CN101400698A - 胰岛淀粉样多肽衍生物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有延长的作用分布图的新型胰岛淀粉样多肽衍生物；涉及包含这些衍生物的药物组合物；并且涉及这些衍生物在治疗与肥胖症、糖尿病和其他代谢紊乱相关的疾病中的应用。

Description

胰岛淀粉样多肽衍生物
发明领域
本发明涉及新型胰岛淀粉样多肽(amylin)衍生物；涉及包含这些衍生物的药物组合物；并且涉及这些衍生物在治疗与肥胖症、糖尿病和其他代谢紊乱相关的疾病中的应用。
发明背景
为数众多且日益增加的人患有糖尿病和肥胖症。糖尿病是一种代谢紊乱，其中利用葡萄糖的能力部分丧失或完全丧失。所有人中约有5％患有糖尿病，而且此紊乱接近流行性的比例。自二十世纪20年代引入胰岛素以来，人们一直在为改进糖尿病的治疗而坚持不懈。
糖尿病和肥胖症两种病症是相关的，从某种意义来说在肥胖症患者之中往往患有糖尿病，反之亦然。糖尿病一方面与肥胖症之间、另一方面与心血管疾病之间也存在非常密切的联系。这导致有这些病症的患者生命周期更短。为人们所熟知并且有资料记录的是糖尿病和肥胖症的有效治疗可致使并发症(例如影响如视觉和肾功能的糖尿病晚期并发症)更少。
许多治疗方法将靶标定在过量的血糖上，而其他方法则主要地集中在减轻体重上。用于降低血糖的最有效的抗糖尿病药是胰岛素及其类似物。人们早已知晓当用传统的胰岛素来治疗糖尿病时，往往会伴随体重的增加。人们不得不皮下注射胰岛素多达每天若干次。
2型糖尿病一般在早期通过饮食和锻炼来治疗。随着病情的发展，加入各种口服的抗胰岛素药。在此阶段也可使用例如GLP-1类似物的注射剂。一般来说，这些药剂在具有能够释放胰岛素和胰岛淀粉样多肽的功能性β细胞的患者中最有效。在95％的已发展的2型糖尿病中，患者的胰岛淀粉样多肽在胰腺中沉淀并可以构成最终β细胞衰竭的原因之一(L.Yan，PNAS，2006，103(7)，2046-2051)。最终，患者再也不能产生胰岛淀粉样多肽和胰岛素。然后这些已经发展的2型糖尿病患者就如1型糖尿病患者一样要用胰岛素来治疗，而不管实际上β细胞产生胰岛素和胰岛淀粉样多肽两种激素的事实。仅在最近，代替胰岛淀粉样多肽以及胰岛素已经成为可能。
人胰岛淀粉样多肽是37个氨基酸的长肽，它所具有的物化性质使其难以作为药物使用。特别是它在体外和/或离体(ex-vivo)情况下趋于形成原纤维并由于沉淀而失效。一种称为醋酸普兰林肽制剂(Symlin)的含有人胰岛淀粉样多肽类似物(普兰林肽)的药品目前在市场上出售，其中37个氨基酸中的3个被脯氨酸取代。这显著改善了形成原纤维的趋向性。然而，连普兰林肽都难以在中性pH溶液中保存，因此它以酸性溶液即醋酸普兰林肽制剂提供。
与糖尿病和肥胖症有关的胰岛淀粉样多肽的作用是：食物摄取减少，导致体重减轻；减慢胃空排；缓和餐后葡萄糖谱以及减少糖尿病患者的过量胰高血糖素释放(A.Young，Amylin：Physiology andPharmacology，Academic Press(2005))。一般而言，胰岛淀粉样多肽的作用通过识别CNS受体介导，而非直接作用于靶器官。
醋酸普兰林肽制剂被批准作为胰岛素的辅助药物。临床试验已经表明：与单独使用胰岛素治疗相比，使HbAlc改善大约0.3-0.6，餐后血糖谱更平滑和更浅以及减轻体重。最近醋酸普兰林肽制剂作为单独注射剂每天3次施用于各别的注射部位。倘若患者也使用每天3次的胰岛素注射剂，那么这样加起来总共多至每天6次注射。
醋酸普兰林肽制剂疗法因副作用恶心而受到限制。恶心是剂量相关性的，但有随时间减少的趋势。醋酸普兰林肽制剂的药代动力学分布图(profile)导致全天内血浆水平有相当大的变化。皮下注射醋酸普兰林肽制剂后，只需约20分钟的时间就达到Cmax(最高浓度)，而血浆t1/2为大约20-50分钟(Colburn，W.A.J.Clin.Pharmacol.36，13-24(1996)。最终，这导致需要每天注射3次或以上的醋酸普兰林肽制剂来保持药理学的血浆水平而基本上无副作用。即使是每天3次注射，醋酸普兰林肽制剂仍然不能很好地模仿胰岛淀粉样多肽的自然释放分布图。与注射醋酸普兰林肽制剂分布图的1-1 1/2的持续时间相比，胰岛淀粉样多肽以持续接近3-6小时的餐后峰值(meal relatedpeak)释放。胰岛淀粉样多肽同样具有醋酸普兰林肽制剂无法模拟的实质的基础水平(A.Young，Amylin：Physiology and Pharmacology，Academic Press(2005))。
1型糖尿病患者基本上无胰岛淀粉样多肽的自然释放，而2型患者具有比健康个体更低的水平。
提供具有天然人胰岛淀粉样多肽活性的衍生物，以及与天然人胰岛淀粉样多肽相比具有延长的PK分布图、表现出增强的可溶性和/或稳定性的衍生物将有所帮助。
发明简述
本发明在一个方面涉及一种化合物，其为SEQ ID No 1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
a)第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
c)赖氨酸残基已被添加到第38位，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中出示的氨基酸编号一致。
本发明在一个方面涉及一种化合物，其为具有SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
a)第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本发明也提供了一种用于增加人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中的作用时间的方法，其特征为：
a)通过用赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代并通过使所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，修饰第2-37位中的氨基酸残基，或者
b)使第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者，
c)在第38位添加赖氨酸残基，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本发明也提供了包含本发明的衍生物的药物组合物以及本发明的衍生物在制备用于治疗疾病的药物中的应用。
发明详述
本文所用的术语“药学上可接受的”指的是适合正常的药学应用，即不引起例如患者中的有害事件等严重副作用。
本文所用的术语“赋形剂”指的是正常地加入药物组合物中的化合物，例如缓冲剂、张度剂、防腐剂等。
本文所使用的术语“有效量”指的是：与无任何治疗相比对于治疗患者足够有效的剂量。
本文所使用的术语“药物组合物”指的是包含活性衍生物与药物赋形剂(例如缓冲剂、防腐剂以及任选的张度调节剂和/或稳定剂)的制品。因此，在本领域中药物组合物也被称为药物制剂。
本文所使用的术语“疾病的治疗”或“治疗疾病”指的是处理和护理已出现疾病、病症或紊乱的患者。治疗的目的是抗击疾病、病症或紊乱。治疗包括施用活性化合物以消除或控制疾病、病症或紊乱，以及缓解与疾病、病症或紊乱相关的症状或并发症。
本发明在一个方面涉及一种化合物，其为SEQ ID No 1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
a)第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者，
c)赖氨酸残基已被添加到第38位，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本发明在一个方面涉及一种化合物，其为SEQ ID No1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
a)第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者，
b)第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本发明在另一方面涉及一种化合物，其为SEQ ID No 1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本发明在另一方面涉及一种化合物，其为SEQ ID No 1的人胰岛淀粉样多肽的衍生物，其中
a)人胰岛淀粉样多肽中的第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)人胰岛淀粉样多肽的第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本发明在另一方面涉及一种化合物，其为SEQ ID No 1的人胰岛淀粉样多肽的衍生物，其中
人胰岛淀粉样多肽中的第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本文所使用的术语“人胰岛淀粉样多肽”指的是具有如SEQ IDNo 1中所描述的序列的肽人胰岛淀粉样多肽。此术语包括但不限于称为胰岛淀粉样多肽的37个氨基酸的人肽类激素，其与胰岛素一起从胰腺的β细胞中共同分泌。人胰岛淀粉样多肽具有以下氨基酸序列：Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr(SEQ ID NO：1)。因此，结构式是如下所示的Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Asn-Phe-Leu-Val-His-Ser-Ser-Asn-Asn-Phe-Gly-Ala-Ile-Leu-Ser-Ser-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Tyr-NH2(SEQ ID NO：1)，，其带有在两个Cys残基之间的二硫键以及C末端氨基。
Figure A200780009130D00131
本文中术语“人胰岛淀粉样多肽的类似物”用于指明一种肽，其中SEQ ID No 1的人胰岛淀粉样多肽中的一个或更多个氨基酸残基已独立地被其他氨基酸残基所取代，和/或其中人胰岛淀粉样多肽中的一个或更多个氨基酸残基已经缺失，和/或其中一个或更多个氨基酸残基已被添加到人胰岛淀粉样多肽中。
本发明的一方面，所述氨基酸残基的添加或缺失可以发生在肽的N末端和/或肽的C末端。人胰岛淀粉样多肽类似物在一方面优选具有30-45个天然存在的或非天然存在的氨基酸，优选35-40个天然存在的或非天然存在的氨基酸。
本文中所使用的术语“衍生物”指的是一种肽，其中此肽中的一个或更多个氨基酸残基已经例如通过烷基化、酰化、形成酯、形成酰胺或通过马来酰亚胺偶联而被修饰。
术语“人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物”或“胰岛淀粉样多肽衍生物”在本文中用于指人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物。
在本发明的又一方面，人胰岛淀粉样多肽类似物与人胰岛淀粉样多肽具有足够的同源性，致使其与人胰岛淀粉样多肽相比表现出至少70％的体内活性。
本发明的化合物可以能够与胰岛淀粉样多肽受体、或其他受体、或胰岛淀粉样多肽自身可与之相互作用以激发生物应答(例如减少食物摄取)的受体结合，或者可以能够与上述受体直接或间接地相互作用。本发明的化合物可以以优于20nM、10nM或5nM的亲和力、更优选以优于2nM、1nM、0.5nM、0.2nM或0.10nM的亲和力，与胰岛淀粉样多肽结合。
本发明的一个实施方案中，本发明的化合物可以保持至少约25％、优选约30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％、98％或99％的胰岛淀粉样多肽的生物活性百分比。在另一个实施方案中，本发明的化合物表现出提高的生物活性。在又一实施方案中，本发明的化合物表现出至少约110％、125％、130％、140％、150％、200％或更高的胰岛淀粉样多肽的生物活性。
在一个实施方案中，术语“活性”指的是降低食欲和/或增加饱腹感的能力。在本发明的一个方面，活性按照例如在标题“测定法”下面的药理学测定I和II中所描述的通过降低食欲的能力来测量。
在本发明的一个实施方案中，本发明的化合物可以表现出比施用溶媒或载体高超过5％、优选比溶媒或载体高超过15％、更优选超过25％，甚至更优选超过35％或40％，最优选高超过50％的减少累计食物摄取的能力。
在另一个实施方案中，术语“活性”指的是在动物模型中延迟胃排空的能力。在另一实施方案中，术语“活性”指的是在动物模型中抑制高血糖素释放的能力。
术语“作用时间”在本文中所指的是药理学效果例如食物摄取减少可以被检测的时间间隔。
本发明的一个实施方案中，与人胰岛淀粉样多肽相比，胰岛淀粉样多肽衍生物在体内和/或离体形成原纤维的可能性较小。形成原纤维的倾向可以例如通过下文中在术语“物理稳定性”的定义下面所描述的硫磺素T试验来评估。
在本发明的一个实施方案中，根据本领域技术人员所知的标准方法例如ELISA进行测量，胰岛淀粉样多肽衍生物与普兰林肽相比具有延长的药代动力学分布图。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少1小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，血浆t 1/2为至少1.5小时。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少2小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少4小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少6小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少8小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少12小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少16小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少24小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少48小时的血浆t 1/2。在本发明的另一个实施方案中，胰岛淀粉样多肽衍生物具有至少96小时的血浆t 1/2。
本发明的再一方面，人胰岛淀粉样多肽类似物具有修饰的人胰岛淀粉样多肽氨基酸序列，致使1、2、3、4、5或6或7或8个氨基酸不同于人胰岛淀粉样多肽的相应位置上的氨基酸。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含少于8个修饰(置换、缺失、添加)。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含少于7个修饰(置换、缺失、添加)。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含少于6个修饰(置换、缺失、添加)。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含少于5个修饰(置换、缺失、添加)。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含少于4个修饰(置换、缺失、添加)。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含少于3个修饰(置换、缺失、添加)。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含少于2个修饰(置换、缺失、添加)。在本发明的再一方面，类似物相对于人胰岛淀粉样多肽包含仅1个修饰(置换、缺失、添加)。
