CN105658234A - 拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物 - Google Patents

拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物 Download PDF

Info

Publication number
CN105658234A
CN105658234A CN201480033501.8A CN201480033501A CN105658234A CN 105658234 A CN105658234 A CN 105658234A CN 201480033501 A CN201480033501 A CN 201480033501A CN 105658234 A CN105658234 A CN 105658234A
Authority
CN
China
Prior art keywords
diabetes
associated peptide
peptide compound
bioconjugates
plan
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201480033501.8A
Other languages
English (en)
Inventor
L.M.特拉姆拜奥里达罗查伊里马
L.H.古尔雷罗罗萨多
M.F.d.阿维拉内特托古特雷斯
B.梅洛维伊拉冈卡维斯费雷拉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universidade Federal do Rio de Janeiro UFRJ
Original Assignee
Universidade Federal do Rio de Janeiro UFRJ
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Universidade Federal do Rio de Janeiro UFRJ filed Critical Universidade Federal do Rio de Janeiro UFRJ
Publication of CN105658234A publication Critical patent/CN105658234A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Child & Adolescent Psychology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)

Abstract

本发明一般地涉及拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的新型非-凝聚生物缀合物及其主要在与胞外淀粉样蛋白沉积或积累有关的疾病的治疗中的用途，所述疾病促成全身性器官例如胰腺功能障碍或衰竭。

