PL216049B1 - Pochodne mocznika, kompozycje zawierajace pochodne mocznika oraz zastosowanie pochodnych mocznika do wytwarzania leku do leczenia niewydolnosci serca - Google Patents

Pochodne mocznika, kompozycje zawierajace pochodne mocznika oraz zastosowanie pochodnych mocznika do wytwarzania leku do leczenia niewydolnosci serca

Info

Publication number
PL216049B1
PL216049B1 PL381801A PL38180105A PL216049B1 PL 216049 B1 PL216049 B1 PL 216049B1 PL 381801 A PL381801 A PL 381801A PL 38180105 A PL38180105 A PL 38180105A PL 216049 B1 PL216049 B1 PL 216049B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
methyl
amino
pyridyl
phenyl
fluoro
Prior art date
Application number
PL381801A
Other languages
English (en)
Other versions
PL381801A1 (pl
Inventor
Bradley P. Morgan
Alex Muci
Pu-Ping Lu
Erica Kraynack
Todd Tochimoto
David Morgans
Original Assignee
Cytokinetics Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=35785669&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL216049(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Cytokinetics Inc filed Critical Cytokinetics Inc
Publication of PL381801A1 publication Critical patent/PL381801A1/pl
Publication of PL216049B1 publication Critical patent/PL216049B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/72—Nitrogen atoms
    • C07D213/75—Amino or imino radicals, acylated by carboxylic or carbonic acids, or by sulfur or nitrogen analogues thereof, e.g. carbamates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
    • A61K31/17—Amides, e.g. hydroxamic acids having the group >N—C(O)—N< or >N—C(S)—N<, e.g. urea, thiourea, carmustine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C275/00—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C275/28—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton
    • C07C275/32—Derivatives of urea, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of urea groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of a carbon skeleton being further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/56—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/32—One oxygen, sulfur or nitrogen atom
    • C07D239/42—One nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D261/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings
    • C07D261/02—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D261/06—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D261/10—Heterocyclic compounds containing 1,2-oxazole or hydrogenated 1,2-oxazole rings not condensed with other rings having two or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D261/14—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D263/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings
    • C07D263/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings
    • C07D263/30—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D263/34—Heterocyclic compounds containing 1,3-oxazole or hydrogenated 1,3-oxazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D263/48—Nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D271/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two nitrogen atoms and one oxygen atom as the only ring hetero atoms
    • C07D271/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having two nitrogen atoms and one oxygen atom as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • C07D271/10—1,3,4-Oxadiazoles; Hydrogenated 1,3,4-oxadiazoles
    • C07D271/113—1,3,4-Oxadiazoles; Hydrogenated 1,3,4-oxadiazoles with oxygen, sulfur or nitrogen atoms, directly attached to ring carbon atoms, the nitrogen atoms not forming part of a nitro radical
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/22—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms with hetero atoms directly attached to ring nitrogen atoms
    • C07D295/26—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings
    • C07D417/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
  • Nitrogen- Or Sulfur-Containing Heterocyclic Ring Compounds With Rings Of Six Or More Members (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Hydrogenated Pyridines (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)

Description

Przedmiotem wynalazku są podstawione pochodne mocznika, zwłaszcza związki chemiczne selektywnie modyfikujące aktywność sarkomeru mięśnia sercowego, a zwłaszcza kompozycje farmaceutyczne zawierające te związki chemiczne do leczenia chorób serca i zastosowanie tych związków do leczenia chorób serca.
Sarkomer, niezwykła struktura komórkowa występująca w mięśniu sercowym i mięśniach szkieletowych, jest zbudowany z cienkich i grubych włókien kontaktujących się ze sobą na podobieństwo wsunięcia palców jednej ręki między palce drugiej ręki. Sarkomer stanowi niemal 60% objętości komórek serca. Grube włókna zbudowane są z miozyny, białka odpowiedzialnego za przekształcanie energii chemicznej (hydroliza ATP) w mechaniczną i ukierunkowany ruch. Miozyna i rodzina związków o podobnej funkcji zwane są białkami motorycznymi. Cienkie włókna zbudowane są z kompleksu białkowego. Jedno z tych białek, aktyna (polimer włókienkowaty) jest podłożem, wzdłuż którego miozyna ślizga się podczas wytwarzania siły. Z aktyną związany jest zestaw białek regulatorowych, kompleks troponiny i tropomiozyna, które powodują oddziaływanie aktyny i miozyny w zależności od poziomów wewnątrzkomórkowego Ca2+. W trakcie każdego uderzenia serca poziom Ca2+ podnosi się i opada, zapoczątkowując skurcz, a następnie rozkurcz mięśnia sercowego. Każdy ze składników sarkomeru bierze udział w tej odpowiedzi skurczowej.
Ze wszystkich białek motorycznych miozyna jest najbardziej intensywnie badanym białkiem. Z trzynastu różnych klas miozyny występujących w komórkach ludzkich, za skurcz mięśni szkieletowych, gładkich i mięśnia sercowego odpowiedzialna jest klasa Il miozyn. Ta klasa miozyn znacząco różni się pod względem składu aminokwasowego i ogólnej struktury od typów miozyn z innych dwunastu odrębnych klas. Miozyna-Il składa się z dwóch globularnych domen „główki” połączonych razem długim fragmentem końcowym o strukturze 2-łańcuchowej spirali typu a, który łączy się z innymi miozynami-ll, tworząc rdzeń grubej nici sarkomeru. Globularne główki zawierają domenę katalityczną, z którą wiąże się aktyna i w której zachodzi oddziaływanie miozyny z ATP. Po związaniu cząsteczki ATP z włóknem aktyny, uwolnienie fosforanu (por. ATP z ADP) prowadzi do zmiany w konformacji strukturalnej domeny katalitycznej, która z kolei zmienia położenie ramienia dźwigni wiązania łańcucha lekkiego, rozciąga się od globularnej główki; ruch ten jest nazwany przesunięciem. Ta zmiana w ułożeniu główki miozyny w odniesieniu do aktyny powoduje, że grube włókno, którego miozyna jest częścią, porusza się w odniesieniu do cienkiego włókna aktyny, z którym jest związane. Zniesienie wiązania główki z włóknem aktynowym (również modulowane przez Ca2+) sprzężone z powrotem domeny katalitycznej i lekkiego łańcucha do ich pierwotnej konfiguracji/orientacji wypełnia cykl skurczu i rozkurczu.
Mięsień sercowy ssaków zbudowany jest z dwóch form miozyny sercowej, alfa i beta, które zostały dobrze scharakteryzowane. Forma beta jest formą przeważającą (>90 procent) w mięśniu sercowym dorosłych ludzi. Jak zaobserwowano w przypadku ludzkiej niewydolności serca, obie te formy ulegają regulacji, na obu poziomach transkrypcyjnym i translacyjnym, przy czym przy niewydolności serca poziom forma alfa ulega obniżeniu.
Wyznaczono sekwencje wszystkich typów ludzkiej miozyny z mięśni szkieletowych, gładkich i mięśnia sercowego. Podczas gdy formy miozyny alfa i beta występujące w mięśniu sercowym są bardzo podobne (93% identyczności), różnią się one znacząco od ludzkiej miozyny z mięśnia gładkiego (42% identyczności) i są bliżej spokrewnione z miozyną z mięśni szkieletowych (80% identyczności). Odpowiednio, formy miozyny z mięśnia sercowego są niezwykle konserwowane pomiędzy wieloma gatunkami ssaków. Na przykład, formy miozyny z serca, zarówno miozyna alfa jak i beta są konserwowane pomiędzy ludźmi a szczurami w >96%, co więcej poznane 250 reszt aminokwasowych sekwencji formy beta miozyny świni jest w 100% konserwowane w porównaniu do odpowiadającej jej sekwencji ludzkiej miozyny beta. Zachowanie sekwencji w tak dużym stopniu przyczynia się do możliwości przewidywania wyników badań nad środkami terapeutycznymi na podstawie modeli zwierzęcych niewydolności serca.
Składniki sarkomeru w sercu stanowią cel przy opracowywaniu nowych metod leczenia niewydolności serca, na przykład przez zwiększenie kurczliwości lub ułatwienie pełnego rozluźnienia mięśnia sercowego, co umożliwia modyfikowanie funkcji odpowiednio, skurczowej i rozkurczowej, serca.
Zastostoinowa niewydolność serca (CHF) nie jest określoną chorobą, lecz raczej stanowi zespół objawów i symptomów, z których wszystkie powodowane są przez niezdolność serca do właściwej odpowiedzi na wysiłek, polegającej na zwiększeniu pojemności minutowej serca. Dominująca patofiPL 216 049 B1 zjologia związana z CHF obejmuje skurczową dysfunkcję, upośledzenie kurczliwości serca (a w konsekwencji obniżenie ilości krwi wyrzucanej przy każdym uderzeniu serca). Skurczowa dysfunkcja z wyrównawczym rozszerzeniem jam komór prowadzi do najbardziej typowej formy niewydolności serca, kardiomiopatii rozstrzeniowej, która jest często utożsamiana z CHF. Kontrapunktem dla skurczowej dysfunkcji jest dysfunkcja rozkurczowa, upośledzenie zdolności do wypełnienia komór krwią, co może również prowadzić do niewydolności serca nawet przy zachowanej funkcji lewej komory. Zastostoinowa niewydolność serca jest ostatecznie związana z niewłaściwym funkcjonowaniem samego miocytu sercowego, obejmującym obniżenie jego zdolności do skurczu i rozkurczu.
Przyczyną dysfunkcji skurczowej i/lub rozkurczowej może stać się wiele stanów chorobowych o tym samym podłożu, takich jak: miażdżyca tętnic, nadciśnienie, zakażenie wirusowe, dysfunkcja zastawek i choroby genetyczne. Pacjenci cierpiący na te stany chorobowe zwykle wykazują te same klasyczne objawy: skrócenie oddechu, obrzęk i przytłaczające zmęczenie. W przybliżeniu u połowy pacjentów z rozstrzeniową kardiomiopatią, powodem dysfunkcji ich serca jest niedokrwienna choroba serca spowodowana przez miażdżycę tętnic wieńcowych. Pacjenci ci mieli bądź jeden zawał mięśnia sercowego lub wielokrotne zawały mięśnia sercowego; stąd powstające w wyniku tego bliznowacenie i przebudowa serca prowadzi do rozwoju rozstrzeniowego i niedokurczliwego serca. Czasami czynnik przyczynowy nie może być zidentyfikowany i w takiej sytuacji choroba ta jest określana jako idiopatyczna kardiomiopatia rozstrzeniowa. Bez względu na pochodzenie choroby, to jest czy jest ona na tle niedokrwiennym czy ma inną przyczynę, rokowania u wszystkich pacjentów z rozstrzeniową kardiomiopatią są niepomyślne, i pacjenci ci wykazują nadmierną zachorowalność i wysoką śmiertelność.
Chorobowość CHF osiąga już wielkości epidemii wraz ze wzrastającą liczbą starszych osób w populacji, a kardiolodzy mogą odnotowywać na swoim koncie coraz więcej sukcesów w obniżaniu śmiertelności wynikającej z niedokrwiennej choroby serca, najczęściej występującego schorzenia prowadzącego do CHF. W Stanach Zjednoczonych CHF zdiagnozowano w przybliżeniu u 4,6 milionów ludzi; częstość takich diagnoz zbliża się do 10 na 1000 u ludzi powyżej 65 roku życia. Hospitalizacja przy CHF jest zwykle wynikiem nieodpowiedniego leczenia ambulatoryjnego. Zwolnienia ze szpitala w przypadku CHF wzrosły z 377,000 (w 1979) do 970,000 (w 2002) powodując, że CHF jest najczęstszym rozpoznaniem wypisowym u ludzi w wieku 65 lat i starszym. Śmiertelność w ciągu pięciu lat wynikająca z CHF jest bliska 50%. Zatem, podczas gdy leczenie chorób serca znacznie się rozwinęło i w ciągu ostatnich kilku lat przewidywana długość życia uległa wydłużeniu, nadal poszukuje się nowych i lepszych sposób leczenia, zwłaszcza CHF.
Ostra zastostoinowa niewydolność serca (również znana jako ostra niewyrównana niewydolność serca) obejmuje nagły spadek funkcji serca wynikający z różnych przyczyn. Na przykład u pacjenta, który już cierpi na zastostoinową niewydolność serca, nowy zawał mięśnia sercowego, zaprzestanie przyjmowania leków i dietetyczne nieprawidłowości mogą prowadzić do akumulacji płynu prowadzącego do obrzęku i metabolicznej niewydolności nawet w stanie spoczynku. Środek terapeutyczny poprawiający funkcjonowanie serca w czasie ostrego przypadku może pomagać w łagodzeniu tej metabolicznej niewydolności i przyśpieszaniu usuwaniu obrzęku, może ułatwiać powrót do bardziej stabilnego wyrównanego stanu zastostoinowej niewydolności serca. Pacjenci cierpiący na bardzo zaawansowaną zastostoinową niewydolnością serca, zwłaszcza ci w końcowym stadium choroby, również mogliby korzystać z dobrodziejstwa środka terapeutycznego, który wzmacnia funkcjonowanie serca, na przykład, w celu stabilizacji w czasie oczekiwania na przeszczep serca. Inne potencjalne korzyści mogą zyskiwać pacjenci wychodzący z zabiegu wszczepienia przepływów omijających (bypass), na przykład dzięki podaniu środka, który pomaga zatrzymanemu lub spowolnionemu sercu w powrocie do normalnego funkcjonowania. Pacjenci cierpiący na rozkurczową dysfunkcję (niedostateczne rozluźnienie mięśnia sercowego) mogą być leczeni przez podawanie środka terapeutycznego, który modyfikuje rozkurcz.
Środki inotropowe są lekami, które zwiększają zdolność serca do skurczu. Jako grupa, wszystkie obecnie stosowane środki inotropowe zawiodły w spełnianiu złotego standardu w leczeniu niewydolności serca, to jest wydłużenia życia pacjenta. Ponadto, obecnie stosowane środki są słabo selektywne pod względem tkanki sercowej, częściowo prowadząc do rozpoznawanych niekorzystnych skutków ubocznych, które ograniczają ich zastosowanie. Pomimo tego, dożylne środki inotropowe nadal są szeroko stosowane w ostrej niewydolności serca (np. aby umożliwić ponowne wprowadzenie leków doustnych lub aby przeprowadzić pacjenta do chwili przeszczepu serca) podczas gdy w przewlekłej niewydolności serca, stosowana doustna digoksyna jest podawana jako środek inotro4
PL 216 049 B1 powy, w celu łagodzenia objawów u pacjenta, polepszania jakości życia i zmniejszenia liczby przyjęć do szpitala.
Obecnie stosowane terapie inotropowe polepszają kurczliwość przez zwiększanie przepuszczania wapnia na drodze cyklazy adenylowej, lub przez opóźnianie rozkładu cAMP w wyniku hamowania fosfodiesterazy (PDE), co może być szkodliwe dla pacjentów z niewydolnością serca.
Biorąc pod uwagę ograniczenia w stosowaniu istniejących środków, konieczne jest opracowanie nowych rozwiązań, które będą poprawiać funkcjonowanie serca przy zastostoinowej niewydolności serca. Ostatnim krótkotrwale działającym dożylnym środkiem, który został dopuszczony do stosowania jest milrinon, jednakże miało to miejsce ponad piętnaście lat temu. Jedyny dostępny lek doustny, digoksyna, została opracowana ponad 200 lat temu. Nadal istnieje ogromna potrzeba opracowania środków, które opierałyby się na nowych mechanizmach działania i skutecznej łagodziły objawy, były bardziej bezpieczne i obniżały śmiertelność pacjentów, zarówno w działaniu krótkotrwałym jak i długotrwałym. Nowe środki będące przedmiotem wynalazku, wykazujące lepszy wskaźnik terapeutyczny w porównaniu do obecnie stosowanych środków spełnią wyżej wymienione wymagania kliniczne.
Selektywność środków działających na sarkomer serca (na przykład, przez działanie na beta miozynę sercową) została określona jako ważna właściwość przy uzyskiwaniu lepszego wskaźnika terapeutycznego. Wynalazek dostarcza takie środki (zwłaszcza środki aktywujące sarkomer) i sposoby ich identyfikacji i zastosowania.
Innym rozwiązaniem może być bezpośrednia aktywacja miozyny serca bez zmiany przepływu wapnia, co prowadziłoby do poprawienia kurczliwości serca. Wynalazek dostarcza takie środki (zwłaszcza środki aktywujące miozynę) i sposoby ich identyfikacji i zastosowania.
Istotą wynalazku jest związek chemiczny, który jest metylo
4-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonylamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem
lub etylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem
metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem
PL 216 049 B1
metylo 4-[(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem
Iub metylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylanem
Iub
N-{3-[(1S)-1-(4-acetylopiperazynylo)etylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamidem
lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tych związków.
Przedmiotem wynalazku jest również kompozycja farmaceutyczna obejmująca dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę, nośnik lub adiuwant i związek określony powyżej, lub farmaceutycznie dopuszczalną sól tego związku.
Opisano tu także opakowanie z kompozycją farmaceutyczną, obejmujące w kompozycji farmaceutycznej dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę, nośnik lub adiuwant i przynajmniej jeden
PL 216 049 B1 opisany związek chemiczny i instrukcje stosowania kompozycji do leczenia pacjenta cierpiącego na chorobę serca.
Przedmiotem wynalazku jest również zastosowanie związku określonego powyżej lub farmaceutycznie dopuszczalnej soli tego związku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek lub jego sól do leczenia niewydolności serca u ssaka, który tego potrzebuje.
Korzystnie niewydolność serca jest zastoinową niewydolnością serca albo skurczową niewydolnością serca.
Opisany tu sposób leczenia choroby serca u ssaka obejmuje podawanie ssakowi, który tego potrzebuje, terapeutycznie skutecznej ilości przynajmniej jednego opisanego związku chemicznego lub kompozycji farmaceutycznej obejmującej dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę, nośnik lub adiuwant i przynajmniej jeden związek według wynalazku.
Opisano także sposób modyfikowana sarkomeru serca u ssaka, obejmujący podawanie ssakowi, który tego potrzebuje, terapeutycznie skutecznej ilości przynajmniej jednego związku według wynalazku lub kompozycji farmaceutycznej obejmującej dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę, nośnik lub adiuwant i przynajmniej jeden związek według wynalazku.
Opis przedstawia także sposób wzmacniania działania miozyny serca u ssaka obejmujący podawanie ssakowi, który tego potrzebuje terapeutycznie skutecznej ilości przynajmniej jednego związku według wynalazku lub kompozycji farmaceutycznej obejmującej dopuszczalną farmaceutycznie zaróbkę, nośnik lub adiuwant i przynajmniej jeden związek według wynalazku.
W opisie przedstawiono również ogólny sposób wytwarzania związku o wzorze I.
_ Λ _ -) _ Ο _ Λ _ ΐΖ _ 4 Ο gdzie R1, R2, R3, R4, R5 i R13 są takie jak zdefiniowano poniżej, obejmujący etapy, w których przekształca się związek o wzorze 400 *4
R-I3
400 w związek o wzorze 401, w którym
R3 oznacza wodór, halogen, grupę cyjanową, ewentualnie podstawiony alkil, ewentualnie podstawiony heterocykloalkil, lub ewentualnie podstawiony heteroaryl;
R4 oznacza wodór, halogen, grupę cyjanową, ewentualnie podstawiony alkil, ewentualnie podstawiony heterocykloalkil lub ewentualnie podstawiony heteroaryl;
i R5 oznacza wodór, halogen, grupę cyjanową, ewentualnie podstawiony alkil, ewentualnie podstawiony heterocykloalkil lub ewentualnie podstawiony heteroaryl;
R13 oznacza wodór, halogen, grupę cyjanową, hydroksylową, ewentualnie podstawiony alkil, ewentualnie podstawiony heterocykloalkil lub ewentualnie podstawiony heteroaryl;
PL 216 049 B1
hydrolizuje się związek o wzorze 401 do związku o wzorze 402
gdzie R jest wybrany z grupy obejmującej O i NH;
kontaktuje się związek o wzorze 402 ze związkiem o wzorze R1-H, gdzie R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę aminową lub ewentualnie podstawiony heterocykloalkil aby utworzyć związek o wzorze 403;
i kontaktuje się związek o wzorze 403 ze związkiem o wzorze R2-NCO, gdzie R2 oznacza ewentualnie podstawiony aryl, ewentualnie podstawiony aryloalkil; ewentualnie podstawiony cykloalkil, ewentualnie podstawiony heteroaryl, ewentualnie podstawiony heteroaryloalkil lub ewentualnie podstawiony heterocykloalkil;
otrzymując związek o wzorze I.