本发明的一个方面，所述修饰是置换。本发明的一个方面，所述修饰是缺失。本发明的一个方面，所述修饰是添加。
本发明的一个方面，以赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代第2、3、4、5或6位的氨基酸残基，而所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明的一个方面，以赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代第23、24、25、26、27或28位的氨基酸残基，而所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明的一个方面，以赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代第32、33、34、35、36或37位的氨基酸残基，而所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明的又一方面，以脯氨酸残基取代第25、28和29位中的1个、2个或全部氨基酸残基。本发明的又一方面，以脯氨酸残基取代第25位的氨基酸残基。本发明的又一方面，以脯氨酸残基取代第28位的氨基酸残基。本发明的又一方面，以脯氨酸残基取代第29位的氨基酸残基。本发明的又一方面，以精氨酸残基取代第18位的氨基酸残基。本发明的又一方面，以亮氨酸残基取代第23位的氨基酸残基。本发明的又一方面，以缬氨酸残基取代第26位的氨基酸残基。本发明在另一方面涉及一种化合物，其为具有SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No1中的氨基酸编号一致。
本发明在另一方面涉及一种化合物，其为具有SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No 1中的氨基酸编号一致。
本发明在另一方面涉及一种化合物，其为具有SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
赖氨酸残基已被添加到第38位，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No 1中的氨基酸编号一致。
本发明在另一方面涉及SEQ ID No 1的人胰岛淀粉样多肽的衍生物。
本发明在另一方面涉及人胰岛淀粉样多肽类似物的衍生物。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第2、3、4、5或6位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第23、24、25、26、27或28位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第32、33、34、35、36或37位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第1位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中所述白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物经由赖氨酸残基的ε-氨基连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中所述白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物经由赖氨酸残基的α-氨基连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37位中任一位置的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第1、10、11、14、15、16、17、18、21、22、25、28、29、31、35或38位中任一位置的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第1、11、17、21、22、25、28、29或31位中任一位置的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第1、11、17、21、22、25、28、29或31位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第1、11、17、21、22或31位中任一位置的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第21位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第22位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第17位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第31位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第11位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第28位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第25位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中第29位的氨基酸残基被赖氨酸残基取代，并且其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
本发明在另一方面涉及衍生物，其中所述赖氨酸残基通过接头与白蛋白结合残基连接。
在本发明的另一方面，衍生物与人胰岛淀粉样多肽相比具有1-6个氨基酸置换。
在本发明的另一方面，衍生物与人胰岛淀粉样多肽相比具有1-4个氨基酸置换。
在本发明的又一方面，第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGPILPP-(SEQ ID No.3)。
在本发明的又一方面，第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGEILSS-(SEQ ID No.4)。
在本发明的又一方面，第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGDILSS-(SEQ ID No.5)。
本文所用的术语“连接”指的是通过共价键的化学连接。例如赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基通过化学键连接。此化学键作为实例可以通过用白蛋白结合残基(例如长链脂肪酸)的活性酯进行酰化来对赖氨酸的ε氨基进行衍生化而获得。
本发明所使用的连接两种化学部分的其他实例包括但不限于：烷基化、形成酯、形成酰胺或马来酰亚胺偶联。
本发明的一方面，本文所使用的术语“白蛋白结合残基”指的是与人血清白蛋白非共价结合的残基。与治疗性多肽连接的白蛋白结合残基对人血清白蛋白的亲和力(结合常数)通常低于10μM，并优选低于1μM。一系列白蛋白结合残基已知是在含4-40个碳原子的线性和分支的亲脂部分、具有环戊烷并菲骨架的化合物、具有10-30个氨基酸残基的肽等之中。
白蛋白结合亲和力可以通过本领域已知的若干方法来测量。在一个方法中，待测量的化合物用例如125I或3H来进行放射性标记并与固定化的白蛋白一起温育(Kurtzhals等，Biochem.J.，312，725-731(1995))。计算出相对于标准品的化合物的结合情况。在另一个方法中，对相关化合物进行放射性标记，让待测化合物的系列稀释液与所述已标记的化合物竞争结合固定在例如SPA珠上的白蛋白。竞争的EC50值是对化合物的亲和力的度量。在第三个方法中，于不同的白蛋白浓度下测量化合物的受体亲和力或效能，化合物随血清浓度变化的相对亲和力或效能的变化反映了该化合物对白蛋白的亲和力。
本文所用的术语“C1-6烷基”指的是饱和、支链、直链或环状的具有1至6个碳原子的烃基。代表性的实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、叔戊基、正己基、异己基、环己烷等。
本文所用的术语“接头(linker)”指的是用来分隔肽与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物的间隔物(在本说明书中，间隔物和接头两个术语可以交换使用)。
本文所用的术语“亲水性接头”指的是以一个化学部分将肽与白蛋白结合残基分隔的间隔物，所述化学部分包含至少4个重原子，其中这些重原子中的30-50％是N或者O。
本发明的一个方面，接头包含具有1-7个亚甲基、优选2个亚甲基的不分支的链烷α，ω-二羧酸基，此接头在肽的氨基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物的氨基之间形成桥。
本发明的另一方面，接头包含一个或更多个亚烷基二醇单元，例如1-5个亚烷基二醇单元。又一方面，亚烷基二醇是乙二醇、丙二醇或丁二醇，但也可以是高级亚烷基二醇。
本发明另一方面，接头是选自以下的亲水性接头：
-(CH2)lD[(CH2)nE]m(CH2)p-Qq-，其中
l、m和n独立地是1-20，而p是0-10，
Q是-Z-(CH2)lD[(CH2)nG]m(CH2)p-，
q是0-5的整数，
D、E和G各自独立地选自-O-、-NR3-、-N(COR4)-、-PR5(O)-和-P(OR6)(O)-，其中R3、R4、R5和R6独立地代表氢或C1-6烷基，
Z选自-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-、-OC(O)NH-、-C(O)NHCH2CH2-、-C(O)CH2-、-C(O)CH＝CH-，、-(CH2)s-，、-C(O)-，、-C(O)O-或-NHC(O)-，其中s是0或1。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中l是1或2，n和m独立地是1-10，而p是0-10。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中D是-O-。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中E是-O-。
本发明的又一方面，亲水性接头是
-CH2O[(CH2)2O]m(CH2)pQq-，其中m是1-10，p是1-3，而Q是-Z-CH2O[(CH2)2O]m(CH2)p-，其中Z如上文所定义。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中q是1。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中G是-O-。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中Z选自-C(O)NH-、-C(O)NHCH2-和-OC(O)NH-。
本发明的另一方面，接头是如上文定义的亲水性接头，其中q是0。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中l是2。
本发明的另一方面，接头是如上文所定义的亲水性接头，其中n是2。
本发明的一个方面，使用了以化学部分使肽与白蛋白结合残基分隔的“亲水性接头”B。
本发明的一个方面，亲水性接头B是-C(O)-(CH2)l-O-[(CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O)-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH-
其中l、m、n和p独立地是1-5，而q是0-5。
本发明的又一个实施方案中，亲水性接头B是-C(O)-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2[NHC(O)-CH2-O-CH2CH2O-CH2CH2]q-NH-，其中q是0-5。
本发明的又一个实施方案中，亲水性接头B是-C(O)-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NHC(O)-CH2-O-CH2CH2O-CH2CH2-NH-。
本发明的又一个实施方案中，亲水性接头B是-[CH2CH2O]m+1(CH2)pQq-，其中m和p独立地是0-10，q是0-5，而Q是如上文所定义的-Z-(CH2)lD[(CH2)nG]m(CH2)p-。
本发明的又一个实施方案中，亲水性接头B是-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p-[C(O)NH-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-，其中l、m、n和p独立地是1-5，而q是0-5。
本发明的再一方面，接头包含：除Cys以外的氨基酸残基，或二肽例如Gly-Lys。在本文中，短语“二肽例如Gly-Lys”用于指肽，其中C末端氨基酸残基是Lys、His或Trp，优选Lys，而其中N末端氨基酸选自Ala、Arg、Asp、Asn、Gly、Glu、Gln、Ile、Leu、Val、Phe和Pro。
合适的PEG聚合物通常是市面上可获得的，或者可以通过本领域技术人员所熟知的技术来制备。
本发明的一个方面，PEG聚合物的分子量高于700D；另一方面，分子量高于5kD；又一方面，高于10kD；再一方面高于20kD。PEG聚合物可以是直链或分支的。当PEG聚合物高于20KDa时，PEG聚合物优选具有分支结构，例如43kD的分支PEG-肽(Shearwater2001产品目录编号2D3XOT01，mPEG2-MAL)。
使PEG连接到完整的肽上可以通过使PEG连接到与受体相互作用的肽表面的相反面来实现。
本发明的一个方面，PEG的连接将发生在人胰岛淀粉样多肽或其类似物中的第2、3、4、5或6位的氨基酸残基上，上述氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸取代，任选通过接头来连接。本发明的又一方面，PEG的连接将发生在人胰岛淀粉样多肽或其类似物的第23、24、25、26、27或28位的氨基酸残基上，上述氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸取代，任选通过接头来连接。本发明的再一方面，PEG的连接将发生在人胰岛淀粉样多肽或其类似物的第32、33、34、35、36或37位的氨基酸残基上，上述氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸取代，任选通过接头来连接。
有若干用于使PEG与肽偶联的策略(参见例如Veronese，Biomaterials 22：405-417，2001)，所有这些策略以其全部在此引作参考。因此，本领域的技术人员将能够利用熟知的技术，来使PEG聚合物与本文所描述的人胰岛淀粉样多肽或胰岛淀粉样多肽类似物连接。
简而言之，半胱氨酸的聚乙二醇化(PEGylation)是用于位点特异性聚乙二醇化的一种方法，而且可以通过以下步骤来完成：在人胰岛淀粉样多肽或胰岛淀粉样多肽类似物上的特定位置之一引入独特的半胱氨酸突变，然后使所产生的肽与半胱氨酸特异性聚乙二醇化试剂(例如PEG-马来亚胺)反应。可能有必要让肽突变以便能够进行位点特异性聚乙二醇化。例如，如果肽含有半胱氨酸残基，则这些半胱氨酸残基将需要用保守的氨基酸来取代，以保证位点特异性聚乙二醇化。此外，可以将包括但不限于“GGS”、“GGSGGS”和“PPPS”的刚性接头添加到C末端上，但位于PEG连接位点(即独特的半胱氨酸残基)之前。