Description

拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物
本发明一般涉及拟胰岛淀粉样多肽（amylin)化合物与聚乙二醇的新型非-凝聚生物缀合物，及其主要在与胞外淀粉样蛋白沉积或积累有关的疾病的治疗中的用途，所述疾病促成全身性器官例如胰腺功能障碍或衰竭。
本发明一个具体的实施方案，不排除任何其它，涉及天然或合成的人胰岛淀粉样多肽与聚乙二醇的生物缀合物，及其在糖尿病和胰腺β-细胞膜表面上胰岛淀粉样多肽寡聚体积累引起的毒性作用的治疗中的用途。所述积累促成糖尿病的发病。因此保存（preserve）在糖尿病患者中已经恶化的那些细胞是本领域所寻求的益处。
发明背景
胰岛淀粉样多肽，胰岛的一种淀粉样蛋白多肽，其被鉴定为CAS RN: 106602-62-4，为响应进食与胰岛素共分泌的胰腺β-细胞激素，并补充胰岛素对餐后葡萄糖控制的效果。其为37个氨基酸的多肽，以100:1的胰岛素：胰岛淀粉样多肽比例与胰岛素共分泌。
已经知道胰岛淀粉样多肽在糖尿病和肥胖中的有益活性：增加饱腹感导致食物摄取减少和由此引起的体重减轻；减慢胃排空、改善的具有餐后峰值葡萄糖代谢概况和降低糖尿病患者中的胰高血糖素水平。
1型糖尿病患者实际上无天然胰岛淀粉样多肽产生，而长期存在的2型糖尿病患者具有比健康个体低的水平。
由于其理化性质，结构上未修饰的胰岛淀粉样多肽用作药学活性物质是不可能的。其在水溶液中有限的溶解度导致了更可溶的拟胰岛淀粉样多肽化合物，普兰林肽的开发，其中将鼠胰岛淀粉样多肽的37个氨基酸中的三个用脯氨酸替换。存在一个普兰林肽的相应市售产品，名为Symlin®。
尽管普兰林肽的溶解度大于人胰岛淀粉样多肽，但与人相比普兰林肽和鼠胰岛淀粉样多肽更相似，并且在中性pH中不具有良好的稳定性，因此产品Symlin®作为酸溶液提供。与人胰岛淀粉样多肽相比鼠胰岛淀粉样多肽显示减少的淀粉样蛋白凝聚倾向，提示了胰岛淀粉样多肽和拟胰岛淀粉样多肽物质的一般倾向。该产品作为皮下注射剂临餐前给予，旨在增加餐后胰岛淀粉样多肽水平。由于其10-15 min的短半衰期，这样的普兰林肽注射剂作为一系列峰增加血流中的胰岛淀粉样多肽浓度，不能恢复禁食期间的胰岛淀粉样多肽基础水平。在科学文献中，已经将普兰林肽与增加的胰岛素-诱导的严重低血糖和其它有害作用例如恶心、呕吐、厌食症和疲劳风险关联。
技术文献似乎并未集中在对人胰岛淀粉样多肽的凝聚倾向或胰岛淀粉样多肽沉积及其对胰腺β-细胞膜的有害作用的解决方案上；并且无解决方案可用。
不受理论束缚，有迹象表明β-细胞质膜上的胆固醇为调节所谓的胰岛淀粉样多肽聚合及其在所述膜上沉积的关键因子。胆固醇在质膜中缺乏或低水平—这为糖尿病的普通方面—抑制胰岛淀粉样多肽寡聚体的内化，并促成胞外积累，增强该状态的胰岛淀粉样多肽细胞毒性，所述毒性导致β-细胞凋亡或破坏。另一方面，单体胰岛淀粉样多肽的细胞内化不依赖质膜的胆固醇含量。
简言之，一系列研究将β-细胞质膜表面上的胰岛淀粉样多肽聚合和沉积—伴随相应的毒性—与胆固醇的缺乏或较少存在和/或与增加的2型糖尿病严重性关联。
到目前为止，尚无已知用于控制血糖过多并且还抑制人胰岛淀粉样多肽或拟胰岛淀粉样多肽化合物聚集的药剂或药学活性物。
本发明一般旨在人胰岛淀粉样多肽与聚乙二醇的缀合，及其对于抑制胰岛淀粉样多肽胞外聚集而不诱导与胰岛淀粉样多肽寡聚体和簇形成相关的毒性的用途。
下面的文字应以下列方面理解：(1) 胰岛淀粉样多肽与聚乙二醇的生物缀合物的提及还包括拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的生物缀合物；(2) 表述“拟胰岛淀粉样多肽化合物”还包括，为便于表达，人胰岛淀粉样多肽，天然或合成的，(3) 糖尿病的提及还包括与拟胰岛淀粉样多肽化合物的凝聚/沉积直接或间接相关的其它疾病和功能障碍。
