PL95291B1 - Sposob wytwarzania nowych d-homosteroidow - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku jest sposób wytwarzania nowych D-homosteroidów o wzorze ogólnym 1 oraz ich 1,2-dehydropochodnych, w którym R6 stanowi wodór, fluor, chlor, brom lub rodnik metylowy, R11 stanowi grupe hydroksylowa, R9 stanowi wodór, R21 stanowi chlorowiec natomiast R17a oznacza grupe hydroksylowa lub acyloksylowa.

Wyrazenie „chlorowiec" obejmuje fluor, chlor, brom i jod. Rodnik acyloksylowy moze pochodzic od nasyconego lub nienasyconego, alifatycznego kwasu jednokarboksylowego albo tez od cykloalifa- tycznego, aryloalifatycznego lub aromatycznego kwasu jednokarboksylowego zawierajacego korzy¬ stnie az do 15 atomów wegla. Przykladami takich kwasów sa: kwas mrówkowy, octowy, piwalinowy, propionowy, maslowy, kapronowy, enantowy, unde- cylenowy, oleinowy, cyElopentylopropionowy, cyklo- heksylopropionowy, fenylooctowy i benzoesowy.

Szczególnie korzystne sa rodniki alkanoiloksylowe majace 1—7 atomów wegla.

Ze zwiazków podstawionych w pozycji 6 uprzy¬ wilejowane sa 6a-izomery. Sposób wedlug wyna¬ lazku polega na tym, ze D-homosteroid o wzorze 2, lub jego 1,2-dehydropochodna, w którym R21, R6, R" oraz zaznaczone linia kreskowana wiazanie w pozycji 1,2 maja wyzej wymienione znaczenie, zna¬ na metoda za pomoca drobnoustrojów lub uzyska¬ nych z nich enzymów hydroksyluje sie w pozycji 11.

Hydroksylowanie zwiazku o wzorze 2 mozna prze¬ prowadzic za pomoca metod, znanych w przypadku mikrobiologicznego wprowadzania do steroidów gru¬ py hydroksylowej w pozycji 11.

Do 11-hydroksylowania nadaja sie drobnoustroje z jednostki taksonomicznej grzyby i bakterie a w szczególnosci z podjednostek takich jak workowce, glonowce, podstawczaki, promieniowce. Mozna uzyc równiez mutantów wytworzonych na drodze chemi¬ cznej, na przyklad przez traktowanie azotynem, lub na drodze fizycznej, na przyklad przez napromienio¬ wanie, jak równiez otrzymanych z drobnoustrojów bezkomórkowych preparatów enzymatycznych. Do lip-hydroksylowania nadaja sie w szczególnosci drobnoustroje z rodzaju Curvularia, na przyklad C. lunata, Absidia, na przyklad A. orchidis i coeru- la, Colletotrichum, na przyklad C. pisi, Pellicularia, na przyklad P. filamentosa, Streptomyces, na przy¬ klad S. fradiae, Cunninghamella, na przyklad C. bai- nieri, C. verticellata, C. elegans i C. echinulata, oraz Pycnosporium.

D-homosteroidy o wzorze 1 sa skuteczne w wy¬ dzielaniu wewnetrznym, a zwlaszcza dzialaja prze¬ ciwzapalnie. Odznaczaja sie selektywnoscia dziala¬ nia.

Nieoczekiwanie stwierdzono, ze nowe zwiazki otrzymywane sposobem wedlug wynalazku znacznie przewyzszaja pod wzgledem wlasciwosci farmako¬ logicznych znane zwiazki o zblizonej budowie i po¬ dobnym kierunku dzialania. Tak na przyklad zna¬ ny kortikoid prednisolon [Organische Chemie, L. F.

Fieser i inni (1968) str. 1640 i 1641] W tescie prze- $stu95 291 prowadzonym na uchu myszy wykazuje EC50 wyno¬ szaca 0,35, podczas gdy D-homokortikoidy, na przy¬ klad 21-chloro-6a-fluoro-lip, 17a-dwuhydroksy-D- homopregna-l,4-dien-3,20-dion wykazuje EC50 = = 0,11, a jego 17a-maslan EC50 = 0,026.

Produkty otrzymane sposobem wedlug wynalazku moga miec zastosowanie jako srodki lecznicze, na przyklad w postaci preparatów farmaceutycznych zawierajacych je w mieszaninie wraz z odpowied¬ nim dla uzycia jelitowego, podskórnego lub poza¬ jelitowego organicznym lub nieorganicznym nosni¬ kiem, takim jak woda, zelatyna, guma arabska, cukier mlekowy, skrobia, stearynian magnezu, talk, oleje roslinne, glikole polialkilenowe, wazelina itd.

Preparaty farmaceutyczne moga miec postac stala, na przyklad jako tabletki, drazetki, czopki, kapsul¬ ki, pólstala, na /przyklad jako masci, lub ciekla na przyklad jako roztwory, zawiesiny lub emulsje.

