PT1654263E

PT1654263E - Sal de ácido fosfórico do inibidor da dipeptidil peptidase iv

Info

Publication number: PT1654263E
Application number: PT04755691T
Authority: PT
Inventors: Stephen Howard Cypes; Alex Minhua Chen; Russell R Ferlita; Karl Hansen; Ivan Lee; Vicky K Vydra; Robert M Wenslow Jr
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 2003-06-24
Filing date: 2004-06-18
Publication date: 2007-11-16
Also published as: KR20080022232A; BRPI0411726B8; WO2005003135A1; EP1654263A1; DK1654263T3; EP1654263B1; PE20050696A1; AR044705A1; HRP20070534T4; CA2529400C; KR20060026061A; NO335371B1; EP1654263B2; IS8183A; CY1106936T1; RS51873B; DE602004008938T2; CA2529400A1; NO20060362L; IS2792B

Description

ΡΕ1654263 1 DESCRIÇÃO "SAL DE ÁCIDO FOSFÓRICO DO INIBIDOR DA DIPEPTIDIL PEPTIDASE IV"

CAMPO DO INVENTO 0 presente invento relaciona-se com um sal particular de um inibidor da dipeptidil peptidase-IV. Mais particularmente, o invento relaciona-se com o sal di-hidrogenofosfato de 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5, 6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(8H)—il]—1—(2,4,5— trifluorofenil)butan-2-amina, o qual é um inibidor potente da dipeptidil peptidase. Este novo sal e os hidratos cristalinos deste são úteis para o tratamento e prevenção de doenças e estados para os quais um inibidor dA dipeptidil peptidase está indicado, em particular diabetes Tipo 2, obesidade e tensão arterial elevada. 0 invento diz ainda respeito a composições farmacêuticas compreendendo o sal di-hidrogenofosfato e hidratos cristalinos destes úteis para tratar diabetes Tipo 2, obesidade, e tensão arterial elevada bem como a processos para preparar o sal di-hidrogenofosfato e hidratos cristalinos deste e suas composições farmacêuticas.

ANTECEDENTES DO INVENTO A inibição de dipeptidil peptidase-IV (DP-IV), 2 ΡΕ1654263 uma enzima que inactiva o peptídeo insulinotrópico glucose-dependente (GIP) e peptídeo 1 análogo de glucagon (GLP-1), representa uma nova abordagem ao tratamento e prevenção da diabetes Tipo 2, também conhecidos como diabetes mellitus não dependentes da insulina (NIDDM). 0 potencial terapêutico dos inibidores de DP-IV para o tratamento de diabetes Tipo 2 foi revisto: C. F. Deacon e JJ-Holst, "Dipeptidyl peptidase IV inhibition as an approach to the treatment and prevention of Type 2 diabetes: a historical perspective", Biochem. Biophys. Res. Commun., 294: 1-4 (2000); K.

Augustyns, et al., "Dipeptidyl peptidase IV inhibitors as new therapeutic agents for the treatment of Type 2 diabetes", Expert-Opin. Ther. Patents, 13: 499-510 (2003); e D. J. Drucker, "Therapeutic potential of didpeptidyl peptidase IV inhibitors for the treatment of Type 2 diabetes", Expert Opin. Investig. Drugs, 12: 87-100 (2003). WO 03/004498 (publicado a 16 de Janeiro de 2003), atribuída a Merck & Co., descreve uma classe de beta-amino tetra-hidrotriazolo[4,3-a]pirazinas, as quais são inibidores potentes de DP-IV e portanto úteis para o tratamento de diabetes Tipo 2. Especificamente revelado em WO 03/004498 é 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro [l,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(8íf)-il]-l-(2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina. Sais farmaceuticamente aceitáveis deste composto estão genericamente englobados no âmbito da WO 03/004498.

Contudo, não existe revelação específica na 3 ΡΕ1654263 referência acima do recentemente descoberto sal monobásico di-hidrogenofosfato de 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(8ϋ)—il]—1—(2,4,5— trifluorofenil)butan-2-amina de fórmula estrutural I abaixo. 0 sal di-hidrogenofosfato é mencionado na base de dados online Prous (n° de acesso 2003:3561) e o sal cloridrato é revelado em Drug Data Report 2003, 25(3), p. 245-246.

SUMÁRIO DO INVENTO O presente invento está relacionado com um novo sal di-hidrogenofosfato do inibidor da dipeptidil pepti-dase-IV (DP-IV) 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro-[l,2,4]triazolo[4,3-a] pirazin-7 (8H)-il]-l-(2,4,5-trifluorofenil) butan-2-amina e hidratos cristalinas deste, em particular um mono-hidrato cristalino. O sal di-hidrogenofosfato e hidratos cristalinos do presente invento têm vantagens na preparação de composições farmacêuticas de 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro[l,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(QH)-il]-1-(2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina tais como facilidade de processamento, manuseamento, e dosagem. Em particular, eles apresentam estabilidade fisica e química melhorada, tal como estabilidade ao stress, temperaturas elevadas e humidade, bem como propriedades fisico-químicas melhoradas, tais como solubilidade e velocidade de dissolução, tornando-os particularmente adequados para a manufactura de várias formas de dosagem farmacêuticas. O inven- 4 ΡΕ1654263 to também diz respeito a composições farmacêuticas contendo o novo sal e hidratos bem como a métodos para os usar como inibidores da DP-IV, em particular para a prevenção ou tratamento de diabetes Tipo 2, obesidade, e tensão arterial elevada.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS FIG. 1 é um padrão de difracção de Raios-X caracteristico do mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural II. FIG. 2 é um espectro de ressonância magnética nuclear (RMN) de carbono-13 de "cross-polarization magic-angle spinning" (CPMAS) do mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural II. FIG. 3 é um espectro de ressonância magnética nuclear (RMN) de fluor-19 de "magic-angle spinning" (MAS) do mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural II. FIG. 4 é uma curva de análise termogravimétrica típica (TGA) típica do mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural II. FIG. 5 é uma curva de calorimetria diferencial de varrimento (DSC) típica do mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural II. 5 ΡΕ1654263

DESCRIÇÃO DETALHADA DO INVENTO

Este invento proporciona um novo sal monobásico di-hidrogenofosfato de 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro [1,2,4] triazolo [4,3-a] pirazin-7 (8fí) —il] —1— (2,4,5 — trifluorofenil)butan-2-amina monobásico com a fórmula estrutural I seguinte:

ou um hidrato cristalino deste. Em particular, o invento eminente proporciona um mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogenofosfato de fórmula I. 0 sal di-hidrogenofosfato do presente invento tem um centro de assimetria no átomo de carbono estereogénico indicado com um * e pode assim ocorrer como um racemato, mistura racémica e enantiómeros simples, com todas as formas isoméricas incluídas no presente invento. Os enantiómeros separados, substancialmente livres um do outro, estão incluídos no âmbito do invento, bem como as misturas dos dois enantiómeros.

