PT2621515T - Polipéptido quimérico de leptina de foca-ser humano com solubilidade aumentada - Google Patents

Description

DESCRIÇÃO

POLIPÉPTIDO DE LEPTINA QUIMÉRICO DE FOCA-SER HUMANO COM

SOLUBILIDADE AUMENTADA

REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica a prioridade do Pedido n° US 61/387,402 depositado em 28 de setembro de 2010 e do Pedido n° US 61/422,091 depositado em 10 de dezembro de 2010. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A presente revelação fornece compostos inovadores que demonstraram atividade biológica. Os compostos também demonstram melhoramento surpreendente e significativo nas propriedades físicas, tais como solubilidade e estabilidade.

Os compostos da revelação se baseiam em sequências de leptina reveladas no Pedido n° U.S. 61/387,402 e no Pedido n° U.S. 61/422,091. Os compostos são surpreendente e altamente solúveis e não demonstram a propensão a se agregar, diferentemente das leptinas de ocorrência natural. As propriedades físicas dos compostos facilitam a preparação de formulações e composições farmaceuticamente aceitáveis solúveis, também fornecidas pela invenção. As doenças recetivas a tal tratamento incluem lipodistrofia, dislipidemia, hiperlipidemia, sobrepeso, obesidade, amenorreia hipotalâmica, doença de Alzheimer, deficiência em leptina, doença hepática gordurosa, diabetes (incluindo tipo I e tipo II) , esteato-hepatite não alcoólica (NASH) , doença hepática gordurosa não alcoólica (NAFLD), síndrome metabólica X e doença de Huntington ou combinações das mesmas.

Permanece uma necessidade de desenvolver polipéptidos úteis nas doenças, afeções e distúrbios metabólicos descritos acima. Consequentemente, é um objetivo da presente invenção fornecer polipéptidos inovadores úteis para tratar as afeções acima e métodos para produzir e utilizar os mesmos.

BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO São fornecidos compostos de polipéptido quimérico que têm atividade biológica de leptina, adicionalmente a propriedades físicas acentuadas. Os compostos são polipéptidos quiméricos que se baseiam num polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem, em que pelo menos uma região contígua de 1 a 30 aminoãcidos de uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem foi substituída por uma região contígua de 1 a 30 aminoãcidos de uma sequência de leptina de ser humano madura e em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoãcidos que tem pelo menos 95% de identidade com a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO:32.

Em um primeiro aspeto, é fornecido um polipéptido quimérico conforme descrito no presente documento.

Em outro aspeto, é fornecido a utilização do polipéptido quimérico da invenção num método para tratar uma doença ou distúrbio num indivíduo que precisa de tratamento. O método inclui administrar um polipéptido quimérico conforme descrito no presente documento ao indivíduo.

Em ainda outro aspeto, é fornecido uma composição farmacêutica que inclui um polipéptido quimérico da invenção em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitável. São adicionalmente descritos no presente documento polinucleótidos codificando o polipéptido quimérico e seus intermediários, vetor de expressão contendo tais polinucleótidos, células hospedeiras expressando tais polinucleótidos e meios para sua expressão, síntese, modificação prós)translacional e isolamento.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

As Figuras IA a 1C retratam os efeitos de uma administração diária dos polipéptidos quiméricos indicados descritos no presente documento na ingestão de alimentos e alteração no peso corporal õ% de veículo corrigido® mediante a administração a murganhos fêmeas C57/B6 conforme descrito no Exemplo 4. Figura IA: ingestão de alimentos. Figura 1 B: alteração no peso corporal õ% de veículo corrigido®. Figura 1C: curva de resposta à dose.

As Figuras 2A a 2C retratam os efeitos de uma administração diária dos polipéptidos quiméricos indicados descritos no presente documento na ingestão de alimentos e alteração no peso corporal õ% de veículo corrigido® mediante a administração a murganhos fêmeas C57/B6 conforme descrito no Exemplo 5. Figura 2A: ingestão de alimentos. Figura 2B: alteração no peso corporal õ% de veículo corrigido®. Figura 2C: curva de resposta à dose.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO I. Definiç® es "Obesidade" e "sobrepeso" se referem a mamíferos que têm um peso maior do que o normalmente esperado e podem ser determinados, por exemplo, pela aparência física, índice de massa corporal õBMI® conforme conhecido na técnica,raz® es de circunferência entre cintura e quadril, espessura da dobra de pele, circunferência da cintura e similares. Os Centros para Controle e Prevenção de Doenças ÕCDC® definem o sobrepeso como um ser humano adulto que tem um BMI de 25 a 29,9; e definem obeso como um ser humano adulto que tem um BMI de 30 ou mais. Métricas adicionais para a determinação de obesidade existem. Por exemplo, o CDC determina que uma pessoa com uma razão entre cintura e quadril maior do que 1,0 está com sobrepeso. "Massa corporal magra" se refere à massa livre de gordura do corpo, isto é, o peso corporal total menos o peso da gordura corporal é a massa corporal magra. A massa corporal magra pode ser medida por métodos tais como ponderação hidrostática, câmaras computadorizadas, absortometria por raios x de dupla energia, pinças de pele, imagens por ressonância magnética ÕMRIB e análise d impedância bioelétrica õBIAlEI conforme conhecido natécnica. "Mamífero" se refere a animais de sangue quente que têm geralmente pelugem ou pelo, que dão à luz sua progénie e que alimentam sua progénie com leite. Mamíferos incluem seres humanos; animais de estimação õpor exemplo, cães, gatosE ; animais de quinta õpor exemplo, vacas, cavàos, ovelhas, porcos, cabrasl^ ; animais selvagens; e simlares. Em uma modalidade, o mamífero é uma fêmea. Em uma modalidade, o mamífero é um ser humano do sexo feminino. Em uma modalidade, o mamífero é um gato ou cão. Em uma modalidade, o mamífero é um mamífero diabético, por exemplo, um ser humano que tem diabetes tipo 2. Em uma modalidade, o mamífero é um mamífero diabético obeso, por exemplo, um mamífero obeso que tem diabetes tipo 2. 0 termo "indivíduo" no contexto dos métodos descritos no presente documento se refere a um mamífero. "Fragmento" no contexto dos polipéptidos se refere no presente documento no sentido químico costumeiro a uma porção de um polipéptido. Por exemplo, um fragmento pode resultar da deleção N)terminal ou deleção C)terminal de um ou mais resíduos de um polipéptido progenitor e/ou um fragmento pode resultar da deleção interna de um ou mais resíduos de um polipéptido progenitor. "Fragmento" no contexto de um anticorpo se refere a uma porção de um anticorpo que pode ser ligada a uma molécula biologicamente ativa para modular a solubilidade, distribuição dentro de um indivíduo e similares. Por exemplo, a leptina A20G descrita no presente documento é um conjugado de um fragmento de anticorpo Fc com uma leptina, conforme conhecido na técnica. Consulte, por exemplo, os documentos WO 98/28427 e US2007/002084. 0 termo "progenitor" no contexto de polipéptidos se refere, no sentido costumeiro, a um polipéptido que serve como uma estrutura de referência antes da modificação, por exemplo, inserção, deleção e/ou substituição. "Análogo" conforme utilizado no presente documento no contexto de polipéptidos se refere a um composto que tem inserções, deleções e/ou substituições de aminoácidos em relação a um composto progenitor. Um análogo pode ter estabilidade, solubilidade, eficácia, meia)vida e similares superiores. Por exemplo, um análogo pode ser um composto que tem pelo menos 50%, tal como 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou até mesmo mais de identidade de sequência com o composto progenitor. "Identidade", "identidade de sequência" e similares no contexto de comparação de dois ou mais ácidos nucleicos ou sequências de polipéptidos se referem a duas ou mais sequências ou subsequências que são iguais ou têm uma percentagem especificada de resíduos de aminoácido ou nucleótidos que são iguais 0 isto é, cerca de 50% de identidade, de preferência, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ou mais de identidade em relação a uma região especificada, quando comparadas e alinhadas para correspondência máxima numa janela de comparação ou região designada® conõrme medido com a utilização de um algoritmo de comparação de sequência conforme conhecido na técnica, por exemplo, BLAST ou BLAST 2.0. Essa definição inclui as sequências que têm deleções e/ou adições, assim como aquelas que têm substituições, assim como variantes de ocorrência natural, por exemplo, polimõrficas ou alélicas e variantes artificiais. Nos algoritmos preferenciais, considera)se lacunas e similares, conforme conhecido na técnica. Para comparação de sequência, tipicamente uma sequência atua como uma sequência de referência, à qual sequências de teste são comparadas. Ao utilizar um algoritmo de comparação de sequência, sequências de teste e referência são inseridas num computador, coordenadas subsequentes são designadas se necessário, e parâmetros de programa de algoritmo de sequência são designados. De preferência, parâmetros de programa padrão podem ser utilizados, ou parâmetros alternativos podem ser designados. 0 algoritmo de comparação de sequência calcula, então, as identidades de sequência percentuais para as sequências de teste em relação à sequência de referência, com base nos parâmetros de programa. 0 alinhamento ideal das sequências para comparação pode ser conduzido, por exemplo, pelo algoritmo de homologia local de Smith &amp; Waterman, 1981, Adv. Appl. Math. 2:482, pelo algoritmo de alinhamento de homologia de Needleman &amp; Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48:443, pelo método de busca por similaridade de Pearson &amp; Lipman, 1988, Proc. Nat'1. Acad. Sei. USA 85:2.444, por implementações computadorizadas desses algoritmos B GAP, BESTFIT, AS TA e TFASTA no Pacote de Software Wisconsin Genetics, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.0 ou pelo alinhamento manual e pela inspeção visual. Consultar, por exemplo, Current Protocols in Molecular Biology 0 Auubel et al. , eds. 1995 supplementUS 0 . Os exemplos prefereneis de algoritmos que são adequados para determinar a identidade de sequência percentual e a similaridade de sequência incluem os algoritmos BLAST e BLAST 2.0 que são descritos em Altschul et al., 1977, Nuci. Acids Res. 25:3.389 a 3.402 e Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403 a 410. BLAST e BLAST 2.0 são utilizados, conforme conhecido na técnica, para determinar a identidade de sequência percentual para os ácidos nucleicos e proteínas da revelação. Software para realizar análises de BLAST está publicamente disponível através do site da web do Centro Nacional para Informações de Biotecnologia. Esse algoritmo envolve, primeiramente, identificar pares de sequência de alta pontuação M HPsB identificando)se palavras curtas de comprimento W na sequência de consulta que ou se correlacionam ou satisfazem alguma pontuação limite com valor positivo T quando alinhadas com uma palavra do mesmo comprimento numa sequência de banco de dados. T é referido como o limite de pontuação de palavra de vizinhança õAltschul et al., Id.á. Esses acertos de palavra de vizinhança iniciais atuam como sementes para iniciar buscas para encontrar HSPs mais longos que contêm os mesmos. Os acertos de palavra são estendidos em ambas as direçlEI es ao longo de cada squência até o ponto em que a pontuação de alinhamento cumulativa pode ser aumentada. As pontuaç® es cumulativas são calculadas com a utilização, por exemplo, para sequências de nucleótidos, dos parâmetros M õpontuação de recompensa para um par de resíduos correspondentes; sempre >0ã e N õpontuação de penalidade para resíduos não correspondentes; sempre <0á. Para sequências de aminoS eidos, uma matiz de pontuação é utilizada para calcular a pontuação cumulativa. A extensão dos acertos de palavra em cada direção é interrompida quando: a pontuação de alinhamento cumulativa diminui pela quantidade X de seu valor m0 ximo alcaçado; a pontuação cumulativa vai para zero ou abaixo, devido à acumulação de um ou mais alinhamentos de resíduo de pontuação negativa; ou o final de cada sequência é alcançado. Os parâmetros de algoritmo BLAST W, T e X determinam a sensibilidade e a velocidade do alinhamento. 0 programa BLASTN õpara sequências de nucleõtidosá utiliza como padrH es um comprimento de palavra õwã de 11, ma expectativa õEã de 10, M=5, N=)4 e uma comparação entre ambos os extirpes. Para sequências de aminolEI eidos, o programa BLASTP utiliza como padrB es um comprimento de palavra de 3 e expectativa ÕEã de 10 e os alinhamentos de matriz de pontuação BLOSIJM62 õconsultar Henikoff &amp; Henikoff, 1989, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89:10.915ã õBá de 50, expectativa õEá de 10, M=5, N=)4 e uma comparação entre ambos os extirpes. 0 termo "cerca de" no contexto de um valor numérico se refere a +/) 10% do valor numérico, a não ser que expressamente indicado de outro modo.

Os termos "péptido" e "polipéptido" no contexto dos compostos descritos no presente documento são sinónimos.

Leptinas. "Leptinas" e "uma leptina" significam: leptinas, fragmentos ativos de leptina, análogos de leptina e derivados de leptina; e uma leptina, um fragmento ativo de leptina, um análogo de leptina e um derivado de leptina; respetivamente. Consequentemente, a não ser que notado de outro modo, a referência a "leptina" se destina a abranger leptinas, fragmentos ativos de leptina, análogos de leptina e derivados de leptina, conforme revelado no presente documento. Similarmente, a não ser que notado de outro modo, a referência a "uma leptina" se destina a abranger uma leptina, um fragmento ativo de leptina, um análogo de leptina e um derivado de leptina, conforme revelado no presente documento. As leptinas exemplificativas que podem ser empregadas no projeto, na preparação e na utilização dos polipéptidos quiméricos revelados no presente documento incluem aquelas que produzem uma ou mais respostas biológicas conhecidas na técnica por serem produzidas quando as leptinas são administradas a indivíduos õconsultar, por exemplo, os Pedidos de Patente publicados n° US 2007/0020284 e US 2008/0207512, as Patentes n° U.S. 6,309,853 e US 7,183,254 e os Pedidos Publicados PCT n° WO 96/005309, WO 98/28427 e WO 2009/064298 H , tais com: redução da ingestão de alimentos, redução do peso corporal, redução de ganho de peso corporal, indução de saciedade, redução da disponibilidade calórica, redução da eficácia calórica, redução do platô metabólico, aumento na sensibilidade à insulina, redução da hiperlipidemia, correção da dislipidemia, redução da hipertrigliceridemia, atenuação da obesidade, atenuação do sobrepeso, atenuação da diabetes mellitus õincluindo diabetes tipo I, diabetes tipo II e diabetes gestacionalS , atenuação da resifeência à insulina, atenuação das afeções de lipodistrofia associadas às mesmas, assim como outras respostas biológicas conhecidas na técnica por serem produzidas mediante a administração de uma leptina 0 consultar, por exempó, os Pedidos de Patente publicados n° US 2007/0020284 e US 2008/0207512, as Patentes n° U.S. 6,309,853 e US 7,183,254 e os Pedidos Publicados PCT n° WO 96/005309, WO 98/28427 e WO 2009/064298 ã.

As leptinas incluem, porém, sem limitação, os compostos descritos nas Patentes n° US 5,594,101, US 5,851,995, US 5,691,309, US 5,580,954, US 5,554,727, US 5,552,523, US 5,559,208, US 5,756,461, US 6,309,853, no Pedido de patente publicado n° US 2007/0020284 e nos Pedidos Publicados PCT n° WO 96/23517, WO 96/005309, WO 98/28427, WO 2004/039832, WO 98/55139, WO 98/12224 e WO 97/02004. Os métodos para testar as atividades de leptina e respostas biológicas in vitro e in vivo, incluindo saciedade, atividade de inibição de ingestão de alimentos e atividade de perda de peso, são conhecidos na técnica e são descritos no presente documento e também nas referências acima e em outras referências citadas no presente documento.

Leptinas representativas, análogos de leptina, fragmentos ativos de leptina e derivados de leptina incluem os seguintes:

Leptinas murinas maduras:

VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLA VYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASGY STEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC,em ^ue Xaa na P°s'Çao 28 é Q ou auseníe <S£QID NO:U

Forma 1 de leptina XKVUL3C JL.in.cl madura:

VPrQK.VQDD'rKTFJK:Tm’RfôDlSmX5SVSAKQR\n’GLDFlPCiLHPlLSLSK:MD0TLAVY OQVLTSLPSQNYLQlANDLE'N'LRDi.I.H'L!..AESKSCSEPQTSGÍ..QKPESLiXiV!X.EASEYST EVVALSRLQGSLQD1LQQLDVSPEC (SEQ ID NO:2l

Forma 2 de leptina murina madura: VPIQKVODDTKTLlKTÍVTRlNDíSHTSVSAKQRVTCíLDFIPGUiPlLSitóKMDQTI^VYQ QVU^U^O^^QIANDLENLRDLLHLLAFSKSCSLPQTSOLQKFESLIXJVLEASLYSTE WALSRLQOSLQDILOQLDVSPEC: (SEQ 1D NO:3>.

Leptinas murinas maduras com metionina n-terminal:

MVPIQKV QDDTKTLIKTIVTRINDI SHT-Xaa- S V S SKQKVTGLDFIPGLHPILTL SKMDQTL AVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEASG YSTEVVALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC,erT1 9ue Xaa na PosíÇão 29 é Q ou ausente (SEQ ID NO:4)

Forma 1 de leptina murina madura com metionina n-terminal:

MVPiQKVQDDTKTLEKTlVTR.lNOtSirrOSVSAKQRVTGLDFiPGLHPlLSLSKN-1DQT.LAV YQQVLTSLPSQN’VtQlANDLENLRDLUÍLLAFSKSCS LPQT8GLQRPES L 00'VLEA5LYS TE V V ALS RLQGSLQDiLQQLD VSPEC (SEQ 1D 'N0:5 >.

Forma 2 de leptina murina madura com metionina n-terminal: MVMQKVQDDTKTLlKT1VTRtND.IS.H]\SVSAKQRVTCKiEF.IPCd,HP!Í..StSKM.QQTI.AVy QQVLTSLPSQMVLQIANDLENLRDL.LHLLAFSKSCSLPQTSGLQKPESLDGVLEASLYST EVVAÍ,SRLQGSLQDíLQQÍ.DVSPEC {SEQ Í.D N();6),

Leptina porcina madura: VPIWRVQDDTKTLIKT1VTRISDTSHMQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLSLSKMDQTLAIY QQILTSLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTEV VALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC (SEQ ID NO:7).

Leptina porcina madura com metionina n-terminal:

MVPIWRVQDDTKTLIKTIVTRISDISHMQSVSSKQRVTGLDFIPGLHPVLSLSKMDQTLAI YQQILTSLPSRNVIQISNDLENLRDLLHLLASSKSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYSTE WALSRLQGALQDMLRQLDLSPGC (SEQ IDNO:8).

Leptinas bovinas maduras: VPICKVQDDTKTLIKTIVTR1NDISHT)Xaa) SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPSRNWQISNDLENLRDLL HLLAASKSCPLPQVRALESLESLGWLEASLYSTEWALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC , em que Xaa na posição 28 é Q ou está ausente ÕSEQ ID NO:90 .

Leptinas bovinas maduras com metionina N-terminal: MVPICKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT)Xaa)

SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAIYQQILTSLPSRNWQISNDLENLRDLL HLLAASKSCPLPQVRALESLESLGWLEASLYSTEWALSRLQGSLQDMLRQLDLSPGC , em que Xaa na posição 29 é Q ou está ausente õSEQ ID NO:100 .

Leptina Humana de Comprimento Completo não Processada (isto é, inclui a sequência de sinal N-terminal com 21 resíduos): MH WGTIXOFLWLWPY LF Y VQA VPIQK VXJDOTKTUKT! VTRINDISHTQSVSSKQK VTG LDFÍKjl.HPftTLSKMDQTL-AVYÇíQltTS)v1PSRNV)QISNDLE^LRDtU-JVtAFSKSCHLr WASGÍ.EnilSLGGVLE ASGY STEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPCSC ÍSEQ 1D NO: m

Leptinas humanas maduras (com a sequência de sinal com 21 aminoãcidos N-terminal removida): VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH)Xaa)Xaa) SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLL HVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEWALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC , em que: Xaa na posição 27 é T ou A; e Xaa na posição 28 ê Q ou está ausente ÕSEQ ID NO:120 .

Leptinas humanas maduras com metionina N-terminal:

MVPTQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQ

TLAVYQQ1LTSMPSRNVIQ1SNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEA ‘sfiV^TFVVAT ÇR7 ΠΓΤ^ί ΟΠΐΥ/ΙΙ WOT ΠΤ SPfiP em ^ue' ^as na Posl<?®° 28 é T ou A, e Xaa na posição bUYM hv VAEbRLQUbLQDMLWQLDLbl 00,29 é Q ou ausente (SEQ ID NO:13).

Leptina de Reso Madura: VPíQK VQSDTKTUKTIVTRÍNDlSlTrQSVSSKQlí VTGlJ">F,'lPÍjlJ'-)PYt.TLSQMíXjT[jMYQ Qi'U'NLP$RNVlQiSM>LENt.ROI.LHOAPSKSCH'LPLASG’í.fe'’rLESi.GDVLEASt,Y'STEV’V ALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID N0:14>.

Leptina de Reso Madura com metionina N-terminal: MVTlQKVQSDTKTUKTIVTRiND!SltTQSVSSKlQR'VTGLD.FIPGLIiP¥L^SQM)QTLAl YQQILIHLPSRIWIQISNDLENLRDLLHLLAFSKSCHLPLASGLETLESLGDVLEASLYSTE WALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 13).

Leptina de rato madura:

WlHKVQDDTICTLrKTIVTRINDISHTQSVSARQRWGLDFIPGLHPlLSLSlCMDQTLAW QQlLTSLPSQNVLQíAHDLENmDLLHLLAFSXSCSLPQIRGLQKPESLDGVLBASLYSTE VVALSRLQGSLQDiLQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 16).

Leptina de rato madura com metionina N-terminal: ÃÍVPlHKVQDDTKlXlKTÍVTRlM>lSHTQSYSARQRVTGLDFIPaLHFtt^LSR.M.DQ'n^V YQQÍLÍSIJ3SQN Vli,>iÂHDiJ'íNiJíJ>LiJ 5L!.,Aí;SKSCSL.PQ'rR0LQKPi':'SÍ..DGV[,EÂ.Sl.YSf' EVVALSR.LÇKjSLQDÍLQQLDLSPEC (SEQ 1D N0:17,!.

Leptina de omitorrinco madura: A sequência de leptinas de ornitorrinco madura segue: ISlEICÍQÂDT.K.TLTKTÍITRtÍQLSTQNGVSTDQRVSG'LDFIPGNQQFQNLÀDMDQTLAVYQ QILSSLFMPDRTQISNDLENLRSLFALLATLKINCPFTRSDOLUrMElWGGIVlESLYSTEV V'fLD'RLRKSUKN]'EKQLI>filQG (SEQ JD NO: I S),

Leptina de Ornitorrinco de Comprimento Completo não Processada (isto é, inclui a sequência de sinal N-terminal com 21 resíduos): Uma sequência de comprimento completo de leptina de ornitorrinco, incluindo uma sequência de sinal N)terminal com 21 resíduos, segue: MROLLYGFLCVWQHl.YYSHPlSiEK]QADTKXi/rKT.UTR!lQLSTQNGVSTDQRVSGl.DF ÍPGNQQFQNl.ADMDQTLAVYQQH.SSEPMPDR.TQiSNOLENLRSÍJFA.ELATÍ.KNETETRS DGLDTMEÍWGGÍVEESLYSTEVVTLDRLRKSLK.NIEKQLDHÍQG(SEQ ÍD NO: 19).

Forma 1 de leptina humana madura: VP]QKVQDDTKTUKTi\TRlNDJSHTQSYSSlí.QíCVTGlJ>FIPGl.HPU;aSKMDQn.AVY QQlLTSMPSRNVlQÍSNDl.ENLRDLLHVXAFSKSCmPWASGi.F/nJDSEGCSVLEASQYST E VV ALSRIQGSLQDML WQLD LSPGC (SEQ ID NO:2G>.

Forma 2 de leptina humana madura:

VPiQKVQDDlXTLTKnVTRINDISHAQSVSSK.QKVTOlJDFlKiLHPILTLSKMDQTLAYY QQ11.TS MPSR N V(Q (SN OLE N LRDL1. H YL A FSKSCHI. P W.A SGLET LDS T..-GG V LE A SG ¥ ET EVVALSREQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO:2Q.

Forma 3 de leptina humana madura:

VPlQKVQDDTKTLIKTIV"rKÍNDlSHl'SVSSKQKVTCíT..DFlPQLHPÍLTÍ..SKMDQTEAVYQ

QiLTSMPSRNVIQíSNDLENLRDLLHVEAFSKSCHLPWASGLFrLDSLGGVLEASGYSTE VVAiSRLQGSLQDML WQLDL&amp;PGC (SEQ lDNO:22).

Forma 4 de leptina humana madura: VPíQK.YQíX>TKlLIKTlVlR!'ND?.SHASVSSKQKVTGIJ')EiPGi,HFIl.'fLSKMDQTl,AVYQ QlLTSMPSRNVíQlSNOLENLRDLLHVLArSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTE WAESRLQGSLQDMLWQLDLSPGC(SEQ ÍDMYIQ.

Forma 1 de leptina humana madura com metionina N-terminal (também conhecida como Metreleptina ou A100): MVPIQKVQDDTKTUKTÍVTRJDIDiSHTQSVSSKQKVTGLDFFPGLHPILTLSKMDQTLAV YQQ!Í..T$KÍPSRNViOiSNDLENi.RDU,HVLAFSKSCHLPWA$at.O'l.DSÍ,ÍK3Ví.EASOYS TEVVALSRLQOSLQDMLWQLDLSPGC' (SEQ ií> NO:24 >

Forma 2 de leptina humana madura com metionina N-terminal: MVPÍQR.VQD1>TKTL1KT1VÍRINDÍSHAQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPÍ1.TLSKMÍX?TLA.V YQQILTSMPS!^VíQISNDLENLRDLlJfV'IAFSKSCHÍJA¥ASGIJtLDSLGGWmSGYS TEVVALSSLQGSLQDMLWQLDLSPGC {SEQ IO Μ>;25)*

Forma 3 de leptina humana madura com metionina N-terminal:

MYTIQKVQDDTKTLIKTlVTRINDlSFrrSVSSKQKVTOLDFIPGLHPÍLTLSKMDQTI.AW

QQlLTSMPSRNVfQISNDLBNLRDLLHVLAFSKSCliLPWASGLETLDSLGGVLEASGYST ΈVVÀLSRLQÕSLQBMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO-26).

Forma 4 de leptina humana madura com metionina N-terminal:

MVTlQKVODDTKTLIKmTRINDíSHASVSSKQKYTGLDnPGLHPiLTLS^fDQTLAVY QQÍLTSMPSRNVfQiSNDLENLRDLLl-IVLAPSKSCi-íLPWASCiLETLDSLCiGVLEASGYST EWALSRLOGSI..QDMLWQLDLSPÚC (SEQ ID NO:27j.

Leptina de foca:

PlQRVQDDTKTLÍKTllTRJNDJSPPQCVCSRPRVACLDFlPRVQSVRIIi^MDQtLÀTYQQ ÍLISL0SRSVVQ!AN[:H..AN!.-RAIJ..RlI,ASAKSCPVPRARGSOÍJKOL.GNVI,RASVHS'1TíV YALSRLKAAI.QDMIJIQI.DR.NPGC' ÍSEQ ID NO'28).

Leptina de foca com os aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente:

Pi0RVQDOTKTUK'nrnUNDJSPFQGVCSRPRVAOLDFJPRV0SVR'Il.SGMD0lhA'n'0Q iLTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCPVPRARGSDTlKGLGNYLRASYHSTEVV ALSRLKAALQDMI.ROBFJRNPCX' (SFQ ID NO: 29),

Leptina de foca com os aminoácidos 30 e 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 32 e 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente:

PjQRV^DDTK.TiJKTÍlTRlNDlSPFQCiVSSRFRVAG'il>FIPRVQSVRTLS0N-1I>QiLA'rYQQl

LTOLQSRNVlQÍSNDLENLRDlLHVLArSKSCPVPRARGSDTIKOUiNVUíASVHSTEVV AÍ,SR.LKAÂLQDMr..RQr..DRNPGC (SEQÍD >10:30).

Leptina de foca com metionina N-terminal: MP!QRVQr.>QTKTIJKTJlTRlNDiSPP<XjVC$RPRVAGLDí;ÍPRVQ$VRTLSGMDQlLATYQ QÍI/T$f..GSÍi$VVQ!A:NDLA^i.RA.L.ii..R ]J.,ASÁKSC'RVPR.ARGSr>TlKCí:L.GNVÍ..FíASVHSTI· VVALSRiK-AALGDMiRQLDR,NPGC (SEQ !D NO:31).

Leptina de foca com metionina N- terminal e com os aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoâcidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente: MPJQRVQDD'ÍKTÍ.JKTHTR}NÍ>lSPPQCjVCSRPRVAGl.DFJPRV<)SVRJLSGMDQll^A'rVO QILTSLQSRNVIQISNDLEMLRDUJ-ÍVIAPSKSCPVPRARGSDTIKGU^VLRASVHSTEV VALSR1JKAÀLQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID NO:32>.

Leptina de foca com metionina N-terminal e com os aminoácidos 30 e 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 32 e 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente: MPIQRVQDDTKTLIKTUTRIMDlSPPQGVSSRPRVÂGLDFIPRVQSYRTLSGMDQÍLA^rYQ QlLTSLQSSNVIQlSNDLENLRDLLHVLÂFSKSCPVPRARGSOTIKGLGNVLRASVeSTEV VALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID NO:33).

Leptina A200: A leptina A200 é um produto de condensação de fragmento de anticorpo Fc com leptina, conforme conhecido na técnica. Consultar, por exemplo, Lo et al., 2005,

Protein Eng. Design &amp; Selection, 18:1 a 10. A sequência de aminoácidos de A200 é da seguinte forma: MDK.THTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLM!SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVfCFNWY VDGVEVHNAKTKi>Rl'EQYMS'n,R.VVSVLTVLHQDWL'NGKEYKCKVSNKALPAP!EKTÍ SKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTK.NQYSí.TÍXVKOFYPSDiAVEWESNGQPENNYKTTP PVLDSDGSPFiySKLTVDKSRWQQGNVPSCSVMHEALBNBYTQKSLSLSPGKVPlQKV QDDTKTUKTiVTRiNDISmOSVSSKOKVTGLDFIPGLHPfLTLSKMDQTLAVYQQH/rS MPSRN VIQÍSNDLHNLRDLLH V LAFSKSCHLPW ASGLETLDSLCiGVLEASGYSTEV VALS Ri.QísSí.,QDM'LWQLDI..SPGC (SEQ IDTnO.: 14)

Leptina A300: A leptina A300 é metreleptina com substituições W101Q e W139Q 0 Met N)terminai contada como o resíduo la:

MVP1QKVQDDTKTL1KTIVTR.INDISHTQSVSSKQKVTGLDFÍP0LHP1LTLSKMDQTLAV YQQÍLTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLÀFSKSCBLFQASGLETLDSLOGVLIASGYS TEWALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQID NQ35).

Leptina A400: A leptina A400 é metreleptina com o resíduo de serina na posição 78 substituído por um resíduo de cisteína, conforme definido a seguir: MVPÍQKVQDDTKTLÍKTIVTR1><D1SHTQSV$SKQKVTCLDFIPGLHP1LTLSKMDQTL.AV Yf^íLTSMPSRNVlQ]CNDLENLRDLLHVl.ÂPSKSCmPWA$GLFn..DSLCJÍ3VXEASGY'S TEVYALSMX^SLQDMLWQ.LI>LSP{jC (SEQ ID NO; 36); ao qual uma porção química PEG de 20 quilodaltons õkDaá foi ligada por meio do resíduo de cisteína na posição 78 .

Leptina A500: A pesquisa por vários investigadores incluindo os inventores focou nos efeitos na agregação da substituição de resíduo na leptina. Consultar, por exemplo, Ricci et al., 2006. "Mutational approach to improve physical stability of protein therapeutics susceptible to aggregation: Role of altered conformation in irreversible precipitation'* , Book Chapter. Em: MI5BEHAVING PROTEINS: PROTEIN õMISãFOLDING, AGGREGATION, AND STABILITY, Murphy RM, Tsai AM, Eds., Nova York. Springer. Páginas 331 a 350. Consequentemente, a leptina A5G0 com acompanhamento de sequência foi utilizada em determinados compostos e métodos descritos no presente documento: MVPIQK.VQDDTKTLlKTfVTRlNDISirrQSVSSKQFCVTOi.P-FIPGI-HPStTLSKMDQrLAV YQQILl'SiVIPSR.NVJQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASfíLETTFSrX*GVLFASGYST BVYALSRLQGSLQDMLQQLDLSPGC (SEQ ID NO:37).

Variantes de leptina A100: As variantes da leptina A100 com as seguintes substituiçS es de aminoácidos seguem: D41E, H98S, W101Q, D109E, G113E, M137I, W139Q e G146E: MWiQKVQDDTKTiJKTIVTRLNDÍSHTQSYSSKQKVTGLEFnOLífPILTLSKMDQTlAV YOQfLTSMPSa>?VTQlSNDLENi^DLmVl^FSKSCJLPQASGLETLESI.jGEVLEASGYST JWVALSRLQGSLQBIT.X^QLDI.SPEC (SFQ ID NO: .?*). H98S, W101Q, A102T, G113E, M137I, W139Q e G146E: MVPlQKVQDDTKTLIKTIVTFJNDIBKIQSVSSKQIvVTGLDFÍPGLHPILTLSKMIDQTLAV YQQÍLTSMPSRKr¥IQ!Sh'DLE>ILRDLL13\'rLAFSíCSCSLPQASGLETLDSLGGVLEASOYST KVYÀISM*QGSLQD!LQQ.LDLSPEC (SEQ ÍD Μ>: 3¾. H98S, W101Q, G113E, M137I, W139Q e G146E: MVPIQKVQDDTKTORTIVTRíNDISHTQSVSSKQKVTGIDFlIKíLlíHLTLSRMDQTLAV YQQiLÍSMPSRNVIQÍSNDLÍiNijlDLLHVLAÍ^KÍjCSi^QASGLE^DSLGSVLEASGYST f^^AÍJSllljQGSlXÍDÍLQQLDLSFF/,' (SEQ ÍD NO: 40). W101Q, G113E, M137I, W139Q e G146E: MVPíQKVQDDTKTLIKTIVTRJNDíSHTQSVSSKQKVTGLDFIKjLHPILTLSKMDQTLAV YQQÍLTSMPSRNVIQÍSNDLe^mDlXHVLAFSKíiCmPQASGiJETLDSLOEVLFASOYST EWALSRLQGSLQD1LQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 41).

H98S, W101Q, M137I, W139Q e G146E: MVPíQKVQDDIRTUKTlVlRLNDISHTQSVSSK.QK.VTGLDFiPGLHPlLTLSKMDQTi.AV YQQÍl.TSMP$RNV|QlSNDLE.Nl.RDi.LHVLAFSKSCSLPQASGLETLD$l.GGVLEASOYST L·VVALSRLQCiSLQDlLQQLDLSPEC (SEQ ID NO; 42). W101Q, G113E, M137I, W139Q, L143V e G146E: M VPIQK VQDDTKT LIKT1VTRJ N OISHTQS VS S KQKVT G LD F1POL H PI LTLSKM DQT LA V YQQTI..TSMPSRNV1Q1SNDLENLRDLLHV1-AFSKSCHLPQASGLETLDSLGEV1J?.ASGYST EVVALSR.LQGSLQDI1.QQLDVSPEC (SEQ ID NO: 43). H98S, W101Q, A102T, M137I, W139Q e G146E: MVPIQK.VQDL>'rKl.LIK'nVTK.f.NDíSi'(rQSVSSKQKV'lO.I..DT'lPCi.LHPI1.7'i.SK.MDQT!..AV YQQH..TSMPSRNYIQISNDLENLRDLLHVLA.FSKSCSLPÍ^rSGLETLDSLCK.»V.LEASGYST EVYALSRLQGSEQDn.,QQEDLSPEC (SEQ ID NO: 44). H98S, W101Q, D109E, G113E e G146E: MVPlQK.VQDDIS.TLIKTÍYTRiNDlSHTQSYSSKQS.V'rGLDHPGLHPiLTLSKMDQTLAY YQQH:rSMPSRNV!QÍSNDLENLRDLLHVLAFSKStSLPQASGLETl.ESLGEVLEASCiYST EVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPPC (SEQ ID NO: 45). W1Q1Q, M137I, W139Q e G146E: M VPIQK VQDD ÍKT1J K'íi V'j RiNDISH T QS VSSKQK.VTGLDFlFtíí J !Fíi.TL.SK.M:DQí'i.A V YQQILTSMPSRNVÍQlSNDLENLRDLLHVLAFSKJSCHLPQASCjLfíTiJDSLCKiVLEASOYS TEVVALSRI.QGSLQD1LQQ.LDLSPEC {SEQ \D MO: 45). W101Q, M137I, W139Q, L143V e G146E: MVPíQK.VQDDTKTUKTÍVTRIND.!SHTQSVSSKQK'VTGLDFiPGLHPiLTLSKMÍ>QTLAV YCK^U.TSMPSRNVÍQÍSNDLENÍJRDÍXHVXAFSKSCHÍiHÍASGtErÍJDSÍXíGVLEAÍíCiYS TíiVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 47). H98S, W101Q, A102T, M137I, W139Q, L143V e G146E: M\?PlQKVQDDTKTUKTiVTRlNDlS{rrQSVSSKQK:VT-OLDFÍPOLHPim,SKMD<yrLAV YQQ!i;rSMPSRNV{QlSN'DLENl.,RDl..LHVi,A:FSKSCS.LFQ1S)CrtJ::i4J'3Sr,CK)VIÍ3ASOVS'.r EVVAI..SRI..QCiSIjQDlíJQQLDVSPl=)f: (SEQ ÍD NO: 48). H98S, W101Q, A102T, G113E e G146E: MVTIQKV^QDDTOLlKTIVTRÍNDlSOTQSYSSKQKVTGLDRPCíLHPíLlILSKMDQTLAV YQQILT SMPSRN ViQlSNDLENLRDLl. Η VI. AFSKSCSLPQTSGLETLDS1XE V L EASGYST EVVALSRLQCiSLQDMLWQLDLSPEC (SEQ ID NO: 49). W101Q, G113E e W139Q: MVPlQKVQDDTKTLlKTíYTRJNDlSHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLAV YQQILTSMPSRNVJQJSNDLENLRDLIHYLAFSKSCHLPQASGLBTLDSLGEVLEASGYST EVVALSRLQGS1.QDMLQQLDLSPGC (SEQ ÍD NO: 50). W101Q, G113E, W139Q e G146E: MVPlQKVQDDTKTL!KTí\TRfNDiSHTQSVSSK.QKVTGLDFIPOLHPJLTLSKMf)QTLAV YQQlLTSMPSRNVIQlSNDLENLRDLLMYiAFSKSCHLPQASGEETLDSLOEVLEASGYST EWALSRLQGSIQDMLQQUDLSPEC (SEQ ID NO: 51). II. Polipéptidos quiméricos

Em um aspeto da presente revelação, uma série de polipéptidos quiméricos são descritos. Esses polipéptidos quiméricos se baseiam num polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem, em que pelo menos uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem foi substituída por uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de uma sequência de leptina de ser humano madura. Uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem inclui a sequência da leptina de foca do tipo selvagem õSEQ ID NO:2Sã e a sequência da leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID N0:31ã. Uma sequência de leptina humana madura, útil para quimerizar a leptina de foca do tipo selvagem conforme fornecido no presente documento, inclui as seguintes sequências descritas acima: leptinas humanas maduras ÕSEQ ID NO:12á, leptinas humanas maduras com metionina N)terminal ÕSEQ ID N0:!3ã, forma 1 de leptina humana madura ÕSEQ ID NO:20á, forma 2 de leptina humana madura ÕSEQ ID NO:2lá, forma 3 de leptina humana madura ÕSEQ ID NO:22á, forma 4 de leptina humana madura ÕSEQ ID NO:2 3ã, forma 1 de leptina humana madura com metionina N)terminal õMetreleptina ou A100, SEQ ID N0:24á, forma 2 de leptina humana madura com metionina N)terminal ÕSEQ ID NO:2 5ã, forma 3 de leptina humana madura com metionina N)terminal ÕSEQ ID NO:26ã, forma 4 de leptina humana madura com metionina N)terminal ÕSEQ ID NO:27ã, A200 ÕSEQ ID NO:34ã, A300 ÕSEQ ID NO:35ã, A400 ÕSEQ ID NO:36á, A500 ÕSEQ ID NO:37ã e variantes de A100 ÕSEQ ID NO: 38 a 510 . Em algumas modalidades, uma série de polipéptdos quiméricos é descrita em que pelo menos uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem ÕSEQ ID NO. 2 8 ou SEQ ID NO: 310 fd> substituída por uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de A100 ÕSEQ ID NO. 240 .

