PT3004061T - Compostos 3,4-dihidroisoquinolina-2(1h)¿ilo - Google Patents

Description

DESCRI πΰθ 'COIVPOSTOS 3, 4- Dl Hl DROI SOQUI NOLI NA- 2( 1 Η) "I LO_

CAIVPO DA INVENnuO A inven'2o proporciona certos corrpostos 3,4-di-hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i lo, as suas corrposi 'Pes f ar mac, ut i cas, rrlfltodos de ut i I i z a'2 o e processos para a prepara'2o do mesmo. A doen'a de Parki nson H uma doen'a cr/Bii ca, progressiva, neur odegenerat i va caract er i zada pela perda de neur/Eii os doparri n^rgi cos no cérebro. A doen'a de Parki nson manifesta-se no tremor em repouso juntamente com outros sintomas motores (por exenpl o, aqui nUsi a e bradi ci nesi a) e sintomas η2 o motores (por exemplo, comprometimento cogni t i vo, di s t Sr bi os do sono e depr ess2 o). A t era pi a at uai para o tratamento da doen'a de Parki nson inclui precursores de doparri na, corro I evodopa e agonistas de dopa mi na, tais corro prarri pexol . Tais terapias de doparri na de a'2o direta s2o lirritadas emeficCStia devi do em part e ao cornpr omet i ment o da cogni '2o assoei a do a altas doses, risco de convul s2 o (corro rrostrado em roedores para certos agonistas de D1) e desenvolvimento de toler°ncia. Continua a existir uma necessidade significativa η2 o atendida de um tratamento seguro e eficaz da doen'a de Parki nson.

Os rrodul adores alostUricos s2o agentes que

modificam remotamente as intera'Pes de ligandos com seus recetores modificando o anrbiente de I i ga'2 o ao ligando. Um exerrpl o desse tipo de rrodul a'2o H quando a I i ga'2 o de um rrodul ador a um local alostUrico (secund®* i o) produz uma altera'2o conformaci onal na prote°na recetora que H transrritida para o s°tio de I i ga '2 o ortostUrico ( pr i rrtEr i o) do I i gando. A qual i da de do ef ei t o al ost Ur i co H di t a posi t i va se o rrodul ador facilitar ou potencializar uma intera'2o ou negativo se inibir uma intera'2o do ligando com o local ortostUrico de liga'2o.

Os corrpostos da presente inven'2o s2o rrodul adores alostUricos positivos (PAIVfe) do recetor de dopam na 1 (D1). Corro tal, os corrpostos da presente inven'2o s2o Bteis para o tratamento de condi 'Pes emque D1 deserrpenha um papel corro a doen'a de Parki nson e a esquizofrenia, incluindo o al°vio de sintomas associados tais corro corrpr omet i ment o cognitivo leve na doen'a de Parki nson, bem corro defic^ncia cognitiva e sintomas negativos em esquizofrenia. Os corrpostos da presente inven'2o tarrbUm s2o considerados Bteis no tratamento de sintomas da doen'a de Alzheimer, tais corro defic^ncia cognitiva. Os corrpostos do presente invento s2o t arrbllm βΐei s para melhorar os sintomas motores na doen'a de Parki nson corro rronoterapia. AI Hm di sso, acredita-se que os corrpostos da presente inven'2o s2o βΐ ei s no tratamento da depress2o e do transtorno de dHficit de aten'2o e hi peratividade (TDAH). A presente inven'2o proporciona certos novos corrpostos que s2o PAM do recetor D1 e, corro tal, s2o Bteis no tratamento dos distKrbios discutidos acima. Qs novos corrpostos da presente inven'2o podem proporcionar um tratamento alternativo para tais distBrbios. A presente inven'2o proporciona ainda uma forma cristalina de certos corrpostos novos. A Publica'2o do Pedido de Patente Europeia nl EP 330360 descreve certos corrpostos de i soqui nol i na corro agoni st as do r ecept or Kappa opi /5 de e Bt ei s corro anal gUsi cos. A Patente dos E. U. A. η. I 5236934 descreve certos corrpost os 1, 2, 3, 4-1 et ra- hi droi soqui nol i na corro i ni bi dores do r ecet or de angi ot ensi na 11 e βΐ i I no t r at ament o de di st Br bi os do SNC, i ncl ui ndo disfun'2o cognitiva. A Publica'2o do Pedido de Patente dos Estados Unidos nJ US 2006/0287359 descreve certos corrpostos de tetra-hi droi soqui nol i na corro antagonistas dos recetores de est r og^lni o e ut Ui s no tratamento de doen'as relacionadas com o estrog^lnio incluindo cancro da mama. A presente inven'2o proporciona um composto da F/fr mil a I;

em que n i s 0, 1 or 2; em que n H 0, 1 ou 2; R1 H hal ogUni o; R2 H hal ogUni o, H, CN, C1-C3 al c/E<i ou C1-C3 al qui I o; e R3 H H, hal ogUni o, C1-C3 al c/E<i ou C1-C3 alquilo. A presente inven'2o proporciona ainda umconposto da F/&amp;rrul a Ia:

em que n H 0, 1, ou 2. R1 H hal ogUni o; R2 % hal ogUni o, H, CN, C1-C3 al c/E<i ou C1-C3 al qui I o; e R3 H H, hal ogUni o, C1-C3 al c/B<i ou C1-C3 alquilo. A presente inven'2o proporciona ainda umconposto da F/frrrul a I ou Ia: em que n H 0, 1, ou 2; R1 H hal ogUni o; R2 H hal ogUni o; e R3 H H ou C1- C3 al c/Bci . A presente inven'2o proporciona ainda umconposto da F/frrrul a I ou Ia: em que n H 0, 1, ou 2; R1 H Cl , F ou Br; R2 H Cl , OCH3, H, F, CN ou CH3; e R3 % OCHs, H, CH2CH3, Cl , OCH( CH3) 2, OCH2CH3, F, CH( CH3) 2 ou CH3. A presente inven'2o proporciona ainda umconposto da F/frrrul a I ou Ia: n H 0 ou 2; R1 H Cl ; R2 H Cl ou F; e R3 H H ou OCH3. A presente inven'2o proporciona ainda umconposto da F/fr rrul a I b:

Umconposto particular de f/frnxila I H umconposto de f rrul a I c.

Um conposto particular de f/frmjla I H 2-(2,6-di cl orofeni I ) - 1 - [ ( I S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3-met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di - hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) -i I ] et anona. A presente inven'2o proporciona ainda urra conposi '2 o corrpreendendo 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) -1 - [ ( I S, 3R) - 3-( hi droxi met il)-5-(3-hidr ox i - 3- met i I but i I ) -1 - met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ] et anona e (Sci do 4-hi droxi benz/H co. A presente inven'2o proporciona ainda urra conpos i '2 o conpr eendendo 2- ( 2, 6- di cl or of eni I ) -1 - [ ( I S, 3R) - 3-( hi droxi rret i I) - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1 - met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ] et anona e (Sti do 4-hi droxi benz/H co nurra porpor'2o de cerca de um para um A presente inven'2o proporciona ainda urra forrra co-cr i st al i na de urra corrposi'2o corrpreendendo 2-(2,6-di cl orof eni I ) -1- [ (1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona e (Sti do 4- hi droxi benz/H co. A presente inven'2o proporciona ainda urra forrra co-cr i st al i na est®/el de urra corrposi'2o corrpr eendendo 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) -1- [ (1S, 3R) - 3- ( hi droxi meti 1)-5-(3-hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) -il] etanona e dei do 4-hi droxi benz/H co. A presente inven'2o proporciona ainda urra forrra cocristalina de urra corrposi'2o corrpr eendendo 2-(2,6-di cl orof eni I ) - 1 - [ ( 1S, 3R) - 3- ( hi dr oxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di - hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - il]etanona e (St i do 4-hi dr oxi benz/H co caract eri zado por um padr2o de difra'2o de raios X em p/E usando radia'2o de CuKa comum pi co de difra'2o no °ngulo de difra'2o 2-teta de 18, 2é em combi na '2 o comumou rnai s dos pi cos sei eci onados do grupo que consiste em16,0é, 25, 4é e 7, Oé; com urna toler°ncia para os °ngulos de difrac'2o de 0,2 graus.

Um composto particular de f/frmula I H 2-(2,6-di cl orofeni I )-1-((1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i 1)-5-(2-hi droxi propan- 2- i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) -i I ) et an-1 - ona. A presente inven'2o proporciona ainda uma forma cristalina de 2-(2, 6-di cl or of eni I )-1-(( 1S, 3R)-3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 2- hi droxi propan- 2- i I ) -1- met il-3,4-di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ) et an-1-ona caract eri zado por um padr2o de difra'2o de raios X em p/E usando radia'2o de CuK com um pico de difra'2o no °ngulo de difra'2o 2-teta de 14, 27é em combi na'2 o comumou mai s dos picos selecionados do grupo que consiste em 15, 71 é, 18, 01 é, 18, 68é, 22, 43é e 25, 08é; com uma toler°ncia para os °ngulos de difra'2o de 0, 2 graus. AI Hm disso, a presente inven'2o proporciona uma corrposi '2o farma^utica compreendendo umcorrposto de f/frrrula 1, e um ve°cul o, diluente ou excipiente f ar rnaceut i cament e acei t ®/el . AI Hm disso, a presente inven'2o proporciona um rrHtodo para tratar a doen'a de Parki nson compreendendo a adrri ni st r a'2 o a um doente que dela necessite de urra quantidade eficaz de umconposto de f/frnula I. AI Hm di sso, a presente inven'2o proporciona umniUtodo de tratamento de distBrbios neurocogni t i vos associados - doen'a de Parkinson conpr eendendo a adrri ni st r a'2 o a um paciente que dela necessite de urna quantidade eficaz de umconposto de f/trrrula I. AI Hm disso, a presente inven'2o proporciona um rrlUtodo de tratamento de esquizofrenia que conpreende a adrri ni st r a'2 o a um doente que dela necessite de uma quantidade eficaz de umconposto de f/frnula I. AI Hm disso, a presente inven'2o proporciona um rrHtodo de tratamento da doen'a de Alzheimer, que conpreende a adrri ni st ra'2 o a um doente que dela necessite de uma quantidade eficaz de umconposto de f/frnula I.

Aa presente inven'2o proporciona um conposto da F/frnula I para o uso emterapia.

Aa presente inven'2o proporciona um conposto da F/frnula I para o uso corro um medi cament o.

Aa presente inven'2o proporciona um conposto da F/frnula I para o uso no tratamento da doen'a de Parkinson.

Aa presente inven'2o proporciona um conposto da F/frnula I para o uso no tratamento da doen'a de esqui zof reni a.

Aa presente inven'2o proporciona um conposto da F/trnula I para o uso no tratamento da doen'a de Alzheimer.

Aa presente inven'2o proporciona um conposto da F/trrrula I para o fabrico de um medi carnent o para a doen'a de Parki nson. AI Hm disso, a presente inven'2o proporciona uma conposi '2 o farmac5utica conpr eendendo 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) -1 - [ ( 1S, 3R) - 3- ( hi dr oxi met i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I but i I ) -1 -met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ] et anona e (Sti do 4-hi dr oxi benz/B co e um ve°culo, diluente ou excipiente f ar maceut i carnent e aceitdVel.

Um conposto de f/trrrula I pode ser utilizado em corrt>ina'2o com outros f®rmacos que s2o utilizados no t rat ament o/preven'2 o/supress2 o ou melhoria das doen'as ou condi 'Pes para as quais os conpostos de f/frnula I s2o βΐ ei s incluindo doen'a de Parki nson e esquizofrenia. Esse(s) outro(s) f®rrraco(s) pode( rr) ser adrri ni st r ado( s) por uma via e numa quantidade vulgarmente utilizada, portanto, si rru I t aneament e ou sequenci al ment e com um conposto de f/frrrula I. Quando um conposto de f/frrrula I H utilizado si rru 11 aneament e com um ou rnai s outros f®rmacos, H preferida uma forma de unidade de dosagem f ar macs ut i ca contendo tais outros f®rmacos, em adi '2o ao conposto da f/frrmla I. Consequentemente, as conposi 'Pes f ar macs ut i cas da presente inven'2o incluem as que tarrbHm cont5 m um ou rnai s outros ingredientes activos, para alUmde umconposto de f/frnola I. Exerrpl os de outros ingredientes activos eficazes no tratamento da doen'a de Parki nson que podem ser corrbi nados com um conpost o de f/trrrula I, adrrinistrada separadamente ou na mesma corrposi'2o f ar mac5 ut i ca, incluem mas η2 o est2o I i rri t ados a: (a) precursores de doparri na tais corro I evodopa; mel evodopa e et il evodopa; e ( b) agonistas da doparri na incluindo prarri pexol e, ropi ni rol e, aponorfina, rotigotina, br orroc r i pt i na, cabergol i na e pergol i da.

Entende-se que os conpostos da presente inven'2o podem existir corro est er eoi s/fmer os. As formas de realiza'2o da presente inven'2o incluem todos os enant i/Emeros, di ast er e/fimer os e suas nisturas. As formas de realiza'2o preferidas s2o pr edorri nant ement e um di ast er e/fmer o. As formas de realiza'2o rrai s preferidas s2o predorri nant ement e um enant i /Emero. § preferido um di ast er e/fmer o particular de um corrposto de f/Ernola I representado por umconposto de f/frnola Ia

onde a liga'2 o tracejada e a liga'2 o em cunha *-* represent am um di ast ere/frnero de configura'2o trans. § rrai s preferido um enant i /Errer o particular de um conposto de F/frrmla I ou Ia representado pelos Exerrpl os incluindo o conposto do Exerrpl o 1: 2-(2, 6-di cl orofeni I )-1-[ (1S, BR) - B- ( hi droxi met i I ) - 5- ( B- hi droxi - 3- met i I but i I) -1 -met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona. Tal corro aqui utilizado, o termo ' c oc ri s t a I refere-se a uma forma s/H i da cristalina de conponente rrôl t i pl o compreendendo dois conpostos em que a assoei a'2o de corrpostos H pri mari amente atravUs de intera'hes qu°rricas n2o coval entes e n2o i/Eli cas tais corro a I i ga'2 o de hi drogUni o. Nas artes f ar macJ ut i cas, umcocristal ti pi carne nte corrpreende um pri mei ro conposto que H um i ngredi ente farma^utico activo e um segundo composto que H referido corro umeorrposto convidado ou um cof or mador. Um cocristal pode ser distinguido de uma forma de sal cristalino, na medida em que o primeiro composto permanece essenci al ment e η2 o carregado ou neutro. Umcocristal pode ser distinguido de uma forma de hidrato ou solvato cristalino, na medida em que o conposto convidado η2 o H exclusivamente (Egua ou solvente. Umcocristal preferido H um de forma est@vel com um ponto de fus2o adequado.

Corro aqui utilizado, o termo 'halogUnio, refere-se a cloro, f I βο r, brorro ou iodo. Valores particulares de hal ogUneo s2o cloro e fIBor.

Tal corro aqui utilizado, o grupo 'C1-C3 al c/txi refere-se a met/E<i, et/Bci , n-prop/Ed e i-prop/B<i. Um vai or particular de C1-C3 a I c /Bc i H met/B<i .

Tal corro aqui utilizado, o grupo 'C1-C3 alquilo, refere-se a met i I o, et i I o, n-propilo e i-propilo. Um vai or particular de C1-C3 alquilo H met i I o.

Tal corro aqui utilizado, o termo 'paciente, refere-se a um animal tal corro um marrtfero incluindo um humano. Um humano H um paciente preferido.

TarrbUm H reconhecido que um especialista na tUcnica pode tratar a doen'a de Parki nson adrri ni st rando a um paci ente exi bi ndo si nt ornas uma quanti dade efi caz do conposto de f/frrrula I. Assi rrj os termos 'tratamento, e 'tratando, destinamse a referir todos os processos em que pode haver um abrandament o, interrup'2o, deten'2o, controlo ou paragem da progress2o de uma desordem existente e/ou dos seus sintomas, mas η2 o indica necessariamente uma elirrina'2o total de todos os sintomas.

TarrbUm H reconhecido que um especialista na tUcnica pode tratar a doen'a de Parki nson adrri ni st rando a um paciente em risco de sintomas futuros uma quantidade eficaz do conposto de f/trnola I, e que se pretende a incluir o tratamento profildtico de tal.

Tal corro aqui utilizado, o terno 'quantidade eficaz_ de um conposto de f/frnula I refere-se a uma quantidade, isto H, uma dosagerq que H eficaz no tratamento de uma desorderq tal corro a doen'a de Parki nson aqui descri ta. O pel o rrlildi co assistente, corro umespecialista na tUcnica, pode ser facilmente deterninar a quantidade eficaz pela utiliza'2o de técnicas conhecidas e pela observa'2o de resultados obtidos em ci rcunst ° nci as anOogas. Na det er rri na'2 o de uma quantidade ou dose eficaz de umconposto de f/trnola I, s2o considerados v®rios factores, incluindo, mas η2 ο I irritado a, o conposto de f/trnola I a ser adrri ni st rado; a coadrri ni st ra'2 o de outros agentes, se for utilizada; as espécies de manTfero; o seu tamanho, idade e saBde geral; o grau de envolvimento ou a gravidade da desorderq corro a doen'a de Parki nson; a resposta do paciente individual; o rrodo de adrri ni st r a'2 o; as caract er° st i cas de bi odi s poni bi I i dade da prepara'2o administrada; o regime de dose selecionado; o uso de outra medica'2o concorri t ant e; e outras ci rcunst ° nci as relevantes.

Um conposto de f/frnola I pode ser adrri ni st rado sozinho ou na forma de uma corrposi'2o farmacsutica com ve°culos, diluentes ou exci pi entes f ar rraceut i cament e aceitdVeis. Tais conposi'Pes f ar mBC5 ut i cas e processos para a sua prepara'2o s2o bem conhecidos na arte (Ver, por exenpl o, Rerrington: The Science and Practice of Pharrracy ( D. B. Troy, Editor, 211 Edi '2 o, Lippincott, Wl li arre &amp; Wlkins, 2006).