本发明的一方面，白蛋白结合残基是亲脂性残基。另一方面，所述亲脂性残基通过缀合化学(例如通过烷基化、酰化、形成酯、形成酰胺)与赖氨酸残基任选经由接头来连接，或通过马来酰亚胺偶联与半胱氨酸连接。
本发明的又一方面，白蛋白结合残基在生理pH下带负电。本发明的另一方面，白蛋白结合残基包含可以带负电的基团。可以带负电的一种优选基团是羧酸基。
本发明的又一方面，白蛋白结合残基与白蛋白非共价结合。本发明的另一方面，白蛋白结合残基对人血清白蛋白的结合亲和力优于约10μM或优于约1μM。
本发明的再一方面，白蛋白结合残基选自：直连烷基、支链烷基、具有ω-羧酸基的基团以及部分或完全氢化的环戊烷并菲骨架。
本发明的又一方面，白蛋白结合残基是汽巴克隆基(cibacronyl)残基。
本发明的又一方面，白蛋白结合残基具有6-40个碳原子，8-26个碳原子或8-20个碳原子。
本发明的又一方面，白蛋白结合残基是选自CH3(CH2)rCO-的酰基，其中r是4-38的整数，优选4-24的整数；更优选选自CH3(CH2)6CO-、CH3(CH2)8CO-、CH3(CH2)10CO-、CH3(CH2)12CO-、CH3(CH2)14CO-、CH3(CH2)16CO-、CH3(CH2)18CO-、CH3(CH2)20CO-和CH3(CH2)22CO-。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基是直链或支链链烷α，ω-二羧酸的酰基。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基是选自HOOC(CH2)sCO-的酰基，其中s是4-38的整数，优选4-24的整数；更优选选自HOOC(CH2)14CO-、HOOC(CH2)16CO-、HOOC(CH2)18CO-、HOOC(CH2)20CO-和HOOC(CH2)22CO-。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基是式CH3(CH2)vCO-NHCH(COOH)(CH2)2CO-的基团，其中v是10-24的整数。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基是式CH3(CH2)wCO-NHCH((CH2)2COOH)CO-的基团，其中w是8-24的整数。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基是式COOH(CH2)xCO-的基团，其中x为8-24的整数。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基是式-NHCH(COOH)(CH2)4NH-CO(CH2)yCH3的基团，其中y为8-18的整数。
本发明的一个方面，白蛋白结合残基与接头联合为-C(O)-(CH2)l-O-[(CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O)-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH-W，
其中l、m、n和p独立地是1-5，而q是0-5，
W选自：CH3(CH2)6CO-、CH3(CH2)8CO-、CH3(CH2)10CO-、CH3(CH2)12CO-、CH3(CH2)14CO-、CH3(CH2)16CO-、CH3(CH2)18CO-、CH3(CH2)20CO-、CH3(CH2)22CO-、HOOC(CH2)14CO-、HOOC(CH2)16CO-、HOOC(CH2)18CO-、HOOC(CH2)20CO-和HOOC(CH2)22CO-。
本发明的一个方面，白蛋白结合残基与接头联合为-C(O)-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2[NHC(O)-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2]q-NH-Ac，其中q是0-5，而Ac为乙酰基。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基与接头联合为式-C(O)-CH2-O-CH2CH2-O-CH2CH2-NHC(O)-CH2-O-CH2CH2O-CH2CH2-NH-Ac的基团，其中Ac为乙酰基。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基与接头联合为
Figure A200780009130D00261
其中B如上文所定义，而Z、V、q和w如下文所定义。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基与接头联合为
Figure A200780009130D00262
其中Z是CH3或COOH；V是H或COOH；q是7-21；w是0-5；而k是0-5，
B是-C(O)-(CH2)l-O-[(CH2CH2-O)m-(CH2)p-[NHC(O)-(CH2)l-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH-，其中l、m、n和p独立地是1-5，而q是0-5。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基与接头联合为其中Z是CH3或COOH；V是H或COOH；q是7-21；w是0-5；而k是0-5。本发明的另一方面，Z是CH3，而V是COOH。本发明的另一方面，V是H，而Z是COOH。本发明的另一方面，V是H，而Z是CH3。本发明的另一方面，V和Z皆是COOH。本发明的一个优选方面，q是13-19；更优选q是13-15。本发明的一个优选方面，k是1-4；并更优选1-2。本发明的一个优选方面，w是1-4；而更优选1-2。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基与接头联合为
Figure A200780009130D00271
其中Z是CH3或COOH；q是7-21，而k是0-5。本发明的另一方面，Z是CH3。本发明的另一方面，Z是COOH。本发明的一个优选方面，q是13-19，而更优选q是13、14或15。本发明的一个优选方面，k是1-4，而更优选1或2。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基是肽，例如包含-少40个氨基酸残基的肽。作为白蛋白结合残基的许多小肽以及它们的鉴定方法可以在J.Biol Chem.277，38(2002)35035-35043中找到。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基任选通过接头经由赖氨酸残基的ε-氨基连接。
本发明的另一方面，白蛋白结合残基任选通过接头经由半胱氨酸连接。
又一方面，本发明涉及胰岛淀粉样多肽衍生物，其中亲脂性残基通过接头与母肽连接，所述接头是除Cys以外的氨基酸残基，或者是二肽例如Gly-Lys，而其中母肽的羧基与所述赖氨酸残基或含有赖氨酸残基的二肽的氨基形成酰胺键，而所述赖氨酸残基或含有赖氨酸残基的二肽的另一个氨基与亲脂性残基的羧基形成酰胺键。
又一方面，本发明涉及胰岛淀粉样多肽衍生物，其中亲脂性残基通过接头与母肽连接，所述接头是除Cys以外的氨基酸残基，或是二肽例如Gly-Lys，而其中母肽的氨基与所述氨基酸残基或二肽接头的羧基形成酰胺键，而所述氨基酸残基或二肽接头的氨基与亲脂性残基的羧基形成酰胺键。
又一方面，本发明涉及胰岛淀粉样多肽衍生物，其中亲脂性残基通过接头与母肽连接，所述接头是除Cys以外的氨基酸残基，或是二肽例如Gly-Lys，而其中母肽的羧基与氨基酸残基接头或二肽接头的氨基形成酰胺键，而所述氨基酸残基接头或二肽接头的羧基与亲脂性残基的氨基形成酰胺键。
又一方面，本发明涉及胰岛淀粉样多肽衍生物，其中亲脂性残基通过接头与母肽连接，所述接头是除Cys以外的氨基酸残基，或是二肽例如Gly-Lys，而其中母肽的羧基与为Asp或Glu的氨基酸接头或含有Asp或Glu残基的二肽接头的氨基形成酰胺键，而接头的羧基与亲脂性残基的氨基形成酰胺键。
本发明的一方面，胰岛淀粉样多肽衍生物的C末端可以以酸或酰胺终止。优选一方面，胰岛淀粉样多肽衍生物的C末端为酰胺。
本发明的一方面，胰岛淀粉样多肽衍生物的氨基酸序列选自：
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.24)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTKVGSNTY(SEQ ID No.6)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTYK(SEQ ID No.7)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILKPTNVGSNTY(SEQ ID No.8)，
KCNTATCATQKLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.9)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSKNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.10)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSNKFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.11)，
KCNTATCATQRLANFKVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.12)，
KCNTATCATQRLANFLKHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.13)，
KCNTATCATQRLAKFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.14)，
KCNTATCATQRLANKLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.15)，
KCNTATCATKRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.16)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSKTY(SEQ ID No.17)，
KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTYK(SEQ ID No.18)，
KCNTATCATQRLANFLVKSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.19)，
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPKTNVGSNTY(SEQ ID No.20)，
KCNTATCATQRLANFLVKSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No.21)，
KCNTATCATQKLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No.22)，和
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGKILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.23)，
其中赖氨酸残基中的至少一个与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
又一方面，胰岛淀粉样多肽衍生物中仅有一个赖氨酸与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
优选的一方面，具有SEQ ID No 6-24的氨基酸序列中任一个的胰岛淀粉样多肽衍生物的C末端是酰胺。
本发明的又一方面，白蛋白结合残基与接头结合选自
Figure A200780009130D00291
和
Figure A200780009130D00292
本发明的一个方面，胰岛淀粉样多肽衍生物选自：
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ IDNo 24)，其中第1位的赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合为：
Figure A200780009130D00293
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTKVGSNTY(SEQ ID No.6)，其中第31位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00301
和
和
Figure A200780009130D00303
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTYK(SEQ ID No.7)，其中第38位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00304
和
Figure A200780009130D00305
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILKPTNVGSNTY(SEQ ID No.8)，其中第28位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00306
和
Figure A200780009130D00307
KCNTATCATQKLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.9)，其中第11位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00311
KCNTATCATQRLANFLVHSSKNFGPILPPTNVGSNTY(S EQ ID No.10)，其中第21位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00312
和
KCNTATCATQRLANFLVHSSNKFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.11)，其中第22位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00314
和
Figure A200780009130D00315
KCNTATCATQRLANFKVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.12)，其中第16位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00316
和
Figure A200780009130D00317
KCNTATCATQRLANFLKHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.13)，其中第17位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00321
KCNTATCATQRLAKFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.14)，其中第14位赖氨酸残基与白蛋白结合残基通过选自以下的接头连接：