Em qualquer um dos polipéptidos quiméricos revelados, uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos pode compreender qualquer aminácido de ocorrência natural ou não natural aminoácido. Qualquer combinação de aminoácidos pode ser empregada sem restrição. Isto é, dois ou mais aminoácidos numa região contígua podem ser substituídos por um aminoácido de ocorrência natural, um aminoácido de ocorrência não natural, uma substituição conservativa, uma substituição não conservativa ou qualquer combinação dos mesmos .

Os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento demonstraram atividade biológica, adicionalmente a propriedades físicas acentuadas. Por exemplo, os polipéptidos quiméricos de foca)ser humano mostram atividade de leptina in vitro e in vivo. Os polipéptidos quiméricos também mostram estabilidade e solubilidade acentuadas em comparação a polipéptidos de leptina humana madura que são utilizados para derivar as sequências, conforme mostrado pelos Exemplos. 0 termo "atividade de leptina" inclui atividade de ligação à leptina atividade funcional de leptina. A pessoa versada na técnica reconhecerá os compostos análogos de leptina com atividade de leptina com a utilização de ensaios adequados para medir a atividade funcional de leptina ou de ligação à leptina. Os compostos análogos de leptina podem ter uma IC50 de cerca de 200 nM ou menos, cerca de 100 nM ou menos ou cerca de 50 nM ou menos ou cerca de 5 nM ou menos ou cerca de 1 nM ou menos num ensaio de ligação à leptina, tal como este descrito no presente documento. 0 termo "IC50" se refere no sentido costumeiro à metade da concentração inibidora máxima de um composto inibindo uma função biológica ou bioquímica. Consequentemente, no contexto dos estudos de ligação a recetor, IC50 se refere à concentração de um composto de teste que compete com metade de um ligante conhecido de um recetor especificado. Os compostos análogos de leptina podem ter uma EC50 de cerca de 2 0 nM ou menos, cerca de 10 nM ou menos, cerca de 5 nM ou menos, cerca de 1 nM ou menos ou cerca de 0,1 nM ou menos, num ensaio funcional de leptina, tal como este descrito no presente documento. 0 termo "EC50" se refere no sentido costumeiro à concentração eficaz de um composto que induz uma resposta bem na metade entre uma resposta de linha de base e uma resposta máxima, conforme conhecido na técnica. A. Polipéptidos quiméricos incorporando hélice humana 1 A região de Hélice 1 de um polipéptido de leptina humana madura atravessa uma região contígua de 20 aminoácidos. Hélice 1 e Hélice 3 são hélices antiparalelas que formam parte do Sítio de Ligação II da leptina a seu recetor. Esse sítio interage com o domínio de homologia de recetor de citocina ÕCRH0 do recetor de leptina e aredita) se que seja um sítio de ligação a recetor principal, mas não envolvido na ativação de recetor. Consultar, por exemplo, Peelman et al., 2004, J. Biol. Chem. 279: 41038.

Em um aspeto, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de hélice 1 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem õSEQ ID NO:280 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 3 a 22 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 5 a 24 de A100 ÕSEQ ID NO:240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:52:

Leptina de foca com os aminoácidos 3 a 22 substituídos pelos aminoácidos 5 a 24 (hélice 1) da metreleptina, respetivamente:

PIQKVQDD'ntTIJKmTRJNDÍSPPQGVC$RPRVAClJ>FrPRVQSVRTLSGMTX)ILATVQ

QlLmQSRSWQIAKDLAHLRALLRLI^SAKSaPWKARGSDTIKGLG^VLRASVHS-rK VVAÍ..SR.LKAALQDMIJRQLDR'N?GC (SEQ ID N052).

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID NO:310 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 3 a 22 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 5 a 24 de A10G § SEQ ID NO240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:53:

Leptina de foca com metionina N- terminal e com os aminoácidos 3 a 22 substituídos pelos aminoácidos 5 a 24 (hélice 1) da metreleptina, respetivamente: MFlQK.VQDOTXrUKri¥TEINDISPPQGVCSRFR¥AGLBF3FRVQSVE:TLSfíMBQTLATY QQlLXSLQSES¥VQMJ^DLANLEAl.LRLlASAlCSC!sWlARGSDTIKGLGNVLRâS¥HST EV¥ÀLSMXAÂLQDMiJiQll)RNFG€ (SEQ ID NO;33). B. POLIPÉPTIDOS QUIMÉRICOS INCORPORANDO HÉLICE HUMANA 2 A região de Hélice 2 de um polipéptido de leptina humana madura atravessa uma região de 16 aminoácidos contíguos. Essa hélice está entranhada no feixe de 4 hélices conforme descrito no artigo de estrutura de cristal original por Zhang et al. 0 Nature 1997 387:2060 .

Em um aspeto, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de hélice 2 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem 0 S0 ID NO: 280 , em que a região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 50 a 65da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 52 a 67 de A100 0 SEQ ID ΝΘ240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:54:

Leptina de foca com os aminoácidos 50 a 65 substituídos pelos aminoácidos 52 a 67 (hélice 2) da metreleptina, respetivamente: P!QRVÍP»TKlXÍKTirrRmDISPPQGVCSRPt.¥AGiI>FIP»¥QS¥R:ri^EMl>QTLAVYG QILTSLQSltSVVQLAlJDL^LRALLmÁS^SCPWI^VliGSDTIKGLG^I^EYHSTE WAI.SROCAA1.QDML1QLDENPGC (SEQ DJNO:$4),

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID NO: 310 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 50 a 65 da SEQ ID NO: 31 fd> substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 52 a 67 de A100 ÕSEQ ID ΝΘ24Β . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:55:

Leptina de foca com metionina N-terminal e com os aminoácidos 50 a 65 substituídos pelos aminoácidos 52 a 67 (hélice 2) da metreleptina, respetivamente:

MPiQRVQDDTKTUKTHTRlNDlSPPOGVCSRPRVAGLDnPRYQSVRTLSKlMrXjTlAVY qqtltslqsrsv,\íqíandi.anlrallrllasaksc:pvprargsdtikclgnm,rasvhst £ VVA.I..SFltK AA.LQDMLRQLDRNPOC (SEQ ID NO í<>). C. Polipéptidos quiméricos incorporando hélice humana 3 A região de Hélice 3 de um polipéptido de leptina humana madura atravessa uma região contígua de 22 aminoácidos. Hélice 3 e Hélice 1 são hélices antiparalelas que formam parte do Sítio de Ligação II da leptina a seu recetor. Esse sítio interage com o domínio de homologia de recetor de citocina õCRHlEl do recetor de leptina e aredita) se que seja um sítio de ligação a recetor principal, mas não envolvido na ativação de recetor. Consultar, por exemplo, Peelman et al., 2004, J. Biol. Chem. 279: 41038.

Em um aspeto, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de hélice 3 incorporada da leptina humana madura. Em algumas modalidades, um polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem ÕSEQ ID NO:280 , em que a região contígua que atravessa θ aminoácidos nas posiçUS es 71 a 92 da SEQ ID NO: 28 fcb substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 73 a 94 de A100 ÕSEQ ID ΝΘ240 . Em algumas modalidades, um polipéptido quimérico compreende a sequência descrita na SEQ ID NO:29. T f* í ri a ^ a f λλώ λλ·ι« λ es flflií ΤίΠάίΠί^Λ® 7 1 s Q O eiiHet· ι 1"ΐι í ΰ jta> v J> JLJLei. Ui€ A» m w Qi w UiLlL U m CS«UL<iL JlJlw GL v JL Uw £9 / JL &amp; £* w UJJ1 ΰ U JL U U JL UlU 0 pelos aminoãcidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, V* Q Q Λ í* “I t F 2s in £t l*t f“ A * ii©spe t xvsiuexxt·© ·

FlQRVQDDTKTLIKTIlTR!NDISFI^VCSRfRVAGLDFIFR¥QS¥RTLSGMDQILATYQQ ILTSLQSRNVlQISNDLlNLRDLLFiVLÀFSKSCFVFRÁRGSDTIKGLGNVLRASVBSTlVV ALSRLKAALQDMLRQLDRNKíC (SEQ ID NO:29).

Em algumas modalidades, um polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N) terminal ÕSEQ ID N0:3lH , em que a região contígua qe

atravessa os aminoãcidos nas posiçS es 71 a 92 da S<0 ID NO:31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posiçES es 73 a 94 de A100 ÕSEQ IDNO:240 . Em algumas modalidades, um polipéptido quimérico compreende a sequência descrita na SEQ ID NO:32. T.âfifr· i na Ha 'Faí*1 s a ato to a F *s λμ t m a KT «, fr· a t“to t rta 1 a a ato a s

JLJ ^25 mw J· v €3i JL Vnf* »58i Αίίνΐ7 mw a JL «JL J· v « *8 Ç5 JL JL&amp;BuJL JL J* wL ^^^JLLL aminoãcidos 71 a 92 substituídos pelos aminoãcidos 73 a 94 íhpl 1 ΓΡ 1 TTiP FTPlPTif 1T58 facsnaf ΐ v ΤΠ P 71 f“ô * \ A A W «h W W 0 / Mu Utv )>> ik ^ wk Ç W v>> ah ΑλΜ f Ja W 0 M vi- W V MiAalV· A A k· w t MPlQRVQDDTKTLl^nrmLNDÍSP?QC»VCSR?RVAGLDFI?RVQSVRTL-S<-íMr>QIiATVQ QILl'SJU^SRNVIQISNDÍJ^LIU>UJH[VJLAlíSKSC?VPRAll'0SD'nKGL<3NVXJRASVlISTBV VALS R LK A A LQDMLRQLDR^PGC (SEQ Π> NO:32). D. Polipéptidos quiméricos incorporando hélice humana 4 A região de Hélice 4 de um polipéptido de leptina humana madura atravessa uma região contígua de 22 aminoãcidos. Acredita)se que a Hélice 4 forma partes do Sítio de Ligação I e do Sítio de Ligação III da leptina, ambos os quais são importantes para ativação de recetor. Consultar, por exemplo, Peelman et al., 2004, J. Biol.

Chem. 279: 41038.

Em um aspeto, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de hélice 4 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem õSEQ ID NO: 280 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 120 a 141 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posiçS es 122 a 143 de A100 ÕSEQ IDNO:24B . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:56:

Leptina de foca com os aminoãcidos 120 a 141 substituídos pelos aminoácidos 122 a 143 (hélice 4) da metreleptina, respetivamente:

PiQRVQDDTKTUtCTiTONDiSPPqCiVCSRPRVAOLDFIPRVQSVRTLSGMDQlLA^QQ ÍLTSLQSRSVVQ1A1NDLANLRALLRLLASAKSCFVTRARCJSDT1K.0L0NVLRASVHSTEV VALSRJ :/X3SLQDMt.WQÍJ0LNPGC (SBQ ÍD NO:S6).

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID N0:31§ , em que a região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posiçUS es 120 a 141 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 122 a 143 de A100 ÕSEQ IDNO:240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:57:

Leptina de foca com metionina N- terminal e com os aminoácidos 120 a 141 substituídos pelos aminoácidos 122 a 143 (hélice 4) da metreleptina, respetivamente:

KlFÍQRVODDlKTLIKmfRIND^PPQGVCSRFRVAOLDFÍPRVQSVRTLSCMrK^I.ATYQ

QiLTSLQSRSWQIANDf.ANLRALLRLLASAKSCPVPRAR.GSDTIKGlXjNVLRASVHSTB V VALSftLQO S LQDML VV QLDLNPGC’ (SEQ 10 E. Polipéptidos quiméricos incorporando laço ab humano A região de Laço AB de um polipéptido de leptina humana madura atravessa uma região contígua de 27 aminoãcidos. Acredita)se que o Laço AB forma parte do Sítio de Ligação III assim como uma pequena porção do Sítio de

Ligação I da leptina. Consultar, por exemplo, Peelman et al. , 2004, J. Biol. Chem. 279: 41038. Essa região também contém o motivo GLDFIP absolutamente conservado.

Em um aspeto, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de Laço AB incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem õSEQ ID NO:280 , em que a região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 23 a 49 da SEQ ID MO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 25 a 51 de A100 ÕSEQ ID NO: 240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:58:

Leptina de foca com os aminoãcidos 23 a 49 substituídos pelos aminoãcidos 25 a 51 (Laço AB) da metreleptina, respetivamente:

PÍQE.V QDDTK.T LIKTUTRiN DiS HTQSVSSKQK VT6 LDFÍPO I.-HPIITÍ .SOMDQILATY QQI ríJTSlXJSRSWQiANDIANl^UJíy.ASAKSa^WRARÍíSiyrnCGLGNVLRASYHSTEVV

Ai.SRl.KAAÍjQDMIRQLDRNPGC (SEQ ID NO:58).

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID NO: 310 , em que a região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 23 a 49 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 25 a 51 de A100 ÕSEQ ID NO: 240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:59:

Leptina de foca com metionina N-terminal e com os aminoãcidos 23 a 49 substituídos pelos aminoãcidos 25 a 51 (Laço AB) da metreleptina, respetivamente: MP1QRVQ0DTKTLIKTllTRINDTSin'QSViSSKQKVl'0LDFH1<jLl-lPiLlXSGM)QiLATY'Q QÍLTSLQSRSWQÍANDLANLRALLRLLÀSÀKSCFVPRÂRGSBTÍKGLONVLRASVHSTE WAÍJ>WJCAALQDMLRQLDHNPGC (SEQ ÍD NO:59). F. Polipéptidos quiméricos incorporando laço 3-4 humano A região de Laço 3)4 de um polipéptido de leptina humana madura atravessa uma região contígua de 27 aminoácidos. Acredita)se que o Laço 3)4 contém uma parte de Sítio de Ligação III de leptina a seu recetor. Consultar, por exemplo, Peelman et al. , 2004, J. Biol. Chem, 279: 41038.

Em um aspeto, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de Laço 3)4 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem õSEQ ID NO: 280 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiç0 es 93 a 119 da SEQ ID NO: 28 £>i substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiç0 es 95 a 121 de A100 ÕSEQ ID 0:240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:60:

Leptina de foca com os aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, respetivamente:

NQRVQDDTKTLIK.TIl'rRÍNDÍSPPQGVCSRPRVAOLDFIPRVQSVinlJSGMDQíLATyQQ ILTSLQSRSVVQiÂNDÍ.ANI.:RALLRLlASÂKSaiLPWASOUiTLDSLCÍGVLEASGYS'FBV' VALSHLKAALQDMLRQLDKNFGC (SEQ ID NO:60).

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID NO: 310 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiç0 es 93 a 119 da SEQ ID NO: 31 £>i substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 95 a 121 de A100 0 SEQ ID 39:240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:61:

Leptina de foca com metionina N- terminal e com os aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, respetivamente:

àMQÍWQD.DmTnKTmmND!SFFQ6:¥CSIiPRVACÍLDfIÍWQSVllTljeMDQlIATYQ

QJI,TSLQSMV'VQlÂNDLANLRÀlXllLLASAKSCHLFWASGLETLDSLGÍj¥IJEASGYSTB WAÍ^MJ^I^DMLRQLDRNPGC (SEQ 10 N0;61). G. Polipéptidos de combinação quiméricos

Em outro aspeto da presente revelação, uma série de polipéptidos de combinação quiméricos são descritos. Esses polipéptidos de combinação quiméricos têm como base um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem em que duas ou mais regiões contíguas de 1 a 30 aminoãcidos de uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem 0 porexemplo, SEQ ID NO: 28 ou SEQ ID NO: 310 foram substituídas emcada região por uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de uma sequência de leptina humana madura. Os polipéptidos de combinação quiméricos podem ser manipulados para demonstrar propriedades físicas acentuadas em comparação aos polipéptidos de leptina humana madura que são utilizados para derivar as sequências, enquanto retêm a atividade biológica da leptina humana.

Em um aspeto, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de hélice 1 incorporada e uma sequência de hélice 2 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem 0 SEQ ID NO: 280 , em que a regcb contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 3 a 22 da SEQ ID NO:28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posições 5 a 24 de A100 0 SEQ ID NO:24á, e a região contígua que atravessa os aminolEI eidos nas posições 71 a 92 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoIEl eidos na posições 73 a 94 de A100 S SEQ ID NO:24á. Especificaente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:62:

Leptina de foca com aminoãcidos 3 a 22 substituídos pelos aminoácidos 5 a 24 (hélice 1) da metreleptina, e aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente: FIQKVQDDTKTLíK:ll\g‘RlNI>BFFí^KjVCSRFRVÂOI,DFÍPR\OSVWrLSGMDQÍLATYQ QlI,TSLQSRKV!QISNm,BMLRDLLfmA]F«KSCFVTRARGiSPTlKOLOMVTiíÁS¥HSIEY VÂ'LSRLKAALQDMLRQli>R'NPOC (SEQ ID NO:S2)

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoS eidos de um polipéptido de leptma de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal B SEQ ID NO:3lá, em que a região contígua que atravessa os aminoB eidos nas posições 3 a 22 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoS eidos nas posições 5 a 24 de A100 0 SEQ ID NQ4á, e a região contígua que atravessa os aminolEI eidos nas poições 71 a 92 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoB eidos nas posições7 3 a 94 de A100 0 SEQ ID NO:24ã. Especificamente, o polipéptdo quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:63:

Leptina de foca com metionina N-terminal e com aminoácidos 3 a 22 substituídos pelos aminoácidos 5 a 24 (hélice 1) da metreleptina, e aminoácidos 72 a 93 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente: MP1QK V QDDTKTLlKTf VTRIND! SPPQG VC SR PRV AGLDFfPRY QS VR TLSGMDQ! LÂT Y QQILTS! QSKNV.lQÍSHI>rBHÍ..R DLLHV1, AFSKSCPVPRARGSDTIKGI/SNVLRAS VHSTB WALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ iD NO;63)

Ademais, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de hélice 3 incorporada e uma sequência de Laço AB incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem ÕSEQ ID NO:28ã, em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 71 a 92 da SEQ ID NO:28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 73 a 94 de A100 ÕSEQ ID NO:240 , e a região contígua que atravessa os ammoácidos nas posições 23 a 49 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 25 a 51 de A100 ÕSEQ ID NO:240 . Especificmente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:64:

Leptina de foca com aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, e aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (Laço AB) da metreleptina, respetivamente:

?íQRVQDDTKTIXOin:RI\TJlSHTQSVSSKQKVTGLDFÍP0LHPU.TI.30MI}QJI.ATYQQI

LTSLQSRNV!Q!SNDLBNÍÍJ?DLIiiVjJ^FSKSCPWRARGSDTrKOIjGNVr^.ASVKSTEVV ALSRLRAA1.<>DM1XQLDRNPÍ1C (SEQ il> NO:64)

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID NO: 310 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 71 a 92 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 73 a 94 de A100 ÕSEQ ID NO:240 , e a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 23 a 49 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 25 a 51 de A100 ÕSEQ ID NO:240 . Especificamente, o polipéptdo quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:6 5:

Leptina de foca com metionina N-terminal e com aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, e aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (Laço AB) da metreleptina, respetivamente:

MPlQRVQDOI^TLtlCTmi^ISHTQS^KQIOTÔI^FIPOtJirn^aMl^H^tTO QILlS,'QSIiNVIQISNDLENLE.DLlJ^iVLAIí3KSC.PV.FRÂM3SPTlKGLGNVl,RASVHSTEV VALSRLIvAALQDMLRQLDEN.PG€ (SEQ ID W>M)

Ademais, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de hélice 3 incorporada e uma sequência de Laço 3)4 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem ÕSEQ ID NO: 280 , em que a região contígua qe atravessa os aminoácidos nas posiçH es 71 a 92 da S<0 ID NO:28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçES es 73 a 94 de A100 ÕSEQ IDNO:240 , e a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçH es 93 a 119 da SEQ ID NO: 28 foi substituída pr uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçH es 95 a 121 de A100 ÕSEQ ID NO:24!3 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:66:

Leptina de foca com aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, e aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (Laço 3-4) da metreleptina, respetivamente:

PiORVQDDTKTLlJCOITRlNDíSPPQOVCSRPRVAGLDFÍPRVQSVRTI^GMDQILATYQQ ILTSr^^SRNVTQÍSNDrJENLRDLLHVLAFSKSCHlJPWASGLETLDSLGGVLeASGYSim' VALSRLKAALQDMLRQLDjRI-ííPGC (SEQ ID NO:66)

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID NO:310 , em que a região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posiçS es 71 a 92 da SEQ ID NO: 31 fcb substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 73 a 94 de A100 ÕSEQ ID ΝΘ240 , e a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 93 a 119 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posiçE es95 a 121 de A100 ÕSEQ ID 110:2413 . Especificamente, o polipéptdo quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:6 7:

Leptina de £oca coxn xnetionma N-terminal, coxn ammoacidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, e aminoãcidos 93 a 119 substituídos pelos aminoãcidos 95 a 121 (Laço 3-4) da metreleptina, V* Λ Λ Λ 4· « p Qm AM 4“ ·** o j- 5“ y c V L çS ·

MPlQR¥QDL>TKTLIKTin'llB,K)ISPPQGVCSM^¥A01I>Fl?RVQS\^TISGMDQlLÂTYQ

QlLTSÍ.^SR^VÍQÍSNDLENLRDLLEVI.AFSKSCHIPWASGLFrLDSÍXjGVIIlÃSGYSTE WALSRLKA.A.liJDMvRQIDRNFÍSC (SEQ ID NO:67)

Ademais, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de Laço AB incorporada e uma sequência de hélice 4 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoãcidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem ÕSEQ ID NO: 280 , em que a região contígua qe atravessa os aminoácidos nas posiçS es 23 a 4 9 da S0 ID NO:28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 25 a 51 de A100 ÕSEQ IDNO:240 , e a região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posiçB es 120 a 141 da SEQ ID NO:28 foi substituídapor uma região contígua que atravessa os aminoãcidos nas posiçS es 122 a 143 de A100 ÕSEQ ID NG:24ã. Especif icamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:68:

Leptina de foca com os aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (laço AB) da metreleptina e com os aminoácidos 120 a 141 substituídos pelos aminoácidos 122 a 143 (hélice 4) da metreleptina, respetivamente:

PIQR¥QDD’rKlLlK.TE'ilíj0®ÍSHTQSVSSKQK¥TGLDFÍPGIJIPILTLSGME>QE,ÂTYQQI

LTSLQSRSWQIANDIAHLRALLRLLASAKSOIIVMA^.GSD11KGLONVLRAS'VMSTEW MSRL^SLQDMLWQLDLNFGC (SEQ 10 ^0:6¾

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal § SEQ ID NO:3lã, em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 23 a 49 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 25 a 51 de A100 ÕSEQ ID NO:240 , e a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 120 a 141 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 122 a 143 de A100 ÕSEQ ID NO:240 . Especificamente, o polpéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:6 9:

Leptina de foca com metionina N- terminal, com os aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (laço AB) da metreleptina e com os aminoácidos 120 a 141 substituídos pelos aminoácidos 122 a 143 (hélice 4) da metreleptina, respetivamente: MPÍQRVQDDTKTUiKTUTRINDiSHTQSVSSKQKVTGLDFlPGLlíPÍLTLSCsMDQ.nATYQ QfLTSLQSKSVVQl'ANDLAMLRÂLLKLLASAKSCPVPRARGSDT!KGI^3NVLRASVÍlSTE WALSRLQCiSI^DMLWQmtNPGC (SEQ ÍD NO:69)

Ademais, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam em leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de Laço AB incorporada e uma sequência de Laço 3)4 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem ÕSEQ ID NO:28ã, em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 23 a 4 9 da SEQ ID NO:28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 25 a 51 de A100 0 SEQ IDNO:240 , e a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 93 a 119 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 95 a 121 de A100 0 SEQ ID NO: 240 . Especif icamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:70:

Leptina de foca com os aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (laço AB) da metreleptina e com os aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, respetivamente: PIQRVQDDlKTLjtKTUTRÍMDlSHTQSVSSKQKVTGLDFÍPGLmnLTLSOMDQttATYQQÍ

LTSIvQSjRSWQIANDi^áNLKAUitlJ^ASAKSCFíLPWASGLirrLDSLGOVXEASGYSTEV V.AI,SIU,KAALQDMLR.QLDT1NPGC (SEQ ID NO:70)

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal 0 SEQ ID NO: 310 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 23 a 49 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 25 a 51 de A100 0 SEQ ID ΝΘ240 , e a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 93 a 119 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 95 a 121 de A100 0 SEQ ID NO: 240 . Especif icamente, o polipêpdo quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:71:

Leptina de foca com metionina N-terminal, com os aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (laço AB) da metreleptina e com os aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, respetivamente: MPIQRVQDDTKTUKTIITRIMÍ^HTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPE.TLSGMDQILAWQ QlLl3LQSRSV¥QlAKDLÂNOlALmLLASAKSCHIPWASÍjLETLDSLGGVLBASaYBTE \^AlSMIJ^AALQDMLRQLD.RNF(Xí (SBQ É)

Ademais, a presente revelação se refere a polipéptidos quiméricos que se baseiam na leptina de foca do tipo selvagem com uma sequência de Laço AB incorporada, sequência de Laço 3)4 incorporada e uma sequência de hélice 3 incorporada da leptina humana madura. Por exemplo, um polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem õSEQ ID NO :2 813 , em que a região contígua que atravessa e aminoácidos nas posições 23 a 49 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 25 a 51 de A100 ÕSEQ ID NO :240 , a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 93 a 119 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 95 a 121 de A100 õSEQ ID NO: 240 , e a região contígua que atavessa os aminoácidos nas posições 71 a 92 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posições 73 a 94 de A100 ÕSEQ ID NO: 240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:72:

Leptina de foca com os aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (laço AB) da metreleptina, com os aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina e com os aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente: PíQR.VQDDTKTLjKTiITRINDíSl-ITQSVSSKOK.VTGLDfiPGLiiFlLTLSG-MDQflATYQQ!

i^LQSRNYiQISNDLHNlJRDLLHVÍ^FSK^HlPWASGU-TLDÍJUKIVLHASCSYSTfeVV ALSRLKÀÂLQDMI.RQLDRNPGC (SEQ ÍD NO:72)

Por exemplo, o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos de um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem com uma metionina N)terminal ÕSEQ ID NO: 310 , em que a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçO es 23 a 49 da SEQ ID NO: 31 fd> substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 25 a 51 de A100 ÕSEQ ID ΝΘ240 , a região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçH es 93 a 119 da SEQ ID NO: 31 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiç0 es95 a 121 de A100 ÕSEQ ID NO: 240 , e a região contígua que atsvessa os aminoácidos nas posiçS es 71 a 92 da SEQ ID NO: 28 foi substituída por uma região contígua que atravessa os aminoácidos nas posiçS es 73 a 94 de A100 ÕSEQ ID ΝΘ240 . Especificamente, o polipéptido quimérico pode compreender a sequência descrita na SEQ ID NO:73:

Leptina de foca com metionina N-terminal, com os aminoácidos 23 a 49 substituídos pelos aminoácidos 25 a 51 (laço AB) da metreleptina, com os aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina e com os aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente:

M?IQRVQDDTK:í'L1KTÍ1TR]ND1SHTQSVSSKQIÍVíGLDFIPGLI{PÍLTLSGMDQI1^TYQ

QífTSLQSRNAfÍQlSNDI.;BRÍ.M)LÍ^VÍ,AFSKSCHLPWASOÍ.ini.;DSlGGVÍJlASC>ySTE VVAl^RjUCAALQDMLRQLDRNPGC (SBO ID NO:73).

Os polipéptidos quiméricos fornecidos pela revelação podem conter uma substituição de aminoácido Cys por Ser na posição 30 da sequência de polipéptidos de foca do tipo selvagem. Consequentemente, os polipéptidos quiméricos a seguir são descritos no presente documento: T f* í ri a f ^ nw as atoí τιλα^τ Haq ^ Π â ^ a OO eiiHet· i 11 t" Hl o <5 νΐ v «tiJLJLeS. Uw JL Uw o v Uul w £9 W1ÍIÍJL jiiv¢31 v> J· UU ΰ J v u «3 η « m £9 UJJ1 ΰ U JL U U JL UlU ΰ pelos aminoãcidos 32 e 5 a 24 (hélice 1) da metreleptina, V* Q QAâ í* “l t F £5 TYI £t l*t f“ A * irespet, j»vsiuexxt·© ·

PIQKVQDDTKlUKTÍVTRTNDISFPQGVSSRPRVAGLDPn^VQSVRTLSOMDQrLATYQ

QJLTSIX^RSVVQÍANtDI.ANU^ALUIU-ASA.KSCPV?RARGSDTIKGUjNVLRASVHS1'E WAL-SRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SB<> ÍD NO:74),

Leptina de foca com metionina N- terminal e com os aminoãcidos 30 e 3 a 22 substituídos pelos aminoãcidos 32 e 5 a O 4 íhâl í re 1¾ Hia ma fyal arit· ima y*a g a a t* ί tfswan i* a o C* m " \ JL * SS5 Jm JL L> C5 JL / UQ aLLw w «L ÇSE JL CSM L JL jLJ>CS&amp; f JL· t» ΰ m v* L J« V C&amp;aLLw JL 1 w »5- · MHQK¥QDmKTllKiriVmiM>ISI^qGVmm¥A(H.I)HPRVQSVItTi^GMI0QIL4T¥' QQ!LTSLQSRSWQIANOLANLRj\LL.RLiASAK.SCP¥PRARGSDTIKGLGN\>rLRAS\l!ST EVVAÍJRLKAálipMi^QIJMNPGC (SEQ10 NO:75).

Leptina de foca com os aminoãcidos 30 e 50 a 65 substituídos pelos aminoãcidos 32 e 52 a 67 (hélice 2) da metreleptina, respetivamente: PJQRVODDTKTUKT«TRÍNfD]SPPQGVSSRPRVAGi..DFÍPRVQSVRmKMDQlXAWQQ ÍLTSLQSRSVVQlANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKCáLGNVXRASVHSTEV VAI.SRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ iD NO:76l

Leptina de foca com metionina N- terminal e com os aminoãcidos 30 e 50 a 65 substituídos pelos aminoãcidos 32 e 52 a 67 (hélice 2) da metreleptina, respetivamente:

MPiORVQ»DTK1'LiKT.insRlNDISPPQGVSSRPRVAGl.DFÍPRVQSVRTLSKMDQTi.AVV QQ]LiSLQSRSVV«;>iA.NOLANLRALLRLLASA^SOn,PRARGSD'íiK.GLGNVLRASVHST EVVALSRI.KAALQDMLRQLDR.NPGC (SEQ TD NO:77).

Leptina de foca com os aminoãcidos 30 e 71 a 92 substituídos pelos aminoãcidos 32 e 73 a 94 (hélice 3) da

Tfí éZS t" V A 1 Λy» *i M st y λ Q *“»λ (” "j Tf ΑΤΜΟΆ t” a · iUIC! L JL Ç? JL CU L JL 11C&amp; / JL Cω UC L JL V LC #

PIQRV0DDTKT.UK.THTR)NDISPP0GVSSRPRVAGLDFlPRVQSV7<Tl.SGMDQiiLATV'f^I ITS LQSRN V]Q1 SNQI. EN L RD t LHV t AF S KSC PVPR A RG S DT1K6 Í.. GN V LR AS V B ST E V V ALSREKAAEQDlvfERQLDRNPGC (SEQIDNOGD).

Leptina de foca com metionina N-terminal e com os aminoácidos 30 e 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 32 e 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente: MPfQRVQDDmTUKTHTRiNDlSPPQOVSSRPRVAGLDFiPRVQSVRTLSGMDQiLATYQ Qll/rSl.(^ÍRNVfOi{SNDX.ENí..ílOLLHVLAFSK:SCPVPRARGSDTTKOLGNVI.K.ASVHSTEV VALSRLKAALQDMLRQLDRNPqC (SEQ JD NO:33),

Leptina de foca com os aminoácidos 30 e 120 a 141 substituídos pelos aminoácidos 32 e 122 a 143 (hélice 4) da metreleptina, respetivamente: fjQRVQDDTOi;fKTOTOMIJlSFPQGVSSRFRVAOLDFÍFRVQEVRTLSGMDQILATYQQi

LTSLQSRSV!VQlAN.OLAMLItALLR.l;LASAKSCFVFRARGSOTI.ítGmNVLRASVHSTBVV ÂLSRLQGSLQDMLWQLDLMFGC (SEQ 1DN0:78).

Leptina de foca com metionina N-terminal e com os aminoácidos 30 e 120 a 141 substituídos pelos aminoácidos 32 e 122 a 143 (hélice 4) da metreleptina, respetivamente: MFIQR VQDDTKJLiKTI.irRiNDISPPQGVSSRPR.VAGLDFlFRVQSVRTLSGMDQILATYQ On/F.Si-QSRSVVQÍANDLA'»NLRAiJ..RLLASAKSCPVfíRARQSBTÍR.Cií..GNV[,RASVHSTÍ; WALSRLQGSI..QDMT..WQLDLNPGC {SEQ 1D NO:79>

Leptina de foca com os aminoácidos 30 e 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 32 e 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, respetivamente:

PiQRVQDDTKTUKTinTONDíSPPQCiíVSSRPRVAGLDFÍPRVQSVRTi^MDgiLATYQQl í.,-TS.l.QSRSVVQiANDLANX..RAn..RLLASAKSCHLPWASOr..F^..DSLGGVi,EASGYSTEV VALSRLKAALQDMlJRQimNPGC (SEQ \D NO:80).

Leptina de foca com metionina N- terminal e com os aminoácidos 30 e 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 32 e 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, respetivamente: MPIQílVQDDTOLÍKTiTTIíjNDBPPQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQILATYQ QILTSLQSRSVVQIANDLAKLRAIXRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVXEASOYSTE VVALS.RJL-KAALQ.DMLRQLDRNPOC (SEQ 1D MO:8I).

Leptina de foca com o aminoácido 30 substituído pelo aminoácido 32, com os aminoácidos 3 a 22 substituídos pelos aminoácidos 5 a 24 (hélice 1) da metreleptina e os aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, respetivamente: FIQKVQDDTKTLIKTIVTRÍNDISPFQGVSSRPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMDQÍLÂTYQ QILTSLQSRNVIQÍSNDLENLRDLUÍVLAFSICSCPVPRARGSDTIKGLGNVL-RASVIfôTEV VÂLSRIXAAiJ^DMLRQLDRNPGC (SEQ1D NQ:82)

Leptina de foca com metionina N-terminal e com o aminoácido 30 substituído pelo aminoácido 32, com os aminoácidos 3 a 2 2 substituídos pelos aminoácidos 5 a 24 (hélice 1) da &amp;ττΗ rirdes 72 a Q2 U J> C J. C· k/ U Ji liCt f C· W 0 GUlUi iÍU Hv· Wkw U* / « G* ^ 0 0 UA/ 0 U i^· U U A> 0 0 «Aa 0 0 aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina, V* Λ Λ A 4> q «f> QiWt am 4“ *** o j- 5“ π C l»«L V L» “ · MPfQKVQDDTKTLlKTiVT.RlNDISPPQGVSSRPRVAGiDFIPRVQSWTLSCíMDíQILATT QQILTSLQSRNVIQISMDLENLBJDLLHVLAFSKSCPYPRARGSDTIKGLGNVXRASVHSTE WALS.RLKAÂLQDMLRQLDRMPGC (SEQID NO:83)

Leptina de foca com o aminoácido 3 0 substituído pelo aminoácido 32, com os aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da metreleptina e os aminoácidos 93 a 119 substituídos pelos aminoácidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, respetivamente: ÍMQKVQDD1XT1'JRT!TTRÍNDÍSB"Q<WSSRFIÍVÁGLDFIPRVQSVR.TLJSGMDQIIATYQQÍ LTSLQSRNVlQfô]NDLENLRDU.HVlAFSKÍiCHLPWASOLETLDSLGGVIÍ,EASGY$TRW ALSRLKAALQDMÍ.RQLDR.N ¥GC (SEQ IX) NO:84) T f* t « a a f* aw mâ ί λμ ί «a ΚΓ „ í* a γ»™ ί tial a ato a sto ί μλααί í^a

JmJI Ç5 ^«1 wba JL JL ^^A ^25 ^ »58i Cia* JLJib JHi»Ç5 aea Curin in iJm A A ÇA JL a <sw ~inn*i irini A JL Mw Ç CirjníÍ ΊΙ *np· ^ji^fiirrirn ~ιιτη JL JL mLi ^mA —1|-* 30 substituído pelo aminoácido 32, com os aminoácidos 71 a 92 substituídos pelos aminoácidos 73 a 94 (hélice 3) da TOâ ( ts 1 an í· i m a o aq sto i Hag Q *2 a 1 1 Q enVve 1" ί ♦vn <^ag Aâl ag Ιίιίνΐ L JL u JL L JL aaC&amp; w U £9 CtjLaJL IIU Gl w J. UU £t Z3 <3 η X J> £9 UuU £9 L X L UL X UU £9 |J u JL U 0 aminoãcidos 95 a 121 (laço 3-4) da metreleptina, σηρ t" 1 V£3ΤΪΊPTí t* p * MFíQR¥QDl>TK:TIjKT.IlTRINDfSPPQGVSSRPRVAG!J>FÍPÍl¥OS¥WI^GMDQl,ATYQ QÍLTSFQSI^VIQBNDLSNLM>mWLAFSKSCHlíWÂSOIiiTLOSIX3aVIiiÂSGYSTE VVÂLSRLKAAÍQDMIií.QLDlNPGC (S.EQ 1D NChSS).

Modalidades adicionais. Entende)se que cada um dos polipéptidos revelados no presente documento é também contemplado para incluir õopcionalmenteã uma metionina na N)terminação no quadro com o primeiro aminoácido de ocorrência natural do mesmo. Por exemplo, a metreleptina õleptina A100S consiste na leptina humana madura aqual foi adicionada uma metionina N)terminal, conforme revelado na SEQ ID NO:24. Similarmente, um resíduo de metionina pode ser incluído na N)terminação de qualquer uma das sequências de aminoácidos e Fórmulas reveladas em todo o presente documento.

Ademais, os análogos de polipéptido quimérico são descritos no presente documento. Um análogo de polipéptido quimérico pode ter pelo menos 80%, por exemplo, 80%, 85%,

90%, 95%, 98% ou até mesmo mais de identidade de sequência em relação a um polipéptido quimérico progenitor. Por exemplo, o polipéptido quimérico progenitor é um polipéptido definido na SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID

NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID

NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID

NO: 6 6, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO:69, SEQ ID

NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID

NO: 74, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:80, ID N0:S1, SEQ ID NO:82, SEQ ID NO:83, SEQ ID NO:84 ou SEQ ID NO:85. Consequentemente, um análogo de polipéptido quimérico pode ter pelo menos 80%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou até mesmo mais de identidade de sequência em relação a qualquer polipéptido quimérico selecionado a partir do grupo que consiste em SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, e SEQ ID NO:33. Por exemplo, um análogo de polipéptido quimérico pode ter pelo menos 80%, por exemplo, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% ou até mesmo mais de identidade de sequência em relação ao polipéptido quimérico apresentado na SEQ ID NO:33. Por exemplo, um análogo de polipéptido quimérico pode ter pelo menos 90% de identidade de sequência em relação ao polipéptido quimérico apresentado na SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, ou SEQ ID NO:33. Por exemplo, um análogo de polipéptido quimérico pode ter pelo menos 90% de identidade de sequência em relação ao polipéptido quimérico apresentado na SEQ ID NO:33.