Ensai o de IVbdul a'2 o AI ost Uri ca Posi t i va do Recet or D1 Hurra no

As cHI ui as HEK293 que expressam de forma est®/el o receptor D1 humano s2o geradas através de transdu'2o de gene retroviral utilizando o vector pBABE- bl eo e o sistema retroviral de Phoeni x. As cHI ui as s2o cultivadas emDIVEIWF12 (Gibco) suplementado com 10% de soro de vitela, 20 rrM de HEPES, 2 rrM de glutamato e 150 ig/rrl de zeoci na a 371 C em 5% de CQ2. Aproxi madament e a 80% de confl^ncia, as cHI ul as s2o colhidas utilizando 0, 25% de t r i ps i na/EDTA, suspensa em FBS rrai s DIVEO a 8% e armazenadas em azoto l°quido. No dia do ensai 0, as c^l ui as s2o descongel adas e ressuspensas no tarrp2o STIM(Solu'2o de Sal Equilibrada de Hanks, suplementada com 0,1% de BSA, 20% de HEPES, 200 =M de I BIVK e 100=3 de <Sti do asc/fr bi co). Um conpost 0 de t est e H di I u° do em sllr i e (1:3) em DIVEO e depois di I u° do adi ci onal rnent e 1:40 emtarrp2o STI M contendo 2X uma concentrado de EC20 de doparri na. Uma concentra'2o EC20 de doparri na H definida como a concentra'2o que aumenta a AIVP c°clica atU 20% da quantidade rriiki ma que pode ser induzida pela doparri na; neste ensaio, 0 ECrax H de 5 =M e 0 EC20 H geral mente 12nM Vinte e cinco =l desta solu'2o s2o nisturados com25 =1 de suspens2o celular (1.250 cHI ul as) e distribu°dos em cada cavidade de placas de meia (gfea de 96 cavidades; a concentra'2o final de DIVBO H de I, 25% As placas s2o incubadas a 25éC durante 60 rri η. A produ'2o de cAIVP H quantificada usando a dete'2o de HTRF (Cisbiou) de acordo comas i nst ru'Pes do fornecedor: otarrp2o de I i se contendo cryptato anti-cAIVP e conjugado-D2 (25 =l de cada un) H adicionado _s cavidades, as placas s2o incubadas durante outros 60-90 rrinutos e a f I uoresc, nci a H detetada usando um leitor de placa EnVision (PerkinElme u). Qs dados s2o convertidos em concent r a' Pes de cAIVP usando una curva padr2o de cAIVP e analisados corro ECso absoluto usando urra equa'2o log°stica n2o-linear de 4 par°metros (Abaseu v5.3. 1.22). O ECso absoluto para um rrodul ador alostUrico positivo H calculado corro a concentrado que gera urra quantidade seni-rriEkirra de cAIVP, com base nurra janela que vai desde a dopa rri na EC20, que define a resposta rrtnirra, resposta ECr™, defi ni da pel a adi '2o de 5 =M de doparri na.

No ensaio acirra, os conpostos aqui exenpl i f i cados derronst ram urra EC50 absoluta inferior a 300 nM no recetor D1 hurrano. O corrposto do Exenpl 0 1 exibe um EC50 absoluto de 3,66 é 0,67 nM(SEIV) n = 9) com urra resposta rriEki rra de 83,8 é 4, 4% no recept or D1 hurrano. O cocri st al do Exerrpl 0 2 exi be um EC50 absoluto de 1,11 é 0,11 nM(SEM n = 2) no receptor D1 hurrano. O corrposto do Exerrpl 0 3 exibe um EC50 absoluto de II, 75 é 1,27 nM(SEM n = 16) com urra resposta rriEki rra de 91,3 é 2,4% no receptor D1 hurrano. Estes dados demonstram que os conpostos exenpl i f i cados de f/trnxila I s2o rrodul adores alostUricos positivos do receptor D1 humano.

Os efeitos ant i par ki nsoni anos dos conpostos da inven'2o podemser deterrri nados utilizando procedimentos bem conheci dos na tUcnica, tais corro rrodel os ani mai s de at i vi da de loconotora, incluindo efeitos sobre a atividade loconotora basal (habituada) e sobre a aci nesi a induzida na reserpina em recetores de doparri na 1 humanizada (D1) em ratos knock-i n.

Gera'2 o de Recetor de D1 Humano em Rato Knock-in

Um rato transgUnico em que o receptor de doparri na 1 rruri no (D1) H substitu°do por sua contraparte humana pode ser gerado por tUcnicas padr2o. Por exenpl o, os fragmentos genxrri cos de ratos s2o subcl onados da biblioteca de cromossomas artificiais bacterianos RP23 e s2o recl onados num um vetor de segmenta'2o PGK- neo. O quadro de leitura aberto do rato H substitu°do pelo quadro de leitura aberto do recetor D1 humano no ex2 o 2. Um marcador de sele'2o neo a montante do ex2 o 2 H flanqueado por locais de frt para posterior rerm'2o. O f I anqueament o do ex2 o 2 por locais de sele'2o I oxP pernite a op'2o de gerar ratos D1 knock-out cruzando com ratos que expressam o gene ere nucl ease. A linhagem de cHI ul as estarrinais errbr i on®r i as C57BL/6 N B6-3 H cultivada numa camada de alimenta'2o inactivada rri t/S i carnent e de fibroblastos errbr i on®r i os de rato em DIVEM com el evado teor de gl i cose com 20% de soro fetal bovino e 2x106 unidade/l de factor de inibi'2o de I eucerri a. Dez rri I hPes de cHI ul as estarrinais errbri on®r i as, mai s 30 rricrogramas de DNA vetorial linearizado, s2o submetidas a el et r opor a '2 o e submetidas - sele'2o de G418 ( 200 rri cr ogra mas/rri ). Os cl ones s2o isolados e analisados por hi br i da '2 o de Southern (Southern blotting).

Umclone contendo o inserto de tamanho esperado H inserido em blastocistos e os ratos resultantes s2o genoti pados por PCR. Uma quimera masculina H cruzada comuma f 5 mea que contUm o gene da nucl ease FI p para eI i rri nar o marcador de sele'2o. A progenitura contendo o receptor D1 humano sem o marcador de sele'2o H identificada por PCR. Um heterozigoto macho H acasalado com ratos f4 rneas C57BL/6. A progeni tura masculina eferrinina cont endo o recetor D1 humano H acasalada e os horrozi gotos s2o identificados por PCR. O conport ament o e a reprodu'2o dos horrozi gotos s2o normais e a col/Eiia H mantida no estado honozigoto para gera'Pes sucessi vas.

Actividade Loconotora Basal (habituada) A atividade loconotora H medida usando umsistema automatizado para rastrear o rrovi mento em ratos. Os ratos knock-in do recetor D1 humano s2o colocados nas c°maras e 11-lhe per rri t i do habi t uar - se _s c° mar as por 60 rri nut os. Durant e este tenpo, eles rrostramuma locorro'2o reduzida ao longo do tenpo. ApAs a adrri ni st r a'2 o de umconposto da inven'2o, o rrovi mento dos animais H aumentado de forma dependente da dose. IVhi s es peei f i cament e, as caixas de atividade loconotora est2o situadas em quadros retangulares comvigas infravermelhas para medi'2o da atividade motora (atividade horizontal e vertical) chamadas arrtrul a' Pes. A atividade loconotora H registada entre as 7:30 e as 15:00 horas.

Os ratos s2o aleatoriamente designados para grupos de tratamento corro mostrado na Tabel a 1. Cada rato H col ocado i ndi vi dual ment e numa das caixas de atividade locomotora para 60 rrinutos de habitua'2o. Os ratos recebem ent2o a dose por via oral e o nBmero total de arrt>ula'bes H registado por 10 rrinutos para cada rato ao longo de umper°odo de 60 rrinutos. Em ratos com prU-1 rat arnent o de reserpina, η2 o est®inclu°do umper°odo de habita'2o anterior. Assi rp imediatamente ap/ls a dosagerp o nBmero total de arrt>ula'hes H medido por 60 rrinutos. Os dados s2o transferidos do sof tv\are/conput adores para folhas de c® cul o para an® i se posterior. A an® i se estat°stica H realizada utilizando ANOJA uni di reci onal segui da de an® i se p/ls- hoc usando o LSDde Fishers ou o teste de Dunnett. No ensaio locorrotor basal (habituado), os conpostos do Exenpl o 1, 2, 3, 4 e 13 facilitam o movimento em ratos de uma forma sens°vel ~ dose (Tabelas 1 a 5). Isto demonstra que os conpostos do Exenpl o 1, 2, 3, 4 e 13 s2o eficazes na activa'2o locomotora de animais que est2o habituados ao meio arrbiente.

Tabel a 1

Tabel a 2

Tabel a 3

Tabel a 4

Ta bei a 5

Revers2o de Aci nesi a Induzida por Reserpina A reserpi na H umagente de redu'2o da catecol arri na ( esgot a dopam na e norepi nef ri na). Ap/B 18-24 horas, os rat os tratados com reserpina tornamse acinUticos e reduzem a contagem de atividade locorrotora. A aci nesi a induzida por reserpina H avaliada pela medi'2o do efeito dos conpostos sobre a atividade locorrotora apr oxi rradament e 18-24 horas ap/B urna dose βηi ca subcut°nea de 0,15, 0,3 rrg/kg ou 0,6 rrg/kg de reserpi na. O equi pamento ut i I i zado H o mesmo que o utilizado para a atividade locorrotora habituada para a avalia'2o do Exemplo 1 nas Tabelas 6 e 7. Para o corrposto do Exerrpl o 3 (corro mostrado na Tabela 8), um sistema de rastreamento de v°deo Ethovision 8 H usado para medir a at i vi dade I ocorrot ora.

Os ratos knock-in machos do receptor de doparri na D1 humanizada s2o aleatoriamente designados para grupos de tratamento. Cada rato H colocado i ndi vi dual ment e numa das caixas de atividade locorrotora. S2 o medidas arrt>ula'Pes por 10 rrinutos para cada rato atU 60 rrinutos ap/B a adrri ni st r a'2 o. Assi rq os efeitos sobre o conport ament o expl or at Ar i o induzido pela reserpina s2o avaliados por um total de 60 rrinutos. Os dados s2o transferidos do sof tv\are/conput adores para folhas de cO cul o para anOise posterior. A an®l i se estat°stica H realizada utilizando ANOVA uni di reci onal segui da de an®l i se p/B- hoc usando t est e-t.

No ensaio acirra, o conposto do Exenpl o 1 inverte os efeitos dotratamentocomreserpina e restaura o rravi ment o em ratos de forrra relacionada coma dose, medida por feixes i nf raver mel hos (Tabelas 6 e 7). Isto demonstra que o conpost o do Exenpl o 1 H eficaz num modelo in vivo da doen'a de Parki nson.

Tabel a 6

Tabel a 7

No ensaio acirra, o conposto do Exenpl o 3 inverte os ef ei tos do t rat ament o com reser pi na e restaura o rrovi mento em ratos de forrra relacionada com a dose, medida por rastreamento de v°deo (Tabela 8). Isto demonstra que o conposto do Exenpl o 3 H eficaz num rrodel o in vivo da doen'a de Parki nson.

Tabel a 8

Efei os nos n°ves ext racel ul ares de acetil colina no c/frtex pr ilf r ont a I

A acetil colina (Ach) H um neurot rans rri ssor cerebral chave para fun'hes cognitivas superiores. Na doen'a de AI z hei mer h® una degenerado de ®-eas cerebrais corticais de i rrport°nci a para a fun'2o da memfi-ia, como o hi pocanpo com Derda de neur/Eii os col i nllrgi cos. Donepezi I (Aricept-^) H um i ni bi dor da acet i I col i nest erase que eleva os n°veis cerebrais de acetil colina e mostra evi d5 nci a cl°nica de melhoria da cogni'2o. Os agonistas de Doparri na D1 mostraram rrodul ar a I i bera '2 o de acetilcolina e o desenpenho cogni t i vo em rrodel os animais. Acredita-se que os conpost os que aumentam os n°veis ext racel ui ares de Ach no hi pocanpo de ratos knock-in do receptor de doparri na D1 humanizada (hD1KI), que se movem livremente, s2o βΐ ei s no tratamento da disfun'2o cognitiva associada ~ doen'a de Alzheimer.

Procedimento Experimental

Sondas de McrodiOise foram inplantadas estereotaxi camente sob anestesi a comi sof I urano no hi pocanpo ventral ( HPC) de ratos macho hD1KI (Charles River, Reino Unido). As coordenadas de bregma para inplanta'2o da sonda s2 o: AP -3,1; LM+2, 8; DV - 4, 5 mm

No dia seguinte, os animais s2o conectados para pernitir que as sondas sej am perf undi das com CSF artificial (contendo NaCI ( 141 rrtS/>, KC1 ( 5 rrM , IVgCI 2 ( 0, 8 rrM e CaCI 2 (1,5 ni/)). ApAs um per°odo de lavagem de 90 rrinutos, as amostras de dialisato s2o recolhidas em intervalos de 20 rrinutos. Ap/ts duas horas, os animais s2o injetados oral mente com ou ve°culo ( 20% de hi droxi ci propi I bet aci cl odext ri na) ou conposto de teste, e as amostras s2o recolhidas durante mai s 3 horas. Todas as amostras s2o congeladas imediatamente em gelo seco e armazenadas a - 80éC, pendentes de anOise para uma sUrie de neurot ransrri ssores e metab/Hitos.

An® i se de Arrost ras A cada arrost ra de di (SI i se ( 29 =1) H adi ci onado: 20 =1 de tanp2o (Bis-Tris 1M pH10), 20 =L deuterado padr2o rristurado e 260 =i cloreto de dansilo 0,1% p/v (emacetona). As amostras s2o submetidas a vortex e aquecidas a 65éC durante 30 rri n, depois secas sob l\h e ressuspensas em 40 4 50:50 (v/v) ACN: (Sgua (contendo formato de amffiii o 10 rrM e (Sti do f/frnico a 0, 06°Λ). As amostras s2o ent2o cent r i f ugadas a 13000 rpm durante 10 rri n tenperatura arrbiente e 35 4 s2o pipetados emfrascos 03-FIVR; 10 4 s2o injetados no LC-IV5/IV5 usando um CTC PAL HTC-xt Autosanpler. A separa'2o crorrat ogr(Sf i ca de amostras dansiladas (incluindo padrPes de medicamentos) H realizada sob um gradiente usando boubas bin(Srias Shi madzu LC-20AD XR e uma coluna de HPLC Phenomenex Kinetex, XB-C18 de 2, 6 =m A fase mffi/el A consiste em acet oni t r i I o/(Sgua 5% 95% (v/v), formato de amffiii o 2 rrM e (Sti do f/trnico a 0,06% e fase rrcS/el B, acet oni t ri I o/(Sgua 95% 5% (v/v), formato de amffib o 2 rrM e (Sti do f/Irrrico a 0,06%

Um AB Sei ex API 5500 H operado em doi s per°odos, per°odo 1, modo TIS positivo para detec'2o de acetil colina (Ach) e per°odo 2 com modos TIS positivos e negativos.

Tratamento dos dados

Qs dados s2o expressos corro urna per cent agem de um per°odo de controlo prH-inje'2o - obtido pela rrlfldi a das tr5s arrostras antes da entrega do f®rmaco (= 100°Λ) e expressando valores corro uma percentagem desse valor. As an®l i ses estat°sticas s2o real i za das usando RIW Fi t ( ANO/A com medi das repetidas), para corrparar as respostas entre os grupos de tratamento. Um valor de probabilidade de p <0,05 H considerado estatisticamente si gni f i cant e.

Resul t ados A resposta de ACh H calculada medindo a Erea sob a Curva (AUC), em rei a'2o a uma linha de base de controlo de prU- i nj e'2 o, para cada condi '2o de fdrmaco ao longo de um per°odo de duas horas ap/6 a adrrinistra'2o do medicamento. Qs dados s2o ent2o analisados por ANQ/A (Oneway; J IVP v9) seguido de teste t post hoc.

Aadrrinistra'2odo conpost o do Exerrpl o 4 a 30 rrg/ kg de IP ou o i ni bi dor de acetil colina esterase donepezi I o a 1 rrg/kg, IP, produzem um aumento estatisticamente significativo emconpara'2o cornos controlos do ve°culo nos n°veis ext racel ul ares de Ach (Tabela 9). Isto demonstra que o conpost o do Exerrpl o 4 H eficaz num rrodel o i n vi vo da doen'a de AI zhei mer.

Tabel a 9

Efeito do Exenpl o 4 (30 rrg/kg IP) ou Donepezi I (1 rrg/kg IP) na resposta ACh no hi pocanpo dos ratos hD1KI.

Qs conpostos de f /5* rru I a I, que i ncl uem conpost os de f/frrrulas Ia, Ib e Ic, podem ser preparados por processos conhecidos nas técnicas qu°rricas ou por um processo inovador aqui descrito. Um processo para a prepara'2o de umconposto de f/frrrula I e novos intermediários para o fabrico de um conposto de f/frnxila I, proporcionam caract er° st i cas adicionais da inven'2o e s2o ilustrados pelos seguintes pr ocedi rnent os.

Geral mente, umconposto de f/frnxila Ia em que n H 0, 1 ou 2 pode ser preparado a partir de um conposto de f/frnxila II em que n H 0, 1 ou 2 e Pgl representa um grupo protector de hi droxi I o adequado (Esquema 1). Qs valores particulares de Pgl incluem terc-buti I (di met i I ) s i I i I o e t er c-but i I ( di f eni I ) s i I i I o. IVhi s especi f i cament e, umconposto de f/trnxila II emque Pgl Uterc - but i I ( di met i I ) s i I i I o H feito reagir com fluoreto de t et rabut i I amffiii o num solvente tal corro t et rahi drof urano para proporcionar um conposto de frrol a Ia.