Inne aspekty i zastosowania będą zrozumiałe dla biegłych w dziedzinie na podstawie poniższego szczegółowego opisu.
Zgodnie z obecnym opisem wynalazku, poniższe określenia i zwroty mają znaczenie jak przedstawiono poniżej, z wyjątkiem sytuacji, w których kontekst w jakim zostały użyte stanowi inaczej. Poniższe skróty i określenia mają następujące znaczenie w całym zgłoszeniu:
Ac = acetyl
Boc = t-butyloksy karbonyl
c- = cyklo-
CBZ = karbobenzoksy = benzyloksykarbonyl
PL 216 049 B1
DCM
DIBAL-H = dichlorometan = chlorek metylenu = CH2CI2 = wodorek diizobutyloglinu
DIEA lub DIPEA = N,N-diizopropyloetyloamina
DMF
DMSO eq
Et
EtOAc
EtOH g
GC h, hr, hrs
Me min ml mmol
Ph
PyBroP stTFA
THF
TLC = N,N-dimetyloformamid = sulfotlenek dimetylu = równoważnik = etyl = octan etylu = etanol = gram = chromatografia gazowa = godzina lub godziny = metyl = minuta = mililitr = milimol = fenyl = heksafluorofosforan bromo-tris-pirolidynofosfoniowy = drugorzędowy = trzeciorzędowy = kwas trifluorooctowy = tetrahydrofuran = chromatografia cienkowarstwowa
Objętość = ml/g substancji w oparciu o odczynnik ograniczający jeśli nie wskazano inaczej.
Jak stosowano w niniejszym opisie, poniższe określenia i zwroty mają znaczenie jak przedstawiono poniżej, z wyjątkiem sytuacji, w których kontekst w jakim zostały użyte stanowi inaczej.
Jak stosowano w niniejszym opisie, gdy we wzorze chemicznym dowolna zmienna występuje więcej niż jeden raz, jej definicja za każdym razem jest niezależna od jego definicji przy każdym innym wystąpieniu.
Poprzeczna kreska (”-”), która nie jest umieszczona pomiędzy dwoma literami lub symbolami, stosowana jest w celu wskazania miejsca przyłączenia podstawnika. Na przykład grupa -CONH2 jest połączona z pozostałą częścią cząsteczki poprzez atom węgla.
Termin ewentualny lub ewentualnie oznacza, że opisane dalej rozwiązanie lub warunek może wystąpić lub nie i że opis obejmuje przypadki, w których rozwiązanie lub warunki występują i przypadki, w których one nie występują. Na przykład ewentualnie podstawiony alkil obejmuje zarówno alkil jak i podstawiony alkil jak zdefiniowano poniżej. Będzie zrozumiałe dla specjalistów z dziedziny, w odniesieniu do dowolnej grupy zawierającej jeden lub więcej podstawników, że takie grupy nie będą wprowadzać żadnych podstawień lub układów podstawień, które są sterycznie niepożądane, których nie można uzyskać w wyniku syntezy lub powodujących niestabilność związku.
Alkil obejmuje prosty i rozgałęziony łańcuch o wskazanej liczbie atomów węgla. Ogólnie grupy alkilowe obejmują grupy o C20 lub krótsze, takie jak C13 lub krótsze, na przykład, C6 lub krótsze. Na przykład C1-C6 alkil obejmuje zarówno prosty jak i rozgałęziony łańcuch alkilowy o 1 do 6 atomach węgla. Przykłady grup alkilowych obejmują grupę metylową, etylową, propylową, izopropylową, n-butylową, sec-butylową, tert-butylową, pentylową, 2-pentylową, izopentylową, neopentylową, heksylową, 2-heksylową, 3-heksylową, 3-metylopentylową i tym podobne. Alkilen jest innym podzbiorem grup alkilowych, określającym podobne podstawniki jak alkil, lecz mające dwa miejsca przyłączenia. Na przykład, alkilen C0 wskazuje na wiązanie kowalencyjne, a alkilen C1 oznacza grupę metylenową. Gdy wymieniono nazwę reszty alkilowej o określonej liczbie atomów węgla, wszystkie geometryczne izomery mające tę samą liczbę atomów węgla są również objęte zakresem wynalazku, zatem na przykład, butyl obejmuje, n-butyl, sec-butyl, izobutyl i t-butyl; propyl obejmuje n-propyl i izopropyl. Niższy alkil odnosi się do grup alkilowych mających jeden do czterech atomów węgla.
Cykloalkil wskazuje nasyconą węglowodorową grupę pierścieniową lub sprzężony układ dwupierścieniowy o wyszczególnionej liczbie atomów węgla w pierścieniu, zwykle od 3 do 12 atomów węgla w pierścieniu, częściej 3 do 10, lub 3 do 7 atomów. Przykłady grup cykloalkilowych obejmują cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl i cykloheksyl, jak i cykliczne układy mostkowe oraz nasycone gruPL 216 049 B1 py pierścieniowe o strukturze klatki, takie jak norbornan. Przykłady sprzężonych układów dwupierścieniowych obejmują oktahydro-1H-inden, oktahydropentalen, 1,2,3,3a,4,5-heksahydropentalen, 1,2,4,5,6,7,7a-heptahydro-2H-inden, 4,5,6,7-tetrahydro-2H-inden i tym podobne.
Aryl obejmuje: 5- i 6-członowe karbocykliczne pierścienie aromatyczne takie jak na przykład: benzen; układy dwupierścieniowe, w których przynajmniej jeden pierścień jest pierścieniem karbocyklicznym i aromatycznym, na przykład, naftalen, indan i tetralin oraz układy trójpierścieniowe, w których przynajmniej jeden pierścień jest pierścieniem karbocyklicznym i aromatycznym, na przykład, fluoren.
Przykładowo, aryl obejmuje 5- i 6 członowe karbocykliczne pierścienie aromatyczne sprzężone z 5- do 7-członowym pierścieniem heterocykloalkilowym, zawierającym jeden lub więcej heteroatomów wybranych z grupy obejmującej N, O i S. W przypadku wspomnianych sprzężonych, układów dwupierścieniowych, w których tylko jeden z pierścieni jest karbocyklicznym pierścieniem aromatycznym, miejsce przyłączenia może znajdować się w obrębie karbocyklicznego pierścienia aromatycznego lub pierścienia heterocykloalkilowego. Dwuwartościowe rodniki utworzone z podstawionych pochodnych benzenowych i mających wolne wartościowości w obrębie atomów pierścienia zostały nazwane podstawionymi rodnikami fenylenowymi. Dwuwartościowe rodniki będące pochodnymi jednowartościowych rodników policyklicznych węglowodorów, których nazwy kończą się na -yl w wyniku usunięcia jednego atomu wodoru przyłączonego do atomu węgla o wolnej wartościowości są obecnie nazywane przez dodanie końcówki -iden do nazwy odpowiedniego jednowartościowego rodnika, np. grupa naftylowa o dwóch miejscach wiązania jest nazwana naftyliden. Termin aryl, jednakże, nie obejmuje ani nie pokrywa się w żaden sposób z określeniem heteroaryl, oddzielnie zdefiniowanym poniżej. Zatem jeśli jeden lub więcej karbocyklicznych pierścieni aromatycznych jest sprzężonych z nieheterocykloalkilowym pierścieniem aromatycznym, otrzymany układ pierścieniowy jest nazwany heteroarylem, a nie arylem, jak zdefiniowano w niniejszym opisie.
W określeniu aryloalkil określenia aryl i alkil mają znaczenie takie jak zdefiniowano w niniejszym opisie i miejsce przyłączenia znajduje się w obrębie grupy alkilowej. Termin ten obejmuje, między innymi, benzyl, fenyloetyl, fenylowinyl, fenyloalil i tym podobne.
Termin halogeno obejmuje podstawnik fluorowy, chlorowy, bromowy i jodowy i termin halogen obejmuje fluor, chlor, brom i jod.
Heteroaryl obejmuje: aromatyczne, monocykliczne pierścienie zawierające jeden lub więcej, na przykład 1 do 4, lub w pewnych rozwiązaniach 1 do 3, heteroatomów wybranych z grupy obejmującej N, O i S, przy czym pozostałe atomy w pierścieniu są atomami węgla, a dwupierścieniowe układy heterocykloalkilowe zawierające jeden lub więcej, na przykład 1 do 4, lub w pewnych rozwiązaniach 1 do 3 heteroatomów wybranych z grupy obejmującej N, O i S, przy czym pozostałe atomy są atomami węgla i gdzie przynajmniej jeden heteroatom jest obecny w pierścieniu aromatycznym.
Przykładowo, heteroaryl obejmuje 5- do 7-członowy heterocykloalkilowy, pierścień aromatyczny sprzężony z 5- do 7-członowym pierścieniem cykloalkilowym. W przypadku takich sprzężonych układów, heteroarylowe bicykliczne układy pierścieniowe, w których tylko jeden z pierścieni zawiera jeden lub więcej heteroatomów, miejsce wiązania może być w obrębie heteropierścienia aromatycznego lub pierścienia cykloalkilowego. Gdy całkowita liczba atomów S i O w grupie heteroaryIowej przekracza 1, to te heteroatomy nie sąsiadują ze sobą. W pewnych rozwiązaniach całkowita liczba atomów S i O w grupie heteroarylowej nie jest wyższa niż 2. W pewnych rozwiązaniach całkowita liczba atomów S i O w aromatycznym pierścieniu heterocyklicznym nie jest wyższa niż 1. Objęte definicją heteroarylu są również pochodne tlenkowe, na przykład N-tlenki azotu zawierające grupy arylowe, takie jak pirydyno-1-tlenek, lub pochodne grup zawierających siarkę >S(O) i >S(O)2. Przykłady grup heteroarylowych obejmują, między innymi, układy (przy numeracji od miejsca wiązania, któremu przypisano numer pierwszy 1), takie jak 2-pirydyl, 3-pirydyl, 4-pirydyl, 2,3-pirazynyl, 3,4-pirazynyl, 2,4-pirymidynyl, 3,5-pirymidynyl, 2,3-pirazolinyl, 2,4-imidazolinyl, izoksazolinyl, oksazolinyl, tiazolinyl, tiadiazolinyl, tetrazolil, tienyl, benzotiofenyl, furanyl, benzofuranyl, benzoimidazolinyl, indolinyl, pirydyzynyl, triazolil, chinolinyl, pirazolil i 5,6,7,8-tetrahydroizochinolinę. Dwuwartościowe rodniki będące pochodnymi jednowartościowych rodników heteroarylowych, których nazwy kończą się na -yl w wyniku usunięcia jednego atomu wodoru przy atomie o wolnej wartościowości nazywane są przez dodanie końcówki -iden do nazwy odpowiadającego im rodnika jednowartościowego, np. grupa pirydylowa o dwóch miejscach wiązania ma nazwę pirydyliden. Heteroaryl nie obejmuje ani nie nakłada się na definicję arylu określonego powyżej.
PL 216 049 B1
W terminie heteroaryloalkil lub heteroaralkil, heteroaryl i alkil zostały zdefiniowane powyżej, a miejsce przyłączenia jest w obrębie grupy alkilowej. Termin ten obejmuje, między innymi, pirydylometyl, tiofenylometyl i (pirolilo)-1-etyl.
Termin heterocykloalkil oznacza podstawnik cykloalkilowy, w którym jeden do czterech atomów węgla zostało zastąpionych heteroatomem takim jak atom tlenu, azotu lub siarki. Odpowiednie grupy heterocykloalkilowe obejmują na przykład (przy numerowaniu od miejsca wiązania określonego jako pierwsze 1), 2-pirolinyl, 2,4-imidazolidynyl, 2,3-pirazolidynyl, 2-piperydyl, 3-piperydyl, 4-piperydyl i 2,5-piperynyl. Zgodnie z wynalazkiem grupy morfolinylowe są również brane pod uwagę, w tym 2-morfolinyl i 3-morfolinyl (przy numerowaniu od miejsca wiązania określonego jako pierwsze 1).
Jak stosowano tutaj, termin modyfikacja dotyczy zmiany w aktywności miozyny lub sarkomeru w wyniku bezpośredniej lub pośredniej odpowiedzi na obecność przynajmniej jednej cząsteczki chemicznej tutaj opisanej, względem aktywności miozyny lub sarkomeru bez tego związku. Zmiana może obejmować wzrost lub obniżenie aktywności i może być wynikiem bezpośredniego oddziaływania cząsteczki związku z miozyną lub sarkomerem, lub może być spowodowana oddziaływaniem związku z jednym lub więcej innymi czynnikami, które z kolei wpływają na aktywność miozyny lub sarkomeru.
Termin podstawiony, jak stosowano tutaj, oznacza, że dowolny jeden lub więcej atomów wodoru w określonym podstawniku lub grupie jest zastąpiony grupą wybraną z wymienionych podstawników, pod warunkiem, że normalna wartościowość atomu przy którym występuje podstawienie nie jest zmieniona. Na przykład podstawnik okso (czyli =O) oznacza, że 2 atomy wodoru zostały zastąpione atomem tlenu. Połączenia podstawników i/lub ich odmiany są dozwolone tylko jeśli takie połączenia prowadzą do stabilnych związków lub związków pośrednich stosowanych w syntezie. Stabilny związek lub stabilna struktura oznacza związek, który jest dostatecznie stabilny, aby było możliwe jego wyodrębnienie z mieszaniny reakcyjnej, a następnie utworzenie preparatu, w którym stanowi on składnik aktywny mający przynajmniej zastosowanie praktyczne. Jeśli nie wyszczególniono inaczej, nazwy podstawników odnoszą się do połączenia ze strukturą główną. Na przykład, należy rozumieć, że gdy jako możliwy podstawnik wymieniony jest (cykloalkilo)alkil, miejsce związania podstawnika do struktury głównej stanowi część alkilowa podstawnika.
Terminy podstawiony alkil, cykloalkil, aryl, heterocykloalkil i heteroaryl, jeśli nie zdefiniowano wyraźnie inaczej, dotyczą odpowiednio grupy alkilowej, cykloalkilowej, arylowej, heterocykloalkilowej i heteroarylowej, w której jeden lub więcej (mianowicie do 5, na przykład, do 3) atomy wodoru zostały zastąpione podstawnikiem niezależnie wybranym z grupy obejmującej:
-Ra, -ORb, -O(C1-C2 alkil)O- (np. metylenodioksy-), -SRb, guanidynę, guanidynę, w której jeden bc lub więcej atomów wodoru guanidyny zastąpiono niższą grupą alkilową, -NRbRc, halogen, grupę cyjanową, nitrową, -CORb, -CO2Rb, -CONRbRc, -OCORb, -OCO2Ra, -OCONRbRc, -NRcCORb, -NRcCO2Ra, -NRcCONRbRc, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc i -NRcSO2Ra, gdzie Ra jest wybrany z grupy obejmującej ewentualnie podstawiony C1-C6 alkil, ewentualnie podstawiony aryl i ewentualnie podstawiony heteroaryl;
Rb jest wybrany z grupy obejmującej wodór, ewentualnie podstawiony C1-C6 alkil, ewentualnie podstawiony aryl i ewentualnie podstawiony hetero aryl i Rc jest wybrany z grupy obejmującej wodór i ewentualnie podstawiony C1-C4 alkil; lub bc
Rb i Rc rozpatrywane razem z atomem azotu z którym są związane, tworzą ewentualnie podstawiony 5- do 7-członowy heterocykloalkil zawierający azot, który w pierścieniu heterocykloalkilowym ewentualnie obejmuje 1 lub 2 dodatkowe heteroatomy wybrane z grupy obejmującej O, N i S;
gdzie każda ewentualnie podstawiona grupa jest niepodstawiona lub niezależnie podstawiona jednym lub więcej, mianowicie jednym, dwoma lub trzema podstawnikami niezależnie wybranymi z grupy obejmującej C1-C4 alkil, aryl, heteroaryl, arylo-C1-C4 alkil-, heteroarylo-C1-C4 alkil-, C1-C4 halogenoalkil-, -OC1-C4 alkil, -OC1-C4 alkilofenyl, -C1-C4 alkilo-OH, -OC1-C4 halogenoalkil, halogen, -OH, -NH2, -C1-C4 alkilo-NH2, -N(C1-C4 alkilo)(C1-C4 alkil), -NH(C1-C4 alkil), -N(C1-C4 alkilo)(C1-C4 alkilofenylo), -NH(C1-C4 alkilofenylo), grupę cyjanową, nitrową, oksową (jako podstawnik grupy cykloalkilowej, heterocykloalkilowej, lub heteroarylowej), -CO2H, -C(O)OC1-C4 alkil, -CON(C1-C4 alkil)(C1-C4 alkil), -CONH(C1-C4 alkil), -CONH2, -NHC(O)(C1-C4 alkil), -NHC(O)fenyIo), -N(C1-C4 alkilo)C(O)(C1-C4 alkil), -N(C1-C4 alkil)C(O)(fenylo), -C(O)C1-C4 alkil, -C(O)C1-C4 fenyl, -C(O)C1-C4 halogenoalkil, -OC(O)C1-C4 alkil, -SO2(C1-C4 alkil), -SO2(fenyl), -SO2(C1-C4 halogenoalkil), -SO2NH2, -SO2NH(C1-C4 alkil), -SO2NH(fenylo), -NHSO2(C1-C4 alkil), -NHSO2(fenyl) i -NHSO2(C1-C4 halogenoalkil).
PL 216 049 B1
Terminy podstawiony cykloalkil, aryl, heterocykloalkil i heteroaryl również obejmują podstawniki okso (=O) i tlenkowe (-O-), na przykład N-tlenki azotu zawierające grupy arylowe, takie jak pirydyno-1-tlenek, lub >S(O) i >S(O)2 pochodne grup zawierających siarkę.
Termin podstawiona grupa aminowa odnosi się do grupy -NHRd lub -NRdRd gdzie każdy podstawnik Rd jest niezależnie wybrany z grupy obejmującej: ewentualnie podstawiony alkil, ewentualnie podstawiony cykloalkil, ewentualnie podstawiony acyl, ewentualnie podstawiony aryl, ewentualnie podstawiony heteroaryl, ewentualnie podstawiony heterocykloalkil, alkoksykarbonyl, sulfinyl i sulfonyl, gdzie podstawiony alkil, cykloalkil, aryl, heterocykloalkil i heteroaryl odpowiednio oznaczają alkil, cykloalkil, aryl, heterocykloalkil i heteroaryl, w którym jeden lub więcej (mianowicie do 5, na przykład, do 3) atomy wodoru zostały zastąpione podstawnikiem niezależnie wybranym z grupy obejmującej:
-Ra, -ORb, -O(C1-C2 alkilo)O- (np., metylenodioksy-), -SRb1 guanidynę, guanidynę, w której jeden bc lub więcej atomów wodoru guanidyny zastąpiono niższą grupą alkilową, -NRbRc, halogen, grupę cyjanową, nitrową, -CORb, -CO2Rb -NRcCONRcRc, -CO2Rb
-CONRbRc, bc
-OCORb, -OCO2Ra
-OCONRbRc, bc
-NRcCORb,
NRcCO2Ra
2R , -CONRbRc, -NRcCORb, -SORa, -SO2Ra, -SO2NRbRc i -NRcSO2Ra, gdzie Ra jest wybrany z grupy obejmującej ewentualnie podstawiony C1-C6 alkil, ewentualnie podstawiony aryl i ewentualnie podstawiony heteroaryl;
Rb jest wybrany z grupy obejmującej H, ewentualnie podstawiony C1-C6 alkil, ewentualnie podstawiony aryl i ewentualnie podstawiony heteroaryl oraz
Rc jest wybrany z grupy obejmującej wodór i ewentualnie podstawiony C1-C4 alkil; lub bc
Rb i Rc rozpatrywane razem z atomem azotu z którym są związane, tworzą ewentualnie podstawiony 5- do 7-członowy heterocykloalkil zawierający azot, który ewentualnie obejmuje 1 lub 2 dodatkowe heteroatomy wybrane z grupy obejmującej O, N i S w pierścieniu heterocykloalkilowym;
gdzie każda ewentualnie podstawiona grupa jest niepodstawiona lub niezależnie podstawiona jednym lub więcej, mianowicie jednym, dwoma lub trzema, podstawnikami niezależnie wybranymi z grupy obejmującej C1-C4 alkil, aryl, heteroaryl, arylo-, C1-C4 alkil-, heteroarylo-C1-C4 alkil-, C1-C4 halogenoalkil-, -OC1-C4 alkil, -OC1-C4 alkilofenyl, -C1-C4 alkil-OH, -OC1-C4 halogenoalkil, halogen, -OH, -NH2, -C1-C4 alkilo-NH2, -N(C1-C4 alkilo)(C1-C4 alkil), -NH(C1-C4 alkil), -N(C1-C4 alkilo)(C1-C4 alkilofenylo), -NH(C1-C4 alkilofenylo), grupę cyjanową, nitrową, okso (jako podstawnik grupy cykloalkilowej, heterocykloalkilowej, lub heteroarylowej), -CO2H, -C(O)OC1-C4 alkil, -CON(C1-C4 alkilo)(C1-C4 alkil), -CONH(C1-C4 alkil), -CONH2, -NHC(O)(C1-C4 alkil), -NHC(O)(fenylo), -N(C1-C4 alkilo)C(O)(C1-C4 alkil), -N(C1-C4 alkilo)-C(O)(fenylo), -C(O)C1-C4 alkil, -C(O)C1-C4 fenyl, -C(O)C1-C4 halogenoalkil, -OC(O)C1-C4 alkil, -SO2-(C1-C4 alkil), -SO2(fenylo), -SO2(C1-C4 halogenoalkil), -SO2NH2, -SO2NH(C1-C4 alkil), -SO2NH(fenylo), -NHSO2(C1-C4 alkil), -NHSO2(fenylo) i -NHSO2(C1-C4 halogenoalkil).