Figure A200780009130D00322
KCNTATCATQRLANKLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.15)，其中第15位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00323
KCNTATCATKRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.16)，其中第10位赖氨酸残基与白蛋白结合残基通过选自以下的接头连接：
Figure A200780009130D00324
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSKTY(SEQ ID No.17)，其中第35位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00325
KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTYK(SEQ IDNo.18)，其中第38位赖氨酸残基与白蛋白结合残基通过选自以下的接头连接：
Figure A200780009130D00331
KCNTATCATQRLANFLVKSSNNFGPILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.19)，其中第18位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00332
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPKTNVGSNTY(SEQ ID No.20)，其中第29位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00333
KCNTATCATQRLANFLVKSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No.21)，其中第18位赖氨酸残基与白蛋白结合残基通过选自以下的接头连接：
Figure A200780009130D00334
KCNTATCATQKLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY(SEQ ID No.22)，其中第11位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
以及
KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGKILPPTNVGSNTY(SEQ ID No.23)，其中第25位赖氨酸残基与结合了接头的白蛋白结合残基连接，所述白蛋白结合残基与接头结合选自：
Figure A200780009130D00336
本发明在又一方面涉及用于增加人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中的作用时间的方法，其特征为：
a)通过用赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，并通过使所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，来修饰第2-37位中的氨基酸残基，或者
b)使第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
c)将赖氨酸残基添加到第38位，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
本发明在又一方面涉及一种用于增加人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中的作用时间的方法，其特征为：
a)通过用赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，并通过使所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，来修饰第2-37位中的氨基酸残基，或者
b)使第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
另一方面，本发明涉及一种方法，其中人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中的作用时间增至超过约40小时。
胰岛淀粉样多肽衍生物可以通过包括以下步骤的方法产生：在合适的营养培养基中允许肽表达的条件下，培养含有编码所述多肽的DNA序列并能表达所述多肽的宿主细胞，随后从培养物中回收。
用于培养细胞的培养基可以是适合用于培养宿主细胞的任何常规的培养基，例如含有合适的补充物的基本培养基或复合培养基。合适的培养基可得自供应商或可以按照公开的配方制备(例如在美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection)的产品目录中)。然后，细胞所产生的肽可以通过常规方法从培养基中回收，所述常规方法包括：经离心或过滤将宿主细胞从培养基中分离；利用盐(例如硫酸铵)使上清液或滤出液中的蛋白质组分沉淀；通过各种层析法(例如离子交换层析、凝胶过滤层析、亲和层析等)来纯化，这取决于待纯化的肽的类型。
编码治疗性多肽的DNA序列可以适当地来源于基因组或cDNA，例如按照以下步骤获得：制备基因组或cDNA文库，并依照标准技术，通过使用合成的寡核苷酸探针杂交来筛选出编码全部或部分所述多肽的DNA序列(参见例如Sambrook，J，Fritsch，EF和Maniatis，T，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，New York，1989)。编码所述多肽的DNA序列也可以通过已制定的标准方法来合成制备，例如在Beaucage和Caruthers，TetrahedronLetters 22(1981)，1859-1869中描述的亚磷酰胺(phosphoamidite)法，或在Matthes等，EMBO Journal 3(1984)，801-805中描述的方法。此DNA序列也可以使用特异性引物通过聚合酶链式反应来制备，例如在US4,683,202或Saiki等，Science 239(1988)，487-491中所描述的。
可以将DNA序列插入任何载体，所述载体可以方便地施以重组DNA的方法，载体的选择往往将取决于它所要引入的宿主细胞。因此，此载体可以是自主复制型载体，即作为染色体外的实体存在的载体，所述载体的复制独立于染色体复制，例如质粒。作为选择，载体可以是当引入到宿主细胞中时整合到宿主细胞基因组中并随它所整合的染色体一起复制的载体。
载体优选表达载体，此载体中编码所述肽的DNA序列与DNA转录所需的另外片段(例如启动子)可操作性地(oprerably)连接。启动子可以是在所选的宿主细胞中表现出转录活性的任何DNA序列，所述DNA序列可以从编码对于宿主细胞是同源或异源的蛋白的基因中获得。用于引导编码本发明肽的DNA在各种宿主细胞中转录的合适启动子的实例在本领域中众所周知，参照例如所述的Sambrook等。
如有必要，编码所述肽的DNA序列也可与合适的终止子、聚腺苷酸化信号、转录增强子序列和翻译增强子序列可操作性地连接。本发明的重组载体可以进一步包含使载体能够在所述宿主细胞中复制的DNA序列。
载体也可以包含选择标记，例如产物能够补足宿主细胞缺陷的基因、或赋予对药物(例如氨苄青霉素、卡那霉素、四环素、氯霉素、新霉素、潮霉素或氨甲喋呤)抗性的基因。
为了引导本发明的母肽进入宿主细胞的分泌途径，可以在重组载体中提供分泌信号序列(也称为前导序列、前原序列(prepro sequence)、前序列(pre sequence))。分泌信号序列在正确的阅读框中与编码所述肽的DNA序列连接。分泌信号序列一般位于编码肽的序列的5’。分泌信号序列分泌信号序列可以是与肽正常地结合的分泌信号序列或者可以来自编码另一种分泌蛋白的基因。
用于连接编码所述肽的DNA序列、启动子以及任选的终止子和/或分泌信号序列的方法，以及用于将它们插入含有复制所需信息的合适载体的方法为本领域的技术人员所熟知(参照例如上述的Sambrook等)。
引入了DNA序列或重组载体的宿主细胞可以是能够产生所述肽的任何细胞，包括细菌、酵母、真菌和高等真核细胞。为本领域所熟知并使用的合适宿主细胞的实例是而不限于：大肠杆菌、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或哺乳动物的BHK或CHO细胞系。
药物组合物
本发明的一方面，提供了包含本发明的衍生物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。本发明的又一方面，所述药物组合物适用于肠胃外给药。
本发明的另一个目的是提供包含本发明化合物的药物制剂，所述化合物以0.1mg/ml-25mg/ml的浓度存在，其中所述制剂具有3.0-9.0的pH。此制剂可以进一步包括缓冲系统、防腐剂、张度剂、螯合剂、稳定剂以及表面活性剂。在本发明的一个实施方案中，所述药物制剂是水性制剂，即含水制剂。此制剂通常是溶液或混悬液。在本发明的又一实施方案中，药物制剂是水溶液。术语“水性制剂”定义为含有至少50％w/w水的制剂。同样地，术语“水溶液”定义为含有至少50％w/w水的溶液，而术语“水性混悬液”定义为含有至少50％w/w水的混悬液。
在另一个实施方案中，所述药物制剂是冻干制剂，医师或患者在使用前向其加入溶剂和/或稀释剂。
在另一个实施方案中，所述药物制剂是现成的而无需预先溶解的干燥制剂(例如冷冻干燥或喷雾干燥的)。
又一方面，本发明涉及包含本发明化合物的水溶液和缓冲剂的药物制剂，其中所述化合物以0.1mg/ml或以上的浓度存在，而其中所述制剂具有约3.0-约9.0的pH。
在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约3.0-约7.0。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约4.0-约6.0。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约4.0-约5.0。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约7.0-约9.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约3.0-约7.0。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约5.0-约7.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约7.5-约9.0。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约7.5-约8.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约6.0-约7.5。在本发明的另一个实施方案中，制剂的pH是约6.0-约7.0。
在本发明的又一实施方案中，缓冲剂选自：醋酸钠、碳酸钠、柠檬酸盐、甘氨酰甘氨酸、组氨酸、甘氨酸、赖氨酸、精氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠以及三羟甲基氨基甲烷、N-二羟乙基甘氨酸、曲辛、苹果酸、琥珀酸盐、马来酸、延胡索酸、酒石酸、天冬氨酸、或者它们的混合物。这些特定的缓冲剂中的每一种都构成了本发明可供选择的实施方案。
在本发明的又一实施方案中，所述制剂还包含药学上可接受的防腐剂。在本发明的又一实施方案中，所述防腐剂选自：苯酚、邻甲苯酚、间甲苯酚、对甲苯酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、2-苯氧乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、2-苯基乙醇、苄醇、三氯叔丁醇以及硫柳汞、溴硝丙二醇、苯甲酸、咪脲、氯己定(chlorohexidine)、脱氢醋酸钠、氯甲酚、对羟基甲酸乙酯、苄索氯铵、氯苯甘醚(chlorphenesine)(3对氯苯氧基丙-1，2-二醇)或者它们的混合物。在本发明的又一实施方案中，防腐剂以0.1mg/ml-20mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，防腐剂以0.1mg/ml-5mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，防腐剂以5mg/ml-10mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，防腐剂以10mg/ml-20mg/ml的浓度存在。这些特定防腐剂中的每一种都构成了本发明可供选择的实施方案。防腐剂在药物组合物中的应用为本领域的技术人员所熟知。为了方便，请参考Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，19thedition，1995。
本发明的又一实施方案中，所述制剂还包含等张剂。本发明的又一实施方案中，所述等张剂选自：盐(例如氯化钠)、糖或糖醇、氨基酸(例如L-甘氨酸、L-组氨酸、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸)、糖醇(例如甘油、1，2-丙二醇(丙二醇)、1，3-丙二醇、1，3-丁二醇)、聚乙二醇(例如PEG400)或者它们的混合物。可以使用任何糖例如单糖、二糖或多糖、或水溶性葡聚糖，包括例如：果糖、葡萄糖、甘露糖、山梨糖、木糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、海藻糖、葡聚糖、普鲁兰(pullulan)、糊精、环糊精、可溶性淀粉、羟乙基淀粉以及羧甲基纤维素钠。在一个实施方案中，糖添加剂是蔗糖。糖醇定义为具有至少一个-OH基的C4-C8碳氢化合物，包括例如甘露醇、山梨醇、肌醇、半乳糖醇、卫矛醇、木糖醇以及阿拉伯糖醇。在一个实施方案中，糖醇添加剂是甘露醇。所述糖或糖醇可以单独或联合使用。不存在对用量的固定限制，只要糖或糖醇可溶于液体制剂中并且不会负面影响使用本发明的方法所实现的稳定效果。在一个实施方案中，糖或糖醇浓度在约1mg/ml-约150mg/ml之间。在本发明的又一实施方案中，等张剂以1mg/ml-50mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，等张剂以1mg/ml-7mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，等张剂以8mg/ml-24mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，等张剂以25mg/ml-50mg/ml的浓度存在。这些特定的等张剂中的每一种都构成了本发明可供选择的实施方案。等张剂在药物组合物中的应用为本领域的技术人员所熟知。为了方便，请参考Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，19thedition，1995。
在本发明的又一实施方案中，所述制剂还包含螯合剂。在本发明的又一实施方案中，螯合剂选自：乙二胺四乙酸(EDTA)、柠檬酸和天冬氨酸的盐以及它们的混合物。在本发明的又一实施方案中，螯合剂以0.1mg/ml-5mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，螯合剂以0.1mg/ml-2mg/ml的浓度存在。在本发明的又一实施方案中，螯合剂以2mg/ml-5mg/ml的浓度存在。这些特定的螯合剂中的每一种都构成了本发明可供选择的实施方案。螯合剂在药物组合物中的应用为本领域的技术人员所熟知。为了方便，请参考Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995。