Esquema 1

Um conposto de f/frrmla II em que n H 2 e Pgl H t er c-but i I ( di met i I ) s i I i I o podem ser preparados fazendo reagir um corrpost o de f Ar rrul a III comum met i I -1 01 i o num solvente adequado (Esquema 2). Os solventes adequados i nc I uem t et r ahi dr of ur ano. Umconposto de fArrrula III emque Pgl H t erc-but i I ( di met i I ) si I i I o pode ser preparado fazendo reagir umconposto de fArrrula IV com hi drogUni o na presen'a de um cat al i sador de metal de transi '2o adequado tal corro t et r af I uor obor at o de 1, 1 bi s( di - i-

propi I f osf i no) f er roceno( 1, 5- ci cl ooct adi eno) r/ffli o( I). A rea'2o H convenientemente realizada num solvente tal corro metanol. Um composto de f/frrmla IV em que Pgl H terc-but i I ( di met i I ) s i I i I o pode ser preparado fazendo reagir um conposto de f/frrmla V com acri lato de et i I o na presen'a de um cat al i sador de I i ga'2 o de metal de transi '2o tal corro acetato de pal ®di o, um ligando tal como t r i - o-1 ol i I f osf i na e una base tal corro trietianrina. A rea'2o H convenientemente realizada numsolvente tal corro acet oni t r i I o. Umconposto de f/B-rrula V pode ser preparado por a c i I a'2 o de umconposto de f/Braila VIII como (Sei do R1, R2, R3 f eni I acHt i co apropriado na presen'a de umagente activador tal corro hexaf I uor of osf at o de benzot ri azol -1-i I - oxi t ri pi r rol i di nof osf /Ehi o e uma base tal corro trietilarrina. A rea '2 o H conveni ent ement e real i zada numsolvente tal corro di met i I f or marri da.

Esquema 2

Em al t er nat i va, umconposto de f/frnxila II pode ser preparado a partir de umconposto de f/Ernula VI em que Pgl H um grupo protector de hi droxi I o adequado (Esquema 3). Qs valores particulares de Pgl incluem terc-but i I ( di met i I ) si I i I o e t erc-but i I ( di f eni I ) si I i I o. IVbi s es peei f i carne nt e, um conpost odef/frmjlaVI emquePgl H t erc-but i I ( di met i I ) si I i I o H aci I ado com (Sti do 2,6-di cl orof eni I acHt i co na presen'a de um agente activador tal como 1, 1 carboni I di i rri dazol e para proporcionar umconposto de f/frmjla II. A rea'2o H convenientemente realizada num solvente tal como t et rahi drof urano. Umcorrposto de f/trrrula VI pode ser preparado por redu'2o de umconposto de f/frnola VII com hi drogUni o na presen'a de um cat al i sador tal corro pal (Sdi o. A rea'2o H conveni ent ement e realizada numsol vente tal corro etanol. Um corrposto de f/Errula VII pode ser preparado por acoplamento de umconposto de f/frrrula VIII com 2- met i I but - 3- en- 2- ol na presen'a de um cat al i sador tal corro acetato de pal ®di o, um ligando tal corro 2-di ci cl ohexi I f osf i no- 2”, 6”- di met oxi bi f eni I o e uma base de tal carbonato de potdssi o. A rea'2o H conveni entemente real i zada num solvente tal corro di met i I f or rrarri da. Um corrposto de f Ar rrul a VIII pode ser preparado com passos rrôl t i pl os a part i r de um corrposto de f/frnola X através de um corrposto i nt er medi ®r i o de f/frrrula IX corro H conhecido nas técnicas qu°rricas ou por um processo descrito nas Prepara'bes e Exenrpl os. Umconposto de f/frrrula X pode ser preparado corro descrito nas Prepara'Pes e Exenrpl os.

Esquema 3

Um conposto de f/frnol a II em que η 1 0 e Pgl H t erc-but i I ( di met i I ) si I i I o pode ser preparado fazendo reagir umconposto de f/frrmla 111 a com brometo de met i I rragnllsi o num solvente adequado (Esquema 4). Umconposto de f/frrrula 111 a pode ser preparado por a c i I a'2 o de umconposto de f/frnola VII a com o CSC i do R1, R2, R3-f eni I acHt i co apropriado na presen'a de umagente activador tal corro o hexaf I uor of osf at o de benzot ri azol -1-i I - oxi t ri pi rrol i di nof osf/Eii o e uma base tal conotrietilanina. Area'2oHconvenientementerealizada num solvente tal corro di met i I f or marri da. Um conposto de f/Ernola VII a pode ser preparado fazendo reagir umconposto de f/frnola VIII comrron/B<ido de carbono e metanol na presen'a de um cat al i sador de pal (Sdi o (0).

Esquema 4

Um corrposto de f/Errrula II em que η 1 0 e Pgl H t er c-but i I ( di rret i I ) si I i I o pode ser preparado fazendo reagir umcorrposto de f/trrrula 111 b comcloreto de rret i I magnUsi o num solvente adequado (Esquema 5). Umcorrposto de f/trrrula III b pode ser preparado por acila'2o de umcorrposto de f/trrrula VII b com o (§ti do R1, R2, R3- f eni I acHt i co apropriado na presen'a de umagente activador tal corro o hexaf I uorofosfato de benzot ri azol -1-i I - oxi t ri pi rrol i di nof osf/Bri o e uma base tal conotrietilanina. Area'2oHconvenienterrenterealizada num solvente tal corro di rret i I f or marri da. Um corrposto de f/trrrula VII b pode ser preparado fazendo reagir umcorrposto de f/frnxila VIII comacetona na presen'a de um cat al i sador de palCSdio (0) e um ligando como descrito nos exenrpl os e prepara' bes.

Esquema 5

Tal corro aqui utilizado, 'DIV50_ refere-se a di met i I sul f/E<i do; 'Tris_ refere-se a t r i s hi dr oxi met i I arri nomet ano; ' DTT_ r ef er e- se a d i ti ot r e i t ο I ; 'HEC_ refere-se a hi dr oxi et i I cel ul ose; 'DIVEM_ refere-se ao IVfei o de Eagl e IVbdi ficado de Dul becco; 'IVE_ refere-se ao espectro de massa e 'HEPS_ refere-se ao (St i do 4- (2-hi droxi et i I ) -1 - pi perazi noet anosul f/Eli co.

Prepara'2o 1 S°ntese de hidrocloreto de 2-bromo-D-feni I al ani nato de meti I o.

Dissolver 2- br orno- D- f eni I al ani na (22,4 g, 91,8 ιίτιόΙ ) em met anol ( 459 rrt). Adi ci onar cl or et o de acet i I o ( 65, 3 rrt, 917,7 ητποΙ ) " tenperatura arrbiente. Agitar durante 36 horas. Concentrar sob press2o reduzida para se obter o conpost o do t01 ul o ( 27, 2 g, 92, 3 mrol ). (rrfz): 258 ( MM). S°ntese alternativa de hidrocloreto de 2-bromo-D-f eni I al ani nat o de met i I o.

Adicionar cloreto de acetilo ( 562,79 g, 7,17 mol ) a metanol (10,00 L) a OéC num reci pi ent e apropriado. Aquecer a rristura at ϋ 17, 5éC e agitar. Ap/B 30 rrinutos, adicionar 2-brorro- D- f eni I al ani na ( 500,00 g, 2,05 moles) e aquecer ao refluxo. Ap/B 4 horas, arrefecer atU 20éC e remover o solvente sob press2o reduzida para se obter o corrposto do t°tulo ( 589 g, 1,96 mol) como um s/H i do esbranqui 'ado. IVE (mfz): 258( M- Cl (79Br)), 260( M- Cl (81Br)).

Prepara '2 o 2 S°ntese de 2-bromo-N-( met oxi car boni I ) - D- f eni I al ani nat o de rret i I o.

Dissolver hidrocloreto de 2-bromo-D- feni I al ani na to de rret i I o ( 27, 2 g, 92, 3 mmol ) em di cl or omet ano ( 923 rrt) e (Egua (185 rrt). Adicionar bicarbonato de s/Hi o ( 31, 0 g, 369, 4 mmol) e cl orof or mat o de met i I o ( 7, 86 nt, 101, 6 mmol) ~ terrperatura anrbiente. Agitar a rristura 2,5 horas. Diluir com dgua e extrair com di cl or omet ano. Secar os extratos de di cl or omet ano sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cromatografi a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (10-75% de gradiente) para se obter o corrposto do t°tulo (29,1 g, 92,1 mmol ). IVE (mfz): 316 (MM). S°ntese alternativa de 2-bromo-N- ( metoxi carboni I )-D-f eni I al ani nato de met i I o.

Adicionar (%ua (2,94 L) e hi dr ogenocar bonat o de s/Hi o (648,25 g, 7,64 mol) a hidrocloreto de 2-bromo-D-f eni I al ani nat o de met i I o (580 g, 1,91 mol) em di cl or omet ano (9,86 L) a 10éC num r eci pi ent e apropriado. Ap/B 5 minutos, adicionar cloroforrrato de met i I o ( 198,53 g, 2,10 mol) e agitar a rristura a 20éC. Ap/B 3 horas, adicionar (Sgua (2,5 L) e separar as camadas. Extrair a solu'2o aquosa com di cl orometano, secar os extractos org°nicos corrbi nados sobre sulfato de s/£li o e concentrar sob press2o reduzida para se obter o corrposto do t°tul o ( 556 g, 1, 74 rrol ). M> ( mfz): 315, 8 ( MM ( 79Br)), 317, 8 ( MM ( 81 Br))

Prepara '2 o 3 S°ntese de ( 3R) - 5-bromo-3, 4-di hi dro-1 H- i soqui nol i na-2, 3-di car boxi I at o de di meti lo.

Agitar uma mistura de 2-br orro-N-( met oxi car boni I ) -D-f eni I al ani nat o de met i I o (29,1 g, 92,10 γτττόΙ ) e paraf ormal de°do ( 9, 13 g, 101,3 πτπόΙ ) emdti do acllt i co gl aci al (115 rrt, 2,01 rrol) e <Sti do sulfBrico concentrado (38,4 nrL, 719,9 mrrol ) ~ temperatura ambiente durante 7 horas.

Reparti '2 o ent r e dgua e acet at o de et i I o. Separar as camadas e extrair a camada aquosa com acetato de etilo. Corrbi na r os extratos de acetato de etilo e secar sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cromatografi a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (5-40% de gradiente) para se obter o corrposto do t°tulo (27,6 g, 84,0 mrrol). IVE (m(z): 328 ( MM).

Prepara '2 o 3a S°ntese de ( 3R) - 5-bromo-3, 4-di hi dro-1 H- i soqui nol i na-2, 3-di car boxi I at o de di meti lo e (St i do ( 3R) - 5-brorm- 2- rnet oxi car boni I - 3, 4- di hi dro-1 H- i soqui nol i na - 3-car box° I i co.

Ao (St i do acUtico (4,29 L) a 10é C num reci pi ent e apropriado, adicionar 2-bromo-N-( met oxi car boni I ) - Οι eni I al ani nat o ( 572 g, 1,81 rrol ) e par af or mal de° do ( 205,86 g, 2,17 rrol ). ApAs 10 rrinutos, adicionar lentamente (St i do sulfBrico concentrado (2,63 kg, 26,83 rrol) e depois agitar a 35éC. Ap/Is 12 horas, arrefecer atU 15éC e adicionar (Bgua (7,5 L) e acetato de et i I o (6 L). Separar as camadas e re-extrair a camada aquosa com acetato de et i I o (2,5 L). Secar os extractos org°nicos corrbi nados sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter os conpostos do t°tulo com ®ci do acUtico ( 640 g, 1,69 rroles). Espectro de massa (mfz): 3a: 327,95 (MH (79Br)), 330,05 ( IVH-1 (81Br)) . 3b: 314 ( MH( 79Br)), 31 5, 95 ( MH(81Br)).

Prepara '2 o 4

S°ntese de hidrocloreto de ( 3R) - 5-br orro-1, 2, 3, 4-t et rahi droi soqui nol i na-3-car boxi I at o de met i I o.

Di ssol ver ( 3, 5) - br οπό- 3, 4- di hi dr o-1 H- i soqui nol i na-2, 3-di car boxi I at o de di meti lo ( 27,55 g, 84,0 ιίτιόΙ ) em (Sti do clor°drico 5N ( 330, 6 rrt, 1,65 rrol) e aquecer atU ao refluxo durante tr5s dias . Concentrar sob press2o reduzida para se obter um s/H i do branco. Lavar o s/H i do com Uter di et01 i co e secar sob v(Stuo a 40éC durant e a noi t e para se obter hidrocloreto de (St i do ( 3R) - 5-bromo, 1, 2, 3, 4- t et rahi droi soqui nol i na-3-car box° I i co (1: 1) (20,8 g, 71,1 ιίτιόΙ ). Adicionar cloreto de acetilo (50,6 rrt, 711,0 ητηοΙ) a urna rristura a OéC de hidrocloreto de (St i do ( 3R) - 5-br orro-I , 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i na-3-car box° I i co ( 1: 1) ( 20, 8 g, 71,1 ητηοΙ ) em metanol (474 rrt). Aquecer atU a terrperatura arrbiente e agitar durante 36 horas. Concentrar sob press2o reduzida e secar para se obter o corrposto do t°tulo (21,9 g, 71,4 ιίτιόΙ ) . IV5 ( rtfz) : 270 ( MH) .

Prepara '2 o 5 S°ntese de hidrocloreto de (Sc i do ( 3R) - 5-brorro-I , 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i na - 3- car box° I i co

Adicionar (Sgua (1,3 L) e (St i do clor°drico a 36,5% (9,07 Kg, 90,81 rrol es) a urna rristura de ( 3R) - 5-br orno-3, 4-di hi dro-1 H-i soqui nol i na-2, 3-di car boxi I at o de di met i I o e (SCi do ( 3R) - 5- bromo- 2- met oxi car boni I - 3, 4- di hi dro-1 H- i soqui nol i na-3-car box° I i co (Prepara'2o 3a) ( 520 g, 1,27 moles) num reci pi ent e apropriado e agitar a rristura a 95éC. Ap/ls 12 horas arrefecer a rristura a 10éC e agitar durante 15 rrinutos. Filtrar a rristura e secar o s/Hido sob v®cuo a 40éC d® o conposto do t°tulo ( 332 g, 1,13 moles). IV5 (míz): 256, 1 ( M- Cl ( 79Br)), 258( M- Cl (81Br)) .

Prepara '2 o 6 S°ntese de 3-met i I - ( 3R) - 5-br orno-3, 4'di hi dr o-1 H-i soqui nol i na-2, 3-di car boxi I at o de 2-1 er c-but i I o.

Dissolver hidrocloreto de ( 3R) - 5-br orro-1, 2, 3, 4-t et r ahi dr oi soqui nol i na - 3- car boxi I at o de met i I o ( 21, 0 g, 68, 5 ιίτιόΙ ) em 1,4- di oxano ( 685 rrt). Adicionar urrasolu'2osaturada de bicarbonato de s/ffli o ( 685 rrL, 17,5 rrol ) e di-terc-but i I di car bonat o (29,9 g, 137,0 ιύπόΙ ) - tenperatura arrbiente. Agitar a rristura bifd&amp;ica durante 90 rri n. Extrair comacetato de et i I o. Secar o acetato de et i I o sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cromatograf i a em gel de s01 i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos ( 5-50% de gradiente) para se obter o conposto do t°tulo (19,5 g, 52,7 rrrrol ). IVE ( rrfz) : 270 ( MtBOC+1) .

Prepara '2 o 7 S°ntese de [ ( 3R) - 5-brorro-1, 2, 3, 4-1 et ra- hi droi soqui nol i n- 3- i I ] met a nol .

Adicionar hidreto de alurrtnio e I 01 i o (2 L, 2,00 rrol, 1 M em THF) a hidrocloreto de (St i do ( 3R) - 5-br orro-1, 2, 3, 4-1 et r ahi dr oi soqui nol i na-3-car box° I i co (325,4 g, 1,11 rrol) em t et rahi drof urano (4,88 L) a -35éC num r eci pi ent e apropriado, depois aquecer atU 25éC durante 60 rrinutos e agitar. Ap/Is 3 horas, arrefecer a rristura atU - 5éC, depois adicionar (Egua (76 rrt), 15%p/p de hi dr /Bei do de s/Bdi o aquoso (76 rrt) e (Sgua (228 rrL). Aquecer a nistura atU 25éC, adicionar sulfato de rragnUsi o anidro (750 g) e agitar. Filtrar a nistura e concentrar sob press2o reduzida para se obter um s/H i do. Adicionar di cl ororret ano ( 690 rrt) ao s/H i do e a pasta durante 30 rrinutos antes da f i I t r a'2 o para se obter um s/H i do. Secar o s/H i do sob v(Stuo a 35éC d (D o conposto do t01 ul o (148.9 g, 0,55 mol ). IVS (míz): 242( MM ( 79Br)), 244( MH(81 Br)) .

Prepara '2 o 8 S°ntese de ( 3R) - 5-br orro-3-( hi dr oxi met i I ) - 3, 4-di hi dro-1 H-i soqui nol i na-2-car boxi I at o de terc-butilo.

Adicionar metanol (10,1 rrL, 248,5 mmDl) e boro-hidreto de I 01 i o (99,4 rrL, 198,8 mmDl , 2 M em THF) a uma solu'2o de 3-met i I - ( 3R) - 5-bromo-3, 4-di hi dro-1H- i soqui nol i na-2, 3-di car boxi I at o de 2-1 er c-but i I o (18,4 g, 49,7 mmDl) em t et rahi drof urano (497 rrL) ~ tenperatura anfoiente num banho de (Sgua. Agitar durante 40 rrin e ext i ngui r a rea'2o com (Sgua. Extrair com acetato de et i I o. Secar os ext ractos de acetato de etilo sobre sulfato de s/fflio, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cromatografi a emgel de s°l i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos ( 5-80% gradi ent e). Secar sob alto v(Stuo durante a noite para se obter o composto do t°tulo corro um s/H i do branco (19,1 g, 55,8 mnol ). IV5 (míz): 286 (M-tBu+1).

Prepara'2o 9 S°ntese de ( 3R) - 5-br orro-3-({[ t er c-but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i na.

Adicionar <St i do t ri f I uoroac^t i co (75,5 rrL, 998,3 mnol) a solu'2o de ( 3R) - 5-brorro-3 ( hi droxi met i I ) - 3, 4- di -hi dro-1 H-i soqui nol i na-2-car boxi I at o de terc-butilo (15,5 g, 45.3 rmol ) em di cl ororret ano ( 226 rrL) - temperatura ambiente. Agitar 30 rri n e concentrar sob press2o reduzida. Secar sob vdtuo para se obter [ ( 3R) - 5-br orro-1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n-3-i I ] met anol ; ®ci do 2, 2, 2-1 ri f I uoroacHt i co corro um s/H i do hBrri do. Dissolver [ ( 3R) - 5-br orro-1, 2, 3, 4-t et ra-hi droi soqui nol i n-3-i I ] metanol; (Sei do 2,2,2-t ri f I uoroacHt i co em di cl ororret ano ( 753 rrL). Adicionar 1 H-irridazole (51,3 g, 753 mnol), N, N- di met i I -4-pi ri di narri na (460 rrg, 3,77 mnol) e t - but i I di met i I cl orossi I ano (13,6 g, 90.4 mnol). Agitar ~ tenperatura arrbiente durante a noite. Adicionar solu'2o saturada de cloreto de amffrii o e extrair com di cl ororret ano. Secar os extratos de di cl or omet ano sobre sulfato de s/Bdi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida.