Związki według wynalazku obejmują między innymi, izomery optyczne związków o wzorze I, racematy i inne ich mieszaniny. Ponadto, związki o wzorze I obejmują formy Z- i E-(lub inaczej formy cis- i trans-) związków z podwójnymi wiązaniami węgiel-węgiel. W takich przypadkach, poszczególne enancjomery lub diastereoizomery, to jest formy optycznie czynne, mogą być otrzymywane w wyniku syntezy asymetrycznej lub przez rozdzielanie racematów. Rozdzielanie racematów można przeprowadzić na przykład, tradycyjnymi sposobami, takimi jak krystalizacja w obecności czynnika rozdzielającego, lub chromatografia, na przykład na kolumnie chiralnej do wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC). Gdy związki według wynalazku występują w różnych formach tautomerycznych, cząsteczki związków według wynalazku obejmują wszystkie odmiany tautomeryczne związku.
Związki według wynalazku również obejmują formy krystaliczne i amorficzne związków, obejmujące na przykład, formy polimorficzne, pseudopolimorficzne, solwaty, hydraty, niesolwatowane formy polimorficzne (w tym bezwodniki) formy konformacyjne polimorficzne i amorficzne związków oraz ich mieszaniny. Fromy krystaliczne, polimorficzne i nowe formy mogą być tutaj stosowane wymiennie i mają obejmować wszystkie krystaliczne i amorficzne formy związku, obejmujące, na przykład, formy polimorficzne, pseudopolimorficzne, solwaty, hydraty, niesolwatowane formy polimorficzne (w tym bezwodniki) formy konformacyjne polimorficzne i amorficzne, jak i ich mieszaniny, jeśli nie ma bezpośredniego odniesienia do szczególnej formy krystalicznej lub amorficznej.
Substancje chemiczne według wynalazku obejmują między innymi związki według wynalazku i wszystkie ich formy dopuszczalne farmaceutycznie. Formy dopuszczalne farmaceutycznie związków wymienionych tutaj obejmują sole dopuszczalne farmaceutycznie, chelaty, niekowalencyjne kompleksy, proleki i ich mieszaniny. W pewnych rozwiązaniach związki według wynalazku występują w postaci farmaceutycznie dopuszczalnych soli. Zatem, terminy cząsteczka chemiczna, cząsteczki chemicz12
PL 216 049 B1 ne, substancje chemiczne oraz związki chemiczne obejmują również sole dopuszczalne farmaceutycznie, chelaty, niekowalencyjne kompleksy, proleki i mieszaniny.
Sole dopuszczalne farmaceutycznie obejmują między innymi sole z nieorganicznymi kwasami, takie jak chlorowodorek, fosforan, difosforan, borowodorek, siarczan, sulfinian, azotan i tym podobne sole; jak i sole z kwasami organicznymi, takie jak jabłczan, maleinian, fumaran, winian, burszytnian, cytrynian, octan, mleczan, metanosulfonian, p-toluenosulfonian, 2-hydroksyetylosulfonanian, benzoesan, salicylan, stearynian i alkanonian, taki jak octan, HOOC-(CH2)n-COOH gdzie n oznacza liczbę całkowitą 0-4 i tym podobne sole. Podobnie, farmaceutycznie dopuszczalne kationy obejmują między innymi jony sodu, potasu, wapnia, glinu, litu i jony amoniowe.
Ponadto, jeśli związek według wynalazku został otrzymany w postaci kwasowej soli addycyjnej, może być otrzymywana wolna zasada poprzez alkalizowanie roztworu soli kwasowej. Przeciwnie, jeśli produkt jest wolną zasadą, można otrzymać sól addycyjną, zwłaszcza farmaceutycznie dopuszczalną sól addycyjną, w wyniku rozpuszczenia wolnej zasady w odpowiednim rozpuszczalniku organicznym i traktowanie roztworu kwasem, zgodnie z tradycyjnymi procedurami wytwarzania kwasowych soli addycyjnych ze związków zasadowych. Dla specjalistów z dziedziny będzie zrozumiałe, że różne metodyki syntezy mogą być stosowane do wytwarzania nietoksycznych farmaceutycznie dopuszczalnych soli addycyjnych.
Jak wskazano powyżej, zakresem związków chemicznych według wynalazku objęte są również proleki, na przykład pochodne estrowe lub amidowe związków według wynalazku. Termin prolek obejmuje dowolny związek, który po podaniu pacjentowi ulega przekształceniu do związku według wynalazku np. w wyniku procesów metabolicznych, którym ulega prolek w organizmie. Przykłady proleków obejmują między innymi, octany, mrówczany i benzoesany, i tym podobne pochodne grup funkcyjnych (takich jak alkohol lub grupy aminowe) w związkach według wynalazku.
Termin solwat odnosi się do cząsteczki chemicznej utworzonej w wyniku oddziaływania rozpuszczalnika i związku. Odpowiednimi solwatami są farmaceutycznie dopuszczalne solwaty, takie jak wodziany, w tym półwodziany, monowodziany, diwodziany, triwodziany, itp.
Termin chelat odnosi się do cząsteczki chemicznej utworzonej w wyniku kompleksowania związku z jonem metalu w dwóch (lub więcej) miejscach.
Termin kompleks niekowalencyjny odnosi się do cząsteczki chemicznej utworzonej w wyniku oddziaływania związku i drugiej cząsteczki, w którym pomiędzy związkiem a cząsteczką nie zachodzi wiązanie kowalencyjne. Na przykład, tworzenie kompleksów może zachodzić na zasadzie oddziaływań van der Waalsa, wiązań wodorowych i oddziaływań elektrostatycznych (zwanych również wiązaniami jonowymi).
Termin substancja czynna lub środek aktywny jest stosowany aby wskazać, że cząsteczka chemiczna wykazuje aktywność biologiczną. W pewnych rozwiązaniach substancja czynna oznacza związek mający zastosowanie w farmacji.
Termin ilość skuteczna terapeutycznie substancji chemicznej według wynalazku oznacza ilość skuteczną, która po podaniu pacjentowi, człowiekowi lub zwierzęciu, prowadzi do leczenia choroby, np. ilość skuteczna terapeutycznie może stanowić ilość wystarczającą, aby leczyć chorobę lub zaburzenie odpowiadające na aktywację miozyny. Ilość skuteczna terapeutycznie może być wyznaczona na przykład w wyniku określania stężenia cząsteczki chemicznej we krwi lub teoretycznie, obliczając dostępność biologiczną.
Termin znacząco lub “znaczący” oznacza dowolną wykrywalną zmianę, która jest znacząca statystycznie według standardowych parametrów testu, przy określaniu istotności statystycznej na przykład według testu T Studenta, gdzie p<0,05.
Określenie pacjent obejmuje zwierzęta, np. ssaki, które są lub będą poddane leczeniu, obserwacji lub doświadczeniom. Sposoby według wynalazku mogą być stosowane zarówno w leczeniu ludzi, jak i w zastosowaniach weterynaryjnych. W pewnych rozwiązaniach pacjentem jest ssak; w określonych rozwiązaniach pacjentem jest człowiek, a w innych rozwiązaniach pacjent jest wybrany z grupy obejmującej psy i koty.
Leczenie lub traktowanie oznacza każdy dowolny sposób leczenia pacjenta cierpiącego na chorobę, obejmujący:
a) zapobieganie chorobie, to jest powodowanie, że objawy kliniczne choroby się nie rozwiną;
b) hamowanie rozwoju choroby;
PL 216 049 B1
c) spowolnienie lub zatrzymanie rozwoju objawów klinicznych i/lub
d) łagodzenie choroby, to jest powodowanie ustąpienia objawów klinicznych.
Związki według wynalazku mogą być nazywane i numerowane (np. z wykorzystaniem oprogramowania NamExpert™ udostępnianego przez Cheminnovation lub automatycznego oprogramowania do tworzenia nazw chemicznych ChemDrawUtIra wersja 9.0 z Cambridge Soft Corporation) jak opisano poniżej. Przykładowo związek:
to jest, związek według wynalazku, w którym n oznacza jeden, R1 oznacza podstawiony piperazynyl, R2 oznacza 6-metylopirydyn-3-yl, R3 oznacza wodór, R4 oznacza wodór, R5 oznacza wodór, R6 oznacza wodór, R7 oznacza wodór i R13 oznacza fluor, ma nazwę N-{3-[(1S)-1-(4-acetylopiperazynylo)etylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid.
Jeśli nie wyszczególniono inaczej, opisane tutaj reakcje prowadzone są pod ciśnieniem atmosferycznym, ogólnie w zakresie temperatur od -10°C do 110°C. Ponadto, z wyjątkiem przypadków wymienionych w przykładach lub określonych w inny sposób, czas i warunki reakcji są podawane w przybliżeniu, np. reakcje prowadzone są pod ciśnieniem bliskim ciśnieniu atmosferycznemu w zakresie temperatur od około -11°C do około 110°C przez okres od około 1 do około 24 godzin; w przypadku reakcji pozostawionych na noc oznacza to okres około 16 godzin.
Terminy rozpuszczalnik, rozpuszczalnik organiczny lub rozpuszczalnik bierny oznaczają rozpuszczalnik bierny w warunkach reakcji opisanych tutaj w odniesieniu do wynalazku, na przykład oznaczają rozpuszczalniki takie jak: benzen, toluen, acetonitryl, tetrahydrofuran (THF), dimetyloformamid (DMF), chloroform, chlorek metylenu (lub dichlorometan), eter dietylowy, metanol, pirydyna i tym podobne. Jeśli nie wyszczególniono inaczej, rozpuszczalniki stosowane w reakcji według wynalazku są biernymi rozpuszczalnikami organicznymi.
Wyodrębnienie i oczyszczanie związków chemicznych i związków pośrednich według wynalazku może być przeprowadzone, jeśli jest to pożądane, dowolnym odpowiednim sposobem rozdziału lub oczyszczania takim jak, na przykład, odsączanie, ekstrakcja, krystalizacja, chromatografia kolumnowa, chromatografia cienkowarstwowa lub chromatografia grubowarstwowa lub różne kombinacje tych procedur. Szczegółowe przedstawienia odpowiednich procedur rozdziału i wyodrębnienia związków według wynalazku przedstawiono w zamieszczonych poniżej przykładach. Jednakże mogą być również stosowane inne odpowiadające im procedury rozdziału lub wyodrębniania.
Jeśli jest to pożądane, izomery (R)- i (S) mogą być rozdzielone sposobami znanymi specjalistom w dziedzinie, na przykład przez tworzenie diastereoizomerycznych soli lub kompleksów, które mogą być rozdzielane, na przykład stosując krystalizację; tworzenie diastereoizomerycznych pochodnych, które mogą być rozdzielone technikami krystalizacji, chromatografii gazowo-cieczowej lub cieczowej; reakcje selektywne jednego enancjomeru ze specyficznie oddziałującym odczynnikiem, na przykład reakcje utleniania lub redukcji enzymatycznej, po których stosuje się rozdzielenie zmodyfikowanych i niezmodyfikowanych enancjomerów; lub techniką chromatografii gazowo-cieczowej lub cieczowej w środowisku chiralnym, na przykład na podłożu chiralnym, na przykład krzemionka ze związanym Iigandem chiralnym lub w obecności chiralnego rozpuszczalnika. W innym rozwiązaniu, specyficzny enancjomer może być wytworzony w syntezie asymetrycznej, z wykorzystaniem optycznie czynnych odczynników, substratów, katalizatorów lub rozpuszczalników, lub w wyniku przekształcenia jednego enancjomeru w inny przez przekształcenie asymetryczne.
Wiele ewentualnie podstawionych związków wyjściowych 101, 103, 201, 301 i innych odczynników jest dostępnych na rynku np. z Aldrich Chemical Company (Milwaukee, Wis., USA) lub mogą być z łatwości wytworzone przez specjalistów w dziedzinie z wykorzystaniem ogólnie stosowanej metodyki syntez chemicznych.
PL 216 049 B1
Wytwarzanie związków według wynalazku
Rozpatrując schemat reakcji 1, kolbę wyposażoną w mieszadło magnetyczne, chłodnicę zwrotną i osłonę termometryczną, w atmosferze azotu, wypełniono fosgenem lub równoważnikiem fosgenu (typowo trifosgenem) i niepolarnym, aprotycznym rozpuszczalnikiem takim jak dichlorometan lub tetrahydrofuran. Roztwór związku o wzorze 101 w niepolarnym, aprotycznym rozpuszczalniku takim jak dichlorometan lub tetrahydrofuran dodawano po kropli przez około 10-60 minut i roztwór pozostawiono mieszając od 1 do 15 godzin. Związek o wzorze 103 dodano porcjami i roztwór mieszano przez około 10-60 minut. Zasadę, taką jak DIEA, dodawano po kropli przez około jedną godzinę i roztwór pozostawiono mieszając przez około 1-15 godzin. Produkt, związek o wzorze 105, wyodrębniono i oczyszczono.
Wytwarzanie związków według wynalazku
Schemat reakcji 2 ilustruje inny sposób syntezy związków według wynalazku. Izocyjanian o wzorze 201 może być wytworzony i wyodrębniony niezależnie bądź z odpowiadającej mu aminy (to jest, R2-NH2) stosując fosgen lub równoważnik fosgenu bądź z odpowiadającego mu kwasu karboksylowego (to jest, R2COOH) stosując rearanżację Curtiusa lub Hoffmana. Mieszaninę związków o wzorze 101 i 201 w optycznie czynnym rozpuszczalniku, takim jak dichlorometan lub tetrahydrofuran w temperaturze od -40°C do 110°C, pozostawiono mieszając przez 1 do 15 godzin. Produkt, związek według wynalazku, wyodrębniono i oczyszczono.
PL 216 049 B1
Wytwarzanie związków o wzorze Il
Rozpatrując schemat reakcji 3, alkohol benzylowy o wzorze 301 przekształcono w grupę opuszczającą (Lv taką jak halogen, mesylan lub triflan), 302 wykorzystując ogólnie stosowaną metodykę syntez chemicznych (na przykład patrz publikacja: Comprehensive Organic Transformation LaRock, Richard C., 1989, VCH publishers, Inc. str. 353-365, którą włączono do opisu jako odnośnik).
Mieszaninę związku o wzorze 302 i aminy o wzorze HNR8R9 w aprotycznym rozpuszczalniku takim jak dichlorometan lub DMF w temperaturze od -40°C do 110°C, pozostawiono mieszając przez 1 do 15 godzin. Produkt, związek o wzorze II, wyodrębniono i oczyszczono.
W innym rozwiązaniu, alkohol benzylowy o wzorze 301 utleniono do aldehydu o wzorze 303 wykorzystując ogólnie stosowaną metodykę syntez chemicznych (na przykład patrz publikacja: Comprehensive Organic Transformation LaRock, Richard C., 1989, VCH publishers, Inc. str. 604-615, którą włączono do opisu jako odnośnik).
Mieszaninę związku o wzorze 303 i aminę o wzorze HNR8R9 w rozpuszczalniku takim jak dichlorometan z czynnikiem redukującym takim jak triacetoksyborowodorek z lub bez kwasu takiego jak
PL 216 049 B1 kwas octowy w temperaturze od -40°C do 110°C, pozostawiono mieszając przez 1 do 36 godzin. Produkt, związek o wzorze II, wyodrębniono i oczyszczono.
W innym rozwiązaniu, kwas karboksylowy o wzorze 304 sprzęga się z aminą stosując ogólnie stosowaną metodykę syntez chemicznych (na przykład patrz publikacja: Comprehensive Organic Transformation LaRock, Richard C., 1989, VCH publishers, Inc. str. 972-976, którą włączono do opisu jako odnośnik) aby utworzyć amid 305. Amid 305 zredukowano do związku o wzorze II, stosując ogólnie stosowaną metodykę syntez chemicznych, taką jak traktowanie związku 305 dimetylosulfidu boranu w THF w temperaturze od -40°C do orosienia przez 1 do 96 godzin.
Związek o wzorze Il gdzie Q oznacza bromo, chloro, nitro, amino, lub zabezpieczoną grupą aminową może być przypisany związkowi o wzorze 101, stosując ogólnie stosowaną metodykę syntez chemicznych. Na przykład, gdy Q oznacza grupę nitrową, może być zredukowany do odpowiadającej mu aminy stosując wodór z katalizatorem Pd/C.
Rozpatrując schemat reakcji 4, etap 1, do roztworu związku o wzorze 400 w NMP dodano nadmiar (to jest około przynajmniej 2 równoważniki) cyjanku sodu i nadmiar (to jest około 1 równoważnik, na przykład, 1,35 równoważnika) bromku niklu (II). Kolejną ilość NMP dodano i roztwór łagodnie
PL 216 049 B1 ogrzano do temperatury około 200°C i mieszano przez około 4 dni. Produkt, związek o wzorze 401, wyodrębniono i ewentualnie oczyszczono.
W temperaturze około 0°C do roztworu związku o wzorze 401 w biernym rozpuszczalniku takim jak dichlorometan, dodano po kropli przez około 3,5 godziny, nadmiar (to jest dwa lub więcej równoważników) czynnika redukującego, takiego jak DIBAL-H (to jest 1 M roztwór DIBAL-H) utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji <0°C. Produkt, mieszaninę związków o wzorze 402A i 402B, wyodrębniono i ewentualnie oczyszczono.
Rozpatrując schemat reakcji 4, etap 3, do roztworu mieszaniny związków o wzorze 402A i 402B w biernym rozpuszczalniku takim jak THF dodano porcjami nadmiar (to jest około 1,05 równoważnika) związku o wzorze R1 -H, gdzie R1 oznacza ewentualnie podstawioną grupę aminową lub ewentualnie podstawiony heterocykloalkil i nadmiar (to jest około 1,5 równoważnika) czynnika redukującego takiego jak triacetoksyborowodorek przez około 40 min, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji poniżej około 45°C. Produkt, związek o wzorze 403, wyodrębniono i ewentualnie oczyszczono.
Rozpatrując schemat reakcji 4, Etap 4, do roztworu związku o wzorze 403 w rozpuszczalniku takim jak aceton dodano po kropli około równoważnika związku o wzorze R2-NCO. Reakcję mieszano przez około jedną godzinę i ewentualnie, ogrzano do temperatury orosienia. Produkt, związek o wzorze 405, wyodrębniono i ewentualnie oczyszczono.
Mieszaninę reakcyjną ewentualnie umieszczano na kolumnie chromatograficznej i rozdzielono enancjomery (R)- i (S)-.
Związek o wzorze I ewentualnie kontaktuje się z dopuszczalnym farmaceutycznie kwasem, aby utworzyć odpowiadającą mu kwasową sól addycyjną.
Dopuszczalną farmaceutycznie kwasową sól addycyjną o wzorze I kontaktuje się ewentualnie z zasadą, aby utworzyć odpowiadającą jej wolną zasadę o wzorze I.
Pewne rozwiązania wynalazku obejmują lub wykorzystują związki o wzorze I o następujących kombinacjach i permutacjach podstawników. Zostały one przedstawione w celu poparcia innych kombinacji i permutacji podstawników, których ze względu na przejrzystość, aby nie zwiększać nadmiernie objętości opisu, nie wyszczególniono tutaj, lecz powinny być uznane jako objęte zakresem obecnego ujawnienia.
