their preparation and their use preferably in pharmaceutical screening and functional genomics
EP1187928B1 (en) * 1999-06-30 2007-05-23 Evotec AG Virus like particles, preparation and use in screening and functional genomics
US20040014033A1 (en) * 1999-06-30 2004-01-22 Evotec Biosystems Ag, A Corporation Of Germany Virus like particles, their preparation and their use preferably in pharmaceutical screening and functional genomics
US6461869B1 (en) * 1999-07-20 2002-10-08 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Purging leukemia cells from hematopoietic stem cells
JP2004500039A (ja) * 1999-09-16 2004-01-08 ソルベイ・フアーマシユーチカルズ・ベー・ブイ ヒトｇ−タンパク質共役型受容体
DE60017924T2 (de) * 1999-09-17 2006-03-30 Tgt Laboratories, S.A. De C.V. Rekombinante, adenovirale vektoren und ihre verwendung zur behandlung von leberzirrhose
US6635476B1 (en) 1999-10-15 2003-10-21 Canji, Inc. Targeted vectors
GB0008966D0 (en) 2000-04-13 2000-05-31 Imp College Innovations Ltd Vectors for gene therapy
CA2341356C (en) * 2000-04-14 2011-10-11 Transgene S.A. Poxvirus with targeted infection specificity
US7348014B2 (en) 2000-04-14 2008-03-25 Transgene, S.A. Poxvirus with targeted infection specificity
EP1276888A2 (en) * 2000-04-26 2003-01-22 Crucell Holland B.V. Adenovirus vectors with knobless fibers, and their uses
US6680172B1 (en) 2000-05-16 2004-01-20 Regents Of The University Of Michigan Treatments and markers for cancers of the central nervous system
JP2003534806A (ja) * 2000-05-31 2003-11-25 ジェンベク、インコーポレイティッド アデノウイルスベクターのターゲティングの方法および組成物
US6762031B2 (en) 2000-06-16 2004-07-13 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Targeting viral vectors to specific cells
GB0017720D0 (en) * 2000-07-19 2000-09-06 Got A Gene Ab Modified virus
US8044259B2 (en) 2000-08-03 2011-10-25 The Regents Of The University Of Michigan Determining the capability of a test compound to affect solid tumor stem cells
US6984522B2 (en) * 2000-08-03 2006-01-10 Regents Of The University Of Michigan Isolation and use of solid tumor stem cells
US20080194022A1 (en) * 2000-08-03 2008-08-14 Clarke Michael F Isolation and use of solid tumor stem cells
GB0019302D0 (en) * 2000-08-08 2000-09-27 Univ Nottingham Trent Biological materials and the use thereof for the treatment of disease
US7235233B2 (en) 2000-09-26 2007-06-26 Crucell Holland B.V. Serotype 5 adenoviral vectors with chimeric fibers for gene delivery in skeletal muscle cells or myoblasts
JP4802401B2 (ja) * 2000-11-07 2011-10-26 トランスジェン・ソシエテ・アノニム 標的化感染特異性を有するポックスウイルス
MXPA00011713A (es) * 2000-11-28 2002-05-31 Tgt Lab S A De C V Vectores recombinantes virales y no virales conteniendo el gen humano del activador de plasminogeno derivado de urocinasa y su utilidad en el tratamiento de diversos tipos de fibrosis hepatica, renal, pulmonar, pancreatica, cardiaca y cicatrices hipe
EP1345617A2 (en) 2000-12-22 2003-09-24 Synovis Limited Methods of modulating toll-related receptor (trr) signaling
US20040126774A1 (en) * 2001-01-08 2004-07-01 Mitchell Lioyd G. Correction of factor VIII genetic defects using spliceosome mediated RNA trans splicing