Um modelo de realização do presente invento proporciona o sal di-hidrogenofosfato de (2R) 4-oxo-4-[3- 6 ΡΕ1654263 (trifluorometil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(QH)-il]-1-(2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina de fórmula estrutural II:

ou um hidrato cristalino deste.

Um segundo modelo de realização do presente invento proporciona o sal di-hidrogenofosfato de (2S)- 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7 (8ϋ) —il]—1— (2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina de fórmula estrutural III:

ou um hidrato cristalino deste.

Mais especificamente, o sal di-hidrogenofosfato do presente invento compreende um equivalente molar do 7 ΡΕ1654263 catião mono protonado de 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(8H)—il]—1—(2,4,5 — trifluorofenil)butan-2-amina e um equivalente molar do anião di-hidrogenofosfato (bifosfato).

Num modelo de realização adicional do presente invento, o sal di-hidrogenofosfato de fórmulas estruturais I-III é um hidrato cristalino. Numa classe deste modelo de realização, o hidrato cristalino é um mono-hidrato cristalino.

Um modelo de realização adicional do presente invento proporciona a substância fármaco sal di-hidrogenofosfato de fórmulas estruturais I-III que compreende o mono-hidrato cristalino presente numa quantidade detectável. Por "substância fármaco" entende-se o ingrediente farmacêutico activo ("IFA"). A quantidade de mono-hidrato cristalino na substância fármaco pode ser quantificada pelo uso de métodos físicos tais como difracção de Raios-X do pó, espectroscopia de ressonância magnética nuclear de estado sólido de flúor-19 de rotação no ângulo mágico ("magic-angle spinning" (MAS)), espectroscopia de ressonância magnética nuclear de estado sólido de carbono-13 de rotação no ângulo mágico e polarização cruzada ("cross-polarization magic-angle spinning" (CPMAS)), espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier de estado sólido, e espectrosocpia de Raman. Numa classe deste modelo de realização, cerca de 5% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino está presente na substância fármaco. Numa segunda classe deste modelo de realização, cerca de 10% até ΡΕ1654263 cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino está presente na substância fármaco. Numa terceira classe deste modelo de realização, cerca de 25% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino está presente na substância fármaco. Numa quarta classe deste modelo de realização, cerca de 50% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino está presente na substância fármaco. Numa segunda classe deste modelo de realização, cerca de 75% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino está presente na substância fármaco. Numa sexta classe deste modelo de realização, todo a substância fármaco sal di-hidrogenofosfato é o mono-hidrato cristalino do presente invento, í.e. o substância fármaco sal di-hidrogenofosfato é uma fase substancialmente pura do mono-hidrato. O sal di-hidrogenofosfato cristalino do presente invento apresenta vantagens farmacêuticas relativamente à base livre e ao sal cloridrato previamente revelado (WO 03/004498) na preparação de um produto farmacêutico contendo o ingrediente farmacologicamente activo. Em particular, a estabilidade química e física aumentada do sal cristalino di-hidrogenofosfato mono-hidratado constitui uma propriedade vantajosa na preparação de formas de dosagem farmacêuticas sólidas contendo o ingrediente farmacologicamente activo. O sal di-hidrogenofosfato do presente invento, que apresenta propriedades inibidoras de DP-IV potentes, é particularmente útil para a prevenção ou tratamento de diabetes Tipo 2, obesidade e tensão arterial elevada. 9 ΡΕ1654263 0 presente invento também proporciona o uso do sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural I ou um hidrato deste, em particular o mono-hidrato cristalino, para a manufactura de um medicamento para o tratamento de estados clínicos para os quais é indicado um inibidor de DP-IV. Tais estados clínicos incluem diabetes, em particular diabetes Tipo 2, hiperglicemia, resistência à insulina, e obesidade. 0 presente invento também proporciona composições farmacêuticas compreendendo o sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural I ou um hidrato deste, em particular o mono-hidrato cristalino, em associação com um ou mais veículos ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Num modelo de realização a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do ingrediente farmacêutico activo numa mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis em que o ingrediente farmacêutico activo compreende uma quantidade detectável do mono-hidrato cristalino do presente invento. Num segundo modelo de realização a composição farmacêutica compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz do ingrediente farmacêutico activo numa mistura com excipientes farmaceuticamente aceitáveis em que o ingrediente farmacêutico compreende cerca de 5% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino do presente invento. Numa classe deste segundo modelo de realização, o ingrediente farmacêutico activo em tais composições compreende cerca de 10% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino. Numa segunda classe 10 ΡΕ1654263 deste modelo de realização, o ingrediente farmacêutico activo em tais composições compreende cerca de 25% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino. Numa terceira classe deste modelo de realização, o ingrediente farmacêutico activo em tais composições compreende cerca de 50% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino. Numa quarta classe deste modelo de realização, o ingrediente farmacêutico activo em tais composições compreende cerca de 75% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino. Numa quinta classe deste modelo de realização, todo o ingrediente farmacêutico activo é substancialmente o sal di-hidrogenofosfato mono-hidrato cristalino do presente invento, i.e., o ingrediente farmacêutico activo é uma fase substancialmente pura de sal di-hidrogenofosfato mono-hidratado.

As composições de acordo com o invento estão adequadamente em formas de dosagem unitária tais como comprimidos, pilulas, cápsulas, pós, grânulos, soluções ou suspensões estéreis, aerosol calibrado ou spray liquido, gotas, ampolas, dispositivos de autoinjecção ou supositórios. As composições pretendem ser para administração oral, parentérica, intranasal, sublingual, ou rectal, ou para administração por inalação ou insuflação. A formulação das composições de acordo com o invento pode convenientemente ser efectuada por métodos conhecidos da arte, por exemplo, como descrito no "Pharmaceutical Sciences" de Remington, 17a ed., 1995. O regime de dosagem é seleccionado de acordo com 11 ΡΕ1654263 uma variedade de factores incluindo tipo, espécie, idade, peso, sexo e estado clinico do doente, severidade do estado a ser tratado; via de administração; e função hepática e renal do doente. Um médico, veterinário ou clinico de especialidade ordinária pode facilmente determinar e prescrever a quantidade eficaz do fármaco necessária para prevenir, contrariar ou parar o progresso do estado.