Adicionalmente, análogos de polipéptido quimérico podem ser projetados, preparados e utilizados em conformidade com a revelação em que 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ou até mesmo

21 aminoácidos de um polipéptido quimérico selecionado a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 52, SEQ ID

NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID

NO:57, SEQ ID NO:58, SEQ ID NO:59, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID

NO: 6 5, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID

NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID

NO: 73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO:75, SEQ ID NO:76, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO:80, ID NO:81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84 e SEQ ID NO:85; são substituídos por outro aminoácido, tal como um aminoácido conservativo ou um aminoácido não conservativo ou são alterados de outro modo. Conforme costumeiro na técnica, o termo "conservativa" no contexto de substituiçlEI es de aminoácidos se refere à substituído que mantém as propriedades do tipo de carga õpor exemplo, aniónico, cationico, neutro, polar e similaresa, hidrofobicidade ou hidrofilicidade, volume õpor exemplo, contatos de van der Waals e similaresá e/ou funcionalidade õpor exemplo, hidróxi, amina, sulfidrilo e similaresá. O termo "não conservativa" se refere a uma substituição de aminoãcido que não é conservativa.

Em outro aspeto, a revelação fornece análogos de polipéptido quimérico que compreendem pelo menos uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de uma sequência análoga de leptina humana madura que contém pelo menos uma substituição de aminoácido numa posição em que a divergência é observada numa posição correspondente numa leptina de outra espécie.

Conforme é entendido na técnica, por exemplo, leptinas murinas, leptinas de rato, leptinas bovinas, leptinas porcinas e leptinas de macaco reso, tais como aquelas reveladas no presente documento, são, cada uma, substancialmente homólogas às leptinas humanas; particularmente, as formas maduras dessas leptinas são substancialmente homólogas às leptinas maduras e, ademais, particularmente próximas à porção N)terminal da proteína. Pode)se preparar análogos de tais leptinas, tal como a forma 1 de leptina humana madura ÕSEQ ID NO:200 e metreleptina ÕSEQ ID NO:240 , tal como substituindo ou alterando os resíduos de aminoácido em uma ou mais posiç0 es em tais sequências em que a divergência é observada numa leptina de murganho, de rato, bovina, porcina ou de macaco reso madura correspondente. Por exemplo, as leptinas humanas maduras õpor exemplo, SEQ ID NO:200 produzm respostas biológicas em, por exemplo, murganhos, ratos e macacos0 . Consultar, por exemplo, os documentos WO 98/28427, WO 2009/064298, US2007/0020284, US2008/0207512 e

Murakami et al. , 19 95, Biochem, Biophys. Res. Comm. 209: 944 a 952. Como leptinas maduras humanas têm atividade biológica em, por exemplo, tais espécies, análogos de leptina podem ser projetados e preparados em que um ou mais aminoácidos nas posiç0 es que são divergentes na poáção õou posiç0 es0 correspondente numa leptina de uma ou mai de tais espécies são substituídos pelo aminoácido õou aminoácidos0 em tais posiç0 es divergentes correspdantes.

Por exemplo, com a utilização de uma proteína leptina madura humana de acordo com a SEQ ID NO: 20 em que o primeiro aminoácido é valina, e o aminoácido na posição 146 é cisteína, pode)se substituir por outro aminoácido um ou mais dos aminoãcidos nas posições 32, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 89, 97, 100, 101, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 e 145 com o aminoácido ® ou aminácidos® correspondente encontrado na posição 0 ou posições® correspondente na SEQ ID NO:2 a fim de projetar e preparar os análogos de leptina compreendidos pelos polipéptidos quiméricos. Adicionalmente, pode)se também substituir outro aminoácido, tal como um aminoácido conservativo ou um aminoácido não conservativo, em uma ou mais das posições 32, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 89, 97, 100, 101, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 e 145, por exemplo, da SEQ ID NO:20 a fim de projetar e preparar os análogos de leptina compreendidos pelos polipéptidos quiméricos em conformidade com a invenção.

Pode)se preparar, ainda, análogos de leptina adicionais com base na sequência de proteína leptina de rato madura ® SEQ ID NO: 16® . Consultar, por exemplo,os documentos WO 98/28427, US2007/0020284 e Murakamiet al. , 1995, Id. A leptina de rato madura se difere da forma 1 de leptina humana madura ® SEQ ID NO:20® nas seguintes posições: 4, 32, 33, 35, 50, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 101, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112,118, 136, 138 e 145. Consequentemente, em uma ou mais de tais posições na SEQ ID NO:20, pode)se substituir o aminoácido encontrado na posição ® ou posições® correspondente encontrada nâeptina de rato madura ® SEQ ID NO:16® a fim de projetar erpparar análogos de leptina compreendidos pelos polipéptidos quiméricos. Adicionalmente, pode)se também substituir outro aminoácido, tal como um aminoácido conservativo ou um aminoácido não conservativo, em uma ou mais das posições 4, 32, 33, 35, 50, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 101, 102, 105, 106 107, 108, 111, 112, 118, 13 6, 13 8 β 145, por exemplo, da SEQ ID NO: 20 a fim de projetar e preparar os análogos de leptina compreendidos pelos polipéptidos quiméricos.

As posições tanto da leptina de rato madura 0 SEQ ID NO:160 quanto da forma 1 de leptina murina madura 0EQ ID NO:20 que divergem da forma 1 de leptina humana madra 0 SEQ ID NO:2O0 são: 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 7, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 e 145. Consequentemente, em uma ou mais de tais posições na SEQ ID NO:20, pode)se substituir o aminoãcido encontrado na posição 0 ou posições0 correspondente encontrada na sequência de leptina de rato madura 0SEQ ID NO:160 ou sequência de forma 1 murina madura 0 SEQDINO:20 a fim de projetar e preparar análogos de leptina compreendidos pelos polipéptidos quiméricos.

Adicionalmente, pode)se também substituir outro aminoácido, tal como um aminoácido conservativo ou um aminoácido não conservativo, em uma ou mais das posições 4, 32, 33, 35, 50, 64, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 e 145 a fim de projetar e preparar os análogos de leptina compreendidos pelos polipéptidos quiméricos.

Adicionalmente, os aminoácidos encontrados na leptina madura de macaco reso 0 SEQ ID NO:140 que divergemadforma 1 de leptina humana madura 0 SEQ ID NO: 200 são 0 cans resíduos de aminoácido notados em parênteses em abreviação de aminoácido de uma letra0 : 8 0 S0 , 35 0 R0 , 4803110Q0 , 600 10 , 660 10 , 670 N0 , 680 0 L0 , 890 L0 , 1000 102,01000 EÍ> e 118 0 L0 . Já que leptinas maduras humanas produzemima resposta biológica em macacos, uma leptina, tal como a forma 1 de leptina humana madura 0 SEQ ID NO:200 qufeem um ou mais dos aminoácidos divergentes de macaco reso substituídos por outro aminoãcido, tais como os aminoácidos em parênteses, pode ser empregada no projeto e preparo de análogos de leptina compreendidos pelos polipéptidos quiméricos. Deve ser notado que determinados aminoácidos divergentes de reso sâo também aqueles encontrados, por exemplo, na forma 1 de leptina murina madura acima õposiçS es 35, 68, 89, 100 e 112á. Assim, pode) se peparar arM logos de leptina em que um ou mais aminoB eidos as posiçH es 4, 8, 32, 33, 35, 48, 50, 53, 60, 64, 66,67, 68, 71, 74, 77, 78, 89, 97, 100, 102, 105, 106, 107, 108, 111, 112, 118, 136, 138, 142 e 145, por exemplo, da forma 1 de leptina humana madura ÕSEQ ID NO:20ã são substituídos pelo aminoS eido õou aminoKI cidosá correspondente em tal opição õou posiç0 esã em leptinas murinas ou de macaco resoõpor exemplo, SEQ ID NO:2 e/ou SEQ ID N0:14á.

Os anS logos de polipéptido quimérico podem ser projetados e preparados para compreender regiKI es cotíguas de aminoS eidos de anS logos de leptina humana. Porxemplo, anH logos de polipéptido quimérico são descritos nopresente documento que se baseiam num polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem em que pelo menos uma região contígua de 1 a 3 0 aminoS eidos de uma sequência de leptina de (5ca do tipo selvagem foi substituída por uma região contígua de 1 a 3 0 aminoEI eidos de uma leptina humana madura anIEI ^o sequência, e em que a sequência anS Ioga de leptina humana madura contém pelo menos uma substituição de aminoBcido numa posição em que a divergência é observada numa posição correspondente numa leptina de outra espécie. AnE lgos de polipéptido quimérico que compreendem duas ou mais regiH es contíguas de 1 a 30 aminoS eidos de uma sequência a§ Ioga de leptina humana madura são também fornecidos.

Os polipéptidos quiméricos aos quais uma porção química é ligada são derivados de polipéptido. A derivatização de polipéptidos quiméricos pela ligação de uma ou mais porçS es químicas revelou fornecer algum vantagem sob determinadas circunstâncias, tal como o aumento da estabilidade e tempo de circulação da proteína terapêutica e a diminuição da imunogenicidade e propensão para, por exemplo, geração de anticorpos neutralizantes e/ou incidência de reações de sítio de injeção. Consultar, por exemplo, os documentos WO 98/28427, US2007/0020284, a Patente n° U.S. 4,179,337, Daviset. al. , expedida em 18 de dezembro de 1979. Para uma revisão, consultar Abuchowski et al. , em ENZYMES AS DRUGS. 0 J. S. Holcerberg e J. Rberts, eds. páginas 367 a 383 Kl 19810 0 ; Franciset. al. , Id.

Os derivados de polipéptido podem constituir polipéptidos aos quais uma modificação química foi feita de um ou mais de seus grupos laterais de aminoãcido, átomos de a)carbono, grupo amino terminal ou grupo ácido carboxílico terminal. Uma modificação química inclui, porém, sem limitação, ligar uma ou mais porções químicas, criando novas ligações e remover uma ou mais porções químicas. As modificações nos grupos laterais de aminoácido incluem, sem limitação, alquilação, acilação, formação de éster, formação de amida, acoplamento de maleimida, acilação de grupos lisina ε)amino, N)alquilação de arginina, histidina ou lisina, alquilação de grupos ácido carboxílico, glutâmico ou aspãrtico e desamidação de glutamina ou asparagina. As modificações do grupo amino terminal incluem, sem limitação, modificações de desamino, alquilo N)inferior, alquilo N)di)inferior e N)acilo, tais como alquilacilos, alqui1acilos ramif içados, alquilaril)acilos . As modificações do grupo carbóxi terminal incluem, sem limitação, as modificações de amida, alquil amida inferior, dialquil amida, arilamida, alquilarilamida e éster de alquilo inferior. 0 alquilo inferior é alquilo Ci)C4. Ademais, um ou mais grupos laterais, ou grupos terminais, podem ser protegidos por grupos protetores conhecidos pelo químico sintético com habilidade comum na técnica. 0 a) carbono de um aminoácido pode ser mono ou dimetilado.

Tais derivados incluem polipéptidos conjugados a uma ou mais moléculas de polímero solúveis em água, tais como cadeias de polietileno glicol õ"PEGi!á ou § eido gras de vKI rios comprimentos õpor exemplo, estearilo, palmiòílo, octanoíloã, pela adição de poliaminoK! eidos, tais emo poli) his, poli)arg, poli)lys e poli)ala ou pela adição de pequenos substituintes de molécula que incluem alquilos curtos e alquilos restritos õpor exemplo, ramificados, cíclicos, fundidos, adamantiloã e grupos aromS ticos As moléculas de polímero solúveis em 0 gua podem ter umpeso molecular na faixa de cerca de 500 Daltons a cerca de 60.000 Daltons.

Tais conjugações de polímero podem ocorrer singularmente na N) ou C)terminação ou nas cadeias laterais de resíduos de aminoKI eido dentro da sequência de um polipéptido quimérico conforme revelado no presente documento. Alternativamente, pode haver múltiplos sítios de derivatização ao longo da sequência de aminoH eidos de tal polipéptido quimérico. A substituição de um ou mais aminoH eidos por lisina, Kl eido asplKI rtico, 0 eido gàiúto ou cisterna pode fornecer sítios adicionais para derivatização. Consultar, por exemplo, as Patentes n° U.S. 5,824,784 e 5,824,778. Um polipéptido quimérico pode ser conjugado a um, duas ou três moléculas de polímero.

Por exemplo, as moléculas de polímero solúveis em Klgua são ligadas a um grupo amino, carboxilo ou tiol e podem ser ligadas por N ou C terminações ou nas cadeias laterais de lisina, Kl eido aspH rtico, K3 eido glutãmico ou cistaín Alternativamente, as moléculas de polímero solúveis em M gua podem ser ligadas a grupos diamina e dicarboxílicos. Especificamente, o polipéptido quimérico pode ser conjugado a um, duas ou três moléculas de PEG através de um grupo épsilo amino num aminoS eido de lisina.

Derivados de polipéptido também incluem polipéptidos com alterações químicas a um ou mais resíduos de aminoKi eido. Tais alterações químicas incluem amidaço, glicosilação, acilação, sulfatação, fosforilação, acetilação e ciclização. As alterações químicas podem ocorrer singularmente na N) ou C)terminação ou nas cadeias laterais de resíduos de aminoácido dentro da sequência de uma leptina. A C)terminação desses péptidos pode ter um grupo )OH ou ) NH2 livre. A extremidade N)terminal pode ser encapsulada com um grupo isobutiloxicarbonilo, um grupo isopropiloxicarbonilo, um grupo n)butiloxicarbonilo, um grupo etoxicarbonilo, um grupo isocaproilo 0 "isocapS , um grupo octanilo, um grupo actil glicina 0 denotado cmo ,!G0 OctB " ou "octylGly"13 , um grupo ácido 8)amino)énico, um dansilo e/ou um grupo Fmoc. A ciclização pode ser através da formação de pontes de dissulfeto.

Alternativamente, pode haver múltiplos sítios de alteração química ao longo da sequência de aminoãcidos de polipéptido.

Os polipéptidos quiméricos podem ser quimicamente alterados para incluir um grupo Bolton)Hunter. Os reagentes de Bolton)Hunter são conhecidos na técnica 0 "Radioimmunoassay and related methods", A. E. Bolòn e W. M. Hunter, Capítulo 26 de HANDBOOK OF EXPERIMENTAL IMMUNOLOGY, VOLUME I, IMMUNOCHEMISTRY, editado por D. M. Weir, Blackwell Scientific Publications, 19860 e pdem ser utilizados para introduzir porções químicas do tipo tirosina com ligação neutra, através de grupos a)amino amino)terminais ou grupos ε)amino da lisina. Por exemplo, a extremidade N)terminal de um polipéptido pode ser modificada com um grupo Bolton)Hunter; um resíduo de lisina interno pode ser modificado com um grupo Bolton)Hunter; ou pode haver múltiplos sítios de modificação de Bolton)Hunter ao longo da sequência de aminoácidos de polipéptido. Os reagentes de Bolton)Hunter utilizados para modificação de polipéptido estão comercialmente disponíveis e podem incluir, porém, sem limitação, reagente de Bolton)Hunter solúvel em água, Sulfossuccinimidil)3)[4) hidrofenil]propionato 0 Pierce Biotechnology, Inc.,

Rockford, ILá e reagente)2 de Bolton)Hunter, Priopionato de N)Succinimidil 3)Õ4)hidroxi)3)iodofenilaá õWako Pure

Chemical Industries, Ltd., Japão, n° de catálogo 199) 09341H . Um grupo Bolton) Hunter exemplif icativo congigado através de uma ligação amida a um polipéptido é ilustrado abaixo, em que a linha tracejada passa através da ligação amida:

Os polipéptidos podem ser iodados õtal como radiomarcados com 125I0 antes ou após a modificação de Bolton)Hunter.

Os derivados de polipéptido podem incluir uma ou mais modificaçE es de um resíduo de aminoácido "não essenial". No contexto da revelação, um resíduo de aminoácido "não essencial" é um resíduo que pode ser alterado, por exemplo, derivatizado, sem eliminar ou reduzir substancialmente a atividade õpor exemplo, a atividade de agonistaS do polipéptido quimérico. Os polipéptidos quiméricos da presente revelação podem incluir derivatizaçS es del, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ou mais resíduos de aminoácido; de entre os mesmos, um ou mais resíduos de aminoácido podem ser resíduos de aminoácido não essenciais. Adicionalmente, os polipéptidos podem ser derivatizados de modo que os mesmos incluem adiçS es de pelo menos 1, 2, 3, 4, 5,6, 7, 8, 9, 10 ou mais aminoãcidos sem eliminar ou reduzir substancialmente a atividade do polipéptido. Adicionalmente, tais resíduos de aminoácido não essenciais podem ser substituídos por um resíduo de aminoácido que é recetivo à derivatização conforme descrito por todo o documento.

Conforme utilizado por todo o documento, "aminoEI cid", "resíduo de amino0 eido" e similares se referem a amino0 eidos naturais, aminoS eidos não naturais e aminoH eidos modificados. A não ser que determinado ao contrário, qualquer referência a um aminoácido, geral ou especificamente pelo nome, inclui referência aos estereoisómeros D e L se sua estrutura permitir tais formas estereoisoméricas. Os aminoãcidos naturais incluem alanina õAlaS , arginina õArgS , asparagina õAsnS , ácido aspâco õAspE , cisteína õCysS , glutamina õGlnE , ácido glmiâo õGlulEI , glicina õGly0 , histidina õHisS , isoleucináElêS , leucina õLeuEI , Lisina õLys0 , metionina õMetEI , feaiànina õPheE , prolina õProIXI , serina õSerE , treonina õThrS , triptofano õTrpB , tirosina õTyrS e valina õValS . Os aminoácidos não naturais incluem, porém, sem limitação, homolisina, homoarginina, homoserina, ácido azetidinacarboxílico, ácido 2)aminoadípico, ácido 3) aminoadípico, beta)alanina, ácido aminopropiínico, ácido 2) aminobutírico, ácido 4)aminobutírico, ácido 6) aminocaproico, ácido 2)amino)heptanoico, ácido 2) aminoisobutírico, ácido 3)aminoisbutírico, ácido 2) aminopimélico, butilglicina terciária, ácido 2,4) diaminoisobutírico, desmosina, ácido 2,2')diaminopimélico, ácido 2,3)diaminopropiónico, N)etilglicina, N) eti1asparagina, bomoprolina, hidroxilisina, alo) hidroxilisina, 3)hidroxiprolina, 4)hidroxiprolina, isodesmosina, alo)isoleucina, N)metilalanina, N) metilglicina, N) metilisoleucina, M)metilpentilglicina, N) metilvalina, naftalanina, norvalina, norleucina, ornitina, pentilglicina, ácido pipecólico e tioprolina. Os aminoácidos não naturais adicionais incluem resíduos de aminoácido modificados que são quimicamente bloqueados, reversível ou irreversivelmente, ou quimicamente modificados em seu grupo amino N)terminal ou seus grupos de cadeia lateral, como, por exemplo, aminoãcidos ou resíduos D e L N)metilados em que os grupos funcionais de cadeia lateral são quimicamente modificados a outro grupo funcional. Por exemplo, os aminoácidos modificados incluem sulfóxido de metionina; metionina sulfona; ácido aspãrtico ) õéster beta)metilicoS , um aminoácido modificado d ácido aspártico; N)etilglicina, um aminoácido modificado de glicina; ou alanina carboxamida, um aminoácido modificado de alanina. Os resíduos adicionais que podem ser incorporados são descritos em Sandberg et al., J. Med. Chem. 41: 2.481 a 2.491, 1998.

Conforme mencionado acima, as porçlEI es químicas adequadas para tal derivatização dos polipéptidos quiméricos incluem, por exemplo, vários polímeros solúveis em água. De preferência, para utilização terapêutica da preparação de produto final, o polímero será farmaceuticamente aceitável. Um versado na técnica terá a capacidade de selecionar o polímero desejado com base em tais consideraçS es de se o conjugado de polímero/pcteína será utilizado terapeuticamente, e, caso sim, na dosagem desejada, tempo de circulação, resistência à proteólise e outras consideraçKI es. Para os polipéptidos quimérios, a eficácia da derivatização pode ser certificada administrando) se o polipéptido derivatizado, na forma desejada õisto é, por bomba osmótica ou, mais preferencialmente, por injeção ou infusão ou, adicionalmente, formulado para entrega oral, pulmonar ou nasal, por exemplo0 e observando os efeitos biológóos e as respostas biológicas conforme descrito no presente documento.

Tal polímero solúvel em água pode ser selecionado a partir do grupo que consiste em, por exemplo, polietileno glicol, copolímeros de etileno glicol/propileno glicol, carboximetilcelulose, dextrano, álcool polivinílico, polivinil pirolidona, poli)l, 3)dioxolano, poli)l,3,6) trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, poliaminoS eidos õou homopolímeros ou copolímeros aleatórios^ e dextrano ou poliõn)vinil pirolidonaãpolietileno glicol, homopolímeros de propileno glicol, copolímeros de óxido de polipropileno/óxido de etileno, poliois polioxietilados e álcool polivimlico. Polietileno glicol propionaldeído pode ter vantagens no fabrico devido a sua estabilidade em água. Também, succinato, estireno e hidroxietil amido podem ser utilizados.

Os derivados de polipéptidos quiméricos em conformidade com a revelação podem ser preparados ligando) se poliaminoãcidos ou aminoãcidos de ponto de ramificação. Por exemplo, o poliaminoácido pode ser uma proteína transportadora adicional, tal como uma porção química Fc, que pode servir para aumentar também a meia)vida de circulação do polipéptido quimérico. Adicionalmente, tais poliaminoãcidos podem ser selecionados a partir do grupo que consiste em albumina sérica õtal como albumina sérica humanai , um anticorpo adicional ou porção do mesmo õpor exemplo, a região FdEI ou outros poliaminoãcidos, po exemplo, polilisinas. Conforme indicado abaixo, a localização da ligação do poliaminoácido pode ser na N) terminação do polipéptido ou C)terminação ou outros locais entre as mesmas e também pode ser conectada por uma porção química ''ligantei! ao polipéptido, tal como um ligante peptídico ou um ligante não peptídico. 0 polímero pode ser de qualquer peso molecular e pode ser ramificado ou nao ramificado. Para polietileno glicol, o peso molecular preferencial está entre cerca de 2 quilodaltons õkDaS e cerca de 100 kDa õo termo "ceca de'! indicando que, em preparaçS es de polietileno glicoi algumas moléculas pesarão mais, algumas menos, do que o peso molecular determinado^ para facilitar o manuséo e fabrico. Por exemplo, o polietileno glicol pode ter entre cerca de 2 kDa e cerca de 60 kDa, entre cerca de 2 kDa e cerca de 4 0 kDa, entre cerca de 5 kDa e cerca de 4 0 kDa, entre cerca de 10 kDa e cerca de 4 0 kDa, entre cerca de 5 kDa e cerca de 3 0 kDa, entre cerca de 5 kDa e cerca de 2 0 kDa ou entre cerca de 10 kDa e cerca de 2 0 kDa, Outros tamanhos podem ser utilizados, dependendo do perfil terapêutico desejado 0 por exemplo, a duração da liferação sustentada desejada, as características de solubilidade, os efeitos, se houver, na atividade biológica, a facilidade de manuseio, o grau ou falta de antigenicidade e outros efeitos conhecidos do polietileno glicol ligado a uma leptina e/ou a um polipéptido quimérico da invençãoã. As considerações adicionais que podem influenciar a seleção de um PEG de um peso molecular particular que pode ser ligado a um polipéptido quimérico para gerar o derivado quimérico incluem o grau ao qual tal PEG de peso molecular pode: mitigar a agregação e/ou aumentar a solubilidade do polipéptido quimérico, quando presente numa composição ou formulação farmaceuticamente aceitável ou quando exposto a tecidos ou fluidos fisiológicos mediante a administração a um indivíduo õtal como por injeçãoã; mitigar a incidência de reações de sítio de injeção causadas pela administração do polipéptido quimérico mediante a administração a um indivíduo por injeção; mitigar a geração de anticorpos neutralizantes que podem ser criados contra o polipéptido quimérico como um resultado da administração de tal polipéptido quimérico a um indivíduo; e similares. VB rias moléculas de polímero assim ligadas podem variar, e uma pessoa versada na técnica terS a capaidade de certificar o efeito resultante na função. Pode)se monoderivatizar ou pode)se fornecer uma di, tri, tetra ou alguma combinação de derivatização com porções químicas iguais ou diferentes õpor exemplo, polímeros, tais como diferentes pesos de polietileno glicóisá. A proporção das moléculas de polímero para moléculas de polipéptido quimérico a serem derivatizadas variará , assim como suas concentrações na mistura de reação. Geralmente, a razão ideal, em termos de eficácia de reação em que não há nenhum polímero ou polipéptido quimérico não reagido em excesso, será determinada por fatores tais como o grau desejado de derivatização 0 por exemplo, mono, di, tri, etc.Kl , qpeso molecular do polímero selecionado, se o polímero é ramificado ou não ramificado e as condições de reação.

As porções químicas devem ser ligadas ao polipéptido quimérico em consideração aos efeitos nos domínios funcionais ou antigénicos do polipéptido quimérico. Há vários métodos de ligação disponíveis às pessoas versadas na técnica. Por exemplo, o documento EP 0 401 384

Kl acoplando PEG a G) CSFKI , consultar também Malik etal. , 1992, Exp. Hematol. 20:1.028 a 1.035 Kl que relata a peguilação de GM)CSF com a utilização de cloreto de tresiloKi . Por exemplo, polietileno glicol pode ser covalentemente ligado através de resíduos de aminoácido por meio de um grupo reativo, tal como um grupo carboxilo ou amino livre. Os grupos reativos são aqueles aos quais uma molécula de polietileno glicol ativada pode ser ligada. Os resíduos de aminoácido que têm um grupo amino livre podem incluir resíduos de lisina e o resíduo de aminoácido N) terminal. Aqueles que têm um grupo carboxilo livre podem incluir resíduos de ácido aspãrtico, resíduos de ácido glutâmico e o resíduo de aminoácido C)terminal. Os grupos sulfidrilo podem também ser utilizados como um grupo reativo para ligar a molécula Kl ou moléculasKi de póètileno glicol. É preferencial para propósitos terapêuticos a ligação num grupo amino, tal como a ligação na N)terminação ou grupo lisina. A ligação em resíduos importantes para a ligação a recetor deve ser evitada se a ligação a recetor for desejada.

Pode)se desejar especificamente projetar e preparar polipéptidos quiméricos quimicamente modificados em N) terminal da revelação. Utilizando)se polietileno glicol como uma ilustração das presentes composições, pode)se selecionar a partir de uma variedade de moléculas de polietileno glicol õpor peso molecular, ramificação, etc. 13 a proporção de moléculas de polietileno glicol para moléculas de polipéptido quimérico na mistura de reação, o tipo de reação de peguilação a ser realizado e o método para obter a proteínas peguilada em N)terminal selecionada. 0 método para obter a preparação peguilada em N)terminal õisto é, separar essa porção química de outras porções químicas monopeguiladas se necessário^ pode ser peà purificação do material peguilado em N)terminal de uma população de moléculas de proteína peguiladas. A modificação química N)terminal seletiva pode ser realizada pela alquilação redutiva que explora a reatividade diferencial de diferentes tipos de grupos amino primários 13 lisina versus o N)terminalE disponível para derifcàzação numa proteína particular. Sob as condições de reação apropriadas, a derivatizaçao substancialmente seletiva da proteína na N)terminação com um grupo carbonilo contendo polímero é alcançada. Por exemplo, pode)se peguilar seletivamente em N)terminal a proteína realizando)se a reação num pH que permite que se aproveitem das diferenças de pKa entre o grupo ε) amino dos resíduos de lisina e este do grupo a)amino do resíduo N)terminal da proteína. Por tal derivatização seletiva, a ligação de um polímero solúvel em água a uma proteína é controlada: a conjugação com o polímero ocorre predominantemente na N)terminação da proteína, e nenhuma modificação significativa de outros grupos reativos, tais como os grupos amino de cadeia lateral de lisina, ocorre. Utilizando)se a alquilação redutiva, o polímero solúvel em água pode ser do tipo descrito acima e deve ter um único aldeído reativo para acoplamento à proteína. Polietileno glicol propionaldeído, contendo um único aldeído reativo, pode ser utilizado. ΤΤΤ Μpf"nHoef Ηώ πτΑ·ΐ f*λ a

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Os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem ser projetados no nível de amino0 cdo. Essas sequências podem, então, ser retrotraduzidas utilizando uma variedade de produtos de software conhecidos na técnica de modo que a sequência de nucleótido seja otimizada para o hospedeiro de expressão desejado, por exemplo, expressão de proteína baseada, otimização de codão, teor de sítio de restrição. Por exemplo, a sequência de nucleótidos pode ser otimizada para expressão de proteína com base em E. coli e para teor de sítio de restrição. Com base na sequência de nucleótidos de interesse, oligonucleótidos sobrepostos podem ser fornecidos para PCR de múltiplas etapas, conforme conhecido na técnica. Esses oligonucleótidos podem ser utilizados em múltiplas reações PCR sob condições bem conhecidas na técnica para construir o cDNA que codifica a proteína de interesse. Para um exemplo é Tampão Amplitaq IX, MgCi2 a 1,3 mM, dNTPs a 200 uM, Amplitaq Gold a 4 U, 0,2 uM de cada iniciador 0 AmpliTaq Gold, ABIã, com parâmetros de ccclagem: 0 94C:30 s, 58C:1 min, 72C:1 minã, 35 ciclos. Sítios de restrição podem ser adicionados às extremidades dos produtos de PCR para utilização na ligação de vetor conforme conhecido na técnica. Os sítios específicos podem incluir Ndel e Xhol, de modo que o cDNA possa, então, estar no quadro de leitura apropriado num vetor de expressão pET45b 0 Novagenã. Utilizando) se esses sítios, quaisquer Etiquetas His N)terminais que estão nesse vetor podem ser removidas na medida que o sítio de início de tradução estaria, então, a jusante da etiqueta. Uma vez que os construtos de expressão são concluídos, uma verificação pode ser conduzida por sequenciação utilizando, por exemplo, iniciador promotor T7, iniciador terminador T7 e protocolos padrão ABI BigDye Term v3.1 conforme conhecido na técnica. As informações de sequência podem ser obtidas a partir de, por exemplo, um Analisador de DNA ABI 3730 e podem ser analisadas utilizando o software Vector NTI v.10 M Invitrogená. Os construtos de expressão podem ser projetados de uma maneira modular de modo que sequências ligantes possam ser facilmente cortadas e alteradas, conforme conhecido na técnica.

Os sítios de reconhecimento de protéase, conhecidos na técnica ou descritos no presente documento, podem ser incorporados em construtos úteis para o projeto, construção, manipulação e produção de polipéptidos quiméricos recombinantes descritos no presente documento. Métodos gerais de produção.

Os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem ser preparados com a utilização de conjuntos de procedimentos biológicos, químicos e/ou de DNA recombinante que são conhecidos na técnica. Os métodos exemplificativos são descritos no presente documento e nas Patentes n° US 6,872,700; WO 2007/139941; WO 2007/140284; WO 2008/082274; WO 2009/011544; e na Publicação n° US 2007/0238669. Outros métodos para preparar os compostos são apresentados no presente documento.

Os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem ser preparados com a utilização de conjuntos de procedimentos de síntese de péptido de fase sólida padrão, tal como um sintetizador de péptido automatizado ou semiautomatizado. Os polipéptidos quiméricos podem ser produzidos pela síntese de péptido não biológica com a utilização de aminoíH eidos e/ou der irados de aminoB eido que têm cadeias laterais reativas protegdas, a síntese de péptido não biológica que compreende o acoplamento em etapas dos aminoíH eidos e/ou dos der irados de aminoS eido para formar um polipéptido de acordo com o primeiro aspeto que tem cadeias laterais reativas protegidas, remoção dos grupos protetores das cadeias laterais reativas do polipéptido e dobra do polipéptido em solução aquosa. Assim, aminoácidos normais õpor exemplo glicina, alanina, fenilalanina, isoleucina, leucina e valina0 e derivados de aminoãcido pré)protegidos sã utilizados para construir sequencialmente uma sequência de polipéptido, em solução ou num suporte sólido num solvente orgânico. Quando uma sequência de polipéptido completa é construída, os grupos protetores são removidos, e o polipéptido é deixado dobrar numa solução aquosa.

Tipicamente, utilizando)se tais conjuntos de procedimentos, um aminoãcido protegido com alfa)N) carbamoílo e um aminoãcido ligado à cadeia de péptido em crescimento numa resina são acoplados à TA num solvente inerte õpor exemplo, dimetilformamida, N) metilpirrolidinona, cloreto de metileno e similares® na presença de agentes de acoplamento õpor exemplo, diciclo) hexilcarbodi)imida, 1)hidroxibenzo)triazol e similares® na presença de uma base õpor exemplo, di)isopropiletilamina e similares® . 0 grupo protetor de alfa)N)carbamoílo é removido da resina peptídica resultante utilizando um reagente õpor exemplo, ácido trifluoroacético, piperidina e similares® , e a reação de acoplamento repetida com o próximo aminoãcido N)protegido desejado a ser adicionado à cadeia de péptido. Os grupos N)protetores adequados são bem conhecidos na técnica, tais como t) butiloxicarbonilo õtBoc® fluorenilmetoxicarbonilo õFmoc® e similares. Os solventes, derivados de aminoãcido e resina de 4)metilbenzidril)amina utilizados no sintetizador de péptido podem ser adquiridos junto à Applied Biosystems Inc. õFoster City, Calif.® .

Para síntese química, a síntese de péptido de fase solida pode ser utilizada para os polipéptidos quiméricos, jã que, em geral, a síntese de fase sólida é uma abordagem direta com excelente escalabilidade para escala comercial. A síntese de péptido de fase sólida pode ser executada com um sintetizador de péptido automático õModelo 430A, Applied

Bi.osyst.0ms Inc., Fos te r City, Cali f.a u t i 1 i zando o si.stema NMP/HOBt 0 Opção 10 e química tBoc ou Fmoc 0 Consutta Applied Biosystems User's Manual for the ABI 430A Peptide Synthesizer, Versão 1.3B 1 de julho de 1988, secção 6, páginas 49 a 70, Applied Biosystems, Inc., Foster City, Calif.0 com encapsulação. As resinas de Boc)péptido podem ser clivadas com HF õ) 5 °C a 0 °C, 1 hora0 . 0 péptòLo pode ser extraído da resina com água e ácido acético alternados, e os filtrados liofilizados. As resinas de Fmoc)péptido podem ser clivadas de acordo com métodos padrão 0 p® exemplo, Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc., 1990, páginas 6 a 120 . Os péptide podem também ser montados utilizando um Sintetizador Advanced Chem Tech 0 Model MPS 350, Louisville, Ky.0 .

Os compostos descritos no presente documento podem também ser preparados utilizando conjuntos de procedimentos de DNA recombinante que utilizam os métodos conhecidos na técnica, tal como Sambrook et al., 1989, MOLECULAR CLONING: A LABORATORY MANUAL, 2a Edição, Cold Spring Harbor. Os compostos de não péptido podem ser preparados por métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, aminoácidos contendo fosfato e péptidos contendo tais aminoácidos podem ser preparados com a utilização de métodos conhecidos na técnica, tal como descrito em Bartlett et al, 1986, Biorg. Chem. 14:356 a 377.

Os polipéptidos quiméricos podem ser alternativamente produzidos por conjuntos de procedimentos recombinantes bem conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Sambrook et al. , 1989 0 ld.0 . Esses polipéptidos quiméricos pradidos por tecnologias recombinantes podem ser expressos a partir de um polinucleótido. Uma pessoa versada na técnica entenderá que os polinucleótidos, incluindo DNA e RNA, que codificam tais polipéptidos quiméricos podem ser obtidos a partir do cDNA do tipo selvagem, por exemplo, leptina humana, levando em consideração a degenerescência da utilização de codão, e podem ser adicionalmente manipulados conforme desejado para incorporar as substituições adequadas. Essas sequências de polinucleótidos podem incorporar códãos que facilitam a transcrição e a tradução de mRNA em hospedeiros microbianos. Tais sequências de fabrico podem ser prontamente construídas de acordo com os métodos bem conhecidos 11a técnica. Consultar, por exemplo, o documento WO 83/04053. Os polinucleótidos acima podem também codificar um resíduo de metionilo N)terminal. Os compostos de não péptido úteis na presente revelação podem ser preparados por métodos conhecidos 11a técnica. Por exemplo, aminoãcidos contendo fosfato e péptidos contendo tais aminoãcidos podem ser preparados com a utilização de métodos conhecidos na técnica. Consultar, por exemplo, Bartlett e Landen, 1986, Bioorg. Chem. 14: 356 a 77.

Uma variedade de sistemas de vetor de expressão/hospedeiro pode ser utilizada para conter e expressar uma sequência de codificação de polipéptido quimérico. Os mesmos incluem, porém, sem limitação, micro) organismos tais como bactérias transformadas com vetores de expressão de bacteriófago, plasmídeo ou DNA cosmídico recombinantes; levedura transformada com vetores de expressão de levedura; sistemas de célula de inseto infetados com vetores de expressão de vírus õpor exemplo, baculoví rusE! ; sistemas de célula vegetal transfretdos com vetores de expressão de vírus õpor exemplo, vírus do mosaico da couve)flor, CaMV; vírus do mosaico do tabaco, TMVEi ou transformados com vetores de expressão bacèrianos õpor exemplo, plasmídeo Ti ou pBR322ES ; ou sistemas de célula animal. As células de mamíferos que são úteis em produçKI es de proteínas recombinantes incluem, paréijt sem limitação, células VERO, células HeLa, linhagens celulares de ovário de hamster chinês ÕCUOEI , células COS õtaás como COS) 70 , células WI 38, BHK, HepG2, 3T3, RIN, MDCK, A549, PC12, K562 e 293. Os protocolos exemplif icativos para a expressão recombinante da proteína são descritos no presente documento e/ou são conhecidos na técnica.

Como tais, sequências de polinucleótidos são úteis na geração de vetores de DNA de plasmídeo e virais novos e úteis, células hospedeiras procarióticas e eucarióticas transfretadas novas e úteis õincluindo células bacterianas, de levedura e de mamíferos cultivadas em culturaá e métodos novos e úteis para crescimento em cultura de tais células hospedeiras com a capacidade de expressão dos presentes polipéptidos quiméricos. As sequências de polnucleótidos que codificam polipéptidos quiméricos no presente documento podem ser úteis para terapia gênica em ocorrências em que a subprodução de polipéptidos quiméricos seria aliviada ou a necessidade de níveis aumentados de tais seria satisfeita. A presente revelação também fornece processos para produção de DNA recombinante dos presentes polipéptidos quiméricos. Ê fornecido um processo para produzir os polipéptidos quiméricos a partir de uma célula hospedeira contendo 0 eidos nucleicos que codificam o polipéptdo quimérico que compreende: õaã cultivar a célula hospedeira contendo polinucleótidos que codificam o polipéptido quimérico sob condiçO es que facilitam a expressão d molécula de DNA; e õbã obter o polipéptido quimérico.

As células hospedeiras podem ser procarióticas ou eucarióticas e incluem bactérias, células de mamíferos õtais como células de Ov0 rio de Hamster Chinês ÕCHQ, células de macaco, células de rim de hamster filhote, células de cancro ou outras célulasã, células de levedura e células de inseto.

Os sistemas hospedeiros de mamífero para a expressão da proteína recombinante são também bem conhecidos por aqueles versados na técnica. Os extirpes de célula hospedeira podem ser escolhidos por uma capacidade particular para processar a proteína expressa ou produzir determinadas modificaç0 es pós)tradução que serão úfeis no fornecimento da atividade de proteína. Tais modificações do polipéptido incluem, porém, sem limitação, acetilação, carboxilação, glicosilação, fosforilação, lipidação e acilação. 0 processamento pós)traducional, que cliva uma forma "pré)pró" da proteína, pode também ser importante para a inserção, dobramento e/ou função corretos. Diferentes células hospedeiras, tais como CHO, HeLa, MDCK, 293, WI38 e similares, têm maquinãrio celular específico e mecanismos característicos para tais atividades pós) traducionais e podem ser escolhidas para garantir a modificação e o processamento corretos da proteína estranha introduzida.