ATE527375T1 (de) 2001-04-12 2011-10-15 Imp Innovations Ltd Diagnose und behandlung von brustkrebs mit scn5a
GB0111324D0 (en) 2001-05-09 2001-07-04 Unilever Plc Ambient stable beverage
WO2002094318A1 (en) * 2001-05-18 2002-11-28 University Of Southern California Vector for targeted delivery to cells
WO2003002746A2 (en) * 2001-06-29 2003-01-09 Novartis Ag Perv screening method and use thereof
US7229774B2 (en) 2001-08-02 2007-06-12 Regents Of The University Of Michigan Expression profile of prostate cancer
GB0119852D0 (en) * 2001-08-15 2001-10-10 Univ York Baculovirus
CA2460157A1 (en) 2001-09-18 2003-03-27 Clontech Laboratories, Inc. Site-specific recombinase based method for producing adenoviral vectors
EP1466016A2 (en) 2002-01-09 2004-10-13 Riken Institute Of Physical And Chemical Research Cancer profiles
US7399753B2 (en) * 2002-02-25 2008-07-15 Virxsys Corporation Trans-splicing mediated photodynamic therapy
SI1497438T1 (sl) 2002-04-25 2010-03-31 Crucell Holland Bv Sredstva in postopki za pripravo adenovirusnih vektorjev
EP1504016A4 (en) * 2002-05-08 2006-11-22 Intronn Inc USE OF SPLICEOSOM-MEDIATED RNA-TRANS-SPLICING TO GIVE ADENOVIRES A CELLSELECTIVE REPLICATION
CA2503247A1 (en) * 2002-10-23 2004-05-06 Intronn, Inc. Screening methods for identification of efficient pre-trans-splicing molecules
US20040166091A1 (en) * 2003-02-24 2004-08-26 Genvec, Inc. Materials and methods for treating disorders of the ear
CA2524499A1 (en) 2003-05-14 2004-11-25 Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti Spa Broadening adenovirus tropism
KR20060031809A (ko) * 2003-06-09 2006-04-13 더 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미시간 암 치료 및 진단용 조성물 및 방법
DK1648931T3 (da) 2003-07-21 2011-03-07 Transgene Sa Multifunktionelle cytokiner
WO2005012537A2 (en) * 2003-07-25 2005-02-10 Genvec, Inc. Adenoviral vector-based vaccines
JP2007517500A (ja) 2003-10-15 2007-07-05 ボード・オブ・リージエンツ，ザ・ユニバーシテイ・オブ・テキサス・システム 電子、光学、磁性、半導体、および生物工学用途の足場としての多機能生体物質
EP1685376A4 (en) * 2003-10-15 2010-03-03 Univ Texas VIRAL FIBERS
JP2007511507A (ja) * 2003-11-14 2007-05-10 ジェンベク、インコーポレイティッド 癌を処置するための治療レジメン
US7923109B2 (en) 2004-01-05 2011-04-12 Board Of Regents, The University Of Texas System Inorganic nanowires
WO2005075506A1 (en) * 2004-01-09 2005-08-18 The Scripps Research Institute Identification of endogenous trimerization domains in the adenovirus fiber protein that allow detargeting and retargeting of viral vectors
US7968334B2 (en) * 2004-01-23 2011-06-28 Virxsys Corporation Expression of apoAI and variants thereof using spliceosome mediated RNA trans-splicing
US8053232B2 (en) * 2004-01-23 2011-11-08 Virxsys Corporation Correction of alpha-1-antitrypsin genetic defects using spliceosome mediated RNA trans splicing
EP1716165A4 (en) * 2004-01-23 2008-06-18 Virxsys Corp EXPRESSION OF APOLIPROTEIN A1 (APOA-1) AND VARIANTS USING SPLICE COMPLEX-INDUCED RNA TRANSPLANT
AU2005209909B8 (en) * 2004-02-03 2009-01-15 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for characterizing, regulating, diagnosing, and treating cancer
US20070207166A1 (en) 2004-04-12 2007-09-06 Genvec, Inc. Method of Using Adenoviral Vectors to Induce an Immune Response