Dosagens orais do presente invento, quando usadas para os efeitos indicados variarão entre cerca de 0,01 mg por kg de peso corporal por dia (mg/kg/dia) até cerca de 100 mg/kg/dia, de preferência 0-0,01 até 10 mg/kg/dia, e com maior preferência 0,1 até 5,0 mg/kg/dia. Para administração oral, as composições são de preferência providenciadas na forma de comprimidos contendo 0,01, 0,05, 0,1, 0,5, 1,0, 2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, 50,0, 100, 200, e 500 miligramas do ingrediente activo para o ajuste sintomático da dosagem ao doente a ser tratado. Um medicamento contém tipicamente desde cerca de 0,01 mg até cerca de 500 mg do ingrediente activo, de preferência, desde cerca de 1 mg até cerca de 200 mg do ingrediente activo. Na forma intravenosa, as doses mais preferidas variarão desde cerca de 0,1 até cerca de 10 mg/kg/minuto durante uma efusão a velocidade constante. Com vantagem, as formas cristalinas do presente invento podem ser administradas numa dose diária única, ou a dose total diária pode ser administrada em doses divididas duas, três ou quatro vezes por dia. Além disso, as formas cristalinas do presente invento podem ser administradas na forma nasal via uso tópico de veiculos intranasais adequados, ou por via 12 ΡΕ1654263 transdérmica, usando aquelas formas de adesivos transdér-micos na pele bem conhecidos dos especialistas ordinários na arte. Para ser administrado na forma de um sistema de distribuição transdérmico, a administração da dosagem será, com certeza continua em vez de intermitente ao longo do regime de dosagem.

Nos usos do presente invento, o sal di-hidroge-nofosfato e hidratos cristalinos deste descritos aqui em detalhe podem formar o ingrediente farmacêutico activo, e são tipicamente administrados numa mistura com diluentes, excipientes ou veículos farmaceuticamente adequados (referidos aqui de forma colectiva como "veículos") seleccio-nados de forma adequada à via pretendida de administração, isto é, comprimidos, cápsulas, elixires, xaropes e semelhantes, e consistentes com práticas farmacêuticas convencionais .

Por exemplo, para administração oral na forma de comprimido ou cápsula, o ingrediente farmacêutico activo pode ser combinado com um veículo inerte, oral, não tóxico, farmaceuticamente aceitável tal como lactose, amido, sucrose, glucose, metilcelulose, estearato de magnésio, fosfato de cálcio, sulfato de cálcio, manitol, sorbitol e semelhantes; para administração oral na forma líquida, o ingrediente farmacêutico activo pode ser combinado com qualquer veículo inerte, oral, não tóxico, farmaceuticamente aceitável tal como etanol, glicerol, água e semelhantes. Além disso, quando desejado ou necessário, podem também ser incorporados na mistura ligantes, lubri- 13 ΡΕ1654263 ficantes, agentes desintegrantes e corantes adequados. Ligantes adequados incluem amido, gelatina, açúcares naturais tais como glucose ou beta-lactose, adoçantes de milho, gomas naturais e sintéticas tal como acácia, tragacante ou alginato de sódio, carboximetilcelulose, polietilenoglicol, ceras e semelhantes. Lubrificantes usados nesta forma de dosagem incluem oleato de sódio, estearato de sódio, estearato de magnésio, benzoato de sódio, acetato de sódio, cloreto de sódio e semelhantes. Desintegradores incluem, sem limitação, amido, metilcelu-lose, agar, bentonite, goma de xantana e semelhantes.

Verificou-se que o sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural I e o mono-hidrato cristalino possuem uma solubilidade elevada em água tornando-os especialmente adequados à preparação de formulações, em particular formulações intranasais e intravenosas, as quais requerem soluções aquosas relativamente concentradas do ingrediente activo. Verificou-se que a solubilidade do sal cristalino di-hidrogenofosfato mono-hidrato de fórmula I em água é cerca de 72 mg/ml.

De acordo com um aspecto adicional, o presente invento proporciona um processo para a preparação do sal di-hidrogenofosfato de fórmula I, processo esse que compreende a reacção de 4-oxo-4-[3-(trifluorometil)-5,6-di-hidro-[l,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(8íí)-il]-l-(2,4,5-trifluo-rofenil)butan-2-amina de fórmula estrutural IV abaixo: 14 ΡΕ1654263

com aproximadamente um equivalente de ácido fosfórico num alcanol C1-C5 adequado, tal como metanol, etanol álcool isopropilico (AIP), e álcool isoamilico (AIA) ou alcanol C1-C5 aquoso. A reacção é levada a cabo num intervalo de temperatura de cerca de 25°C até cerca de 80°C. A solução de ácido fosfórico pode ser adicionada a uma solução da amina, ou a adição pode ser realizada em sentido inverso. 0 sal cristalino di-hidrogenofosfato mono-hidrato é obtido por cristalização a partir de uma solução aquosa de alcanol C1-C5 do sal di-hidrogenofosfato como descrito abaixo. MÉTODOS GERAIS PARA CRISTALIZAR 0 MONO-HIDRATO DO SAL DI-HIDROGENOFOSFATO DE FÓRMULA ESTRUTURAL I. (a) No sistema etanol/água a 25°C: (1) cristalização a partir de uma mistura do composto I em etanol e água, de modo a que a concentração da água esteja acima de 31 por cento em peso, (2) recuperação da fase sólida resultante, e (3)remoção do solvente. ΡΕ1654263 15 (b) No sistema álcool isoamílico (AIA)/água a

25°C (1) cristalização a partir de uma mistura do composto I em AIA e água, tal que a concentração de água esteja acima de 2,9 por cento em peso; (2) recuperação da fase sólida resultante; e (3) remoção do solvente.

(c) No sistema AIA/água a 40°C (1) cristalização a partir de uma mistura do composto I em AIA e água, de modo que a concentração da água esteja acima de 3,6 por cento em peso; (2) recuperação da fase sólida resultante; e (3) remoção do solvente

(d) No sistema AIA/água a 60°C (1) cristalização a partir de uma mistura do composto I em AIA e água, de modo que a concentração da água esteja acima de 4,5 por cento em peso; (2) recuperação da fase sólida resultante; e (3) remoção do solvente ΡΕ1654263 16 (e) No sistema álcool isopropílico (AIP)/água a

25°C (1) cristalização a partir de uma mistura do composto I em AIP e água, de modo que a concentração da água esteja acima de 7,0 por cento em peso; (2) recuperação da fase sólida resultante; e (3) remoção do solvente

(f) No sistema ΑΙΡ/água a 40°C (1) cristalização a partir de uma mistura do composto I em AIP e água, de modo que a concentração da água esteja acima de 8,1 por cento em peso; (2) recuperação da fase sólida resultante; e (3) remoção do solvente

(g) No sistema ΑΙΡ/água a 75°C (1) cristalização a partir de uma mistura do composto I em AIP e água, de modo que a concentração da água esteja acima de 20 por cento em peso; (2) recuperação da fase sólida resultante; e (3) remoção do solvente 17 ΡΕ1654263 0 composto de partida de fórmula estrutural IV pode ser preparado por procedimentos detalhados nos Esquemas 1-3 e Exemplo 1 abaixo.