Alternativamente, um sistema de levedura pode ser empregado para gerar os polipéptidos quiméricos da presente invenção. A região de codificação dos polipéptidos quiméricos DNA é amplificada por PCR. Um DNA que codifica a sequência de iniciação pré)pró)alfa de levedura é amplificado a partir do DNA genómico de levedura numa reação PCR com a utilização de um iniciador contendo os nucleótidos 1 a 20 do gene de fator conjugado alfa e outro iniciador complementar aos nucleótidos 255 a 235 desse õKurjan e Herskowitz, 1982, Cell, 30:933 a 9430 . Os fragmentos de sequência de codificação de iniciação pré) pró)alfa e sequência de codificação de polipéptido quimérico são ligados num plasmídeo contendo o promotor de álcool desidrogenase de levedura ÕADH20 , de modo qe o promotor direcione a expressão de uma proteína de fusão que consiste no fator pré)pró)alfa fundido ao polipéptido quimérico maduro. Conforme ensinado por Rose e Broach, Meth. Enz. 185: 234 a 279, Goeddel ed., Academic Press,

Inc., San Diego, Califórnia Õ199G0 , o vetor inclui adicionalmente um terminador de transcrição de ADH2 a jusante do sítio de clonagem, a origem de replicação de "2 mícrones" de levedura, o gene leu)2d de levedura, os genes REP1 e REP2 de levedura, o gene de beta) lactamase de E. coli e uma origem de replicação de E. coli. Os genes de beta)lactamase e leu)2d fornece a seleção em bactérias e leveduras, respetivamente. 0 gene leu)2d também facilita o número de cópias aumentado do plasmídeo na levedura para induzir níveis mais altos de expressão. Os genes REP1 e REP2 codificam as proteínas envolvidas na regulação do número de cópias de plasmídeo. 0 construto de DNA descrito no parágrafo anterior é transformado em células de levedura com a utilização de um método conhecido, por exemplo, tratamento com acetato de lítio õSteams et al. , 1990, Me th. Enz. 185: 280 a 29713 . 0 promotor de ADH2 é induzido mediante a exaustão de glicose no meio de crescimento õPrice et al., 1987, Gene 55:2870 . A sequência pré)pró)alfa efetua secreção da proteína de fusão a partir das células. Concomitantemente, a proteína KEX2 de levedura cliva a sequência pré)pró dos polipéptidos quiméricos maduros õBitter et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:5.330 a 5.3340 .

Os polipéptidos quiméricos da invenção podem também ser expressos de modo recombinante em levedura, por exemplo, Pichia, com a utilização de um sistema de expressão comercialmente disponível, por exemplo, o Sistema de Expressão de Pichia õlnvitrogen, San Diego, Califórnia0 , seguindo)se as instruç0 es do fabricante. Esse sistaa também depende da sequência pré)pró)alfa para direcionar a secreção, mas a transcrição do inserto é acionada pelo promotor de álcool oxidase ÕAOX10 mediante a induçã por metanol. 0 polipéptido quimérico secretado é purificado a partir do meio de crescimento de levedura, por exemplo, pelos métodos utilizados para purificar o referido polipéptido quimérico de sobrenadantes celulares bacterianos e de mamíferos.

Alternativamente, o DNA que codifica um polipéptido quimérico pode ser clonado num vetor de expressão de baculovírus, por exemplo pVL1393 õPharMingen, San Diego,

Califórniaã. Esse vetor de codificação de polipéptido quimérico é, então, utilizado de acordo com as orientações do fabricante 0 PharMingenã ou técnicas conhecidas pra infetar células de Spodoptera frugiperda, cultivado, por exemplo, em meio sem proteína sF9, e para produzir proteína recombinante. A proteína é purificada e concentrada a partir do meio com a utilização de métodos conhecidos na técnica, por exemplo, uma coluna de heparina)Sepharose 0 Pharmacia, Piscataway, New Jerseyã e colunas de dimensionamento molecular sequenciais 0 Amicon, Bevely, Massachusettsã, e ressuspensa em solução adequada, por exemplo, PBS. Análise SDS)PAGE pode ser utilizada para caracterizar a proteína, por exemplo, mostrando uma única banda que confirma o tamanho do polipéptido quimérico, assim como a análise de sequência de aminoãcidos completa, por exemplo, sequenciação de Edman num Sequenciador de Péptidos Proton 2090, ou confirmação de sua sequência N) terminal.

Por exemplo, a sequência de DNA que codifica o polipéptido quimérico maduro previsto pode ser clonada num plasmídeo contendo um promotor desejado e, opcionalmente, uma sequência de iniciação 0 consultar, por exemplo, Better et al. , 1988, Science 240:1.041 a 1.043ã. A sequência desse construto pode ser confirmada por sequenciamento automatizado. 0 plasmídeo é, então, transformado na cepa de E. coli, cepa MC1Q61, com a utilização de procedimentos que empregam incubação de CaC12 e tratamento de choque térmico das bactérias 0 Sambrook et al., Id.ã. As bactérias transformadas são cultivadas em meio LB suplementado com carbenicilina, e a produção da proteína expressão é induzida por cultivo num meio adequado. Se presente, a sequência de iniciação afetará a secreção do polipéptido quimérico maduro e será clivada durante a secreção. 0 polipéptido quimérico recombinante secretado é purificado do meio de cultura bacteriano pelo método descrito no presente documento.

Alternativamente, os polipéptidos quiméricos podem ser expressos num sistema de inseto. Os sistemas de inseto para expressão de proteína são bem conhecidos por aqueles versados na técnica. Em tal sistema, o vírus da poliedrose nuclear de Autographa californica õAcNPVá é utilizado como um vetor para expressar genes estranhos em células de Spodoptera frugiperda ou em larvas de Trichoplusia. A sequência de codificação de polipéptido quimérico é clonada numa região não essencial do vírus, tal como o gene de poliedrina e colocada sob o controlo do promotor de poliedrina. A inserção bem)sucedida de um polipéptido quimérico tornará o gene de poli)hedrina inativo e produzirá o vírus recombinante sem revestimento de proteína de revestimento. Os vírus recombinantes são, então, utilizados para infetar células de S. frugiperda ou Trichoplusia larvae em que um polipéptido quimérico da presente invenção é expresso õSmith et al., 1983, J. Virol. 46:584; Engelhard et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91:3.224 a 3,227§ .

Em outro exemplo, a sequência de DNA que codifica os polipéptidos quiméricos pode ser amplificada por PCR e clonada num vetor apropriado, por exemplo, pGEX)3X õPharmacia, Piscataway, Nova JerseyH . 0 vetor pGEX é projetado para produzir uma proteína de fusão que compreende glutationa)S)transferase õGSTS , codificda pelo vetor e uma proteína codificada por um fragmento de DNA inserido no sítio de clonagem do vetor. Os iniciadores para a PCR podem ser gerados para incluir, por exemplo, um sítio de clivagem apropriado. A proteína de fusão recombinante pode, então, ser clivada a partir da porção de GST da proteína de fusão. 0 construto de pGEX)3X/polipéptido quimérico é transformado em células XL) 1 Blue de E. coli õStratagene, La Jolla, Califórnia^ , e transformante individuais são isolados e cultivados a 37 °C em meio LB M suplementado com carbenicilinaã a uma densidade ótca a um comprimento de onda 6 00 nm de 0,4, seguido pela incubação adicional por 4 horas na presença de Isopropil beta)D) tiogalactopiranósido a 0,5 mM M Sigma Chemical Co. , St. Louis, MissouriS . 0 DNA de plasmídeo de transformates individuais é purificado e parcialmente sequenciado com a utilização de um sequenciador automatizado para confirmar a presença do inserto de gene de codificação de polipéptido quimérico desejado na orientação apropriada. A proteína de fusão, quando se espera que seja produzida como um corpo de inclusão insolúvel nas bactérias, pode ser purificada conforme descrito acima ou conforme segue. As células são colhidas por centrifugação; lavadas em NaCl a 0,15 M, Tris a 10 mM, pH 8, EDTA a 1 mM; e tratadas com 0,1 mg/mL de lisozima õSigma Chemical Co.á por 15 min. à TA. 0 lisato é retirado por sonicação, e os restos de células são peletizados por centrifugação por 10 min. a 12.000 xg. 0 pélete contendo proteína de fusão é ressuspenso em Tris a 50 mM, pH 8 e EDTA a 10 mM, sobreposto sobre glicerol 50% e centrifugado por 30 min. a 6.000 xg. 0 pélete é ressuspenso em solução salina tamponada com fosfato õPBSá padrão livre de Mg++ e Ca++. A proteína de fusão é adicionalmente purificada fracionando) se o pélete ressuspenso num gel de poliacrilamida SDS desnaturante õSambrook et al., supraá. 0 gel é embebido em KC1 a 0,4 M para visualizar a proteína que é extirpada e eletroeluída em tampão de execução em gel sem SDS. Se a proteína de fusão de polipéptido quimérico/GST for produzida em bactérias como uma proteína solúvel, a mesma pode ser purificada utilizando o Módulo de Purificação de GST õPharmacia Biotechá. A proteína de fusão pode ser submetida à digestão para clivar a GST do polipéptido quimérico maduro. A reação de digestão Õ20 a 40 pg de proteína de fusão, 20 a 30 unidades de trombina humana Õ4.000 U/mg õSigmaá em 0,5 mL de PBSã é incubada por 16 a 48 h à TA e carregada num gel SDS)PAGE desnaturante para fracionar os produtos de reação. 0 gel é embebido em KC1 a 0,4 M para visualizar as bandas de proteína. A identidade da banda de proteína correspondendo ao peso molecular esperado do polipéptido quimérico pode ser confirmada pela análise de sequência de aminoácidos parcial que utiliza um sequenciador automatizado õApplied Biosystems Modelo 473A, Foster City, Califórnia® .

Em um método particularmente exemplificativo da expressão recombinante dos polipéptidos quiméricos da presente invenção, 293 células podem ser cotransfetadas com plasmídeos contendo o cDNA de polipéptidos quiméricos no vetor pCMV õpromotor CMV 5', sequência HGH poli A 3'® e pSV2neo õcontendo o gene de resistência neo® pelo étodo de fosfato de cálcio. Os vetores podem ser linearizados com Seal antes da transfeção. Similarmente, um construto alternativo que utiliza um vetor pCMV similar com o gene neo incorporado pode ser utilizado. As linhagens celulares estáveis são selecionadas a partir de clones de célula única limitando)se a diluição no meio de crescimento contendo 0,5 mg/mL de G418 õantibiótico do tipo neomicina® por 10 a 14 dias. As linhagens celulares são tríadas por expressão de polipéptidos quiméricos por ELISA ou Western blot, e as linhagens celulares de alta expressão são expandidas para crescimento em larga escala. É preferencial que as células transformadas sejam utilizadas para produção de proteína de alto rendimento a longo prazo, e, como tal, expressão estável é desejável. Uma vez que tais células são transformadas com vetores que contêm marcadores selecionáveis juntamente com a cassete de expressão desejado, as células podem ser deixadas crescer por 1 a 2 dias num meio enriquecido antes que as mesmas sejam comutadas para o meio seletivo. 0 marcador selecionável é projetado para conferir resistência à seleção, e sua presença permite o crescimento e a recuperação de células que expressam de modo bem)sucedido as sequências introduzidas. Os agregados resistentes de células estavelmente transformadas podem ser proliferados com a utilização de conjuntos de procedimentos de cultura de tecido apropriados para a célula. Vários sistemas de seleção podem ser utilizados para recuperar as células que foram transformadas para produção de proteína recombinante. Tais sistemas de seleção incluem, porém, sem limitação, genes de HSV timidina quinase, hipoxantina)guanina fosforribosiltransferase e adenina fosforribosiltransferase, em células tk, hgprt ou aprt, respetivamente. Também, a resistência a antimetabólito pode ser utilizada como a base de seleção para dhfr que confere resistência a metotrexato; gpt que confere resistência a ácido micofenólico; neo que confere resistência ao aminoglicósido, G418; também, que confere resistência a clorsulfurão; e higro que confere resistência à higromicina. Os genes selecionáveis adicionais que podem ser úteis incluem trpB que permite que as células utilizem indol no lugar de triptofano ou hisD que permite que as células utilizem histinol no lugar de histidina. Os marcadores que proporcionam uma indicação visual para a identificação de transformantes incluem antocianinas, beta) glucuronidase e seu substrato, GUS e luciferase e seu substrato, luciferina.

Os polipéptidos quiméricos da presente revelação podem ser produzidos com a utilização de uma combinação tanto de síntese de péptido automatizada como técnicas recombinantes. Por exemplo, um polipéptido quimérico pode conter uma combinação de modificações, incluindo deleção, substituição, inserção ou derivação por peguilação õou outra porção química, por exemplo, polímero, cadeia de acila graxa, amidaçâo C)terminal® . Tal polipéptido quimérico pode ser produzido em estágios. No primeiro estágio, um polipéptido quimérico intermediário contendo as modificações de deleção, substituição, inserção, e qualquer combinação das mesmas, pode ser produzido por técnicas recombinantes conforme descrito. Então, após uma etapa de purificação opcional, conforme descrito no presente documento, o polipéptido quimérico intermediário é peguilado õou submetido a outra derivação química, por exemplo, acilação, amidação C)terminal® através de modificação química com um reagente de peguilação adequado õpor exemplo, da NeKtar Transforming Therapeutics, San Carlos, Califórnia® para render o derivado de polipptido quimérico desejado. Um versado na técnica perceberá que o procedimento descrito acima pode ser generalizado para aplicação a um polipéptido quimérico contendo uma combinação de modificaç® es selecionadas dentre delção, substituição, inserção, derivação e outros meios de modificação bem conhecidos na técnica e contemplados pela presente revelação.

Os péptidos podem ser purificados por diversos métodos conhecidos na técnica, incluindo conforme descrito no presente documento. Em um método, os péptidos são purificados por RP)HPLC õpreparativa e analítica® om a utilização de um sistema Waters Delta Prep 3000. Uma coluna preparativa C4, C8 ou Cl 8 Õ10 μ, 2,2 X 2 5 cm; Vydac, Hesperia, Calif.® pode ser usada para isolar péptids, e a pureza pode ser determinada com a utilização de uma coluna analítica C4, CS ou C18 Õ5 μ, 0,46 X 25 cm; Vydac® . Os solventes ÕA=0,1% de TFA/água e 33=0,1% de TFA/CH3CN® podem ser entregues à coluna analítica a uma taxa de fluxo de 1,0 ml/min e à coluna preparativa a 15 ml/rnin. Análises de aminoácido podem ser realizadas no sistema Waters Pico Tag e processadas com a utilização do programa Maxima. Os péptidos podem ser hidrolisados por hidrólise ácida de fase de vapor Õ115 °C, 20 a 24 h® . Os hidrolisados podem ser

derivados e analisados por métodos padrão õCohen et al, THE PICO TAG METHOD: A MANUAL OF ADVANCED TECHNIQUES FOR AMINO ACID AMALYSIS, p® ginas 11 a 52, Millipore Corporatõn, Milford, Mass. õ!989ãã. An® lise de bombardeio r® pd>d de ® tomo pode ser realizada por M)Scan, Incorporated ®est Chester, Pa.® . A calibração de massa pode ser realiada com a utilização de iodeto de césio ou iodeto de césio/glicerol. A análise por ionização de dessorçâo de plasma com a utilização de deteção por tempo de voo pode ser executada num espectromet.ro de massa Applied Biosystems Bio)Ion 20.

Ensaio de expressão de polipéptido quimérico.

Estão disponíveis métodos para avaliar o nível de expressão de proteína por uma célula hospedeira. Os procedimentos úteis para avaliar o nível de expressão de proteína por uma célula hospedeira são exemplificados no protocolo típico a seguir. Cerca de 25 μΐ de células BL21E. coli são transformados com 2 ul de DNA plasmídeo õvetor de expressão para o polinucleótido quimérico® . As célíias são colocadas em placas e incubadas de um dia para o outro a 37 graus C ou à temperatura ambiente õTA® durante um príodo de 48 horas. Uma colónia única pode ser selecionada e usada para cultivar uma cultura inicial em 4 ml de meio LB com antibiótico adequado por ~6 horas. Soluç® es estoque de glicerol podem ser preparadas adicionando)se 100 ul de glicerol estéril a 80% a 900 ul de solução estoque, que podem ser, então, misturados gentilmente e armazenados a ) 80 C. Uma amostra de 250 μΐ pode ser removido para amostra não induzida por TCP. Um alíquota, por exemplo, 2 ml de meio Magic contendo antibiótico adequado podem ser inoculados com 5 μΐ de cultura inicial, que pode ser, então, incubada de um dia para o outro õaté 24 horas® a 37 C, 300 rpm. Conforme conhecido na técnica, o meio Magic é autoinduzido. Alternativamente, 60 ml de meio Magic contendo antibiótico adequado podem ser inoculados com 60 μΐ de cultura inicial num frasco Thompson de 250 ml ou 125 ml, que pode ser, então, incubado de um dia para o outro õaté 24 horasá a 30 C, 3G0rpm. Após a incubação, 250 μΐ de cultura podem ser removidos de cada tubo, e as células peletizadas. A célula pode ser ressuspensa em 1 ml de Tris a 50 mM pH 8, NaCl a 150 mM, ao qual pode ser adicionado 0,1 volume Õ100 ulá de reagente de cultura POP e 1 μΐ de r) lisozima õdiluição a 1:750 em tampão de r)lisozimaã. A mistura pode ser bem misturada e incubada pelo menos 10 minutos à TA. A preparação pode ser, então, centrifugada por 10 min a 14.000 x G. 0 sobrenadante õfração solúvelã pode ser removido e retido, e as amostras podem ser preparadas por anS lise em gel Õ15 μΐ + 5 μΐ de LDSã 0 pélete de corpo de inclusão remanescente pode ser ressuspenso em 1 ml de SDS a 1% com sonicação. A amostra pode ser preparada para anS lise em gel Õ15 ul + 5 fli de LDSá. Para amostras não induzidas, 1,0 volume de reagente de cultura POP e 1 μΐ de r) lisozima õdiluição a 1:750 em tampão de r)lisozimaã pode ser adicionado. A mistura pode ser bem misturada e incubada pelo menos 10 minutos à TA. Essas amostras podem não precisar ser centrifugadas. A amostra pode ser, então, preparada para anB lise emgel Õ15 μΐ + 5 μΐ de LDSã. Géis NU)PAGE Õ4 a 12%ã não reduzidos em tampão 1XMES podem ser passados e manchados com protocolo de micro)ondas SimplyBlue. A remoção da mancha pode ser conduzida de um dia para o outro, conforme conhecido na técnica. Uma imagem de gel pode ser retida e analisada para determinar os níveis de expressão de proteína.

Preparação de corpo de inclusão.

Para polipéptidos quiméricos que são encontrados na fração de corpo de inclusão, o procedimento a seguir pode ser benéfico. 0 pélete celular pode ser ressuspenso num mínimo de 100 ml de tampão de lise para cada 50 ml de cultura. Mediante a adição de 30 ml, uma pipeta de 10 ml pode ser usada para ressuspensão, então, o tubo pode ser lavado com 70 ml adicionais. A solução celular ressuspensa pode ser passada múltiplas vezes, por exemplo, 4 passagens, através de um microfluidizados a 689 kPa Õ100 PSIã õminã, tendo)se o cuidado de manter a câmara em água com gelo por todo o processo. A pasta fluida fluidizada pode ser centrifugada a 14.000 x g, 20 min õpor exemplo, JLA 10.5, 10.000 rpm, com a utilização de garrafas de 250 ml Nalgene®0 . 0 pélete de corpo de inclusão pode ser ressuspenso em gelo em tampão de lise resfriado com barra de agitação e placa de agitação por 1 hora a 4 C após a interrupção com a ponta da pipeta. 0 pélete pode ser ressuspenso uma segunda vez em H20 destinado com barra de agitação e placa de agitação por 1 hora a 4 C após interrupção com a ponta da pipeta, seguida por centrifugação a 14.000 x g, 15 min. 0 sobrenadante pode ser removido e descartado. 0 resultante pode ser armazenado a ) 80 C.

Purificação de proteína.

Conforme descrito no presente documento, inúmeros métodos são conhecidos para isolamento de polipéptidos expressos. 0 seguinte é um exemplo. Os péletes de corpo de inclusão podem ser solubilizados em volume adequado de tampão de solubilização õureia a 8 M ou guanidina a 8 M, Tris a 50 mM, DTT a 10 mM, pH 7,750 por 1 hora à TA Os péletes solubilizados podem ser centrifugados por 20 minutos a 27.000 g. 0 sobrenadante filtrado õpor exemplo, 0,4 um0 pode ser transferido gota a gota em volumeadequado de tampão de reenovelamento õTris)HCl a 50 mM, ureia a 1 M, arginina a 0,8 M, cisteína a 4 mM, cistamina a 1 mM; pH 80 à TA. 0 resultado pode ser, então, colocado a 4 °C de um dia para o outro ou mais tempo com mistura suave. As amostras podem ser concentradas e passadas numa coluna de filtração em gel õSuperdex™ 75 26/600 a 1 a 2 ml/mm em ambiente a 4 C com a utilização de um GE Healthsciences AKTAFPLC™. Fraç0 es contendo proteína adequadas podm ser identificadas por meio de SDS)PAGE, agrupadas e passadas através de uma segunda coluna de filtração em gel. A proteína agrupada pode ser, então, concentrada em filtro Amicon a uma concentração adequada e avaliada quanto aos níveis de endotoxina com a utilização, por exemplo, de Leitor Endosafe® PTS õCharles Riverã, conforme conhecido na técnica. Uma vez que uma amostra de proteína tenha passado pelos critérios de endotoxina, a mesma pode ser filtrada estéril, dispensada em alíquotas e passada através de ensaios de controlo de qualidade. Os ensaios de controlo de qualidade podem incluir HPLOSEC analítica, SDS PAGE não redutora e RP HPLC ) MS para obter a massa aproximada. As proteínas podem ser obtidas em IxPBS õcloreto de sódio a 137 mM, cloreto de pot0 ssio a 2,7 mM, fosfato dissdico a 4,3 mM, fosfato de monopotS ssio a 1,4 mM, pH7,2ã, distribuídas em alíquotas e congeladas rapidamente para armazenamento a )70 a )80 °C. IV. MÉTODOS DE UTILIZAÇÃO Ξ TRATAMENTO DE DOENÇAS Indicações.

Uma variedade de doenças e distúrbios é contemplada para ser beneficamente tratada pelos compostos de polipéptido e métodos descritos no presente documento. Obesidade e sobrepeso. A obesidade e seus distúrbios associados, incluindo sobrepeso, são problemas de saúde comuns e sérios nos Estados Unidos e por todo o mundo. A obesidade na parte superior do corpo é o fator de risco mais forte para diabetes mellitus tipo 2 e é um fator de risco forte para doença cardiovascular. A obesidade é um fator de risco reconhecido para hipertensão, aterosclerose, insuficiência cardíaca congestiva, derrame, doença da vesícula biliar, osteoartrite, apneia do sono, distúrbios reprodutivos, tais como síndrome do ovário policístico, cancros de mama, próstata e cólon, e incidência aumentada de complicações de anestesia geral. Consultar, por exemplo, Kopelman, 2000, Nature 404:635 a 643. A obesidade reduz o tempo de vida e produz um risco sério das comorbidades listadas acima, assim como distúrbios, tais como infeções, varizes, Acanthosis nigricans, eczema, intolerância a exercícios, resistência à insulina, hipercolesterolemia por hipertensão, colelitiase, lesão ortopédica e doença tromboembólica. Consultar, por exemplo, Rissanen et al, 1990, Br. Med. J., 301:835 a 837. A obesidade é também um fator de risco para o grupo de afeções chamado síndrome de resistência à insulina ou "Síndrome X" e síndrome metabólica. 0 custo médico em todo o mundo da obesidade e distúrbios associados é enorme.

Acredita)se que a patogénese da obesidade seja multifatorial. Um problema é que, em indivíduos obesos, a disponibilidade de nutriente e o gasto de energia não entram em equilíbrio até haver tecido adiposo em excesso. 0 sistema nervoso central 0 CMSã controla o saldo de eergia e coordena uma variedade de atividades comportamentais, autonômicas e endõcrinas adequadas para a situação metabólica do animal. Os mecanismos ou sistemas que controlam essas atividades são amplamente distribuídos através da prosencéfalo Kl por exemplo, hipotEI lamoá, rombencéfalo 0 por exemplo, tronco cerebralã e meduà espinhal. Por fim, as informações metabólicas 0 isto é, disponibilidade de combustívelã e cognitivas EI isto é, preferências aprendidasã desses sistemas são integradas e a decisão de iniciar comportamentos apetitivos EI busca de alimentoã e consumatórios Kl ingestãoá é ativado Kl ofehção e iniciação da refeiçãoá ou desativado EI término da réeiçãoã. Acredita) se que o hipotEI lamo seja principalmente responsEi vel por integrar esses sinais e, então, emiir comandos para o tronco cerebral. Núcleos do tronco cerebral que controlam os elementos do sistema de controlo do motor consumatório 0 por exemplo, músculos responsES veis po mastigar e engolirá. Como tais, esses núcleos do CNS foram literalmente denominados como constituindo a "trajetória comum final" para comportamento ingestivo. 0 suporte de evidência neuroanatómica e farmacológica que sinais de energia e homeostase nutricional integram)se nos núcleos do prosencéfalo e que o sistema de controlo do motor consumatório reside nos núcleos do tronco cerebral, provavelmente em regiões que circundam o núcleo motor trigeminal. Há conexão recíproca extensiva entre o hipotálamo e o tronco cerebral. Uma variedade de terapêutico antiobesidade direcionados ao CNS 0 porexemplo, moléculas pequenas e péptidosS foca predominantemeíie nos substratos do prosencéfalo que residem no hipotálamo e/ou mediante os substratos do rombencéfalo que residem no tronco cerebral. A obesidade permanece um distúrbio metabólico insuficientemente tratável, crónico, essencialmente intratável. De modo correspondente, existe a necessidade de novas terapias úteis na redução de peso e/ou manutenção de peso num indivíduo. Tais terapias poderiam levar a um efeito benéfico profundo sobre a saúde do indivíduo. Métodos e terapias que empregam os péptidos quiméricos no presente documento, sozinhos ou em combinação com outros agentes antiobesidade 0 consultar, por exemplo, os documentos WO 2009064298 e US 200802075120 podem fenecer tais efeitos benéficos.

Deficiência de leptina. A deficiência de leptina mostrou resultar em obesidade. Uma forma de deficiência de leptina é deficiência de leptina congénita, um distúrbio genético raro. Consultar Montaque et al. , 1997, Nature 387: 903 a 908. A deficiência de leptina grave pode ser um resultado de diabetes mellitus por deficiência de insulina descontrolada que resulta da destruição de células β de secreção de insulina. Teoriza)se que a falta de insulina leve à síntese e ao armazenamento de triglicerídeos em tecido adiposo, o que impede o ganho de peso e, por sua vez, reduz drasticamente os níveis plasmãticos de leptina, visto que a leptina é sintetizada no tecido adiposo. Essas e outras deficiências de leptina, e doenças e distúrbios que resultam de tais deficiências, podem ser tratadas com terapia de reposição de leptina, tal como por meio de injeções diárias de leptina ou agonista de leptina. Os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem fornecer um tratamento terapêutico mais conveniente e vantajoso de tais doenças e distúrbios.

Diabetes e doença cardiovascular. A diabetes mellitus é reconhecida como uma doença complexa e crónica em que 60% a 70% de todas as fatalidades de caso entre pacientes diabéticos são resultado de complicações cardiovasculares. A diabetes não é apenas considerada um equivalente de risco de doença cardíaca coronariana, mas é também identificada como um previsor independente de eventos adversos, incluindo infarto do miocãrdio recorrente, insuficiência cardíaca congestiva e morte após incidente cardiovascular. Poder)se)ia esperar que a adoção de controle de glicose mais rígido e tratamento agressivo para fatores de risco cardiovascular reduzisse o risco de complicações de doença cardíaca coronariana e aprimorasse a sobrevida global entre pacientes diabéticos. Além disso, pacientes diabéticos têm probabilidade duas a três vezes maior de experimentar um infarto agudo do miocãrdio do que pacientes não diabéticos, e pacientes diabéticos vivem oito a trinta anos a menos que pacientes não diabéticos.

Entendendo a natureza de alto risco de pacientes diabéticos/com infarto agudo do miocárdio, as diretivas da prática clínica da American College of Cardiology/'American Heart Association E "ACC/AHA"0 para o gerenciamentode pacientes hospitalizados com angina instável ou infarto do miocárdio sem elevação de ST E coletivamente denomiados "ACS"0 reconheceram recentemente que pacientes diaêticos hospitalizados são uma população especial que exige gerenciamento agressivo de hiperglicemia. Especificamente, as diretivas determinam que a terapia de redução de glicose para pacientes diabéticos/com ACS hospitalizados deve ser direcionada para atingir glicose pré)prandial menor que 10 mg/dl, um alvo diário máximo menor que 180 mg/dl e uma hemoglobina Alc pós)descarga menor que 7%.

Em uma amostra nacional de pacientes idosos com ACS, foi demonstrado que um aumento em mortalidade em 30 dias em pacientes diabéticos correspondeu aos pacientes que têm valores de glicose mais altos mediante admissão no hospital. Consultar i! Diabetic Coronary Artery Disease &amp; Intervention", Coronary Therapeutics 2002, Oak Brook, IL, 20 de setembro de 2002. Há evidência crescente de que hiperglicemia prolongada em vez de glicose elevada temporária mediante admissão no hospital está relacionada a eventos adversos sérios. Embora a métrica ideal para hiperglicemia e risco vascular em pacientes não seja facilmente conhecida, parece que o valor de glicose médio durante a hospitalização é mais preditivo de mortalidade. Em um estudo separado de pacientes com ACS de mais de quarenta hospitais nos Estados Unidos, concluiu)se que a hiperglicemia resistente, em oposição a valores de glicose aleatórios mediante admissão no hospital, foi mais preditiva de mortalidade no hospital. Consultar Acute Coronary Syndrome Summit.: A State of the Art Approach, Kansas City, MO, 21 de setembro de 2002. Em comparação com os valores de glicose mediante admissão, um modelo de regressão logística de controlo de glicose durante toda a hospitalização foi mais preditivo de mortalidade. Há quase um risco aumentado em dobro de mortalidade durante a hospitalização para cada 10 mg/dl de aumento em glicose em relação a 120 mg/dl. Em uma coorte menor de pacientes diabéticos/com ACS consecutivos, houve um aumento gradual em mortalidade num ano com níveis de glicose crescentes mediante admissão no hospital. No ambiente hospitalar, as diretivas de ACC/AHA sugerem a iniciação de terapia agressiva com insulina para atingir teor de glicose sanguínea mais baixo durante a hospitalização.

Foi relatado que a leptina pode ter benefício direto para tratar diabetes, particularmente em diabetes tipo I e diabetes tipo II, com ou sem a presença de obesidade e, mais particularmente, em condições de baixo teor de leptina sérica. Foi relatado que a reposição de leptina reduziu ou prevenir hiperinsulinemia, resistência à a e hiperglicemia em vários modelos animais de diabetes tipo 1 e 2 com ou sem obesidade presente. Por exemplo, altos níveis plasmáticos de leptina gerados por administração farmacológica de leptina ou com terapia génica adenoviral reduziram a hiperglicemia e aumentos associados de níveis plasmáticos de glucagon em diabetes induzida por STZ, a despeito de níveis de insulina persistentemente baixos.

Doenças de regulação de lípido.

Conforme conhecido na técnica, a lipodistrofia é caracterizada por condições anormais ou degenerativas do tecido adiposo do corpo. A dislipidemia é uma rutura no componente lipídico normal no sangue. Acredita)se que a elevação prolongada de níveis de insulina pode levar à dislipidemia. A hiperlipidemia é a presença de níveis elevados ou anormais de lípidos e/ou lipoproteínas no sangue. A amenorreia hipotalâmica é uma afeção em que a menstruação cessa por diversos meses devido a um problema que envolve o hipotãlamo. Concluiu)se que a terapia de reposição de leptina em mulheres com amenorreia hipotalâmica aprimora os eixos hormonais reprodutivos, da tireoide e de crescimento e marcadores de formação óssea sem causar efeitos adversos. Consultar, por exemplo, Oral et al. , N Engl J Med. 2004, 351: 959 a 962, 987 a 997. Doença do fígado gordo, por exemplo, doença do fígado gordo não alcoólica S NAFLD0 , refere)se a um espectro ampl de doença hepática na faixa de fígado gordo simples õesteatoseã a esteato)hepatite não alcoólica õNASHá a cirrose õirreversível, cicatrização avançada do fígadoá. Todos os est§ gios de NAFLD têm em comum o acúmulo á gordura õinfiltração de gorduraá nas células hep0 tcras õhepatócitosã. Acredita)se que a leptina seja um dos reguladores principais para inflamação e progressão de fibrose em v0 rias doenças crónicas, incluindo NASH. Consultar, por exemplo, Ikejima et al. , 2005, Hepatology

Res. 33:151 a 154.

Adicionalmente, sem o desejo de vincular)se a qualquer teoria, acredita)se que a deficiência de insulina relativa em diabetes tipo 2, toxicidade de glicose e carga de 13 eido graxo livre hepH tico aumentada através da entrega èevada de tecido adiposo intra)abdominal por meio da veia portal sejam implicados como causas possíveis em distúrbios do fígado gordo. De facto, criou)se a hipótese de que o comportamento alimentar é o fator principal que aciona a síndrome metabólica de obesidade com seus muitos corolS rios, incluindo NASH. Consequentemente, os tratamentos que visam diminuir a ingestão de alimento e aumentar o número de refeiçH es pequenas, conforme |3 foi demonstrado em diabetes tipo 2, podem tratar e prevenir eficazmente NASH. Os fS rmacos que promovem a secreço de insulina e a perda de peso e atrasam o esvaziamento g!3 strico são também eficazes para aprimorar a toleância à glicose e, assim, podem aprimorar o fígado gorduroso com sua hiperinsulinemia presente. Assim, a utilização de polipéptido de leptina quimérico pode ser bem adequada como uma modalidade de tratamento para essa afeção. Consequentemente, os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem ser úteis no tratamento de distúrbios de fígado gordo.

Doença de alzheimer. A doença de Alzheimer õADá, conforme mostrado na técnica, estS associada a placas e emaranhados no érebro que incluem desregulação da proteína A)beta. Acredita)se que os lípidos cerebrais estejam intrinsecamente envolvidos nas trajetórias patogénicas relacionada a A)beta e que um modulador importante de homeostase de lípido seja a leptina. Consequentemente, a leptina pode modular a cinese de A)beta bidirecional, reduzindo seus níveis extracelularmente. De facto, foi demonstrado que a administração crónica de leptina a animais transgénicos com AD reduziu a carga cerebral de A)beta, subjacente a seu potencial terapêutico. Consultar Fewlass et al. , 2004, FASEB J., 18:1870)1878. Adicionalmente, a diabetes mellitus tipo 2 e a AD compartilham características epidemiolõgicas e bioquímicas pelo facto de que ambas são caracterizadas por agregados de proteína insolúveis com conformação fibrilar ) amilina em ilhotas pancreãticas de DM tipo 2 e Αβ em cérebro com AD. Sem o desejo de vincular) se a qualquer teoria, acredita)se que mecanismos tóxicos similares podem caracterizar DM tipo 2 e AD. Consultar Lim et al., 2008, FEBS Lett., 582:2.188 a 2.194. Síndrome metabólica X. A síndrome metabólica X é caracterizada por resistência à insulina, dislipidemia, hipertensão e distribuição visceral de tecido adiposo e exerce um papel pivotal na patofisiologia de diabetes tipo 2. Foi também concluído estar fortemente relacionada a NASH, fibrose e cirrose do fígado. Consequentemente, os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem ser úteis no tratamento de síndrome metabólica X.

Doença de Huntington. A doença de Huntington é uma doença neurodegenerativa, dominante autossómica. As características da doença incluem perturbações motoras, demência, problemas psiquiátricos e perda de peso não pretendida. Os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem ser usados no tratamento de doença de Huntington.

Consequentemente, em um aspeto, é fornecido um método para tratar uma doença ou um distúrbio num indivíduo. 0 indivíduo precisa de tratamento para a doença ou o distúrbio. A doença ou o distúrbio pode ser lipodistrofia, dislipidemia, hiperlipidemia, sobrepeso, obesidade, amenorreia hipotalâmica, doença de Alzheimer, deficiência de leptina, doença de fígado gordo ou diabetes õincluindo tipo I e tipo Ilã. As doenças e distúrbios adicionais que podem ser tratados pelos compostos e métodos descritos no presente documento incluem esteato)hepatite não alcoólica õNASHá, doença do fígado gordo não alcoólica õNAFLDá, síndrome metabólica X e doença de Huntington. 0 método de tratamento inclui a administração ao indivíduo de um polipéptido quimérico conforme no presente documento numa quantidade eficaz para o tratamento da doença ou do distúrbio. V. Ensaios

Os métodos para a produção e o ensaio de polipéptidos quiméricos descritos no presente documento estão, de modo geral, disponíveis ao versado na técnica. Ademais, os métodos específicos são descritos no presente documento assim como nas publicaçíH es de patente e outras refeências citadas no presente documento. T ΤΠ <·“Τι£3 G 1“ 3Λ ai T YnôO ί“Λ

Sem o desejo de ater)se a qualquer teoria, acredita)se que a ingestão de alimento seja útil na avaliação da utilidade de um composto conforme descrito no presente documento. Por exemplo, sabe)se que diversas patologias metabólicas estão relacionadas à ingestão de alimento õpor exemplo, diabetes, obesidadeã. Consequentemente, uma triagem inicial pode ser conduzida para determinar a extensão em que a ingestão de alimento é modulada pela administração de compostos descritos no presente documento, e uma triagem inicial positiva pode ser útil no desenvolvimento subsequente de um composto.

Ensaios in vitro.

Sem o desejo de ater)se a qualquer teoria ou mecanismo de ação, acredita)se que existam correlaç0 es entre os resultados de ensaios in vitro õpor exemplo, recetores0 , e a utilidade de agentes para o tratamento de doenças e distúrbios metabólicos. Consequentemente, ensaios in vitro 0 por exemplo, ensaios baseados em célula0 são úteis;omo uma estratégia de triagem para agentes metabólicos potenciais, tal como descrito no presente documento. Uma variedade de ensaios in vitro é conhecida na técnica, incluindo aqueles descritos conforme segue.

Pm oa t λ 1 4 «a^Sa 1 âni* í na jm j, £ Ca mw V-ii^ Ç5 mm JL ^a· C5 mmm Ç5 mm» JL JL 9 A ligação de leptina pode ser medida pela potência de um composto de teste de deslocar 125I) Leptina recombinante0 murinaS a partir da membrana de supeíóie que expressa Leptina quimérica 0 Hu0 ) recetor de EPO 00M apresentado pela linhagem de células 32D OBECA 0 J Éol Chem 1998; 2730 290 : 18.365 a 18.3730 . As membranas ceàmès purificadas podem ser preparadas por homogeneização de culturas celulares confluentes colhidas de células 32D OBECA. As membranas podem ser incubadas com l25I) Leptina Murina rec e concentraç0 es crescentes de composto d teste por 3 horas à temperatura ambiente em placas de poliestireno de 96 cavidades. Fraç0 es de ligante lgadas e não ligadas podem ser, então, separadas por filtração rápida em placas de 96 cavidades GF/B pré)bloqueadas por pelo menos 60 minutos em 0,5% de PEI cpolietilenoimina0 . As placas de fibra de vidro podem ser, então, secas, cintilante adicionado e CPM determinado por leitura num contador de cintilação de múltiplas cavidades com capacidade para ler iodeto radiomarcado.