WO2005115477A2 (en) 2004-04-13 2005-12-08 Quintessence Biosciences, Inc. Non-natural ribonuclease conjugates as cytotoxic agents
CA2567156A1 (en) * 2004-05-17 2006-07-20 Cambrios Technology Corp. Biofabrication of transistors including field effect transistors
US7858323B2 (en) 2004-06-09 2010-12-28 The Regents Of The University Of Michigan Phage microarray profiling of the humoral response to disease
US20060094110A1 (en) * 2004-07-30 2006-05-04 Mcgarrity Gerard J Use of spliceosome mediated RNA trans-splicing for immunotherapy
US20060134658A1 (en) * 2004-08-09 2006-06-22 Garcia-Blanco Mariano A Use of RNA trans-splicing for generation of interfering RNA molecules
CA2589602A1 (en) * 2004-09-01 2006-04-13 Genvec, Inc. Adenoviral vectors able to transduce apcs, potential use in immune response generation
DE102004047492B4 (de) * 2004-09-23 2006-07-20 Jost-Werke Gmbh & Co. Kg Verfahren zum Übertragen von elektrischer, pneumatischer oder hydraulischer Energie sowie ein Energieübertragungssystem
US8563511B2 (en) 2004-10-06 2013-10-22 University Of Rochester Treatment of pulmonary hypertension using an agent that inhibits a tissue factor pathway
US7871795B2 (en) 2004-10-08 2011-01-18 Virxsys Corporation Targeted trans-splicing of highly abundant transcripts for in vivo production of recombinant proteins
AU2005326784B2 (en) * 2004-10-08 2012-03-15 Virxsys Corporation Use of RNA trans-splicing for antibody gene transfer and antibody polypeptide production
WO2006067402A2 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Lipopeptide Ab Agents inibiting the cathelin-like protein cap18/ll-37
CA2595407A1 (en) 2005-01-20 2006-07-27 University Of Rochester Thioredoxin interacting protein (txnip) as regulator of vascular function
EP1863511A2 (en) * 2005-02-23 2007-12-12 UAB Research Foundation Alkyl-glycoside enhanced vaccination
EP1907858A4 (en) * 2005-06-13 2009-04-08 Univ Michigan COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT AND DIAGNOSIS OF CANCER
WO2006135886A2 (en) * 2005-06-13 2006-12-21 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
CA2620495A1 (en) * 2005-08-31 2007-03-08 Genvec, Inc. Adenoviral vector-based malaria vaccines
EP2612870A1 (en) 2005-09-12 2013-07-10 The Regents of the University of Michigan Recurrent gene fusions in prostate cancer
WO2007047907A2 (en) * 2005-10-14 2007-04-26 The Regents Of The University Of Michigan Dek protein compositions and methods of using the same
US7794951B2 (en) * 2005-10-18 2010-09-14 University Of Massachusetts Medical School SREBP2gc transcription factors and uses thereof
JP5368798B2 (ja) 2005-10-31 2013-12-18 オンコメッド ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 癌を診断し処置するための組成物および方法
US7723477B2 (en) 2005-10-31 2010-05-25 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for inhibiting Wnt-dependent solid tumor cell growth
EP1945754B1 (en) * 2005-10-31 2014-07-23 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing cancer
CA2629163C (en) * 2005-11-10 2017-03-21 Genvec, Inc. Adenoviral vector-based foot-and-mouth disease vaccine
US9274108B2 (en) * 2006-02-06 2016-03-01 Massachusetts Institute Of Technology Self-assembly of macromolecules on multilayered polymer surfaces