Corrbi nar como produto em bruto a partir de uma sequ, nci a de rea'2o subst anci al ment e i dítica com 19,4 rrrrol de (3R)-5-brorro- 3- ( hi droxi met i I) - 3, 4- di hi dro-1 H- i soqui nol i na- 2-carboxilato de terc-butilo. Purificar o res°duo por crorratograf i a emgel de s° I i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (5-40% de gradiente) para se obter o corrposto do t°tulo (14,3 g, 40,1 rrrrol). IVE (mfz): 356 (MM). S°ntese alternativa de ( 3R) - 5-br orro-3-({[ t er c-but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi} met i 1)-1,2,3,4-t et rahi droi soqui nol i na.

Adicionar t er c-but i I di met i I cl or ossi I ano (193,7 g, 1,29 rrol ) a uma rristura de [ ( 3R) - 5-brorro-1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n-3-i I ] met anol (148,9 g, 0,58 rrol), 1H-inidazole ( 202,9 g, 2,92 rrol), 4-di meti I a rri nopi ri di na (0,72 g, 5,84 mrrol ) e ^ ^ di met i I f or marri da (1,04 L) em di cl oromet ano (2,61 L) a 20éC e agitar num recipiente apropriado. Ap/ts 3 horas, arrefecer a rristura atU 10éC e adicionar uma solu'2o aquosa saturada de cloreto de amffiii o (1,3 L). Extrair a solu'2o aquosa com di cl oromet ano e lavar os extractos org°nicos combinados com sal moura (2 x 2L), secar sobre sulfato de s/ffli o e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Dissolver o res°duo em Uter terc-butilo met Mico (1,5 L) e lavar comsalrroura (2 x 1 L). Diluir a fase org°nica comtolueno (5 L) e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Adicionar tolueno (2,6 L) ao res°duo e concentrar sob press2o reduzida para se obter o corrposto do t°tulo (210 g, 0,53 γτττόΙ ). IVE (mfz): 356 ( MM ( 79Br)), 358 ( MH ( »i Br)).

Prepara'2o 10 S°ntese de ( 3R) - 5- br orm- 3- ({[ t er c- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi } met i I ) - 3, 4- di hi droi soqui nol i na.

Dissolver ( 3R) - 5- br orno- 3- ({[ t er c- but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi} met i I) -1, 2, 3, 4- t et rahi droi soqui nol i na (4,2 g, 11,8 γτττόΙ ) emUter di et01 i c o (118 rrL) . Adi ci onar N- cl orossucci ni rri da ( 2, 36 g, 17, 7 mnrol). Agitar 30 rri n e temperatura ambiente e concentrar sob press2o reduzida. Dissolver o res°duo em hi dr/txi do de potdSsio (42,0 mt, 30,3 γτττόΙ, 5% em IVbOH) e agitar durante 30 rri n temperatura ambiente. Verter em (Sgua e extrair com di cl oromet ano. Secar os extratos de di cl or omet ano sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por crorratografi a em gel de s°lica ei ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (5-100% de gradiente) para se obter o composto do t°tulo (3,40 g, 9,59 ιίτιόΙ ). IV5 ( rrfz): 354 ( MM). S°ntese alternativa de ( 3R) - 5-brorro-3-({[ t erc-but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) - 3, 4- di - hi droi soqui nol i na.

Adicionar N-cl or ossucci ni rri da (106,7 g, 0,79 rrol ) a urra solu'2o de ( 3R) - 5- br orno- 3- ({[ t er c- but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi} met i I) -1, 2, 3, 4- t et rahi droi soqui nol i na ( 220 g, 0, 52 rrol ) emtet rahi drof urano (3,85 L) a 20éC num r eci pi ent e apropriado e agitar. Ap/B 30 rrinutos, concentrar a rristura sob press2o reduzida e dissolver os res°duos em hi dr/txi do de potG&amp;sio a 5% p/p em metanol (2,2 L, 1,69 moles) e agitar a 20éC. Ap/B 30 rrinutos, adicionar a rristura ~ dgua (3 L) e extrair tr,s vezes com di cl oromet ano (3 x 1 L). Secar os extractos org°nicos corrbi nados sobre sulfato de rragnUsi o anidro e concentrar sob press2o reduzida para dar o conposto do t°tulo (210 g, 0,50 rrol). IVB(rrfz): 354 ( MH ( 79Br)), 356 ( IVH-1 (81Br)) .

Prepara '2 ο 11 S°ntese de (1S, 3R) - 5-br orro-3-({[ t er c- but i I ( di rret i I) s i I i I ] oxi} mst i I ) -1 - rret i 1-1,2,3,4-t et rahi droi soqui nol i na. .

Dissolver ( 3R) - 5-br orno-3-({[ t er c- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) - 3, 4- di hi droi soqui nol i na ( 3, 4 g, 9,59 ιίτιόΙ ) emUter di et01 i c o (160 rrL). Arrefecer atU - 78éC sobre umbanho de gel o seco - acetona. Adi ci onar cl oreto de met i I rragnUsi o ( 26, 9 rrL, 80, 6 ιίτιόΙ , 3M emTHF) gota a gota. Aquecer a rea'2o lentamente atU - terrperatura arrbiente e agitar durante a noite. Extinguir lentamente com sol u'2o saturada de cloreto de amffiii o. Extrair com di cl or omet ano e secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Corrbi nar como produto em bruto a partir de uma sequ, nci a de rea'2o substanci al mente id4ntica com 1,73 ιύττόΙ de ( 3R) - 5-br orno-3-({[ t er c- but i I ( di met i I) si I i I ] oxi} met i I) - 3, 4- di hi droi soqui nol i na. Purificar os res°duos combinados por cr omat ogr af i a emgel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (5-65% de gradiente) para se obter o composto do t°tulo (3,78 g, 10,2 ιίπττόΙ ). M> ( rdz): 370 ( MM). A configura'2o relativa do corrposto (IS, 3R) - 5-bromo- 3- ({[ t er c - but i I ( di meti I) si I i I ] oxi} met i I) -1 - rret i I - 1, 2, 3, 4-1et rahi droi soqui nol i na H deterrrinada por espect roscopi a RMM usando experi4ncias de NOE uni di mensi onai s (I D- NOESY). A exci t a '2 o sei ect i va do grupo met i I o a 1,30 ppmd®origema um NOE para Ha a 3,11 ppm

Este aprimoramento NOE H apenas consistente com urra configura'2o na qual o met i I o e Ha est2o no mesmo lado do anel {is/Brero trans) porque no is/Brero ci s os protbes de met i I o est2o rruito longe de Ha para mostrar um NOE. Uma vez que a qu°rrica absoluta para a posi'2o 3 H conhecida por ser R, ent2 o a qu° rri ca absol ut a na posi '2 o 1 H deduzi da para ser S.

S°ntese alternativa de (1S, 3R) - 5-br orno-3-({[ t er c-but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi} met i I ) -1 - met i 1-1,2,3,4-t et rahi droi soqui nol i na.

Adicionar cloreto de rnet i I rragnlls i o (0,66 L, 1,99 rrol , 3 M em THF) a urra solu'2o de ( 3R) - 5-brorro-3-({[terc-but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) - 3, 4- di - hi droi soqui nol i na (93,5 g, 0,24 rrol ) emUter di et01 i co (2,8 L) a - 65éC num recipiente apropriado. Em seguida, aquecer a rristura de rea'2o atU 20éC durante 2 horas e agitar. Ap/B 16 horas, arrefecer a rristura a OéC e extinguir a rea'2o com sol u'2o aquosa saturada de cloreto de arrffiii o (2,5 L) e extrair com acetato de et i I o (2,5 L) e filtrar a rristura. Lavar os extractos org°nicos corrbi nados com sal moura, secar sobre sulfato de rragnflsi o anidro e concentrar sob press2o reduzida para dar o conpost o do t°tulo embruto corro um/Heo. Corrbi na r o /H eo com produtos em bruto de sequ5 nci as de rea'2o subst anci al ment e id5nticas com48 mrrol e 229 mrrol de [ ( 3R) -5- brorro- 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 3- i I ] met oxi -1 er c - but i I - di met i I si I ano e purificSHos por c r orrat ogr af i a em gel de s°l i ca el ui ndo comacetato de et i I o emhexanos (gradiente 5-65% de acetato de et i I o) para se obter o corrposto do t°tulo (151 g, 0,41 rrol). IVE (rrfz): 370,1 (MM (79Br)), 372,1 ( MM (81 Br)).

Prepara'2o 12 S°ntese de ( 1S, 3R) - 5-br orno-3-[ [ t er c- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi met i I ] -1- met i I - 3, 4- di hi dro-1 H-i soqui nol i na-2-car boxi I at o de terc-butilo.

Adicionar di carbonato de di -1 erc-but i I o (1,23 g, 5,54 ιίτιόΙ ) a urna solu'2o de [(1S, 3R)-5-br orno-1 - met i I - 1, 2, 3, 4-1 et r a- hi dr oi soqui nol i n- 3- i I ] met oxi -1 er c - but i I - di met i I - si I ano ( 2, 01 g, 5, 43 ιίτιόΙ ) em di cl oromet ano (15 rrt).

Agitar a nistura de rea'2o durante a noite - terrperatura arrbiente. Concentrar sob press2o reduzida. Dissolver o res°duo em di cl oromet ano e lavar comdgua e salmoura, secar sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar por cromat ograf i a em gel de s°lica ei ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (0-4% de gradiente) para se obter o conposto do t°tulo (2,54 g, 5,40 ητηοΙ ). IV5 ( rrfz) : 370, 2, 372, 2 ( M BOC+1) .

Prepara'2o 13 S°ntese de 1 - [ ( 1S, 3R) - 5-br orno-3-({[ t er c- but i I ( di met i I) s i I i I ] oxi} met i I ) -1 - met i I - 3, 4- di -hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] - 2- ( 2, 6- di cI or of eni I ) et anona.

Adicionar hexafI uorofosfato de benzotriazol-1-il-oxi t ri pi rrol i di nof osf/Bni o (7,97 g, 15,3 ητηοΙ ) a urra rristura de ( 1S, 3R) - 5- brorro- 3- ({[ t erc - but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi } met i I ) -1 - met i I -1, 2, 3, 4-tetrahi droi soqui nol i na (3,78 g, 10,2 ιίτιόΙ ) e (Sti do 2, 6-di cl orofeni I acilti co (2,30 g, 11,2 ητηοΙ) em di met i I f or rrarri da (51,0 rrt). Adicionar trietilarrina (2,13 rrt, 15,3 mmDl) e agitar - temperatura ambiente 3 horas. Diluir com (Sgua e extrair com di cl or omet ano. Secar os extratos de di cl or omet ano sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cr onrat ogr af i a em gel de s°l i ca el ui ndo com acetato de et i I o: hexanos ( 5-50% de gradiente) para se obter o composto do t°tulo (4,70 g, 8,43 ητηοΙ). IVE (rrfz): 556 (Mt-1).

Prepara'2o 14 S° nt ese de ( 2S) - 3- {(1S, 3R) - 3- ({[ t er c- but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi} met i I )-2-[(2, 6-di cl orofeni I )aceti I ]-1-met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5- i I} prop- 2- enoat o.

Borbulhar azoto através de acet oni t r i I o. Colocar t ri - o-1 ol i I f osf i na (72,3 rrg, 0,23 rmol), acetato de pal ®di o (II) (11, 8 rrg, 0, 052 nrm>l) e acet oni t r i I o ( 0, 96 nl) num vaso de rricroondas. Agitar durante 10 rri n. Adicionar acrilato de etilo (0, 31 rrt, 2,88 γτπόΙ ). Adicionar 1 - [ (1S, 3R) - 5-br orno-3-({[ t erc- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) -1- met il-3,4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) et anona (0,54 g, 0,96 ιίπγτόΙ ). Adicionar trieti lamina (0,40 rrt, 2,88 mrml ) e agitar vi gor osament e. Soprar azoto pela superf°cie da rea'2o. Selar o recipiente e aquecer atll 160éC durante 35 rri n no rricroondas. Arrefecer atll - terrperatura arrbiente e diluir com acetato de etilo. Filtra o precipitado e lavar com acetato de etilo. Concentrar o filtrado sob press2o reduzida para se obter um /H eo castanho. Conrbi nar com o produto em bruto a partir de urra sequ, nci a de rea'2o subst anci al ment e i dA nt i ca com 0,27 mrml de 1 - [ (IS, 3R) - 5- bromo- 3- ({[ t er c - but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I) et anona. Purificar os res°duos combinados por cr omat ogr af i a em gel de s° I i ca ei ui ndo com acet at o de et i I o: hexanos ( gr adi ent e, 0-10°Λ) par a se obt er o conrpost o do t01 ul o ( 0, 54 g, 0, 93 ιίπττόΙ ). IVB(mTz): 576 (MH). O corrposto seguinte H preparado essenci al ment e pelo rrfltodo da Prepara'2o 14.

Prepara'2o 16

S°ntese de (1S, 3R) - 3- [ [ t er c-but i I ( di met i I) si I i I ] oxi met i I ] - 5- ( 3- et oxi - 3- oxo- pr opi I) -1 - met i I -3, 4-di hi dr o-1 H-i soqui nol i na-2-car boxi I at o de terc-butilo

Adicione 10% de pai ddi o em carbono (0,09 g) a um frasco Parr de 100 ni . Purgar comazoto. Adicionar etanol (5 rrt) para rrol har o catalisador. Adicionar ( 1S, 3R) - 3- [ [ t er c-but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi met i I ] - 5- [ ( E) - 3- et oxi - 3- oxo- prop-1-eni I ] -1 - met i I o- 3, 4- di hi dro-1 H- i soqui nol i na - 2- car boxi I at o de t erc - but i I o ( 330 rrg, 0, 67 mrol ) corro urna solu'2o em et a nol (15 rrt). Fechar o frasco e purgar com azoto. Purgar o recipiente com hi drogUni o e pressurizar atU 414 kPa de hi drogUni o. Agitar ~ tenperatura arrbiente durante 1,5 horas. Ventilar e abrir o recipiente. Filtrar a rristura de rea'2o. Concentrar o filtrado sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cromatografi a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de etilo: hexanos (0-10% de gradiente) para se obter o corrpost o do t01 ul o como um/H eo i ncol or ( 252 g, 0, 51 mnrol ). IVE ( rrfz): 392, 2 ( MtBOC+1).

Prepara'2o 17 S° nt ese de 3-{(1S, 3R) - 3-({[ t er c-but i I ( di met i I) si I i I ] oxi} met i I ) - 2- [ ( 2, 6- di cl orof eni I ) acet i I ] -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n-5-i I} propanoat o de etilo.

Na caixa seca para urra autoclave Parr de 85 rri com barra de agita'2o e forro de vidro, adicionar t et raf I uoroborat o de 1,1~-bis(di-i- propi I f osf i no) f erroceno( 1, 5-ci cl ooctadi eno) r/ffli o( I) (7 ng, 0,010 ιίπττόΙ ). Adicionar ( 2E) - 3-{( 1S, 3R) - 3-({[ t er c-but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) - 2- [ ( 2, 6- di cl orof eni I ) acet i I ] -1-met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5- i I} prop- 2- enoat o de et i I o (133 rrg, 0, 23 ιίπττόΙ ) como uma sol u'2 o em met a nol ani dro (5 rrt). Selar o autoclave e retirar da caixa seca. Purgar o recipiente com hidrogUnio e pressurizar atU 690 kPa de hidrogénio. Agitar - terrperatura anrbiente durante a noite.

Ventilar e abrir o recipiente. Concentrar a rristura de rea'2o sob press2o reduzida.

Purificar o res°duo por cr orrat ogr af i a em gel de s° I i ca el ui ndo com 25% de Ht er t - but01 i co de met i I o: hexanos para se obter o corrposto do t°tulo corro um /H eo incolor ( 121 g, 0.21 ιίπττόΙ ). IV5 ( rciz): 578 ( MH).

Prepara'2o 18 S°ntese de hidrocloreto de (1S, 3R) - 5-bromo-3-({[ t erc - but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) -1 - met i 1-1,2,3,4-t et rahi droi soqui nol i na.

Adicionar cloreto de hi drogUni o (267,24 g, 1,02 rrol , 4M em 1,4-dioxano) a (1S, 3R) - 5-br orno-3-({[ t er c-but i I ( di rret i I ) s i I i I ] oxi} met i I ) -1 - met il-1,2,3,4-tet rahi droi soqui nol i na (419 g, 1,02 rrol) em acetato de isopropilo (4,19 L) a 10éC e agitar durante 15 rrinutos num recipiente apropriado. Filtrar a rristura e lavar o bolo de f i 11 r a '2 o comacetato de isopropilo (2, 5 L), secar no filtro durante 30 rrinutos e depois sob vCStuo num forno a 40éC durante 16 horas para se obter o conposto do t°tulo ( 380 g, 0,89 rrol). NS(rtíz): 370 ( M- Cl (79Br)), 372 ( M- Cl (81 Br)).

Prepara'2o 19 S° nt ese de ( E) - 4- [ ( 1S, 3R) - 3- [ [ t er c- but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi met i I ] -1 - rret il-1,2,3,4-t et rahi droi soqui nol i n- 5- i I ] - 2- met i I - but - 3- en- 2- ol .

Adicionar cloridrato de (1S, 3R) - 5-br orro-3-({[ t erc - but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) -1- met i I -1, 2, 3, 4-t et r ahi dr oi soqui nol i na (310 g, 723,83 rrrrol) e 2-meti I but - 3-en- 2- ol ( 508, 95 g, 5, 79 rrol ) a N, N- di met i I f or rrarri da (1, 08 L) num r eci pi ent e apropriado e desgasei f i car borbulhando azoto através da solu'2o durante 10 rrinutos. Adicionar carbonato de potG&amp;sio (315,12 g, 2,28 rrol), 2-di ci cl ohexi I f osf i no-2“, 6“-di met oxi bi f eni I o (15,32 g, 36,19 rrrrol ) e acetato de pal ®di ο (II) (8,29 g, 36,19 rrrrol) e desgasei f i car por borbul hamento de azoto através da mistura por 15 rrinutos, depois aquecer atU 125éC. Ap/6 16 horas, arrefecer atU 20éC e diluir com acetato de etilo (1,5 L) e (Sgua (2,5 L). Lavar a carrada de acetato de etilo com sal moura (2,5 L), depois secar sobre sulfato de s/Hi o e concentrar sob press2o reduzida para se obter umres°duo. Purificar o res°duo por c r orrat ogr af i a flash, el ui ndo com 0-50% de acetato de etilo em i sohexanos para se obter o conposto do t°tulo (193 g, 459,1 rmrol ). IVE (míz): 376 (MH).