Ewentualnie sa one wyjalawiane i/lub zawieraja substancje pomocnicze, takie jak srodki konserwu¬ jace, stabilizujace, zwilzajace lub emulgujace, sole do zmieniania cisnienia osmotycznego lub substan¬ cje buforowe. Moga one tez zawierac jeszcze inne terapeutycznie cenne substancje.

Jako wytyczna dla zakresu dawki preparatów miejscowych mozna przyjac okolo 0,01—1%, a w przypadku preparatów systemicznych okolo 0,1—10 miligrama w jednej zastosowanej jednostce.

Srodki lecznicze wytwarza sie znanym sposobem przez zmieszanie zwiazków o wzorze 1 z odpowied¬ nimi do terapeutycznego podawania, nietoksyczny¬ mi, zwykle stosowanymi w tego rodzaju prepara¬ tach stalymi i/lub cieklymi substancjami nosnymi, na przyklad z wyzej wymienionymi oraz ewentual¬ nie przez doprowadzenie do zadanej postaci.

Przyklad. 500 ml wyjalowionego roztworu po¬ zywki zawierajacej 5,0% cukru skrobiowego, 0,5% namoku kukurydzanego, 0,2% azotanu sodowego, 0,1% fosforanu jednopotasowego, 0,05% chlorku po¬ tasowego, 0,05% siarczanu magnezowego i 0,002% siarczanu zelazawego zaszczepia sie majaca 2 tygod¬ nie, hodowana na skosie agarowym kultura Curvu- laria lunata (NRRL 2380) i nastepnie wytrzasa w temperaturze 30° w ciagu 5 dni. Tak otrzymana wstepna kultura sluzy do zaszczepiania wstepnego fermentatora o pojemnosci 20 1 zaladowanego 15 li¬ trami wyjalowionej substancji zawierajacej 5,0% cukru skrobiowego, 0,25% namoku kukurydzanego, 0,1% azotanu sodowego, 0,05% wodorofosforanu po¬ tasowego, 0,025% chlorku potasowego, 0,025% siar¬ czanu magnezowego i 0,001% siarczanu zelazawego.

Wstepna kulture hoduje sie w ciagu 72 godzin w temperaturze 29° mieszajac (220 obrotów/minute) i napowietrzajac (15 1 powietrza na minute). 900 ml tak otrzymanej kultury wstepnej umieszcza sie w fermentatorze glównym o pojemnosci ,20 1, za¬ wierajacym to samo medium co fermentator wstep- ny. Mieszajac i napowietrzajac hoduje sie kulture w temperaturze 29° w ciagu 24 godzin, a nastepnie traktuje sterylnie przesaczonym roztworem 3,0 g 17a-hydroksy-21-chloro-D-homopregn-4-en-3,20-dio- nu w 150 ml dwumetyloformamidu i poddaje sie dalszej fermentacji w ciagu 40 godzin. Nastepnie wsad fermentacyjny przesacza sie i przesacz oraz grzybnie ekstrahuje sie ketonem metylowoizobuty- lowym. Wyciagi laczy sie i zateza pod zmniejszo¬ nym cisnieniem. C trzymana pozostalosc chromato- graf uje sie na kolumnie z zelu krzemionkowego i otrzymany surowy produkt przekrystalizowuje z mieszaniny acetonu i heksanu. Otrzymuje sie w ten sposób 21-chloro-lip, 17a-dwuhydroksy-D- -homopregn-4-en-3,20-dion. UV: %m = 15900. Sub- stancje wyjsciowa mozna otrzymac w znany spo¬ sób z 17a, 21-dwuhydroksy-D-homopregn-4-en-3,20- -dionu o temperaturze topnienia 241—242°.

Claims (3)

Zastrzezenia patentowe

1. Sposób wytwarzania nowych D-homosteroidów o wzorze 1 oraz ich 1,2-dehydropochodnych, w któ¬ rym R6 stanowi wodór, fluor, chlor, brom lub rod¬ nik metylowy, R11 stanowi grupe hydroksylowa, R9 35 stanowi wodór, R21 stanowi chlorowiec, a R17a oznacza grupe hydroksylowa lub acyloksylowa, znamienny tym, ze D-homosteroid o wzorze 2, lub jego 1,2-dehydropochodna, w którym R21, R6, R17a maja wyzej wymienione znaczenie hydroksyluje sie 40 w pozycji 11 za pomoca drobnoustrojów lub uzy¬ skanych z nich enzymów.

2. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako substancje wyjsciowa stosuje sie 17a-hydro- ksy-21-chloro-D-homopregn-4-en-3.20-dion. któnr 45 poddaje sie hydroksylowaniu-

3. Sposób wedlug zastrz. 1, znamienny tym, ze jako mikroorganizm stosuje sie Curvularia lunata (NRRL 2380).95 291 Wzór 2