GB0607354D0 (en) 2006-04-12 2006-05-24 Bioinvent Int Ab Agent, Composition And Method
US7393699B2 (en) 2006-06-12 2008-07-01 Tran Bao Q NANO-electronics
JP2009541333A (ja) * 2006-06-23 2009-11-26 クインテセンス バイオサイエンシーズ インコーポレーティッド 修飾リボヌクレアーゼ
EP2049151A4 (en) 2006-07-17 2010-03-24 Quintessence Biosciences Inc METHOD AND COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF CANCER
US20080261216A1 (en) * 2006-09-08 2008-10-23 The Regents Of The University Of Michigan HERV Group II Viruses In Lymphoma And Cancer
US20080248060A1 (en) * 2007-01-09 2008-10-09 Genvec, Inc. Adenoviral vector-based malaria vaccines
EP2106439B1 (en) * 2007-01-24 2014-11-12 The Regents of the University of Michigan Compositions and methods for treating and diagnosing pancreatic cancer
EP2390340A3 (en) 2007-01-30 2012-02-22 Transgene SA vector encoding Papillomavirus E1 and E2 polypeptides with reduced percentage of identity
US10745701B2 (en) 2007-06-28 2020-08-18 The Trustees Of Princeton University Methods of identifying and treating poor-prognosis cancers
US20090324596A1 (en) 2008-06-30 2009-12-31 The Trustees Of Princeton University Methods of identifying and treating poor-prognosis cancers
AU2008275304B2 (en) 2007-07-06 2012-07-26 The Regents Of The University Of Michigan Recurrent gene fusions in prostate cancer
WO2009026152A1 (en) 2007-08-16 2009-02-26 The Regents Of The University Of Michigan Metabolomic profiling of prostate cancer
JP2010540681A (ja) * 2007-10-08 2010-12-24 クインテッセンス バイオサイエンシズ，インコーポレーテッド リボヌクレアーゼに基づく治療のための組成物及び方法
US8193151B2 (en) * 2008-04-25 2012-06-05 Northwestern University Methods for treating atrial or ventricular arrhythmias
US8518884B2 (en) 2008-04-25 2013-08-27 Northwestern University Methods for treating atrial or ventricular arrhythmias by administering a G-protein alpha inhibitor
CA2724231A1 (en) 2008-05-15 2009-11-19 The University Of North Carolina At Chapel Hill Novel targets for regulation of angiogenesis
ES2587395T3 (es) 2008-06-04 2016-10-24 Cellular Dynamics International, Inc. Procedimientos para la producción de células IPS usando un enfoque no vírico
CA2738485A1 (en) 2008-09-26 2010-04-01 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. Frizzled-binding agents and uses thereof
US8551789B2 (en) 2010-04-01 2013-10-08 OncoMed Pharmaceuticals Frizzled-binding agents and their use in screening for WNT inhibitors
BRPI0920743A2 (pt) 2008-10-01 2016-09-20 Quintessence Biosciences Inc ribonucleases terapeuticas
EP2356221B1 (en) 2008-10-24 2018-11-21 Wisconsin Alumni Research Foundation Pluripotent stem cells obtained by non-viral reprogramming
CN102639709A (zh) 2009-01-09 2012-08-15 密歇根大学董事会 癌症中的复现性基因融合体
WO2010085665A2 (en) 2009-01-23 2010-07-29 Cedars-Sinai Medical Center Targeted delivery system
WO2010107991A2 (en) 2009-03-18 2010-09-23 Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Use of ixolaris, a tissue factor inhibitor, for the treatment and prevention of cancer
ES2385251B1 (es) 2009-05-06 2013-05-06 Fundació Privada Institut D'investigació Biomèdica De Bellvitge Adenovirus oncolíticos para el tratamiento del cáncer.