Ensaio funcional de leptina.

Os níveis aumentados de STAT5 fosforilado 0 Transduòr de Sinal e Ativador de Transcrição 50 podem ser medidos após o tratamento de células 32D)Keptin que expressam ectopicamente recetor de Hu)Leptin/Mu)EPO quimérico com um composto de teste. As células 32D)Keptin õidênticas às células 32D)OBECA, mas mantidas em cultura com leptinaã podem ser leptina separadas de um dia para o outro com compostos de teste em placas de 96 cavidades por 30 minutos a 37 °C, seguido por extração de células. Os níveis de pSTAT5 nos lisados celulares podem ser determinados com a utilização do kit de ensaio Perkin Elmer AlphaScreen<®>SureFire<®>pSTAT5 num formato de 384 cavidades õProxiplate™ 384 Plusá. A efic0 cia de copostos de teste pode ser determinada em relação ao sinal mS ximo em lisados celulares de células tratadas com leptina humana. VT ΠΛ'ίΤΙ'ΠΑα 1 /"íACftQ Q vrn a ΑΛΉ í" ”i A 25 C!

V ^B · ^B n d AÍICa V ^B

Em um aspeto, são fornecidas composiçS es farmacêutóas que compreendem os compostos descritos no presente documento em combinação com um excipiente farmaceuticamente aceitB vel õpor exemplo, veículoã. 0 termo "veículo farmaceuticamente aceitS vel", conforme usado no preente documento refere)se a excipientes farmacêuticos, por exemplo, substâncias de veículo orgânico ou inorgânico aceitB veis farmacêutica e fisiologicamente adequada para aplicação enteral ou parenteral que não reagem deleteriamente com o agente ativo. Os veículos farmaceuticamente aceitH veis adequados incluem M gua soluçS es salinas õpor exemplo, solução de Ringer e similaresã, H Icoois, óleos, gelatinas e hidratos de carbono, tal como lactose, amilose ou amido, ésteres de S eido graxo, hidroximetilcelulose e polivinil pirrebidina. Tais preparaçB es podem ser esterilizadas e, se desfjado, misturadas com agentes auxiliares, tais como lubrificantes, conservantes, estabilizantes, agentes umectantes, emulsificantes, sais para influenciar a pressão osmótica, tampB es, coloração e/ou substâncias aromIEI ticas e milares, que não reagem deleteriamente com os polipéptidos da invenção. A. Métodos

Os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento podem ser administrados sozinhos ou podem ser coadministrados a um indivíduo, A coadministração significa incluir administração simultânea ou sequencial dos compostos individualmente ou em combinação õmais de um compostoá. Por exemplo, concluiu)se que a obesidade pode ser beneficamente tratada com uma terapia de combinação que inclui uma leptina õpor exemplo, metreleptinaá e certos outros compostos antiobesidade. Consultar, por exemplo, Pedido Publicado n° U.S. 2008/0207512. Consequentemente, um polipéptido quimérico descrito no presente documento poderia ser útil para o tratamento de obesidade.

Nas formulaçS es e métodos descritos no presente documento, o polipéptido quimérico pode ser coadministrado com um ou mais agentes antidiabéticos, tais como agentes anti)hiperglicemia, por exemplo, insulina, amilinas, pranlintida, metformina.

Nas formulaçS es e métodos descritos no presente documento, o polipéptido quimérico pode ser coadministrado com um ou mais agentes de redução de colesterol e/ou triglicerídeo. Os agentes exemplificativos incluem inibidores de HMG CoA redutase õpor exemplo, atorvastatina, fluvastatina, lovastatina, pravastatina, rosuvastatina, sinvastatinaa; sequestrantes de Kí eido biliar opor templo, colesevelam, colestiramina, colestipolã; fibratos õpor exemplo, fenofibrato, clofibrato, genfibrozilã; ezetimibe, S eido nicotínico, probucol, uma combinação de lovastatina/niacina ,· uma combinação de atorvastatina/anlodipina; e uma combinação de s invas t a t ina/e z e t. imibe.

Alternativamente, os polipéptidos quiméricos individuais podem ser coadministrados com outros agentes antiobesidade, tais como exenatida ou liraglutida. A presente revelação fornece a composição para uti 1 i zaçao como um medicamento, isto e, para utilização em terapia, visto que o composto de leptina é um composto terapeuticamente ativo. As composições que compreendem um polipéptido quimérico, 11a forma líquida ou seca, e opcionalmente pelo menos um veículo e/ou excipiente farmaceuticamente aceitável são também especificamente contemplados e são exemplificados no presente documento. A coadministração pode ser atingida administrando)se separadamente o polipéptido quimérico com o segundo agente ou administrando)se uma única formulação farmacêutica que compreende o polipéptido quimérico e o segundo agente. Os regimes de dosagem adequados para os segundos agentes são, de modo geral, conhecidos na técnica.

As preparações podem ser também coadministradas, quando desejado, com outras substâncias ativas 0 por exemplo, para reduzir a degradação metabólicaE conõrme conhecido na técnica ou outros agentes terapeuticamente ativos.

Amilinas. A amilina é uma hormona peptídica sintetizada por células β pancreáticas que é cossecretada com insulina em resposta à ingestão de nutrientes. A sequência de amilina é altamente preservada pelas espécies de mamífero, com similaridades estruturais ao péptido relacionado ao gene de calcitonina H CGRP0 , as calCcbninas, as intermedinas e adrenomedulina, conforme conhecido na técnica. As ações glucoregulatõrias da amilina complementam aquelas de insulina regulando)se a taxa de aparecimento de glicose 11a circulação por meio de supressão de secreção de glucagon estimulada por nutriente e retardando o esvaziamento gástrico. Em pacientes tratados com insulina com diabetes, a pranlintida, um análogo sintético e equipotente de amilina humana, reduz as excursões de glicose pós)prandial suprimindo a secreção de glucagon pós) prandial inadequadamente elevada e retardando o esvaziamento gástrico. Seguem as sequências de amilina de rato, amilina de ser humano e pranlintida: amilina de rato: KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY ÕSEQ ID NO:860 ; amilina de ser humano: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGAILSSTNVGSNTY ÕSEQ ID NO:870 ; Pranlintida: KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY ÕSEQ ID NO:880 .

Davalintida. Davalintida, também conhecida como "AC) 2307", é um agonista de amilina potente útil no tratamento de uma variedade de indicações de doença. Consultar os documentos WO 2006/083254 e WO 2007/114838. A davalintide é um péptido quimérico que tem uma região de laço N)terminal de amilina ou calcitonina e análogos da mesma, uma região alfa)helicoidal de pelo menos uma porção de uma região alfa)helicoidal de calcitonina ou análogos da mesma ou uma região alfa)helicoidal que tem uma porção de uma região alfa)helicoidal de amilina e uma região alfa)helicoidal de calcitonina ou análogo da mesma, e uma região de cauda C) terminal de amilina ou calcitonina. Seguem as sequências de calcitonina de ser humano, calcitonina de salmão e davalintida: calcitonina de ser humano: CGNLSTCMLGTYTQDFNKFHTFPQTAIGVGAP ÕSEQ ID NO:890 ; calcitonina de salmão: CSNLSTCVLGKLSQELHKLQTYPRTNTGSGTP ÕSEQ ID NO:900 ;

davalintida: KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY ÕSEQ ID NO:910 .

Sem o desejo de vincular)se a qualquer teoria, acredita)se que amilinas e davalintida, e fragmentos e análogos das mesmas, podem exigir amidação C)terminal para produzir uma resposta biológica completa. Acredita)se que os compostos de amilina, tais como aqueles descritos no presente documento, que incluem amilinas e/ou davalintida, e fragmento e análogos das mesmas, podem ser amidados no C) terminal. "Compostos agonistas de amilina" incluem péptidos de amilina nativos, péptidos análogos de amilina e outros compostos õpor exemplo, moléculas pequenas® que têm atividade de agonista de amilina. Os "compostos agonistas de amilina" podem ser derivados de fontes naturais, podem ser sintéticos ou podem ser derivados de técnicas de DNA recombinante. Os compostos agonistas de amilina têm atividade de ligação de recetor de agonista de amilina e podem compreender aminoãcidos õpor exemplo, naturais, não naturais ou uma combinação dos mesmos® , miméticos á péptido, porç® es químicas e similares. 0 versado natécnica reconhecerá compostos agonistas de amilina com a utilização de ensaios de ligação de recetor de amilina ou medindo)se a atividade de agonista de amilina em ensaios de músculo sóleo. Em uma modalidade, os compostos agonistas de amilina terão um IC50 de cerca de 200 nM ou menos, cerca de 100 nM ou menos, ou cerca de 50 nM ou menos, num ensaio de ligação de recetor de amilina, tal como aquele descrito no presente documento, na Patente n° 5,686,411, e na Publicação n° US 2008/0176804. Em uma modalidade, os compostos agonistas de amilina terão um EC50 de cerca de 20 nM ou menos, cerca de 15 nM ou menos, cerca de 10 nM ou menos, ou cerca de 5 nM ou menos num ensaio de músculo sóleo, tal como aquele descrito no presente documento e na Patente n° 5,686,411. Em uma modalidade, o composto agonista de amilina tem pelo menos 90% ou 100% de identidade de sequência com 25'28'29Prõ) amilina humana. Em uma modalidade, o composto agonista de amilina é uma quimera peptídica de amilina õpor exemplo, amilina de ser, amilina de rato e similares® e calõtonina õpor exemplo, calcitonina de ser humano, calcitonina de salmão e similares® . Os compostos agonistas de amilna adequados e exemplificativos são também descritos na Publicação n° 2008/0274952.

Por "análogo de amilina", conforme usado no presente documento, quer)se dizer um agonista de amilina que tem pelo menos 50% de identidade de sequência, de preferência, pelo menos 70% de identidade de sequência, com uma forma de ocorrência natural de amilina, de rato ou ser humano ou de qualquer outra espécie, e é derivado da mesma por modificações, incluindo inserções, substituições, extensões e/ou deleções da sequência de aminoãcidos de referência. A sequência de análogo de amilina pode ter pelo menos 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 90% ou 95% de identidade de sequência de aminoãcidos com a amilina de referência. Em um aspeto, o análogo tem 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou mesmo 16 substituições, inserções, extensões e/ou deleções de aminoácidos em relação ao composto de referência. Em uma modalidade, o análogo de amilina pode compreender substituições de aminoácido conservadoras e não conservadoras 0 incluindo aminoáidos não naturais e formas L e D® . Esses análogos são, á preferência, péptidos, derivados de péptido ou miméticos de péptido. Os análogos de amilina típicos serão péptidos, especialmente de 32 a 37 aminoácidos, por exemplo, 27 a 45, especialmente 28 a 38 e ainda 31 a 36.

Os análogos de amilina com identidade com amilina de rato ou ser humano incluem25,28'29Pro) h) amilina S pranlintidaB ; dekQys) h) amilina; 2bPro, 26Val, 28, 29Pro)h) amilina; ldArg, 2b' 28Pro) h) amilina; des)1Lys, i8Arg, 2b' 28Pro)h amilina; iSArg, 25, 28, 29Pro) h) amilina; des)]'Lys, i8Arg, 25, 28, 29Pro) h) amilina; des)1, Lys25, 28, 29Pro) h) amilina; 25Pro, 26Val, 28, 29Pro) h) amilina; 28Pro) h) amilina, 2, 7)Cyclo) [2Asp, 7Lys] ) h) amilina;2> 37h) amilina; ^Ala) h) amilina; íAla) h) amilina; 2‘ 7Ala) h) amilina; 1Ser) h) amilina; 29Pro) h) amilina; 25, 28Pro) h) amilina ; des)1Lys, 25, 28Pro) h) amilina; 23Leu, 25Pro, 2bVal, 28, 29Pro)h) amilina; 23Leu25Pro26Val28Pro) h) amilina; des)iLys, 23Leu, 2bPro, 2°Val, “8Pro) h) amilina; 18Arg, 23Leu, 25Pro, 26Val, 28Pro)h) amilina; 18Arg, 23Leu, 2b' 28, 29Pro) h) amilina; 18Arg23Leu, 25' 28Pro) h) amilina; b7Ile, 23Leu, 2b' 28, 29Pro) h) amilina; 1/Ile, 2b' 28, 29pro) h) amilina; des)iLys, 17Ile, 23Leu, 25' 28, 29Pro)h) amilina ;L'Ile, i8Arg, ^Leu) h) amilina; i7Ile, 18Arg, 23Leu, 2SVal, 29Pro) h) amilina; ~'Ile, ~8Arg, 23Leu; 25Pro; 26Val; 28, 29Pro) h) amilina; i3Thr, 21His, 23Leu, 26Ala, 28Leu, 29Pro, 31Asp) h) amilina; 13Thr, 21His, 23Leu, 26Ala, 29Pro, 31Asp) h) amilina; des)LLys, 13Thr, 2lHis, 23Leu, 26Ala, 28Pro, 3iAsp)h) amilina; 13Thr, 18Arg, 21His, 23Leu, 26Ala, 29Pro, 31Asp)h) amilina; 13Thr, 18Arg, 21His, 23Leu, ^8, 29Pro, 31Asp) h) amilina; e 13Thr, 18Arg, 21His, 23Leu, 25Pro, ^Ala, 28' 29Pro, 31Asp)h) amilina.

Os análogos de amilina incluem sequências de aminoácidos dos resíduos 1 a 37 de Fórmula 0 10 a gair, em que até 25% dos aminoácidos apresentados na Fórmula 010 podem ser deletados ou substituídos por um aminoácido diferente:

Na Fórmula ÕI0 , X' é hidrogénio, um grupo capping ¢1 terminal ou um ligante a uma porção química de aumento de duração. Xaa3'é Lys ou uma ligação, Xaa2ié Lys, Cys ou Asn, Xaa“4 é Lys, Cys ou Gly, Xaa25é Lys, Cys ou Pro, Xaa2bé Lys, Cys ou Ile, Xaa27 é Lys, Cys ou Leu, Xaa28é Lys, Cys ou Pro, Xaa29é Lys, Cys ou Pro, e Xaa31é Lys, Cys ou Asn. Adicionalmente em relação à Fórmula ÕI0 , a variável X representa uma funcionalidade C)terminal õpor exemplo, um cap C)terminal® . X é amino substituído ou não subsituído, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, cicloalquilamino substituído ou não substituído, arilamino substituído ou não substituído, aralquilamino substituído ou não substituído, alquilõxi substituído ou não substituído, arilóxi substituído ou não substituído, aralquilóxi substituído ou. nao substituído ou liidroxilo. Se o G) terminal do componente de polipéptido com a sequência de resíduos 1 a 37 de Fórmula õlá tiver cap com uma funcionalidade X, então, X é, de preferência, amina, formando, assim, uma amida C)terminal. Por exemplo, até 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45% ou mesmo 50% dos aminoácidos de resíduos 1 a 37 de Fórmula õlá são deletados ou substituídos num componente de polipéptido de acordo com a Fórmula õlã. 0 componente análogo de amilina pode ter 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 ou mesmo 16 substituiç® es de aminoácido em relação à sequênóa de aminoácidos apresentada na Fórmula õlá. 0 análogo de amilina pode ter uma sequência que tem uma identidade de sequência definida em relação aos resíduos 1 a 37 da sequência de aminoácidos de acordo com a Fórmula õlá. Por exemplo, a identidade de sequência entre um análogo de amilina descrito no presente documento e os resíduos 1 a 37 de Fórmula õlá é 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ou ainda mais alta. Por exemplo, até 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% ou ainda menos dos aminoácidos apresentados nos resíduos 1 a 37 de Fórmula õlá podem ser deletados ou substituídos por um aminoácido diferente. Por exemplo, a identidade de sequência está dentro da faixa de 75% a 100%, dentro da faixa de 75% a 90%, dentro da faixa de 80% a 90% ou pelo menos 75%. Por exemplo, o análogo de amilina tem a sequência de resíduos 1 a 37 de Fórmula õlá.

Os análogos de amilina, incluindo aqueles de Fórmula õlá, podem formar a base de um componente de polipéptido ao qual uma ou mais porçS es químicas de aumento de duação são ligadas, opcionalmente através de um ligante, para formar um conjugado de amilina e polipéptido. Assim, o componente de polipéptido serve como um modelo õ'!modelo de polipéptido!!ã ao qual o mesmo está ligado, de preferência, por ligação covalente, uma ou mais porç0 es químicas de aumento de duração. A ligação da porção química de aumento de duração ao componente de polipéptido pode ser através de um ligante conforme descrito no presente documento. Alternativamente, a ligação da porção química de aumento de duração ao componente de polipéptido pode ser por meio de uma ligação covalente direta. A porção química de aumento de duração pode ser um polímero solúvel em água conforme descrito no presente documento. Uma pluralidade de porções químicas de aumento de duração pode ser ligada ao componente de polipéptido, em cujo caso cada ligante a cada porção química de aumento de duração é independentemente selecionado dentre os ligantes descritos no presente documento.

Os análogos de amilina úteis como componentes de polipéptido descritos no presente documento incluem, porém, sem limitação, os compostos apresentados nos resíduos 1 a 37 de Fórmula 0 fornecidos na Tabela 1 abaixo. Hão ser que indicado ao contrário, todos os péptidos descritos no presente documento, incluindo péptidos que têm uma sequência expressamente fornecida, são contemplados em ambas as formas de carboxilato livre ou amidadas.

Tabela 1. Polipéptidos componentes úteis nos compostos descritos no presente documento.

Os termos "ligante" e similares, no contexto de ligação de porções químicas de aumento de duração a um componente de polipéptido num conjugado de amilina e polipéptido descrito no presente documento, significam uma espécie divalente 0 )L)I3 ligada covalentemente, poeua vez, a um componente de polipéptido que tem uma valência disponível para ligação e a uma porção química de aumento de duração que tem uma valência disponível para ligação. 0 sítio de ligação disponível no componente de polipéptido é convenientemente um resíduo de cadeia lateral õpor exemplo, lisina, cisteína, ácido aspãrtico e homólogos dos mesmos® . 0 sítio de ligação disponível no componente de polipéptido pode ser a cadeia lateral de um resíduo de lisina ou cisteína. Por exemplo, o sítio de ligação disponível no componente de polipéptido pode ser selecionado dentre a amina N)terminal, o carboxilo C)terminal e um átomo de cadeia principal do componente de polipéptido. Conforme usado no presente documento, o termo "resíduo de aminoácido de ligação" significa um aminoácido dentro dos resíduos 1 a 37 de Fórmula 010 ao qual uma porção química de aumnto de duração é ligada, opcionalmente através de um ligante.

Ademais, são descritos no presente documento compostos que têm um ligante que liga covalentemente um componente de polipéptido com uma porção química de aumento de duração. 0 ligante é opcional; isto é, qualquer ligante pode simplesmente ser uma ligação. 0 ligante pode estar ligado numa cadeia lateral do componente de polipéptido ou a um átomo de cadeia principal do componente de polipéptido.

Em outro aspeto, é fornecido um conjugado de amilina e polipéptido, que é derivado de pranlintida com SEQ ID NO:88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoácido na posição 1 está ausente õisto é, desjLys1® e um resíduo de aminoácido na posição 2 a 37 foi substituído por um resíduo de lisina ou um resíduo de cisteína e em que o dito resíduo de lisina ou resíduo de cisteína está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante, em que a numeração de aminoácidos se conforma ao número de aminoácido na SEQ ID NO:88.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoácido na posição 1 está ausente õisto é, desjLys1® e em que um resíduo de aminoácido em qualquer uma das posiçS es 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 31, 32, 33, 34, 35, 36 ou 37 é substituído com um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo do mesmo, em que o resíduo de aminoãcido na posição 1 está ausente õisto é, des)Lys10 e em que um resíduo de aminoãcido em qualquer uma das posiçES es 21, 24 a 29 ou 31 é substituído por um reãduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID MO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoãcido na posição 1 está ausente õisto é, des)Lys10 e em que um resíduo de aminoãcido na posição 21 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoãcido na posição 1 está ausente õisto é, des)Lys1B e em que um resíduo de aminoácido na posição 24 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoãcido na posição 1 está ausente õisto é, des)LysLi3 e em que um resíduo de aminoãcido na posição 25 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoácido na posição 1 está ausente õisto é, des) Lys1!*! e em que um resíduo de aminoãcido na posição 26 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID MO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoácido na posição 1 está ausente õisto é, des)Lys10 e em que um resíduo de aminoácido na posição 27 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoácido na posição 1 está ausente õisto é, des)Lys1B e em que um resíduo de aminoácido na posição 28 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoãcido na posição 1 está ausente õisto é, des)Lys1S e em que um resíduo de aminoácido na posição 29 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante.

Em outro aspeto, a revelação refere)se a um conjugado de amilina e polipéptido, que é um derivado de pranlintida com SEQ ID NO: 88 ou um análogo da mesma, em que o resíduo de aminoácido na posição 1 está ausente õisto é, desjLys1® e em que um resíduo de aminoácido na posição 31 é substituído por um resíduo de lisina e em que o dito resíduo de lisina está ligado a um polímero de polietileno glicol, opcionalmente por meio de um ligante. A porção química de aumento de duração pode ser um polímero solúvel em água. Um "polímero solúvel em água" significa um polímero que é suficientemente solúvel em água sob condições fisiológicas de, por exemplo, temperatura, concentração iónica e similares, conforme conhecido na técnica, para ser útil para os métodos descritos no presente documento. Um polímero solúvel em água pode aumentar a solubilidade de um péptido ou outra biomolécula a qual o polímero solúvel em água está ligado. De facto, tal ligação foi proposta como um meio para aprimorar a vida em circulação, a solubilidade em água e/ou antigenicidade de proteínas administradas, in vivo. Consultar, por exemplo, a Patente n° U.S. 4,179,337; o Pedido Publicado n° U.S. 2008/0032408. Muitos polímeros solúveis em água diferentes e químicas de ligação foram usados para atingir esse objetivo, tais como polietileno glicol, copolímeros de etileno glicol/propileno glicol, carboximetilcelulose, dextrano, álcool polivinílico, polivinil pirrolidona, poli) 1,3)dioxolano, poli)1,3,6)trioxano, copolímero de etileno/anidrido maleico, poliaminoácidos 0 homopolmeros ou copolímeros aleatórios® e similares. A porção química de aumento de duração ligada pode incluir um polietileno glicol. Polietileno glicol ®"PEG"0 foi usado em esforços para obter polipéptidos terapeuticamente usáveis. Consultar, por exemplo, Zalipsky, S., 1995, Bioconjugate Chemistry, 6:150 a 165; Mehvar, R,, 2000, J. Pharm. Pharmaceut. Sei., 3:125 a 136. Conforme percebido por um versado na técnica, a cadeia principal de PEG [ÕCH2CH2)O)án, n: número de monômeros de repetição] é flexível e anfifílica. Sem o desejo de vincular)se a qualquer teoria ou mecanismo de ação, acredita)se que a molécula ou porção química de PEG do tipo de cadeia longa seja altamente hidratada e esteja em movimento rB pdo quando num meio aquoso. Acredita)se que o movimento rB pido faça com que o PEG varra um grande volume e impeça a aproximação e interferência de outras moléculas. Como resultado, quando ligado a outra entidade química õtal como um péptidoá, as cadeias de polímero PEG podem proteger tal entidade química contra resposta imunológica e outros mecanismos de eliminação. Como resultado, a peguilação pode levar à eficl3 cia e segurança do flEl rmaco por otimição da farmacocinética, aumento da biodisponibilidade e diminuição da imunogenicidade e frequência de dosagem. "Peguilação” refere)se no sentido costumeiro à conjugação de uma porção química PEG com outro composto. Por exemplo, a ligação de PEG mostrou proteger as proteínas contra proteólise. Consultar, por exemplo, Blomhoff, Η. K. et al. , 1983, Biochim Biophys Acta, 757:202 a 208. A não ser que indicado expressamente ao contrS rio, os termos "PEG", "políffiro de polietileno glicol" e similares referem)se a polímero de polietileno glicol e derivados do mesmo, incluindo metóxi) PEG õmPEGã.

Uma variedade de meios foi usada para ligar porçH es químicas poliméricas, tal como PEG e polímeros relacionados, a grupos reativos encontrados na proteína. Consultar, por exemplo, a Patente n° U.S. 4,179,337; a Patente n° U.S. 4,002,531; Abuchowski et al. , 1981, em "Enzymes as Drugs," J. S. Holcerberg e J. Roberts, õEds.ã, pS ginas 367 a 383; Zalipsky, S., 1995, Bioconjugate Chemistry, 6:150 a 165. A utilização de PEG e outros polímeros para modificar proteínas foi discutido.

Consultar, por exemplo, Cheng, T.)L. et al. , 199Sm,

Bioconjugate Chem., 10:520 a 528; Belcheva, N. et al. , 1999, Bioconjugate Chem., 10:932 a 937; Bettinger, T. et al. , 1998, Bioconjugate Chem., 9:842 a 846; Huang, S.)Y. et al., 1998, Bioconjugate Chem., 9:612 a 617; Xu, B. et al. 1998, Langmuir, 13:2.447 a 2.456; Schwarz, J. B. et al., 1999, J. Amer. Chem. Soc., 121:2.662 a 2.673; Reuter, J. D. et al. , 1999, Bioconjugate Chem., 10:271 a 278; Chan, T,)H. et al. , 1997, J. Org. Chem., 62:3.500 a 3.504. Os sítios de ligação típicos em proteínas incluem grupos amino primários, tais como aqueles em resíduos de lisina ou no N) terminal, grupos tiol, tais como aqueles em cadeias laterais de cisteína, e grupos carboxilo, tais como aqueles em resíduos de glutamato e aspartato ou no C)terminal. Os sítios comuns de ligação são os resíduos de glicoproteínas, cisteínas ou ao N)terminal e lisinas do polipéptido alvo. Os termos "peguilados" e similares referem)se à ligação covalente de polietileno glicol a um polipéptido ou outra biomolécula, opcionalmente através de um ligante conforme descrito no presente documento e/ou conforme mostrado na técnica.

Uma porção química de PEG num conjugado de amilina e polipéptido descrito no presente documento pode ter um peso molecular nominal dentro de uma faixa especificada. Como costumeiro na técnica, o tamanho de uma porção química de PEG é indicado por referência ao peso molecular nominal, tipicamente fornecido em quilodaltons õkDS . O peso molecular é calculado numa variedade de formas na técnica, incluindo número, peso, viscosidade e peso molecular médio "Z". Entende)se que os polímeros, tal como PEG e similares, existem como uma distribuição de pesos moleculares cerca de um valor médio nominal.

Como exemplo da terminologia para peso molecular para PEGs, o termo "mPEG40KD" refere)se a um polímero de metóxi polietileno glicol que tem um peso molecular nominal de 40 quilodaltons. A referência a PEGs de outros pesos moleculares segue essa convenção. Por exemplo, a porção química de PEG tem um peso molecular nominal na faixa de 10 a 100 KD, 20 a 80 KD, 20 a 60 KD ou 20 a 40 KD; ou a porção química de PEG tem um peso molecular nominal de 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95 ou mesmo 100 KD. De preferência, a porção química de PEG tem um peso molecular de 20, 25, 30, 40, 60 ou 80 KD.

As moléculas de PEG úteis para derivação de polipéptidos são tipicamente classificadas nas classes linear, ramificadas e Warwick õisto é, poliPEG®0 dePEGs, conforme conhecido na técnica. A não ser que expressamente indicado ao contrE rio, as porções químicas de PEG dscritas no presente documento são PEGs lineares. Além disso, os termos "ramificada em dois braços", "com formato de Y" e similares referem)se a porções químicas de PEG ramificadas, conforme conhecido na técnica. 0 termo "Warwick" no contexto de PEGs, também conhecido como PEGs "em pente" ou "do tipo pente", refere) se a uma variedade de PEGs com múltiplos braços ligados a uma cadeia principal, tipicamente poliõmetacrilatoã, conforme conhecido na técnica. Em relação à nomenclatura que inclui convenções empregadas na tabela fornecida no presente documento, ausente indicação ao contrH rio, uma porção química de PEG está ligada à cadeia principal do péptido. Por exemplo, Comp. 19 é o resultado da conjugação de mPEG4 0KD ao nitrogénio N)terminal do Comp. 1. Similarmente, o Comp. 20 é o resultado da conjugação de mPEG40KD ao nitrogénio N) terminal do Comp. 2. Abreviações de uma letra padrão para aminoãcidos podem ser usadas, assim como abreviações de três letras padrão. Por exemplo, o Comp. 24 é um análogo do Comp. 10 em que o resíduo na posição 26 do Comp. 9 é usado no lugar da lisina, e a funcionalidade de amina pendente da lisina 26 õisto é, Κ2Έ é conjugada com uma porção química de PEG40KD. Compostos exemplificativos são fornecidos na

Tabela 2 abaixo.

Tabela 2. Compostos peguilados

B. Formulações

Os polipéptidos farmacêuticos da invenção podem ser formulados com veículos ou diluentes farmaceuticamente aceitáveis assim como quaisquer outros adjuvantes e excipientes conhecidos em conformidade com técnicas convencionais, tais como aquelas reveladas em Remington's

Pharmaceutical Sciences por E„ W. Martin. Consultar também Wang et al. Õ1988ã J. of Parenteral Sei. and Tech.,

Technical Report n° 10, Supp. 42:2 S.

Em geral, os polipéptidos quiméricos podem ser formulados numa composição farmacêutica segura e estável para administração a um paciente. As formulações farmacêuticas contempladas para utilização médica de acordo com a invenção podem compreender aproximadamente 0,01 a 1,0% 0 p/vS , em certos casos 0,05 a 1,0%, do polipépdo quimérico, aproximadamente 0,02 a 0,5% E p/vH de urtampão acetato, fosfato, citrato ou glutamato que permite um pH da composição final de cerca de 3.0 a cerca de 7.0; aproximadamente 1,0 a 10% S p/vB de um tonificante ed hidrato de carbono ou álcool poli)hídrico e, opcionalmente, aproximadamente 0,005 a 1,0% 0 p/vS de um conservaet selecionado a partir do grupo que consiste em m)cresol, álcool benzilico, metil, etil, propil e butil parabenos e fenol. Tal conservante é, de modo geral, incluído se o péptido formulado precisar ser incluído num produto de utilização múltipla.

Em modalidades particulares, uma formulação farmacêutica dos presentes polipéptidos quiméricos pode conter uma faixa de concentrações do composto 0 ou compostosH , por exemplo, entre cerca de 0,01% a ceca de 98% em p/p ou entre cerca de 1 a cerca de 98% em p/p ou, de preferência, entre 80% e 90% em p/p ou, de preferência, entre cerca de 0,01 % a cerca de 50% em p/p ou, mais preferencialmente, entre cerca de 10% a cerca de 25% em p/p nessas modalidades. Uma quantidade suficiente de água para injeção pode ser utilizada para obter a concentração desejada de solução.

Agentes de tonificação adicionais, tal como cloreto de sódio, assim como outros excipientes, podem estar também presentes, se desejado. Em alguns casos, tais excipientes são úteis na manutenção da tonicidade geral do composto. Um excipiente pode estar incluído nas formulações descritas no presente documento em várias concentrações. Por exemplo, um excipiente pode estar incluído na faixa de concentração de cerca de 0,02% a cerca de 20% em p/p, de preferência, entre cerca de 0,02% e 0,5% em p/p, cerca de 0,02% a cerca de 10% em p/v ou cerca de 1% a cerca de 20% e p/p. Adicionalmente, similarmente às próprias presentes formulações, um excipiente pode estar incluído na forma de sólido 0 incluindo em pó!EI , líquido, semissólido ou gel.

As formulações farmacêuticas podem ser compostas em varias formas, por exemplo, solida, Irquida, semissolida ou líquida. 0 termo "sólido", conforme usado no presente documento, destina)se a abranger todas as utilizações normais desse termo, incluindo, por exemplo, pós e formulações liofilizadas. As formulações descritas no presente documento podem ser liofilizadas.

Os termos tampão, solução tampão e solução tamponada, quando usados em referência à concentração de iões de hidrogénio ou pH, referem)se à capacidade de um sistema, particularmente uma solução aquosa, de resistir a uma alteração de pH na adição de ácido ou álcali, ou na diluição com um solvente. A característica de soluções tamponadas, que passam por pequenas alterações de pH em adição de ácido ou base, é a presença de um ácido fraco e um sal do ácido fraco ou uma base fraca e um sal da base fraca. Um exemplo do sistema anterior é ácido acético e acetato de sódio. A alteração de pH é ligeira contanto que a quantidade de ião de hidrónio ou hidroxilo adicionada não exceda a capacidade do sistema de tampão de neutraliza a mesma.

Conforme descrito no presente documento, uma variedade de veículos líquidos é adequada para utilização nas formulações de polipéptidos quiméricos, por exemplo, água ou uma mistura ou uma suspensão de solventes aquosos/orgânicos. A estabilidade de uma formulação de polipéptido quimérico para utilização conforme descrito no presente documento é aumentada mantendo)se o pH da formulação numa faixa determinada por métodos conhecidos na técnica. Em certas modalidades, o pH da formulação é mantido na faixa de cerca de 3,5 a 5,0, ou cerca de 3,5 a 6,5, em algumas modalidades, de cerca de 3,7 a 4,3 ou cerca de 3,8 a 4,2. Em algumas modalidades, o pH pode ser cerca de 4,0, cerca de 5,0, cerca de 6,0, cerca de 7,0, cerca de 8,0, cerca de 9,0 ou ainda mais alto. Em algumas modalidades, o pH pode estar na faixa fisiológica, pH 6 a 8, de preferencia, pH 7 a 7,6.

Em certas modalidades, o tampão com o polipéptido quimérico é um tampão acetato õde preferência, a uma concentração final de formulação de cerca de 1 a 5 a cerca de 6 0 mMá, tampão fosfato õde preferência, a uma concentração final de formulação de cerca de 1 a 5 a cerca de 3 0 mMá ou tampão glutamato õde preferência, a uma concentração final de formulação de cerca de 1 a 5 a cerca de 60 mMá. Em algumas modalidades, o tampão é acetato õde preferência, a uma concentração final de formulação de cerca de 5 a cerca de 30 mMá.

Um estabilizante pode estar incluído nas formulaçS e, mas não é necessariamente exigido. Se incluído, no entanto, um estabilizante útil na prS tica da presente invenço é um hidrato de carbono ou um 0 lcool poli)hídrico. Um estabilizante adequado útil na pr0 tica da presenteinvenção é aproximadamente 1,0 a 10% õp/vá de um hidrato de carbono ou 0 lcool poli)hídrico. Os 0 Icoois poli)hídricos eos hidratos de carbono compartilham a mesma característica em suas cadeias principais, isto é, )CH0H)CH0H), que é responslEI vel por estabilizar as proteínas. Os 0 Icooipoli) hídricos incluem tais compostos como sorbitol, manitol, glicerol e polietileno glicõis õPEGsã. Esses compostos são moléculas de cadeia reta. Os hidratos de carbono, tal como manose, ribose, sacarose, frutose, trealose, maltose, inositol e lactose, por outro lado, são moléculas cíclicas que podem conter um grupo ceto ou aldeído. Essas duas classes de compostos demostraram ser eficazes na estabilização de proteína contra a desnaturação causada por temperatura elevada e por processos de congelamento e descongelamento ou secagem por congelamento. Os hidratos de carbono adequados incluem: galactose, arabinose, lactose ou qualquer hidrato de carbono que não tem um efeito adverso num paciente diabético, isto é, o hidrato de carbono não é metabolizado para formar concentraçES es inaceitavelente grandes de glicose no sangue. Tais hidratos de carbono são bem conhecidos na técnica conforme adequado para diabéticos. A sacarose e a frutose são adequadas para utilização com o composto em aplicações não diabéticas 0 por exemplo, tratar obesidadeã.

Em certas modalidades, se um estabilizante estiver incluído, o composto é estabilizado com um 0 lcool pli) hídrico tal como sorbitol, manitol, inositol, glicerol, xilitol e copolímero de polipropileno/etileno glicol, assim como vEI rios polietileno glicóis 0 PEGá de peso moleõar 200, 400, 1.450, 3.350, 4.000, 6.000, 8.000 e mesmo mais altoã. Manitol é o 13 lcool poli)hídrico preferencial em algumas modalidades. Outra característica útil das formulações liofilizadas da presente invenção é a manutenção da tonicidade das formulações liofilizadas descritas no presente documento com o mesmo componente de formulação que serve para manter sua estabilidade. Em algumas modalidades, o manitol é o 0 lcool poli)hídico preferencial utilizado para esse propósito. A Farmacopeia dos EUA § USPá determina que agentes antimicrobianos em concentrações bacteriostES ticas α fungist0 ticas precisam ser adicionados às preparaçês contidas em recipientes de múltiplas doses. Os mesmos precisam estar presentes em concentração adequada no momento da utilização para impedir a multiplicação de micro)organismos introduzidos inadvertidamente na preparação durante a remoção de uma porção dos conteúdos com uma agulha ou seringa hipodérmica, ou com a utilização de outros meios invasivos para entrega, tal como injetores de caneta. Os agentes antimicrobianos devem ser avaliados para garantir a compatibilidade com todos os outros componentes da fórmula, e sua atividade deve ser avaliada na fórmula total para garantir que um agente particular que é eficaz em uma formulação não seja ineficaz em outra. Não é incomum concluir que um agente antimicrobiano particular será eficaz em uma formulação, mas não eficaz em outra formulação.

Um conservante é, no sentido farmacêutico comum, uma substância que impede ou inibe o crescimento microbiano e pode ser adicionada às formulações farmacêuticas para esse propósito para evitar deterioração consequente da formulação por micro)organismos. Embora a quantidade do conservante não seja grande, a mesma pode, todavia, afetar a estabilidade geral do péptido.

Embora o conservante para utilização nas composições farmacêuticas possa estar na faixa de 0,005 a 1,0% õp/v0 , em algumas modalidades, a faixa para cada conservante, sozinho ou em combinação com outros, é: álcool benzilico 0 0,1 a 1,0%¾ , ou m) cresol 0 0,1 a 0,6%¾ , ou feno! 10 aO 0,8%¾ ou combinação de metil I 0,05 a 0,25%¾ e etddu propil ou butil B 0,005% a 0,03%IE! parabenos. Os pabanos são éster de alquila inferior de ácido para) hidroxibenzoico. Uma descrição detalhada de cada conservante é aprese4ntada em Remington's Pharmaceutical Sciences^ ld.0

Os polipéptidos quiméricos podem não ter uma tendência para absorção no vidro e um recipiente de vidro quando numa forma líquida, portanto, um tensoativo pode não ser exibido para estabilizar adicionalmente a formulação farmacêutica.

Entretanto, em relação aos compostos que têm uma tendência quando na forma líquida, um tensoativo deve ser usado em sua formulação. Essas formulações podem ser, então, liofilizadas. Os tensoativos frequentemente causam desnaturação de proteína, tanto de rutura hidrofóbica como por separação de ponte. Concentrações relativamente baixas de tensoativo podem exercer uma atividade de desnaturação potente, devido às interações fortes entre porções químicas de sobrenadante e os sítios reativos nas proteínas. Entretanto, a utilização criteriosa dessa interação pode estabilizar as proteínas contra desnaturaçao interfacial ou superficial. Os tensoativos que poderiam, ainda, estabilizar o polipéptido quimérico podem estar opcionalmente presentes na faixa de cerca de 0,001 a 0,3% 0 p/vá da formulação total e incluem polissorbato 80 0 isto é, mono)oleato de sorbitano e polioxietilenoKI 2Qãã, CHAPS®

Kl isto é, 3)[0 3)colamidopropilãdimetilamônio]1) propanossulfonatoã, Brij® Kl por exemplo, Brij® 35, qe é Kl lauril éter de polioxietileno Kl 23ãã, poloxâmero OKDutro tensoativo não iõnico.

Pode ser também desejKl vel adicionar cloreto de sódcb ou outro sal para ajustar a tonicidade da formulação farmacêutica, dependendo do tonificante selecionado. Entretanto, isso é opcional e depende da formulação particular selecionada. As formulações parenterais podem ser isotónicas ou substancialmente isotõnicas.