本发明生物缀合物，特别是人胰岛淀粉样多肽的生物缀合物的使用显示多种益处，特别是较高的糖尿病生物体稳定性，其作为下列性质的药剂的期需特征受到医师的高度推荐：
- 与胰岛淀粉样多肽和拟胰岛淀粉样多肽物质例如普兰林肽相比血浆半衰期增加，因此允许在血流中更持久；
- 较低的剂量或较少的注射模拟天然胰岛淀粉样多肽的作用；
- 良好的血糖过多控制；
- 减少的恶心；
- 与饮食有关的高饱腹感；
- 减小的胃排空速度；
- 比人胰岛淀粉样多肽高的溶解度；
- 降低胰高血糖素水平，因此改善葡萄糖控制。
附图简述
图1 – 通过人胰岛淀粉样多肽与mPEG反应获得的单聚乙二醇化胰岛淀粉样多肽的色谱图；
图2 – 显示单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽特征的质谱图；
图3和4 –游离和纯化的单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽对RAMP2和RAMP3共受体的结合相互作用的测定；
图5 – 对淀粉样蛋白聚集物的测定；
图6 – 游离胰岛淀粉样多肽与单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽之间的血浆稳定性比较。
发明详述
本发明一般涉及旨在通过降低或避免在胰腺β-细胞上凝聚(在文献中还称为聚合)、沉积和纤维化并因此避免所述胰腺β-细胞凋亡或破坏对人类有机体造成的有害作用，来避免人胰岛淀粉样多肽和拟胰岛淀粉样多肽化合物原因导致的典型毒性的化学实体。
在第一个方面，本发明涉及胰岛淀粉样多肽或拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的新型非-凝聚生物缀合物，特征在于所述生物缀合物包含至少一个聚乙二醇单元(因此可获得单缀合物或多缀合物化合物)，其与源于胰岛淀粉样多肽多肽链的赖氨酸1残基的α和ε胺部分(侧链)的两个氮原子共价结合这一事实。
因此本发明的一个对象为式I的拟胰岛淀粉样多肽化合物的非-凝聚生物缀合物
(R1-COX)m-R2
其中
R1代表甲氧基聚乙二醇(mPEG)部分和具有各种平均摩尔质量的官能间隔基，
R2代表胰岛淀粉样多肽或拟胰岛淀粉样多肽化合物，
X代表NH或O，
m代表与拟胰岛淀粉样多肽化合物(R2)缀合的mPEG聚合物(R1)的单元的数目，所述与拟胰岛淀粉样多肽化合物(R2)缀合的mPEG聚合物(R1)由mPEG-琥珀酰亚胺基与拟胰岛淀粉样多肽化合物通过伯胺或羟基官能部分反应经由酰胺健或酯键缀合获得，所述拟胰岛淀粉样多肽化合物包括缺乏Lys1的拟胰岛淀粉样多肽(或：脱-Lys1)；
和式II的化合物
(R1-X)m-R2
其中
R1代表甲氧基聚乙二醇(mPEG)部分和具有各种平均摩尔质量的官能间隔基，
R2代表胰岛淀粉样多肽或拟胰岛淀粉样多肽化合物，
X代表NH或O，
m代表从mPEG-醛与拟胰岛淀粉样多肽化合物缀合获得的与拟胰岛淀粉样多肽化合物(R2)缀合的mPEG聚合物(R1)单元的数目。
本发明生物缀合物中拟胰岛淀粉样多肽化合物的提及包括所述拟胰岛淀粉样多肽化合物的活性衍生物，例如盐、同分异构体、水合物、溶剂合物、前药、代谢产物、同质多象变体和电子等排体。
重要的是要记住文中拟胰岛淀粉样多肽化合物的提及包括人胰岛淀粉样多肽本身，无论是天然的、合成的或生物-半合成的。
在另一个方面，本发明涉及所述拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的新型非-凝聚生物缀合物在由淀粉样蛋白沉积或积累引起或促成的导致全身性器官(即中枢神经系统外的器官或组织)功能障碍或衰竭的疾病或问题的预防或治疗中的用途，所述全身性器官功能障碍或衰竭的疾病或问题例如高血糖症、糖尿病、低葡萄糖耐受或葡萄糖代谢缺陷、肥胖、代谢综合征和饮食失调以及间接地由血压升高导致的问题和血管疾病，例如动脉粥样硬化、心肌梗死、中风、冠心病、一般性心脏病、阿尔兹海默病。