Prepara '2 o 20 S°ntese de 4-[ ( 1S, 3R) - 3-[ [ t er c-but i I o( di met i I ) si I i I ] oxi met i I ] -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5- i I ] - 2- met i I - but ano- 2- ol .

Adi ci onar uma sol u'2 o de ( E) - 4- [ (1S, 3R) - 3- [ [ t er c-but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi met i I ] -1 - met i I -1, 2, 3, 4-t et rahi droi soqui nol i n- 5- i I o] - 2- met i I - but - 3- en- 2- ol (68 g, 168,83 ιίτιόΙ ) emetanol (816 rrt) para umvaso de hidrogena'2o sob press2o e adicionar pai (Sdi o a 5% sobre carbono activado ( 35,83 g, 16,84 ιύϊτόΙ ). Purgar o recipiente com gds de hidrogénio, pressurizar até 470 kPa de g<SS de hidrogénio e agi t ar a 251 C. Ap/Is 16 horas, vent i I ar o reci pi ent e e filtrar a rristura de rea'2o através de terra de di atonrtSteas. Lavar a terra de diatorriSteas com acetato de et i I o e concentrar o filtrado sob press2o reduzida para se obter um /H eo. Dissolver o /H eo em acetato de et i I o (1 L) e concentrar sob press2o reduzida para se obter o conrposto do t°tulo (64 g, 161 mrrol). M> (rrfz): 378,2 (MH).

Prepara'2o 21 S°ntese de 1-[ (1S, 3R) - 3-({[ t er c-but i I ( di met i I) s i I i I ] oxi} met i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I but i I ) -1 - met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) et anona.

Di ssol ver 4- [ (1S, 3R) - 3- [ [ t erc - but i I o( di met i I ) si I i I ] oxi met i I ] -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5- i I ] - 2-met i I but ano-2-ol (0,21 g, 0,36 ιίτιόΙ ) em THF (2,0 rrt). Arrefecer em banho de gelo seco - acetona. Adicionar met i I - I 01 i o (0,67 rrt, 1,07 ιίτιόΙ , 1,6 M em |er di et01 i co) lentamente e agitar o banho de gelo seco - acetona durante 4 horas. Adicionar uma solu'2o saturada de cloreto de amffiiii o (2 rrt). Remover o banho de gelo seco - acetona e deixar a rristura aquecer atU a temperatura ambiente. Extrair com acetato de et i I o. Combinar os extratos de acetato de et i I o; lavar comsal moura, secar sobre sulfato de s/Rdi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um /H eo incolor. Purificar o res°duo por cr omat ogr af i a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (gradiente, 0-309Q para se obter o composto do t°tul o como um/B eo I 0 nrpi do, incolor (0,16 g, 0,29 mmol ). MS (m(z): 564 (MM). S°ntese alternativa de 1-[( 1S, 3R)-3-({[terc-but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi} met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] - 2- ( 2, 6-di cl orof eni I) et anona.

Adicionar 1, 1 car boni I di i rri dazol e (112,9 g, 682,36 ιίτιόΙ ) a urra rristura de (Sti do 2, 6-di cl orofeni I acilti co ( 173,09 g, 818,83 ιίτιόΙ ) em t et rahi drof urano (1,63 L) num recipiente apropriado e agitar a 25éC. Ap/B 1 hora adicionar urra solu'2o de 4-[(1S,3R)-3 -[[terc- but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi met i I ] -1 - met il-1,2,3,4-tetrahi droi soqui nol i η-5-i I ]-2- rret i l-butan-2-ol (217 g, 545, 89 ηττοΙ ) emtetrahidrofurano(1,63L) narristura, aquecer a rristura atU 45éC e agitar. Ap/B 24 horas, arrefecer a rristura atU 20éC, remover 2 L de t et r ahi dr of ur ano concent rando-se sob press2o reduzida e diluir os res°duos com acetato de et i I o (2,5 L). Lavar a solu'2o de acetato de et i I o com cloreto de amffiii o aquoso saturado (1,5 L), hi dr/B(i do de s/Hi o aquoso 1 M (1 L), (Bgua (1 L) e salmoura (1,5 L). Secar os org°nicos sobre sulfato de s/Bdi o anidro e concentrar sob press2o reduzida para se obter o composto do t01 ul o ( 376 g, 532,70 mol ). l\Z5(mTz): 564, 2( MM ( 35CI )), 566,2 ( IVH-1 ( <37>CI )) · O conposto seguinte H preparado essenci al ment e pelo rrfltodo da Prepara'2o 21.

Exenplο 1 S°ntese de 2-(2, 6-di cl orofeni I ) - 1-[( 1S, 3R)-3-( hi dr oxi met i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I but i I ) -1 - met i 1-3,4-di- hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona.

Dissolver 1-[(1S,3R)-3-({[terc - but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi } met i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I but i I ) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] - 2- ( 2, 6- di cI orof eni I ) et anona (0,16 g, 0,28 ιτττόΙ ) em THF (2,8 nt). Adicionar fluoreto de t et rabut i I amffiii o (0,30 nt, 0,30 mmol , 1 M em THF). Agitar durante 40 rri n. Adicionar uma solu'2o saturada de cloreto de amflrii o e extrair com acetato de et i I o. Corrbi nar os extratos de acetato de et i I o; lavar com<Sgua e salmoura, secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por cromatografi a emgel de s° I i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (gradi ent e, 0-60°4) para se obter o corrposto do t°tul o como uma espuma branca (0,12 g, 0,26 mmol ). IV5 (rtíz): 450 ( MH).

Adicionar fluoreto de t et r a- n- but i I amffirii o (651,71 nt, 651,71 γτττόΙ , 1 MemTHF) a uma solu'2o de 1 - [ (1S, 3R) - 3-[ [ t erc - but i I ( di meti I ) si I i I ] oxi meti I ] - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I -but i I ) -1 - met il-3, 4-di-hidroi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] - 2- ( 2, 6-di cl orof eni I ) et anona (400 g, 566,71 ητηοΙ) em t et rahi drof urano (4 L) a 5éC num recipiente apropriado. Aquecer a nistura atU 20éC e agitar. Ap/B 3 horas, remover 3 L de t et rahi drof urano concent rando-se sob press2o reduzida e diluir os res°duos comacetato de et i I o (2,5 L). Lavar os org°nicos com cloreto de amffiii o aquoso saturado (2 L), (Egua (2 L) e salmoura (2x2 L). Secar a solu'2o de acetato de etilo sobre sulfato de s/Hi o anidro e concentrar sob press2o reduzida para se obter um /H eo. Dissolver este /H eo em 2-propanol (2,5 L) e concentrar sob press2o reduzida para se obter um/0 eo. Purificar por SFC qui ral utilizando coluna AS- H ( 50 x 250 mrrj tamanho de part°cula de 5 rrf cr on) el ui ndo com 80% de di /Bei do de carbono supercr°tico e 20% de uma sol ιΓ2 ο 0, 2% de di et i I rnet i I arri na em ® c°o1 isoprop°lico a 280 g/rrin. para se obter o corrposto do t°tulo (182,8 g> 389,62 irmol ). IVB(mTz): 450, 2( MH( 35CI )) - 452, 2 ( IVH-1 ( 37Cl )) -Rot a'2 o /Ept i c a: [ ] 20^ 39, 4é (c = 0,95, MsOH).

Exenplo 2 A cocr i st al i za'2 0 de 2-(2, 6-di cl orofeni I )-1 [ (1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4-di - hi droi soqui nol i n-2( 1 Η) - i I ] et anona e (Sti do 4- hi droxi benz/H co.

Qs conpostos 2-( 2, 6-di cl orof eni I ) -1-[ (1S, 3R) - 3-( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met il-3,4-di hi dr oi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ] et anona (402,56 ng) e (Sti do 4-hi droxi benz/B co (144,7 ng) s2o colocados numf rasco de 40 rrt juntamente com uma barra de agita'2o. O frasco para inject®/eis H cheio atU a borda comdgua (39 rrL). A amostra H agitada a 1200 rpm a 50éC (conf i gur a'2 o da agita'2o). O /B eo de si 10ci o H goteado em torno da base do frasco para garantir uma boa t ransf er, nci a tUrnica com a placa de aquecimento. Resulta uma pasta branca grossa compeda'os de s/H i do esbranqui 'ado. Ap/B urna hora de suspens2o, um terrnffimetro inserido através do septo do frasco de leitura indicou 40, 5éC, e a amostra t ransf orrrou- se numa pasta homogénea de s/H i do branco brilhante. Ap/B a pasta durante a noite, a amostra H uma suspens2o horrogUnea de s/H i do branco floculante. O terrnffimetro \i 43, 1éC. O rricrosc/φϊο de luz polarizada mostra bi r r ef r i ng5 nci a conpleta. O s/H i do branco brilhante H isola do por filtra'2o sob v(St uo e seco no I ocal sob corrente de ar durante 10 rrinutos. A amostra H colocada no forno de v®cuo a 75éC durante duas horas para proporcionar a conpos i '2 o do t°tulo corro ums/Hido cristalino branco (484 rrg, rendimento de 94, 9°4).

In°cio do ponto de fus2o = 160, OéC (calorimetria de varrimento diferencial).

Difra'2o de P/E de Raio X

Os padr Pes de difrac'2o de raios X (XRD) de s/H i dos cristalinos s2o obtidos em um di f ract/fmet ro de p/E de raios X Bruker D4 Endeavour, equipado com uma fonte CuKa = = 1.54060 A) e umdetector Vantec, operando a 35 kV e 50 ιη. A amostra H varrida entre 4 e 40é em2:; comumtamanho de passo de 0, 009é em 2:: e uma taxa de varredura de 0,5 segundos/passo, e com di verg5 nci a de 0,6 mrr) 5,28 mm fixo anti-scatter e umdetector de fendas de 9, 5 mm O p/E seco H errbal ado num suporte de amostras de quartzo e H obtida uma superf°cie lisa utilizando uma l°rrina de vidro. Os padrPes de difrac'2o da forma cristal i na s2o recolhi dos - t enper at ura arrbiente e hurri dade relativa. § bem conheci do na técnica da cristalografia que, para qualquer dada forma cristalina, as intensidades relativas dos picos de difrac'2o podem variar devido ~ orienta'2o preferida resultante de factores tais corro morfologia e h®bito do cristal. Onde os efeitos da orienta'2o preferida est2o presentes, as intensidades de pico s2o alteradas, mas as posi'Pes de pico caract er° st i co do pol i rrorf o f i cam i nal teradas. AI Hm di sso, tarrbHm H bem conhecido na tHcnica de cristalografia que, para qualquer forma de cristal dada, as posi'Pes angulares do pico podem variar ligeiramente. Por exerrpl o, as posi'Pes de pico podem rrudar devido a uma varia'2o na terrperatura ou hurri dade qual uma amostra H analisada, ao deslocamento da amostra, ou presen'a ou aus5 nci a de um padr2o interno. No presente caso, uma variabilidade da posi'2o de pico de 0,2 em 2:: levar® em considera'2o estas varia'Pes potenciais sem i rrpedi r a i dent i f i ca'2 o i nequ°voca da forma cristalina indicada. A confirma'2o de uma forma cristalina pode ser feita com base em qualquer corrbina'2o Bni ca de picos distintivos (em unidades de é2\), tipicamente os picos mai s proeminentes. (United States Pharmacopeia #35, National Forrrulary #30, Cap°tulo <941 >, pdgi nas 427-432, 2012). Qs padrPes de difrac'2o de forma de cristal, recolhidos temperatura ambiente e hurri dade relativa, s2o ajustados com base no material de refer4ncia padr2o NBS 675 (nica) com picos em 8, 853 e 26,774 graus 2- teta.

Uma amostra preparada do co-cristal do Exerrpl o 2 H caract eri zada por umpadr2o de difrac'2o de raios X usando a radia'2o CuKa como tendo picos de difrac'2o (valores de 2- teta) como descrito na Tabela 3 abaixo e, em particular, tendo picos a 18,2 em corrbi na'2 o com um ou rnai s dos picos selecionados do grupo que consiste em 16, 0, 25,4 e 7,0; com urna toler°ncia para os °ngulos de difrac'2o de 0,2 graus.

Tabel a 3

Prepara'2o alternativa de cocristal de 2-(2,6-di cl orof eni I ) -1- [ (1S, 3R) - 3- hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3-met i I but i I) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona e <Bti do 4- hi droxi benz/B co.

Num frasco de 20 rrt, adicionar 2-(2,6-di cl orof eni I ) -1- [ (1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3-met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona (2,00 g, 1,00 equi v. 4,44 rrrmles). Adicionar acetona (4 rrL) enquanto se agita ~ temperatura ambiente. Uma solu'2o clara H formada. Adi ci onar ®ci do 4- hi droxi benz/H co ( 0, 756 g; 1, 23 equi ν. , 5,47 ιίτιόΙ es) enquanto se agita - tenperatura arrbiente. Urra ligeira suspens2o H formada e depois uma suspens2o espessa. A nistura H aquecida na placa quente a 60éC. Adicionar acetona emal “quotas de 1 rrt atU se observar uma boa suspens2o de nistura a 60éC. A acetona total adi ci onada H 9, 00 rrt ( 122, 43 rmol es, 7, 11 g). At enperat ura H mantida a ~60éC por v(Srias horas. A nistura H arrefecida atU a tenperatura arrbiente e colocada na geladeira para melhorar a recupera'2o. O s/H i do resultante H recolhido por f i I t r a'2 o sob v(Scuo, enxaguado com 2 rrt de acetona e seco numforno de v®cuo durante a noite a 40éC para proporcionar a corrposi'2o do t°tulo corro um s/H i do cristalino branco. A an® i se por HPLC demonstra a raz2o rrol ar de 2- (2,6- di cl orof eni I ) -1- [ (1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3-met i I i I but i I ) - 1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) -il]etanona em (St i do 4-hi dr oxi benz/H co no cocristal H de um a um

An® i se de HPLC

Coluna: Agi I ent ZORBAX Bonus-RP, Resolu'2o R(Spi da, 4, 6x75rrrp 3, 5 =

Tenperatura da coluna: 30éC Vol ume de i nj e '2 o: 2 Dete'2o: UV 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) -1- [ (1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) -5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ] etanona ( Exenpl o 1) @219 nm (Sti do 4-hi droxi benz/H co @ 256 nm Taxa de fluxo: 1,5 ni/rrin.

Fase mffi/el : A) 0, 1 % TFA em (Egua B) 0, 1 % TFA em acet oni t r i I o

Tabel a de Gradi ent e

Pr opor '2 o Rei at i va

Segunda prepara'2o alternativa de cocristal de 2-(2, 6- di cl orof eni I ) -1 - [ ( 1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i 1)-5-(3-hi droxi - 3- met i I bu1 i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) -il]etanona e (Sc i do 4-hi dr oxi benz/H co.

Os conpostos 2-(2, 6-di cl orofeni I ) -1-[( 1S, 3R)-3-( hi dr oxi met i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I but i I ) -1 - met il-3,4-di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ] et anona (45,06 g, 0,1 rrol ) e (Sti do 4-hi droxi benz/B co (14,5 g, 1,05 nol eq) s2o suspensos a 23éC em 53:47 de al co/B i sopropi I o: heptano (236 rrL, 4 volumes) e aquecidos a 65éC. Asolu'2o resultante H semeada com cocristais de 2-(2, 6-di cl orofeni I )-1-[( 1S, 3R)-3-( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met il-3,4-di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ] et anona e <$ti do 4-hi droxi benz/B co ( 553 rrg, 1, 0 em peso % de carga de sement es) e agitada a 65éC durante 30 rrinutos. Adicionar hept ano (943 rrL, 16 volumes) a 65éC ao longo de 4,6 horas. A suspens2o H agitada a 65éC durante mai s 30 rrinutos, arrefecida a 23éC durante 2 horas, agitada durante a noite a 23éC e filtrada a v®cuo. Os s/B i dos do produto s2o enxaguados com 10:90 <SI c ool i soprop01 i co: hept ano (2 x 50 rrL) e heptano (50 rrL) e depois seco numa estufa de vCStuo a 40éC durante 2 horas para produzir a conposi'2o do t°tulo corro um produto cristalino branco (51,3 g, 86, 3% em peso de rendimento).

In°cio do ponto de fus2o = 162,2éC (calorimetria de varrimento diferencial).

Prepara'2o 23 S°ntese de hidrocloreto de 4-[ (1S, 3R) - 3-( hi droxi met i I ) -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5- i I ] -2- met i I - but an- 2- ol .

Dissolver (1S, 3R) - 3-[ [ t er c-but i I ( di meti I ) si I i I ] -oxi met i I ] - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I - but i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi dro-1 H-i soqui nol i na-2-car boxi I at o de terc-butilo (161 rrg, 0,34 ιίτιόΙ ) em acetato de et i I o ( 962 =L. Arrefecer num banho de gelo. Adicionar cloreto de hi drogUni o (843 xL, 3,37 rmol, 4M em di oxano) e agitar no banho de gelo durante 4 horas. Concentrar sob press2o reduzida. Dissolver o etanol e concentrar sob press2o reduzida para se obter o corrposto do t°tulo (100 g, 0.34 γτττόΙ ). IVE (mfz): 264,2 (MM). O corrposto seguinte H preparado essenci al ment e pelo rrlUtodo da Prepara'2o 23.

Prepara '2 ο 25 S°ntese de 1 - [ (1S, 3R) - 3- [ [ t er c-but i I ( di met i I ) s i I i I ] oxi met i I ] - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I - but i I ) -1 - met i I - 3, 4-di hi dro-1 H- i soqui nol i n- 2- i I ] - 2- ( 2- cl oro- 5- met oxi -f eni I ) et anona.