Os exemplos seguintes pretendem ilustrar o presente invento.

Os compostos descritos aqui podem existir como tautómeros tais como ceto-enol tautómeros. Os tautómeros individuais bem como misturas destes estão englobados nos compostos de fórmula estrutural I. 0 termo "% de excesso enantiomérico" (abreviado "ee") significará % do enantiómero mais abundante menos a % do enantiómero menor. Assim, um excesso enantiomérico de 70% corresponde à formação de 85% de um enantiómero e 15% do outro. O termo "excesso enantiomérico" é sinónimo do termo "pureza óptica".

EXEMPLO

h3pos -h2o

F

cf3 18 ΡΕ1654263 _(2-R) -4-OXO-4- [3- (trifluorometil) -5,6-di- hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(8fl)-il]-l-(2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina

Preparação do cloridrato de 3-(trifluorometil)-5,6,1,8-tetra-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazina (1-4)

Esquema 1

OHgCI 1.CF3COOEí, CHgCN NH2NH2 --*

Z C1COCHA NaOH

POCÍa i ÕH3CN

.................* MeQH

O cf3

HCI MaOH, HCI, 55 °C L. ,N-.^N

Passo A: Preparação da bishidrazida (1-1)

Hidrazina (20,1 g, 35% em peso em água, 0,22 mol) foi misturada com 310 mL de acetonitrilo. 31,5 g de trifluoroacetato de etilo (0,22 mol) foi adicionada durante 19 ΡΕ1654263 60 min. A temperatura foi aumentada de 14°C até 25°C. A solução resultante foi deixada a 22-25°C durante 60 min. A solução foi arrefecida arrefecida a 7°C. Foram adicionadas simultaneamente durante 130 min 17,9 g de NaOH aquoso a 50% (0,22 mol) e 23,5 g de cloreto de cloroacetilo (0,22 mol) a uma temperatura abaixo de 16°C. Quando a reacção estava completa, a mistura foi destilada a vácuo para remover a água e etanol a 27-30°C e vácuo a 26-27 mm Hg. Durante a destilação, foram adicionados lentamente 720 mL de acetonitrilo para manter o volume constante (aproxima-damente 500 mL). A suspensão foi filtrada para remover o cloreto de sódio. O bolo foi lavado com cerca de 100 mL de acetonitrilo. A remoção do solvente produziu bis-hidrazida 1-1 (43,2 g, rendimento 96,5%, 94,4% puro pela área do ensaio de HPLC). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) : δ 4,2 (s, 2H) , 10,7 (s, 1H), e 11,6 (s, 1H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, DMSO-d6) : δ .41,0, 116,1 (q, J=362 Hz), 155,8 (q, J=50 Hz), e 165,4 ppm.

Passo B: Preparação de 5-(trifluorometil)-2-(clorometil)-1,3,4-oxadiazolo (1-2)

Bishidrazida 1-1 do Passo A (43,2 g, 0,21 mol) em ACN (82 mL) foi arrefecida a 5 °C. Foi adicionado oxicloreto de fósforo (32,2 g, 0,21 mol), mantendo a 20 ΡΕ1654263 temperatura abaixo de 10 °C. A mistura foi aquecida a 80 °C e deixada a esta temperatura durante 24 h até o HPLC mostrar menos de 2% em área de 1-1. Num recipiente separado, foram misturados 260 mL de AIP e 250 mL de água e arrefecidos a 0 °C. A suspensão da reacção foi deitada no "quencher" mantendo a temperatura abaixo de 10 °C. Após a adição, a mistura foi agitada vigorosamente durante 30 min, a temperatura foi aumentada até à temperatura ambiente e a fase aquosa foi retirada. A fase orgânica foi então lavada com 215 mL de água, 215 mL de bicarbonato de sódio aquoso a 5% e finalmente 215 mL de solução salina a 20% em peso. O rendimento do ensaio de HPLC após isolamento foi 86-92%. Os voláteis foram removidos por destilação a 75-80 mmHg, a 55 °C para produzir um óleo que pode ser usado directamente no passo C sem purificação adicional. De outra forma o produto pode ser purificado por destilação para produzir 1-2 com um rendimento de 70-80%. 1H-RMN (400 MHz, CDC13) : δ 4,8 (s, 2H) ppm. 13C-RMN (400 MHz, CDC13) : δ 32,1, 115,8 (q, J=337 Hz), 156,2 (q, J=50 Hz), e 164,4 ppm.

Passo C.- Preparação de N-[ (2Z)-piperazin-2-ilideno]trifluoroacetohidrazida (1-3) A uma solução de etilnodiamina (33,1 g, 0,55 mol) em metanol (150 mL) arrefecida a -20°C foi adicionado 21 ΡΕ1654263 oxadiazolo 1-2 destilado do Passo B (29,8 g, 0,16 mol) enquanto se manteve a temperatura a -20°C. Após a adição estar completa, a suspensão resultante foi deixada a -20°C durante 1 h. Foi então deitado etanol (225 mL) e a suspensão lentamente aquecida a -5°C. Após 60 min a -5°C, a suspensão foi filtrada e lavada com etanol (60 mL) a -5°C. Amidina 1-3 foi obtida como um sólido branco com 72% de rendimento (24,4 g, área de 99,5% no HPLC). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) : δ 2,9 (t, 2H) 3,2 (t, 2H) , 3,6 (s, 2H) , e 8,3 (b, 1H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, DMSO-d6) : δ 40, 8, 42,0, 43,3, 119,3 (q, J=350 Hz), 154,2 e 156,2 (q, J=38 Hz) ppm.