在另一个方面，本发明涉及所述拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的新型非-凝聚生物缀合物在可用于预防或治疗由淀粉样蛋白沉积或积累所引起或促成的导致全身性器官功能障碍或衰竭的疾病的低毒性产品、药剂、组合物和联合剂的制备中的用途。
在又一个方面，本发明涉及包含治疗有效量的一种或多种拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的新型非-凝聚生物缀合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂的低毒性药物组合物。这样的组合物对于各种给予形式例如口服、肠内、胃肠外、舌、舌下、鼻、真皮、表皮、透皮、粘膜、阴道、直肠、眼睛等均为适当的。
本发明组合物以任何需要或适当的剂量形式呈现，例如溶液、悬液、乳液、微乳液、泡沫、糊剂、乳膏剂、片剂、胶囊(硬胶囊或软胶囊、栓剂)、大丸剂、凝胶、粉剂、气雾剂、喷雾剂等。
本发明组合物中使用的药学上可接受的赋形剂为本领域技术人员所已知，例如，如在"Remington's Pharmaceutical Sciences (雷明顿药物科学)", 第15版，Mack Publishing Co., New Jersey (1991)中所描述的那些。已知，在药理学领域的实践内，根据期需的给予途径选择具体的赋形剂。
本发明的药物组合物可额外包含一种或多种与人胰岛淀粉样多肽不同的活性要素，例如(不排除任何其它)胰岛素、离子(例如锌和钠)、抗糖尿病药、抗生素、抗高血压药、抗逆转录病毒药等。这样的组合物可为立即、延迟或缓慢释放的，也包括将所述人胰岛淀粉样多肽的新型生物缀合物与其它活性成分相伴或序贯给予的可能性。
本发明的又一个方面涉及人胰岛淀粉样多肽与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物在由淀粉样蛋白沉积或积累引起或促成的导致全身性器官功能障碍或衰竭的疾病的预防或治疗中作为佐剂的用途。
本发明的又一个方面涉及药剂，其特征在于它包含治疗有效量的一种或多种人胰岛淀粉样多肽与聚乙二醇的生物缀合物这一事实。
本发明的又一个方面涉及人胰岛淀粉样多肽与聚乙二醇的生物缀合物，以及包含其的产品、药剂、组合物或联合体，其特征在于在医学治疗中使用。
本发明的又一个方面涉及治疗或预防由淀粉样蛋白沉积或积累引起或促成的疾病的方法，特征在于包括给予患者治疗有效量的一种或多种拟胰岛淀粉样多肽化合物，特别是人胰岛淀粉样多肽，与聚乙二醇的生物缀合物。
实施例
下列实施例涉及本发明具体的实施方案，并且不意在以任何方式限制所附权利要求的范围。
1. 本发明缀合物的制备
5 mg/mL人胰岛淀粉样多肽溶液在10 mM PBS (磷酸盐缓冲溶液) pH 7.4存在下与摩尔过量的5 mPEG / l人胰岛淀粉样多肽于25℃反应2h。
通过加入等量30 %乙腈/0.1 %三氟乙酸(水中)淬灭反应，然后在C18 Kromasil反相柱中以4 mL/min进行色谱分析，检测器设置在220 nm。(Kromasil为瑞典AkzoNobel公司的一个部门，Separation Products组出售的产品线)。该纯化过程在图1中示出。色谱图显示在12分钟时单聚乙二醇化胰岛淀粉样多肽的峰。
进行基质辅助激光解吸和离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)表征单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽。图2显示在9 Kda的单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽的峰。