W opisie przedstawiono także związki wybrane z grupy obejmującej:
metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-[3-({[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-({[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(3-{[(etylosulfonylo)metyloamino]metylo}-5-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid; metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid; metylo 4-({4-fluoro-3-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
PL 216 049 B1
N-[5-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-(5-{[4-(etylosulfonylo)pirydylopiperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[5-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{3-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[5-fluoro-3-({4-[(metyloetylo)sulfonylo]piperazynylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(2-metoksyacetylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(propylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-({4-[(1E)-1-(dimetyloamino)-2-cyjano-2-azawinylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(5-metylo-1,1-diokso(1,2,5-tiadiazolidyn-2-ylo))metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(5-metylo-1,1-dioksopirydylo(1,2,5-tiadiazolidyn-2-ylo))metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(5-metylo-1,1-diokso(1,2,5-tiadiazolidyn-2-ylo))metylo]fenylo}[(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
metylo 4-[(2-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan:
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-4-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-4-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-({2-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-4-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]pirydylopiperazynylo}metylo)-4-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
metylo 4-({3-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)fenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(3-metylo-2-oksoimidazolidynylo)metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(3-metylo-2-oksoimidazolidynypirydylol)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(4-metylo-3-oksopiperazynylo)metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-fluoro-5-(piperydylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-fluoro-5-(piperydylometylo)fenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-({(3S)-4-[(dimetyloamino)sulfonylo]-3-(metoksymetylo)piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-(3-{[(3S)-4-(etylosulfonylo)-3-(metoksymetylo)piperazynylo]pirydylometylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid;
metylo (2S)-4-({5-fluoro-3-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
PL 216 049 B1
N-[3-({(3S)-4-[(dimetyloamino)sulfonylo]-3-(metoksymetylo)piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo]-[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(3-{[(3S)-4-(etylosulfonylo)-3-(metoksypirydylometylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksamid;
metylo (2S)-4-[(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ylometylo)fenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-{3-[(1,1-diokso(1,4-tiazaperhydroin-4-ylo))metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[(1,1-diokso(1,4-tiazaperhydroin-4-ylo))metylo]-5-fluorofenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(4-metylopiperazynylo)metylo]pirydylofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-fluoro-3-[(4-metylopiperazynylo)metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-{3-[((3S)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}pirolidynylo)metylo]-5-fluorofenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-({(3S)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]pirolidynylo}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[(3S)-1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)pirolidyn-3-ylo]metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-{3-[((3S)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}pirolidynylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-({(3S)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]pirolidynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{(3S)-1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)pirydylometylo]pirolidyn-3-ylo}metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperydylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)(pirymidyn-5-yloamino)karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}pirydylometylo)-5-fluorofenylo](pirymidyn-5-yloamino)karboksyamid;
metylo 1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperidine-4-karboksylan;
metylo 1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperydyn-4-karboksylan; metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karboksyamid;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karboksyamid;
({5-[((3R)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metylo]-3-fluorofenylo}amino)-N-(3-pirydylo)karboksyamid;
{[5-({(3R)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-3-fluorofenylo]amino}-N-(3-pirydylo)karboksyamid;
N-[(3R)-1-({5-fluoro-3-[(N-(3-pirydylo)karbamoilo)amino]fenylo}metylo)(3-piperydylo)]metoksy-N-metylokarboksyamid;
({5-[((3R)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metylo]-3-fluorofenylo}amino)-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
{[5-({(3R)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-3-fluorofenylo]amino}-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
N-{(3R)-1-[(5-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}metoksy-N-metylokarboksyamid;
metylo 4-({3-fluoro-5-[(izoksazol-3-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)(izoksazol-3-yloamino)karboksyamid;
PL 216 049 B1
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo](izoksazol-3-yloamino)karboksyamid;
N-[5-fluoro-3-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N[3-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[(4-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-metyloacetamid;
metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(2-metylopirymidyn-5-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metyl]piperazynokarboksylan;
N-[5-fluoro-3-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[3-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-{3-[(4-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metylo]-5-fluorofenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid;
N-[1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)(4-piperydylo)]metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-[1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)(4-piperydylo)]-N-metyloacetamid;
N-[5-fluoro-3-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-[3-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-5-fluorofenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-{3-[(4-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-metyloacetamid;
(tert-butoksy)-N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-metylokarboksyamid;
(tert-butoksy)-N-[1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)(4-piperydylo)]-N-metylokarboksyamid;
(tert-butoksy)-N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-metylokarboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(metyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(metyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid;
metylo 4-({4-fluoro-3-[(1,3-oksazol-2-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(2-metylopirymidyn-5-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(1-metylopirazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
kwas 1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperydyn-4-karboksylowy;
kwas 1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperydyn-4-karboksylowy; N-[2-fluoro-5-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
PL 216 049 B1 metylo 4-({4-fluoro-3-[(pirymidyn-5-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}etoksy-N-metylokarboksyamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N-metylo(metyloetoksy)karboksyamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N-metyloacetamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N-metylopropanoamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-2-metylo-N-metylopropanoamid;
metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(5-metylo(1,3,4-oksadiazol-2-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(4-metylo(1,3-oksazol-2-ylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(4-chloro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metyloetylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{5-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{2-fluoro-5-[(4-propanoilopiperazynylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-fluoro-5-{[4-(2-metylopropanoilo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[5-({(3R)-3-[(tert-butoksy)-N-metylokarbonyloamino]pirolidynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3R)-3-(metyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3R)-3-(metoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3R)-3-(etoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[5-({(3R)-3-[N-metylo(metyloetoksy)karbonyloamino]pirolidynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}-N-metyloacetamid;
N-(5-{[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperydylo]metylo}-3-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksamid;
N-(3-fluoro-5-{[4-(N-metylokarbamoilo)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbony!oamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}(tert-butoksy)-N-metylokarboksyamid;
N-{2-fluoro-5-[(5-propanoilo-2,5-diazabicyklo[2.2.1]hept-2-ylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(4-metylo-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
tert-butylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
metylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
etylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
PL 216 049 B1 metyloetylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{f(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
N-(5-{[(3S)-4-acetylo-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3S)-3-(metoksymetylo)-4-propanoilopiperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3S)-3-(metoksymetylo)-4-(2-metylopropanoilo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3S)-3-(metoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3S)-3-(etoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[5-({(3S)-3-[N-metylo(metyloetoksy)karbonyloamino]pirolidynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}-N-metyloacetamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}-N-metylopropanoamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}-2-metylo-N-metylopropanoamid;
N-(2-fluoro-5-{[4-(metoksy-N-metylokarbonyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[4-(etoksy-N-metylokarbonyloamino)piperydylo]metylo}-2-fluorofenylo)[-(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[2-fluoro-5-({4-[N-metylo(metyloetoksy)karbonyloamino]piperydylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydy!o)}-N-metyloacetamid;
N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metyl](4-piperydylo)}-N-metylopropanoamid;
N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-2-metylo-N-metylopropanoamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydy!o))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}-N-metylopropanoamid;
N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}-2-metylo-N-metylopropanoamid;
N-{5-[((3S,5R)-3,5-dimetylmorfolin-4-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[((1S,4S)-5-oksa-2-azabicyklo-[2.2.1]hept-2-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}etoksy-N-metylokarboksyamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N-metylo(metyloetoksy)karboksyamid;
tert-butylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N-metyloacetamid;
N-[2-fluoro-5-(piperazynylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo (2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
N-(5-{[(3R)-4-acetylo-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
PL 216 049 B1 etylo (2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
metyloetylo (2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan;
N-(5-{[(3R)-3-(metoksymetylo)-4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[(3S)-3-(metyloamino)piperydylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N-metylopropanoamid;
N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-2-metylo-N-metylopropanoamid;
tert-butylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan;
N-(3-{[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperydylo]metylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid; metylo 4-({4-fluoro-3-[(pirydazyn-4-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
N-(5-{[(3R)-4-(etylosulfonylo)-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-fluoro-3-{[4-(N-metylokarbamoilo)piperydylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid; metylo 4-({4-fluoro-3-[(izoksazol-3-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan;
N-{3-[((1S)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[((1S)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
N-{3-[(4-acetylopiperazynylo)etylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid; N-[5-(1,4-diazaperhydroepinylometylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid; metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan;
etylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan;
metyloetylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan;
N-{5-[(4-acetylo(1,4-diazaperhydroepinylo))metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[(1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dec-8-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{2-fluoro-5-[(4-metoksypiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[5-(azaperhydroepinylometylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{2-fluoro-5-[(4-piperydylopiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[4-(cykloheksylometoksy)piperydylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-fluoro-5-{[2-(hydroksymetylo)morfolin-4-ylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-fluoro-5-{[2-(metoksymetylo)morfolin-4-ylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(2,4-difluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{2-fluoro-5-[(4-propoksypiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{2-fluoro-5-[(4-metylopiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
PL 216 049 B1
N-[5-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo](1,4-diazaperhydroepinylo)}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
propylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan;
N-{3-[((1R)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-fluoro-5-{[4-(metylosulfonylo)(1,4-diazaperhydroepinylo)]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[((1R)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyclo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(5-{[4-(etylosulfonylo)(1,4-diazaperhydroepinylo)]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[((1R)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[2-fluoro-5-({4-[(metyloetylo)sulfonylo](1,4-diazaperhydroepinylo)}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[((1S)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[((1S)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[((1R)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metoksy(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(2,4,5-trifluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynnokarboksylan;
N-[2-fluoro-5-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid; metylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan;
(tert-butoksy)-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-metylokarboksyamid;
N-(2-fluoro-5-{[4-(metyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)[(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid metylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metyloetylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{3-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]-N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)karboksyamid;
N-[2-fluoro-5-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-[5-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-2-fluorofenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
tert-butylo (3S)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan;
metylo (3S)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan;
metylo (3R)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan;
PL 216 049 B1 metylo 4-[(2-metylo-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(2-chloro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
2-{4-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynylo}-N,N-dimetyloacetamid;
etylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-5-fluorofenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid; metylo 4-(3-{3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}propylo)piperazynokarboksylan; N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid; etylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan;
metyloetylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan;
N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-5-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-(3-{4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}propylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-5-fluorofenylo}[(6-metoksy(3-pirydylo))amino]karboksyamid; metylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metoksy(3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan;
N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-5-fluorofenylo)[(6-metoksy(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-(5-{[((3S)pirolidyn-3-ylo)metyloamino]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
tert-butylo (3R)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan;
N-(5-{[((3R)pirolidyn-3-ylo)metyloamino]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-etylo-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}metoksykarboksyamid;
etoksy-N-etylo-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}karboksyamid;
N-[5-({4-[etylo(etylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-etylo-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}acetamid;
metylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metyloetylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{5-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karboksyamid; metylo 4-[(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-(trifluorometylo)fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(2-metylo-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(2,6-difluoro-3-{[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(4-chloro-2-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
PL 216 049 B1 tert-butylo 4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonylamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metyloetylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]-N{5-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}karboksyamid; metylo 4-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}piperydynkarboksylan;
N-(5-{[(1-acetylo(4-piperydylo))metyloamino]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[5-({[1-(etylosulfonylo)(4-piperydylo)]metyloamino}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[({2-[(tert-butoksy)-N-metylokarbonyloamino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[({2-[(tert-butoksy)-N-metylokarbonyloamino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
metylo 4-[(2-chloro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-(trifluorometylo)fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
tert-butylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-[2-fluoro-5-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-[2-fluoro-5-({metylo-[2-(metyloamino)etylo]amino}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[2-fluoro-5-({metylo-[2-(metyloamino)etylo]amino}metylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}etylo)metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}etylo)-N-metyloacetamid;
metylo 4-[(2-cyjano-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(3,4-difluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{2-fluoro-5-[(metylo-{2-[metylo(metylosulfonylo)amino]etylo}amino)metylo]fenylo}[(4-fluorofenyl)amino]karboksyamid;
N-{5-[({2-[(etylosulfonylo)metyloamino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid;
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}etylo)metoksy-N-metylokarboksyamid;
N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}etylo)-N-metyloacetamid;
PL 216 049 B1 tert-butylo 4-[(1S)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
N-[3-((1S)-1-piperazynyloetylo)fenylo][(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(1S)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(1S)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
N-(3-{(1S)-1-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]etylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[(1S)-1-(4-acetylopiperazynylo)etylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{2-fluoro-5-[(metylo-{2-[metylo(metylosulfonylo)amino]etylo}amino)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{5-[({2-[(etylosulfonylo)metyloamino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(1R)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(1R)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-(5-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}-1,2,3,4-tetrahydronaftylo)piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(1S)-1-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazyno karboksylan;
etylo 4-[(1S)-1-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan;
N-{3-[(1S)-1-(4-acetylopiperazynylo)etylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo (3R)-4-metylo-3-[(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo (3S)-4-metylo-3-[(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(2,4-difluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
(tert-butoksy)-N-[2-(5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}(2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))etylo]karboksyamid;
N-[2-(2-aminoetylo)(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo)][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid; metylo 4-[(2,5-difluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metoksy-N-[2-(5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}(2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))etylo]karboksyamid;
metylo {metoksy-N-[2-(5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}(2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))etylo]karbonyloamino}mrówczan;
(tert-butoksy)-N-metylo-N-[2-(5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}(2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))etylo]karboksyamid;
[(6-metylo(3-pirydylo))amino]-N-{2-[2-(metyloamino)etylo](5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo)}karboksyamid;
metylo 4-[2-(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan; etylo 4-[2-(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan; N-(3-{2-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]etylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid; N-[2-(5-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}-2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo)etylo]acetamid;
N-[2-(2-{[(dimetyloamino)sulfonylo]amino}etylo)(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo)][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-{2-[(dimetyloamino)karbonyloamino]etylo}(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan;
PL 216 049 B1 metylo 4-(4-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}indanylo)piperazynokarboksylan; tert-butylo 4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan;
metoksy-N-metylo-N-[2-(5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}(2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))etylo]karboksyamid;
N-(2-{2-[(etylosulfonylo)metyloamino]etylo}(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[2-(2-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}etylo)(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo)][(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
(dimetyloamino)-N-metylo-N-[2-(5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}(2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))etylo]karboksyamid;
N-metylo-N-[2-(5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}(2-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))etylo]acetamid;
[(6-metylo(3-pirydylo))amino]-N-(2-{3-[(fenylometoksy)karbonyloamino]propylo}(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))karboksyamid;
N-{2-[2-(dietyloamino)etylo](5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo)}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[2-(3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]amino}propylo)(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo)][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-{3-[(etylosulfonylo)amino]propylo}(5-1,2,3,4-tetrahydroizochinolilo))[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(2-hydroksy-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-hydroksyfenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(3-{2-[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperazynylo]etylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[3-(2-{4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}etylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
[(6-metylo(3-pirydylo))amino]-N-(3-{2-[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]etylo}fenylo)karboksyamid; etylo 4-[(2-hydroksy-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-(2-hydroksy-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[2-(4-acetylopiperazynylo)etylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[2-fluoro-3-(3-piperazynylpropylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid; etylo 4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(3-{[(1-hydroksy-6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(1-hydroksy-6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
fenylometylo (2S,6R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2,6-dimetylopiperazynokarboksylan;
N-{3-[((3S,5R)-4-acetylo-3,5-dimetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
tert-butylo 4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
({3-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}amino)-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
{[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo]amino}-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
PL 216 049 B1
[(3-{[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
[(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
[(2-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
metylo (2S,6R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2,6-dimetylopiperazynokarboksylan;
N-{3-[((3S,5R)-3,5-dimetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
tert-butylo 4-(4-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}indanylo)piperazynokarboksylan; metylo 4-[(3-{[N-(6-cyjano(3-pirydylo))karbamoilo]amino}-2-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(3-{[N-(6-acetylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}-2-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-{[2-fluoro-3-({N-[6-(trifluorometylo)-(3-pirydylo)]karbamoilo}amino)fenylo]metylo}piperazyno karboksylan;
metylo 4-({2-fluoro-3-[(N-(4-pirydylo)karbamoilo)amino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan; [(3-{[4-(azetydynylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
[(6-metylo(3-pirydylo))amino]-N-(1-piperazynylindan-4-ylo)karboksyamid;
N-[1-(4-acetylopiperazynylo)indan-4-ylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksamid;
N-{1-[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperazynylo]indan-4-ylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
[(6-metylo(3-pirydylo))amino]-N-{1-[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]indan-4-ylo}karboksyamid; tert-butylo 4-[(4-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}indan-2-ylo)metylo]piperazynokarboksylan;
metylo 4-[(4-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}indan-2-ylo)metylo]piperazynokarboksylan;
etylo 4-[(4-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}indan-2-ylo)metylo]piperazynokarboksylan;
N-{2-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]indan-4-ylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-{[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperazynylo]metylo}indan-4-ylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}indan-4-ylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-[2-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)indan-4-ylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
tert-butylo (5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]-3,5-dimetylopiperazynokarboksylan;
metylo (5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]-3,5-dimetylopiperazynokarboksylan;
({3-[((6S,2R)-4-acetylo-2,6-dimetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}amino)-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
{(5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]-3,5-dimetylopiperazynylo}-N,N-dimetylokarboksamid;
[(3-{[(6S,2R)-4-(etylosulfonylo)-2,6-dimetylopiperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
{[3-({(6S,2R)-4-[(dimetyloamino)sulfonylo]-2,6-dimetylopiperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo]amino}-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid;
N-[2-fluoro-3-(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazyn-7-ylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
kwas 2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}benzoesowy;
PL 216 049 B1
N-{2-fluoro-3-[(3-metylo(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazyn-7-ylo))metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-{3-[(3-etylo(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazyn-7-ylo))metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid;
N-(2-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)(4-pirydyloamino)karboksyamid; N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)(4-pirydyloamino)karboksyamid; etylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan;
1-(3-((4-acetylopiperazyn-1-ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik; metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(6-fluoropirydyn-3-yl)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; (3R,5S)-tert-butylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-3,5-dimetylopiperazyno-1-karboksylan;
1-(3-(((2R,6S)-4-acetylo-2,6-dimetylopiperazyn-1-ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik;
(3R,5S)-4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-N,N,3,5-tetrametylopiperazyno-1-karboksyamid;
(2S,6R)-benzylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-2,6-dimetylopiperazyno-1-karboksylan;
1-(3-(((3S,5R)-3,5-dimetylopiperazyn-1-ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik; tert-butylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; (3R,5S)metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-3,5-dimetylopiperazyno-1-karboksylan;
metylo 4-(2-fluoro-3-(3-pirydyn-3-yloureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan;
(2S,6R)metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-2,6-dimetylopiperazyno-1-karboksylan;
4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-N,N-dimetylopiperazyno-1-karboksyamid;
4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-N,N-dimetylopiperazyno-1-sulfonamid;
1-(3-((4-(etylosulfonylo)piperazyn-1-ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik;
1-(2-fluoro-3-((4-(metylosulfonylo)piperazyn-1-ylo)metylo)fenylo)-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik;
1-(3-((4-(azetydyn-1-ylosulfonylo)piperazyn-1-ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik;
1-(3-(((2R,6S)-4-(etylosulfonylo)-2,6-dimetylpiperazyn-1-ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik;
(3R,5S)-4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-N,N,3,5-tetrametylopiperazyno-1-sulfonamid;
metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(izoksazol-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; etylo 4-(4-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(2,6-difluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzyl)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(3,4-difluoro-5-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan;
(S)-etylo 4-(1-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)fenylo)etylo)piperazyno-1-karboksylan; (S)-metylo 4-(1-(2-fluoro-3-(3-(6-pirydyn-3-ylo)ureido)fenyl)etylo)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(2,5-difluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(3-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)fenylo)propylo)piperazyno-1-karboksylan; etylo 4-(3-(2-fluoro-3-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)fenylo)propylo)piperazyno-1-karboksylan; metylo 4-(3-(3-fluoro-5-(3-(pirydyn-3-ylo)ureido)fenylo)propylo)piperazyno-1-karboksylan; {3-fluoro-5-[3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido]benzylo}metyloamid kwasu etanosulfonowego; {3-fluoro-5-[3-(pirydyn-3-ylo)ureido]benzylo}metyloamid kwasu etanosulfonowego; 1-[3-(4-acetylopiperazyn-1-ylometylo)-5-fluorofenylo]-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik; 1-[3-fluoro-5-(4-metanosulfonylopiperazyn-1-ylometylo)fenylo]-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik; 1-{3-fluoro-5-[4-(2-metoksyacetylo)piperazyn-1-ylometylo]fenylo}-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik; 1-{3-fluoro-5-[4-(propano-2-sulfonylo)piperazyn-1-ylometylo]fenylo)}-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik;
-{3-fluoro-5-[4-(propano-1-sulfonylo)piperazyn-1-ylometylo]fenylo}-3-(pirydyn-3-ylo)mocznik; 1-[3-(4-etanosulfonylopiperazyn-1-ylometylo)-5-fluorofenylo]-3-(2-metylopirymidyn-5-ylo)mocznik; dimetyloamid kwasu 4-{3-fluoro-5-[3-(2-metylopirymidyn-5-ylo)ureido]benzylo]piperazyno-1-sulfonowego;
PL 216 049 B1 ester metylowy kwasu 4-{3-fluoro-5-[3-(pirymidyn-5-ylo)ureido]benzylo}piperazyno-1-karboksylowego;
(S)-N-(1-(3-fluoro-5-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzy!o)piperydyn-3-ylo)-N-metylo-(N',N'-dimetyloamino)sulfonamid;
(S)-N-(1-(3-fluoro-5-(3-pirydyn-3-ylureido)benzylo)piperydyn-3-ylo)-N-metylo-(N',N'-dimetyloamino)sulfonamid;
(E)-N'-cyjano-4-(3-fluoro-5-(3-pirydyn-3-ylureido)benzylo)-N,N-dimetylopiperazyno-1-karboksyimidamid; lub (S)-1-(3-(1-(4-acetylopiperazyn-1-ylo)etylo)fenylo)-3-(6-metylpirydyn-3-ylo)mocznik.