Di ssol ver 4- [ (1S, 3R) - 3- [ [ t er c - but i I ( di met i I) si I i I ] oxi met i I ] -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et ra- hi droi soqui nol i n- 5-il] - 2-met i I - but an-2-ol (0,36 g, 0,95 rrol em di cl or omet ano (9,5 rrt). Adicionar di i sopropi I et i I a rri na (499 xL, 2,86 ιίτιόΙ ). Adicionar (Sfci do 2-( 2-cl oro-5-met oxi - f eni I ) acHt i co ( 229,5 rrg, 1,14 γτττόΙ ). Adicionar hexaf I uorof osf at o de 0(7- aza-1 H- benzot r i azol -1- i I ) - N, N, l\T, l\T-1 et r a met i I ur/Bii o (561 rrg, 1,40 ιίπττόΙ ) e agitar - temperatura ambiente durante a noite. Diluir a mistura de rea'2o com di cl or omet ano e lavar com dgua e salmoura, secar sobre sulfato de s/Bdi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um /3 eo castanho. Purificar o res°duo por cr omat ogr af i a em gel de s°lica el ui ndo com acetona: hexanos (gradiente, 0-20°Λ) para se obter o corrposto do t°tulo como um /0 eo opaco (0,46 g, 0, 82 γτττόΙ). IVE (rrfz): 560,2 (MH).

Qs corrpostos seguintes s2o preparados essenci al rrent e pelo rrlUtodo da Prepara'2o 25.

Prepara'2o 28 S° nt ese de 1 - (( 1S, 3R) - 3- (((t er c- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) -1 - met i I - 5- vi ni I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) et an-1 - ona.

Di ssol ver 1 - [ ( 1S, 3R) - 5- br oito- 3- ({[ t er c- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi } met i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2 ( 1 H) - i I ] - 2-( 2, 6-di cl orof eni I ) et anona ( 300 rrg, 0,54 itttoI ) e

Ust er di but01 i co de (Eti do vi ni I bor/Bii co ( 0, 24 nt, 1, 08 ιίγττόΙ ) em 1,4-dioxano (5,4 nt) Adicionar uma solu'2o aquosa de Na2CQ3 (2,7 nt, 2 M em (Egua ). Desgasi ficar com azoto 10 rrinutos. Adicionar cloreto de bi s( t r i f eni I f osf i na) pal (Edi o (II) (76 rrg, 0,11 ιίτιόΙ ). Aquecer a 801C. Agitar durante 2 horas. Adicionar (Egua e extrair com acetato de et i I o tr5s vezes. Corrbi nar os extratos de acetato de et i I o e secar sobre sulfato de s/Bdi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por cromatografi a emgel de s°l i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos ( gradi ent e, 5- 80°Λ) para se obt er o conpost o do t01 ul o corro uma espuma branca ( 220 g, 0,44 πτιόΙ ). IV5 (míz): 504 ( MH).

Prepara '2 o 29 S°ntese de 1( 1S, 3R) - 3- ((t er c-but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 5- ( 1 - hi dr oxi et i I ) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I) - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I) et an-1- ona (rristura de di astere/Emeros) e 1 - ((1S, 3R) - 3-(((t er c-but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi droxi et i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I) et an- 1 - ona.

Dissolver 1 - (( 1S, 3R) - 3-(((t er c- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) -1 - met i I - 5-vi ni I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6- di cI orof eni I ) et an-1 - ona (477 rrg, 0,95 ιίτιόΙ ) em THF (9,5 rrt). Arrefecer a 01C. Adicionar BH3 (1,9 rrt, 1,89 ιίτιόΙ , 1M em THF). Agitar 4 h " temperatura arrbiente. Arrefecer a 01C. Adicionar NaOH (3,8 rrt, 3 M em (Sgua) e H2Q2 (0,58 nt, 30% p/p% em dgua). Agitar 4 h " temperatura arrbi ente. Adi ci onar acetato de et i I ο, I avar com solu'2o saturada de NaHCCfe e salmoura, secar sobre sulfato de s/Bdi 0, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar 0 res°duo por crorratografi a emgel de s°l i ca el ui ndo comacetato de et i I 0: hexanos (gradiente, 5-60°/Q para se obter 1 - ((1S, 3R)-3- ((t erc - but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 5- (1- hi droxi et i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6-di cl orof eni I ) et an-1-ona (nistura de di ast ere/Emeros) sob a forma de uma espuma branca (92 rrg, 0,19 rirrol ). IVE (rrfz): 522 (MM); e 1-(( 1S, 3R)-3-((terc-buti I di met i I s i I i I ) oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi droxi et i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2-( 2, 6-di cl orof eni I ) et an-1-ona sob a forma de uma espuma branca (254 rrg, 0,49 ιίτιόΙ ). IVE (rrfz): 522 (MM).

Prepara'2o 30 S°ntese de 1( 1S, 3R)-5-aceti I - 3-(((terc- but i I di met i I si I i I) oxi) met i I) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) et an-1 - ona.

Dissolver 1-(1S,3R)-3-(((terc - but i I di met i I si I i I) oxi ) met i I ) - 5- ( 1- hi droxi et i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) et i I -1- ona (92 rrg, 176 =ttoI , rristura de dois di ast er e/Brer os) em CH2CI 2 (1,8 rrt). Adicionar NaHCCfe (92 rrg, 1,1 mrml) e 3,3,3-Tr i acet oxi - 3-i od/fft al i da (90 ng, 211 =ttoI ) - temperatura ambiente. Agitar durante 40 mi n. Adicionar uma solu'2o saturada de NaHCCfe e uma solu'2o saturada de Na2S2Cfe, extrair com acetato de et i I o trss vezes. Combinar os extratos de acetato de et i I 0 e secar sobre sulfato de s/Edi 0, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter umres°duo. Purificar o res°duo por crorratografia em gel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I 0: hexanos (gradiente, 5-60°Λ) para se obter o composto do t°tulo como uma espuma branca ( 0, 068 g, 130 =m>l). IVB ( mf z): 522 (MH).

Os conpostos seguintes s2o preparados essenci al rnent e pelo rrlUtodo da Prepara'2o 30.

Prepara'2o 33 S° nt ese de 2- (( 1S, 3R) - 3- (((t er c- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 2- ( 2- ( 2, 6- diclorofenil)acetil)-1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n-5- i I ) acet al de° do.

Di ssol ver 1- (((t er c - but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 5- 2- hi droxi et i I) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I) - 2- ( 2, 6-di cl orof eni I) et an-1-ona (160 rrg, 0,31 rmrol) emCH2Cl2 (3,1 rrt). Adicionar NaHCCfe (160 rrg, 1,90 mrml ) e 3,3,3-

Tr i acet oxi - 3-i odof t al i da (156 rrg, 0,37 mrml ) - terrperatura arrbiente. Agitar durante 40 rri n. Adicionar urra solu'2o saturada de NaHCCfe e una solu'2o saturada de Na2S2Cfe, extrair com acetato de etilo tr4s vezes. Conrbi nar os extratos de acetato de etilo e secar sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter umres°duo. Purificar o res°duo por c r orrat ogr af i a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de etilo: hexanos (gradiente, 5-60°4) para se obter o conposto do t°tulo corro uma espuma branca (140 g, 0,27 mnol ) . IVE (rtfz): 520,2 (MH).

Prepara'2o 34 S°ntese de 1 - ((1S, 3R) - 3-((t er c-but i I di met i I si I i I) oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi dr oxi pr opi I) -1 - met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n-2( 1H)-i I )-2-(2, 6-di cl or of eni I ) etan-1- ona (rristura de dois di ast er e/fmer os).

Di ssol ver 2- (( 1S, 3R) - 3- (((t erc - but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 2- ( 2- ( 2, 6- di cI or of eni I ) acet i I ) -1 - met i I -1,2, 3, 4-tetrahi droi soqui nol i η-5-i I )acetal de°do (138 rrg, 0,27 rrirol ) emTHF (2,7 rrt). Arrefecer atU OéC, adicionar IVbIVgCI (0,097 rrt, 0,29 πτπόΙ , 3M em Et 2O). Agitar 30 rri n a OéC. Adicionar (Sgua e extrair com acetato de et i I 0 tr5s vezes. Corrbi nar os extratos de acetato de et i I 0 e secar sobre sulfato de s/ffli 0, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar 0 res°duo por cr omat ogr af i a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I 0: hexanos (gradiente, 2-60°Λ) para se obter 0 conrposto do t°tulo como uma espuma branca (122 g, 0,23 ηττυΙ ). IVE (mfz): 536,2 (MM). O corrposto seguinte H preparado essenci al ment e pelo rrlfltodo da Prepara'2o 34.

Prepara'2o 36 S°ntese de 1-(( 1S, 3R)-5-brom>-3-(((terc-but i I di met i I si I i I) oxi) met i I) -1 - met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2- cl oro- 6- f I uorof eni I ) et an- 1-ona.

Di ssol ver (1S, 3R) - 5- bromo- 3- (((t erc - but i I di met i I - si I i I ) oxi ) met i I ) -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i na (1,85 g, 4,99 mrrol ) e dti do 2-cloro- 6-f I uorof eni I acllt i co (1,04 g, 5,49 rrmol) em di cl or orret ano (50 rrL). Adicionar hexafl uorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-^N,N'',^-t et r amet i I ur/Ebi o (2,85 g, 7,49 ιίπττόΙ ) e di i sopropi I et i I arri na (1,3 rrL, 7,49 rrmol) - temperatura ambiente. Agitar durante 3 horas. Adicionar (Sgua e extrair com di cl or omet ano tr,s vezes. Combinar os extratos de di cl or omet ano e secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por cromatografi a emgel de s° I i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (gradi ente, 5-60°Λ) para se obter o composto do t°tul o como uma espuma branca (2,2 g, 4,07 mmol ). IV5 (rrfz): 540,2 ( MM).

Preparado 37 S° nt ese de 1-((1S, 3R) - 3- (((t er c- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) -1 - met i I - 5- vi ni I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I) - 2- ( 2- cl oro- 6- f I uorof eni I ) et an- 1 -ona.

Di ssol ver 1- ((1S, 3R) - 5- bromo- 3- (((t erc- but i I di met i I s i I i I ) oxi ) met i I ) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2- cl oro- 6- f I uorof eni I ) et an- 1-ona (1,8 g, 3,33 ητποΙ ) e Uster de dibutilo do dti do vi ni I bor/Eii co (1,5 nt, 6,65 πτπόΙ ) em 1,4-di oxano (22 nt). Adicionar uma solu'2o aquosa de Na2CCh (11 nt, 2Mem(Sgua). Desgasei f i car com azoto durante 10 rrinutos.

Adicionar cloreto de bi s(tri feni I fosfi na) pal (Sdi o (II) (467 rrg, 0,67 ητποΙ). Aquecer a 801C. Agitar durante 2 horas. Adicionar (Sgua e extrair com acetato de et i I o tr5s vezes. Corrbi nar os extratos de acetato de et i I o e secar sobre sulfato de s/6Ji o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por cromatografi a emgel de s°l i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (gradi ente, 5-40°Λ) para se obter o conposto do t°tul o corro uma espuma branca (1, 54 g, 3, 15 rmol ). MS (rrfz): 488, 2 ( MH).

Prepara'2o 38 S°ntese de 1-(1S, 3R) - 3- (((t er c- but i I di met i I s i I i I ) oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi dr oxi et i I ) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2- cl oro- 6- f I uorof eni I ) et an- 1-ona.

Dissolver 1-(( 1S, 3R)-3-(((terc- but i I di met i I s i I i I ) oxi ) met i I) -1 - met i I - 5- vi ni I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2- cl oro- 6- f I uor of eni I ) et an- 1-ona (1,54 g, 3,15 πτπόΙ ) em THF (31 rrL). Arrefecer a 01C. Adicionar BH3 (6, 3 rrt, 6.3 ητηοΙ , 1M em THF). Agitar 4 h tenperatura arrbiente. Arrefecer a 01C. Adicionar NaOH(12,6 ni, 3 M em (Bgua) e H2Q2 (1,92 nrt, 30% p/ p% em (Sgua). Agitar durante a noite ~ tenperatura arrbiente. Adicionar acetato de et i I ο, I avar comsol u'2o saturada de NaHCQ3 e sal moura, secar sobre sulfato de s/ffli 0, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter umres°duo. Purificar 0 res°duo por crorrat ograf i a emgel de s01 i ca ei ui ndo comacetato de et i I 0: hexanos (gradiente, 5-60°4) para se obter 1 - (( 1S, 3R) - 3-((t erc - but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi dr oxi et i I ) -1 -met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2- cI or0- 6- f I uorof eni I) et an-1- ona sob a f or rra de urra espurra branca (1, 08 ng, 2,13 mmDl ). IV5 (mfz): 506.,2 (MM).

Prepara'2o 39 S° nt ese de 2- (( 1S, 3R) - 3- (((t erc- but i I di met M sM M ) oxi ) met i I ) - 2- ( 2- ( 2- c I or o- 6- f I uorof eni I ) acet M ) -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5- i I ) acet al de° do.

Dissolver 1-(( 1S, 3R)-3-(((terc- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi dr oxi et i I ) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2- cl oro- 6- f I uorof eni I ) et an- 1 - ona (1, 08 g, 2, 13 ιίπττόΙ ) em ChbCI z ( 21 rrL). Adi ci onar NaHCCfe (1,08 g, 12,9 ηποΙ ) e 3, 3, 3-Tr i acet oxi - 3-i odof t al i da (1,09 g, 2,56 mmDl) ~ terrperatura ambiente. Agitar durante 40 mi n. Adicionar urra solu'2o saturada de NaHCQ e urra solu'2o sat ur a da de Na2S2Cfe, ext r ai r com acet at o de et i I o t rs s vezes. Combinar os extratos de acetato de et i I o e secar sobre sulfato de s/Bdi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por crorratografi a emgel de s° I i ca ei ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (gradi ente, 5-60°Λ) para se obter o corrposto do t°tul o como una espuma branca (0,87 g, 1,73 rrrrol ).

Prepara'2o 40 S° nt ese de 1 - ((1S, 3R) - 3-(((t er c- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) -1 - met i 1-1,2,3,4- t et r ahi dr oi soqui nol i n- 5- i I ) pr opa no- 2- ona.

Msturar hidrocloreto de (1S, 3R) - 5-br orro-3-(((t erc - but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) -1- met il-1,2,3,4- t et rahi droi soqui nol i na (2,5 g, 6,14 ιίπγτόΙ ), acetona (30 rrL), fosfato de potdSsio, TribCSSico, N-hidrato (3,99 g, 18,4 ητηοΙ ), Cat aCXi um A ( di (1 - adamant i I ) - n- but i I f osf i na, 220 rrg, 0,61 ητηοΙ ) e t r i s( di benzi I i denoacet ona) di pal ®di o (0) (290 rrg, 0,31 ιίτιόΙ ). Agitar durante 2 dias a 701C. Arrefecer a 01C. Adicionar (Sgua e extrair com acetato de et i I o trss vezes. Corrbi nar os ext rat os de acet at o de et i I o e secar sobre sulfato de s/Edi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por cromatograf i a emgel de s° I i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (gradiente, 10-100°Λ) para se obter o corrposto do t°tulo corro uma espuma branca (1.3 g, 3,74 rrrrol). IVE (mfz): 348 (MM).

Prepara '2 o 41 S° nt ese de 1 - ((1S, 3R) - 3- (((t er c- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 2- ( 2- ( 6- cl oro- 2- f I uoro-3- met oxi f eni I ) acet i I ) -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5- i I ) propan- 2- ona.

Di ssol ver 1- ((1S, 3R) - 3- ((t erc - but i I di meti I si I i I) -oxi ) met i I ) -1 - met i I -1, 2, 3, 4-1 et rahi droi soqui nol i n- 5-i I ) propan- 2- ona (1,3 g, 3, 74 ιίπττόΙ ) em di cl oromet ano (37 rrt). Adicionar di i sopropi I et i I a rri na (2,0 nt, 11,22 mnol ), (Sti do 2-( 6-cl oro-2-f I uoro-3-met oxi f eni I ) acHt i co (1,06 g, 4,86 ιίπττόΙ), hexaf I uorof osf at o de O- ( 7- azabenzot r i azol -1 - i I ) - N, N, N“, N“-1 et r amet i I ur/Eni o (1,91 g, 4,86 mrrol) e temperatura ambiente. Agitar durante 16 horas. Lavar com solu'2o saturada de NaHCCfe, secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por cr ornat ogr af i a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (gradiente, 5-50°Λ) para se obter o composto do t°tulo corro uma espuma branca (1.6 g, 2,69 mnol ). IVE (rrfz): 548,6 (MM).

Prepara '2 o 42 S° nt ese de 1-((1-S, 3R) - 3- (((t erc- but i I di met i I si I i I ) oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi droxi propan- 2- i I) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui noli n- 2 (1 H) - i I) - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I ) et an-1 - ona.

Di ssol ver 1 - ((1S, 3R) - 5- acet i I - 3- (((t er c- but i I di rret i I s i I i I ) oxi ) met i I ) -1 - met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6- di cl orof eni I) et an-1- ona (68 rrg, 130 =m>l ) em THF (1,3 nt). Arrefecer atU OéC, adicionar IVbl\fèCI (87 =L, 261 =ttdí I , 3M em Et20). Agitar durante 30 rrin a OéC e 30 rri n terrperatura ambiente. Adicionar IVbIVgCI (87 =L, 261 =ttoI , 3MemEt20) " temperatura anrbi ent e. Agi t ar dur ant e 60 rri nut os. Adi ci onar dgua e ext r ai r com acetato de et i I o trss vezes. Combinar os extratos de acetato de et i I o, secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obtero composto do t°tulo corro urna espuma branca ( 0,054 g, 100 =rrol ) IV5 (rrfz): 536, 2 ( MH).

Os compostos seguintes s2o preparados essenci al ment e pelo rr1||todo da Prepara'2o 42.

Exerrpl ο 3 S°ntese de 2-(2, 6-di cl orofeni I )-1-(( 1Sf 3R)-3-( hi droxi met i I ) - 5- ( 2- hi droxi propan- 2- i I ) -1 - rret i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) et a n-1 - ona.