Um veículo preferencial para produtos parenterais é Kl gua. Água de qualidade adequada para administração parenteral pode ser preparada por destilação ou por osmose reversa. Água para injeção é o veículo aquoso preferencial para utilização nas formulações farmacêuticas. É possível que outros ingredientes possam estar presentes nas formulações farmacêuticas. Tais ingredientes adicionais podem incluir, por exemplo, agentes umectantes, emulsificantes, óleos, antioxidantes, agentes avolumadores, modificadores de tonicidade, agentes quelantes, iões metálicos, veículos oleaginosos, proteínas EI por exaplo, albumina sérica humana, gelatina ou proteínas® e um ião misto ® por exemplo, um aminoãcido, tal como betaina taurina, arginina, glicina, lisina e histidina® , Adicionalmente, soluções de polímero ou misturas com polímeros fornecem a oportunidade de liberação controlada do péptido. Tais ingredientes adicionais, obviamente, não devem afetar adversamente a estabilidade geral da formulação farmacêutica da presente invenção.

Os recipientes são também uma parte integrante da formulação de uma injeção e podem ser considerados um componente, jã que não há recipiente que seja totalmente inerte, ou que não afete de alguma forma o líquido que o mesmo contém, particularmente se o líquido for aquoso. Portanto, a seleção de um recipiente para uma injeção particular precisa ser baseada numa consideração da composição do recipiente, assim como da solução, e o tratamento ao qual será submetido. A adsorção do péptido à superfície de vidro do frasco pode ser também minimizada, se necessário, com a utilização de vidro de borossilicato, por exemplo, vidro de borossilicato Wheaton tipo I n° 33 ® Wheaton Tipo 1)33® ou seus equivalentes ® WheatoriLaGs Co.® . Outros fornecedores de frascos e cartuchos de vidro de borossilicato similares aceitáveis para fabricação incluem Kimbel Glass Co. , West Co. , Bunder Glas GMBH and Form a Vitrum. As propriedades químicas e biológicas dos compostos podem ser estabilizadas por formulação e liofilização num frasco de soro de borossilicato Wheaton Tipo 1)33 a uma concentração final de 0,1 mg/ml e 10 mg/rnl do composto na presença de 5% de manitol e 0,02% de Tween 80 .

Para formulações a serem entregues por injeção, a fim de permitir a introdução de uma agulha de uma seringa hipodérmica num frasco e múltiplas doses e para liberar o quanto antes a agulha é removida, a extremidade aberta de cada fasco é, de preferência, vedada com um fecho tamponador de borracha mantido em posição por uma banda de alumínio.

Os tamponadores para frascos de vidro, tal como, West 4416/50, 4416/50 õcom face de TeflonS e 4406/40, Abott 5139 ou qualquer tamponador equivalente podem ser usados como o fecho para produto farmacêutico para injeção. Para formulações que compreendem agentes antiobesidade peptídicos, esses tamponadores são compatíveis com o péptido assim como os outros componentes da formulação. Alternativamente, o péptido pode ser liofilizado nos frascos, seringas ou cartuchos para reconstituição subsequente. As formulações líquidas da presente invenção podem ser preenchidas num ou dois cartuchos com câmara ou uma ou duas seringas com câmara.

Cada um dos componentes da formulação farmacêutica descrita acima é conhecido na técnica e é descrito em PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS: PARENTERAL MEDICATIONS, Volume 1, 2a edição, Avis et al. Ed., Mercel Dekker, New York, N.Y. 1992. 0 processo de fabricação para as formulações líquidas acima, de modo geral, envolve etapas de formação de composto, filtração estéril e preenchimento. 0 procedimento de formação de composto envolve dissolução de ingredientes numa ordem específica 0 conservante seguido por estabilizante/agentes de tonicidade, tampões e péptidoã ou dissolução ao mesmo tempo.

As formulações alternativas, por exemplo, não parenterais, podem não exigir esterilização. Entretanto, se a esterilização for desejada ou necessKl ria, qualque processo de esterilização adequado pode ser utilizado no desenvolvimento da formulação farmacêutica de péptido da presente invenção. Os processos de esterilização típicos incluem filtração, vapor d!0 gua 0 calor húmidoá, cai: seco, gases õpor exemplo, óxido de etileno, formaldeído, dióxido de cloro, óxido de propileno, beta)propiolactona, ozónio, cloropicrina, metil brometo de ácido peracético e similaresS , exposição a uma fonte de radiação e manseio assético, A filtração é o método de esterilização preferencial para formulaçS es líquidas da presente invenção. A filtração estéril envolve a filtração através de 0,45 um e 0,22 um õl ou 20 que podem ser conectdos em série. Após a filtração, a solução é preenchida em frascos ou recipientes adequados.

Em certas modalidades, os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento são administrados por via periférica aos indivíduos. Em algumas modalidades, as formulaçS es farmacêuticas líquidas da presente inveção são destinadas à administração parenteral. As vias de administração adequadas incluem intramuscular, intravenosa, subcutânea, intradérmica, intra)articular, intratecal e similares. Em algumas modalidades, a via de administração subcutânea é preferencial. Em certas modalidades, a entrega mucosal é também preferencial. Essas vias incluem, porém, sem limitação, as vias oral, nasal, sublingual, pulmonar e bucal que podem incluir a administração do péptido na forma líquida, semissólida ou sólida. Para formulaçS es qe compreendem polipéptidos quiméricos, a administração por meio dessas vias pode exigir substancialmente mais composto para obter os efeitos biológicos desejados devido à biodisponibilidade desejada em comparação com a entrega parenteral. Adicionalmente, a entrega de liberação controlada parenteral pode ser atingida formando)se microcãpsulas poliméricas, matrizes, soluç0 es, impàntes e dispositivos e administrando)se os mesmos por via parenteral ou por meio cirúrgico. Os exemplos de formulaçS es de liberação controlada são descritos as Patentes n° U.S. 6,368,630, 6,379,704 e 5,766,627. Essas formas de dosagem podem ter uma biodisponibilidade mais baixa devido à captura de alguns dos péptidos na matriz ou dispositivo polimérico. Consultar, por exemplo, as Patente n° U.S. 6,379,704, 6,379,703 e 6,296,842.

Os compostos podem ser fornecidos em forma unitária de dosagem que contém uma quantidade do polipéptido quimérico que será eficaz em uma ou múltiplas doses.

Conforme será reconhecido por aqueles no campo, uma quantidade eficaz do polipéptido quimérico variará com muitos fatores, incluindo a idade e o peso do indivíduo, a condição física do indivíduo, a afeção a ser tratada e outros fatores conhecidos na técnica. Uma quantidade eficaz dos polipéptidos quiméricos variará também com a combinação particular administrada. Conforme descrito no presente documento, a administração dos polipéptidos quiméricos em combinação pode permitir que uma quantidade reduzida de qualquer um dos polipéptidos quiméricos administrados seja uma quantidade eficaz. • l·'v te»Ai w te» JL te» Q £&amp; 6 £9

As composições farmacêuticas fornecidas no presente documento incluem composições em o ingrediente ativo está contido numa quantidade terapeuticamente eficaz, isto é, numa quantidade eficaz para atingir o propósito ao qual se destina. A quantidade eficaz atual para aplicação particular dependerá, entre outros, da afeção que é tratada. Por exemplo, quando administradas em métodos para tratar diabetes, tais composições conterão uma quantidade de ingrediente ativo para atingir o resultado desejado 0 por exemplo diminuir a glicose sanguínea em jejum num indivíduo® . Quando administradas nos métodos para fcatar obesidade, tais composições conterão uma quantidade de ingrediente ativo eficaz para atingir o resultado desejado 0 por exemplo, diminuir a massa corporal® . A dosagem e a frequência 0 doses únicas ou múltiplall de composto administrada podem variar dependendo de uma variedade de fatores, incluindo a via de administração; tamanho, idade, sexo, saúde, peso corporal, índice de massa corporal e dieta do recetor; natureza e extensão de sintomas da doença que é tratada õpor exemplo, a doença responsiva aos compostos descritos no presente documentoã; presença de outras doenças ou outros problemas relacionados à saúde; tipo de tratamento concomitante; e complicaçB es de qualquer doença ou regime de tratamento. Outros regimes ou agentes terapêuticos podem ser usados em conjunto com as utilizaçS es médicas e polipéptidos da invenção.

As quantidades terapeuticamente eficazes para utilização em seres humanos podem ser determinadas a partir de modelos animais. Por exemplo, uma dose para seres humanos pode ser formulada para atingir uma concentração que se mostrou eficaz em animais. A dosagem em seres humanos pode ser ajustada monitorando)se um ou mais parâmetros fisiológicos, incluindo, porém, sem limitação, açúcar sanguíneo e massa corporal, e ajustando)se a dosagem para mais ou para menos, conforme descrito acima e conhecido na técnica.

As dosagens podem ser variadas dependendo dos requisitos do paciente e do composto a ser empregado. A dose administrada a um paciente, no contexto da presente invenção, deve ser suficiente para afetar uma resposta terapêutica benéfica no paciente ao longo do tempo. 0 tamanho da dose também serS determinado pela existêcia, natureza e extensão de quaisquer efeitos colaterais adversos. De modo geral, o tratamento é iniciado com dosagens menores, que são menores que a dose ideal do composto. Depois disso, a dosagem é aumentada por incrementos pequenos até o efeito ideal sob as circunstâncias ser atingido. Em uma modalidade da invenção, a faixa de dosagem é 0,001% a 10% em p/v. Em outra modalidade, a faixa de dosagem é 0,1% a 5% em p/v.

Entretanto, as doses típicas podem conter de um limite inferior de cerca de 0,1 mg a um limite superior de cerca de 200 mg do composto farmacêutico por dia. São também contempladas outras faixas de dose, tal como 1 mg a 100 mg do composto por dose, e 3 mg a 70 mg por dose. As doses por dia podem ser entregues em doses unitárias distintas ou fornecidas continuamente num período de 24 horas ou qualquer porção dessas 24 horas.

As quantidades e intervalos de dosagem podem ser ajustadas individualmente para fornecer os níveis do composto administrado para a indicação clínica particular que é tratada. Isso fornecerá um regime terapêutico que é proporcional à gravidade do estado doentio do indivíduo.

Utilizando)se os ensinamentos no presente documento, pode ser planejado um regime de tratamento profilático ou terapêutico que não cause toxicidade substancial e ainda seja inteiramente eficaz para tratar os sintomas clínicos demonstrados pelo paciente particular. Esse planejamento deve envolver a escolha cuidadosa de composto ativo considerando)se fatores tais como potência de composto, biodisponibilidade relativa, peso corporal do paciente, presença e gravidade de efeitos colaterais adversos, modo preferencial de administração e o perfil de toxicidade do agente selecionado. D. Toxicidade A razão entre toxicidade e efeito terapêutico para um composto particular é seu índice terapêutico e pode ser expressa como a razão entre LD50 õa quantidade de composto letal em 50% da populaçãoá e ED50 õa quantidade de composto eficaz em 50% da populaçãoá. Os compostos que exibem altos índices terapêuticos são preferenciais. Os dados de índice terapêutico obtidos a partir de ensaios de cultura celular e/ou estudos em animais podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagens para utilização em seres humanos. A dosagem de tais compostos, de preferência, encontra)se dentro de uma faixa de concentraçS es plasmEl ticas quinclui o ED50 com baixa ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro dessa faixa, dependendo da forma de dosagem empregada e da via de administração utilizada. Consultar, por exemplo, Fingi et al . , In: THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, Capítulo 1, página 1, 1975. A formulação exata, a via de administração e a dosagem podem ser escolhidas pelo médico individual em vista da condição do paciente e do método particular em que o composto é utilizado. VII. Exemplos

Exemplo 1: Recuperação de polipéptido quimérico

As sequências de proteínas foram projetadas e traduzidas de volta com utilização de software comercial na sequência de DNA para clonagem num vetor de expressão de E. coli. As sequências foram obtidas como oligonucleótidos e unidas com a utilização de técnicas de amplificação por PCR padrão ou foram digeridas a partir de construtos de expressão existentes com a utilização de enzimas de restrição padrão e, então, ligadas novamente. As sequências que expressam a proteína de interesse foram colocadas em pET45 com um promotor T7 para expressão induzível. Após os construtos terem sido verificados por sequenciação, o DNA do vetor foi purificado e transformado num hospedeiro de expressão, tipicamente BL210 DE30 . Uma única colóniafoi selecionada para cultivar a cultura inicial em 4 ml de meio LB por ~6 horas. Soluções estoque de glicerol foram preparados adicionando)se 100 ul de glicerol a 80% a 900 ul de solução estoque e armazenamento a ) 80 C. Opcionalmente, 500 ul de amostra não induzida foram retidos para análise em gel. Uma cultura de 60 ml õmeio magicES foi inocúada com a utilização de 60 ul de cultura inicial num frasco Thompson de 12 5 ml e incubada a 30 C de um dia para o outro. Remover 250 ul de amostra para análise. Reduzir o giro e congelar pélete celular para processamento posterior.

As células bacterianas foram coletadas e subsequentemente lisadas para isolar os corpos de inclusão. Visto que a proteína estava presente nos corpos de inclusão, os mesmos foram solubilizados, e a proteína enovelada novamente a 4 C. As proteínas foram, então, separadas com a utilização de cromatografia de exclusão de tamanho até apenas uma única banda ter permanecido e os níveis de endotoxina serem aceitáveis para teste ín vivo. HPLC analítica, RP)LC)M5 e SDS)PAGE gel foram executados como medidas de controlo de qualidade na proteína final. A proteína foi distribuída em alíquotas predeterminadas e armazenada a )80 C.

Exemplo 2: Propriedades biológicas e farmacêuticas

Conforme apresentado na Tabela 3 abaixo, os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento tiveram propriedades comparáveis, e alguns até mesmo superiores, ao A100 õComposto 37, SEQ ID NO: 240 . Esas propriedades incluem propriedades biológicas tais como atividade de ligação de leptina, atividade funcional de leptina e ingestão de alimento em camundongos e propriedades farmacêuticas tais como solubilidade em pH neutro.

Os ensaios exemplificativos para atividade de ligação de leptina e atividade funcional de leptina foram previamente descritos. A atividade de ingestão de alimento em camundongos foi testada com o seguinte ensaio: Camundongos fêmeas C57BL6 e seu alimento foram pesados diariamente 3 horas antes de acabar. Imediatamente após a pesagem, nos dias 0, 1, 2 e 3, os camundongos foram injetados SC com composto de leptina ou mutante em 1 x PBS. Os pontos representam média ± desvio padrão de n=9 gaiolas Õ3 camundongos/'gaiolaS . Os reultados relatados sob "Ingestão de Alimento por Camundongo" na Tabela 3 correspondem ao veículo correto, alteração em % em peso corporal medida após o Dia 4. A solubilidade foi medida com o seguinte ensaio: as proteínas foram concentradas a 4 C, centrifugadas para remover precipitados, então, deixadas equilibrar à temperatura ambiente de um dia para o outro. Os mesmos foram filtrados para remover precipitados e, então, a concentração foi determinada medindo)se a absorbância a OD280 e usando)se o coeficiente de extinção molar teórico. Tabela 3. Propriedades biológicas e farmacêuticas de polipéptidos quiméricos

Exemplo 3: Estabilidade de péptidos quiméricos

Conforme apresentado na Tabela 4 a seguir, os polipéptidos quiméricos descritos no presente documento têm estabilidade física comparável, e alguns até mesmo superior, em comparação com AI 00 õComposto 37, SEQ ID NO:24á. Os compostos foram formulados no seguinte tampão: ácido glutâmico a 10 mM, glicina a 2%, sacarose a 1%, 0,01% de Tween 20, pH 4,2 5 e armazenados a 3 7 °C. As amostras foram removidas em T = 0, 2, 5, 7 e 14 dias e testados por análise visual, cromatografia líquida de alto desempenho de fase reversa õHPLCá, espectrometria de UV e difusão dinâmica de luz õDLSá. Conforme mostrado na Tabela 4, os polipéptidos quiméricos têm pureza e potência comparáveis ou superiores, em comparação com o Composto 37.

Tabela 4. Estabilidade de Polipéptidos Quiméricos

Exemplo 4: Alteração em peso corporal após administração diária de polipéptido quimérico. Método. Camundongos fêmeas C57BL6 e seu alimento foram pesados diariamente 3 horas antes de acabar. Imediatamente após a pesagem, nos dias 0, 1, 2 e 3, os camundongos foram injetados SC com composto de leptina ou mutante em 1 x PBS.

Os pontos representam média ± desvio padrão de n=4 gaiolas Õ3 camundongos/gaiolaã. Cada grupo õn=12/grupoã foi designado para receber um dos seguintes: veículo; Comp. 41 a 0,1 mg/kg; Comp, 41 a 0,3 mg/kg; Comp. 41 a 1 mg/kg; Comp, 41 a 3 mg/kg; Comp. 41 a 5 mg/kg; Comp. 41 a 10 mg/kg- A ingestão de alimento e a alteração em peso corporal õ% de veículo corrigidoá foram monitorados por 4 dias, e os resultados registrados conforme mostrado õFiguras IA e lBá. Os pontos representam média ± desvio padrão de n=4 gaiolas õ3 camundongos/gaiolaã. Compostos administrados: Veículo õcírculo preenchidoá; Comp. 41 a 0,1 mg/kg õtriângulo voltado para baixoã; Comp. 41 a 0,3 mg/kg õlosango abertoã; Comp. 41 a 1 mg/kg õcírculo abertoã; Comp. 41 a 3 mg/kg õtriângulo voltado para cimaã; Comp. 41 a 5 mg/kg õestrelaá; Comp. 41 a 10 mg/kg õlosango preenchidoá.

Resultados. Conforme representado nas Figuras IA e 1B, a administração de diferentes doses do polipéptido quimérico resultou em ingestão de alimento e peso corporal reduzidos em relação ao grupo que recebeu veículo apenas. Uma resposta à dose é observada na Figura 1C.

Exemplo 5: Alteração em peso corporal após administração diária de polipéptido quimérico. Método. Camundongos fêmeas C57BL6 e seu alimento foram pesados diariamente 3 horas antes de acabar. Imediatamente após a pesagem, nos dias 0, 1, 2 e 3, os camundongos foram injetados SC com composto de leptina ou mutante em 1 x PBS. Os pontos representam média ± desvio padrão de n=4 gaiolas Õ3 camundongos/gaiolaã. Cada grupo õn=12/grupoá foi designado para receber um dos seguintes: veículo; Comp. 42 a 0,1 mg/kg; Comp. 42 a 0,3 mg/kg; Comp. 42 a 1 mg/kg; Comp. 4 2 a 3 mg/kg; Comp. 4 2 a 5 mg/kg; Comp. 4 2 a 10 mg/kg. A ingestão de alimento e a alteração em peso corporal õ% de veículo corrigidoá foram monitorados por 4 dias, e os resultados registrados conforme mostrado õFiguras 2A e 2Bá. Os pontos representam média ± desvio padrão de n=4 gaiolas 53 camundongos/gaiolaá. Compostos administrados: Veículo õcírculo preenchidoã; Comp. 42 a 0,1 mg/kg õtriângulo voltado para cimaá; Comp. 42 a 0,3 mg/kg õtriângulo voltado para cimaã; Comp. 42 a 1 mg/kg õquadrado preenchidoã; Comp. 42 a 3 mg/kg õponto acima e abaixo da barraá; Comp. 42 a 5 mg/kg õestrelaã; Comp. 42 a 10 mg/kg õponto acima da barraá.

Resultados. Conforme representado nas Figuras 2A e 2B, a administração de diferentes doses do polipéptido quimérico resultou em ingestão de alimento e peso corporal reduzidos em relação ao grupo que recebeu veículo apenas. Uma resposta à dose é observada na Figura 2C.

Conforme mostrado na Tabela 5 abaixo, as respostas à dose medidas para os polipéptidos quiméricos 41 e 42 são comparS veis às respostas à dose medidas para a lepina de foca õComp. 3 8á e leptina de ser humano õComp. 3 7á das quais os polipéptidos quiméricos são derivados.

Tabela 5. Respostas à dose de polipéptidos quiméricos

Seguem exemplos adicionais dos polipéptidos quiméricos, método de utilização dos mesmos e composiçS es farmacêuticas descritas no presente documento:

El. Um polipéptido quimérico compreendendo um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem, em que pelo menos uma região contígua de 1 a 30 aminoãcidos de uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem foi substituída por uma região contígua de 1 a 3 0 aminoãcidos de uma sequência de leptina de ser humano madura. E2. O polipéptido quimérico, de acordo com El, em que duas ou mais regiões contíguas de 1 a 30 aminoãcidos de uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem foram substituídas em cada região por uma região contígua de 1 a 3 0 aminoãcidos de uma sequência de leptina de ser humano madura. E3. 0 polipéptido quimérico, de acordo com El ou E2, em que a sequência de leptina de foca do tipo selvagem compreende a sequência de aminoãcidos da SEQ ID NO:28 OU SEQ ID NO:31.

E4. 0 polipéptido quimérico, de acordo com qualquer um dentre El a E3, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoãcidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25,

SEQ ID NO: 2 6, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID

NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51. E5. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre El a E4, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoãcidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:2Q, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25,

SEQ ID NO: 2 6, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42,

SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID

NO: 4 6 , SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO: 4 9 , SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos uma substituição de aminoãcido numa posição em que é observada divergência numa posição correspondente numa leptina de outra espécie. E6. 0 polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E5, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos

selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID N0:13, SEQ ID NO:20, SEQ ID N0:21, SEQ ID NO : 22 , SEQ ID NO : 23 , SEQ ID NO : 24 , SEQ ID NO : 2 5 , SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID

NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos duas substituições de aminoãcido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie. E7. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E6, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos

selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 2 5, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID MO: 34, SEQ ID

NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 4 6 , SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO: 4 9 , SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos três substituições de aminoãcido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie. E8. 0 polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E7, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos

selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12 , SEQ ID NO: 13 , SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO : 22 , SEQ ID NO : 23 , SEQ ID NO : 24 , SEQ ID NO : 2 5 ,

SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID

NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID

NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos quatro substituições de aminoãcido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie. E9. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E8, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 2 5,

SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID MO: 34, SEQ ID NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42,

SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 4 6 , SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO: 4 9 , SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos cinco substituições de aminoãcido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie.

E10. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a Ε9, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos

selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12 , SEQ ID NO: 13 , SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO : 22 , SEQ ID NO : 23 , SEQ ID NO : 24 , SEQ ID NO : 2 5 , SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID

NO : 3 5 , SEQ ID NO : 3 6 , SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO : 3 8 , SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos seis substituições de aminoácido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie.

Eli. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E10, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25,

SEQ ID NO: 2 6, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42,

SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID MO: 45, SEQ ID

NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos sete substituições de aminoácido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie. E12. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a Eli, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos

selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID

NO :12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:2Q, SEQ ID NQ:21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID

NO : 3 5 , SEQ ID NO : 3 6 , SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO : 3 8 , SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos oito substituições de aminoácido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie. E13. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E12, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoãcidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25, SEQ ID NO: 2 6, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 3 5, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NO:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos nove substituições de aminoácido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie. E14. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E13, em que uma sequência de leptina de ser humano madura compreende uma sequência de aminoácidos

selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23 , SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 2 5, SEQ ID NO: 2 6, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO:35, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:37, SEQ ID NQ:38, SEQ ID NO: 3 9, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:41, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 4 9, SEQ ID NO:50 e SEQ ID NO:51, em que a sequência de leptina de ser humano madura tem pelo menos dez substituições de aminoácido em posições em que é observada divergência em posições correspondentes numa leptina de outra espécie. E15. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E14, em que a sequência de leptina de ser humano madura compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:24. E16. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E15, em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade com uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO: 2 9, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 5 9, SEQ ID NO:60, SEQ ID NO:61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO:65, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84 e SEQ ID NO:85. E17. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E16, em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade com uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NQ:32, SEQ ID NO:33. Ε18. 0 polipéptido quimérico de qualquer uma das EI a E!7, em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 80% de identidade com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33. E19. 0 polipéptido quimérico de qualquer uma das EI a E18, em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoácidos com pelo menos 90% de identidade com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33.

E20. 0 polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E19, em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO : 32 , SEQ ID NO : 33 , SEQ ID NO : 52 , SEQ ID NO : 5 3 , SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO: 60, SEQ ID

NO: 61, SEQ ID NO:62, SEQ ID NO:63, SEQ ID NO:64, SEQ ID NO: 6 5, SEQ ID NO:66, SEQ ID NO:67, SEQ ID NO:68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO:73, SEQ ID NO:74, SEQ ID NO: /5, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO:77, SEQ ID NO:78, SEQ ID NO:79, SEQ ID NO: 80, ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO:84 e SEQ ID NO:85, E21. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E20, em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoácidos selecionada a partir do grupo que consiste em: SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33. E22. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E21, em que o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:29. E23. O polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E21, em que o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:30. Ε24. 0 polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E21, em que o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32. E25. 0 polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E21, em que o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33. E26. Um método para tratar uma doença ou um distúrbio num indivíduo que compreende administrar um polipéptido quimérico de qualquer um dentre EI a E25 a um indivíduo que precisa do mesmo numa quantidade eficaz para tratar a dita doença ou distúrbio. E27. 0 método, de acordo com E26, em que a doença ou o distúrbio é uma doença ou um distúrbio selecionado a partir do grupo que consiste em: lipodistrofia, dislipidemia, hiperlipidemia, sobrepeso, obesidade, amenorreia hipotalâmica, doença de Alzheimer, deficiência de leptina, doença do fígado gordo, diabetes õincluindo tipo I e tipo II® , esteato) hepatite não alcoólica õNASH® , doença do fígado godo não alcoólica õNAFLD® , síndrome metabólica X e doeça de Huntington. E28. 0 método de E26 ou E2 7, em que a doença ou o distúrbio é lipodistrofia, dislipidemia, hiperlipidemia, sobrepeso, obesidade, amenorreia hipotalâmica, doença de Alzheimer, deficiência de leptina, doença do fígado gordo ou diabetes. E29. 0 método de qualquer um dentre E26 a E28, em que a doença ou o distúrbio é diabetes tipo I ou diabetes tipo II. E30. 0 método de qualquer um dentre E26 a E28, em que a doença ou o distúrbio é obesidade. E31. 0 método de qualquer um dentre E26 a E28, em que a doença ou o distúrbio é lipodistrofia ou deficiência de leptina. E32. Uma composição farmacêutica que compreende um polipéptido quimérico, de acordo com qualquer um dentre EI a E25, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.

VIII. LISTAGEM INFORMAL DE SEQUÊNCIAS

Segue uma listagem informal de sequências no presente documento: VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTLA VYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEAS GYSTEVVALSR- LQGSLQDMLQQLDLSPGG, em que Xaa na posição 28 é Q ou ausente (SEQ ID NO:1)

VFIQKVODDTKTLiK.TiVllilNOÍSffrQSV&amp;AKQRWatDFiFGLHPil^LS.KMDQTI.A.W QQVLTSI.PSQN%Í1-QÍANDLENLRDLLHLÍAFS.KSCSU>Q1'SGLQKJ>ESÍ,DGV1JEASLY STEVVAf JÍRLQGStODM.XJQLDVSPHC (SEQ &amp;> NO:2>. VFÍQ.KVQDDTKTLIK.TrVTKÍNDiSííTSVSÂKQRVTGLDFPeLH.PlLSLSíC.MDQTl.AVYQ QVLTSLPSQNVLQiANDLEHLRDLLHlLI-AFSKSCSLFQTSCfLQKPESLDGVLHASLVS TBVVALSRLQGSLQDIT jQQLDVSPEC (SEQ ÍD N0;3). MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQTL AVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPQASGLETLESLGGVLEA SGYSTEVVALSR- LQGSLQDMLQQLDLSPGC, em que Xaa na posição 29 é Q ou ausente (SEQ ID NO:4)

MVPIQKVQDDTKTLIKTlVTRINDISHTQSVSAKQRVTOLDFIPGLHRn.BLSKMDQTLAV YSTBY V &amp;LSRLQOSI,QDiLQQLl)VSPF.C (SBQ ID N0:5). MVFTQKVQODTK.TL1KTIVTR1M51SHTSVSAKQRVTQLDHPGLÍ3PILSLSKMDQTLAW QQV.LTSLPSQNVLQIANDLENLRDL.LHLLAFSKSCSL.PQl^GLQKPESLDGVLEASLY STEVVALSRLQGSLQDILQQLDVSPEC (SEQ ID NO:6), VPiWRVQDDTK:n.fKTÍV'miSDlSHMQSVSSKQRVTGLDFIPGl..HPVli;i„SKMfX5TLAiY QQILTSLPSRNVíQISNDLENLRDLLHLLASSICSCPLPQARALETLESLGGVLEASLYS Tr:VVAl.SRLQGALQDMLRQLDLSPGC: íSEQ ID NO:?). MVTIWR.VQDDTK'l'í.({KTTVTR.ÍSDIS}iM'QSVSSKQIEVTGL.DFIPCH'..{iPV'Í.SI..SKMi'>QTl..AÍ YQQiLTSLfôRNVlQiSMDLENLRDLLHLLASSKSC^WARALETiliSLCKiVLEASLY STEVVALSRLQGA1.QDMLRQLDL$PGC ($EQ!DNO:8).

VPICKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTLAI YQQILTSLPSRNVVQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEASL YSTEVVALSRLQGSLQDM- LRQLDLSPGC, em que Xaa na posição 28 é Q ou ausente (SEQ iD NO:9)

MVPICKVQDDTKTLIKTIVTRINDISHT-Xaa-SVSSKQRVTGLDFIPGLHPLLSLSKMDQTL AIYQQILTSLPSRNVVQISNDLENLRDLLHLLAASKSCPLPQVRALESLESLGVVLEAS LYSTEVVALSR- LQGSLQDMLRQLDLSPGC, em que Xaa na posição 29 é Q ou ausente (SEQ ID NO:10) MH WÍ.VÍÍ.CGFI.. W L WPY L F Y V QA V P JQKV QDDT KT.U K.T1 VT RJ ND I SHTQS V SSK.QK. VT G LOHí>GO-ÍPÍL'í'L5KMDQTLAV\QQÍLTSMPSRNV1Q1SN.DL£LN'LRDLLHV'Lí\ívSKSCH LPWASGLETOJSIXKiVLEASGY STEVVALSR.LQ«SI.QOMI,WQLDI,SPGC (SEQ 1.0 NO: 11)

VPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQT LAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLE ASGYSTEVVALSR- LQGSLQDMLWQLDLSPGC, em que: Xaa na posição 27 é T ou A; e Xaa na posição 28 é Q ou ausente (SEQ ID NO:12).

MVPIQKVQDDTKTLIKTIVTRINDISH-Xaa-Xaa-SVSSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSKMDQ TLAVYQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVL EASGYSTEVVALSR- LQGSLQDMLWQLDLSPGC, em que: Xaa na posição 28 é T ou A; e Xaa na posição 29 é Q ou ausente (SEQ ID NO:13).

VpIQK VQSDTKTLI KT1V IR i NOiSHTQS V.SSKQR VTG LDFÍLHP VL TLSQMDQTLAl YQ Q1LINLPSRNVIQ!SN'DLENLRDLLH.LLAPSK.SCH.LPLÀSGLETLESLC5DVLEASLYSTE VVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPOC {SEQ ID NO: 14). MV PlQKVQSDIKILÍOIVTRlND.lSífrQS VSSKQR VrCíLDFIPGLHFVLT!.,SQM.DQTl,A.I YQQrLINIPSRNV!Q1SN:DLÍEVL.RDLLHI.LAí'SKSCHl,PLAS<jí..ETl..ESl.,GDV1..BAS.tY STE VVALSRLQG SLQDM1 WQLDLSPGC (SEQ ID NO: 15). VPÍHKVQDDmTUKTiVTRiNDlSHTQSVSARQRVTGLDFIPGt.HPlLSl.SKMDQn.AVY f^ILTSLPSQNVLQíAHDLENLRDLLÍ-ÍLLATíSKSCSLPQTRGi.QKPESLDGVL.EASLV STEVVÂLSRLQGiSLQDÍLQQLDLSPFX' (SEQ JD NO: 161, MVPÍHKVQDDTKTLÍKT1VTR1ND1SHTQSVSARQRVTGLDFIP0LHPÍLSLSKMDQTLÁV YQQ1LISLPSQNVLQ.IAHDLENXRDLLHI.LAFSICSCSLPQTRGI..QKPESLÍ'XjVLEASL YSTEVVALSRLQGSLCplLQQLDLSPEC (SEQ ID NO: 1 ?>.

ISiEKíQADTKTLTKTlITRirQLSTQNOVSTDQRVSGLDFIPGNQQFQNLADMDQTLAYYQ QÍLSSLEMPDRTQISNDLENLRSLFÀLLATLKNCRFTRSDOLDTMElWOOiVEESLYST Í^VTLDRLRKSLKNIEKQLDmQG (SEQ ID NO: 1SQ.

MRCliJ.YOHrV’WQHl.VYSWPTSí£KIQAIiyrKTi;i'K'niTRIiQLSTQ?«GVS'TDQRVSOi.DF IPGNQQFQN LA OMDQTLAVYQQI1. SSLPMPDRTQISNDLE N LRSLPALLATLKNCPFT RSIX^DlWJrWGGIVIxESLYSTCWrLDRLRKSr. KNIEKQi. DH3QG (SEQ \D NO: 19}. VPÍQKVQDDTRTUKTIVÍRÍNDÍSHTQSVSSKQKVTGLDFIPGLHPU/TISKMDQTLAVY QQ![;íSMPSRNVHv>iS^Dl,ENÍ.ROÍ.iilVLAFSKSC':HÍ..PWASGl-.FrLDSlXKsVLEASGY STEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ !D NO.:29). VPiQK.YQfMY|-K17JK.TiV'rRÍM'HSHAQSVSSKQKVTÔLDF1PGLHPILTLSKMDQ'R^V\' QQ í LTSM PSRNVIQ] SND L ENE RDLL HVÍ.AFSK S CFÍLFW ASGLET1,DS LG G V LE A S G ¥S'ΤΊΕ VVALSRLQGSLQDMLWQLDLSFGC (SEQ !D N0:2 í}. VPlQK.VQDDTKT!J.K'nVTRINDíSHTSVSSKQK.VTGLDFÍPGI..HPIL'n,SKMlX?Tl^AVYQ QILTSMPSRNViQISMDiENLRDtLHVLA^KSaJLPWASGlETLDSLGGVU-ASGYS TEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ lD NO:22). VPIQKVQDDTKrLiK.TJXlTUNOISHASVSSK.QKVTGLDFlPGLHPlLTLSKMDQTLAWQ OILTSMPSRNVIQISNDEEN1RDLUIVLAFSKSCMLPWASGLETLDSLGGVLEASGYS TEVVAL.SRLOGSLQDMLWQLDLSPGC: (SEQ 1D N(>23> MVPIQKVQíXrrOLIKTiVnUNDISHTQSVSSKQKVTGLDnPGUIPU/rLSKMrX^XAV YÍ^QILTSMP$RNV)QiSNDÍ.ENLRDLLHVLAF$K.S<-HI.PWASGLETI.I)Sl.GGVI.EA.SG YSTEVYALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGt' (SEQ ]D NO:24 >. MVPIQKVQDDTKTL1KT1YTR1TMD1S.HÂQSVSSK.QK\JTG'LDFIPGLH.PILTLS.KMDQTLAV YQQfLTSMPSRNVlQISNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASfíLETLDSLGGVLEASG YSTEWALSRLQGSLQPMLWQLDLSPGC (SEQ ID N025). MYPIQKVQDDTKTIIKTIVTIlNDISHTSVSSKQKVTGLDFlPGLHPimJICMDQ^ÂYY QQI.LTSMPSRNVIQÍSNDLENLRDLLHVL.AFSKSCHLPWASG.LET.LDSLGGYLEASGY STEVVALSRLQGSLQDMLWQ.LDLSPGC (SEQ ID NO:2é).

MVPI(^VQI>D11Í7UKTÍVTRIND1$HA$VSSICQKYTGL0FIPGLHPÍLTL$KMDQTLAVY QQlLTSMPSRNVíQÍSNDLENLRDLl.HVLAFSKSCHLP\VASGLETLDSLCiGVLEASGY SYEVVAL.SRI.QGSLQDMLWQIX>LSPGC (SEQ ÍDNO:27\ PK5R'VQD!;>TKrL:KTi;í'rRÍNDíSFFQGVCSRPR.VAGLDF;íFR.VQSV!ríI,SGMD0!i,A.TYQQ 1LTSLQ$RSVW.)1ANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDT1KGLGNVLKA$VKST EVVALSR.LK.AALQOMLRQL.I«Í.NPGC.: (SEQ .ID NO:2K).

PiQRV<)DDTKTL!K.TnTRiNDlSPPQGVCSRFRVAGLDFlPRVQSVRTLSGMDQILATYOQ IU'S.I.<^RN!VlQlSNDL£NLRDU..HV.LAFSKSCPVpRAROSDTÍKamNVLRASVH{nsg WALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC {SEQ 1DN0:29}, PÍQRVQDDTKTUK.T}ITR1NDÍSPPQGV.SSRFRVAGI.DF1FRV0SVRTÍSGMJ»QILATYQQÍ LTSi-QSRNVÍQ(SN'DLEN!LRDlXHVI,AESKSCPVPRARGSD'nKGLGN'VLRASVHSTE VVAl.SRLKAALQDMLRQI.DR.NFGC' (SEQ ID .NO. 30). MPÍQRVQDDTK.TL1KTI!TR1NDISFPQGVCSRPRVA.GLDFIPRVQSVRTL$GMDQÍLATYQ QILTSLQSRSVVQIÂNDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLG^VLRASVHS TEWALSM.KAALQDMLRQLDWGC (SEQ ID NO:31). MPlQRVQODTKTLiKTíITRrNDlSPPOGVCSRPRVACLmPRVOSVRTtSGMDOlLATYO QfLTSLQSRNVíQiSNDLENLRDLLHVLAPSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVI-ÍST EV VALSRLKAALQDMLRQLDR.N PGC (SEQ ID NO: 32). M.PIQR VQDDTKTLlKTHTRÍNDISPPOGVSSRPRVAGLDEiPRVQSVRTl^SGMDQILÂTYQ QiLTSLQSRNVIQISNDLENLRDLLHVLAPSKSCPVPRARGSDTJRGLGNVLRASVHST EWALSRI.KAALQpMLRQIDR.NPGC (SEQ ID NO: 3:3). MDKTRTCPFCPAPELLCíCíPSVELPPPKPKDTLMISR.TPE'VTCVVVDVSHEOPEVKFNWY VDG V EVHN AKTKPREEQY NSTYRV VSVLTV LHC^>WLN(jKEYK€KVSNK ALPAPIE KTISKAKGOPREPQVYTLPPSR.DELTKNQVSLTCIVKGPTPSDIAVEW£SNGQFENvN YK.TTPPVLDSOGSFFLYSKi.TVDKSRWQQGNVFSCSVNrHEALHNRVTQRSLSLSPG KVPlQKVQDDTK:nJK7TVlRINDiSinQSVSSKQKVíGí.-DFIPG[,KPM;íI.SKMíXVri. AVYQQIi/rSMPSRNVlQISNDLENLRDLLMVIAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEA SCiVSTEVVALSRÍ-QGSLQDMLWOLDLSPGC (SEQ ID NO:34) MVPfQKVQDDTKTt. IKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGI. DFÍPGI. HPILTL SK MDQTLAV Y QQILT SMPSRN V 3 Ql SN Dl. EN LRD L L,H VL A FS K S CHLPQA S G.L ΠI- DS Í..GG V ti: A SG YSTEWALSRL<XSLQDMU&amp;LDLSPGC<SEQ ID NO:3S). MYT.!QKVQDDTKTL!KTTVTRiNDfSHTQSVSSKQK.VTGLDFIFGLHPILTLSKMDQTLA.V YQQILTSMPSRMVIQICNDl.ENLRDLU-fVI.AFSKSCH'LPWASGI..ETL-DSUKVVl.EASG YSTEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 36). MVP}QKVQDDTKTiJKTiV'fRINDlSHTQ$VS$KQKYTGLEHKiLHPILTLSKMt>QTLAV YQQI LTSM PSK N VíQlSN OLE N LR DU..H VLAESNSCB LPQASGl. LO. L$ LCiG VEASO YSTJEVYAJ.S8I.QGSl.QDMl.QQLr>l.SPGC (SEQ ID NO J7). MVPíQKVODDT?CTL.!KT!YTR!NDíSin'QSVSSKQKWCt.í:fíPCI.IÍPÍUn,SI(MDOTL-AV YQQILTSMPSRNVlQlSNOiJiNl.R.Dn..HVl.AFSKSCSLPQASGT.ETI.ESLGEVLEASGY .$ TEVV A LSR LQGSLQD11X)QLDI.SPEC (SEQ ID NO" 38)

MVPIQKVQDDTKILÍKTIVTRÍNDISHTQSV^SKQKVTÔLDRPOLHFILTLSKMDC^TLAV YQQÍi;TSMPSRNV|QISNDteNLR0LLHVLAríSICSC^l-í,QAS<:rl-m.DÍ>LfX7VLEAS<í YSTE V VA LSR LQGS LQDf LQQLDL SPEC (SEQ ID NO: 39). MVPlQKYQDlXrKTLIKTlVTRÍNDiSHTQSVSSlCQKVTGLDePCLEPILTLMMDQTLAV YQQILTSMPSRNVIQISNDLENLRDLLl-iYLÃFSKSCSLPQÂSGLFrLDSLGEYLEASG YSTEWALSR.LQGSLQD1LQQLDLSP1C (SEQ ID NO: 40). MVPlQKVQDDTKllJKOVTRJNDiSHTf^SVTsSKQKVTGLDFIPGLHPILTLSRMrXJTLAV YQQíl.TSMPSRNV)QTSNDLENLRDU.HVLAFSKSCHfLPOASGLETLDSl.GEVLEASG YSTE VVALSRLQf^EQDrLQQl.DLSPEr (SEQ ÍD NO: 41)

MVPlQKVQDDTRTUKTIVTRTNDISHTQSVSSKQKVrGLDPIPGLHPIlTLSlvMrXJTLAV YQQI LTS MPSRN VIQÍSNDI ..E NLRDLLH V LA ES KSCSLPQASGLETLDSi.GG'V LEASG YSTEVVALSRLQGSLQDILOQLDLSPEC fSEQ ID NO: 42). MV PIQKVQDDTKTIJK7 ÍVTRINDISHT QS VSSKQKYT GLDRPGLHFILTLSKJMDQTIAY' YQOILTSMPSRNVIQíSNDLENLRDLLHVLAF^KSCULPQASGLETLDSLGEVLEASG YSTE VVALSRLQG5L QDiLQQLDVSFFC (SEQ SD NO: 43).