在本发明的又一实施方案中，所述制剂还包含稳定剂。稳定剂在药物组合物中的应用为本领域的技术人员所熟知。为了方便，请参考Remington：The Science and Practice of Pharmacy，19thedition，1995。
更详细地讲，本发明的组合物是稳定的液体药物组合物，它们的治疗活性组分包括多肽，所述多肽在贮存于液体药物制剂期间可能呈现出形成聚集体。“形成聚集体”指的是多肽分子之间的物理相互作用，其导致形成仍然可溶的低聚体或从溶液中沉淀下来的大而可见的聚集物。“在贮存期间”指的是制备后的液体药物组合物或制剂并不马上施用于受试者。而是在制备完以后，它或以液体形式，或以冷冻状态，或以随后能重新构成液体形式的干燥形式或适用于给予受试者的其他形式被包装以用于贮存。“干燥形式”指的是液体药物组合物或制剂或通过冷冻干燥(即冻干法；参见例如Williams和Polli(1984)J.Parenteral Sci.Technol.38：48-59)、喷雾干燥(参见Masters(1991)载于Spray-Drying Handbook(5th ed；LongmanScientific和Technical，Essez，U.K.)，pp.491-676；Broadhead等(1992)Drug Devel.Ind.Pharm.18：1169-1206；以及Mumenthaler等(1994)Pharm.Res.11：12-20)或风干(Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology25：459-470；以及Roser(1991)Biopharm.4：47-53)来干燥。在液体药物组合物的贮存期间多肽形成聚集体，则可以负面影响肽的生物活性，从而导致药物组合物治疗功效的损失。此外，当使用输液系统来施用含多肽药物组合物时，聚集体的形成可以引起其他问题，例如阻塞管道、膜或泵。
本发明的药物组合物可以进一步包含在组合物贮存期间足以减少多肽形成聚集体的氨基酸碱(amino acid base)。“氨基酸碱”指的是氨基酸或氨基酸组合，其中任何给出的氨基酸以其游离碱的形式或以其盐的形式存在。当使用氨基酸组合时，这些氨基酸全部可以以其游离碱的形式存在；全部可以其盐的形式存在；或者一些以其游离碱的形式存在，而另一些以其盐的形式存在。在一个实施方案中，制备本发明的组合物中所用的氨基酸是具有带电荷侧链的氨基酸，例如精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸以及谷氨酸。特定氨基酸(例如甲硫氨酸、组氨酸、咪唑、精氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、天冬氨酸、色氨酸、苏氨酸以及它们的混合物)的任何立体异构体(即L、D或它们的混合物)或者这些立体异构体的组合可以在本发明的药物组合物中存在，只要此特定的氨基酸是以其游离碱的形式或以其盐的形式存在。在一个实施方案中，使用L-立体异构体。本发明的组合物也可以与这些氨基酸的类似物一起制备。“氨基酸类似物”指的是天然存在的氨基酸的衍生物，其产生在贮存本发明的液体药物组合物期间降低多肽形成聚集体的所需效果。合适的精氨酸类似物包括例如氨基胍、鸟氨酸和N-单乙基L-精氨酸；合适的甲硫氨酸类似物包括乙硫氨酸和丁硫氨酸；合适的半胱氨酸类似物包括S-甲基-L半胱氨酸。与其他氨基酸一样，氨基酸类似物以其游离碱的形式或以其盐的形式掺入组合物中。本发明的又一实施方案中，氨基酸或氨基酸类似物以足以阻止或延迟蛋白聚集的浓度使用。
本发明的又一实施方案中，如果用作治疗剂的多肽是包含至少一个易于氧化的甲硫氨酸残基的多肽，那么可以加入甲硫氨酸(或其他含硫的氨基酸或氨基酸类似物)来抑制甲硫氨酸残基氧化为甲硫氨酸亚砜。“抑制”指的是使随着时间的过去甲硫氨酸氧化种类有最少的积累。抑制甲硫氨酸的氧化可导致多肽更好地以其固有的分子形式保持。可以使用甲硫氨酸的任何立体异构体(L或D)或其组合。加入量应该是足以抑制甲硫氨酸残基氧化、以使甲硫氨酸亚砜的量可被接受管理机构的量。一般来说，这意味着组合物中不含有超过约10％-约30％的甲硫氨酸亚砜。通常这可以通过加入甲硫氨酸以致使所加入的甲硫氨酸与甲硫氨酸残基之比为约1:1-约1000:1(例如10:1-约100:1)来实现。
在本发明的又一实施方案中，所述制剂还包含选自高分子量聚合物或低分子量化合物的稳定剂。在本发明的又一实施方案中，稳定剂选自：聚乙二醇(例如PEG 3350)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基-/羟基纤维素或其衍生物(例如HPC、HPC-SL、HPC-L和HPMC)、环糊精；如二羟基丙硫醇、巯基乙酸和2-甲硫乙醇的含硫物质；以及不同的盐(例如氯化钠)。这些特定的稳定剂中的每一种构成了本法明可供选择的实施方案。
药物组合物也包含另外的稳定剂，所述稳定剂进一步增强药物组合物中的治疗性活性多肽的稳定性。本发明特别感兴趣的稳定剂包括但不限于：甲硫氨酸和EDTA，其保护多肽对抗甲硫氨酸氧化；以及非离子表面活性剂，其保护多肽对抗由于冻融或机械剪切相关的聚集。
在本发明的又一实施方案中，所述制剂还包含表面活性剂。在本发明的又一实施方案中，表面活性剂选自洗涤剂、乙氧基化蓖麻油、聚乙二醇化甘油酯(polyglycolyzed glycerides)、乙酰化单酸甘油酯、山梨坦脂肪酸酯、聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段聚合物(例如泊洛沙姆例如
Figure A200780009130D0042102738QIETU
Figure A200780009130D0042102806QIETU
 
Figure A200780009130D0042102738QIETU
F68、泊洛沙姆188和407、Triton X-100)、聚氧乙烯山梨坦脂肪酸酯、聚氧乙烯和聚乙烯衍生物例如烷基化衍生物和烷氧基化衍生物(吐温，例如吐温-20、吐温-40、吐温-80和Brij-35)、单酸甘油酯或其乙氧基化衍生物、二酯酸甘油酯或其聚氧乙烯衍生物、醇类、甘油、凝集素和磷脂(例如磷脂酰丝氨酸、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、双磷脂酰甘油和鞘磷脂)；磷脂衍生物(例如二棕榈酰磷脂酸)和溶血磷脂衍生物(棕榈酰溶血磷脂酰-L-丝氨酸；和乙醇胺、胆碱、丝氨酸或苏氨酸的1-酰基-sn-甘油-3-磷酸酯)和溶血磷脂酰胆碱和磷脂酰胆碱的烷基、烷氧基(烷基酯)、烷氧基(烷基醚)衍生物，例如溶血磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱的月桂酰和肉豆蔻酰衍生物；极性头基(即胆碱、乙醇胺、磷脂酸、丝氨酸、苏氨酸、甘油、肌醇)的修饰物；带正电的DODAC、DOTMA、DCP、BISHOP、溶血磷脂酰丝氨酸和溶血磷脂酰苏氨酸；甘油磷脂(例如脑磷脂)、甘油糖脂(例如吡喃半乳糖苷)、鞘糖脂(例如神经酰胺、神经节苷酯)、月桂基磷酸胆碱、鸡蛋溶血卵磷脂、夫西地酸衍生物-(例如牛磺二氢夫西地酸钠等等)、长链脂肪酸及其盐C6-C12(例如油酸和辛酸)、酰基肉碱和衍生物、赖氨酸或精氨酸或组氨酸的Nα-酰化衍生物、或者赖氨酸或精氨酸的侧链酰化衍生物；包含赖氨酸、精氨酸或组氨酸与中性或酸性氨基酸的任何组合的二肽的Nα-酰化衍生物；包含中性氨基酸与两种带电氨基酸的任何组合的三肽的Nα-酰化衍生物、DSS(多库酯钠(CAS登记号[577-11-7]))、多库酯钙(CAS登记号[128-49-4])、多库酯钾(CAS登记号[7491-09-0])、SDS(十二烷基硫酸钠或月桂基硫酸钠)、辛酸钠、胆酸或其衍生物、胆汁酸及其盐和甘氨酸或牛磺酸的缀合物、熊去氧胆酸、胆酸钠、脱氧胆酸钠、牛磺胆酸钠、甘胆酸钠、N-十六烷基-N，N-二甲基-3-铵-1-丙磺酸盐、阴离子(烷基-芳基-磺酸盐)一价表面活性剂、两性离子表面活性剂(例如N-烷基-N，N-二甲铵基-1-丙磺酸盐、3-胆酰氨基-1-丙基二甲铵基-1-丙磺酸盐、阳离子表面活性剂(季铵碱)(例如溴化十六烷基三甲基铵、氯化十六烷基吡啶鎓)、非离子表面活性剂(例如十二烷基β-D-吡喃葡萄糖苷)、poloxamines(通过将环氧丙烷和环氧乙烷连续加入乙二胺而获得的四官能嵌段共聚物)(例如Tetronic’s)，或者表面活性剂可以选自咪唑啉衍生物、或其混合物。这些特定的表面活性剂中的每一种构成了本法明可供选择的实施方案。
表面活性剂在药物组合物中的应用为本领域的技术人员所熟知。为了方便，请参考Remington：The Science and Practice ofPharmacy，19thedition，1995。
在本发明的又一实施方案中，所述制剂还包含蛋白酶抑制剂，例如EDTA(乙二胺四乙酸)和苄脒HCl，但也可以使用其他商业上可获得的蛋白酶抑制剂。为了抑制自身催化，蛋白酶抑制剂的使用在包含蛋白酶酶原的药物组合物中特别有用。
有可能其他成分可以存在于本发明的肽药物制剂中。这些另外的成分可以包括湿润剂、乳化剂、抗氧化剂、填充剂、张度添加剂、螯合剂、金属离子、油质溶媒或载体、蛋白质(例如人血清白蛋白、明胶或蛋白质)以及两性离子(例如氨基酸如：甜菜碱、牛磺酸、精氨酸、甘氨酸、赖氨酸和组氨酸)。这些另外的成分理所当然地不应该负面影响本发明药物组合物的总稳定度。
可以将含有本发明化合物的药物组合物在若干部位给予需要该治疗的患者，例如：在局部部位，例如皮肤和粘膜部位；在避开吸收的部位，例如在动脉、静脉、心脏中施用；在与吸收有关的部位，例如在皮肤中、皮肤下、在肌肉或腹部中施用。
本发明药物组合物的施用可以通过若干途径，例如舌、舌下、口腔含化、口中、经口服、胃内和肠内、鼻内、肺部(例如通过细支气管和肺泡或它们的组合)、表皮、真皮、经皮、阴道、直肠、眼(例如通过结膜)、输尿管以及肠胃外来给与需要该治疗的患者。
本发明的组合物可以以若干剂型来施用，例如作为溶液、混悬液、乳剂、微乳剂、复合型乳剂、泡沫剂、药膏、糊剂、硬膏剂、软膏剂、片剂、包衣片、冲洗剂、胶囊(例如硬明胶胶囊和软明胶胶囊)、栓剂、直肠用胶囊剂、滴剂、凝胶剂、喷雾剂、粉剂、气雾剂、吸入剂、滴眼剂、眼用软膏、眼用冲洗剂、阴道栓剂、阴道环、阴道软膏、注射液、原位转化液(in situ transforming solution)(例如原位胶凝、原位安置、原位沉淀、原位结晶)、输液剂以及埋植剂。
本发明的组合物可以进一步混入药物载体、药物递送体系和高级药物递送体系，或通过例如共价、疏水或静电相互作用与药物载体、药物递送体系和高级药物递送体系连接(attach)，以进一步增强本发明化合物的稳定性；提高生物利用度；提高可溶性；减少不良作用；实现本领域的技术人员所熟知的按时疗法；和提高患者的顺从性；或以上的任何组合。载体、药物递送体系和高级药物递送体系包括但不限于：聚合物例如纤维素及衍生物、多糖例如葡聚糖及衍生物、淀粉和衍生物、聚(乙烯醇)、丙烯酸酯与异丁烯酸酯的聚合物、聚丙交酯与聚乙交酯及其嵌段共聚物、聚乙二醇、载体蛋白例如白蛋白、凝胶例如热胶凝体系(thermogelling system)、例如本领域的技术人员所熟知的嵌段共聚物体系；微团、脂质体、微球体、纳米微粒、液晶及其分散体、L2相及其分散体，其为脂质-水体系中相行为领域的技术人员所熟知；聚合微团、复合型乳剂、自乳化、自微乳化、环糊精及其衍生物、以及树枝状大分子。
本发明的组合物可用于配制固体、半固体、粉末以及溶液，用于通过使用例如定量吸入器、干粉吸入器和雾化器(所有的这些都是本领域的技术人员所熟知的装置)肺部施用本发明的化合物。
本发明的组合物具体可用于配制控释、持续释放、延释、延释和慢释药物递送体系。更具体地说但不限于，组合物可用于配制胃肠外控释体系和持续释放体系(两种体系皆导致给药次数减低许多倍)，此为本领域的技术人员所熟知。甚至更优选皮下施用控释体系和持续释放体系。在不限制本发明范围的情况下，有用的控释体系和组合物的实例为水凝胶、油质凝胶、液晶、聚合微团、微球体、纳米微粒。
产生对本发明组合物有用的控释体系的方法包括但不限于：结晶、浓缩、共结晶、沉淀、共沉淀、乳化、分散、高压均化、胶囊化、喷雾干燥、微胶囊化、凝聚、相分离、溶剂蒸发以产生微球体、挤压以及超临界流体法。请广泛参考：Handbook ofPharmaceutical Controlled Release(Wise，D.L.编辑，Marcel Dekker，NewYork，2000)和Drug and the Pharmaceutical Sciences vol.99：ProteinFormulation and Delivery(MacNally，E.J.编辑，Marcel Dekker，NewYork，2000)。
胃肠道外给药可以借助注射器(任选钢笔状注射器)通过皮下、肌内、腹膜内或静脉注射来进行。可供选择的是，胃肠道外给药可以通过输液泵来进行。另一种选择是一种组合物，所述组合物可以是用于以鼻内或肺部喷雾的形式施用本发明的化合物的溶液或混悬液。作为再一种选择，含有本发明化合物的所述药物组合物也可以适于透皮给药，例如通过无针注射，或由贴剂任选离子导入贴剂(iontophoretic patch)，或经粘膜(例如口腔含化)给药。
本发明的化合物可以在载体中作为溶液、混悬液或干粉，通过使用任何已知类型的适用于肺部药物递送的装置经由肺部途径来给药。这些装置的实例包括但不限于：用于肺部药物递送的三种通用型气雾剂产生装置，并可以包括喷射式或超声式雾化器、定量吸入器或干粉吸入器(参见Yu J，Chien YW.Pulmonary drug delivery：Physiologic and mechanistic aspects(肺部药物递送：生理学与机械学方面).Crit Rev Ther Drug Carr Sys 14(4)(1997)395-453)。
基于标准化测试方法，粒子的空气动力学粒径(da)定义为：单位密度(1g/cm3)的参考标准球形粒子的几何等效粒径。在最简单的情况下，对于球形粒子而言，如以下所描述的，da与参考粒径(d)相关，为密度比平方根的函数：
d a = ρ ρ a d
对于非球形颗粒则对以上关系进行修改(参考Edwards DA，Ben-Jebria A，Langer R.Recent advances in pulmonary drug delivery usinglarge，porous inhaled particles(使用大的多孔吸入颗粒进行肺部药物递送的最新进展).J Appl Physiol 84(2)(1998)379-385)。术语“MMAD”和“MMEAD”于本领域有充分描述并且众所周知(参考Edwards DA，Ben-Jebria A，Langer R，代表了对空气动力学粒径分布中值的度量。Recent advances in pulmonary drug delivery using large，porous inhaledparticles(使用大分多孔吸入颗粒进行肺部药物递送的最新进展).JAppl Physiol 84(2)(1998)379-385)。质量中值空气动力学粒径(MMAD)和质量中值有效空气动力学粒径(MMEAD)可交换使用，是统计学参数，并且从经验上描述了与气溶胶粒子沉积于肺内的可能性相关、而与实际形状、大小或密度无关的气溶胶粒径(参考Edwards DA，Ben-Jebria A，Langer R.Recent advances in pulmonarydrug delivery using large，porous inhaled particles(使用大的多孔吸入颗粒进行肺部药物递送的最新进展).J Appl Physiol 84(2)(1998)379-385)。通常根据使用撞击器(impactor)(测量空气中粒子惯性行为的仪器)的测量结果计算MMAD。