Di ssol ver 1- ((1 R, 3S) - 3- ((t erc - but i I di met i I si I i I ) - oxi ) met i I ) - 5- ( 2- hi dr oxi pr opan- 2- i I ) -1 - met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) - 2- ( 2, 6- di cl orofeni I ) et an-1- ona ( 0,054 g, 100 =rral ) emTHF (1,0 rrt). Adicionar fluoreto de t et rabut i I arnffiii o (0,11 rrt, 110 rirml , 1 MemTHF). Agitar durante 30 rri n. Adicionar urra solu'2o saturada de cloreto de arnffiii o e extrair com acetato de et i I o.

Corrbi nar os extratos de acetato de et i I o e secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter umres°duo. Purificar o res°duo por crorratografi a emgel de s°l i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (gradiente, 10-1009¾ para se obter o conposto do t°tulo corra urra espurra branca (0,03 g, 71 =rral ). IVE (rrfz): 422 ( MH).

Exenplo 3a

Prepara'2o de 2-(2, 6-di cl orofeni I )-1-(( 1S, 3R)-3-( hi droxi met i I ) - 5- ( 2- hi droxi propan- 2- i I ) -1- met i I - 3, 4- di -hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) et a n-1 - ona cristalina.

Dissolver 1,932 g de 2-(2, 6-di cl orofeni I )-1-(( 1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 2- hi droxi propan- 2- i I ) -1- met i I -3, 4-di hi droi soqui nol i n-2( 1 H) - i I ) et ano-1-ona a uma concentra'2o de 128 rrg/rrt em Uter ci cl opent i I met01 i co enquanto se agita a 80éC/1000 rpm A solu'2o come'a a precipitar um s/0 i do branco que H ent2o arrefecido atU tenperatura arrbiente ap/ls um breve per°odo de suspens2o. O s/H i do H isolado por filtra'2o em vtuo e seco sob azoto brevemente antes de continuar num forno de vdtuo a 65éC durante 2 horas. S2 o recuperados 1,606 g do conposto do t°tulo para um rendi mento de 86,8%

Difra'2o de P/E de Raio X

Os padrPes XRD de s/H i dos cri stal i nos s2o obti dos num di f ract/fmet ro Bruker D4 Endeavour de raios X em p/E equipado com uma fonte CuKa (= = 1,54060 \ ) e umdetector Vantec, operando a 35 kV e 50 ιη . A amostra H varrida entre 4 e 40é em 2:; com um tamanho de passo de 0, 0087é em2::e uma taxa de varredura de 0,5 segundos/passo, e com diverg5ncia de 0,6 mrr) 5,28 mm fixo anti-scatter e um detector de fendas de 9, 5 mm O p/E seco H errbal ado num suporte de amostras de quartzo e H obtida uma superf°cie lisa ut i I i zando uma l°rrina de vidro. § bemconhecido na arte da cristalografia que, para qualquer dada forma cristalina, as intensidades relativas dos pi cos de di f rac '2 o podemvari ar devido ~ orienta'2o preferida resultante de factores tais corro morfologia e h®bito do cristal. Onde os efeitos da orienta'2o preferida est2o presentes, as intensidades de pico s2o alteradas, mas as posi'Pes de pico caract er° st i co do pol i rrorfo f i cam i nal t eradas. Ver, p. exenpl o, The U. S. Pharmacopeia 35 - National Forrrolary 30 Cap°tulo <941> Charact eri zat i on of crystalline and partially crystalline sol i ds by X-ray povuder diffraction (XRPD) Official, 1 de Dezembro, 2012- 1 de IVbi o 1, 2013. AI Hm disso, H tambHmbem conhecido na arte da cristalografia que para qualquer dada forma cristalina as posi'Pes angulares do pico podem variar ligeiramente. Por exenpl o, as posi 'Pes de pico podem mudar devido a uma varia'2o na tenperatura ou humidade ~ qual uma arrostra H analisada, ao deslocamento da amostra, ou presen'a ou aus5 nci a de umpadr2o interno. No presente caso, uma variabilidade da posi'2o de pico de é 0,2 em 2:: levar® em considera'2o estas varia'Pes potenciais sem impedir a i dent i f i ca'2 o i nequ°voca da forma cristalina indicada. A confirma'2o de uma forma cristalina pode ser feita com base em qualquer corrt>ina'2o βη i ca de picos distintivos (em unidades de é2:), tipicamente os picos mai s proeminentes. Qs padrPes de difrac'2o de forma cristalina, recolhidos tenperatura ambiente e " hurri dade relativa, foram aj ustados com base nos picos padr2o NI ST 675 a 8, 85 e 26,77 graus 2-t et a.

Uma arrostra preparada do composto em ep°grafe do Exenplo 3a H ca r act er i zada por um padr2o XRD utilizando radia'2o CuKa corro tendo picos de difrac'2o (valores 2-teta) como descrito na Tabela 10 abaixo. Es peei f i carnent e, o padr2o contUm um pi co a 14, 3 em corrbi na'2o com doi s ou rnai s dos pi cos sei eci onados do grupo que consi ste em5, . 7, 18, 0, 18, 7, 22,4 e 25,1 com urna toler°ncia para os °ngulos de difra'2o de 0, 2 graus.

Tabela 10. Picos de difrac'2o de raios X em p/E do

Exenplo 3a

Os corrpostos seguintes s2o preparados essenci al rnent e pelo rrlUtodo da Prepara'2o 3.

Exenplo 4a

Prepara'2o de 2-(2, 6-di cl orofeni I )-1-(( 1S, 3R)-5-( 2- hi dr oxi - 2- met i I pr opi I ) - 3- ( hi dr oxi met i I ) -1 - met il-3,4-di hi droi soqui nol i n-2( 1H)-i I )etan- 1-ona e (Sti do 4- hi dr oxi benz/H co.

Col ocar 2-( 2, 6- di cI or of eni I ) - 1 - (( 1 S, 3R) - 5-( 2-hi droxi - 2- met i I propi I ) - 3- ( hi droxi met i I ) -1- met i I - 3, 4-di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ) et an-1- ona ( 98, 33 rrg) e de (St i do 4- hi dr oxi benz/H co ( 35,40 rrg) num frasco de 20 rrt equipado com urna barra de agita'2o. O frasco H cheio atll a borda com (Egua ( —20 rrt) e suspenso a 45éC ( conf i gur a'2 o da agita'2o) durante a noite. A amostra H suspensa ainda mai s durante as 48 horas a 60éC semforma'2o de cristais.

Adiciona-se acetona (1 rrt) e a amostra H suspensa durante a noite a 40éC/1000 rpm O material aparece cristalino. O s/H i do branco resultante H isolado por f i 11 r a '2 o sob v®tuo eseconolocal sob v®tuo e sob corrent e de ar durante 10 rrinutos.

Difra'2o de P/E de Raio X

Os padr Pes de difrac'2o de raios X (XRD) de s/H i dos cristalinos s2o obtidos em um di f ract/fmet ro de p/E de raios X Bruker D4 Endeavour, equipado com uma fonte CuKa = = 1.54060 A) e umdetector Vantec, operando a 35 kV e 50 ιη. A amostra H varrida entre 4 e 40é em2:; comumtamanho de passo de 0. 009é em 2:: e uma taxa de varredura de 0,5 segundos/passo, e com di verg5 nci a de 0,6 mrr) 5,28 mm fixo anti-scatter e umdetector de fendas de 9, 5 mm O p/E seco H errbal ado num suporte de amostras de quartzo e H obtida uma superf°cie lisa utilizando uma l°rrina de vidro. Os padrPes de difrac'2o da forma cristal i na s2o recolhi dos - t enper at ura arrbiente e unidade relativa. § bem conhecido na arte da cristalografia que, para qualquer dada forma cristalina, as intensidades relativas dos picos de difrac'2o podem variar devido ~ orienta'2o preferida resultante de factores tais corro morfologia e h®bito do cristal. Onde os efeitos da orienta'2o preferida est2o presentes, as intensidades de pico s2o alteradas, mas as posi'Pes de pico caract er° st i co do pol i rrorf o f i cam i nal teradas. AI Hm di sso, tarrbHm H bem conhecido na tHcnica de cristalografia que, para qualquer forma de cristal dada, as posi'Pes angulares do pico podem variar ligeiramente. Por exerrpl o, as posi'Pes de pico podem rrudar devido a uma varia'2o na temperatura ou hurri dade qual uma amostra H analisada, ao deslocamento da amostra, ou presen'a ou aus5 nci a de um padr2o interno. No presente caso, uma variabilidade da posi'2o de pico de é 0,2 em 2:: levar® em considera'2o estas varia'Pes potenciais sem i rrpedi r a i dent i f i ca'2 o i nequ°voca da forma cristalina indicada. A confirma'2o de uma forma cristalina pode ser feita com base em qualquer corrbina'2o Bni ca de picos distintivos (em unidades de él\), tipicamente os picos mai s proeminentes. (United States Pharmacopeia #35, National Forrrulary #30, Cap°tulo <941 >, pdgi nas 427-432, 2012). Qs padrPes de difrac'2o de forma de cristal, recolhidos temperatura ambiente e hurri dade relativa, s2o ajustados com base no material de refer4ncia padr2o NBS 675 (nrica) com picos em 8, 85 e 26,77 graus 2- teta.

Uma amostra preparada do co-cristal do Exerrpl o 4a H caract eri zada por umpadr2o de difrac'2o de raios X usando a radia'2o CuKa como tendo picos de difrac'2o (valores de 2- teta) como descrito na Tabela 11 abaixo e, em part i cul ar, tendo picos a 7, 0 em corrbi na'2 o com um ou rnai s dos picos selecionados do grupo que consiste em 18, 8, 16,1, e 19,3; com une toler°ncia para os °ngulos de difrac'2o de 0, 2 graus. Tabela 11 Picos de difrac'2o de raios X em p/E do Exenrpl o 4a

Exenplo 7 S°ntese de 2- ( 2- cl oro- 6- rret oxi - feni I ) -1-[( 1S, 3R) - 3- ( hi dr oxi rret i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- rret i I - but i I ) -1 - rret i I - 3, 4-di hi dro-1 H- i soqui nol i n- 2- i I ] et anona.

Di ssol ver 1 - [ (1S, 3R) - 3- [ [ t er c- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi met i I ] - 5- ( 3- hi droxi - 3- met i I - but i I ) -1- met i I - 3, 4-di hi dro-1 H- i soqui nol i n- 2- i I ] - 2- ( 2- cl oro- 6- met oxi f eni I ) etanona (0,58 g, 1,04 ιίτπόΙ ) emTHF (5,3 rrt). Adicionar (St i do acUtico (16 rrL, 279 πτπόΙ ) e (Egua (5,3 rrt). Agitar a 50éC durante 1,5 horas. Concentrar sob press2o reduzida. Dissolver o res°duo em acetato de et i I o e lavar comsol u'2o saturada de bicarbonato de s/Bdi o, dgua e salmoura. Secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cr omat ogr af i a em gel de s°lica el ui ndo com acetona: hexanos (gradiente, 0-30°/) para se obter o corrposto do t°tulo corro urra espurra branca (0,34 g, 0,76 mnol). IVS (míz): 446,0 (MH). O corrposto seguinte H preparado essenci ai ment e pelo rrlUtodo do Exerrpl o 8.

Exenplο 10 S°ntese de 2-(2-cl orofeni I ) - 1-[( 1S, 3R)-3-( hi dr oxi met i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I - but i I ) -1 - met i I - 3, 4-di hi dro-1 H- i soqui nol i n- 2- i I ] et anona.

Dissolver (St i do 2-( 2-c I or of eni I ) acHt i co (96,8 rrg, 0,56 ιίτιόΙ ) e hexaf I uor of osf at o de O-( 7-aza-1 H-benzot r i azol -1-i I ) - N, N, N“, N“-1 et ramet i I ur/Bii o ( 200 rrg, 0,52 ιίίίόΙ ) em di cl orornet ano (2 rrt). Adicionar di i sopropi I et i I arri na (183 =1, 1,05 ιίτιόΙ ). Agitar - tenperatura a rrbi ente durante 20 rri n. Adicionar esta rristura de rea'2o a urna solu'2o de 4-[ ( 1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) -1- met il-1,2,3,4-tetrahi droi soqui nol i η-5-i I ]-2- rret i l-butan-2-ol (92 rrg, 0,35 rrol ) em di cl or ornet ano (0,4 rrt). Enxaguar com di cl orornet ano (1 rrt) e agitar - tenperatura arriai ente durante 3,5 horas. Diluir a rristura de reac'2o com (Egua e agitar. Extrair com diclorometno e secar os extratos de di cl orornet ano sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por c r ornat ogr af i a em gel de s°lica el ui ndo com acetato de et i I o: hexanos (gradiente, 0-60°4) para se obter um res°duo. Purificar o res°duo por cromatografia em gel de s°lica elui ndo com 10% ( 2N amffiii a em metanol): di cl orornet ano para se obter o conposto do t°tulo como uma espuma branca (78 rrg, 0,19 ιίτιόΙ ). IV5 (míz): 416,2 ( MH). O conposto seguinte H preparado essenci al ment e pelo niUtodo do Exenpl o 10.

Exerrpl ο 12 S°ntese de 3-cl or o-2-[ 2-[ (1S, 3R) - 3-( hi dr oxi met i I ) - 5- ( 3- hi dr oxi - 3- met i I - but i I) -1 - met i I - 3, 4- di hi dr o-1 H-i soqui nol i n- 2- i I ] - 2- oxo- et i I ] benzoni trilo.

Numa frasco a pasta de de (Sti do 2-(2-cloro-6-ci ano-f eni I ) acHt i co (75,4 rrg, 0,37 rmol) em acetonitrilo (0,3 rrL). Adicionar t r i et i I arri na (114 =L, 0,82 mmDl) e agitar atU dissolver os s/B i dos. Adicionar t et r af I uor obor at o de O-( benzot r i azol -1-i I) - N, N, ΝΓ, ΝΓ-1 et ramet i I ur/frii o (165 ng, 0. 51 mmDl) e agitar - temperatura ambiente durante 10 minutos. Num frasco separado, a pasta 4- [ (1S, 3R) - 3-( hi droxi met i I ) -1- met i I -1, 2, 3, 4-1 et ral i i droi soqui nol i n- 5- i I ] - 2-met i I - but an-2-ol (cloridrato) 102 rrg, 0,34 mol ) em acetonitrilo (0,3 rnt). Adicionar t r i et i I a mi na (227 =L, 1,63 mmDl) e forma-se um pr eci pi t ado. Agitar 10 mi n - temperatura ambiente. Transferir o (St i do 2-(2-cloro-6-ciano- f eni I) acHt i co, acetonitrilo, t r i et i I a rri na e a mistura de rea'2o de t et r af I uor obor at o de O-( benzot r i azol -1 - i I ) -N, N, N~, Nw-1 et ramet i I ur/Bii o do frasco para o bal2o contendo o hidrocloreto de 4-[( 1S, 3R)-3-( hi dr oxi met i I) -1 - met i I - 1, 2, 3, 4-1 et r a- hi droi soqui nol i n- 5- i I ] - 2- meti I - but a n-2- ol , acetonitrilo e rristura de rea'2o de trietilarrina. Enxaguar com acetonitrilo (0,9 rrt) e agitar a rristura de rea'2o horrogUnea ~ tenperatura arrbiente durante a noite. Diluir a rristura de reac'2o comdgua e extra°da comacetato de et i I o. Lavar os extratos de acetato de et i I o comdgua, urna solu'2o saturada de bicarbonato de s/Hi o e salmoura. Secar os extratos sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por c r ornat ogr af i a em gel de s01 i ca el ui ndo comacetato de et i I o: hexanos (0-60% gradiente) para se obter um res°duo. Purificar por c r ornat ogr af i a de fase reversa em s°l i ca modificada comC18 para produzir o conposto do t°tulo corro um /H eo verde (34 ng, 0, 08 rmol ) : (míz): 441,2 (MM).

Prepara '2 o 46 S°ntese de (St i do 2- ( 2- cl oro- 6- rret i I - f e n i I ) acHt i co.

A umf rasco de tanpa de rosca de 100 rrt, adicionar 2-( 2-cl oro-6-met i I - f eni I ) acet oni t ri I o (8,0 g, 48,30 rmol) e hi dr/Ed do de s/Hi o aquoso 3N (80 rrt, 240,00 rmol). Aquecer a rristura a 110éC durante 18 horas. Arrefecer a rristura atU 10éC e acidificar a pH 1 com ®ci do clor°drico concentrado (15 rrt). Extrair a rristura comacetato de et i I o. Separar e secar a fase org°nica sobre sulfato de s/ffli o. Filtrar, e concentrar atU ” secura.

Cristalizar a partir de Uter di et01 i c o para se obt er o conpost o do t01 ui o corro ums/H i do esbranqui 'ado ( 7, 20 g, 39,00 rmol ) : IVE (rtfz): 184,8 (MH).

Prepara '2 o 47 S°ntese de 2-( 2-cl oro-5-i sopropi I - f eni I ) acet at o de t erc- but i I o.

Adicionar bi s( di benzi I i denoacet ona) pai ddi o (49,2 rrg, 85,6 =nol) a umbal2o de fundo redondo e selar comum septo. Purgar com azoto. Adicionar t r i -1 er c-but i I f osf i na (85,6 =L, 85,6 =mol, IMemtolueno) e bi s( t r i met i I si I i I ) arri da de I 01 i o (12,8 rrt, 11,56 rmol, 0,9 M em met i I ci cl ohexanos) através de uma seringa. Adicionar 2-bromo-1-cl oro-4-i sopr opi I - benzeno (1,0 g, 4,28 rmol) e acetato de t-butilo ( 865,2 =L, 6,42 rmol) através de uma seringa. Adicionar tolueno (10,7 rrL) atravUs de uma seringa e a nristura de rea'2o fica quente ao toque. Colocar em um banho-maria terrperatura ambiente e agitar durante 3 horas. Armazenare a mistura de rea'2o no congelador durante o fim de semana.

Aquecer a nistura de reac'2o gradual mente atU _ tenperatura arrbiente. Diluir a nistura de rea'2o cometer d i et01 i c o e adicionar uma solu'2o saturada de cloreto de amffiii o. Separar as camadas e lavar a camada de Uter d i et01 i c o com sol u'2o saturada de cloreto de s/ffli o. Secar sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por c r omat ogr af i a em gel de s°lica ei ui ndo com acetona: hexanos ( 0-2% de gradiente) para se obter o conposto do t°tulo (1,04 g). Purificar novamente por crornat ograf i a em gel de s°lica ei ui ndo com di cl orornet ano: hexanos ( 0-20% de gradiente) para se obter o conposto do t°tulo (490 g, 1.82 ιίτιόΙ ) . IVB(rrfz): 213, 0 ( M-1 Bu+1) . O conposto seguinte H preparado essenci ai ment e pelo rrlUtodo da Prepara'2o 47.