WO2010141801A2 (en) 2009-06-05 2010-12-09 Cellular Dynamics International, Inc. Reprogramming t cells and hematophietic cells
CN106390107B (zh) 2009-06-10 2019-12-31 纽约大学 病理tau蛋白的免疫靶向
GB0910620D0 (en) 2009-06-19 2009-08-05 Immunovia Ab Agents and uses thereof
US20120171771A1 (en) 2009-07-08 2012-07-05 Cellular Dynamics International, Inc. Modified ips cells having a mutant form of a human immunodeficiency virus (hiv) cellular entry gene
GB0912624D0 (en) 2009-07-21 2009-08-26 Imp Innovations Ltd Methods
RU2555346C2 (ru) 2009-08-07 2015-07-10 Трансген Са Композиция для лечения инфекции вирусом гепатита в
WO2011025852A1 (en) 2009-08-28 2011-03-03 Cellular Dynamics International, Inc. Identifying genetic variation in affected tissues
US9605844B2 (en) * 2009-09-01 2017-03-28 Cree, Inc. Lighting device with heat dissipation elements
JP5962996B2 (ja) 2009-09-03 2016-08-03 キャンサー・リサーチ・テクノロジー・リミテッド Ｃｌｅｃ１４ａ阻害剤
US20120219583A1 (en) 2009-10-16 2012-08-30 Los Alamos National Security, Llc Nucleic acid sequences encoding expandable hiv mosaic proteins
AU2010315712B2 (en) 2009-10-19 2014-04-17 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Cardiomyocyte production
KR20120139672A (ko) 2009-11-09 2012-12-27 젠벡, 인코포레이티드 원숭이 아데노바이러스 벡터의 증식 방법
WO2011057254A2 (en) 2009-11-09 2011-05-12 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Simian adenoviral vector-based vaccines
TWI535445B (zh) 2010-01-12 2016-06-01 安可美德藥物股份有限公司 Ｗｎｔ拮抗劑及治療和篩選方法
WO2011100460A2 (en) * 2010-02-11 2011-08-18 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Ccr7 ligand delivery and co-delivery in immunotherapy
EP2548025A4 (en) * 2010-03-17 2013-09-25 Univ Michigan USE OF PHOTOEPITOPES FOR PROFILING AN IMMUNE REACTION
WO2011119524A1 (en) * 2010-03-22 2011-09-29 The University Of North Carolina At Chapel Hill Novel targets for regulation of angiogenesis
GB201105584D0 (en) 2011-04-01 2011-05-18 Imp Innovations Ltd Cancer methods
AU2011267849B2 (en) 2010-06-15 2015-02-05 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Generation of induced pluripotent stem cells from small volumes of peripheral blood
KR101861171B1 (ko) 2010-06-18 2018-05-31 후지필름 셀룰러 다이내믹스, 인코포레이티드 투석된 혈청이 있는 심근세포 배지
RU2011136591A (ru) * 2010-06-23 2014-07-27 Олег Федорович Михейцев Антибактериальный и/или противогрибковый компонент, обладающий свойством специфически связываться с бактериями и/или грибами
WO2012006440A2 (en) 2010-07-07 2012-01-12 Cellular Dynamics International, Inc. Endothelial cell production by programming
US9518087B2 (en) 2010-08-10 2016-12-13 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US9517257B2 (en) 2010-08-10 2016-12-13 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
US9850296B2 (en) 2010-08-10 2017-12-26 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne (Epfl) Erythrocyte-binding therapeutics
WO2012021730A2 (en) 2010-08-11 2012-02-16 Genvec, Inc. Respiratory syncytial virus (rsv) vaccine
WO2012083297A2 (en) 2010-12-17 2012-06-21 Genvec, Inc. Adenoviral vectors with modified hexon regions
WO2012088041A1 (en) 2010-12-20 2012-06-28 Genvec, Inc. Adenoviral vector-based dengue fever vaccine
EP2658567A4 (en) 2010-12-28 2014-09-24 Univ Rochester METHOD FOR MODIFYING INSULIN SIGNAL TRANSMISSION BY BILIVERDINREDUCTASE (BVR) AND BVR-DERIVED PEPTIDES
DK2694644T3 (en) 2011-03-30 2018-04-16 Cellular Dynamics Int Inc Priming of pluripotent stem cells for neural differentiation
WO2013001372A2 (en) 2011-06-30 2013-01-03 University Of Oslo Methods and compositions for inhibition of activation of regulatory t cells