Passo D: Preparação de cloridrato de 3-(trifluo~ rometil)-5, 6, 7,8-tetra-hidro[1,2,4]triazolo[4,3~a]pirazina (1-4)

Uma suspensão de amidina 1-3 (27,3 g, 0,13 mol) em 110 mL de metanol foi aquecida a 55°C. Ácido clorídrico a 37% (11,2 mL, 0,14 mol) foi adicionado durante 15 min a esta temperatura. Durante a adição, todos os sólidos se dissolveram resultando uma solução límpida. A reacção foi deixada durante 30 min. A solução foi arrefecida a 20°C e deixada a esta temperatura até se formar uma camada de sementeira (10 min a 1 h). Foram deitados 300 mL de MTBE a 22 ΡΕ1654263 20°C durante 1 h. A suspensão resultante foi arrefecida a 2°C, deixada durante 30 min e filtrada. Os sólidos foram lavados com 50 mL de etanol:MTBE (1:3) e secos em vazio a 45°C. O rendimento de triazolo 1-4 foi 26,7 g (99,5% de área por HPLC). 1H-RMN (400 MHz, DMSO-de) : δ 3,6 (t, 2H) , 4,4 (t, 2H), 4,6 (s, 2H), e 10,6 (b, 2H) ppm. 13C-RMN (100 MHz, DMSO-d6) : δ 39, 4, 39,6, 41,0 118,6 (q, J=325 Hz), 142,9 (q, J=50 Hz), e 148,8 ppm.

Esquema 2

O

HO

F

M CFS

NHaOAc —i.....

MeOH ΡΕ1654263 23

F

R& FBo Josiphos, Ha.MeOH.200p

F

Passo A: Preparação de 4-oxo-4-[3-(trifluoro- metil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7(8H)-il]-1-(2,4,5-trifluorofenil)butan-2-ona (2-3) Ácido 2,4,5-trifluorofenilacético (2-1) (150 g, 0,789 mol) , ácido de Meldrum (125 g, 0,868 mol) , e 4-(dimetilamino)piridina (DMAP) (7,7 g, 0,063 mol) foram deitados num balão de 5 L e três tubuladuras. N,N-dimetilacetamida (DMAc) (525 mL) foi adicionada de uma vez à temperatura ambiente para dissolver os sólidos. N,N-di-isopropiletilamina (282 mL, 1,62 mol) foi adicionada de uma vez à temperatura ambiente enquanto se manteve a temperatura abaixo de 40°C. Foi adicionado gota à gota cloreto de pivaloilo (107 mL, 0,868 mol) durante 1 a 2 h enquanto se manteve a temperatura entre 0 e 5°C. A mistura de reacção foi deixada a 5°C durante 1 h. Cloridrato de 24 ΡΕ1654263 triazolo 1-4 (180 g, 0,789 mol) foi adicionado de uma vez a 40-50°C. A solução foi deixada a 70°C durante várias h. Solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio a 5% (625 mL) foi então adicionada gota a gota a 20-45°C. O lote foi semeado e deixado a 20-30°C durante 1-2 h. Depois foram adicionados gota a gota mais 525 mL de solução aquosa de hidrogenocarbonato de sódio a 5% durante 2-3 h. Após deixar várias h à temperatura ambiente, a suspensão foi arrefecida a 0-5°C e deixada 1 h antes de filtrar o sólido. O bolo húmido foi deslocado-lavado com DMAc aquoso a 20% (300 mL), seguido da adição de duas porções de DMAc aquoso a 20% (400 mL) e finalmente água (400 mL) . O bolo foi seco por secção à temperatura ambiente. O rendimento do produto final isolado 2-3 foi de 89%.

Passo B: Preparação de (2 Z)-4-oxo-4-[trifluoro-metil) - 5,6-di-hidro [l,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7-(8ff)-il]-1- (2,4,5~trifluorofenil)but-2-en-2-amina (2-4)

Um balão de fundo redondo de 5 L foi carregado com metanol (100 mL), cetoamida 2-3 (200 g), e acetato de amónio (110,4 g) . Metanol (180 mL) e hidróxido de amónio aquoso a 28% (58,6 mL) foram então adicionados mantendo a temperatura abaixo de 30°C durante a adição. Foi adicionado mais metanol (100 mL) à mistura da reacção. A mistura foi aquecida em refluxo e deixada durante 2 h. A reacção foi arrefecida à temperatura ambiente e depois até cerca de 5°C num banho de gelo. Após 30 min, o sólido foi filtrado e seco para produzir 2-4 como um sólido (180 g); pf 271,2°C. 25 ΡΕ1654263

Passo C: Preparação de (2R)-4-oxo-4-[trifluoro-metil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7-(8H) -il]-1- (2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina (2-5)

Num balão de 500 mL foram deitados dímero de cloro(1,5-ciclo-octadieno)ródio(I) {[Rh(cod)Cl]2} (292 mg, 1,18 mol) e " (R, S)-t-butilo Josiphos" (708 mg, 1,3 mmol) sob uma atmosfera de azoto. Foi então adicionado MeOH desgaseificado (200 mL) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 h. Num hidrogenador de 4 L foi deitada a enamina amida 2-4 (118 g, 0,29 mol) juntamente com MeOH (1 L). A suspensão foi desgaseificada. A solução de catalisador foi então transferida para o hidrogenador sob azoto. Após desgaseificar três vezes, a enamina amida foi hidrogenada sob hidrogénio a 200 psi a 50°C durante 13 h. O rendimento de ensaio foi determinado HPLC como sendo 93% e a pureza óptica como sendo 94% ee. A pureza óptica foi ainda intensificada da seguinte forma. A solução de metanol da reacção de hidro-genação (18 g em 180 mL MeOH) foi concentrada e transferida para éter t-butilmetilico (MTBE) (45 mL) . A esta solução foi adicionada solução aquosa de H3PO4 (0,5 M, 95 mL). Após separação das fases, foi adicionado NaOH 3N (35 mL) à fase aquosa, a qual foi então extraída com MTBE (180 mL+100 mL). A solução de MTBE foi concentrada e mudado o solvente para tolueno quente (180 mL, cerca de 75°C). A solução de tolueno quente foi então deixada a arrefecer lentamente a 26 ΡΕ1654263 0°C (5-10 h) . Os cristais foram isolados por filtração (13 g, rendimento 72%, 98-99% ee); pf 114,1-115,7 °C. 1H-RMN (300 MHz, CD3CN) : δ 7,26 (m) , 7,08 (m) , 4,90 (s), 4,89 (s), 4,14 (m), 3,95 (m), 3,40 (m), 2,68 (m), 2,49 (m), 1,40 (ls). O composto 2-5 existe como rotâmeros na ligação amida. Salvo indicado, os rotâmeros mais abundante e menos abundante estão agrupados visto que os sinais de carbono-13 não estão bem resolvidos: 13C RMN (CD3CN) : δ 171,8, 157,4 (ddd, Jcf = 242,4, 9,2, 2,5 Hz), 152,2 (mais abundante), 151,8 (menos abundante), 149,3 (ddd, Jcf = 246, 7, 14,2, 12, 9 Hz), 147,4 (ddd, JCf = 241,2, 12,3, 3,7 Hz), 144,2 (q, JCF = 38,8 Hz), 124,6 (ddd, JCF = 18,5, 5,9, 4,0 Hz), 120,4 (dd, JCF = 19,1, 6,2 Hz), 119,8 (q, JCF = 268,9 Hz), 106,2 (dd, JCF = 29,5, 20,9 Hz), 50,1, 44,8, 44,3 (menos abundante), 43,2 (menos abundante), 42,4, 41,6 (menos abundante), 41,4, 39,6, 38,5 (menos abundante), 36,9. A base livre cristalina pode também ser isolada como se segue: (a) A mistura de reacção após completado o passo de hidrogenação é misturada com 25% em peso de Ecosorb C-941. A mistura é agitada sob azoto durante uma h e depois 27 ΡΕ1654263 filtrada. 0 bolo é lavado com 2L/kg de metanol. A recuperação da base livre é de cerca de 95% e a pureza óptica é cerca de 95% ee. (b) A solução de base livre em metanol é concentrada até 3,5-4,0 L/kg volume (baseada na quantidade de base livre) e depois o solvente mudado para isopropanol (AIP) até um volume final de 3,0 L/kg de AIP. (c) A suspensão é aquecida a 40 °C e deixada 1 h a 40°C e depois arrefecida a 25°C durante 2 h. (d) É deitado heptano (7L/kg) durante 7 h e a suspensão agitada durante 12 h a 22-25°C. A concentração do sobrenadante antes da filtração é de 10-12 mg/g. (e) A suspensão é filtrada e o sólido lavado com 30% de ΑΙΡ/heptano (2L/kg). (f) O sólido é seco num forno a vácuo a 40°C. (g) A pureza óptica da base livre é de cerca de 99% ee.