2.人胰岛淀粉样多肽和单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽的受体结合测定
测定纯化的单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽对RAMP2和RAMP3共受体的结合相互作用。
用荧光素异硫氰酸酯在PBS (胎牛血清) pH 7.4中于4℃标记RAMP (受体活性修饰蛋白)1h，并使用相同的缓冲液通过在Sepharose G25 (基于琼脂糖的色谱介质，美国公司GE Healthcare提供)中尺寸排阻色谱(SEC)纯化。标记通过A280和A490处的UV吸光度测量证实，这允许根据约0.5 荧光素/RAMP分子估算偶联效率。结合通过测量作为游离鼠胰岛淀粉样多肽、聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽的函数的RAMP-FITC (荧光素异硫氰酸酯)荧光各向异性和通过使用不相关的鸡蛋白溶菌酶(HEWL)作为非特异性结合的对照进行。
根据图3和图4，结合测定显示在二重测定中(单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽C#1、C#2以及游离胰岛淀粉样多肽#1和#2)，游离的和纯化的单聚乙二醇化的人胰岛淀粉样多肽二者对共受体RAMP2和RAMP3相似表观的结合亲和性，表明PEG部分不干扰共受体亲和性。使用HEWL的对照测定显示对共受体的非特异性结合。
3. 聚乙二醇化对人胰岛淀粉样多肽聚集分布型的作用
将实施例1的纯化的单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽重悬在DMSO中，稀释到PBS pH 7.4中，并且使其在37°C孵育。通过使用淀粉样蛋白显色探针硫黄素T(ThT)针对淀粉样蛋白聚集物评估样品。
图5显示结果。游离人胰岛淀粉样多肽聚集非常迅速。在3天中，几乎所有的游离人胰岛淀粉样多肽以淀粉样蛋白形式聚集。单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽在第7天仍未显示聚集迹象。该测定证明聚乙二醇化过程能够抑制人胰岛淀粉样多肽的凝聚。
4. 聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽产品的药代动力学
单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽产品的药代动力学在瑞士小鼠体内表征。小鼠在控制温度的房间中以12h的光-暗周期饲养。水和食物可自由取得。形成两组，对照(游离人胰岛淀粉样多肽，非聚乙二醇化)和聚乙二醇化胰岛淀粉样多肽。动物接受100 μL包含10 μg人胰岛淀粉样多肽肽(游离人胰岛淀粉样多肽或纯化的单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽)的盐水。从小鼠后眼窝（retro-orbitally）采集血液(每个时间间隔n=3只小鼠)，并让该血浆接受如制造商(Millipore, Cat Number EZHA-52K - http://www.millipore.com/catalogue/item/ezha-52k)所提供的针对人胰岛淀粉样多肽的ELISA测定。
图6显示游离胰岛淀粉样多肽的快速血浆衰变，而单聚乙二醇化人胰岛淀粉样多肽在血浆中显示较长的稳定性持续时间。该测定证明人胰岛淀粉样多肽聚乙二醇化过程能够增加其半衰期。
本领域技术人员可使用本说明书和本文所给实施例的教导在同等的实施方案中实施本发明，这些同等的实施方案虽然没有清楚地描述，但实施相同或相似的功能以获得相同或相似的结果，因此包含在所附权利要求的保护范围内。