Opisane tutaj związki chemiczne są selektywne i selektywnie modyfikują funkcje sarkomeru serca oraz mogą być stosowane do wiązania się z miozyną w sercu i/lub zwiększania aktywności miozyny serca, poprzez zwiększanie szybkości, z jaką miozyna hydrolizuje ATP. W tym kontekście, termin modyfikacja oznacza zwiększanie lub zmniejszanie aktywności miozyny, jednocześnie zwiększanie oznacza wzmocnienie aktywności. Stwierdzono również, że podawanie tych związków może ponadto zwiększać siłę skurczu włókna mięśnia sercowego.
Związki chemiczne, kompozycje farmaceutyczne według wynalazku stosowane do leczenia chorób serca i sposoby leczenia chorób serca według wynalazku, obejmujących między innymi: ostrą (lub niewyrównaną) zastostoinową niewydolność serca i chroniczną zastostoinową niewydolność serca; zwłaszcza choroby związane ze skurczową dysfunkcją serca. Dodatkowe zastosowanie terapeutyczne obejmuje podawanie związku lub kompozycji farmaceutycznej w celu stabilizacji funkcjonowania serca u pacjentów oczekujących na przeszczep serca i jako środków pomocniczych przy zatrzymaniu lub spowolnieniu serca w przywracaniu normalnego funkcjonowania serca po założeniu pompy omijającej (bypass).
Miozyna wykorzystuje hydrolizę ATP w sarkomerze do wytwarzania siły mięśnia. Dlatego, zwiększenie hydrolizy ATP może odpowiadać za zwiększenie siły lub szybkości skurczu mięśnia. W obecności aktyny, aktywność miozynowej ATPazy jest stymulowana >100-krotnie. Zatem, hydroliza ATP nie tylko wyznacza aktywność enzymatyczną miozyny, lecz również jej oddziaływanie z włóknem aktynowym. Związki, które modyfikują sarkomer serca mogą być identyfikowane przez monitorowanie zwiększenia lub obniżenia przez miozynę szybkości hydrolizy ATP. W pewnych rozwiązaniach, wykazano 1,4 krotne zwiększenie przy stężeniach poniżej 10 μΜ (mianowicie poniżej 1 μΜ). Testy do oznaczania takiej aktywności mogą być oparte na miozynie pochodzenia ludzkiego, jednakże zwykle stosowana jest miozyna pochodząca z innych organizmów. Również stosowane są układy będące modelami regulatorowej roli wapnia w wiązaniu miozyny z dekorowanym cienkim włóknem.
W innym rozwiązaniu preparat funkcjonalny biochemicznie względem sarkomeru może być stosowany do wyznaczania in vitro aktywności ATPazy, na przykład, jak opisano w zgłoszeniu U.S. Nr 09/539,164, złożonym 29 marca 2000. Biochemiczna funkcja sarkomeru, obejmująca wrażliwość na wapń hydrolizy ATPazy, może zostać odtworzona przez połączenie oczyszczonych poszczególnych składników sarkomeru (zwłaszcza składników regulatorowych i miozyny). Inny preparat funkcjonalny jest stosowany w testach ruchliwości in vitro. Testy takie wykonuje się przez naniesienie badanego związku na szkiełko nakrywkowe ze związaną miozyną i obserwowanie szybkości przesuwania się włókien aktynowych względem powierzchni szklanej pokrytej miozyną (Kron S J. (1991) Methods Enzymol. 196:399-416).
Stopień hydrolizy ATP in vitro koreluje się dobrze z aktywnością zwiększającą aktywność miozyny, która może być określona przez monitorowanie produkcji ADP lub fosforanu, na przykład jak opisano w zgłoszeniu nr 09/314,464, złożonym 18 maja 1999. Produkcja ADP może być również monitorowana przez sprzęganie produkcji ADP z utlenianiem NADH (stosując jako enzymy kinazę pirogronianową i dehydrogenazę mleczanową) i monitorowanie poziomu NADH zarówno na podstawie odczytu absorbancji, jak i fluorescencji (Greengard, P., Nature 178 (część 4534): 632-634 (1956); Mol Pharmacol 1970 Styczeń; 6(1):31-40). Produkcja fosforanu może być monitorowana z wykorzystaniem fosforylazy nukleozydów purynowych do sprzęgania produkcji fosforanu z cięciem analogu puryny, co prowadzi bądź do zmian absorbancji (Proc Natl Acad Sci USA 1992 Jun. 1;89(11):4884-7) bądź fluorescencji (Biochem J 1990 Mar. 1;266(2):611-4). Mimo, że możliwe jest zastosowanie techniki jednego pomiaru, ogólnie będą rozpatrywane wielokrotne pomiary tej samej próbki w różnych czasach, w celu wyznaczenia bezwzględnego poziomu aktywności białka. Pomiary takie mają większą specyficzność, zwłaszcza w obecności związków badanych, które mają podobne właściwości absorbancji lub fluorescencji do związków stosowanych do odczytu enzymatycznego.
PL 216 049 B1
Związki badane mogą być testowane równolegle, stosując wielostudzienkowe szalki i umieszczając związki w studzienkach bądź osobno bądź w mieszaninach. Składniki takiego testu obejmują kompleks białkowy będący przedmiotem testu, enzymy sprzęgające i substraty. Po dodaniu takiej mieszaniny, do każdej studzienki następnie dodaje się ATP i mierzy się absorbancję lub fluorescencję w każdej ze studzienek w szalce przy pomocy czytnika szalek.
W sposobie tym wykorzystuje się szalki o 384 studzienkach i reakcję prowadzi się w objętości 25 μΙ. Do mierzenia szybkości hydrolizy ATP w każdej studzience stosuje się sprzężony układ enzymatyczny kinazy pirogronianowej/dehydrogenazy mleczanowej (Huang T. G. i Hackney D. D. (1994) J. Biol. Chem. 269(23):16493-16501). Specjalista w dziedzinie z pewnością będzie wiedział, że składniki testu dodaje się w buforach i z odczynnikami. Ponieważ sposoby naszkicowane tutaj umożliwiają pomiary kinetyczne, okresy inkubacji zostały tak zoptymalizowane, aby uzyskać odpowiednie sygnały detekcji względem sygnału tła. Analizę przeprowadzono w czasie rzeczywistym uzyskując kinetykę hydrolizy ATP, o zwiększonym stosunku sygnału do tła rejestrowanego w doświadczeniu.
Modyfikacja aktywności ATPazy włókna mięśnia sercowego i/lub siły skurczu może również być mierzona przez uprzepuszczalnienie na przykład włókna sercowego (również określane jako „pozbawione skóry” włókna sercowe) lub włókienek mięśniowych (subkomórkowe fragmenty mięśni) detergentem, jak opisali Haikala H, i wsp. (1995) J Cardiovasc Pharmacol 25(5):794-801. Pozbawione błony komórkowej włókna sercowe zachowują swoją wewnętrzną sarkomerową organizację, lecz nie zachowują wszystkich aspektów komórkowego krążenia wapnia. Model ten zapewnia dwie korzystne właściwości: po pierwsze, błona komórkowa nie stanowi bariery dla przenikania związków, a po drugie, kontroluje się stężenie wapnia. Dlatego, każde zwiększenie aktywności ATPazy Iub siły skurczu jest bezpośrednią miarą wpływu badanego związku na białka sarkomeryczne. Pomiary aktywności ATPazy prowadzi się stosując sposoby jak opisano powyżej. Pomiary napięcia prowadzi się przez zamocowanie jednego końca włókna mięśniowego do nieruchomego elementu, a drugiego końca do przetwornika, który może mierzyć siłę. Po rozciągnięciu włókna w celu uzyskania jego napięcia, przetwornik siłowy będzie zapisywał zwiększone napięcie gdy włókno rozpoczyna skurcz. Pomiar ten nazywany jest napięciem izometrycznym, ponieważ włókno nie ma możliwości skrócenia swojej długości. Aktywacja uprzepuszczalnionego włókna mięśniowego jest uzyskana poprzez umieszczenie go w buforowanym roztworze wapnia, a następnie przez dodanie badanego związku lub związku kontrolnego (nośnika). Gdy opisane badane w ten sposób cząsteczki chemiczne powodują zwiększenie siły przy stężeniach wapnia bliskich aktywności skurczowej mięśnia, lecz bardzo niewielkie zwiększenie siły w buforze rozkurczającym o niskich stężeniach wapnia lub w przypadku braku jonów wapnia (punkt danych z EGTA).
Selektywność sarkomeru sercowego i miozyny sercowej może być wyznaczona przez zastąpienie tych układów w jednym lub więcej z powyżej opisanych testach, składnikami sarkomeru i miozyny nie pochodzącymi z serca, i porównanie tak otrzymanych wyników do wyników otrzymanych przy stosowaniu ich odpowiedników uzyskanych z serca.
Zdolność cząsteczki chemicznej do zwiększenia obserwowanej szybkości hydrolizy przez ATPazę w analizie na odtworzonym sarkomerze lub włókienku mięśniowym może wynikać ze zwiększonej szybkości obrotu metabolicznego miozyny S1 lub, w innym rozwiązaniu, zwiększenia wrażliwości dekorowanego włókna aktynowego na aktywację przez Ca++. Aby rozróżnić pomiędzy tymi dwoma mechanizmami działania, wstępnie mierzy się wpływ cząsteczki chemicznej na aktywność ATPazową S1 z niedekorowanymi włóknami aktynowymi. Jeśli obserwuje się zwiększenie aktywności, wpływ cząsteczki chemicznej na regulatorowy aparat odpowiadający na poziom Ca może być odrzucony. Inny, bardziej czuły test może być zastosowany do identyfikacji cząsteczek chemicznych, których aktywujący wpływ na miozynę S1 jest wzmocniony przez obecność dekorowanej aktyny (w porównaniu do czystego włókna aktynowego). W teście tym oznaczeniu porównuje się aktywności sercowego-S1 i szkieletowego-S1 względem sercowych i szkieletowych włókien aktynowych regulowanych (we wszystkich 4 permutacjach).
Wstępne oszacowanie aktywności in vivo może być przeprowadzone w komórkowych modelach kurczliwości włókna mięśniowego, np. jak opisali.Popping S, i wsp. ((1996) Am. J. Physiol. 271: H357-H364) i Wolska B M, i wsp. ((1996) Am. J. Physiol. 39:H24-H32). Korzyścią z zastosowania modelu włókna mięśniowego jest to, że układy składników, które prowadzą do zmian w kurczliwości mogą być wyodrębnione i mogą być wyznaczone główne miejsce(a) ich działania. Cząsteczki chemiczne wykazujące aktywność komórkową (na przykład, wybrane cząsteczki chemiczne o następującej charakterystyce: >120% zwiększenie cząstkowego skrócenia względem poziomu podstawowego przy 2 μΜ
PL 216 049 B1 stężeniu, lub powodowanie zmian w długości rozkurczowej (<5% zmiany)) mogą następnie być badane w modelach całego organu, takich jak model funkcjonowania serca wykorzystujący wypreparowane serce (Langendorff), stosując echokardiografię in vivo lub inwazyjne pomiary hemodynamiczne oraz w modelach zwierzęcych niewydolności serca, takich jak model zrośnięcia lewej tętnicy wieńcowej u szczurów. Na koniec, aktywność związków wykorzystywana do leczenia chorób serca sprawdzana jest w ślepych badaniach klinicznych na ludziach, z podawaniem placebo.
Opisane tutaj związki chemiczne podaje się w terapeutycznie skutecznych dawkach, np. dawce wystarczającej, aby zapewnić leczenie powyżej opisanych stanów chorobowych. Podczas gdy dla związków chemicznych tutaj opisanych, poziomy dawek u ludzi nie zostały jeszcze zoptymalizowane, ogólnie, dzienna dawka substancji czynnej wynosi od około 0,05 do 100 mg/kg masy ciała; w pewnych rozwiązaniach, około 0,10 do 10,0 mg/kg masy ciała i w korzystnych rozwiązaniach, około 0,15 do 1,0 mg/kg masy ciała. Zatem aby podać lek osobie o masie ciała 70 kg, w korzystnych rozwiązaniach, zakres dawkowania będzie około 3,5 do 7000 mg na dzień; w innych rozwiązaniach, około 7,0 do 700,0 mg na dzień i w pewnych rozwiązaniach, około 10,0 do 100,0 mg na dzień. Ilość podawanego związku chemicznego będzie z pewnością zależna od pacjenta i stanu chorobowego, który ma być leczony, ciężkości choroby, sposobu i trybu podawania oraz osądu lekarza przepisującego lek; na przykład, prawdopodobny zakres dawkowania przy podawaniu doustnym wynosiłby około 70 do 700 mg na dzień, podczas gdy przy dożylnym podawaniu prawdopodobny zakres dawkowania wynosiłby około 70 do 700 mg na dzień, w zależności od farmakokinetyki związku.
Podawanie opisanych tutaj związków chemicznych może być prowadzone każdą z ogólnie dopuszczalnych dróg podawania środków służących podobnym celom. Przykładowo sposoby podawania obejmują między innymi, podawanie doustne, podjęzykowe, podskórne, dożylne, donosowe, miejscowe, przezskórne, śródotrzewnowe, domięśniowe, dopłucne, dopochowe, doodbytnicze lub śródoczne. Tradycyjnie w leczeniu chorób, które zostały opisane stosuje się podawanie doustne i pozajelitowe.
Kompozycje dopuszczalne farmaceutycznie obejmują postacie dawkowania stałe, półstałe, płynne i aerozolowe, takie jak, np. tabletki, kapsułki, formy sproszkowane, płyny, zawiesiny, czopki, aerozole lub tym podobne. Związki chemiczne również mogą być podawane w postaciach o przedłużonym lub kontrolowanym uwalnianiu, obejmujących wstrzyknięcia wolno uwalnianej postaci leku, pompy osmotyczne, pigułki, plastry do podawania przeskórnego (obejmujące elektrotransport) i tym podobne, do przedłużonego i/lub czasowego, pulsowego podawania, przy wcześniej określonej szybkości uwalniania. W pewnych rozwiązaniach, kompozycje przygotowuje się w jednostkowych postaciach dawkowania odpowiednich do podawania jednorazowo ściśle określonej dawki.
Opisane tutaj związki chemiczne mogą być podawane zarówno same jak i bardziej typowo w połączeniu z tradycyjnie stosowanym farmaceutycznym nośnikiem, zaróbką lub podobną substancją (taką jak np. manitol, laktoza, skrobia, stearynian magnezu, sacharynian sodu, talk, celuloza, kroskarmeloza sodu, glukoza, żelatyna, sacharoza, węglan magnezu i tym podobne). Jeśli jest to pożądane, kompozycja farmaceutyczna może również zawierać mniejsze ilości nietoksycznych środków pomocniczych takich jak środki zwilżające, środki emulgujące, środki zwiększające rozpuszczalność, środki buforujące pH i tym podobne (takich jak np. octan sodu, cytrynian sodu, pochodne cyklodekstryny, monolaurynian sorbitanu, octan trietanolaminy, oleinian trietanolaminy i tym podobne). Ogólnie, w zależności od wybranego trybu podawania, kompozycja farmaceutyczna będzie zawierać około 0,005% do 95%, w korzystnych rozwiązaniach, około 0,5% do 50% wagowo związku chemicznego. Faktyczne sposoby wytwarzania takich form dawkowania są znane, lub będą oczywiste dla specjalistów w dziedzinie; na przykład patrz Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pensylwania, USA.
Ponadto, cząsteczki chemiczne opisane tutaj mogą być podawane wspólnie z innymi środkami i kompozycje farmaceutyczne mogą obejmować inne środki medyczne, środki farmaceutyczne, adiuwanty i tym podobne. Odpowiednie dodatkowe środki aktywne obejmują na przykład: środki do terapii, które opóźniają postęp niewydolności serca przez regulację w dół stymulacji neurohormonalnej serca i mają zapobiegać przebudownie serca (np. inhibitory ACE lub β-blokery); środki do terapii, które poprawiają funkcjonowanie serca przez stymulację kurczliwości serca (np. pozytywne środki inotropowe, takie jak środki agonistyczne β-adrenergiczne, dobutamina lub inhibitor fosfodiesterazy, milrinon); i środki do terapii, które obniżają obciążenie wstępne serca (np. środki moczopędne, takie jak furosemid). Inne odpowiednie dodatkowe środki aktywne obejmują środki rozszerzające naczynia, digitoksynę, antykoagulanty, środki antagonistyczne mineralokortykoidu, blokery
PL 216 049 B1 receptora angiotensyny, nitroglicerynę, inne środki inotropowe i wszelkie inne środki do terapii stosowane w leczeniu niewydolności serca.
W pewnych rozwiązaniach, kompozycje będą przygotowane w formie pigułki lub tabletki, a zatem kompozycja będzie zawierać, wraz ze składnikiem czynnym, rozcieńczalnik taki jak laktoza, sacharoza, fosforan diwapnia, lub tym podobne; środek smarujący taki jak stearynian magnezu lub tym podobne i środek wiążący taki jak skrobia, żywica akacjowa, poliwinylopirolidyna, żelatyna, celuloza, pochodne celulozy lub tym podobne. W innej stałej postaci dawkowania, proszek, marume, roztwór lub zawiesina (np. w węglanie propylenu, olejach roślinnych lub triglicerydach) jest zamknięta w żelatynowej kapsułce.
Płynne kompozycje dopuszczalne farmaceutycznie mogą, na przykład, być wytworzone przez rozpuszczenie, zawieszenie, itp. w nośniku (np. wodzie, solance, wodnym roztworze dekstrozy, glicerolu, glikolach, etanolu lub tym podobnych) przynajmniej jednego związku chemicznego i ewentualne farmaceutycznych adiuwantów w celu utworzenia roztworu lub zawiesiny. Środki do iniekcji mogą być wytwarzane w tradycyjnych postaciach, zarówno jako płynne roztwory lub zawiesiny, jako emulsje, lub w postaci stałej odpowiedniej do rozpuszczenia lub wytworzenia zawiesiny w cieczy przed iniekcją. Procent zawartości związku chemicznego obecnego w takiej wyjściowej kompozycji jest w dużej mierze zależny od jego charakterystyki, jak i od aktywności związku chemicznego i potrzeb pacjenta. Jednakże, stosowane są procentowe zawartości składnika czynnego w roztworze w zakresie od 0,01% do 10% i mogą być one wyższe jeśli kompozycja ma postać stałą, która będzie następnie rozcieńczana do powyżej wymienionej zawartości procentowej. W pewnych rozwiązaniach, kompozycja będzie obejmować 0,2-2% substancji czynnej w roztworze.
Kompozycje farmaceutyczne opisanych tutaj związków chemicznych mogą również być podawane do dróg oddechowych w postaci aerozolu lub roztworu z nebulizera, lub jako bardzo rozdrobniony proszek do wdmuchiwania, same lub w połączeniu z obojętnym nośnikiem takim jak laktoza. W takim przypadku, cząsteczki kompozycji farmaceutycznej mają średnice poniżej 50 mikronów, w pewnych rozwiązaniach, poniżej 10 mikronów.