Foram usadas as seguintes condições de cromato-grafia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinar a percentagem de conversão de produto: ΡΕ1654263 - 28 -

Coluna :

Waters Symmetry C18, 250 mm x 4,6 mm

Eluente:

Solvente A: 0,1 % vol HCIO4/H2O

Solvente B: acetonitrilo

Gradiente:

0 min 75% A: 25% B

10 min 25% A: 75% B

12,5 min 25% A: 75% B

15 min 75% A: 25% B

Caudal: 1 mL/min

Vol. Injecção: ΙΟμΙ.

Detecção UV: 210 nm

Temp. Coluna:

40°C

Tempos de retenção: composto 2-4: 9,1 min composto 2-5: 5,4 min t-Bu Josiphos: 8,7 min 29 ΡΕ1654263

As condições seguintes de cromatografia liquida de alta eficiência (HPLC) foram usadas para determinar a pureza óptica:

Coluna: Chirapak, AD-H, 250 mm x 4,6 mm

Eluente: Solvente A: 0,2% vol. dietilamina em heptano

Solvente B: 0,2% vol. dietilamina em etanol

Tempo do ensaio isocrático: 18 min

Caudal: 0,7 mL/min

Vol. Injecção: 7μΙϋ

Detecção UV: 268 nm

Temp. Coluna: 35°C

Tempos de retenção: (B)-amina 2-5: 13,8 min (S-amina 2-5: 11,2 min

Di-hidrogenofosfato de (2R)-4-oxo-4-[trifluoro-metil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7-(8H) -il]-1- (2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina mono-hidratado

Num balão de fundo redondo de 250 mL equipado com 30 ΡΕ1654263 agitador de topo, manta de aquecimento e termopar, foram deitados 31,5 mL de isopropanol (AIP), 13,5 mL de água, 15,0 g (36,9 mmol) da base livre (2R)-4-oxo-4-

[trifluorometil)-5,6-di-hidro[l,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7-(8H) -il]-1-(2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina e 4,25 g (36,9 mmol) de ácido fosfórico aquoso a 85%. A mistura foi aquecida a 75°C. Formou-se um precipitado espesso branco a temperaturas inferiores mas que se dissolveu quando se atingiram os 75°C. A solução foi arrefecida a 68°C e depois mantida a essa temperatura durante 2 h. Formou-se uma camada de sólidos durante este intervalo de tempo [a solução pode ser semeada com 0,5% a 5% de partículas de tamanho pequeno (moinho Alpine) de mono-hidrato] . A suspensão foi então arrefecida a uma velocidade de 4°C/h até 21°C e depois mantida durante a noite. 105 mL de AIP foram então adicionados à suspensão. Após lha suspensão foi filtrada e lavada com 45 mL de AIP (os sólidos podem também ser lavados com uma solução de água/AIP para evitar a passagem a outras formas cristalinas). Os sólidos foram secos no filtro ao ar livre. Foram recuperado 18,6 g de sólidos. Verificou-se que os sólidos tinham uma pureza maior do que 99,8% pela percentagem de área no HPLC (condições de HPLC mesmas do que as dadas acima). A análise da distribuição do tamanho das partículas dos sólidos isolados mostrou uma média de PSD de 80 micron com 95% inferior a 180 micron. Mostrou-se que a forma cristalina dos sólidos era o mono-hidrato por difracção de Raios-X do pó e análise termogravimétrica. 31 ΡΕ1654263

Os estudos de difracção de Raios-X do pó são largamente utilizados para caracterizar estruturas moleculares, formas cristalinas e polimorfismos. 0 padrão de difracção de Raios-X do pó do di-hidrogenofosfato mono-hidratado cristalino foi gerado num Sistema de Difracção de Raios-X Philips Analytical X'Pert PRO com consola PW3040/60. Foi usada como fonte de radiação K-Alfa um tubo de Raios-X cerâmico PW3373/00 Cu LEF. A FIG. 1 mostra o padrão de difracção de Raios-X para a forma cristalina mono-hidratada do sal di-hidrogenofosfato de fórmula estrutural II. 0 mono-hidrato apresentou picos de difracção caracteristicos correspondentes a espaçamentos-d de 7,42, 5,48, e 3,96 angstrom. O mono-hidrato foi ainda caracterizado pelos espaçamentos-d de 6, 30, 4,75 e 4,48 angstrom. O mono-hidrato foi ainda caracterizado pelos espaçamentos-d de 5,85, 5,21 e 3,52 angstrom.