Claims (25)

1.一种拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，特征在于在医学治疗中使用。
2.权利要求1的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，特征在于具有式I
(R1-COX)m-R2
其中R1代表甲氧基聚乙二醇(mPEG)部分和具有各种平均摩尔质量的官能间隔基，
R2代表胰岛淀粉样多肽或拟胰岛淀粉样多肽化合物，
X代表NH或O，
m代表与拟胰岛淀粉样多肽化合物(R2)缀合的mPEG聚合物(R1)单元的数目，所述与拟胰岛淀粉样多肽化合物(R2)缀合的mPEG聚合物(R1)由mPEG-琥珀酰亚胺基与拟胰岛淀粉样多肽化合物，通过伯胺或羟基官能部分反应经由酰胺键或酯键缀合获得，所述拟胰岛淀粉样多肽化合物包括缺乏Lys1的拟胰岛淀粉样多肽(去-Lys1)；或式II的化合物
(R1X)m-R2
其中
R1代表甲氧基聚乙二醇(mPEG)部分和具有各种平均摩尔质量的官能间隔基，
R2代表胰岛淀粉样多肽或拟胰岛淀粉样多肽化合物，
X代表NH或O，
m代表从mPEG-醛与拟胰岛淀粉样多肽化合物缀合获得的与拟胰岛淀粉样多肽化合物(R2)缀合的mPEG聚合物(R1)单元的数目。
3.权利要求1或2中任一项的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽化合物为天然或合成的人胰岛淀粉样多肽这一事实。
4.权利要求1或2中任一项的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽化合物呈其盐、同分异构体、水合物、溶剂合物、前药、代谢产物、同质多象变体或电子等排体形式这一事实。
5.拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽化合物为人胰岛淀粉样多肽和包含所述生物缀合物的药学产品、药剂、组合物和联合体为用于在医学治疗中使用这一事实。
6.用于在由淀粉样蛋白沉积或积累引起或促成的疾病和功能障碍的预防或治疗中使用的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物。
7.权利要求6的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，特征在于所述疾病或功能障碍为高血糖症、糖尿病、低葡萄糖耐受或葡萄糖代谢缺陷、肥胖、代谢综合征、饮食失调、动脉粥样硬化、心肌梗死、中风、冠心病、一般性心脏病、阿尔兹海默病中的一种或多种这一事实。
8.权利要求6的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，特征在于用于糖尿病的预防或治疗。
9.用于在可用于治疗或预防由淀粉样蛋白沉积或积累所引起或促成的疾病的低毒性产品的制备中使用的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物。
10.权利要求9的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，其特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽剂为天然或合成的人胰岛淀粉样多肽这一事实。
11.权利要求9的拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，其特征在于所述生物缀合物如权利要求2中所描述这一事实。
12.低毒性药物组合物，特征在于它们包含治疗有效量的一种或多种拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的一种或多种非-凝聚生物缀合物和一种或多种药学上可接受的赋形剂这一事实。
13.权利要求12的组合物，其特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽化合物为天然或合成的人胰岛淀粉样多肽这一事实。
14.权利要求12的组合物，其特征在于所述生物缀合物如权利要求2中所描述这一事实。
15.权利要求12-14中任一项的组合物，其特征在于额外包含一种或多种与拟胰岛淀粉样多肽化合物不同的活性要素。
16.权利要求12-14中任一项的组合物，其特征在于额外包含一种或多种与拟胰岛淀粉样多肽化合物不同的选自以下的活性要素：胰岛素、离子例如锌或钠、抗糖尿病药、抗生素、抗高血压药、抗逆转录病毒药。
17.用于预防或治疗疾病的佐剂，其特征在于包含拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物。
18.权利要求17的用于预防或治疗疾病的佐剂，其特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽化合物为天然的、合成的或生物-半合成的人胰岛淀粉样多肽这一事实。
19.权利要求17的用于预防或治疗疾病的佐剂，其特征在于所述生物缀合物如权利要求2中所描述这一事实。
20.药剂，特征在于其包含治疗有效量的一种或多种拟胰岛淀粉样多肽剂与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物这一事实。
21.权利要求20的药剂，其特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽化合物为天然或合成的人胰岛淀粉样多肽这一事实。
22.权利要求20的药剂，其特征在于所述生物缀合物如权利要求2中所描述这一事实。
23.治疗或预防疾病的方法，其特征在于包括给予患者治疗有效量的一种或多种拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物，所述疾病由淀粉样蛋白沉积或积累引起或促成。
24.权利要求23的方法，其特征在于所述拟胰岛淀粉样多肽化合物为天然或合成的人胰岛淀粉样多肽这一事实。
25.权利要求23的方法，其特征在于所述非-凝聚生物缀合物如权利要求2中所述这一事实。
CN201480033501.8A 2013-06-14 2014-06-13 拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物 Pending CN105658234A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
BRBR102013017626-5 2013-06-14
BRBR102013017626-5A BR102013017626A2 (pt) 2013-06-14 2013-06-14 Bioconjugados não aglomerantes de amilinomiméticos com polietilenoglicol, uso de bioconjugados não aglomerantes de amilinomiméticos com polietilenoglicol, composições farmacêuticas de baixa toxicidade, adjuvante para a prevenção ou tratamento das doenças, medicamento, método de tratamento ou prevenção de doenças.
PCT/BR2014/000199 WO2014197961A1 (en) 2013-06-14 2014-06-13 Non-agglomerating bioconjugates of amylin-mimetic compounds and polyethyleneglycol