在又一实施方案中，可以通过任何已知的气雾化技术(例如喷雾)使所述制剂雾化，以实现气溶胶粒子的MMAD少于10μm，更优选为1-5μm，最优选为1-3μm。优选的粒径基于对于将药物递送到肺部深处最有效的尺寸，其中蛋白质任选被吸收(参考Edwards DA，Ben-Jebria A，Langer A，Recent advances in pulmonary drug deliveryusing large，porous inhaled particles(使用大的多孔吸入颗粒进行肺部药物递送的最新进展).J Appl Physiol 84(2)(1998)379-385)。
包含本发明化合物的肺制剂的肺部深处沉积可以任选通过使用所述吸入技术的改进方法来进一步优化，例如但不限于放缓吸入流速(例如30L/min)、屏住呼吸以及对刺激计时。
术语“稳定的制剂”指的是物理稳定性提高、化学稳定性提高或物理及化学稳定性提高的制剂。
本文所使用的蛋白制剂的术语“物理稳定性”指的是：蛋白质因暴露在热-机械应力下和/或与被去稳定的界面和表面(例如疏水表面和界面)相互作用而导致形成无生物活性和/或不溶性蛋白质聚合物的倾向。水性蛋白制剂的物理稳定性通过以下方式来进行评价：在使装在合适的容器(例如药筒或小瓶)中的制剂于不同的温度在热-机械应力(例如搅拌)下暴露不同时间之后，进行目测检查和/或浊度测量。制剂的目测检查在黑暗背景下用锐聚焦光来进行。制剂的浊度以目测计分来表征，目测计分评定浑浊程度的等级，例如等级为0-3(表现出不浑浊的制剂对应于目测计分0，而在日光下表现出可见浑浊的制剂对应于目测计分3)。当制剂在日光下表现出可见的浑浊时，则此制剂被归类为就蛋白质聚集而言物理不稳定。可供选择的是，制剂的浊度可以通过为本领域技术人员所熟知的简单浊度测量值来评价。水性蛋白制剂的物理稳定性也可以通过使用蛋白质构象状态的光谱剂或探针来评价。探针优选是优先结合蛋白质的非天然构象异构体的小分子。蛋白质结构的小分子光谱探针的一个实例是硫磺素T。硫磺素T是已被广泛地用于检测淀粉状蛋白原纤维的荧光染料。在所述原纤维以及也可能有其他蛋白质构型的存在下，当硫磺素T与原纤维蛋白形式结合时，会在约450nm下产生新的激发最大值以及在约482nm下产生增强的发射。在这些波长下，未结合的硫磺素T基本上是非荧光的。
其他小分子可以用作蛋白质结构从天然状态变为非天然状态的探针。例如优先结合蛋白质的外露疏水补片(hydrophobic patch)的“疏水补片”探针。所述疏水补片通常包埋在以其天然状态存在的蛋白质的三级结构中，但随着蛋白质开始展开或变性它会转为外露。这些小分子光谱探针的实例是芳香族疏水染料，例如蒽(antrhacene)、吖啶、菲咯啉等。其他光谱探针是金属-氨基酸络合物，例如疏水性氨基酸(例如苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸和缬氨酸等)的钴金属络合物。
本文所使用的术语蛋白制剂的“化学稳定性”指的是这样的蛋白结构的化学共价变化，其导致形成与天然蛋白结构相比生物效能可能更低和/或免疫原性特性潜在增强的的化学降解产物。根据天然蛋白质的类型与性质以及蛋白质所暴露的环境，可以形成各种化学降解产物。正如本领域技术人员所熟知的，化学降解的消除最可能不能完全避免，而在蛋白制剂贮存或使用期间经常看到化学降解产物数量的增加。大部分蛋白易于脱酰胺，这是谷氨酰胺酰或天冬酰胺酰残基中的侧链酰氨基水解形成游离羧酸的过程。其他降解途径包括：生成高分子量转化产物，其中两个或更多个蛋白质分子通过转酰胺和/或二硫化物相互作用彼此共价结合，从而导致形成共价结合的二聚体、寡聚体以及多聚体的降解产物(Stability of ProteinPharmaceuticals，Ahern.T.J.& Manning M.C.，Plenum Press，New York1992)。氧化(例如甲硫氨酸残基的氧化)可以被叙述为化学降解的另一种变体。蛋白制剂的化学稳定性可以通过以下方法评估：在使蛋白制剂暴露于不同的环境条件下以后，于不同的时间点测量化学降解产物的量(通常可以通过例如提高温度加快降解产物的形成)。每种单个降解产物的量通常通过根据分子大小和/或电荷使用各种层析技术(例如SEC-HPLC和/或RP-HPLC)分离降解产物来检测。
因此，如上文所概述的，“稳定的制剂”指的是物理稳定性提高、化学稳定性提高或物理及化学稳定性提高的制剂。一般来说，制剂必须在使用或贮存(符合所推荐的使用及贮存条件)期间保持稳定，直至达到失效日期。
在本发明的一个实施方案中，包含本发明化合物的药物制剂可在使用超过6周和贮存超过3年期间保持稳定。
在本发明的另一个实施方案中，包含本发明化合物的药物制剂可在使用超过4周和贮存超过3年期间保持稳定。
在本发明的又一个实施方案中，包含本发明化合物的药物制剂可在使用超过4周和贮存超过2年期间保持稳定。
在本发明的再一个实施方案中，包含本发明化合物的药物制剂可在使用超过2周和贮存超过2年期间保持稳定。
另一方面，本发明涉及本发明的化合物在药物制备中的应用。
在一个实施方案中，使用本发明的化合物来制备用于治疗或预防高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、中风、冠心病和其他心血管疾病、炎性肠病、消化不良以及胃溃疡的药物。
在另一个实施方案中，使用本发明的化合物来制备用于延缓或预防2型糖尿病病情发展的药物。
在另一个实施方案中，使用本发明的化合物制备用于减少食物摄取、减少β细胞程序性死亡、增强β细胞功能与增加β细胞群集、和/或用于恢复β细胞对葡萄糖敏感性的药物。
本发明的一个方面，提供用作药物的本发明的衍生物，所述药物用于治疗或预防高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管疾病、中风、炎性肠病、消化不良以及胃溃疡的药物，或者被提供用于延缓或预防2型糖尿病病情发展，或者用于减少食物摄取、减少β细胞程序性死亡、增强β细胞功能与增加β细胞群集、和/或用于恢复β细胞对葡萄糖的敏感性。
本发明的又一方面，提供用于治疗或预防高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管疾病、中风、炎性肠病、消化不良以及胃溃疡，或者用于延缓或预防2型糖尿病病情发展，或者用于减少食物摄取、减少β细胞程序性死亡、增强β细胞功能与增加β细胞群集、和/或用于恢复β细胞对葡萄糖的敏感性的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的患者治疗有效量的本发明衍生物。
用本发明化合物的治疗也可以与第二种或更多种药理活性物质联合，所述药理活性物质例如选自抗糖尿病、减肥药、食欲调节剂、抗高血压药、用于治疗和/或预防因糖尿病产生或与之相关的并发症的药剂、以及用于治疗或预防因肥胖症产生或与之相的并发症和功能紊乱的药剂。这些药理活性物质的实例为：胰岛素、磺酰脲、双胍、美格列奈、葡萄糖苷酶抑制剂、胰高血糖素拮抗药、DPP-IV(二肽基肽酶IV)抑制剂、参与刺激糖异生和/或糖原分解的肝酶的抑制剂、葡萄糖摄取调节剂、修饰脂类代谢的化合物例如抗高血脂药如HMG CoA抑制剂(他汀类)的、降低食物摄取的化合物、RXR激动剂或作用于β细胞的ATP依赖性钾通道的药剂；考来烯胺、考来替泊、氯贝丁酯、吉非贝齐、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、普罗布考、右甲状腺素、那格列奈(neteglinide)、瑞格列奈；β阻滞药，例如阿普洛尔、阿替洛尔、噻吗洛尔、吲哚洛尔、普萘洛尔与美托洛尔；ACE(血管紧张素转化酶)抑制剂，例如贝那普利、卡托普利、依那普利、福辛普利、赖诺普利、alatriopril、喹那普利和雷米普利；钙通道阻断剂，例如硝苯地平、非洛地平、尼卡地平、伊拉地平、尼莫地平、地尔硫
Figure A200780009130D00511
和维拉帕米；以及α-阻断剂，例如多沙唑嗪、乌拉地尔、哌唑嗪和特拉唑嗪；CART(可卡因苯丙胺调控的转录物)激动剂、NPY(神经肽Y)拮抗剂、MC4(黑皮质素4)激动剂、食欲肽(orexin)拮抗剂、TNF(肿瘤坏死因子)激动剂、CRF(促肾上腺皮质素释放因子)激动剂、CRF BP(促肾上腺皮质素释放因子结合蛋白)拮抗剂、尿皮质素(urocortin)激动剂、β3激动剂、MSH(促黑素细胞激素)激动剂、MCH(黑素细胞收缩激素(melanocyte-concentratinghormone))拮抗剂、CCK(缩胆囊素)激动剂、血清素重摄取抑制剂、血清素与去甲肾上腺素摄取抑制剂、混合的血清素与去甲肾上腺素能化合物、5HT(血清素)激动剂、铃蟾肽激动剂、甘丙肽拮抗剂、生长激素、生长激素释放化合物、TRH(促甲状腺素释放激素)激动剂、UCP2或3(解偶联蛋白2或3)调节剂、瘦蛋白激动剂、DA激动剂(溴隐亭、doprexin)、脂肪酶/淀粉酶抑制剂、RXR(视黄醇类X受体)调节剂、TRβ激动剂；组胺H3拮抗剂、胃泌素和胃泌素类似物。
应当理解的是，本发明的化合物与一种或更多种上述化合物以及任选的一种或更多种另外的药理活性物质的任何合适的组合，都被认为在本发明的范围内。
本发明的进一步实施方案
1.具有SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
a)第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
2.具有SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的实施方案1的衍生物，其中
第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
3.实施方案1或2中任一项的衍生物，其中第2、3、4、5或6位的氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
4.实施方案1或2中任一项的衍生物，其中第23、24、25、26、27或28位的氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
5.实施方案1或2中任一项的衍生物，其中第32、33、34、35、36或37位的氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
6.实施方案1-5中任一项的衍生物，其中所述衍生物与人胰岛淀粉样多肽相比具有1-6个氨基酸取代。
7.实施方案1-5中任一项的衍生物，其中所述衍生物与人胰岛淀粉样多肽相比具有1-4个氨基酸取代。
8.实施方案1-7中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGPILPP-(SEQ ID No.3)。
9.实施方案1-7中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGEILSS-(SEQ ID No.4)。
10.实施方案1-7中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGDILSS-(SEQ ID No.5)。
11.实施方案1的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽，其中
a)人胰岛淀粉样多肽的第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)人胰岛淀粉样多肽的第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接。
12.实施方案11的衍生物，其中所述衍生物是SEQ ID No.1的人胰岛淀粉样多肽，其中
人胰岛淀粉样多肽的第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
13.实施方案11或12中任一项的衍生物，其中第2、3、4、5或6位的氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
14.实施方案11或12中任一项的衍生物，其中第23、24、25、26、27或28位的氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
15.实施方案11或12中任一项的衍生物，其中第32、33、34、35、36或37位的氨基酸残基被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，任选通过接头来连接。
16.实施方案11-15中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGPILPP-(SEQ ID No.3)。
17.实施方案11-15中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGEILSS-(SEQ ID No.4)。
18.实施方案11-15中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变成-FGDILSS-(SEQ ID No.5)。
19.实施方案1-18中任一项的衍生物，其中所述衍生物与聚乙二醇聚合物连接。
20.实施方案19的衍生物，其中所述聚乙二醇聚合物是具有至少30kD的分子量的聚乙二醇。
21.实施方案18-20中任一项的衍生物，其中所述聚乙二醇聚合物是支链的聚乙二醇。
22.实施方案1-18中任一项的衍生物，其中所述衍生物与白蛋白结合残基连接。
23.实施方案22的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是亲脂性残基。
24.实施方案22的衍生物，其中所述白蛋白结合残基在生理pH值下带负电。
25.实施方案22的衍生物，其中所述白蛋白结合残基包含可以带负电的基团。
26.实施方案25的衍生物，其中所述白蛋白结合残基包含羧酸基。
27.实施方案22-26中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基与白蛋白非共价结合。
28.实施方案22-27中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基对人血清白蛋白的结合亲和力低于约10μM或低于约1μM。
29.实施方案22的衍生物，其中所述白蛋白残基选自：直链烷基、支链烷基、具有ω-羧酸基的基团、和部分或完全氢化的环戊烷并菲骨架。
30.实施方案22的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是汽巴克隆基残基。
31.实施方案23的衍生物，其中所述亲脂性残基包含部分或完全氢化的环戊烷并菲骨架。
32.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基具有6-40个碳原子、8-26个碳原子或8-20个碳原子。
33.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是选自CH3(CH2)rCO-的酰基，其中r是4-38的整数，优选4-24的整数，所述白蛋白结合残基更优选选自CH3(CH2)6CO-、CH3(CH2)8CO-、CH3(CH2)10CO-、CH3(CH2)12CO-、CH3(CH2)14CO-、CH3(CH2)16CO-、CH3(CH2)18CO-、CH3(CH2)20CO-和CH3(CH2)22CO-。
34.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是直链或支链链烷α，ω-二羧酸的酰基。
35.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是选自HOOC(CH2)sCO-的酰基，其中s是4-38的整数，优选4-24的整数，所述白蛋白结合残基更优选选自HOOC(CH2)14CO-、HOOC(CH2)16CO-、HOOC(CH2)18CO-、HOOC(CH2)20CO-和HOOC(CH2)22CO-。