US10980879B2 (en) 2011-07-06 2021-04-20 Sykehuset Sørlandet Hf EGFR targeted therapy
GB201115280D0 (en) 2011-09-05 2011-10-19 Alligator Bioscience Ab Antibodies, uses and methods
ES2791760T3 (es) 2011-09-07 2020-11-05 Sinai School Medicine Ceramidasa y diferenciación celular
RU2664673C2 (ru) 2011-10-27 2018-08-21 Веллстат Офтэлмикс Корпорэйшн Векторы, кодирующие фактор жизнеспособности колбочек, полученный из палочек
WO2013079973A1 (en) 2011-12-02 2013-06-06 Di Cara Danielle Marie Antibodies against hgf - receptor and uses
CA2864432A1 (en) 2012-02-15 2013-08-22 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Erythrocyte-binding therapeutics
EP4406568A3 (en) 2012-03-30 2024-10-16 Insulet Corporation Fluid delivery device with transcutaneous access tool, insertion mechanism and blood glucose monitoring for use therewith
WO2013181128A1 (en) 2012-05-29 2013-12-05 Genvec, Inc. Modified serotype 28 adenoviral vectors
EP2880160B1 (en) 2012-08-03 2018-09-19 Cedars-Sinai Medical Center Isolating traffic-enhancing mutants of drug delivery protein
US9694050B2 (en) 2012-10-21 2017-07-04 University Of Rochester THY1 (CD90) as a novel therapy to control adipose tissue accumulation
EP3587455A1 (en) 2012-10-23 2020-01-01 Emory University Gm-csf and il-4 conjugates, compositions, and methods related thereto
EP2911691B1 (en) 2012-10-23 2018-10-10 OncoMed Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating neuroendocrine tumors using wnt pathway-binding agents
WO2014095088A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Sykehuset Sørlandet Hf Egfr targeted therapy of neurological disorders and pain
CN105073195A (zh) 2013-02-04 2015-11-18 昂科梅德制药有限公司 使用Wnt途径抑制剂进行治疗的方法及对该治疗的监测
AU2014218807A1 (en) 2013-02-22 2015-09-03 Cellular Dynamics International, Inc. Hepatocyte production via forward programming by combined genetic and chemical engineering
US9168300B2 (en) 2013-03-14 2015-10-27 Oncomed Pharmaceuticals, Inc. MET-binding agents and uses thereof
AU2014248167B2 (en) 2013-04-03 2019-10-10 FUJIFILM Cellular Dynamics, Inc. Methods and compositions for culturing endoderm progenitor cells in suspension
US9822418B2 (en) 2013-04-22 2017-11-21 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Mutations in PDGFRB and NOTCH3 as causes of autosomal dominant infantile myofibromatosis
US10590459B2 (en) 2013-12-20 2020-03-17 The Regents Of The University Of California Biomimetic virus-based colorimetric sensors
US10946079B2 (en) 2014-02-21 2021-03-16 Ecole Polytechnique Federale De Lausanne Glycotargeting therapeutics
US10953101B2 (en) 2014-02-21 2021-03-23 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
US10046056B2 (en) 2014-02-21 2018-08-14 École Polytechnique Fédérale De Lausanne (Epfl) Glycotargeting therapeutics
EP3107563B1 (en) 2014-02-21 2021-04-07 Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne (EPFL) EPFL-TTO Glycotargeting therapeutics
DK3119881T3 (da) 2014-03-21 2023-04-03 Fujifilm Cellular Dynamics Inc Production of midbrain dopaminergic neurons and methods for the use thereof
WO2015164228A1 (en) 2014-04-21 2015-10-29 Cellular Dynamics International, Inc. Hepatocyte production via forward programming by combined genetic and chemical engineering
TWI710635B (zh) 2014-10-09 2020-11-21 美商珍維克公司 編碼人類無調同源物-1(hath1)之腺病毒載體
US10377801B2 (en) 2015-11-04 2019-08-13 Northwestern University Amelioration of chronic kidney disease
WO2017079442A1 (en) 2015-11-04 2017-05-11 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Methods of treating tumors and cancer, and identifying candidate subjects for such treatment