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN105658234A true CN105658234A (zh) 2016-06-08

Family

ID=52021510

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201480033501.8A Pending CN105658234A (zh) 2013-06-14 2014-06-13 拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物

Country Status (13)

Country Link
US (2) US20160331811A1 (zh)
EP (1) EP3007721B1 (zh)
JP (1) JP2016526533A (zh)
CN (1) CN105658234A (zh)
AU (1) AU2014280869B2 (zh)
BR (1) BR102013017626A2 (zh)
CA (1) CA2915104A1 (zh)
ES (1) ES2720274T3 (zh)
MX (1) MX368485B (zh)
PL (1) PL3007721T3 (zh)
PT (1) PT3007721T (zh)
TR (1) TR201906773T4 (zh)
WO (1) WO2014197961A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR102015031283A2 (pt) * 2015-12-14 2018-09-18 Univ Rio De Janeiro Bioconjugado de amilina humana ou de análogos de amilinanão agregantes, composição, métodos para a preparação deuma composição, para o tratamento de uma doença oucondição e para estabilizar um composto amilino-mimético, e,medicamento
PT3498006T (pt) * 2016-08-12 2022-06-28 Ericsson Telefon Ab L M Seleção de uma portadora num sistema de funcionamento com múltiplas portadoras

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101400698A (zh) * 2006-03-15 2009-04-01 诺沃-诺迪斯克有限公司 胰岛淀粉样多肽衍生物
US20110166063A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-07 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6143718A (en) * 1995-06-07 2000-11-07 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Treatment of Type II diabetes mellutis with amylin agonists
US7101853B2 (en) * 1997-05-06 2006-09-05 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Method for treating or preventing gastritis using amylin or amylin agonists
WO2003057244A2 (en) * 2002-01-08 2003-07-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Use of amylin agonists to modulate triglycerides
ATE421333T1 (de) * 2002-10-22 2009-02-15 Waratah Pharmaceuticals Inc Behandlung von diabetes.
US20050143303A1 (en) * 2003-12-26 2005-06-30 Nastech Pharmaceutical Company Inc. Intranasal administration of glucose-regulating peptides
US8114958B2 (en) * 2004-02-11 2012-02-14 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Amylin family peptides
US7399744B2 (en) * 2004-03-04 2008-07-15 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Methods for affecting body composition
KR20080003849A (ko) * 2005-03-31 2008-01-08 아밀린 파마슈티칼스, 인크. 비만 및 섭식 장애의 조절, 예방 및 치료를 위한 조성물 및방법
US7341720B2 (en) * 2005-04-06 2008-03-11 Genzyme Corporation Targeting of glycoprotein therapeutics
EP1874339A1 (en) * 2005-04-21 2008-01-09 Gastrotech Pharma A/S Pharmaceutical preparations of a glp-1 molecule and an anti-emetic drug
US8617531B2 (en) * 2006-12-14 2013-12-31 Bolder Biotechnology, Inc. Methods of making proteins and peptides containing a single free cysteine
EP2036539A1 (en) * 2007-09-11 2009-03-18 Novo Nordisk A/S Stable formulations of amylin and its analogues
EP2036923A1 (en) * 2007-09-11 2009-03-18 Novo Nordisk A/S Improved derivates of amylin
CA2723821C (en) * 2008-05-16 2017-05-02 Nektar Therapeutics Conjugates of a cholinesterase moiety and a polymer
TWI474832B (zh) * 2008-06-17 2015-03-01 Univ Indiana Res & Tech Corp 胰高血糖素／ｇｌｐ-１受體共同激動劑
BRPI1003424A2 (pt) * 2010-09-08 2013-01-08 Univ Rio De Janeiro sistema polimÉtrico de confinamento de amilina humana e anÁlogos agonistas, processo e uso; processo de avaliaÇço funcional de amilina liberada
EA202092025A1 (ru) * 2010-11-12 2021-05-31 Нектар Терапьютикс Конъюгаты компонента il-2 и полимера
EP2714069A4 (en) * 2011-05-25 2015-06-24 Amylin Pharmaceuticals Llc LONG-TERM CONJUGATES WITH TWO HORMONES
WO2013009539A1 (en) * 2011-07-08 2013-01-17 Amylin Pharmaceuticals, Inc. Engineered polypeptides having enhanced duration of action and reduced immunogenicity
WO2013059336A1 (en) * 2011-10-18 2013-04-25 Amylin Pharmaceuticals, Llc Amylin-calcitonin chimeric peptides conjugated to duration enchancing moieties
US9830621B2 (en) * 2013-03-14 2017-11-28 Vdopia Inc. Systems and methods for layering content