MVPIQKVQDDTKTLlKTIVTRiNDlSHTQSVSSKQKVTGLDFiPGLHPJÍLTl.SK.MDQTL.AV

YQQILTSMPSRNVIQISNDl,ENLRDU..HVLAF'SKSCSLPQTSGI.m.DSLCK'jíVLPASG YSTE V VALSRLQGSLQDiLQQLDL S FEC (SEQ ID NO: 44). MVPíQKY'QDDTKTLIKTIVTRfNDISHl’QSVSSKQKVTGLDRPCíLHPlLTLSKMDQTLAV YQQri.TSMPSRNVÍQÍSNyDLENLRDLI..HVl.AFSKSCSl.PQASGl.E^..E$l.GPA'X.EASGY SlliVYAUSRU^SLQDMLWQLDLSPEC (SEQ ID NO: 43). MVPíQK.VQDDTKTÍ.JKl.rVl'.RiNDíSHTQSVSSKQKVTGLDF.lPCU,.íiP.!i;n,SKMr>QTLA.V Yí^iLTSMPSR.NVIQiS^DLIiNLRD.U.HVXAFSKSCHLFQASGLETLDS.UKxVl.EASG YSTEVVALSRl.íK^EQDILQQLDLSPEC (SEQ I.D NO: 46). MVPíQKVQDD'!'K'nJKT.rVTRÍNDíSHTQSVSSKQK.VTGLDFlPGLHPIL'.n,SKMí.')Q1'LAV VQQil.TSMPSRNVlQISNDLENI..RDLLHVLÂFSKSCHLPQÂSCiLETI.DSi..OGVLEASG YS'rEVVALSRLOGSLQDILQQLDYSPEC i SEQ IO NO; 47). MVPlQKVQDD'TKl'UK'.'nV'FRINDlSHTÍ)SVSSíCQKY!’Gl.DRFGl.HPiL/n..SKMlX)TlJW YQqrí:TSMPSRNVíQÍSNL>i;ENiRDLlíiVl.AFSKSCSt.PQTSOLFri;OSlGGVl.EASO YSTEVVALSRLQGSLQD1LQQLDVSPEC (SEQ ID NO: 48).

.^TIQKYQDDTKTLIKTIVTRINDISHTQSVSSKQKVTGLD.FIPOLH.PILTLSKMDQTLA.V YQQiUrSMÍ>S'RNVÍQÍSNDLENLRDLLHVLA‘FSK:SCSL?{yrSOLETLDS'LGEVLEASGY· STEVVALSRLQGSLQDMLWQLDLSrEC (SEQ ID NO: 49). MVPTQKVQDDTR.TUKTÍVTRlM>fSH'rQSVSSICQKVTGLDFiPOLHPILTLSKMíX^n..AV YQQllTSMRSRNVÍQlS>TOLENtRDLLHVLAFSK5a*LPQASK}LE1TDSU}EVL£A.SG YSTEVYALSR1.QGSLQDMLQGLDLSPGC (SEQ ID NO: 50).

MVPíQKVQODTKT!..iKTIVTRÍNDiSHl'QSVSSK.QK\TGL.DF1PGlHPILTLͧK;MIXyrLAV

YQQlLl'SMPSRNV'lQJSNDLENLRDLLHVl.AFSKSCRLPQAS(.jLE'rT.i')SLGFiVLEASG YSTE'VVA.LSRLQGSLQEFOLQQEDL.SPEC (SEQ ID NO: 51).

P!QKVQÍ>DTKTLIKTJV7RIM>ISPW^VTSRPRVAGLDF1PRVQS\TITLSGMDQ]LATYQ QILTSLQSRSWQÍANDLANÍ..RAI.LR.I..LASAKSCPVPRARGSDTÍKGLGNVLRASVHS TEVVALSRLKA ALQDM LRQIDRNPGC (SEQ ID NO:52t. MPIQKVQDDTK.TLIKT1YTRI.NDISPPQGVCSRFRVÂGLDFIPRVQSV.RTLÍÍGMDQILATY'

QQÍLTSLQSRSVVQIANDLANLRAILRLLASAICSCrVPRARGSmiKGLGNVXRASY HSTE VVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ ID NO:S3).

PlQRVQDDTCTLlKTlOXÍNDÍSPPQGVCSRPRVÂGLDFiPRVQSVRTLSKMDQTIJkVYQ QILTSLQSRSWQlARDLANLRALLRLLASAKSCPVPRAROSDmOLGNVLRASVHS T.EVV ALSRLKAALQDMiRQLDRNPQC (SEQ ID N054). MPiQRVQDDTKTUKTirrRrNDlSPPQGY'CSRmYAGLDnPRVQSVRTLSKMDQTLAVY QQ)LTSLQSRSVVQlANDLANLRALLRUASAKSCF\;PRARGSDTiKOLGNVLRASV 11STEVVAESR.LKAA LQDMLR QLDRNPGC (SEQ !D NO:55). PJQRVQDDT&amp;YlJKTlíFRINOíSPPQGVCS&amp;PRVAGLDFfPRYQSVRTLSGMDQíLATYQQ li,TSl.QSRSVVQiANDl.AMil.Al.LRU.ASAKSCPVPRAR<3SDTÍK0l.GNVl.RASVBST EVYÂlJÍRÍ.qGSi.QDMLWQil)LNPGC (SEQ ID NO:56>. M.PíQRVQDDlXTLlK.Tir.rR.IM?lSPP(X'jVCSRPRVAGLDF.ÍPÍÍ.YQSVRTLSGMíX>lLATYQ QlLmQSRSVa>QIANDI.ANt.RAU..m.ASAKSCPVPRARGSDTlKGULNVI,RASVHS TEVVALSRÍX^SLQDMLWQLDLNPGC' íSEQ 1D N<*57). FK,)RVQDDTKTLIKTÍlTRiNDíSPrrQKYSSK.QRVTGLDFiPG!..HPÍÍ..TL.SGM.DQíLATYQQl LTSLQSRSWQIANDiA.NLRALLR.Ll.ASAK.SCPVPRARGSDTlR.GLGNVLRASVBST EV'VAIERLKAÂIX^DMi,RQI..DR.NPGC (SEQ ÍDNO:58). MPlQRVQ0DTKTLÍICTllTRÍND!SHTQSYSSKQKVTGLDFIP(3L!!PÍLfLSGMDQILÂTYQ QÍLTSLQSRSVVGÍANDLANLRALL^LÂSAJCSCPVPRARGSDTIICGLGNVLRASVHS TE¥VALSR:LKAALQ0MÍRQLD1NPGC (SEQID NO:59), PTORVQDDTKTUKTITTRrNDiSPPqGVCSRPRVAGLDFIPRVOSVRTLSGMDOltATYOG ÍLTSLQSRSYY'QfANDLANLHALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLCXiYLLASG¥S"í' EWALSRLK ΑΛLQDMLRQLDRN PGC (SEQ ÍD NO:60>. MHQRYQDDTRTLIKTTITRMOISPFQGYCSRPRVAGLOFiPRVQSVRTLSGMOQíLATYQ QILmÇ^RSVVQÍANDLAMLRALLRLLASAKSCHLPWASGLETLDSLGGVLEÂSGY STEVVALSRLKAALQDMLSQLORNPÍX.' (SEQ iDM3:6í).

PíQKVQDDTKTLIKTÍYTRlMMSPPQGVCSRPRVAGLDFÍPRVQSVRTLSGMDQiLATYQ

Qn..TSLQ$RN'VlQ1SNOLEi'íLRDlXTWLAFSKSCPVPRARGSDTlKGi.GNVl.RA$VFIST EVYA.LSRi.RAAI.QDYf.LR.QL.DR.NPGC (SEQ ÍD NO:62)

MPiQKVQODTKTUKTÍVTRLNDlSPPQGVCSRPRVAGi-DFÍPRV^VRTi-SGMDQiLATY QQ1LT S LQSR N VI Qi SN DL EN LR.D1, L Η V L A FS KSC P VPRA RG S DTUCGL G N V LR AS VII STEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPOC (SEQ ÍD NO;63t PK>RVQDDTKTUKTíri'RiNDISHTQSVSSKQ£YTGLDFIPGLHPÍl.TLSGMÍX}liJATYQQi l,TSLf^SRNVIQiSNDLÍ:NLRÍ>LtliViJ\FSKSCPVFRÀRGSDTÍKGLGNVLRASVHSTE, VVALSRLKAALQDMLRQLDRNFGC (SEQ ID NO:64) MP!QlWQDD1KTL!KTin^lNDlSHTQSVSSKqKVTGLDF]PG:L.HF!LTLSGMDQ!i,ATYQ Qn;!Slx;>SRNVIQISNDLE'NRJlDUi]VÍ,APSKSCPVPRARGSDirKGLX).NVÍ,RASVHST EVYALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC ÍSEQ ÍD NO:65>

PíQRVQDDTKTnK'niTRlTsD!SPPOC»VCSRPRVAGLDHPRVQSVRTíJ>GMr>QlÍjMTOQ H..T.St..QSRNVíQS $N DI.,F.NÍ.RÍ.)U,H V t. A PSKSCHLPWASGL ETUmtf} VLEASGYST EVVALSRI..KAALQT.MLRQLDRMPGC (SEQ ID ΝΌ.66) MPiQRVQDDTKTÍAKTlíTRINOlSPPQGVCSRPRVAGLDRPRVQSVRTLSGMOQlLATYQ QlLTSLQSRNVlQíSNDLENLRDLLHVLAFSKSCHLPWASGLETLDSLGGYLEASGYS ΊEVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ TO N<M57) ΡΚ^\^0ΟΤΚ·ΤΧΪΚ'ΠΙΤΚ1Νϋ!ΧΗΤ0δν88Κ0ϊίΥΤΟΙ..Ε»«ΊΡΟΙ..ίίΡίί.ΤΕίΚ.»ΜΤΧ^1ΙΑΤΥ00!

LTSLQSRSVVQlANDI.AN!i.RAU,Rl.t.A$AKS<:PVPRARGSDTIÍÍGl.GNVLRASVH$T EVVALSRi..fX>SLQDMLWQIi'>I,NPC.TC.' (SEQ Ϊ0 NO:6B) MPIQRYrQDDT.IÍTLIKTHTRÍNDISHTQSVSSKQKYTOLDFI.PG'LÍIPILTLSGMDQILA.TYQ QILTSLQSRSWQMNDLAN'LRALXRLLÂSAKSCPVP'RARG.SDTÍKG'L<iNVLRAS'VHS TEVVALSSIQGSLQDMLWqEDLMPGC <SEQ ID NO:69)

PIQRVQDr>TKTLTKJTrrRÍM>íSHTQSVSvSKQKVTGLDnPGLHPI.LTLSGMDQUATYÍ^I

LTSLQSRSVVQIANDiJVNLRALLRLLASAKSGHLPWASaLETLDSLGGVLEASGYST EVVALSRLKÂÂLQDMLRQmRNPGC (SEQ ÍD NO 70) M PJ QR VQDDTKTL1KTI1TRÍNDÍ S ITT OS VSSKQK VT G LDF í PGL HPIL.T LSGMDQ! L AT YQ OILTTSLOSR$VS?OIANDL,ANLRAIÍ,RLLASAKSCHLPWASGIE1'LOSLGGVLEASGY STEVVALSRLKAALQDMLRQlJDRNPCiC; {SEQ ID ΝΌ:71} PJQRVQDOTKTU KT! JTR INDJSHTQS VSSKQRVTGLDRPGLHPILTLSGMDQí LA'n'QQl LTSÍ.QSRNVÍQISNDLENi.RDILHVÍ.AFSfCSCHLPWASGl.ETl.DSLGGVLEASGVSTl; V\?ALSRLKAALqDMl.RQl.DRNPGC íSEQ ID NO 72} MFJQHVQDD'l'K.'TOKTirnUNDfSHTQS>VSSKQKV'T'GLDFIPCíI.HPlí/rLS(jMDQiI.ÀTYQ QILTSLQSRNV1QiSNDLENLRDLLHVLÂFSKSCHLPWASGLE^aS.LCiGVLEASGYS TEVVALSRl-KAALQDMUKQLDRNPGC fSEQ ID NO:73>. PIQKVQDIXrKTLIKTiVTRINDiSPPQG-YBS.RPRVAGLDFIPRVQSVRTLSGMIXJILA.TYQ Q1LTSLQSRS WQI ANDLÁNLRÁLLRULÂ SAKSCFVPR ARGSDTIKGLGNVLEASVHS TB W ALSRLK AÀLQDMLRQLDSNPOC <SEQ IP NO: 74),

MPiQKVQDDTKTLTKXi VTRINDíSPPQG VSSRPR VAGLDFIPR VQS VR TLSGMDQlLAT Y QQll.TSLQSRSVVQLANi7l.AMJlAIiJGXASAKSCPVFRA.RGSD'j1KGtGNVLRÁSV HSTE VV AÍ..SRÍ. KA A LQDM I.RQL DRNPGC i.SF Q ΪΟ N 0:75). PIQRyQDiDTKTLiKTlTRlHDlBPPQOVSSRPRVAGLDFÍPRVQSVRTLSKMDCpLÂVYQQ ILTSLQSRSVVQIANDLANLRALLIILLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHST EVVALSR.LKAALQDMLRQ.LDRNPGC ÍSBQ ÍD NO:76), MPiQRVQDDTKTLlKTflTRlNDÍSPPí^VSSRPRVAGLOFiFRVQSVRTLSKAlDQTLAVY QQILTSLQSRSVVQLANDLANLRÂLLRLIASÂRSCFVPRÂRGSDTIKOLGNAfLRÂSV miEVVAURLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ IO NO:??). PIQRVQDDTKTUKTIITRÍMDÍSPPQGVSSRPRVAGLDFTPRYQSVRTLSGMDQILATYQQÍ LTSLQSRSVVQIANDLANLRALLRLLASAKSCPVPRAROSDTIKGLGNVLRASVHST EVVALSRLQ(mQDMI.WQÍi>LNPGC (SBQ 10X0:78). MPlQRVQDDTKTLiKTUTRINDTSPPQGVSSRPRVAGLDFlPRVQSVRTLSGMDQlLATYQ QiLTSLQSRSWQiAMDLANLRALLRLLASAKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLJRASVHS TEWAL$Rl.Qt3$LQDMLWQLDLNPGC TSEQ iD NO:79). PÍQRVQDDTK.TyKTlfTRÍNDlSPPQGVSSR.PRVAGLDFÍPRVQSVRTLSCjMI>QÍLATYQQl

LTSl.QSRSVVQlANDI.AMl,RAU,RU,ASAKSCH'LPWASGLBTLDSLCKjVLPASCfS'ST RVVALSRLKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ 1DNO:80). MI>IQR.VQDDTKTUKTilTRlNDíSPPQCjVSSRPRVAGI.DFlPRVQSVRTf..SGMtX)lI..ATYQ Qil.l‘SLQSRSVVQiANDl.ANLR.Al.LRi.LASAKjSCHLPWASGQTRDSt.GCm.fiASGY STEWALSRIJKAALQDMLRQLDRNPGC (SEQ 10 NO:8i>.

PiQKVQDDTKTMKTIVTRÍNDISPPQGVSSRFRVAGLDFIPRVQSVRTl.SGMDOíLATYQ

QiLTSLQSR'NV1QTSNDLENT.RDLLHVIAFSKSCPVPRARGSDTIKGLGNVLRASVHST EVVALSRLRAALQDMLRQI.DRNPGC fSEQ ÍD NO:82>

MPIQ^.VQCH>1'KnJK.TIVTRINDlSPPQCiVSSRPRVA0LDF!PRVQSVRTLSGMtX^LATY

QQ.ÍLTSl.<^RNVIQjS>iDLENÍ.RDLLHVLÂFSKSCPVPRARGSDTiKGiXiNVl,RASVH STÍÍVVAlSRLK.AAl.QOKlí..RQl,DRNPGCfSK0 ID NO:83) P}QRVODDTKTyKTllTRiNDlSPPQOVSSRÍ»RVACíLDFIPÍiVQSVFm,SOMDOi{..ATYOQl LTS’LQS8NiVIQISNDL-RN’LRDl.LHVl,AFSKSCHLPWAS<.>Lfi‘TLDSLCK.>VLKASC}YS'l^' VV ALSRLK AA LQDMLRQLDRNPGC (SEQ 1Q NO:S4t

MPfQRVQDDTÍ01,lKTlíTRINDlSPPQGVSSRPRVAClLDFlPRVQSVRTLSGMDQiLATYQ

QlLTSLQSRNVIQISNDLIM.RDLLHVl-AFSKS(.';HLPWASGL£TLDSLGCiVLEASGYS TF-VVALSRLKAALQD'MI.RQLDRNPGC (SEQ ID NO:85} KCNTATCATQRLANFLvRSSNNLGPVlPPTOVGSETY (SEQ sd m:mr, peq m no:8?);. KO^TATQATQRLAMRVttSSN^FQPSLFFT^-SSÍSÈTYpEQ ÍO NG:8S)í,

GmtsmML&amp;Tnm?mFm¥mTMmmM> (seq sq no:s&amp;);

CmSTeVIQKLSQELHKLQTYRRTOTeSGTP {SEQ SD ROrSO):; KC^TATCVLSRLSQEÍH:RLQsWPRT^T0S^T¥ (SEQ ID NO:Ô1>. X’-Xaa!‘-Cp2-Ásas-Thr:-Á ia5-!'hi^-Çys^Áía5·a! â-Àfg:! 1-Leu1, YAks ^-Ãsa14%s15~Leií!ft~ Víbs Xá&amp;^-A^^-Pk?^" Xtf1*- Xaa^' Xaâ26» XaâSí- Xar^ Xte^-Tfer3*- 'Xaír^-VíiI^-Gly^-Ser^-Asii^-Thr^-Tyr^^X (SEQ ÍD NO:92) C^TATÇATQRLAN:FL¥RSSNf4L0PVLPFm¥0SMn'-^H2 {SEQ: ID RCfeS®) iKGMTATC^TQRiANELyRSSKRLSP^LPPTMVSSNTY^Hig (SEQ §0 NO:â4) CMTATCATQRLA^FLTOSSKNLGFVIFPTNYQSKTY-MH^ (SEQ: !D NKfcSS) K.GMTATCATQRIAN:FLYRSSN:NLQPKL:PPTO¥QSMTY-NH2 (SEQ ÍD M>M) eRTATCATQRLA^FLVRSSNRLQPKLPPTWQS^TY-NH^ (SEQ: IS NOcS?) K.ÇRTATCATQRIANFLVRS:SN:NLGPVLPPTKVGíSNTY4«IN:2 (SEQ §0 W&amp;M) C»ATCATQRIAMFL¥RSSN^LGPVLPPTK¥GSMT¥^IH2 (SEQ ID Mkm} :K€MTATÇATQRLÃREL¥HSSN:NFGRLPPINVSSMTY-^H2':(SE0 ÍD MQ:10Q| CMTATCATQRLA^FLyMSSNMFfíPSLPPTOyQS^TY-NHg (SEQ ÍD NO: 181* C«ATÇATQRLAN:FL¥«SS:KN:FeP1LPPTNVGSÍ4W.NH2pEQ ID NQ:102> OSÈlATCATQRLANFLVEISSN^FQPKLPPTNYQSMTY-RHg (SEQ ÍD NO; 1Õ3) SRTATÇATQRlANflVHSS«E8PILPFmVSSRIY--MH2 (SEQ IS N0:1Õ4> C^TATCATQPLANFLySSSNREKPiLPPTNVGSNTY-NHg (SEQ ÍD NOAOS) CRIATOWQElANFLMSSNRESKIlPFIMVQSÍfrY-^Kg (SEQ: ID 140:188) cmAT^TcmAmLmsmup^miw^nmiGmj^^mi csêq sq ro:io?> C^TATCATQRLANFLyttSS^FGPSLKPBiyQS^TY-N^ (SEQ: ID NO 0¾ QOTAICATQRLANFLWttSSN^FGPfLPKTOyQS^TY··^^ (SEQ: ID NO 10S|

LISTA DE SEQUÊNCIAS <110> AMYLIN PHARMACEUTICALS, INC.

<120> LEPITINAS ALTAMENTE SOLÚVEIS <13 0 > 1317W01 <140> PCT/US2011/053 774 <141> 28)09)2011 <150> 61/422.091 <151> 10)12)2010 <150> 61/387.402 <151> 28)09)2010 <16 0 > 164 <170> Patentln versão 3.5 < 210 > 1 <211> 146 <212> PRT <213> Mus sp. <220> <221> MOD_RES <222> o28a. ,o28a <223> Pode estar presente ou não <400> 1

Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 S 10 ' 15 ile val Thr Arg ile Asn Asp ile ser Hís Thr Gin ser vai ser ser 20 25 30

Lys Gin Lys val Thr Glv Leu Asp Phe ile pro Gly Leu His pro ile 35 40 45

Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hís val Leu Ala Phe ser Lys ser cys 85 90 95 Hís Leu Pro Gin Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu ser Leu Gly Gly 100 105 110

Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Ara 115 120 125

Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140

Gly Cys 145 <210> 2 <211> 146 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 2 vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ala 20 25 30

Lys Gin Arg Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45

Leu ser Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin vai 50 55 60

Leu Thr ser Leu pro ser Gin Asn vai Leu Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys '85 90 95

Ser Leu Pro Gin Thr Ser Gly Leu Gin Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly 100 105 110 val Leu Glu Ala ser Leu Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp ile Leu Gin Gin Leu Asp val ser pro 130 135 140

Glu Cys 145 <210> 3 < 211> 145 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 3 vai ργο He Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 1 5 10 15 lie Vai Thr Aro Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Ser Vai Ser Ala Lys 20 25 30

Gin Arg Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu 35 40 45 ser Leu ser lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin vai Leu 50 55 60

Thr ser Leu Pro ser Gin Asn vai Leu Gin ile Ala Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Ser 85 90 95

Leu Pro Gin Thr Ser Gly Leu Gin Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly Vai 100 105 110

Leu Glu Ala ser Leu Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Gin Gly ser Leu Gin Asp ile Leu Gin Gin Leu Asp vai ser Pro Glu 130 135 140

Cys 145 <210> 4 <211> 147 <212> PRT <213> Mus sp. <220>

<221> MOD RES <222> 0 290 . .0 290 <223> Pode estar presente ou não <400> 4

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 15 10 15

Thr Tle Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30 ser lvs Gin lvs vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Glv Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp

65 70 75 SG

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 cys His Leu Pro Gin Ala ser Glv Leu Glu Thr Leu Glu ser Leu Glv 100 105 110

Glv vai Leu Glu Ala ser Glv Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser 130 135 140

Pro Gly Cys 145 <21Q> 5 <211> 147 <212 > PRT <213> Mus sp. < 4 0 0 > 5

Met vai Pro rle Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys 15 10 15

Thr rle vai Thr Arg Tle Asn Asp Tle ser m's Thr Gin ser vai ser 20 25 30

Ala Lys Gin Arg Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tvr Gin Gin 50 55 60 val Leu Thr ser Leu Pro ser Gin Asn vai Leu Gin ile Ala Asn aso 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hts Leu Leu Ala Phe ser Lys ser 85 90 95 cvs ser Leu Pro Gin Thr ser Gly Leu Gin Lys Pro Glu ser Leu Asp 100 105 110

Gly Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser 115 120 125

Ara Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Val Ser 130 135 140

Pro Glu Cvs 145 < 210 > 6 <211> 146 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 6

Met vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys

15 10 IS

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr ser vai ser Ala 20 25 30

Lys Çln Arg Vai Thr Çly Leu Asp Phe Ile Pro Çly Leu His Pro Ile 35 40 45

Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin Vai 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gin Asn Vai Leu Gin Ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 S0

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe ser Lys ser cvs 85 90 95 ser Leu pro Gin Thr ser Gly Leu Gin lvs pro Glu ser Leu Asp Gly 100 105 110

Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Val Ser Pro 130 135 140

Glu cys 145 <210> 7 <211> 146 <212> PRT <213> Sus sp, <4QQ> 7 vai Pro ile rrp Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 15 10 15

Tle vai Thr Arg lie ser Asp ile ser His Met Gin ser vai ser ser 20 25 30

Lys Gin Arg vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro vai 35 40 45

Leu Ser Leu Ser Lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin Ile 50 55 Θ0

Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala ser ser Lys ser cys 85 90 95 pro Leu Pro Gin Ala Arg Ala Leu Glu Thr Leu Glu ser Leu Gly Gly 100 105 110

Vai Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140

Gly cys 145 <210> 8 < 211> 14 7 <212> PRT <213> Sus sp. <400> 8

Met Vai Pro lie Trp Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu lie Lys 1 5 10 15

Thr lie vai Thr Arg ile ser Asp lie ser His Met Gin ser vai ser 20 25 30 ser Lys Gin Arg vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu m's Pro 35 40 45 vai Leu ser Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala ile Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ser Ser Lys Ser 85 90 95

Cys Pro Leu Pro Gin Ala Arg Ala Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly 100 105 110

Gly val Leu Glu Ala ser Leu Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu ser 130 ' 135 140

Pro Gly Cys 145 <210> 9 <211> 146 <212> PRT <213> Bos sp. <220>

<221> MOD RES <222> 0 280 . .0 280 <223> Pode estar presente ou não <400> 9

Vai Pro Ile Cys Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser 20 25 30

Lys Gin Arg vai Thr Glv Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro Leu 35 ' 40 45

Leu ser Leu ser Lys wet Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Pro Ser Arg Asn Vai Vai Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 ' 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ala Ser Lys Ser Cys 85 90 95

Pro Leu Pro Gin vai Arg Ala Leu Glu ser Leu Glu ser Leu Gly vai 100 105 110

Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 1.25

Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 ‘ 1.40

Gly Cys 145 <210> 10 <211> 147 <212> PRT <213> Bos sp. <22Q>

<221> MOD_RES <222> 0 290 . .0 290 <223> Pode estar presente ou não < 4 0 0 > 10

Met vai Pro ile cys Lys vai Gin Asp Asp Thr lvs Thr Leu ile lvs 1 5 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30

Ser Lvs Gin Arg Vai Thr Glv Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Leu Leu ser Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala ile Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Leu Pro ser Arg Asn vai vai Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Ala Ser Lys Ser 85 90 95

Cys Pro Leu Pro Gin Vai Arg Ala Leu Glu Ser Leu Glu Ser Leu Gly 100 105 110 val val Leu Glu Ala ser Leu Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Gly Cys 145

<210> 11 <211> 167 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11

Met His Trp Gly The Leu cys Gly Phe Leu Trp Leu Trp Pro Tyr Leu 15 10 15

Phe Tyr Vai Gin Ala Vai Pro lie Gin Lvs Vai Gin Asp Asp Thr Lys 20 25 30

Thr Leu Ile Lys Thr lie Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr 35 40 45

Gin ser vai ser ser Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro 50 55 60

Gly Leu His Pro ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala 65 70 75 80

Vai Tyr Gin Gin Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin S5 90 95

Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala 100 105 110

Phe ser Lys ser cys His Leu Pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu 115 120 125

Asp ser Leu Gly Gly vai Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai 130 135 140

Vai Ala Leu Ser Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin 145 150 155 160

Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys 165

<210> 12 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD RES <222> 0 270 ..0 270 <223> Thr ou Ala <220>

<221> MOD_RES <222> 0 280 . .0 280 <223> Pode estar presente ou não <4Q0> 12

Val Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 15 10 15 ile val Thr Arg ile Asn Asp ile ser His xaa Gin ser vai ser ser 20 25 30 lvs Gin lys val Thr Gly Leu Asp Phe ile pro Gly Leu His pro ile 35 40 45

Leu Thr Leu $er Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu m's val Leu Ala Phe ser Lys ser cys 85 90 95

His Leu pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly 100 105 110 val Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu val val Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140

Glv Cys 145

< 210 > 13 <21i> 147 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> 0 280 ,.0 280 <223> Thr ou Ala <220>

<221> MOD_RES <222> 0 290 . .0 290 <223> Pode estar presente ou não <4QQ> 13

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 15 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Gin Ser Vai Ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met Pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95

Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Gly val Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Gly Cys 145

<210> 14 <211> 146 <212> PRT <213> Macaca mulatta <400> 14 vai Pro ile Gin Lys val Gin ser Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 15 10 15 ile val Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser val ser ser 20 25 30

Lys Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Val 35 40 45

Leu Thr Leu Ser Gin Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu ile Asn Leu pro ser Arg Asn val ile Gin ile ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe ser Lys ser cys 8S 90 9S

His Leu Pro Leu Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu ser Leu Gly Asp 100 10S 110

Val Leu Glu Ala Ser Leu Tvr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140

Gly cys 145

<21Q> 15 <211> 147 <212> PRT <213> Macaca mulatta <4 0 0 > 15

Met val pro ile Gin Lys val Gin ser Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys 15 10 15

Thr ile val Thr Arg He Asn Asp He ser His Thr Gin ser val ser 20 25 30

Ser Lys Gin Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Val Leu Thr Leu Ser Gin Met Asp Gin Thr Leu Ala Ile Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu ile Asn Leu Pro ser Arg Asn val ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe ser Lys ser 85 90 95

Cys His Leu Pro Leu Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly 100 105 110

Asp Val Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Gly cys 145 <210> 16 <211> 146

<212 > PRT <213> Rattus sp. <400> 16 vai Pro ile His Lys vai Gin Asp Asp Thr lvs Thr Leu ile lvs Thr I 5 10 15 ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser Ala 20 25 30

Arg Gin Arg Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45

Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Pro ser Gin Asn vai Leu Gin ile Ala His Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe ser Lys ser cys 85 90 95

Ser Leu Pro Gin Thr Arg Gly Leu Gin Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly 100 105 110

Vai Leu Glu Ala Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Ara 115 120 125

Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser pro 130 135 140

Glu cys 145 <21Q> 17 <211> 147

< 212 > PRT <213> Rattus sp. < 4 0 0 > 17

Met Vai Pro Ile His Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 1 5 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin set- vai ser 20 25 30

Ala Arg Gin Arg vai Thr Glv Leu Asp Phe ile Pro Glv Leu His Pro 35 40 45 ile Leu ser Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gin Asn vai Leu Gin Ile Ala His Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 cys ser Leu Pro Gin Thr Arg Gly Leu Gin Lys Pro Glu ser Leu Asp 100 105 110

Gly vai Leu Glu Ala ser Leu Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser 130 135 140

Pro Glu Cys 145

<21Q> 18 <211> 145 <212> PRT <213> Ornithorhynchus anatínus < 4 0 0 > 18

He ser He Glu Lys He Gin Ala Asp Thr Lys Thr Leu Thr Lys Thr 15 10 15

He Ile Thr Arq Ile Ile Gin Leu Ser Thr Gin Asn Gly Vai Ser Thr 20 25 30

Asp Gin Arg Vai Ser Gly Leu Asp Phe lie Pro Gly Asn Gin Gin Phe 35 40 45

Gin Asn Leu Ala Asp Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu ser ser Leu Pro Met Pro Asp Arg Thr Gin He ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Ser Leu Phe Ala Leu Leu Ala Thr Leu Lys Asn Cys 85 90 95 pro Phe Thr Arg ser Asp Gly Leu Asp Thr Met Glu ile Trp Gly Gly 100 105 110 ile vai Glu Glu ser Leu Tyr ser Thr Glu vai vai Thr Leu Asp Arg 115 120 125

Leu Arg Lys Ser Leu Lys Asn Ile Glu Lys Gin Leu Asp Hls Ile Gin 130 135 140

Gly 145

<210> 19 <211> 166 <212> PRT <213> Ornithorhynchus anatinus <4QQ> 19

Met Arg Cys IIe Leu Leu Tyr Gly Phe Leu Cys Vai Trp Gln His Leu 1 ' 5 10 15

Tyr Tyr ser His Pro ile ser lie Glu Lys lie Gin Ala Asp Thr lvs 20 25 ' 30

Thr Leu Thr Lys Thr ile ile Thr Arg ile ile Gin Leu ser Thr Gin 35 40 ~ 45

Asn Gly Vai Ser Thr Asp Gin Arg Vai Ser Gly Leu Asp Phe Ile Pro 50 55 60

Gly Asn Gin Gin Phe Gin Asn Leu Ala Asp Met Asp Gin Thr Leu Ala 65 70 75 80 val Tyr Gin Gin ile Leu ser ser Leu pro Met pro Asp Arg Thr Gin 85 90 95 ile ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg ser Leu Phe Ala Leu Leu Ala 100 105 110

Thr Leu Lys Asn Cys Pro Phe Thr Arg Ser Asp Gly Leu Asp Thr Met 115 120 125

Glu Ile Trp Gly Gly Ile Val Glu Glu Ser Leu Tyr Ser Thr Glu Val 130 135 140 val Thr Leu Asp Arg Leu Arg Lys ser Leu Lys Asn ile Glu lvs Gin 145 150 155 160

Leu Asp His Ile Gin Gly 165

<210> 20 < 211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 vai pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 1 5 10 15 ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser ser 20 25 30

Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45

Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr ser Met pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arq Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys '85 90 ' 95 '

His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110

Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly ser leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser pro 130 135 140

Gly cys 145

<210> 21 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <4QQ> 21 vai pro lie Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr lvs Thr Leu lie Lys Thr 15 10 15

Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Hls Ala Gin Ser Vai Ser Ser 20 25 30 lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile pro Gly Leu His pro ile 35 40 45

Leu Thr Leu ser Lys «et Asp Gin Thr Leu Ala vai Tvr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95

His Leu Pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly 100 105 110 val Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<210> 22 <211> 145 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 1 5' 10 15

Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Ser Vai Ser Ser Lys 20 25 30

Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu 35 40 45

Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr ser Met Pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His 05 90 95

Leu pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly vai 100 105 110

Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser pro Gly 130 135 140

Cys 145

<21Q> 23 <211> 145 <212 > PRT <213> Homo sapiens <400> 23

Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu lie Lys Thr 15 10 15 lie val Thr Ara ile Asn Asp ile ser His Ala ser vai ser ser Lys 20 2$ 30

Gin Lys val Thr Gly Leu Asp Phe lie pro Gly Leu His pro lie Leu 35 40 45

Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His 85 90 ' 95

Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly Val 100 105 110

Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu 115 120 125

Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro Gly 130 135 140 cyj 145

<210> 24 <211> 147 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24

Met vai pro lie Gin lvs vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile lvs 15 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95

Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Gly Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140 pro Gly cys 145

<210> 25 <211> 147 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25

Met vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr lvs Thr Leu ile lvs I 5 10 15

Thr Tle vai Thr Arg ile Asn Asp lie ser His Ala Gin ser vai ser 20 25 30

Ser Lvs Gin Lys Vai Thr Glv Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai ryr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 05 90 95

Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Gly Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140 pro Gly cys 145

< 210 > 2 6 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <4QQ> 26

Met vai Pr o ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu He Lys 15 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr ser vai ser ser 20 25 30

Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45

Leu Thr Leu Ser Lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin Ile 50 55 50

Leu Thr ser Met pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys 85 90 95

His Leu pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Glv Glv 100 105 110

Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<210> 27 < 211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 15 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Ala Ser Vai Ser Ser 20 25 30

Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro ile 35 40 45

Leu Thr Leu ser lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr ser Met Pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95

His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 val Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<210> 28 <211> 145 <212> PRT <213> Desconhecido <220> <223> Descrição de Desconhecido: Polipéptido de lepitina de foca <4QQ> 28 pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr ile 15 10 15 ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Gly vai cys ser Arg 20 25 30

Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe lie Pro Arg Vai Gin Ser Vai Arg 35 40 ' 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin lie Leu Ala Thr Tyr Gin Gin lie Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Ara ser vai vai Gin ile Ala Asn aso Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lvs ser cys Pro 85 90 95

Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr lie Lys Gly Leu Gly Asn Vai 100 105 110

Leu Arq Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140 cys 145 <210> 29 <211> 145

<212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 29

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 1 5 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser Arg 20 25 30

Pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai Arg 35 40 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cvs pro 85 90 95 vai pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Glv Leu Glv Asn vai 100 105 110

Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140 cys 145

<210 > 3 0 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4QQ> 30 ργο ile Gin Arg vai Gin Asp Asp The Lys Thr Leu ile Lys Thr ile 15 10 15 lie Thr Arg lie Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser Arg 20 25 30

Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai Arg 35 40 45

Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin He Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Pro 85 90 95 vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Vai 100 105 110

Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg Leu 115 120 125

Lvs Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140 cys 145

<210> 31 <211> 146 <212> PRT <213> Desconhecido <220> <223> Descrição de Desconhecido: Polipéptido de lepitina de foca <4 0 0 > 31

Met Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser 20 25 30

Arg Pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai 35 40 45

Arg Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu 65 70 ‘ 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys ‘85 ‘90 95

Pro vai Pro Arg Ala Arg Glv ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 105 110 vai Leu Arg Ala ser vai His ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Xl5 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro ISO 135 140

Gly Cys 145

<210> 32 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 32

Met Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 S 10 15 ile ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Gly vai cys ser 20 25 30

Arg pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile pro Arg vai Gin ser vai 35 40 45

Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hls Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys ' 85 90 95 pro val Pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr Tle lvs Gly Leu Gly Asn 100 105 110

Val Leu Arg Ala Ser Val Hls Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<21Q> 33 <211> 146 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 33

Met ργο ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 15 10 15 ile ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser pro Pro Gin Gly vai ser ser 20 25 30

Arg pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile pro Arg vai Gin ser vai 35 40 45

Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Ara Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 " 75 80

Glu Asn Leu Arq Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys ' 85 90 95 pro vai pro Arq Ala Arq Gly ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 ‘ 105 ' 110