36.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是式CH3(CH2)vCO-NHCH(COOH)(CH2)2CO-的基团，其中v为10-24的整数。
37.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是式CH3(CH2)wCO-NHCH((CH2)2COOH)CO-的基团，其中w为8-24的整数。
38.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是式COOH(CH2)xCO-的基团，其中x为8-24的整数。
39.实施方案23的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是式-NHCH(COOH)(CH2)4NH-CO(CH2)yCH3的基团，其中y为8-18的整数。
40.实施方案22的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是肽，例如包含少于40个氨基酸残基的肽。
41.实施方案22-40中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基任选通过接头经由赖氨酸残基的ε-氨基连接。
42.实施方案22-40中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基任选通过接头经由半胱氨酸残基连接。
43.药物组合物，其包含实施方案1-42中任一项的衍生物和药学上可接受的赋形剂。
44.实施方案43的药物组合物，其适用于胃肠道外给药。
45.实施方案1-42中任一项的衍生物在制备药物中的应用。
46.实施方案1-42中任一项的衍生物在制备用于治疗或预防以下疾病的药物中的应用：高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管疾病、中风、炎性肠病、消化不良以及胃溃疡。
47.实施方案1-42中任一项的衍生物在制备用于延缓或预防2型糖尿病病情发展的药物中的应用。
48.实施方案1-42中任一项的衍生物在制备用于减少食物摄取、减少β细胞程序性死亡、增强β细胞功能与增加β细胞群集、和/或以恢复β细胞对葡萄糖的敏感性的药物中的应用。
49.用于增加人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中作用时间的方法，其特征表现为：
a)通过用赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代并通过使所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，来修饰第2-37位中的氨基酸残基，或者
b)使第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
50.实施方案49的方法，其中人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中的作用时间增至超过约40小时。
51.实施方案49或50中任一项的方法，其中人胰岛淀粉样多肽或其类似物如在实施方案1-41的任一项中所进一步定义。
前述描述中所公开的特征可以是用于实现本发明各种形式的材料及其组合。
本文中所引用的所有参考资料(包括出版物、专利申请以及专利)在此引作参考，其程度就如同每一参考资料都个别地并明确地被指明引作参考和全文陈述于此一样。
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本文中范围的记载仅旨在用作个别地提及属于所述范围的每个单独数值的简便方法，除非于此另作指明，而每个单独数值引入说明书中，正如它在本文中单独地被记载一样。除非另有说明，否则本文提供的所有准确数值代表的是相应的近似值(例如可以认为：所提供的关于特定系数或测量数值的所有准确例示性数值可被认为也提供了相应的近似测量值，合适时用“约”来修饰)。
在本文中所描述的所有方法可以以任何适当的顺序来进行，除非在本文中另作指明或明显地与上下文相抵触。
在本文中所提供的任何和所有实例或例示性用语(例如“例如”)的使用仅旨在以更好地阐明本发明，而非限制本发明的范围，除非另作指明。在本说明书中的任何用语都不应被解释成表明任何要素是实施本发明所必需的，除非有同样的明确叙述。
本文中对专利文件的引用以及引入仅为了方便，而并不反映这些专利文件的有效性、专利性和/或可实施性的任何观点。
在本文中关于一个或多个要素使用诸如“包含”、“具有”、“包括”、“含有”的术语来对本发明的任何方面或实施方案进行描述时，其意图在于为“由”所述特定的一个或多个要素“组成”或“基本上由(所述要素)组成”，或者“基本上包含”所述要素的本发明类似方面和实施方案提供支持，除非另有说明或明显地与上下文相抵触(例如在本文中描述为包含特定要素的制剂应该被理解成也描述了由所述要素组成的制剂，除非另有说明或明显地与上下文相抵触)。
本发明在适用法律允许的最大范围包括了本文中提出的方面或求利要求中所记载主题的所有修改与等同方案。
在以下代表性的方法和实施例中进一步阐述本发明，然而所述方法和实施例并非旨在以任何形式限制本发明的范围。
测定方法
药理学测定(I)-用于用胰岛淀粉样多肽衍生物测试对食欲功效的实验方案，使用随意喂食的大鼠模型。
来自丹麦M&B育种与研究中心A/S(M&B Breeding andResearch Centre A/S，Denmark)的TAC：SPRD @mol大鼠或Wistar大鼠用于此实验。在实验开始时，大鼠体重为200-250g。大鼠在实验开始前至少10-14天达到，它们的体重为180-200g。以6-8只大鼠的组别测试每一剂量的衍生物。在每个系列的测试中，都使用6-8只大鼠的赋形剂组。
当这些动物达到时，将它们单独地放在光照/黑暗时间颠倒的室中(早上7:30关灯，下午7:30关灯)，亦即日间关灯而夜间开灯。因为大鼠一般是在光线移走时开始摄食，并且在夜间完成它们每天摄食的主要部分，所以这种设置导致其开始摄食时间转变为早上7:30，这时正好关灯。在10-14天的驯化期间，这些大鼠可以自由地取食和饮水。在此期间对所述动物处理至少3次。实验在大鼠的养笼中进行。临服药前根据体重将大鼠随机地分到各个治疗组别(n＝6-8)。在早上7:00至早上7:45之间根据体重以0.01-3mg/kg溶液经腹膜内(ip)、口服(po)或皮下(sc)施用对其给药。记录每一组的给药时间。给药后，将大鼠放回养笼，在笼中它们取食和饮水中。通过联机登记或手工逐个地连续记录食物消耗情况，每小时记录一次持续7小时，然后24小时以及有时48小时后再进行记录。在实验期结束时，处小鼠以无痛死亡。
各个数据记录在微软excel工作表中。在应用异常值的Grubbs统计评估检验法之后将异常值排除，使用GraphPad Prism程序使结果以图来表示。
药理学测定(II)-用于用胰岛淀粉样多肽衍生物测试对食欲功效的实验方案，使用定时喂食的大鼠模型。
来自丹麦M&B育种与研究中心A/S(M&B Breeding andResearch Centre A/S，Denmark)的TAC：SPRD@mol大鼠或Wistar大鼠用于此实验。在实验开始时，大鼠的体重为200-250g。这些大鼠在实验开始前至少10-14天达到，它们的体重为180-200g。以6-8只小鼠组别测试每一剂量的衍生物。在每个系列的测试中，都使用了6-8只小鼠的赋形剂组。
当这些动物达到时，将它们单独关养。开始研究前至少7天，开始按照喂食时间表对它们进行调驯，使它们以3-7小时的排定时间周期自由饮食。在每天的剩余时间内不能让大鼠取食，而仅能饮水。在一星期之内大鼠将每天完全按照设定的时间表来吃定量的食物。因为大鼠一般在光线移走时开始摄食，并且在夜间完成它们每天摄食的主要部分，所以这种设置允许在日间监测摄食情况，并且将通常意味着与随意喂食的大鼠相比赋形剂组中变化更少。在10-14天的驯化期间，这些大鼠可以自由地饮食。在此期间对该动物处理至少3次。实验在大鼠的养笼中进行。临给药前根据体重将大鼠随机地分到各个治疗组(n＝6-8)。在给定取食前15至30分钟之间，根据体重以0.01-3mg/kg溶液经腹膜内(ip)、口服(po)或皮下(sc)施用以对它们给药。记录每一组的给药时间。给药后，将大鼠放回养笼中，在笼中它们可以饮食。通过联机登记或手工在时间表内每小时逐个地连续记录食物消耗情况，在实验期结束时，处小鼠以无痛死亡。
各个数据记录在微软excel工作表中。在应用异常值的Grubbs统计评估检验法之后将异常值排除，使用GraphPad Prism程序使结果以图来表示。
胰岛淀粉样多肽受体结合测定
使用来自以下描述的胰岛淀粉样多肽3(a)/CRE-luc细胞的膜进行了受体结合测定。示踪物是在N末端酪氨酸中用125I碘标记的Tyr-普兰林肽。使SPA-WGA珠(GE Healthcare RPNQ0001)与膜、示踪物以及胰岛淀粉样多肽类似物的系列稀释液，在含有50mM Hepes、5mM MgCl2、5mM EGTA、0.025％吐温-20，pH7.4的缓冲液的96孔Optiplate中孵育。
于室温下孵育2小时后，将板离心并在Topcounter上读数。计算EC50作为受体亲和力的测量结果。
胰岛淀粉样多肽荧光素酶测定
1.胰岛淀粉样多肽测定概述
先前业已公开的是(Poyner DR等2002，Pharmacological Reviews54(2)233-246)，胰岛淀粉样多肽激活胰岛淀粉样多肽受体(降钙素受体和受体激活修饰性肽RAMP的共表达)导致cAMP在细胞内浓度的增加。所以，在含有多拷贝cAMP应答元件(CRE)的启动子处转录被激活。因此，有可能通过使用引入到也表达胰岛淀粉样多肽受体的BHK细胞中的CRE荧光素酶受体基因，来测量胰岛淀粉样多肽的活性。
2.构建胰岛淀粉样多肽3(a)/CRE-luc细胞系
用人降钙素受体(CTa)和CRE应答性荧光素酶报告基因稳定转染BHK570细胞系。使用标准方法用RAMP-3进一步转染该细胞系。这使降钙素受体转变成胰岛淀粉样多肽3(a)受体。氨甲喋呤、新霉素和潮霉素分别是荧光素酶、降钙素受体和RAMP-3的选择标记。
3.胰岛淀粉样多肽荧光素酶测定
将BHK胰岛淀粉样多肽3(a)//CRE-luc细胞以约20.000个细胞/孔的密度接种到白色96孔培养板中，以进行活性测定。所述细胞在100μl的生长培养基(含10％FBS、1％Pen/Strep、1mM丙酮酸钠、250nM氨甲喋呤、500μg/ml新霉素和400μg/ml潮霉素的DMEM)中。经过于37℃和5％CO2下孵育过夜之后，用50μl/孔的测定培养基(DMEM(不含酚红)、GlumamaxTM、10％FBS和10mM Hepes，pH7.4)代替生长培养基。再加入50μl含标准品或样品的测定缓冲液。经过于37℃和5％CO2下孵育4小时之后，移去含标准品或样品的测定培养基并用100μl/孔的PBS代替。进一步加入100μl/孔的LucLiteTM。将板封好并于室温下孵育30分钟。最后在TopCounter(Packard)上以SPC(单光子计数)模式测量发光情况。
实施例
肽合成：
肽合成方法之一是通过在基于微波的Liberty肽合成仪(CEM Corp.，North Carolina)上进行的Fmoc化学法。树脂是Tentagel S RAM，其负载量为0.24mmol/g。偶联化学是NMP中的DIC/HOAt，使用在NMP中的0.4M氨基酸溶液并且有8-10倍摩尔过量。偶联条件为5分钟于直至70℃。用NMP中的5％哌啶于高至70℃下去保护。当需要化学修饰赖氨酸侧链时，将赖氨酸以Lys(mtt)掺入，并通过用Boc-碳酸酯处理来保护N末端的氨基酸。通过将树脂悬浮在纯六氟异丙醇中20分钟、随后用DCM和NMP洗涤，恢复(repomed)mtt基。赖氨酸的化学修饰可以通过手动合成或通过在Liberty上的一个或多个自动步骤随后再通过手动偶联来进行。PEG化也可以通过使纯化的肽与例如含PEG2000-SPA(Nektar)的DMSO反应来进行。另一种肽合成法是在ABI 433上使用HBTU偶联的Fmoc化学法。合成后用DCM洗涤树脂并干燥，用TFA/TIS/水(92.5/5/2.5)处理2小时、随后用二乙醚沉淀，来将肽从树脂上切下。进一步用二乙醚洗涤并干燥后，使肽以1-2mg/ml重新溶解在水中，将pH调整到约4.5，用1当量的[Pt(IV)乙二胺2Cl2]Cl2处理过夜以形成二硫键。经冻干后将肽再溶解在30％乙酸中，使用乙腈/TFA在C18柱上通过标准RP-HPLC来纯化。可作选择的是，省略冻干，将水溶液直接应用到HPLC柱中。通过MALDI-MS确认了肽的身份。
所用的缩写：
DMF：N，N二甲基甲酰胺
HBTU：六氟合磷酸2-(1H-苯并三唑-1-基-)-1，1，3，3四甲基脲鎓
Fmoc：9H-芴-9-基甲氧羰基
Boc：叔丁氧羰基
Mtt：4-甲基三苯甲基
DCM：二氯甲烷
TIS：三异丙基硅烷)
TFA：三氟乙酸
NMP：1-甲基-吡咯烷-2-酮
HOAt：1-羟基-7-氮杂苯并三唑
DIC：二异丙基碳二亚胺
实施例1-28
如以下表1中所描述的实施例1-28的衍生物，根据上文中在“肽合成”下面所描述的来制备。实施例1-28的衍生物在如上文所描述的“胰岛淀粉样多肽荧光素酶测定”中检测，结果在表1中出示。实施例1-28的衍生物的受体亲和力在如上文所描述的“胰岛淀粉样多肽受体结合测定”中检测，结果在表1中出示。使用在20分钟内从10％-90％的乙氰/TFA浓度梯度，在分析型HPLC系统中测量表1中的HPLC洗脱数据。
下面出示了实施例编号1的结构以作为示例。展开了第2、7、18和37位残基的完全结构，而其余的氨基酸残基仅以其单字母代号出示。整条肽序列1-19在两个半胱氨酸(第2和7位)之间具有二硫键，而且全部都是C末端酰胺。
Figure A200780009130D00631
表1
 
NNCD编号 实施例编号 序列编号(见下表2)  R基(见下表3) 连接点 HPLC洗脱液(％乙腈) 功效荧光素酶测定     受体亲和力
0002 1 17 C K18-ε 67％ *** ***
0004 2 02 B K31-ε 59％ ** **
0005 3 02 A K31-ε 63％ ** **
0006 4 03 B K38-ε 59％ * *
0007 5 03 A K38-ε 62％ * *
0011 6 04 A K28-ε 62％ * *
0013 7 04 C K28-ε 66％ *** ***
 
0016 8 02 C K31-ε 67％ *** ***
0018 9 01 A K1-α 62％ *** ***
0020 10 06 D K21-ε 69％ *** ***
0022 11 06 A K21-ε 62％ ** ***
0024 12 07 A K22-ε 62％ * ***
0025 13 07 E K22-ε 68％ ** **
0027 14 08 A K16-ε 58％ * **
0028 15 08 F K16-ε 58％ * **
0033 16 01 A K1-ε 64％ ** ***
0034 17 09 A K17-ε 62％ ** **
0036 18 05 A K11-ε 64％ ** **
0047 19 10 A K14-ε 62％ * **
0050 20 11 A K15-ε 59％ * **
0055 21 14 C K38-ε 67％ ** **
0063 22 12 A K10-ε 68％ * **
0066 23 13 A K35-ε 68％ * *
0068 24 18 C K11-ε 67％ *** ***
0070 25 15 A K18-ε 62％ * **
0073 26 16 A K29-ε 62％ ** ***
0085 27 19 A K25-ε 61％ ** ***
0086 28 01 PEG2000 K1-α和K1-ε   56％ * *
表2
 
序列编号 肽序列 SEQ ID No.