Ogólnie, aby wykorzystać opisane tutaj cząsteczki chemiczne do poszukiwania kandydatów na substancje czynne pod kątem wiązania z miozyną, miozynę wiąże się z podłożem i związek według wynalazku dodaje się do testu. W innym rozwiązaniu, opisane tutaj cząsteczki chemiczne mogą być związane z podłożem, a dodawana jest miozyna. Klasy związków wśród których nowe środki wiążące mogą się znajdować obejmują specyficzne przeciwciała, środki wiążące nie pochodzenia naturalnego, zidentyfikowane przy przeszukiwaniu chemicznych bibliotek, analogów peptydów, itp. Szczególnie ważne są testy przeszukiwania pod kątem związków, które mogą być lekami, które mają niską toksyczność dla komórek ludzkich. Szeroki wachlarz testów, które mogą być zastosowane w tym celu, obejmuje testy ze znakowaniem wiązania białko-białko in vitro, testy elektroforetycznego przesunięcia ruchliwości, testy immunologiczne wiązania białek, funkcjonalne testy (testy fosforylacji, itp.) i tym podobne. Patrz np. patent U.S. Nr 6,495,337, włączony do opisu jako odnośnik.
Poniższe przykłady mają służyć pełnemu opisaniu sposobu zastosowania powyżej opisanego wynalazku. Zrozumiałe jest, że te przykłady w żaden sposób nie ograniczają zakresu wynalazku, lecz są przedstawione w celu jego zilustrowania. Wszystkie publikacje cytowane w opisie są niniejszym włączone jako odnośniki do obecnego opisu w całości.
P r z y k ł a d 1 Etap 1
1Α 1Β
Do roztworu 1,0 równoważnika związku 1A w suchym DMF (0,37 M) dodano Zn(CN)2 (0,92 równoważnika) i Pd(PPh3)4 (0,058 równoważnika). Mieszaninę reakcyjną przedmuchiwano azotem i ogrzewano do temperatury 80°C przez noc. Następnie dodano kolejne 0,023 równoważnika Pd(PPh3)4 i reakcję ogrzewano przez następnych 6 godzin. Mieszaninę reakcyjną następnie schładzano do temperatury pokojowej, rozcieńczano 15 objętościami EtOAc (w oparciu o związek 1A) i warstwę organiczną przemywano 3 razy wodą i jeden raz solanką. Warstwę organiczną wysuszono
PL 216 049 B1 w obecności siarczanu sodu, przesączono i zatężono. W wyniku oczyszczania techniką chromatografii w żelu krzemionkowym stosując 10% Et2O/heksan jako płyn wymywający, uzyskano związek 1B w postaci stałej (90%).
P r z y k ł a d 1 Etap 2
Do roztworu 1,0 równoważnika związku 1B w suchym Et2O (0,06 M) w temperaturze 0°C dodano strzykawką po kropli roztwór wodorek diizobutyloglinu litu (1,1 równoważnik, 1,0 M w heksanach). Otrzymany roztwór utrzymywano w temperaturze 0°C przez noc. Mieszaninę reakcyjną dodano do mieszaniny lodu i lodowego kwasu octowego. Następnie mieszaninę reakcyjną rozcieńczano octanem etylu i warstwę wodną ekstrahowano octanem etylu dwa kolejne razy. Połączone warstwy wodne przemywano dwukrotnie nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu i jeden raz solanką. Warstwy organiczne następnie wysuszono w obecności siarczanu sodu, przesączono i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania w żelu krzemionkowym stosując 10% EtOAc/heksany jako płyn wymywający, otrzymano żółte ciało stałe (100%) jako mieszaninę związków 1C:1B w stosunku 80:20.
P r z y k ł a d 1 Etap 3
Do schłodzonej (0°C) zawiesiny mieszaniny związków 1C:1B w stosunku 80:20 (1,0 równoważnik) i boc-piperazyny (około 2 równoważniki) w mieszaninie HOAc i DCM (4,8 M boc-piperazyny w 1:1,4 obj./obj. HOAc/DCM) dodawano przez około 5 minut triacetoksyborowodorek sodu w postaci stałej. Reakcję pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez dwie godziny. Mieszaninę reakcyjną gaszono nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu i rozcieńczano octanem etylu. Warstwy rozdzielano i warstwę wodną przemywano trzy razy octanem etylu. Warstwy organiczne połączono i przemywano solanką, wysuszono w obecności siarczanu sodu i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania techniką chromatografii w żelu krzemionkowym stosując 50% octan etylu/heksany jako płyn wymywający, uzyskano związek 1D (67,7%) w postaci żółtego oleju.
P r z y k ł a d 1 Etap 4
Mieszaninę 1,0 równoważnika związku 1D i katalitycznej ilości 10% Pd/C (w przybliżeniu 10% udziału masowego) w MeOH (około 0,6 M związku 1D w MeOH) mieszano w atmosferze 50 psi (0,34 MPa) H2 przez 45 min. Po zastąpieniu atmosfery H2 przez N2, mieszaninę reakcyjną przesączono przez ziemię okrzemkową i ziemię okrzemkową przemywano MeOH. Zatężenie MeOH prowadziło do wyodrębnienia związku 1E.
PL 216 049 B1
P r z y k ł a d 1 Etap 5
F
1F
Do roztworu aniliny 1E (1,0 równoważnika) w suchym DCM (około 0,1 M związku 1E w DCM) w temperaturze pokojowej w atmosferze N2 dodano strzykawką 2-metylo-5-izocyjanoatopirydynę (lekki nadmiar, około 1,2 równoważnika). Mieszaninę mieszano przez 1 godzinę. Do mieszaniny reakcyjnej dodano kolejno nasycony wodny roztwór wodorowęglanu sodu i octanu etylu. Warstwy rozdzielano i warstwę organiczną przemywano dwukrotnie nasyconym roztworem NaHCO3 i jeden raz solanką. Warstwę organiczną wysuszono w obecności siarczanu sodu, przesączono i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania techniką chromatografii w żelu krzemionkowym stosując 5% metanol/DCM jako płyn wymywający, uzyskano związek 1F.
P r z y k ł a d 1 Etapy 6 i 7
Do roztworu 1,0 równoważnika związku 1F w CH2CI2 (około 0,14 M związek 1F w DCM) dodano w przybliżeniu 200 równoważników kwasu trifluorooctowego (TFA). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 30 min i zatężono. Otrzymaną pozostałość rozpuszczono w EtOAc (około 1,6 krotna objętość mieszaniny reakcyjnej) i przemywano kolejno 3N NaOH (2 razy) i solanką. Warstwę organiczną wysuszono (NaSO4) i zatężono do uzyskania żądanej wolnej zasady, którą stosowano bez dalszego oczyszczania.
Do roztworu wolnej zasady uzyskanej jak opisano (1,0 równoważnika) i DIPEA (1,2 równoważnika) w suchym THF (około 0,2 M wolnej zasady w THF) dodano strzykawką chloromrówczan metylu (1,1 równoważnika) i otrzymaną mieszaninę mieszano przez 1 godzinę. Do mieszaniny dodano wodny roztwór wodorowęglanu sodu, a następnie octan etylu. Warstwę organiczną rozdzielono i przemywano dwukrotnie wodnym roztworem wodorowęglanu sodu i jeden raz solanką. Połączone warstwy wodne ekstrahowano jeden raz octanem etylu. Połączone warstwy wodne wysuszono w obecności siarczanu sodu, przesączono i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania techniką chromatografii w żelu krzemionkowym, stosując 5% MeOH/DCM jako płyn wymywający, uzyskano metylo 4-(3-fluoro-5-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan. MS 402 (M+H).
Do roztworu wolnej zasady uzyskanej jak opisano powyżej (1,0 równoważnika) i DIPEA (1,2 równoważnika) w suchym THF (około 0,2 M roztwór wolnej zasady w THF) dodano strzykawką chlorek dimetylosulfamoilu (1,1 równoważnika). Po kilku godzinach, reakcja była zakończona. Mieszaninę gaszono wodnym roztworem wodorowęglanu sodu, rozcieńczano octanem etylu i przemywano
PL 216 049 B1 dwukrotnie roztworem wodorowęglanu i jeden raz solanką. Połączone warstwy wodne ekstrahowano jeden raz octanem etylu i połączone warstwy wodne wysuszono w obecności siarczanu sodu, przesączono i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania techniką chromatografii w żelu krzemionkowym, stosując 5% MeOH/DCM jako płyn wymywający, uzyskano 4-(3-fluoro-5-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)-N,N-dimetylopiperazyno-1-sulfonamid. MS 451 (M+H).
P r z y k ł a d 2 Etap 1
Do 1,0 równoważnika (4-fluoro-3-nitrofenylo)metanolu (2A) w THF (około 1 M 2A w THF) i (około 1,1 równoważnika) pirydyny dodano w przybliżeniu 1,1 równoważnika chlorku kwasu metanosulfonowego. Mieszaninę mieszano przez noc w temperaturze pokojowej następnie zatężono. Pozostałość oczyszczono stosując chromatografią błyskawiczną (flash) na złożu krzemionkowym, stosując 10%-50% EtOAc/heksany jako płyn wymywający, otrzymując ester 4-fluoro-3-nitrobenzylowy kwasu metanosulfonowego (2B) (57%).
P r z y k ł a d 2 Etap 2
Do 1,0 równoważnika estru 4-fluoro-3-nitrobenzylowego kwasu metanosulfonowego (2B) w DMF (około 0,6 M roztwór związku 2B w DMF) dodano około 1,05 równoważnika TEA i około 1,0 równoważnika t-butylo piperazyno-1-karboksylanu. Mieszaninę mieszano przez 30 minut w temperaturze pokojowej, rozcieńczano EtOAc, przemywano roztworem NH4CI, wysuszono (Na2SO4) i odparowano. W wyniku oczyszczania chromatografią błyskawiczną (flash) na złożu krzemionkowym, stosując 50% EtOAc/heksany jako płyn wymywający, otrzymano ester tert-butylowy kwasu 4-(4-fluoro-3-nitrobenzylo)piperazyno-1-karboksylowego (2C).
P r z y k ł a d 2 Etap 3
Ester tert-butylowy kwasu 4-(4-fluoro-3-nitrobenzylo)piperazyno-1-karboksylowego (związek 2C, 1,0 równoważnika) w metanolu (około 0,2 M roztwór związku 2C w MeOH) traktowano katalitycznym Pd(OH)2/C w atmosferze wodoru pod ciśnieniem 60 psi (4136,88 hPa) przez noc. Mieszaninę przesączono przez ziemię okrzemkową i zatężono do oleju. Olej ten rozpuszczono w THF i traktowano w przybliżeniu 1,05 równoważnika 6-metylopirydyno-3-izocyjanianu. Po mieszaniu w temperaturze 50°C przez 30 minut mieszaninę zatężono. Pozostałość oczyszczono techniką HPLC z odwróconym układem faz otrzymując ester tert-butylowy kwasu 4-{4-fluoro-3-[3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido]benzylo]piperazyno-1-karboksylowego (2D).
PL 216 049 B1
Do 1,0 równoważnika estru tert-butylowego kwasu 4-{4-fluoro-3-[3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido]benzylo]piperazyno-1-karboksylowego (związek 2D) w MeOH (około 0,1 M 2D w MeOH) dodano 2 objętości HCI w dioksanie (4 N) i mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze 50°C przez 15 min i odparowano do uzyskania ciała stałego. Ciało stałe połączono z DCM i traktowano w przybliżeniu 5 równoważnikami TEA i podzielono na 3 równe części mieszaniny reakcyjnej A. Jedną część mieszaniny reakcyjnej A traktowano 1,2 równoważnikami chlorku metylokarbonylu i mieszano przez noc. Otrzymaną mieszaninę zatężono i oczyszczono HPLC z odwróconym układem faz, aby otrzymać ester metylowy kwasu 4-{4-fluoro-3-[3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido]benzylo]piperazyno-1-karboksylowego. MS 402 (M+H). Drugą część mieszaniny reakcyjnej A traktowano 1,2 równoważnikiem chlorku dimetylosulfamoilu i mieszano przez noc. Otrzymaną mieszaninę zatężono i oczyszczono techniką HPLC z odwróconym układem faz, aby otrzymać dimetyloamid kwasu 4-{4-fluoro-3-[3-(6-metylopyrdyn-3-ylo)ureido]benzylo]piperazyno-1-sulfonowego. MS 451 (M+H).
P r z y k ł a d 3 Etap 1
F F
3A 3B
Okrągłodenną kolbę wypełniono 1 równoważnikiem 3-chloro-2-fluoroaniliny (3A), 1-metylo-2-pirolidynonu (około 1,5 M związku 3A w NMP), 2,2 równoważnikami cyjanku sodu i 1,35 równoważnika bromku niklu (II) w temperaturze pokojowej w atmosferze N2. Stężenie obniżono o połowę przez wprowadzenie dodatkowego NMP w atmosferze N2 i roztwór łagodnie ogrzewano do temperatury 200±5°C i mieszano przez 4 dni w atmosferze N2. Mieszaninę reakcyjną pozostawiono do schłodzenia do temperatury pokojowej. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczano 30 objętościami eteru tert-butylo metylowego (MTBE) i przesączono przez celit. Podkładkę celitową następnie przemyto 10 objętościami MTBE. Części organiczne przemywano 40 objętościami solanki, 2 x 40 objętościami wody i 40 objętościami solanki. Połączone części organiczne wysuszono w obecności siarczanu sodu i zatężono aby otrzymać brązowe ciało stałe, które wysuszono w próżni (~30 w Hg) w temperaturze 40°C przez 8 godzin, aby otrzymać związek o wzorze 3B (wydajność 71%).
PL 216 049 B1
Roztwór związku 3B w dichlorometanie (około 1,5 M roztwór związku 3B w DCM) w temperaturze pokojowej w atmosferze mieszaniny azotu schładzano do około 0°C i dodano po kropli przez około 3,5 godziny, 2,0 równoważnika 1 M roztworu wodorku diizobutyloglino litu (DIBAIH) w DCM, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji <0°C. Po zakończeniu dodawania DiBAIH, mieszaninę reakcyjną dodano po kropli intensywnie mieszając do schładzanego roztworu (~0°C) 40 objętości 15% soli Rochelle'a i 10 objętości DCM, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji poniżej 10°C. Kolbę przemyto 10 objętościami DCM i mieszaninę pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej i mieszano przez 4 godziny. Warstwy rozdzielano i warstwy wodne reekstrahowano 20 objętościami DCM. Połączone warstwy wodne przemywano 20 objętościami wody. Warstwę organiczną wysuszono w obecności siarczanu sodu i zatężono aby otrzymać brązową pianę, którą wysuszono w próżni (~30 w Hg), w temperaturze pokojowej, aby otrzymać związek 3C (wydajność 92%).
P r z y k ł a d 3 Etap 3
Etapy S3A/B:
Roztwór 1 równoważnika związku 3C, tetrahydrofuranu (około 1,4 M związku 3C w THF) i 1,05 równoważnika metylo piperazyno-1-karboksylanu i pozostawiono mieszając w temperaturze otoczenia przez 3 godziny. Do mieszaniny reakcyjnej dodano porcjami przez około 40 minut, 1,5 równoważnika triacetoksyborowodorku sodu, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji poniżej 45°C. Mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Do mieszaniny reakcyjnej dodano 5 objętości wody po kropli, w ciągu godziny, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji poniżej 30°C. Następnie dodawano octan etylu (EtOAc, 5 objętości) i warstwy rozdzielano. Warstwy wodne reekstrahowano 5 objętościami EtOAc. Połączone warstwy wodne przemywano nasyconym roztworem wodorowęglanu sodu i dodano stały wodorowęglan sodu zgodnie z potrzebą, aby doprowadzić pH do 8 (papierki pHydrion). Warstwy rozdzielano i warstwę organiczną przemywano 5 objętościami solanki. Warstwę organiczną wysuszono w obecności siarczanu sodu i w etapie suszenia dodano aktywowany węgiel. Części organiczne przesączono przez celit i podkładkę celitową przemywano 4 razy EtOAc. Części organiczne zatężono i wysuszono przez noc na wyparce obrotowej (~30 w Hg w temperaturze pokojowej) aby otrzymać olej o barwie brązowego bursztynu.
Etap 3C:
Wszystkie obliczenia wykonano w oparciu o ilość związku 3C (R= O).
Do 3 objętości metanolu (w oparciu o związek 3C, R= O) w atmosferze N2 nad łaźnią lód/solanka/aceton dodano 3 równoważniki chlorku acetylu po kropli w ciągu 3 godzin, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji poniżej 0°C. Roztwór następnie mieszano przez kolejną godzinę poniżej 0°C. Roztwór 1,0 równoważnika nieoczyszczonego związku 3D (z etapów 3A/3B opisanych powyżej) w MeOH (około 3,6 M w oparciu o związek 3C, R= O) dodano po kropli w ciągu 30 min, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji poniżej 15°C. Reakcję pozostawiono do ogrzania do temperatury pokojowej przez noc. Ciało stałe przesączono następnego dnia i przemyto 2 x 0,5 objętościami MeOH, 5 objętościami 1:1 tert-butylo metylo eteru (MTBE):MeOH i 5 objętościami MTBE.
PL 216 049 B1
Ciało stałe następnie roztworzono w 5 objętościach EtOAc i nasyconym roztworze wodorowęglanu sodu i dodano stały wodorowęglan sodu zgodnie z potrzebą, aby doprowadzić pH warstwy wodnej do 8 (papierki pHydrion). Warstwy rozdzielano i warstwę wodną ekstrahowano 5 objętościami EtOAc. Połączone warstwy wodne przemywano 5 objętościami solanki, wysuszono w obecności siarczanu sodu i zatężono aby otrzymać blado pomarańczowe ciało stałe, które wysuszono w próżni (-30 w Hg) w temperaturze ~40°C uzyskując związek 3D (50% wydajność).
P r z y k ł a d 3 Etap 4
Do roztworu związku 3D w acetonie (około 2,7 M roztwór związku 3D w acetonie) dodano 1,0 równoważnika 5-izocyjanato-2-metylopirydyny po kropli w ciągu 9 min. W trakcie dodawania utworzył się osad o dużej objętości i reakcję mieszano przez jedną godzinę. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano przez 2 godziny do temperatury orosienia i schładzano przez 2,5 godziny do temperatury pokojowej. Reakcję następnie ogrzewano przez 1 godzinę do temperatury orosienia i schładzano do temperatury pokojowej przez noc. Reakcję przesączono i przemyto 1 objętością acetonu, następnie trzy razy 2 objętościami octanu etylu. Części stałe wysuszono w próżni (~30 w Hg) w temperaturze 60°C przez noc, aby otrzymać biały proszek (86% wydajność) metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylanu. Materiał przetworzono następująco:
Metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan otrzymany jak opisano powyżej rozpuszczono w acetonie (około 0,2 M) w atmosferze N2. Reakcję następnie ogrzewano przez 2,5 godziny do temperatury orosienia i schładzano do temperatury pokojowej przez noc. Reakcję. przesączono i przemyto 1 objętością acetonu, następnie trzy razy 2 objętościami octanu etylu. Części stałe wysuszono w próżni (~30 w Hg) w temperaturze 60°C przez noc, aby otrzymać metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan jako biały proszek (79% wydajność). Materiał przetworzono następująco:
Metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan otrzymany jak opisano powyżej rozpuszczono w acetonie (około 0,2 M) w atmosferze N2. Reakcję następnie ogrzano do temperatury orosienia i schładzano do temperatury pokojowej przez noc. Reakcję przesączono i przemyto 1 objętością acetonu, następnie dodatkowo trzy razy 2 objętościami octanu etylu. Części stałe wysuszono w próżni (~30 w Hg) w temperaturze 60°C przez noc aby otrzymać metylo 4-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan jako biały proszek (73% wydajność). MS 402 (M+H).