Além dos padrões de difracção de Raios-X descritos acima, a forma cristalina mono-hidratada do sal di-hidrogenofosfato da fórmula estrutural II foi ainda caracterizada pelo seu espectro de ressonância magnética nuclear (RMN) do estado sólido de carbono-13 e flúor-19. O espectro de RMN de estado sólido de carbono-13 foi obtido num RMN Bruker DSX 400 WB usando uma sonda de ressonância dupla CPMAS Bruker de 4 mm. O espectro de RMN de carbono-13 utilizou "proton/carbon-13 cross-polarization magic-angle spinning" com polarização cruzada de amplitude variável. A 32 ΡΕ1654263 amostra foi girada a 15,0 kHz, e foram registados um total de 2048 varrimentos com um delay de 20 segundos entre ciclos. Foi aplicado ao espectro um alargamento de sinal de 40 Hz antes de se realizar a FT. Os desvios químicos são registados na escala TMS usando o carbono do carbonilo da glicina (176,03 ppm) como referência secundária. O espectro de RMN de estado sólido de flúor-19 foi obtido num RMN Bruker DSX 400 WB usando uma sonda CPMAS Bruker de 4 mm. O espectro de RMN utilizou um programa pulso simples-aquisição de pulso. As amostras foram giradas a 15,0 kHz, e foram registados um total de 16 varrimentos com um delay de 30 segundos entre ciclos. Foi utilizada uma tampa de Vespel para minimizar o background de flúor. Foi aplicado ao espectro um alargamento de sinal de 100 Hz antes de se realizar a FT. Os desvios químicos são registados usando poli(tetrafluoroetileno) (teflon) como uma referência secundária externa à qual foi atribuída um desvio químico de -122 ppm. A FIG. 2 mostra o espectro de estado sólido de RMN de carbono-13 CPMAS para a forma cristalina do mono-hidrato do sal di-hidrogenofosfato da fórmula estrutural II. A forma mono-hidratada apresentou picos característicos com valores de desvios químicos de 169,1, 120,8 e 46,5 ppm. Ainda característicos da forma mono-hidratada foram os sinais com valores de desvios químicos de 159,0 e 150,9 e 40,7 ppm. 33 ΡΕ1654263 A FIG. 3 mostra o espectro de estado sólido de RMN de flúor-19 MAS para a forma cristalina do mono-hidrato do sal di-hidrogenofosfato da fórmula estrutural II. A forma mono-hidratada apresentou picos caracteristicos com valores de desvios químicos de -64,5. -114,7, -136,3, e -146,2 ppm. Ainda caracteristicos da forma mono-hidratada foram os sinais com valores de desvios químicos de -96,5, -104,4, -106,3, e -154,5 ppm. A FIG. 4 mostra a curva da análise termogra-vimétrica característica (TGA) para a forma cristalina do mono-hidrato do sal di-hidrogenofosfato da fórmula estrutural II. Foi usado um Perkin Elmer TGA 7 ou instrumento equivalente. As experiências foram realizadas sob um fluxo de azoto e usando uma velocidade de aquecimento de 10°C/min até uma temperatura máxima de aproximadamente 250°C. Após tarar automaticamente a balança, foram adicionados 5 a 20 mg de amostra ao cadinho de platina, o forno foi elevado e o programa de aquecimento iniciado. Os dados de peso/tem-peratura foram registados automaticamente pelo instrumento. A análise dos resultados foi realizada seleccionado a função Delta Y com o software do instrumento e escolhendo as temperaturas entre as quais se calculou a perda de peso. As perdas de peso foram reportadas até ao limiar de decomposição/evaporação. A TGA indicou uma perda de peso de cerca de 3,3647% desde a temperatura ambiente até cerca de 250°C. A FIG. 5 ,mostra a curva DSC característica para 34 ΡΕ1654263 a forma cristalina do mono-hidrato do sal di-hidrogeno-fosfato da fórmula estrutural II. Foi usado um instrumento TA DSC 2910 ou instrumentação equivalente. Entre 2 e 6 mg de amostra foram pesadas num cadinho aberto. Este recipiente foi então amolgado e colocado na posição da amostra da célula calorimétrica. Foi colocado um cadinho vazio na posição de referência. A célula calorimétrica foi fechada e foi passado um fluxo de azoto através da célula. O programa de aquecimento foi feito para aquecer a amostra a uma velocidade de aquecimento de 10°C/min até uma temperatura de aproximadamente 250°C. O programa de aquecimento foi iniciado. Quando o ensaio se completou, os dados foram analisados usando o programa de analise de DSC contido no software. A fusão endotérmica foi integrada entre os pontos de temperatura da linha base que estão acima e abaixo do intervalo de temperatura ao longo do qual se observou a endotérmica. Os dados reportados são a temperatura limiar, a temperatura do pico, e entalpia. O mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogeno-fosfato do presente invento tem uma pureza de pelo menos cerca de 5% da forma com as caracteristicas físicas do difracção de Raios-X do pó, RMN MAS flúor-19, RMN CPMAS carbono-13, e DSC acima. Num modelo de realização a pureza da fase é de pelo menos cerca de 10% da forma com as caracteristicas físicas do estado sólido acima. Num segundo modelo de realização a pureza da fase é de pelo menos cerca de 25% da forma com as caracteristicas físicas do estado sólido acima. Num terceiro modelo de realização a pureza da 35 ΡΕ1654263 fase é de pelo menos cerca de 50% da forma com as caracte-rísticas físicas do estado sólido acima. Num quarto modelo de realização a pureza da fase é pelo menos de cerca de 75% da forma com as características físicas do estado sólido acima. Num quinto modelo de realização a pureza da fase é de pelo menos cerca de 90% da forma com as características físicas do estado sólido acima. Num sexto modelo de realização o mono-hidrato cristalino do sal di-hidrogeno-fosfato é a forma substancialmente pura com as características físicas do estado sólido acima. Pelo termo "pureza de fase" pretende-se significar a pureza do estado sólido do sal di-hidrogenofosfato mono-hidratado com respeito à forma particular amorfa ou cristalina do sal como determinado pelos métodos físicos de estado sólido descritos na presente aplicação.

Verificou-se que o sal di-hidrogenofosfato mono-hidratado cristalino é estável nas condições ambientes. Verificou-se que se convertia no mono-hidrato desidratado se aquecido acima de 40°C sob um fluxo de azoto muito seco. O mono-hidrato desidratado converteu-se de volta ao mono-hidrato nas condições ambiente.