US10413665B2 (en) 2015-11-25 2019-09-17 Insulet Corporation Wearable medication delivery device
WO2017189730A1 (en) 2016-04-26 2017-11-02 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Treatment of hippo pathway mutant tumors and methods of identifying subjects as candidates for treatment
US11091795B2 (en) 2016-07-11 2021-08-17 Arizona Board Of Regents On Behalf Of The University Of Arizona Compositions and methods for diagnosing and treating arrhythmias
US11155832B2 (en) 2016-09-30 2021-10-26 Genvec, Inc. Adenovectors for delivery of therapeutic genetic material into T cells
US11241436B2 (en) 2017-01-25 2022-02-08 Northwestern University Autophagy inducers for treatment of CNS conditions
US11045603B2 (en) 2017-02-22 2021-06-29 Insulet Corporation Needle insertion mechanisms for drug containers
US11253579B2 (en) 2017-06-16 2022-02-22 The University Of Chicago Compositions and methods for inducing immune tolerance
US10898656B2 (en) 2017-09-26 2021-01-26 Insulet Corporation Needle mechanism module for drug delivery device
US11147931B2 (en) 2017-11-17 2021-10-19 Insulet Corporation Drug delivery device with air and backflow elimination
US10815484B2 (en) 2017-11-22 2020-10-27 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating cancer
WO2020172509A1 (en) 2019-02-21 2020-08-27 Unleash Immuno Oncolytics, Inc. Oncolytic adenoviral vector and methods of use
JP2023506768A (ja) 2019-12-12 2023-02-20 ティン セラピューティックス エルエルシー 聴覚損失の予防及び治療のための組成物及び方法
IL300552A (en) 2020-08-11 2023-04-01 Musculoskeletal Transplant Foundation A method for treating heart problems using preparations derived from the placenta
US20240342313A1 (en) 2023-03-30 2024-10-17 Pharma Cinq, Llc Vector encoding rod-derived cone viability factor and human igk signal sequence

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2708046B2 (ja) * 1986-11-01 1998-02-04 ブリティッシュ バイオテック ファーマシューティカルズ リミテッド 融合タンパク質および粒子
EP0832980B1 (en) * 1989-01-23 2002-06-19 Chiron Corporation Recombinant therapies for infection and hyperproliferative disorders
EP0466815A4 (en) * 1989-04-05 1992-09-02 Novacell Corpporation Infectious targetted replication-defective virion
MY109299A (en) * 1990-08-15 1996-12-31 Virogenetics Corp Recombinant pox virus encoding flaviviral structural proteins
EP0553235A1 (en) * 1990-10-01 1993-08-04 The University Of Connecticut Targeting viruses and cells for selective internalization by cells
JP3547129B2 (ja) * 1991-02-19 2004-07-28 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 変更宿主域を有するウィルス粒子
GB9107631D0 (en) * 1991-04-10 1991-05-29 British Bio Technology Proteinaceous particles
CA2110489A1 (en) * 1991-06-14 1992-12-23 Enzo Paoletti Immunodeficiency virus recombinant poxvirus vaccine
IL103059A0 (en) * 1991-09-30 1993-02-21 Boehringer Ingelheim Int Conjugates for introducing nucleic acid into higher eucaryotic cells
SE503225C2 (sv) * 1991-10-30 1996-04-22 Leif Lindholm Konsult Ab Virus-antikroppskomplex för införing av virus i mammalieceller
US5543328A (en) * 1993-08-13 1996-08-06 Genetic Therapy, Inc. Adenoviruses having modified fiber proteins
US5559099A (en) * 1994-09-08 1996-09-24 Genvec, Inc. Penton base protein and methods of using same

Also Published As

Publication number Publication date
JPH08506239A (ja) 1996-07-09
DE69329879D1 (de) 2001-02-22
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GB9508947D0 (en) 1995-06-21
GB2286593B (en) 1997-01-15
US5885808A (en) 1999-03-23
WO1994010323A1 (en) 1994-05-11
ATE198769T1 (de) 2001-02-15

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