P r z y k ł a d 4 Etap 1
Trzyszyjkową okrągłodenną kolbę przedmuchiwano azotem przez przynajmniej dziesięć minut. Kolbę wypełniono 1,0 równoważnikiem związku 4A, CH2CI2 (około 1,2 M roztwór związku 4A w DCM) i około 1,1 równoważnika DIPEA. Kolbę następnie schładzano do temperatury 10±5°C. Podczas schładzania kolby, roztworzono 1,2 równoważnika metylo piperazyno-1-karboksylanu w CH2CI2 (około
5,3 M). Materiał nie przechodził do roztworu, tak więc dodano kolejne 0,05 równoważnika DIPEA w DCM (około 0,3 M). Materiał nie przechodził do roztworu i zawiesinę następnie dodawano po kropli w ciągu 50 minut, utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji <30°C. Łaźnię chłodzącą usunięto i mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury orosienia. Mieszaninę reakcyjną utrzymywano pod chłodnicą zwrotną przez 19 godzin. Dodano kolejne 0,05 równoważnika metylo piperazyno-1-karboksylanu i reakcję ogrzewano pod chłodnicą zwrotną przez następnych 2,5 godziny. Reakcję
PL 216 049 B1 schładzano do temperatury pokojowej i przemywano 5 objętościami wody. Warstwę wodną reekstrahowano 5 objętościami CH2CI2. Połączone warstwy wodne przemywano 5 objętościami 10% AcOH/wody. Warstwę organiczną następnie przemywano 5 objętościami nasyconego roztworu wodorowęglanu sodu i 5 objętościami solanki. Warstwę organiczną wysuszono w obecności siarczanu sodu, przesączono i zatężono stosując wyparkę obrotową w temperaturze 30±5°C do uzyskania pozostałości. MTBE wprowadzono do kolby na wyparce obrotowej w temperaturze 20±5°C i kolbę obracano aż uzyskania roztworu. Heksan wprowadzono do kolby i roztwór mieszano przez 2,5 godziny w temperaturze 20±5°C. Części stałe przesączono i przemyto heksanami. Części stałe wysuszono w temperaturze <40°C w najwyższej próżni do uzyskania stałej masy (-22 godziny), aby otrzymać 4B jako blado żółte ciało stałe (66% wydajność).
P r z y k ł a d 4 Etap 2
Reaktor wysokociśnieniowy wypełniono zawiesiną 25% wagowych Pt/C względem związku 4B w 8 objętościach THF (względem Pt/C), a następnie dodano zawiesinę 1,5 równoważnika K2CO3, w THF (około 0,67 M), po czym dodano roztwór 1,0 równoważnika związku 4B w THF (około 0,47 M). Płaszcz reaktora ustawiono na temperaturę 10°C i reaktor wypełniono H2 przy 50 psi (0,34 MPa) jednocześnie utrzymując wewnętrzną temperaturę reakcji <30°C. Reakcję mieszano przez 9 godzin, 45 minut, a następnie mieszano przez następnych 3,5 godziny. Reakcję przesączono. Kolbę reakcyjną i filtry przemyto 9 objętościami MeOH (względem związku 4B) i zatężono stosując wyparkę obrotową w temperaturze <50°C. Pozostałość rozpuszczono w 4 objętościach EtOAc i przemywano 4 objętościami wody. Warstwę wodną reekstrahowano 4 objętościami EtOAc. Połączone części organiczne przemywano 4 objętościami solanki, wysuszono w obecności siarczanu sodu, przesączono i zatężono stosując wyparkę obrotową w temperaturze <50°C do uzyskania pozostałości. Gdy rozpuszczalnik nie wydobywał się już z wyparki obrotowej, pozostałość wypełniono 2 objętościami MTBE i roztwór zatężono stosując wyparkę obrotową w temperaturze <50°C do uzyskania pozostałości. Gdy rozpuszczalnik nie wydobywał się już z wyparki obrotowej, materiał utrzymywano na wyparce obrotowej w najwyższej próżni przez 15 godzin. Następnie wprowadzono MTBE (2 objętości) aby rozetrzeć materiał na proszek i kolbę obracano przez 2 godziny. Części stałe przesączono i przemyto 0,5 objętościami MTBE. Części stałe wysuszono w temperaturze <50°C w najwyższej próżni do uzyskania stałej masy (~22 godziny), aby otrzymać związek 4C jako blado żółte ciało stałe (87% wydajność).
P r z y k ł a d 4 Etap 3
Trzyszyjkową okrągłodenną kolbę przedmuchiwano azotem przez przynajmniej dziesięć minut. Kolbę następnie wypełniano 1,0 równoważnikiem związku 4C w acetonie (około 0,56 M). Kolbę ogrzano do temperatury 27°C aby utworzyć roztwór. Około 1 równoważnika 5-izocyjanato-2-pirydyny dodano po kropli w ciągu 68 min, kontrolując szybkość dodawania, aby utrzymać wewnętrzną temperaturę <45°C. Po dodaniu, mieszaninę reakcyjną utrzymywano w temperaturze <45°C w przybliżeniu przez 5 godzin. Reakcję następnie ogrzano łagodnie ogrzewając pod chłodnicą zwrotną przez 35 min następnie schładzano ponownie do temperatury pokojowej przez noc (15 godzin). Części stałe przesączono i przemyto 0,45 objętości acetonu i 1,7 objętości EtOAc. Części stałe wysuszono w piecu próżniowym <50°C, aby uzyskać związek 4D, metylo 4-(3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan (89% wydajność). MS 384 (M+H).
PL 216 049 B1
Do mieszaniny 1,0 równoważnika 2-fluoro-3-bromonitrobenzenu (5A), 1,0 równoważnika chlorku tetrabutyloamonowego, 1,5 równoważnika NaHCO3 i 2,0 równoważnika alkoholu allilowego w DMF (około 1 M alkoholu allilowego w DMF) w atmosferze N2 dodano 0,4 równoważnika PdCI2. Mieszaninę reakcyjną ogrzano do temperatury 60°C i mieszano w atmosferze N2 przez 16 godzin. Temperaturę podnoszono do 70°C i mieszaninę reakcyjną mieszano przez kolejne 4 godziny. Dodano kolejne podwielokrotności 1 równoważnika alkoholu allilowego i 0,1 równoważnika PdCI2, i mieszaninę reakcyjną mieszano w atmosferze N2 przez 6 godzin. Mieszaninę reakcyjną schładzano do temperatury pokojowej i rozcieńczano EtOAc. Mieszaninę przemywano kolejno wodą, 1 N HCI i solanką. Warstwę organiczną wysuszono i zatężono do uzyskania pozostałości. W wyniku oczyszczania w żelu krzemionkowym stosując 10% EtOAc/Heksan w 60% EtOAc/Heksan jako gradientowym eluencie otrzymano związku 5B.
P r z y k ł a d 5 Etap 2
Do roztworu 1,0 równoważnika związku 5B w CH2Cl2 (około 0,04 M) w atmosferze N2 dodano
1,3 równoważnika soli HCI metylo piperazyno-1-karboksylanu, a następnie dodano 1,2 równoważnika triacetoksyborowodorku sodu. Mieszaninę reakcyjną mieszano w temperaturze pokojowej przez noc. Dodano kolejne 0,5 równoważnika soli HCI metylo piperazyno-1-karboksylanu, a następnie do mieszaniny reakcyjnej dodano 2 równoważniki triacetoksyborowodorku sodu i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 4 godziny. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczano CH2CI2 i przemywano kolejno wodą i solanką. Warstwę organiczną wysuszono i zatężono do uzyskania pozostałości. W wyniku oczyszczania w żelu krzemionkowym, stosując 2:1 EtOAc/Heksan jako płyn wymywający, otrzymano związek 5C.
P r z y k ł a d 5 Etap 3
Mieszaninę 1 równoważnika związku 5C i 50 wagowych równoważnika 10% Pd/C w MeOH (0,06 M związku 5C w MeOH) mieszano w atmosferze H2 przy 30 psi (2068,44 hPa) przez 2 godziny. Po zastąpieniu atmosfery H2 przez N2, mieszaninę reakcyjną przesączono przez ziemię okrzemkową i ziemię okrzemkową przemywano MeOH. Zatężenie MeOH prowadziło do wyodrębnienia związku 5D z niemal ilościową wydajnością.
PL 216 049 B1
P r z y k ł a d 5 Etap 4
metylo 4-(3-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyno-3ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1 - karboksylan
Do roztworu 1 równoważnika związku 5D w CH2CI2 (około 0,1 M) w atmosferze N2 w temperaturze pokojowej dodano 1 równoważnik 5-izocyjanato-2-pirydyny i otrzymaną mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 12 godzin. Mieszaninę reakcyjną rozcieńczano CH2CI2 i przemywano kolejno wodą i solanką. Warstwę organiczną wysuszono i zatężono do uzyskania pozostałości. W wyniku oczyszczania preparatywną HPLC o odwróconej fazie (kolumna C-18) stosując 10% CH3CN/wodę do 100% CH3CN jako gradientowym eluencie otrzymano metylo 4-(3-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)fenylo)propylo)piperazyno-1-karboksylan.
P r z y k ł a d 6 Etapy 1 i 2
6A 6B 6C
PdCI2(PPh3)2 (0,05 równoważnika) dodano do mieszaniny 1,0 równoważnika związku 6A, 1,0 równoważnika tributylo(1-etoksywinylo)cyny w dioksanie (około 0,4 M) w atmosferze N2. Mieszaninę ogrzewano w temperaturze 95°C przez 4 godziny w atmosferze N2. Mieszaninę 1:1 obj./obj. EtOAc/ roztwór (1 M KF) dodano do mieszaniny reakcyjnej i mieszaninę mieszano przez 1 godzinę. Wytrącony osad odsączono. Warstwę organiczną wysuszono i zatężono aby uzyskać związek 6B, które stosowano bez dalszego oczyszczania.
Do mieszaniny związku 6B w THF (0,8 M względem związku 6A) dodano około 2,3 objętości 2N HCI i mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Do mieszaniny reakcyjnej dodano nasycony roztwór NaHCO3. Mieszaninę reakcyjną zatężono aby usunąć THF i do otrzymanej mieszaniny dodano objętość eteru około 3 razy tej objętości mieszaniny reakcyjnej. Warstwę organiczną wysuszono i zatężono do uzyskania pozostałości. Pozostałość oczyszczono w żelu krzemionkowym aby otrzymać związek 6C (87% w 2 etapach).
P r z y k ł a d 6 Etap 3
Do mieszaniny 0,1 do 0,15 równoważnika (S)-1-metylo-3,3-difenyloheksahydropirolo[1,2-c][1,3,2]oksazaborolu w toluenie (1-1,5 M) i toluen (około 10 krotna objętość względem oksazaborolu w toluenie) w atmosferze N2 w temperaturze 20°C dodano 1,05 równoważnika Et2NPh-BH3. Do tej mieszaniny reakcyjnej dodano po kropli w ciągu 1,5 godziny, 1,0 równoważnik związku 6C w toluenie (około 0,4 M). Mieszaninę reakcyjną następnie mieszano przez dodatkową godzinę w temperaturze pokojowej. Do mieszaniny reakcyjnej dodano około 1,9 objętości MeOH, a następnie dodano około
3,4 objętości 1 N HCI. Mieszaninę mieszano przez 20 min. Do mieszaniny reakcyjnej dodano około 7,8 objętości eteru i około 7,8 objętości solanki. Warstwę organiczną rozdzielono, wysuszono i zatężono do uzyskania pozostałości. Pozostałość oczyszczono techniką chromatografii w żelu krzemionkowym aby otrzymać związek 6D (79%).
PL 216 049 B1
P r z y k ł a d 6 Etap 4
Do 1,0 równoważnika związku 6D w eterze (około 0,55 M) i 1,2 równoważnika Et3N dodano około 1,1 równoważnika chlorku metanosulfonylu po kropli w temperaturze 0°C. Mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez 30 min. Mieszaninę reakcyjną przesączono i zatężono do uzyskania pozostałości. Pozostałość rozpuszczono w około 5,9 objętościach DMF i dodano 1,2 równoważnika soli HCI metylo piperazyno-1-karboksylanu i 4 równoważniki K2CO3. Mieszaninę reakcyjną ogrzewano w temperaturze 50°C przez 16 godzin. Mieszaninę reakcyjną schładzano do temperatury pokojowej i około 29 objętości EtOAc i dodano 29 objętości nasyconego NH4CI. Warstwę organiczną rozdzielono, wysuszono i zatężono. Otrzymaną pozostałość oczyszczono techniką chromatografii w żelu krzemionkowym, aby uzyskać 6E.
P r z y k ł a d 6 Etap 5
Mieszaninę 1 równoważnika związku 6E i 10 wagowych równoważników 10% Pd/C w MeOH mieszano w atmosferze H2 45 psi (3102,66 hPa) przez pół godziny. Po zastąpieniu atmosfery H2 przez N2. Mieszaninę reakcyjną przesączono przez ziemię okrzemkową i ziemię okrzemkową przemywano MeOH. Zatężenie MeOH prowadziło do wyodrębnienia związku 6F.
P r z y k ł a d 6 Etap 6
(S)-metylo 4-(1-(2-f!uoro-3-(3-(6-metylopirydyno-3 ylo)ureido)fenylo)etylo)piperazyno-1 - karboksylan
Do roztworu 1,0 równoważnika związku 6F w CH2CI2 (przy około 0,3 M) w atmosferze N2 w temperaturze pokojowej dodano 1,0 równoważnika 5-izocyjanato-2-metylopirydyny i otrzymaną mieszaninę mieszano w temperaturze pokojowej przez pół godziny. Mieszaninę reakcyjną zatężono do uzyskania pozostałości. W wyniku oczyszczania techniką HLPC o odwróconych fazach (kolumna C-18) otrzymano (S)metylo-4-(1-(2-fluoro-3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)fenylo)etylo)piperazynolkarboksylan jako białe ciało stałe. MS 416 (M+H).
P r z y k ł a d 7 Etap 1
PL 216 049 B1
Wysuszoną w piecu, okrągłodenną kolbę wypełniono tert-butylo piperazyno-1-karboksylanem (1,1 równoważnika), kwasem 3-nitrofenylooctowym (związek 7A, 1,0 równoważnika), EDC (1,2 równoważnika) i HOBT (1,2 równoważnika). Kolbę przepłukiwano azotem i dodano strzykawką N,N-dimetyloformamid (około 0,5 M związku 7A w DMF) i trietyloaminę (2,0 równoważnika). Otrzymaną mieszaninę reakcyjną mieszano przez noc w temperaturze pokojowej. Mieszaninę reakcyjną następnie rozcieńczano EtOAc i przemywano 4 razy H2O, dwukrotnie wodnym 1 N roztworem KHSO4, jeden raz nasyconym NaHCO3 i jeden raz solanką. Warstwę organiczną wysuszono w obecności Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Tert-butylo 4-(2-(3-nitrofenylo)acetylo)piperazyno-1-karboksylan (7B) wyodrębniono w postaci stałej (80%) i stosowano bez dalszego oczyszczania.
P r z y k ł a d 7 Etap 2
Do roztworu tert-butylo 4-(2-(3-nitrofenylo)acetylo)piperazyno-1-karboksylanu (związek 7B, 1,0 równoważnika) w THF (około 0,5 M związku 7B w THF)) dodano strzykawką boran-THF (2,0 równoważnika). Otrzymaną mieszaninę reakcyjną ogrzewano do temperatury orosienia przez 2 godziny. Mieszaninę reakcyjną schładzano w łaźni lód/woda i dodano powoli 10% wodny HOAc. Mieszaninę zatężono w próżni i pozostałość rozpuszczono w EtOAc. Warstwę organiczną rozdzielono pomiędzy wodę i warstwę wodną zalkalizowano (pH 9) przez dodanie 50% NaOH. Warstwę organiczną następnie przemywano dwukrotnie nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 i jeden raz solanką. Warstwę organiczną wysuszono w obecności Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Otrzymany tert-butylo 4-(3-nitrofenyloetylo)piperazyno-1-karboksylan (związek 7C, ilościowo) stosowano bez dalszego oczyszczania.
P r z y k ł a d 7 Etap 3
Szklaną wkładkę do reaktora Parra wypełniono tert-butylo 4-(3-nitrofenyloetylo)piperazyno-1-karboksylanem (związek 7C, 1,0 równoważnika) i metanolem (około 0,2 M roztworu związku 7C w MeOH). Do tego roztworu dodano zawiesinę 12,5 wagowych równoważników 10% Pd/C w metanolu. Mieszaninę reakcyjną szczelnie zamknięto w naczyniu Parra do uwodorniania i poddano 3 cyklom zwiększania ciśnienia /odpowietrzania z H2. Mieszaninę reakcyjną pozostawiono, aby zaszła reakcja w temperaturze pokojowej i H2 pod ciśnieniem 45 psi (3102,66 hPa) przez 2,5 godziny. Do mieszaniny reakcyjnej następnie wprowadzono 12,5 wagowego równoważnika Pd(OH)2/C i naczynie ponownie poddano zwiększonemu ciśnieniu wodoru (45 psi = 3102,66 hPa). Po jednej godzinie, mieszaninę reakcyjną przesączono przez podkładkę z ziemi okrzemkowej, ziemię okrzemkową przemywano MeOH i połączone warstwy organiczne zatężono w próżni, aby otrzymać żądany tert-butylo 4-(3-aminofenyloetylo)piperazyno-1-karboksylan (7D, 63%), który stosowano bez dalszego oczyszczania.
P r z y k ł a d 7 Etap 4
Do roztworu tert-butylo 4-(3-aminofenyloetylo)piperazyno-1-karboksylanu (związek 7D, 1,0 równoważnika) w THF (około 0,3 M roztwór związku 7D w THF) dodano po kropli 5-izocyjanato-2-metylopirydynę (1,0 równoważnika). Otrzymaną mieszaninę reakcyjną mieszano przez 2 godziny. Do
PL 216 049 B1 mieszaniny reakcyjnej dodano nasycony roztwór wodny NaHCO3. Mieszaninę rozcieńczano EtOAc i warstwy rozdzielano. Warstwę organiczną przemywano dwukrotnie nasyconym wodnym roztworem NaHCO3 i jeden raz solanką. Warstwę organiczną wysuszono w obecności Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania w żelu krzemionkowym stosując 5-12% MeOH/CH2Cl2 jako gradientowy eluent uzyskano tert-butylo 4-(3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)fenyloetylo)piperazyno-1-karboksylan (7E, 63%).
P r z y k ł a d 7 Etap 5
Do roztworu tert-butylo 4-(3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)fenetylo)piperazyno-1-karboksylanu (związek 7E, 1,0 równoważnika) w MeOH (około 0,2 M roztwór związku 7E w MeOH)) dodano roztwór 2 M HCI w dioksanie (około 12 równoważników). Po 70 minutach mieszaninę reakcyjną zatężono w próżni i stosowano bez oczyszczania w następującej acylacji. MS 398 (M+H).
Otrzymaną sól HCI (1,0 równoważnik) z etapu wytrącania zawieszono w THF (około 0,15 M roztwór soli w THF) i dodano trietyloaminę (4,0 równoważniki). Mieszaninę reakcyjną schładzano do temperatury 0°C i dodano po kropli metylo chloromrówczan (1,05 równoważnika). Otrzymaną mieszaninę mieszano przez 5 min w temperaturze pokojowej. Do mieszaniny reakcyjnej dodano nasycony wodny roztwór NaHCO3, a następnie dodano EtOAc. Warstwy rozdzielano i warstwę organiczną przemywano jeden raz nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, jeden raz solanką, wysuszono w obecności Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania w żelu krzemionkowym stosując 2-10% MeOH/CH2CI2 jako gradientowy eluent, otrzymano metylo 4-(3-(3-(6-metylopirydyn-3-ylo)ureido)fenetylo)piperazyno-1-karboksylan.
P r z y k ł a d 8
-(3-((4-(6-etylosulfbnylo)piperazyno-1 ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(6metylopirydyn-3-ylo)mocznik
Do roztworu 1,0 równoważnika związku 8A w MeOH (około 0,07 M) dodano roztwór 2 M HCI w dioksanie (około 30 równoważników)). Po 70 minutach mieszaninę reakcyjną zatężono w próżni i stosowano bez oczyszczania w następującej acylacji.
Otrzymaną sól HCI z poprzedniego etapu zawieszono w THF (około 0,05 M) i dodano około 18 równoważników diizopropyloetyloaminy. Mieszaninę reakcyjną schładzono do temperatury 0°C i dodano po kropli około 1 równoważnik chlorku etanosulfonylu. Otrzymaną mieszaninę mieszano przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Do mieszaniny reakcyjnej dodano nasycony wodny roztwór NaHCO3, a następnie dodano EtOAc. Warstwy rozdzielano i warstwę organiczną przemywano jeden raz nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, jeden raz solanką, wysuszono w obecności Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. Oczyszczano w żelu krzemionkowym stosując 1-10% MeOH/CH2CI2 jako gradientowy eluent, a następnie roztarto na proszek w 1:1 actonie/eterze, otrzymując metylo 1-(3-((4-(etylosulfonylo)piperazyn-1-ylo)metylo)-2-fluorofenylo)-3-(6-metylopirydyn-3-ylo)mocznik. MS 436 (M+H).