EXEMPLOS DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS 1) Processo de compressão directa O sal di-hidrogenofosfato mono-hidratado foi formulado num comprimido por um processo de compressão 36 ΡΕ1654263 directa. Um comprimido com uma potência de 100 mg é composto de 128,4 mg de ingrediente activo, 127,8 mg de celulose microcristalina, 127,8 mg de manitol (ou 127,8 mg de fosfato de cálcio), 8 mg de croscarmelose de sódio, 8 mg de estearato de magnésio e 16 mg de branco de Opadry (material de revestimento feito por Colorcon, West Point, PA) . O ingrediente activo, celulose microcristalina, manitol (ou fosfato de cálcio), e croscarmelose foram primeiro misturados, e a mistura foi então lubrificada com estearato de magnésio e prensado em comprimidos. Os comprimidos foram revestidos com um filme com branco de Opadry. 2) Processo de compactação com rolo O sal di-hidrogenofosfato mono-hidratado foi formulado num comprimido por um processo de compactação com rolo. Um comprimido com uma potência de 100 mg é composto de 128,4 mg do ingrediente activo, 45 mg de celulose microcristalina, 111,6 mg de fosfato de cálcio, 6 mg de croscarmelose de sódio, 9 mg de estearato de magnésio e 12 mg de branco de Opadry (material de revestimento feito por Colorcon, West Point, PA) . O ingrediente activo, celulose microcristalina, fosfato de cálcio, e croscarmelose foram primeiro misturados, e a mistura foi então lubrificada com um terço da quantidade total de estearato de magnésio e compactada em fitas com um rolo. Estas fitas foram então moídas e os grânulos resultantes foram lubrificados com a quantidade restante de estearato de magnésio e prensadas em 37 ΡΕ1654263 comprimidos. Os comprimidos foram então revestidos com um filme de branco de Opadry. 3) Uma formulação intravenosa (i.v.) aquosa é definida como o sal di-hidrogenofosfato mono-hidratado da fórmula I em acetato de sódio 10mM/0,8% de solução salina a pH 4,5+0,2. Para uma formulação com uma concentração de 4,0 mg/mL, 800 mg de NaCl são dissolvidas em 80 mL de água, depois são adicionados 57,5 μό de ácido acético glacial, seguidos por 512 mg do sal di-hidrogenofosfato mono-hidratado. O pH é ajustado a 4,510,2 com solução de NaOH 0,1N. O volume final é ajustado a 100 mL com água. Uma solução de 2,0 mg/mL pode ser feita por diluição de 50,0 mL da solução de 4,0 mg/mL a 100 mL com placebo. Uma solução de 1,0 mg/mL pode ser feita por diluição de 25,0 mL da solução de 4,0 mg/mL a 100,0 mL com placebo.

Lisboa, 5 de Novembro de 2007

Claims

ΡΕ1654263 1 REIVINDICAÇÕES 1. Um sal di-hidrogenofosfato de 4-oxo-4-[3-trifluorometil)-5,6-di-hidro[1,2,4]triazolo[4,3-a]pirazin-7- (8H) -il]-1-(2,4,5-trifluorofenil)butan-2-amina de fórmula estrutural I:

F (1)

ou um hidrato farmaceuticamente aceitável deste. 2. 0 sal da reivindicação 1 de de fórmula estrutural II tendo a configuração- (R) no centro quiral marcado com um 1

1 3 3. 0 sal da reivindicação 1 de fórmula estrutural III tendo a configuração- (S) no centro quiral marcado com um 1 2 ΡΕ1654263

4. 0 sal da Reivindicação 2 caracterizado por ser um mono-hidrato cristalino 5. 0 sal da Reivindicação 4 caracterizado por bandas de absorção características obtidas a partir do padrão de difracção de Raios-X do pó a espaçamentos espectrais d de 1,42, 5,48, e 3,96 angstrom. 6. 0 sal da Reivindicação 5 caracterizado por bandas de absorção características obtidas a partir do padrão de difracção de Raios-X do pó a espaçamentos espectrais d de 6,30, 4,75, e 4,48 angstrom.
7. O sal da Reivindicação 6 caracterizado por bandas de absorção características obtidas a partir do padrão de difracção de Raios-X do pó a espaçamentos espectrais d de 5,85, 5,21, e 3,52 angstrom.
8. O sal da Reivindicação 4 caracterizado por um espectro de ressonância magnética nuclear de estado sólido de carbono-13 CPMAS mostrando sinais a 169,1, 120,8 e 46,5 ppm. 3 ΡΕ1654263 9. 0 sal da Reivindicação 8 caracterizado por um espectro de ressonância magnética nuclear de estado sólido de carbono-13 CPMAS mostrando sinais a 159,0, 150,9 e 40,7ppm.
10. O sal da Reivindicação 8 caracterizado por um espectro de ressonância magnética nuclear de estado sólido de flúor-19 MAS mostrando sinais a -64,5, -114,7, -136,3, e -146,2 ppm.
11. O sal da Reivindicação 4 caracterizado por um espectro de ressonância magnética de estado sólido de flúor-19 MAS mostrando sinais de -96,5, -104,4, -106,3, e -154,5 ppm.
12. A substância fármaco compreendendo cerca de 5% até cerca de 100% em peso do mono-hidrato cristalino da Reivindicação 4.
13. A substância fármaco da Reivindicação 12 compreendendo cerca de 10% até cerca de 100% em peso do referido mono-hidrato cristalino.
14. A substância fármaco da Reivindicação 12 compreendendo cerca de 25% até cerca de 100% em peso do referido mono-hidrato cristalino.
15. A substância fármaco da Reivindicação 12 compreendendo cerca de 50% até cerca de 100% em peso do referido mono-hidrato cristalino. 4 ΡΕ1654263
16. A substância fármaco da Reivindicação 12 compreendendo cerca de 75% até cerca de 100% em peso do referido mono-hidrato cristalino.
17. A substância fármaco da Reivindicação 12 compreendendo substancialmente todo o peso do referido mono-hidrato cristalino.
18. Uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz do sal de acordo com a Reivindicação 1 ou Reivindicação 4 ou um solvato farma-ceuticamente aceitável deste em associação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
19. Um processo para preparar o sal da Reivindicação 1 compreendendo o passo de pôr em contacto um equivalente de 4-oxo-4-[3-trifluorometil)-5,6-di-hidro-[1,2,4] triazolo [4,3-a] pirazin-7- (8fí) —il] —1— (2,4,5-trifluo-rofenil)butan-2-amina num solvente orgânico ou solvente orgânico aquoso com cerca de um equivalente de ácido fosfórico a uma temperatura no intervalo de 25-100°C.
20. O processo da Reivindicação 19 em que o referido solvente orgânico é um alcanol Ci-C5 linear ou ramificado.
21. Uso do sal da Reivindicação 1 ou Reivindicação 4 para a manufactura de um medicamento para o tratamento de diabetes tipo 2. 5 ΡΕ1654263
22. Um processo para preparar o mono-hidrato cristalino da Reivindicação 4 compreendendo os passos de: (a) cristalizar o referido sal di-hidrogenofosfato da Reivindicação 1 a 25°C a partir de uma mistura de isopro-panol e água, de modo a que a concentração da água seja superior a 6,8 por cento em peso; (b) recuperar a fase sólida resultante; e (c) remover o solvente desta. Lisboa, 5 de Novembro de 2007