Prepara '2 o 49 S°ntese de (St i do 2-( 2-cl oro-5-i sopropi I - f eni I ) acHt i co.

Dissolver 2-( 2-cl oro-5-i sopropi I - f eni I) acet at o de terc-butilo (483 ng, 1,80 mrml ) em di cl or omet ano (5,1 rrL). Adicionar ®Ci do t r i f I uoroacHt i co (1,09 rrt, 14,4 πττοΙ ) lentamente e agitar a rristura de rea'2o durante 3 horas temperatura ambiente. Concentrar sob press2o reduzida para se obter o composto do t°tulo (380 g, 1,79 mrml). IVE (mfz): 229, 8 ( IVH-18). O conpost o segui nt e H preparado essenci al ment e pelo rrliltodo da Prepara'2o 14.

Prepara'2o 51 S°ntese de 2-( 3-i sopropoxi f eni I) acet at o de i sopropi I o.

Di ssol ver (Sti do 2- ( 3- hi dr oxi f eni I ) acHt i co ( 5, 04 g, 32,8 πίπόΙ ) em di rret i I f or rrarri da (49,9 rrt). Adicionar carbonato de pot®ssio (15,1 g, 108,2 ιίτιόΙ ) e 2-i odopropano (15,1 rrt, 150,8 ιίτιόΙ ). Aaquecer a rristura de rea'2o a 80éC durante 6 horas. Agitar “ tenperatura arrbiente durante 64 horas. Aquecer a rristura de rea'2o a 95éC durante 6 horas.

Adicionar carbonato de pot(S3ssio adicional (9,2 g, 65,6 γτττόΙ ) e 2-i odopropano (15,1 rrt, 150,8 mmol ) e aquecer a rristura de rea'2o a 90éC durante a noite. Aumentar a tenperatura da rristura de rea'2o a 150éC e aquecer durante a noite. Arrefecer atU a tenperatura arrbiente e concentrar sob press2o reduzida. Diluir o res°duo com<§gua e acetato de et i I o. Separar as camadas e extrair a camada aquosa com acetato de et i I o. Conrbi nar os extratos de acetato de et i I o e lavar com (Sgua e salmoura, secar sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar o res°duo por cromat ograf i a em gel de s01 i ca el ui ndo com acetona: hexanos (0-20% de gradiente) para se obter o conrposto do t°tulo (4,79 g, 20,27 mmol ). IVS (mfz): 237,0 ( IVH-H), 254, 0 ( MM 8). 0 conposto seguinte H preparado essenci al rnent e pelo rrlUtodo da Prepara'2o 51.

Prepara'2o 53 S°ntese de (St i do 2-( 3-i sopropoxi f eni I ) acHt i co.

Dissolver 2-( 3-i sopropoxi f eni I ) acet at o de i sopr opi I o ( 4, 2 g, 17, 8 ππόΙ ) em t et r ahi dr of ur ano ( 35, 6 rrt). Adi ci onar (Egua ( 35, 6 rrt) e hi dr/Ed do de I 01 i o ( 6, 05 g, 248, 8 ιίτιόΙ ). Aquecer a rristura de rea'2o a 66éC durante a noite. Concentrar sob press2o reduzida para remover o tetrahidrofurano. Diluir a rristura de rea'2o com (Egua e lavar comUter di et01 i c o. Acidificar a carrada de (Egua com HC1 5N at H pH 1. Ext rair a carrada de (Egua comUter diet°lico. Lavar o extrato de acetato de et i I o com (Egua e salmoura, secar sobre sulfato de s/ffli o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter o conposto do t°tulo (3,37 g, 17,35 ιύττόΙ ). IVS(míz): 195,0 (MH), 212,0 (MH8). O conposto seguinte H preparado essenci ai rnent e pelo rrlUtodo da Prepara'2o 53.

Prepara'2o 55 S°ntese de (St i do 2-( 2-c I or o-5-3- i sopropoxi f eni I ) acHt i co.

Dissolver (St i do 2-( 3-i sopropoxi f eni I ) ac^t i co (3,24 g, 16,6 ιίτιόΙ ) em di met i I f or rrarri da (11,1 rrt). Arrefece num banho de gelo e adicionar urna solu'2o de N-c I or oss ucci ni rri da ( 2, 44 g, 18, 3 ιίτιόΙ ) em di met i I f or marri da (12,2 rrL). Agitar durante a noite, permitindo que a rea'2o atinja a temperatura ambiente. Diluir a rristura de rea'2o cometer diet°lico. Lavar com (Egua. Extrair a I avagem com (Egua com Uter diet°lico. Combinar os extratos de +Hter d i et01 i c o e lavar com (Egua e salmoura, secar sobre sulfato de s/Hi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida.

Purificar o res°duo por cromatograf i a em gel de s°lica el ui ndo com acetona: hexanos ( 0-25% de gradiente) para se obter o corrposto do t°tulo (3.08 g, 13.47 mrol). IVE (míz): 245, 8 ( MM8). O corrpost o segui nt e H preparado essenci al ment e pelo rrlfltodo da Prepara'2o 55.

Prepara'2o 57 S°ntese de (St i do 2-( 2-cl oro-6-ci ano-f eni I) acHt i co de met i I o.

Adicionar uma solu'2o 2M de di i sopropi I a rri da de I 01 i o em t et rahi drof urano (62,6 nt, 461,8 mmol ) a t et rahi drof urano (1 L) a -78éC. Adicionar lentamente 1,3-di met i I - 3, 4, 5, 6-1 et rahi dro-2( 1 H) - pi ri rri di nona (19,94 nt, 164,91 ιίτιόΙ ) seguido da adi'2o gota a gota de 3-cloro-2-met i I - benzoni t ri I o (20 g , 131,93 ηττοΙ ). IVànter a rristura a -78éC comagita'2o durante 5 rri n. Purgar o recipiente de rea'2o comdi/B<ido de carbono (1 L; 25,65 rrnl es) durante 15 rri n. Adicionar (Sgua (100 rrl) e mexer durante 2 horas. Adicionar uma solu'2o aquosa 10Mde hi dr /Bei do de s/ffli o para aumentar o pH da fase aquosa para >12. Separar a camada aquosa e lavar cometer d i et01 i c o. Acidificar a camada aquosa com ®ci do clor°drico concentrado atU pH-1 e extrair com acetato de et i I o. Separar a fase org°nica e secar sobre sulfato de s/Hi o. Filtrar e concentrar atU ” secura para se obter o conposto do t°tulo sob a forma de um s/H i do esbranqui 'ado ( 16, 0 g; 81, 80 ιίτιόΙ ). IV5 ( rrfz): 195, 9 ( IVH-1).

Prepara'2o 58 S°ntese de (1S, 3R) - 3-[ [ t er c- but i l ( di met i I) s i I i I ] oxi met i I ] -1 - met i I -1, 2, 3, 4- t et r ahi dr oi soqui nol i na-5-car boxi I at o de met i I o.

Num r eci pi ent e de press2o de vidro, contendo uma barra de agitador magnética, suspender ( 1S, 3R) - 5-br orno-3-((t erc - but i I di met i I si I i I oxi ) met i I ) -1- met il-1,2,3,4-t et rahi droi soqui nol i na ( 30 g , 81, 0 ιίτιόΙ ), acet at o de pai (Sdi o (1,8 g, 8,1 ηττοΙ ), bis- ( 1, 3-di f eni I f osf i no) propano (6,7 g, 16,2 ητηοΙ) e carbonato de s/ffli o (34,3 g, 324,0 mmol ) numa rristura de s u I f /Bei do de di met i I o ( 360 rrt) e metanol (180 rrt). Carregar o recipiente com rron/Ed do de carbono (41 0 kPa) e aquecer atfl 100éC com agita'2o. IVhnter a tenperatura a 100éC durante 19 horas. Deixar a rristura arrefecer atU tenperatura arrbiente. Filtrar a suspens2o resultante e diluir o filtrado comUter met i I - terc-but°l i co ( 1000 ni). Lavar a solu'2o com salmoura ( 3 x 500 rrt). Secar sobre sulfato de s/Bdi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida para se obter o conposto do t°tulo como um /H eo cor de laranja escura (26,7 g, 76, 4 rrol ). IV5 (míz): 350,0 (MM).

Prepara'2o 59 S°ntese de (1S, 3R) - 3-[ [ t erc- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi met i I ] - 2- [ 2- ( 6- cl oro- 2- f I uoro- 3- met oxi - f eni I ) acet i I ] -1 - met i I o- 3, 4- di hi dro-1 H- i soqui nol i na- 5-car boxi I at o de met i I o.

Adicionar trietilarrina (0,36 rrt, 2,57 mmol ) a uma solu'2o agitada de (1S, 3R) - 3-[ [ t erc- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi met i I ] -1 - met i 1-1,2,3,4-tetra- hi dr oi soqui nol i na-5-car boxi I at o de met i I o ( 500 rrg, 1,29 mmol), hexaf I uorof osf at o de ( benzot r i azol -1-i I oxi ) t ri pi r rol i di nof osf /Erii o (1,02 g, 1,93 mmol) e (§ti do 2-( 6- cl oro-2-f I uoro-3-met oxi f eni I ) acHt i co ( 356 rrg, 1,54 mrrol ) em di met i I f or marri da (6,4 rrt). Agitar - terrperatura ambiente durante 16h. Adicionar cloreto de amffiii o saturado aquoso (60 rrL). Extrair com acetato de et i I o (3 x 50 rrL). Lave as camadas org°nicas conrbi nadas com salmoura. Secar sobre sulfato de magnUsi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Purificar por cromat ogr af i a flash para produzir o composto do t°tulo sob a forma de um s/H i do amarelo amorfo (703 rrg, 1,15 mmol): IV5 (mfz): 550,0 (MM).

Os corrpostos seguintes s2o preparados essenci al ment e pelo rrlHt odo da Prepara'2o 59.

Exenplο 13 S°ntese de 2- ( 6- cl oro- 2- f I uoro- 3- met oxi - fenil)-1-[ ( 1S, 3R) - 3- ( hi dr oxi met i I ) - 5- ( 1 - hi dr oxi -1 - met i I - et i I ) - 1 -met i I - 3, 4- di hi dro-1 H- i soqui nol i n- 2- i I ] et anona.

Adicionar urra solu'2o 0,6 M de corrpl exo de cloreto de lant°nio (III) bi s ( c I or et o de I 01 i o) em t et r ahi dr of ur ano (1,92 rrt, 1,15 ητητοΙ ) a urra solu'2o agitada de (1S, 3R) - 3-[ [ t erc- but i I ( di met i I ) si I i I ] oxi met i I o] - 2- [ 2- ( 6- cl oro- 2-f I uoro- 3- met oxi - f eni I ) acet i I ] -1 - met i I - 3, 4- di hi dr o-1 H-i soqui nol i na-5-car boxi I at o de et i I o (703 rrg, 1,15 mmol ) em t et rahi drof urano (5 rrt). Agitar ~ temperatura ambiente durante 40 rrinutos. Adicionar uma solu'2o de 3M de brometo de met i I magnUsi o emUter di et01 i c o (3,50 equi v. , 4,03 ιίπγτόΙ , 1,34 rrt, 1,39 g) gota a gota. Agitar a rristura de rea'2o durante 1,5 h. Extinguir com sal moura (25 rrt). Ap/ls a cessa '2 o da evol u'2 o do g®s, ext rair comacetato de etilo (3 x 25 rrt). Lavar as camadas org°nicas corrbi nadas comsal moura. Secar sobre sulfato de magnUsi o, filtrar e concentrar sob press2o reduzida. Redissolver o res°duo em t et rahi drof urano (10 rrt) e adicionar fluoreto de t et rabut i I arnffiii o, tri-hidrato (492 ng, 1,73 imoles). Agitar durante 2h temperatura ambiente. Concentrar sob press2o reduzida. Lavar o res°duo atravUs de uma al mofada de s°lica flash curta (15 g) com acetato de etilo (50 rrt). Concentrar sob press2o reduzida. Purificar por cromat ograf i a de fase reversa em s01 i ca rrodi f i cada com C18 para produzi r o composto do t°tul o como um s/H i do branco (349 rrg, 0,76 ιίτιόΙ ): (míz): 436,0 ( MH) .

Os conpostos seguintes s2o preparados essenci al rnent e pelo rrlUtodo do Exenpl o 13.

Lisboa, de Outubro de 2107

Claims (16)

1. REI VI NDI CAauES

   1. Umconposto da f/trmjla

   em que n H 0, 1, ou 2; R1 H hal ogUneo; R2 % hal ogUni o, H, CN, C1-C3 al c/B<i ou C1-C3 al qui I o; e R3 % H, hal ogílni o, C1-C3 a I c /Bc i ou C1-C3 alquilo.
2. 2. O conposto de acordo coma r ei vi ndi ca'2 o 1 da f rru I a

   em que η 1 Ο, 1, ou 2; R1 H hal ogUneo; R2 ^ hal ogUni o, H, CN, C1-C3 al c/B<i ou C1-C3 al qui I o; e R3 H H, hal ogUni o, C1*-C3 a I c/Bci ou C1-C3 alquilo.
3. 3. O conposto de acordo coma r ei vi ndi ca'2 o 1 ou 2, em que n H 0, 1, ou 2; R1 H hal ogUneo; R2 H hal ogUni o; e R3 H hi drogUni o ou C1-C3 aI c/Bci .
4. 4. O conposto de acordo coma r ei vi ndi ca'2 o 1 ou 2, em que n H 0, 1, ou 2; R1 H Cl , F ou Br; R2 H Cl , OCH3, H, F, CN ou CH3; e R3 H OCHs, H, CH2CH3, CL, OCH( CH3) 2, F, CH( CH3) 2 OU CH3.
5. 5. O conposto de acordo com qualquer urna das reivindicares 1, 2 ou 3, em que n H 0 ou 2; R1 1 Cl ; R2 H Cl ou F; e R3 H H ou OCH3.
6. 6. O conpost ο de acordo coma reivindica'2o 1 que H 2- ( 2, 6- di c I or of eni I ) - 1 - [ ( 1 S, 3R) - 3- ( hi dr oxi met i 1)-5-(3-hi droxi - 3- met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di - hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona.
7. 7. O conpost o de acordo coma reivindica'2o 1 que H 2- ( 2, 6- di c I or of eni I ) - 1 - [ ( 1 S, 3R) - 5- ( 2- hi dr oxi - 2- met i I -pr opi I ) - 3- ( hi dr oxi met i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona.
8. 8. Uma conposi'2o conpr eendendo 2-(2,6-di cl orofeni I )-1-[(1S, 3R) - 3- ( hi droxi met i I ) - 5- ( 3- hi droxi - 3-met i I but i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) - i I ] et anona e <Sti do 4- hi droxi benz/H co.
9. 9. Uma forma co-cristalina da conpos i '2 o de acordo com a r ei vi ndi ca '2 o 8.
10. 10. A forma co-cristalina da conposi '2 o de acordo com a rei vi ndi ca'2 o 9, caract eri zada por um padr2o de difrac'2o de raios X em p/E usando radia'2o CuK com um pi co de difrac'2o no °ngulo de difrac'2o 2-1 et a de 18,2é em corrt>ina'2o com um ou mai s dos picos selecionados do grupo que consiste em16,0é, 25, 4é e 7, Oé; comuma toler°ncia para os °ngulos de difrac'2o de 0,2 graus.
11. 11. Uma forma co-cristalina de 2-(2,6-di cl or of eni I ) - 1 - [ ( 1S, 3R) - 5- ( 2- hi dr oxi - 2- met i I pr opi I ) - 3- ( hi droxi met i I ) -1- met i I - 3, 4- di hi droi soqui nol i n- 2( 1 H) -i I ] et an-1 - ona e (Sti do 4- hi dr obenz/H co.
12. 12. A forma co-cristalina da conpos i '2 o de acordo com a r ei vi ndi ca'2 o 11, caract eri zada por um padr2o de difrac'2o de raios X em p/E usando radia'2o CuK com um pi co de difrac'2o no °ngulo de difrac'2o 2-1 et a de 7, Oé em corrt>ina'2o com um ou mai s dos picos selecionados do grupo que consi ste em 18, 8é, 16, 1é e 19, 3é; com urna tol er°nci a para os °ngulos de difrac'2o de 0,2 graus.
13. 13. Uma conposi'2o farmacsutica conpreendendo um conposto de acordo com qual quer uma das reivindicares 1 a 7, e um ve°cul o, diluente ou excipiente f ar rnaceut i cament e acei t ®/el .
14. 14. Um corrposto de acordo com qualquer uma das reivindicares 1 a 7 para uso em terapia.
15. 15. Um conposto de acordo com qualquer uma das reivindicares 1 a 7 para uso no tratamento da doen'a de Parki nson.
16. 16. Um composto de acordo com qualquer uma das rei vi ndi ca ' Pes 1 a 7 para uso no t rat ament o da esqui zof reni a Lisboa, 10 de Outubro de 2017 REFERNNCI AS CITADAS NA DESCRI π (jO Esta lista de refer, nci as citadas pelo requerente H apenas para conveni , nci a do leitor. A mesma η2 o faz parte do documento da patente europeia. Ainda que tenha sido tonrado o devido cuidado ao conrpi I ar as refer, nci as, podem η2 o estar exclu°dos erros ou onri sshes e o IEP declina quaisquer responsabilidades a esse respeito. Documentos de patentes citadas na Descri '2o * EP 338360 A * US 2G06Ô2873S9 A * US5236S34Â Literatura que η2 o H de patentes citada na Descri '2o " D 8. TROY, RepiirKjtors: The S^ertire and Pfactlíje * Cnar^tenzarisnofcrysiaiiiriearKÍpartialJycr/iítaSkíie df Pfis«i3áçy. Wflísahjs S SSíj® v a4·. -v >< «áv ,vam 3#í íl- t CRF7'· 0*S-m 1Íhs:.Ú:íiS^ÍPferaSftcopeiá:3Si':^^asPFõ?^^fy:'.3S;· * · UeS^ SfiSteis j^idnãf fwpií- SI QéceiTí&amp;sr 52013 ^#30,:20^22427-432