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101400698A (zh) * 2006-03-15 2009-04-01 诺沃-诺迪斯克有限公司 胰岛淀粉样多肽衍生物
US20110166063A1 (en) * 2008-09-19 2011-07-07 Nektar Therapeutics Polymer conjugates of therapeutic peptides

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
MAZZAGLIA A ET AL.: "Aggregation Properties of the Peptide Fragments Derived from the 17-29 Region of the Human and Rat IAPP: A Comparative Study with Two PEG-Conjugated Variants of the Human Sequence", 《THE JOURNAL OF PHYSICAL CHEMISTRY B》 *
张鑫等: "胰岛淀粉样多肽的研究进展", 《生命科学》 *

Also Published As

Publication number Publication date
PT3007721T (pt) 2019-05-13
EP3007721B1 (en) 2019-02-27
AU2014280869A1 (en) 2016-01-07
BR102013017626A2 (pt) 2015-02-10
CA2915104A1 (en) 2014-12-18
WO2014197961A9 (en) 2016-01-28
MX2015017356A (es) 2016-12-20
EP3007721A1 (en) 2016-04-20
TR201906773T4 (tr) 2019-05-21
MX368485B (es) 2019-10-04
JP2016526533A (ja) 2016-09-05
AU2014280869B2 (en) 2017-11-02
ES2720274T3 (es) 2019-07-19
EP3007721A4 (en) 2016-12-07
US20160184401A1 (en) 2016-06-30
PL3007721T3 (pl) 2019-09-30
US20160331811A1 (en) 2016-11-17
WO2014197961A1 (en) 2014-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101667948B1 (ko) 글루카곤 유사체
ES2502218T3 (es) Análogos de glucagón
TWI619724B (zh) 新穎之調酸素衍生物及含有該衍生物之用於治療肥胖之醫藥組成物
US11167014B2 (en) Solid glp-1 derivative compositions for oral administration
TW201202265A (en) Glucagon analogues
US11773150B2 (en) Antibody peptide conjugates that have agonist activity at both the glucagon and glucagon-like peptide 1 receptors
AU2019256245B2 (en) Acylated GLP-1 derivative
US20220119473A1 (en) Acylated oxyntomodulin peptide analog
CN110087666B (zh) 用于治疗糖尿病、高血压和高胆固醇血症的组合物和方法
WO2006126673A1 (ja) 組み合わせによる糖尿病治療薬
JP2014531469A (ja) Ｋｖ１．３カリウムチャネルの薬理学的標的化による肥満症および肥満症関連障害の治療
CN105658234A (zh) 拟胰岛淀粉样多肽化合物与聚乙二醇的非-凝聚生物缀合物
WO2019201333A1 (zh) Glp-1衍生物及其治疗用途
KR20160042819A (ko) 아밀린-모방 화합물 및 폴리에틸렌 글리콜의 비-응집 생접합체
CA3162463A1 (en) Combination therapy using glucagon and glp-1 co-agonists for the treatment of obesity
JP6006264B2 (ja) グルカゴン類似体
JP6018129B2 (ja) グルカゴン類似体
CN114867742A (zh) 胰高血糖素和glp-1受体的钉合内酰胺共激动剂

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
AD01 Patent right deemed abandoned

Effective date of abandoning: 20200602

AD01 Patent right deemed abandoned