01 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.24
02 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTKVGSNTY SEQ ID No.6
03 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTYK SEQ ID No.7
04 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILKPTNVGSNTY SEQ ID No.8
05 KCNTATCATQKLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.9
06 KCNTATCATQRLANFLVHSSKNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.10
07 KCNTATCATQRLANFLVHSSNKFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.11
08 KCNTATCATQRLANFKVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.12
09 KCNTATCATQRLANFLKHSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.13
10 KCNTATCATQRLAKFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.14
 
11 KCNTATCATQRLANKLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.15
12 KCNTATCATKRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.16
13 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPPTNVGSKTY SEQ ID No.17
14 KCNTATCATQRLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTYK SEQ ID No.18
15 KCNTATCATQRLANFLVKSSNNFGPILPPTNVGSNTY SEQ ID No.19
16 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGPILPKTNVGSNTY SEQ ID No.20
17 KCNTATCATQRLANFLVKSSNNLGPVLPPTNVGSNTY SEQ ID No.21
18 KCNTATCATQKLANFLVRSSNNLGPVLPPTNVGSNTY SEQ ID No.22
19 KCNTATCATQRLANFLVHSSNNFGKILPPTNVGSNTY SEQ ID No.23
表3
Figure A200780009130D00651
在以上表1中，衍生物的功效用“测定方法”下面的如上文所描述的“胰岛淀粉样多肽荧光素酶测定”进行测量。在以上表1中，衍生物的亲和力用“测定方法”下面的如上文所描述的“胰岛淀粉样多肽受体结合测定”进行测量。
在以上表1中，“***”指的是与普兰林肽相当的功效/亲和力，“**”指的是比普兰林肽略低的功效/亲和力，“**”指的是比普兰林肽低得多的功效/亲和力。
序列表
<110>Novo Nordisk A/S
<120>延伸的胰岛淀粉样多肽衍生物
<130>7355.204-PCT
<160>24
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>37
<212>PRT
<213>Homo sapiens
<220>
<221>二硫键
<222>(2)..(7)
<400>1
Figure A200780009130Q00671
<210>2
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>2
Figure A200780009130Q00681
<210>3
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>3
Figure A200780009130Q00682
<210>4
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>4
Figure A200780009130Q00683
Figure A200780009130Q00691
<210>5
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>5
Figure A200780009130Q00692
<210>6
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>6
<210>7
<211>38
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>7
<210>8
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>8
Figure A200780009130Q00702
Figure A200780009130Q00711
<210>9
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>9
<210>10
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>10
Figure A200780009130Q00721
<210>11
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>11
Figure A200780009130Q00722
<210>12
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>12
Figure A200780009130Q00731
<210>13
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>13
Figure A200780009130Q00732
Figure A200780009130Q00741
<210>14
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>14
<210>15
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>15
Figure A200780009130Q00743
Figure A200780009130Q00751
<210>16
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>16
Figure A200780009130Q00752
<210>17
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>17
Figure A200780009130Q00761
<210>18
<211>38
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>18
Figure A200780009130Q00762
<210>19
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>19
Figure A200780009130Q00771
<210>20
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>20
Figure A200780009130Q00772
Figure A200780009130Q00781
<210>21
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>21
Figure A200780009130Q00782
<210>22
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>22
Figure A200780009130Q00783
Figure A200780009130Q00791
<210>23
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>23
<210>24
<211>37
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>胰岛淀粉样多肽序列或衍生物
<400>24
Figure A200780009130Q00801

Claims (27)

1.人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
a)第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
c)赖氨酸残基已被添加到第38位，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
2.权利要求1的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
a)第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
b)第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
3.权利要求1-2中任一项的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接。
4.权利要求1-3中任一项的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
第2-37位中的氨基酸残基已被赖氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
5.权利要求1-4中任一项的人胰岛淀粉样多肽或其类似物的衍生物，其中
第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；
其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
6.权利要求1-6中任一项的衍生物，所述衍生物是人胰岛淀粉样多肽的衍生物。
7.权利要求1-6中任一项的衍生物，所述衍生物是人胰岛淀粉样多肽类似物的衍生物。
8.权利要求1-7中任一项的衍生物，其中第1、11、17、21、22、25、28、29或31位的氨基酸被赖氨酸残基取代，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基连接，任选通过接头来连接。
9.权利要求1-8中任一项的衍生物，其中所述氨酸残基与白蛋白结合残基通过接头连接。
10.权利要求1-9中任一项的衍生物，其中所述衍生物与人胰岛淀粉样多肽相比具有1-6个氨基酸取代。
11.权利要求1-10中任一项的衍生物，其中所述衍生物与人胰岛淀粉样多肽相比具有1-4个氨基酸取代。
12.权利要求1-11中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变为-FGPILPP-(SEQ ID No.3)。
13.权利要求1-11中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变为-FGEILSS-(SEQ ID No.4)。
14.权利要求1-11中任一项的衍生物，其中第23-29位的-FGAILSS-(SEQ ID No.2)被改变为-FGDILSS-(SEQ ID No.5)。
15.权利要求1-14中任一项的衍生物，其中所述衍生物具有至少4小时的血浆t1/2。
16.权利要求1-15中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基是亲酯性残基。
17.权利要求1-16中任一项的衍生物，其中所述接头是具有下式的亲水性接头B：
-C(O)-(CH2)1-O-[(CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O)-(CH2)1-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH-
其中1、m、n和p独立地是1-5，而q是0-5。
18.权利要求1-16中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基和接头结合为：
-C(O)-(CH2)1-O-[(CH2CH2-O]m-(CH2)p-[NHC(O)-(CH2)1-O-[(CH2)n-O]m-(CH2)p]q-NH-W
其中1、m、n和p独立地是1-5，而q是0-5，
W选自CH3(CH2)6CO-、CH3(CH2)8CO-、CH3(CH2)10CO-、CH3(CH2)12CO-、CH3(CH2)14CO-、CH3(CH2)16CO-、CH3(CH2)18CO-、CH3(CH2)20CO-、CH3(CH2)22CO-、HOOC(CH2)14CO-、HOOC(CH2)16CO-、HOOC(CH2)18CO-、HOOC(CH2)20CO-和HOOC(CH2)22CO-。
19.权利要求1-16中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基和接头结合为：
其中B如权利要求17中所定义，Z是CH3或COOH，V是H或COOH，q是7-21，而w是0-5。
20.权利要求1-16中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基和接头结合为：
Figure A200780009130C00051
其中Z是CH3或COOH，V是H或COOH，q是7-21，w是0-5，而k是0-5。
21.权利要求1-16中任一项的衍生物，其中所述白蛋白结合残基和接头结合为：
Figure A200780009130C00052
其中Z是CH3或COOH，q是7-21，而k是0-5。
22.用作药物的权利要求1-21中任一项的衍生物，所述药物用于治疗或预防高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管疾病、中风、炎性肠病、消化不良以及胃溃疡，或者用于延缓或预防2型糖尿病病情发展，或者用于减少食物摄取、减少β细胞程序性死亡、增强β细胞功能与增加β细胞群集、和/或用于恢复β细胞对葡萄糖的敏感性。
23.药物组合物，其包含权利要求1-21中任一项的衍生物以及药学上可接受的赋形剂。
24.用于增加人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中的作用时间的方法，其特征为：
a)通过用赖氨酸残基或半胱氨酸残基取代，并通过使所述赖氨酸残基或半胱氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，来修饰第2-37位中的氨基酸残基，或者
b)使第1位的赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，或者
c)将赖氨酸残基添加到第38位，其中所述赖氨酸残基与白蛋白结合残基或聚乙二醇聚合物连接，
任选通过接头来连接；其中所述氨基酸编号与SEQ ID No.1中的氨基酸编号一致。
25.权利要求24的方法，其中人胰岛淀粉样多肽或其类似物在患者中的作用时间增至超过约40小时。
26.权利要求24或25中任一项的方法，其中所述人胰岛淀粉样多肽或其类似物如在权利要求1-21中任一项所进一步定义的。
27.用于治疗或预防高血糖、2型糖尿病、葡萄糖耐量减低、1型糖尿病、肥胖症、高血压、X综合征、血脂异常、认知障碍、动脉粥样硬化、心肌梗塞、冠心病和其他心血管疾病、中风、炎性肠病、消化不良以及胃溃疡，或者用于延缓或预防2型糖尿病病情发展，或者用于减少食物摄取、减少β细胞程序性死亡、增强β细胞功能与增加β细胞群集、和/或用于恢复β细胞对葡萄糖的敏感性的方法，所述方法包括对需要所述治疗的患者施用对所述治疗有效的量的权利要求1-21中任一项的衍生物。
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