Vai Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gly cys 145

<210 > 34 <211> 3 74 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 34

Met Asp Lys Thr His Thr cys Pro Pro cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 1 ' 5 10 15

Gly Gly Pro ser vai Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 20 25 30

Met xle ser Arg Thr Pro Glu vai Thr cys vai vai vai Asp vai ser 35 40 45

His Glu Asp Pro Glu Vai Lys Phe Asn Trp Tyr Vai Asp Gly Vai Glu SO 55 60 val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn ser Thr 65 70 75 80

Tyr Arg val val ser val Leu Thr val Leu His Gin asd Trp Leu Asn 85 90 95

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 100 101 110

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 115 120 125 val Tyr Thr Leu Pro Pro ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin val 130 135 140 ser Leu Thr cys Leu val Lys Gly Phe Tyr Pro ser Asp ile Ala val 145 150 155 160

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 165 170 175

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 180 185 190 val Asp Lys ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn val Phe ser cvs ser val 195 200 205

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys ser Leu ser Leu 210 215 220

Ser Pro Glv Lys Val Pro Ile Gin Lys Val Gin Asp Asp Thr Lys Thr 225 230 235 240

Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin 245 ' 250 255 ser val ser ser Lys Gin Lys val Thr Gly Leu Asp Phe rle Pro Glv 260 265 270

Leu His Pro ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala val 275 280 285

Tyr Gin Gin Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gin Ile 290 295 300 ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His val Leu Ala Phe 305 310 315 320 ser Lys ser cys His Leu pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp 325 330 335

Ser Leu Gly Gly val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val 340 345 350

Ala Leu Ser Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu 355 360 365

Asp Leu Ser Pro Gly Cys 370

<210 > 3 5 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 35

Met vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys 1 S 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asπ Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu Hi s Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met Pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 S0

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 05 90 95

Cys His Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Gly Cys 145

<210> 36 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 36

Met Vai Pro Ile Gin Lvs Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu lie Lys 1 5 10 15

Thr Ile Vai Thr Ara Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 " 25 30 ser Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His pro ' 35 ' 40 45' ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met Pro ser Arg Asn vai ile Gin ile cys Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95

Cys Bis Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Gly val Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Gly Cys 145 <21Q> 37 <211> 147

< 212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 37

Met vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile lvs 1 5 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser m's Thr Gin ser vai ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Glu Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile leu Thr ser Met pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp leu leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser 85 90 95

Cvs His Leu Pro Gin Ala Ser Glv Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly 100 ' 105 110

Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Ara Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser 130 ' 135 140 pro Gly cys 145

< 210 > 3 8 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 38

Met Val Pro Ile Gin Lys Val Gin Asp Asp Thr Lvs Thr Leu Ile Lys 1 5 10 15

Thr Ile Val Thr Ara Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Val Ser 20 ‘ 25 30 ser Lys Gin Lys val Thr Gly Leu Glu Phe ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 i‘íe Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Het Pro ser Arg Asn vai lie Gin lie ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95

Cys Ser Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly 100 105 110

Glu val Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Glu Cys 145

<210 > 3 9 < 211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 39

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 1 5 10 15

Thr ile vai Thr Ara ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser 20 25 30 ser lvs Gin lvs vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Glv Leu His Pro ' 35 ' 40 45'

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 ' 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser 85 90 95

Cys Ser Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Gly Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser 130 135 140

Pro Glu cys 145

<210> 40 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4 0 0 > 4 0

Met vai Pro tle Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Tle Lys 15 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser Hls Thr Gin ser vai ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tvr Gin Gin 50 55 60

Tle Leu Thr ser Met Pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hls vai Leu Ala Phe ser Lys ser S5 90 95 Çys Ser Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Glu Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Tle Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140 pro Glu cys 145

<210> 41 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 41

Met vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile lvs 15 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met Pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser L.ys Ser 85 90 95

Cys His Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser L.eu Gly 100 105 110

Glu val Leu Glu Ala ser Gly Tvr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Glu Cys 145

<210> 42 < 211> 14 7 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 42

Met vai Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu lie Lys 1 S 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser m's Thr Gin ser vai ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met pro ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser âS 90 95

Cys Ser Leu Pro Gin Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Gly Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Ara Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140 pro Glu cvs 145

< 210 > 4 3 <211> 147 <212> PRT <213> Sequencia artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 43

Met vai pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys 1 5 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hís vai Leu Ala Phe ser Lys ser 85 90 95 cys Hís Leu Pro Gin Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly 100 105 110

Glu Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Vai Ser 130 135 140

Pro Glu cvs 145

<210 > 44 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4QQ> 44

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 1 5 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser 20 25 30 ser Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser 85 90 95 cvs ser Leu pro Gin Thr ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly 100 105 110

Gly vai Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Ara Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu ser 130 135 140

Pro Glu Cys 145

<21Q> 45 <211> 147 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 45

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 1 5 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30 ser Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 ' 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 cvs ser Leu Pro Gin Ala ser Glv Leu Glu Thr Leu Glu ser Leu Gly 100 ' 105 110

Glu val Leu Glu Ala ser Glv Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 ' 120 125

Arg Leu Gin Glv ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu ser 130 ’ 135 140

Pro Glu Cys 145

<210> 46 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4 0 0 > 4 6

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 15 10 15

Thr ile vai Thr Arg lie Asn Asp lie ser His Thr Gin ser vai ser 20 25 30 ser lvs Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu Hís Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 $0

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 cys His Leu pro Gin Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly 100 105 110

Gly vai Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser 130 135 140

Pro Glu Cys 145

<21Q> 47 <211> 147 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 47

Met vai pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr uys Thr Leu ile Lys 1 5 10 15

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser 20 25 30 ser Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile pro Gly Leu m's pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arq Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser 85' 90 95 cys His Leu pro Gin Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly 100 105 110

Gly Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Vai Ser 130 135 140 pro Glu cys 145

< 210 > 4 8 <211> 147 <212> PRT <213> Sequencia artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 48

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 15 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 cys ser Leu Pro Gin Thr ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly 100 105 110

Gly vai Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Ile Leu Gin Gin Leu Asp Vai Ser 130 135 140

Pro Glu Cys 145

<210> 49 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4 0 0 > 4 9

Met val Pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys 1 5 10 ' 15 '

Thr ile val Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser val ser 20 25 30

Ser Lys Gin Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Val Tyr Gin Gin 50 55 60 ile Leu Thr ser Met pro ser Arg Asn val ile Gin ile ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Ara Asp Leu Leu His val Leu Ala Phe ser lvs ser 85 90 95

Cys Ser Leu Pro Gin Thr Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly 100 105 110

Glu Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Ser 130 135 140

Pro Glu cys 145

< 210 > 50 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 50

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys

1 S 10 IS

Thr ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser 20 25 30 ser Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro 35 40 45

Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 ‘ 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser 85 90 95 cvs His Leu Pro Gin Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly 100 105 110

Glu Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser 130 135 140

Pro Gly cys 145

< 210 > 51 <211> 147 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4 0 0 > 51

Met Vai Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys 1 5 10 15

Thr Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Hís Thr Gin Ser Vai Ser 20 25 30 ser Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu Hís Pro 35 40 45 ile Leu Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin 50 55 60

Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp 65 70 75 80

Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hís Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser 85 90 95 cys His Leu Pro Gin Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly 100 105 110

Glu vai Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser 115 120 125

Arg Leu Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Gin Gin Leu Asp Leu Ser 130 135 140

Pro Glu Cys 145

<210> 52 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 52

Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 15 10 15 vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Gly vai cys ser Arg 20 25 3ò pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai Arg 35 40 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu Ala

65 70 75 SG

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys Pro 85 90 95 val Pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Gly Asn vai 100 105 110

Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140 cys 145

<210> 53 < 211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 53

Met Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5' 10 15 ile vai Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Gly vai cys ser 20 25 30

Arg Pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai 35 40 45

Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60 leu Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys 85 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 105 110

Vai leu Arg Ala Ser Vai Hi s Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Ara Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gly cys 145

<21Q> 54 <211> 145 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 54

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 1 5 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser Arg 20 25 30

Pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai Arg 35 40 45

Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70* 75 80

Asn Leu Arq Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys Pro 85 ‘ 90 95 val Pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Gly Asn vai 100 105 110

Leu Arg Ala ser val His ser Thr Glu val val Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Het Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140 cys 145

< 210 > 55 <211> 146 <212> PRT <213> Sequencia artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 55

Met Pro Ile Çln Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr

1 5 10 IS ile ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Gly vai cys ser 20 25 30

Arg pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile pro Arg vai Gin ser vai 35 40 45

Arg Thr Leu Ser Lvs Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin Ile 50 55 50

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu 55 70 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys 85 90 95 pro vai pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Glv Leu Glv Asn 100 105 110

Vai Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gly Cys 145

< 210 > 56 <211> 145 <212> PRT <213> Sequencia artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 56

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 1 " 5 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser Arg 20 25 30

Pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai Arg 35 40 45

Thr Leu ser Gly Met Asp Gin Tle Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys Pro 85 90 95

Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Vai 100 105 110

Leu Arg Ala ser vai m's ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Asn Pro Gly 130 135 140

Cys 145

< 210 > 57 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 57

Met Pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 15 10 15

Ila Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser 20‘ 25 30

Arg Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai 35 40 45

Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 80

Ala Asn Leu Arq Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys ' 85 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 105 110

Vai Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Asn Pro 130 135 140

Gly cys 145

< 210 > 58 <211> 145 <212> PRT <213> Sequencia airtificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 58 pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lvs Thr Leu ile lvs Thr ile 15 1Õ 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Hls Thr Gin Ser Vai Ser Ser Lys 20 25 30

Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu Hís Pro Ile Leu 35 40 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys Pro 85 90 95

Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Vai 100 105 110

Leu Arg Ala ser vai His ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Glv 130 135 140

Cys 145

< 210 > 5 9 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 59

Met Pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser 20 25 30

Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu Hi s Pro Ile 35 40 45

Leu Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 " 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys 85 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 105 110 val Leu Arg Ala ser vai His ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 ' 140

Gly cys 145

<210> 60 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 60

Pro ΙΊή ¢1 η Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Xle Lys Thr Ile 1 5 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser Arg 20 25 30 pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile pro Arg vai Gin ser vai Arg 35 40 45

Thr Leu ser Glv Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys His 85 90 95

Leu Pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly vai 100 105 110

Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140

Cys 145

<21Q> 61 <211> 146 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 61

Met Pro Ile Gira Arq Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 ile ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Glv vai cys ser 20 25 30

Arg Pro Arg vai Ala Glv Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai 35 40 45

Arg Thr Leu $er Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys 85 90 95

Hls Leu pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly 100 105 110

Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Ara Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 " 140

Gly cys 145

< 210 > 62 <211> 145 <212> PRT <213> Sequencia artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 62

Pro Ile Gira Lys Vai Gira Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 1 5 10 15 vai Thr Arg ile asn Asp ile ser pro Pro Gin Gly vai cys ser Arg 20 25 30

Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai Arg 35 40 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys Pro 85 90 95

Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Vai 100 105 110

Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arq Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arq Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 ' 140

CVS 145

< 210 > 63 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 63

Met Pro Ile Gin Lys Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser 20 25 30

Arg pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile pro Ara vai Gin ser vai 35 40 45

Arg Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tvr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 60

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hls Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys S5 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn L0Ò ' 105 110 vai Leu Arg Ala ser vai Hls ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Ara Asn Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<210> 64 <211> 145 <212> PRT <213> S0C[U.BIlCÍcl artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 64

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 15 1Ô 15 ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser His Thr Gin ser vai ser ser Lys ' 20 25 30

Gin Lvs vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro ile Leu 35 40 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys Pro 85 90 95 vai Pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Gly Asn vai 100 105 110

Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Ara Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 " 140

Cys 145

<21Q> 65 <211> 146 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 65

Met Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser 20 25 30

Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro ile 35 40 45

Leu Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tvr Gin Gin ile 50 55 60 '

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95

Pro vai Pro Arg Ala Arg Glv ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 105 110 vai Leu Arg Ala ser vai His ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gl y Çys 145

<21Q> 66 <211> 145 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 66

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile

1 5 10 IS ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Gly vai cys ser Arg 20 25 30 pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile pro Arg vai Gin ser vai Arg 35 40 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu Glu 65 70‘ 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys m's 85 90 95

Leu pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly vai 100 105 110

Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 ' 140

Cys 145

<210> 67 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 67

Met Pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 15 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Cys Ser 20 25 30

Arg Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe lie Pro Arg Vai Gin Ser Vai 35 40 ' 45

Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin lie 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys 85 90 95

His Leu Pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly 100 105 110

Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Ara 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gly cys 145

<210 > 6 8 < 211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 68

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 1 5 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser Lys 20 25 30

Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro ile Leu 35 40 45

Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arq ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp leu Ala 65 70' 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys Pro 85 90 95 val pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Gly Asn vai 100 105 110

Leu Arg Ala ser val His ser Thr Glu val val Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Gin Gly Ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Asn Pro Gly 130 135 140

Cys 145

<210> 69 < 211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipêptido sintético <400> 69

Met ργο He Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu He Lys Thr 15 10 15 ile ile Thr Arg ile Asn Asp He ser His Thr G‘ln ser vai ser ser 20 25 30

Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe lie Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45

Leu Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys 85 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 105 110

Vai Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Asn Pro 130 135 140

Gly cys 145

<210> 70 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 70 ργο ile Gin Arg vai Gin asd Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr ile 15 10 15

Ile Thr Arq Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser Lys 20 25 30

Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu 35 40 45

Thr Leu ser Glv Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys His 85 90 95

Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly Vai 100 105 110

Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn pro Gly 130 135 140

Cys 145

<210> 71 < 211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 71

Met Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser 20 25 30

Lys Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile Pro Gly Leu His Pro ile 35 40 45

Leu Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Ara Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu 65 70 " 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Ara Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys S5 " 90 95

His Leu Pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly 100 105 110 vai Leu Glu Ala ser Gly Tvr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 ' 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<210> 72 < 211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 72

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 15 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser Lys 20 25 30

Gin Lys vai Thr Gly Leu Asp Phe ile pro Gly Leu His Pro ile Leu 35 ' 40 45

Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu Glu

65 70 75 SO

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His 85 90 95

Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Glv Glv Vai 100 105 11Ó

Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn pro Gly 130 135 140

Cys 145

<210> 73 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 73

Met Pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 1 S 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gin Ser Vai Ser Ser 20 25 30

Lys Gin Lys Vai Thr Gly Leu Asp Phe lie Pro Gly Leu His Pro lie 35 40 45

Leu Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys " 85 90 95

His Leu pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly 100 105 110 vai Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Ara 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Ara Asn Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<210> 74 <211> 145 <212> PRT <213> Sequencia artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 74 ργο ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr ile 15 10 15 val Thr Arg ile Asn Asp ile ser pro pro Gin Gly vai ser ser Arg 20 25 30

Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gin Ser Val Arg 35 40 45

Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg ser val val Gin ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys Pro 85 90 ' 95

Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Val 100 105 110

Leu Arg Ala Ser Val His Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn pro Glv 130 135 140

Cys 145

< 210 > 75 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 75

Met Pro lie Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu lie Lys Thr 1 5 10 IS

Ile Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser 20 25 30

Arg Pro Arg Vai Ala Glv Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai 35 40 45

Arg Thr Leu ser Glv Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys 85 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lvs Gly Leu Gly Asn 100 105 110 val Leu Arg Ala ser vai His ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Lvs Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 150 135 140

Gly Cys 145

<210> 76 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4QQ> 76

Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 1 5 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser Arg 20 25 30

Pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Ara vai Gin ser vai Arg 35 40 ~ 45

Thr Leu ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala vai Tvr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys Pro 85 90 95 val Pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Glv Asn vai 100 105 110

Leu Arg Ala ser val His ser Thr Glu val val Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140

Cys 145

<210> 77 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4QQ> 77

Met Pro ile Gin Arg val Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 15 10 15 ile ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser Pro Pro Gin Gly val ser ser 20 25 30

Arg Pro Arg Val Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Val Gin Ser Val 35 4Q 45

Arg Thr Leu Ser Lys Met Asp Gin Thr Leu Ala Vai Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr Ser Leu Gin Ser Ara Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu 65 70 " 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Ara Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys 85 ' 90 95 pro vai Pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile Lys Gly Leu Glv Asn 100 105 110 vai Leu Arg Ala ser vai His ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 ' 140

Gly Cys 145

<210> 78 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 78 pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr ile 15 10 15

Ile Thr Arg Ile Asπ Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser Arg 20 25 30

Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai Arg 35 40 45

Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu Ala

65 70 75 SO

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala ser Ala Lys ser cys Pro 85 90 95

Val Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn Vai 100 105 110

Leu Arg Ala ser val m's ser Thr Glu val val Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Asn Pro Gly 130 135 140

Cys 145

<210> 79 < 211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 79

Met Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser 20 25 30

Arg Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai 35 40 45

Arg Thr Leu ser Gly Met Asp Gin Tle Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Ara Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys S5 " 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Ara Gly Ser Asp Thr Ile Lys Glv Leu Gly Asn 100 " 105 ' 110 val Leu Arg Ala ser vai Hts ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Gin Gly ser Leu Gin Asp Met Leu Trp Gin Leu Asp Leu Asn pro 130 ' 135 140

Gly Cys 145

<210> 80 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 80

Pro lie Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr Ile 15 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser Arg 20 25 30 pro Arg vai Ala Gly Leu Asp Phe ile Pro Arg vai Gin ser vai Ara 35 40 45

Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Ser Vai Vai Gin Ile Ala Asn Asp Leu Ala 65 70 75 80

Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Çys His S5 90 95

Leu Pro Trp Ala ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp ser Leu Gly Gly vai 100 105 LlO '

Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 ‘ 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Het Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140 tys 145

<21Q> 81 <211> 146 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 81

Met Pro Ile Gin Arg Vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15

Ile Ile Thr Arg Ile As π Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser 20 25 30

Arg Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai 35 40 45

Arg Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg ser vai vai Gin ile Ala Asn Asp Leu 65 70 " 75 80

Ala Asn Leu Arg Ala Leu Leu Arg Leu Leu Ala Ser Ala Lys Ser Cys 85 90 95

His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 val Leu Glu Ala ser Glv Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro 130 135 140

Gly Cys 145

<210> 82 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 82 pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr He 15 10 15

Vai Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser Arg 20 25 30

Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai Arg 35 40 45

Thr Leu ser Glv Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr Ser Leu Gin Ser Arg Asn Vai Ile Gin Ile Ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu Hls Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys Pro 85 90 95 val Pro Arg Ala Arg Gly ser Asp Thr ile lvs Gly Leu Gly Asn vai 100 105 110

Leu Arg Ala ser val Hís ser Thr Glu val val Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro Gly 130 135 140

Cys 145

<210 > 83 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 83

Met pro ile Gin Lys vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr 1 5 10 15 lie vai Thr Arg lie Asn Asp lie ser pro Pro Gin Gly vai ser ser 20 25 30

Arg Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai 35 40 45

Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu 65 70 75 80

Glu Asn Leu Arq Asp Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser Lys ser cys ' 85 90 95

Pro Vai Pro Arg Ala Arg Gly Ser Asp Thr Ile Lys Gly Leu Gly Asn 100 105 110

Vai Leu Arg Ala Ser Vai His Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Ara 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Ara Asn Pro 130 135 140

Gly cys 145

<210> 84 <211> 145 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 84 pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp Thr Lys Thr Leu ile Lys Thr ile 15 10 15

Ile Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser Pro Pro Gin Gly Vai Ser Ser Arg 20 25 30

Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai Arg 35 40 45

Thr Leu ser Gly Met Asp Gin ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin ile Leu 50 55 60

Thr ser Leu Gin ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu Glu 65 70 75 80

Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Vai Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His 85 90 95

Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly Vai 100 105 110

Leu Glu Ala ser Gly Tyr ser Thr Glu vai vai Ala Leu ser Arg Leu 115 120 125

Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Ara Gin Leu Asp Arq Asn Pro Gly 130 135 140

Cys 145

< 210 > 85 <211> 146 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 85

Met pro ile Gin Arg vai Gin Asp Asp The Lys The Leu rle Lys Thr 15 10 15 ile ile Thr Arg ile Asn Asp ile ser pro pro Gin Gly vai ser ser 20 25 30

Arg Pro Arg Vai Ala Gly Leu Asp Phe Ile Pro Arg Vai Gin Ser Vai 35 40 45

Arg Thr Leu Ser Gly Met Asp Gin Ile Leu Ala Thr Tyr Gin Gin Ile 50 55 60

Leu Thr ser Leu Gin ser Arg Asn vai ile Gin ile ser Asn Asp Leu 65 70 75 S0

Glu Asn Leu Arg Asn Leu Leu His vai Leu Ala Phe ser lvs ser cvs 85 90 95

His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110

Vai Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Vai Vai Ala Leu Ser Arg 115 120 125

Leu Lys Ala Ala Leu Gin Asp Met Leu Arg Gin Leu Asp Arg Asn Pro l50 135 140

Gly cys 145 <210> 86 <211> 37 <212> PRT <213> Rattus sp. <400> 86

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 val Arg ser ser Asn Asn Leu Gly pro vai Leu pro pro Thr Asn vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

< 210 > 87 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens < 4 Ο Ο > 87

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15 vai His ser ser Asn Asn Phe Gly Ala lie Leu ser ser Thr Asn vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210 > 88

< 211> 3 7 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 88

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15

Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 89 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89

Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gin Asp Phe 15 10 15

Asn Lys Phe His Thr Phe Pro Gin Thr Ala Ile Gly Vai Gly Ala Pro 20 25 30

<210 > 90 <211> 32 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 90

Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Vai Leu Gly Lys Leu Ser Gin Glu Leu 15 10 15

His Lys Leu Glrs Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 ' 25 30

<210> 91 <211> 32 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético < 4 0 0 > 91

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys vai Leu Gly Arg Leu ser Gin Glu Leu 1 S 10 15 Hís Arg Leu Gin Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly ser Asn Thr Tyr 20 25 30

<210> 92 <211> 37 <212> PRT <213> Sequencia artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético < 2 2 Ο > <223> Hidrogénio de Ν)terminal, Grupo capping de N)terminal ou um ligante a uma porção química de aumento de duração <220>

<221> MOD_RES <222> 0 lá. .0 lã <223> Pode estar presente ou não <22Q> <221> MOD RES <222> 0 2iã..0 21ã <223> Lys, Cys ou Asn < 2 2 0 > <221> MODERES <222> 0 24á..0 24ã <223> Lys, Cys ou Gly <220> <221> MOD RES <222> 0 25á..0 25ã <223> Lys, Cys ou Pro <220> <221> MOD_RES <222> 0 26á..0 26á <223> Lys, Cys ou Ile <220> <221> MOD_RES <222> 0 27á..0 27ã <223> Lys, Cys ou Leu < 2 2 0 > <221> MOD_RES <222> 0 280 ..0 290 <223> Lys, Cys ou Pro <220>

<221> MOD_RES <222> 0 310 ..0 310 <223> Lys, Cys ou Asn <22Q> <223> Amino substituído ou não substituído de C)terminal, alquilamino substituído ou não substituído, dialquilamino substituído ou não substituído, cicloalquilamino substituído ou não substituído, arilamino substituído ou nao substituído, <220> <223> cont. do anterior; aralquilamino substituído ou não substituído, alquiloxi substituído ou não substituído, ariloxi substituído ou não substituído, aralquiloxi substituído ou não substituído, ou hidroxil <400> 92

Lys cys Asn Thr Ala Thr cvs Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 S ' 10 15

Vai His Ser Ser Xaa Asn Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Vai 20 25 30

Glv Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 93 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 93 cys Asn Thr Ala Thr cvs Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 1 5 10 15

Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 94 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 94

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 val Arg ser ser Lys Asn Leu Gly Pro vai Leu Pro Pro Thr Asn vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35 <210 > 95

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <22Q> <223> NH2 de C)terminal <400> 95 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 1 5 10 15

Arg Ser Ser Lys Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 96 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal < 4 0 0 > 96

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 ‘ 15

Vai Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tvr 35

<210> 97 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 97 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Arg ser ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tvr 35

<210> 98 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 98

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu n.Ti 1 S 10 15 vai Arg ser ser Asn Asn Leu Gly Pro vai Leu Pro Pro Thr Lys vai 20 ' 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 99 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 99

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 15 10 15

Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Lys Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 100 < 211> 3 7 <212> PRT <213> Sequência artificial < 2 2 Ο > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 100 lvs cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 vai His ser ser Asn Asn Phe Gly Pro ile Leu Pro Pro Thr Asn vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 101 <211> 36 <212> PRT <213> Sequencia artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 101

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Çln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 15 10 15

His ser ser Asn Asn Phe Gly pro ile Leu Pro pro Thr Asn vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35 <210> 102

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <22Q> <223> NH2 de C)terminal <400> 102 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

His Ser Ser Lys Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 103

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 103

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arq Leu Ala Asn Phe Leu Vai l 5 10 15

Hls Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Lvs Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35 '

<210> 104 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 104

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 1 5 10‘ 15

His ser ser Asn Asn Phe Gly Pro ile Leu Pro Pro Thr Lys vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35

<210> 105 <211> 36 <212> PRT <213> Sequencia artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 105 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai

1 S 10 IS

Hls Ser Ser Asn Asn Phe Lys Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 106 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 106

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 1 5 10' 15 Hís Ser Ser Asn Asn Phe Gly Lys Ile Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35

<210> 107 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial < 2 2 Ο > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 107 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Hls ser ser Asn Asn Phe Gly Pro ile Lys Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 108

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <22G> <223> NH2 de C)terminal <400> 108

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arq Leu Ala Asn Phe Leu Vai 1 5 10“ 15

Hls ser ser Asn Asn Phe Gly pro ile Leu Lys pro Thr Asn vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35 <210> 109 < 211> 3 6

<212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 109

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 15 10 15

His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Lys Thr Asn Vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35

<210> 110 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético < 2 2 0 > <223> NH2 de C)terminal < 4 0 0 > 110

Lys cvs Asn Thr Ala Thr cvs Ala Thr Gin Ara Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 ' 10 15 val Ara ser ser Asn Asn Leu Glv Pro vai Leu Pro Pro Thr Asn vai 20 ' 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 111 <211> 36 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 111 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arq Leu Ala Asn Phe Leu val 1 5 10' 15 m's ser ser Asn Asn Phe Gly Ala Tle Leu ser ser Thr Asn val Glv 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 112 <211> 37 <212 > PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 112

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arq Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 val Hi s ser ser Asn Asn Phe Gly Pro vai Leu Pro Pro Thr Asn vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr

<21Q> 113 <211> 37 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 113

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Ara Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 " 15

Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro lie Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<21Q> 114 <211> 36 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 114 cvs Asn Thr Ala Thr cvs Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Vai Glv 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 115 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 115

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1' ' 5 ' 10 15 val Arg ser ser Asn Asn Phe Glv Pro ile Leu Pro Pro Thr Asn vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <21Q> 116 < 211> 3 6

< 212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 116

cys as n Thr Ala Thr cys Ala Thr Glrt Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 IS

Arg ser ser Asrt Asrt Phe Gly Pro ile Leu Pro pro Thr Asn vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

< 210 > 117 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 117 cys Asn Thr Ala Thr cvs Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

His ser ser Asn Asn Phe Gly Pro ile Leu Pro Pro Thr Asn vai Glv 20 25 30 ser Asn Thr Tvr 35

<210> 118 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 118

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15 val Hf s ser ser Asrv Asrv Phe Gly Pro vai Leu pro pro Thr Asn vai

20 25 BO

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 119 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 119

Lys Asp Asn Thr Ala Thr Lys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15 val His ser ser Asn Asn Phe Gly Ala ile Leu Pro ser Thr Asn val 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35 <21Q> 120 < 211> 3 6

< 212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 120 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Hls ser ser Asn Asn Phe Gly Ala ile Leu ser ser Thr Asn vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 121 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 121

Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15

Vai His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <21Q> 122 < 211> 3 7

< 212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 122

Lys Ala Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 1$

Vai Hís Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Vai 20 25 30

Glv ser Asn Thr Tyr 35

<210> 123 < 211> 3 7 <212> PRT <213> Sequencia artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 123

Lys Ala Asn Thr Ala Thr Ala Ala Thr Gin Arq Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15

Vai His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 124 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 124 ser cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 ' S 10 15 vai His ser ser Asn Asn Phe Gly Ala ile Leu ser ser Thr Asn vai 20 25 50

Glv Ser Asn Thr Tyr 35 < 210 > 125 <211> 37

<212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400>125

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15

Vai His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 126 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 126

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1' 5 10 15

Vai Hls Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro lie Leu Pro Ser Thr Asn Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 127 <211> 36 <212> PRT <213> Sequencia artificial <22Q> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 127

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 15 10 15 Hís ser ser Asn Asn Phe Gly Pro ile Leu Pro ser Thr Asn vai Glv 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 128 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 128

Lys cys Asn Thr Ai a Thr cys Ai a Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15

Val His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<21Q> 129 <211> 37 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 129 lvs cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1' 5 10 15 val Hís ser ser Asn Asn Leu Gly pro val Leu Pro ser Thr Asn val 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 130 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 130

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arq Leu Ala Asn Phe Leu Vai 1 5 10' 15

Hls ser ser Asn Asn Leu Gly pro vai Leu pro ser Thr Asn vai Gly 20 2S 30 ser Asn Thr Tyr 35

<210> 131 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético < 4 0 0 > 131

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15

Vai Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Ser Thr Asn Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 132 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 132

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15

Yal Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 133 <211> 37 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 133

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15

Vai Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 134 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 134

Lys Çys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15 ile His ser ser Asn Asn Leu Gly Pro ile Leu Pro Pro Thr Asn vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 135 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400>135

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15

Ile His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<21Q> 136 <211> 36 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 136 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu lie 15 10 15

Hts ser ser Asn as» Leu Gly Pro ile Leu Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<21Q> 137 <211> 37 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 137

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Pl»e Leu 1 5 10 15

Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 138 < 211> 3 7 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4QQ> 138

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 ' S 10 15

Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Vai Leu Ser Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35 < 210 > 139 <211> 37

<212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 139

Lvs cvs Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15

Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 ' 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<21Q> 140 <211> 37 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 140

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Thr Asn Phe Leu 15 10 15 vai Hls ser ser m's Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu pro Thr Asp vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 141 <211> 37 <212> PRT <213> Sequencia artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 141

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1’ 5 10 15

Vai Hls Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<21Q> 142 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 142

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Thr Asn Phe Leu Vai I 5 10‘ 15

His ser ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Pro ser Thr Asp vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35

<210> 143 <211> 37 <212 > PRT <213> Sequência artificial < 2 2 0 > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 143 lvs cvs Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Thr Asn Phe Leu

1' ' E 10 IS

Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 144 < 211> 3 7 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <4QQ> 144

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 ' 10 15

Vai Arg Ser Ser Hls Asn Leu Gly Ala Ile Leu Pro Pro Thr Asp Vai 20 25 30

Glv ser Asn Thr Tyr 35

<210> 145 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <400> 145

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 10 15

Vai Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Pro Ala Leu Pro Pro Thr Asp Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35 < 210 > 146

< 211> 3 7 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> N)term mPEG40KD <22Q> <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 146

Lys cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 vai Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 147 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <223> mPEG40KD de N)terminal <220> <223> NH2 de C)terminal <4QQ> 147 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 148 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> Õ210 .,0210 <223> LysõmPEG4OKD0 <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 148

Lys cvs Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15 vai Arg ser ser Lys Asn Leu Gly Pro vai Leu Pro Pro Thr Asn vai 20 25 30

Glv Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 149 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD RES <222> 0200 ..0200 <223> LysõmPEG4OKD0 < 2 2 Ο > <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 149 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai

1' S 10 IS

Arg Ser Ser Lys Asn Leu Gly Pro vai Leu Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 150 <211> 37 <212> PRT <213> Sequencia artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD RES <222> o26ã..o26ã <223> LysõmPEG40KDá <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 150

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 15 10 15

Vai Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35 <210> 151

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <22Q> <221> MOD RES <222> Õ25ã. .Õ25ã <223> LysõmPEG4OKDá < 2 2 0 > <223> NH2 de C)terminal < 4 0 0 > 151 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Ara ser ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 152 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> 0 310 ..0 310 <223> Lys0 mPEG4OKD0 <220> <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 152

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Ptie Leu 15 10 15

Vai Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Vai Leu Pro Pro Thr Lys Vai 20 25 30

Gly ser Asn Thr Tyr 35

<210> 153 <211> 36 <212 > PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> M0D_RES <222> Õ30á..Õ30á <223> LysõmPEG4OKDá <220> <223> NH2 de C)terminal <4QQ> 153 cvs asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Arg ser ser Asn Asn Leu Gly Pro vai Leu Pro Pro Thr Lys vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 154 <211> 37 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MODERES <222> Õ26ã. .Õ26á <223> LysõmPEG40KD em formato de Yã <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 154

Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15

Vai Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn Vai 20 25 30

Glv ser Asn Thr Tyr 35

<210> 155 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial < 2 2 Ο > <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> 0200 ..0200 <223> LysõmPEG4 OKD0 <220> <223> NH2 de C)terminal <4QQ> 155 cvs Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 1 S 10 15

Hts ser ser Lys Asn Phe Glv Pro ile Leu Pro Pro Thr Asn vai Glv 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 156

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> Õ250 ..0250 <223> LysõmPEG4OKD0 <220> <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 156

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Ara Leu Ala Asn Phe Leu Vai 1 5 10" 15

His ser ser Asn Asn Phe Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35 '

<210> 157 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> Õ30á..Õ30ã <223> LysõmPEG40KDã <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 157 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Hls ser ser Asn Asn Phe Gly pro ile Leu pro pro Thr Lys vai Gly 20 ' 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 158

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <22Q> <221> MOD RES <222> Õ25ã. .Õ25ã <223> LysõmPEG40KD em formato de Yã < 2 2 0 > <223> NH2 de C)terminal < 4 0 0 > 158

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 15 10 15

His ser ser Asn Asn Phe Gly Pro Lys Leu Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35 <210> 159

< 211> 3 6 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> 0 230 ..0 230 <223> Lys0 mPEG4OKD0 <220> <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 159 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

His ser ser Asn Asn Phe Lys Pro ile Leu Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35

<210> 160 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> Õ24á..Õ24á <223> LysõmPEG40KDã <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 160

Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 1 5 10' 15

His ser ser Asn Asn Phe Gly Lys lie Leu Pro Pro Thr Asn vai Gly 20 25 30 ser Asn Thr Tyr 35 < 210 > 161 <211> 36

<212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD RES <222> Õ26ã..Õ26á <223> LysõmPEG4OKDá <220> <223> NH2 de C)terminal < 4 0 0 > 161

Cys Asm Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu Vai 15 10 15

His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Lys Pro Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 162 <211> 36 <212 > PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético <220> <221> MOD_RES <222> Õ270 .,0270 <223> LysõmPEG4OKD0 <220> <223> NH2 de C)terminal <400> 162 cys Asn Thr Ala Thr cys Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 15 10 15

Hls Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Lys Pro Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35

<210> 163 <211> 36 <212> PRT <213> Sequência artificial <220> <223> Descrição da sequência artificial: polipéptido sintético < 2 2 0 > <221> MOD RES <222> Õ280 ..0280 <223> LysõmPEG4OKD0 < 2 2 Ο > <223> ΝΗ2 de C)terminal <400> 163 cvs Asn Thr Ala Thr cvs Ala Thr Gin Arg Leu Ala Asn Phe Leu vai 1' S 10 15

His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Lys Thr Asn Vai Gly 20 25 30

Ser Asn Thr Tyr 35 < 210 > 164 < 211 > 6

<212> PRT <213> Desconhecido <220> <223> Descrição de Desconhecido: péptido de motive conservado de lepitina <400> 164

Gly Leu Asp Phe Ile Pro 1 5

DOCUMENTOS REFERIDOS NA DESCRIÇÃO

Esta lista de documentos referidos pelo autor do presente pedido de patente foi elaborada apenas para informação do leitor. Não é parte integrante do documento de patente europeia. Não obstante o cuidado na sua elaboração, ο IEP não assume qualquer responsabilidade por eventuais erros ou omissões.

Documentos de patente referidos na descrição • US 61387402 B [0001] [0224] • US 61422091 B [0001] [0003] [0224] • US 61387402 A [0003] • WO 9828427 A [0014] [0019] [0020] [0062] [0064] [0068] • US 2007002084 A [0014] • US 20070020284 A [0019] [0020] [0062] [0064] [0068] • US 20080207512 A [0019] [0062] [0121] [0139] • US 6309853 B [0019] [0020] • US 7183254 B [0019] • WO 96005309 A [0019] [0020] • WO 2009064298 A [0019] [0062] [0121] • US 5594101 A [0020] • US 5851995 A [0020] • US 5691309 A [0020] • US 5580954 A [0020] • US 5554727 A [0020] • US 5552523 A [0020] • US 5559208 A [0020] • US 5756461 A [0020] • WO 9623517 A [0020] • WO 2004039832 A [0020] • WO 9855139 A [0020] • WO 9812224 A [0020] • WO 9702004 A [0020] • US 4179337 A [0068] [0169] [0171] • US 5824784 A [0071] • US 5824778 A [0071] • EP 0401384 A [0083] • US 6872700 B [0088] • WO 2007139941 A [0088] • WO 2007140284 A [0088] • WO 2008082274 A [0088] • WO 2009011544 A [0088] • US 20070238669 A [0088] • WO 8304053 A [0093] • WO 2006083254 A [0147] • WO 2007114838 A [0147] • US 5686411 A [0149] • US 20080176804 A [0149] • US 20080274952 A [0149] • US 20080032408 A [0169] • US 4002531 A [0171] • US 6368630 B [0199] • US 6379704 B [0199] • US 5766627 A [0199] • US 6379703 B [0199] • US 6296842 B [0199] • US 2011053774 W [0224]

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Claims (11)

1. REIVINDICAÇÕES

   1. Polipéptido quimérico que compreende um polipéptido de leptina de foca do tipo selvagem, em que pelo menos uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de uma sequência de leptina de foca do tipo selvagem foi substituída por uma região contígua de 1 a 30 aminoácidos de uma sequência de leptina de ser humano madura e em que o polipéptido quimérico compreende uma sequência de aminoácidos que tem pelo menos 95% de identidade com a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32.
2. 2. Polipéptido quimérico, de acordo com a reivindicação 1, em que o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:32.
3. 3. Polipéptido quimérico, de acordo com a reivindicação 1, em que o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:30.
4. 4. Polipéptido quimérico, de acordo com a reivindicação 1, em que o polipéptido quimérico compreende a sequência de aminoácidos da SEQ ID NO:33.
5. 5. Polipéptido quimérico, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que é para utilização no tratamento de uma doença ou um distúrbio num indivíduo.
6. 6. Polipéptido quimérico para utilização, de acordo com a reivindicação 5, em que a doença ou o distúrbio é selecionado a partir do grupo que consiste em: lipodistrofia, dislipidemia, hiperlipidemia, obesidade, amenorreia hipotalâmica, doença de Alzheimer, deficiência de leptina, doença do fígado gordo, diabetes H inclmndo tipo I e tipo IIBI , esteato) hepatite não alcoólica HashIEI , doença do fígado gordo não alcoólica õNAFLDã, síndrome metabólica X e doença de Huntington.
7. 7. Polipéptido quimérico para utilização, de acordo com a reivindicação 5 ou 6, em que a doença ou o distúrbio é lipodistrofia, dislipidemia, hiperlipidemia, obesidade, amenorreia hipotalâmica, doença de Alzheimer, deficiência de leptina, doença do fígado gordo ou diabetes.
8. 8. Polipéptido quimérico para utilização, de acordo com qualquer uma das reivindicaçS es 5 a 7, em que a doeça ou o distúrbio é diabetes tipo I ou diabetes tipo II.
9. 9. Polipéptido quimérico para utilização, de acordo com qualquer uma das reivindicaç® es 5 a 7, em que a doeça ou o distúrbio é obesidade.
10. 10. Polipéptido quimérico para utilização, de acordo com qualquer uma das reivindicaçUS es 5 a 7, em que a doeça ou o distúrbio é lipodistrofia ou deficiência de leptina.
11. 11. Composição farmacêutica que compreende o polipéptido quimérico, conforme definido em qualquer uma das reivindicaçB es 1 a 4, e um excipiente farmaceuticaante aceitS vel.