PL 216 049 B1
P r z y k ł a d 9
Do roztworu około 0,4 równoważnika trifosgenu w THF (około 0,04 M) w temperaturze pokojowej w atmosferze N2 dodano 1 równoważnik 5-metyloizoksazol-3-aminy i 2 równoważniki diisopropyletyloaminy w THF (około 0,2 M aminy w THF). Mieszaninę reakcyjną mieszano przez 15 min. Do tej mieszaniny dodano 1,0 równoważnik związku 9A w THF (około 0,2 mM roztwór związku 9A w THF). Otrzymaną mieszaninę mieszano przez 10 min. Do mieszaniny reakcyjnej dodano nasycony wodny roztwór NaHCO3, a następnie dodano EtOAc. Warstwy rozdzielano i warstwę organiczną przemywano jeden raz nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, jeden raz solanką, wysuszono w obecności Na2SO4, przesączono i zatężono w próżni. W wyniku oczyszczania w żelu krzemionkowym stosując 1-10% MeOH/CH2CI2 jako gradientowy eluent, otrzymano metylo 4-(4-fluoro-3-(3-(5-metyloizoksazol-3-ylo)ureido)benzylo)piperazyno-1-karboksylan. MS 392 (M+H).
Poniżej przedstawiono związki, które mogą być zsyntetyzowane w sposób podobny do związków reprezentatywnych przedstawionych powyżej:
Dane MS Nazwa związku
1 2
347 (M+H) N-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metoksy-N-metylo- karboksyamid
382 (M+H) N-[3-({[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karboksy- amid
396 (M+H) N-[3-({[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))ami- no]karboksyamid
381 (M+H) N-(3-{[(etylosulfonylo)metyloamino]metylo}-5-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
388 (M+H) metylo 4-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
422 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
402 (M+H) metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
436 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
451 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
437 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)karbo- ksyamid
454 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloairiino)sulfonylo]piperazynylo}iTietylo)-5-fluorofenylo][(4-fluorofenylo)aiTiino]- karboksyamid
405 (M+H) metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
439 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(4-fluorofenylo)aiTiino]karboksyaiTiid
388 (M+H) metylo 4-({4-fluoro-3-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
PL 216 049 B1 cd. tabeli
1 2
437 (M+H) N-[5-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo](3-pirydyloaminokarbo- ksyamid
436 (M+H) N-(5-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
422 (M+H) N-(5-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
451 (M+H) N-[5-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
402 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
386 (M+H) N-{3-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
422 (M+H) N-(5-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
450 (M+H) N-[5-fluoro-3-({4-[(metyloetylo)sulfonylo]piperazynylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))ami- no]karboksyamid
416 (M+H) N-(5-fluoro-3-{[4-(2-metoksyacetylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
450 (M+H) N-(5-fluoro-3-{[4-(propylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
439 (M+H) N-[3-({4-[(1 E)-1-(dimetyloamino)-2-cyjano-2-azawinylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
380 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(5-metylo-1,1-diokso(1,2,5-tiadiazolidyn-2-ylo))metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)kar- boksyamid
394 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(5-metylo-1,1-diokso(1,2,5-tiadiazolidyn-2-ylo))metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydy- lo))amino]karboksyamid
397 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(5-metylo-1,1-diokso(1,2,5-tiadiazolidyn-2-ylo))metylo]fenylo}[(4-fluorofenylo)ami- no]karboksyamid
402 (M+H) metylo 4-[(2-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
436 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-4-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
451 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-4-fluorofenylo]-[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
388 (M+H) metylo 4-({2-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
422 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-4-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
437 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-4-fluorofenylo]-(3-pirydyloamino)karbo- ksyamid
370 (M+H) metylo 4-({3-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
404 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
418 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
384 (M+H) metylo 4-[(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
419 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)fenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid
433 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
PL 216 049 B1
cd. tabel
1 2
341 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(3-metylo-2-oksoimidazolidynylo)metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid
355 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(3-metylo-2-oksoimidazolidynylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
358 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(4-metylo-3-oksopiperazynylo)metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid
343 (M+H+) N-[3-fluoro-5-(piperydylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
329 (M+H+) N-[3-fluoro-5-(piperydylometylo)fenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid
481 (M+H+) N-[3-({(3S)-4-[(dimetyloamino)sulfonylo]-3-(metoksymetylo)piperazynylo}metylo)-5-fluorofeny- lo](3-pirydyloamino)karboksyamid
466 (M+H) N-(3-{[(3S)-4-(etylosulfonylo)-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydylo- amino)karboksyamid
432 (M+H) metylo (2S)-4-({5-fluoro-3-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan
495 (M+H) N-[3-({(3S)-4-[(dimetyloamino)sulfonylo]-3-(metoksymetylo)piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo]- -[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
480 (M+H) N-(3-{[(3S)-4-(etylosulfonylo)-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(6-metylo(3- -pirydylo))amino]karboksyamid
446 (M+H) metylo (2S)-4-[(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan
345 (M+H) N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
331 (M+H) N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ylometylo)fenylo](3-pirydyloamino)karboksyamid
393 (M+H) N-{3-[(1,1-diokso(1,4-tiazaperhydroin-4-ylo))metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]- karboksyamid
379 (M+H) N-{3-[(1,1-diokso(1,4-tiazaperhydroin-4-ylo))metylo]-5-fluorofenylo}(3-pirydyloamino)karboksy- amid
358 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(4-metylopiperazynylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
344 (M+H) N-{5-fluoro-3-[(4-metylopiperazynylo)metylo]fenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid
451 (M+H) N-{3-[((3S)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}pirolidynylo)metylo]-5-fluorofenylo}(3-piry- dyloamino)karboksyamid
436 (M+H) N-[3-({(3S)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]pirolidynylo}metylo)-5-fluorofenylo](3-pirydyloamino)- karboksyamid
402 (M+H) N-[(3S)-1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)pirolidyn-3-ylo]metoksy-N- -metylokarboksyamid
465 (M+H) N-{3-[((3S)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}pirolidynylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-me- tylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
450 (M+H) N-[3-({(3S)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]pirolidynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydy- lo))amino]karboksyamid
416 (M+H) N-{(3S)-1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}- metoksy-N-metylokarboksyamid
421 (M+H+) N-(5-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
407 (M+H+) N-(5-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperydylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
423 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)(pirymidyn-5-yloamino)karboksy- amid
PL 216 049 B1 cd. tabeli
1 2
438 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo](pirymidyn-5-yloamino)- karboksyamid
401 (M+H) metylo 1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperydyn-4-karboksylan
387 (M+H) metylo 1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperydyn-4-karboksylan
392 (M+H) metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
441 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(5-metyloizoksazol-3-ylo)- amino]karboksyamid
426 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karbo- ksyamid
465 (M+H) ({5-[((3R)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metylo]-3-fluorofenylo}amino)-N-(3- -pirydylo)karboksyamid
450 (M+H) {[5-({(3R)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-3-fluorofenylo]amino}-N-(3-pirydylo)- karboksyamid
416 (M+H) N-[(3R)-1-({5-fluoro-3-[(N-(3-pirydylo)karbamoilo)amino]fenylo}metylo)(3-piperydylo)]metoksy-N- -metylokarboksyamid
479 (M+H) ({5-[((3R)-3-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metylo]-3-fluorofenylo}amino)-N-(6- -metylo(3-pirydylo))karboksyamid
464 (M+H) {[5-({(3R)-3-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-3-fluorofenylo]amino}-N-(6-metylo(3-pi- rydylo))karboksyamid
430 (M+H) N-{(3R)-1-[(5-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}me- toksy-N-metylokarboksyamid
378 (M+H) metylo 4-({3-fluoro-5-[(isoksazol-3-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
412 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylo)(izoksazol-3-yloamino)karboksyamid
427 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo](isoksazol-3-yloamino)kar- boksyamid
450 (M+H) N-[5-fluoro-3-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo)ami- no]karboksyamid
462 (M-H) N-[3-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo)ami- no]karboksyamid
479 (M+H) N-{3-[(4-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metyl]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pi- rydylo))amino]karboksyamid
430 (M+H) N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}meto- ksy-N-metylokarboksyamid
414 (M+H) N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-me- tyloacetamid
403 (M+H) metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(2-metylopirymidyn-5-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
436 (M+H) N-[5-fluoro-3-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo](3-pirydyloamino)karbo- ksyamid
448 (M+H) N-[3-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-5-fluorofenylo]-(3-pirydyloamino)karbo- ksyamid
465 (M+H) N-{3-[(4-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metyl]-5-fluorofenylo}(3-pirydyloamino)- karboksyamid
PL 216 049 B1
cd. tabel
1 2
416 (M+H) N-[1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)(4-piperydylo)]metoksy-N-metylo- karboksyamid
400 (M+H) N-[1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)(4-piperydylo)]-N-metyloacetamid
453 (M+H) N-[5-fluoro-3-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]- karboksyamid
467 (M+H) N-[3-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-5-fluorofenylo]-[(4-fluorofenylo)amino]kar- boksyamid
482 (M+H) N-{3-[(4-{[(dimetyloamino)sulfonylo]metyloamino}piperydylo)metyl]-5-fluorofenylo}[(4-fluorofenylo)- amino]karboksyamid
433 (M+H) N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}metoksy-N- -metylokarboksyamid
417 (M+H) N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-metylo- acetamid
472 (M+H) (tert-butoksy)-N-{1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-pi- perydylo)}-N-metylokarboksyamid
458 (M+H) (tert-butoksy)-N-[1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)(4-piperydy!o)]-N- -metylokarboksyamid
475 (M+H) (tert-butoksy)-N-{1-[(3-fluoro-5-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydy- lo)}-N-metylokarboksyamid
371 (M+H) N-(5-fluoro-3-{[4-(metyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
356 (M+H) N-(5-fluoro-3-{[4-(metyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
378 (M+H) metylo 4-({4-fluoro-3-[(1,3-oksazol-2-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
392 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
403 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(2-metylopirymidyn-5-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
391 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(1-metylopirazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
391 (M-H) 1-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperydyn-4-karboksylowy kwas
379(M-H) 1-({3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperydyn-4-karboksylowy kwas
345 (M+H) N-[2-fluoro-5-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo)amino]karboksyamid
339 (M+H) metylo 4-({4-fluoro-3-[(pirymidyn-5-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
430 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}me- toksy-N-metylokarboksyamid
444 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}eto- ksy-N-metylokarboksyamid
458 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N- -metylo(metyloetoksy)karboksyamid
414 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N- -metyloacetamid
428 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-N- -metylopropanoamid
PL 216 049 B1 cd. tabeli
1 2
442 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}-2- -metylo-N-metylopropanoamid
393 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(5-metylo(1,3,4-oksadiazol-2-ylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
392 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(4-metylo(1,3-oksazol-2-ylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
418 (M+H) metylo 4-[(4-chloro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
416 (M+H) etylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
430 (M+H) metyloetylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
386 (M+H) N-{5-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
400 (M+H) N-{2-fluoro-5-[(4-propanoilopiperazynylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
414 (M+H) N-(2-fluoro-5-{[4-(2-metylopropanoilo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
458 (M+H) N-[5-({(3R)-3-[(tert-butoksy)-N-metylokarbonyloamino]pirolidynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-mety- lo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
358 (M+H) N-(5-{[(3R)-3-(metyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
416 (M+H) N-(5-{[(3R)-3-(metoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3- pirydylo))amino]karboksyamid
430 (M+H) N-(5-{[(3R)-3-(etoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
444 (M+H) N-[5-{(3R)-3-[N-metylo(metyloetoksy)karbonyloamino]pirolidynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-mety- lo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
400 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}- -N-metyloacetamid
414 (M+H) N-(5-{[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperydylo]metylo}-3-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo)amino]- karboksyamid
400 (M+H) N-(3-fluoro-5-{[4-(N-metylokarbamoilo)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo)amino]karbo- ksyamid
472 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}- (tert-butoksy)-N-metylokarboksyamid
398 (M+H) metylo 4-[(4-metylo-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
488 (M+H) tert-butylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan
446 (M+H) metylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan
460 (M+H) etylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan
474 (M+H) metyloetylo (2S)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-metoksymetylo)piperazynokarboksylan
430 (M+H) N-(5-{[(3S)-4-acetylo-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
PL 216 049 B1
cd. tabel
1 2
444 (M+H) N-(5-{[(3S)-3-(metoksymetylo)-4-propanoilopiperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydy- lo))amino]karboksyamid
458 (M+H) N-(5-{[(3S)-3-(metoksymetylo)-4-(2-metylopropanoilo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-me- tylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
416 (M+H) N-(5-{[(3S)-3-(metoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3- -pyrydylo))amino]karboksyamid
430 (M+H) N-(5-{[(3S)-3-(etoksy-N-metylokarbonyloamino)pirolidynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pi- rydylo))amino]karboksyamid
444 (m+H) N-[5-({(3S)-3-[N-metylo(metyloetoksy)karbonyloamino]pirolidynylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-mety- lo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
400 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}- -N-metyloacetamid
414 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}- -N-metylopropanoamid
428 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}- -2-metylo-N-metylopropanoamid
430 (M+H) N-(2-fluoro-5-{[4-(metoksy-N-metylokarbonyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydy- lo))amino]karboksyamid
444 (m+H) N-(5-{[4-(etoksy-N-metylokarbonyloamino)piperydylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
458 (M+H) N-[2-fluoro-5-({4-[N-metylo(metyloetoksy)karbonyloamino]piperydylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pi- rydylo))amino]karboksyamid
414 (M+H) N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-me- tyloacetamid
428 (M+H) N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-N-me- tylopropanoamid
442 (M+H) N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydylo)}-2-me- tylo-N-metylopropanoamid
414 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}- -N-metylopropanoamid
428 (M+H) N-{(3R)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]pirolidyn-3-ylo}- -2-metylo-N-metylopropanoamid
373 (M+H) N-{5-[((3S,5R)-3,5-dimetylomorfolin-4-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
430 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}- metoksy-N-metylokarboksyamid
444 (m+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}- etoksy-N-metylokarboksyamid
458 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}- -N-metylo(metyloetoksy)karboksyamid
444 (m+H) tert-butylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
414 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}- -N-metyloacetamid
344 (m+H) N-[2-fluoro-5-(piperazynylometylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
446 (M+H) metylo (2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan
PL 216 049 B1 cd. tabeli
1 2
430 (M+H) N-(5-{[(3R)-4-acetylo-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
460 (M+H) etylo (2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-metoksymetylo)piperazynokarboksylan
474 (M+H) metyloetylo (2R)-4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2-(metoksymetylo)piperazynokarboksylan
466 (M+H) N-(5-{[(3R)-3-(metoksymetylo)-4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3- -pirydylo)amino]karboksyamid
372 (M+H) N-(5-{[(3S)-3-(metyloamino)piperydylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
428 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}- -N-metylopropanoamid
442 (M+H) N-{(3S)-1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](3-piperydylo)}- -2-metylo-N-metylopropanoamid
458 (M+H) tert-butylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan
400 (M+H) N-(3-{[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperydylo]metylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
389 (M+H) metylo 4-({4-fluoro-3-[(pirydazyn-4-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
480 (M+H) N-(5-{[(3R)-4-(etylosulfonylo)-3-(metoksymetylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)[6-metylo(3-pi- rydylo)amino]karboksyamid
386 (M+H) N-(5-fluoro-3-{[4-(N-metylokarbamoilo)piperydylo]metylo}fenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
378 (M+H) metylo 4-({4-fluoro-3-[(isoksazol-3-yloamino)karbonyloamino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
400 (M+H) N-{3-[((1S)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
400 (M+H) N-{5-[((1S)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
416 (M+H) metylo 4-[(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
430 (M+H) etylo 4-[(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
400 (M+H) N-{3-[(4-acetylopiperazynylo)etylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
358 (M+H) N-[5-(1,4-diazaperhydroepinylometylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karboksyamid
416 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan
430 (M+H) etylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan
444 (M+H) metyloetylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan
400 (M+H) N-{5-[(4-acetylo(1,4-diazaperhydroepinylo))metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
401 (M+H) N-{5-[(1,4-dioksa-8-azaspiro[4.5]dec-8-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
373 (M+H) N-{2-fluoro-5-[(4-metoksypiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
357 (M+H) N-[5-(azaperhydroepinylometylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
PL 216 049 B1
cd. tabel
1 2
426 (M+H) N-{2-fluoro-5-[(4-piperydylopiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
455 (M+H) N-(5-{[4-(cykloheksylometoksy)piperydylo]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
375 (M+H) N-(2-fluoro-5-{[2-(hydroksymetylo)morfolin-4-ylo]metylo}fenylo)-[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
389 (M+H) N-(2-fluoro-5-{[2-(metoksymetylo)morfolin-4-ylo]metylo}fenylo)-[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
420 (M+H) metylo 4-[(2,4-difluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazyno karboksylan
401 (M+H) N-{2-fluoro-5-[(4-propoksypiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
357 (M+H) N-{2-fluoro-5-[(4-metylopiperydylo)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
465 (M+H) N-[5-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo](1,4-diazaperhydroepinylo)}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3- -pirydylo))amino]karboksyamid
444 (m+H) propylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-1,4-diazaperhydroepinokarboksylan
400 (M+H) N-{3-[((1R)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pi- rydylo))amino]karboksyamid
436 (M+H) N-(2-fluoro-5-{[4-(metylosulfonylo)(1,4-diazaperhydroepinylo)]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
449 (M+H) N-{3-[((1R)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6- -metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
450 (M+H) N-(5-{[4-(etylosulfonylo)(1,4-diazaperhydroepinylo)]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
449 (M+H) N-{5[((1R)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6- -metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
465 (M+H) N-[2-fluoro-5-({4-[(metyloetylo)sulfonylo](1,4-diazaperhydroepinylo)}metylo)fenylo][(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
449 (M+H) N-{3-[((1S)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6- -metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
449 (M+H) N-{5-[((1S)-8-metylo-7,7-diokso-7-tia-3,6,8-triazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6- -metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
400 (M+H) N-{5-[((1R)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
418 (M+H) metylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metoksy(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
402 (M+H) N-{5-[((1R)-7-okso-8-oksa-3,6-diazabicyklo[4.3.0]non-3-ylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
438 (M+H) metylo 4-[(2,4,5-trifluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
451 (M+H) N-[2-fluoro-5-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo)ami- no]karboksyamid
414 (M+H) N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-5-fluorofenylo}[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karboksyamid
430 (M+H) metylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan
PL 216 049 B1 cd. tabeli
1 2
475 (M+H) (tert-butoksy)-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydy- lo)}-N-metylokarboksyamid
475(M+H) N-(2-fluoro-5-{[4-(metyloamino)piperydylo]metylo}fenylo)[(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid
413 (M+H) metylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
427 (M+H) etylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
441 (M+H) metyloetylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
397 (M+H) N-{3-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-5-fluorofenylo}[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karboksyamid
462 (M+H) N-[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-5-fluorofenylo][(6-cyjano(3-pirydylo))ami- no]karboksyamid
447 (M+H) [(6-cyjano(3-pirydylo))amino]-N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-5-fluorofenylkarboksy- amid
453 (M+H) N-[2-fluoro-5-({4-[metylo(metylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]- karboksyamid
467 (M+H) N-[5-({4-[(etylosulfonylo)metyloamino]piperydylo}metylo)-2-flourofenylo][(4-fluoropenylo)amino]kar- boksyamid
458 (M+H) tert-butylo (3S)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan
416 (M+H) metylo (3S)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan
416 (M+H) metylo (3R)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan
398 (M+H) metylo 4-[(2-metylo-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
418 (M+H) metylo 4-[(2-chloro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
429 (M+H) 2-{4-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynylo}-N,N-di- metyloacetamid
444 (M+H) etylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
400 (M+H) N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-5-fluorofenylo}(3-pirydyloamino)karboksyamid
416 (M+H) metylo 4-(3-{3-fluoro-5-[(3-pirydyloamino)karbonyloamino]fenylo}propylo)piperazynokarboksylan
450 (M+H) N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-5-fluorofenylo)(3-pirydyloamino)karboksyamid
444 (M+H) etylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan
458 (M+H) metyloetylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan
464 (M+H) N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-5-fluorofenylo)[-(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
479 (M+H) N-[3-(3-{4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}propylo)-5-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
430 (M+H) N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-5-fluorofenylo}[(6-metoksy(3-pirydylo))amino]karboksyamid
PL 216 049 B1
cd. tabel
1 2
446 (M+H) metylo 4-[3-(3-fluoro-5-{[(6-metoksy(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan
480 (M+H) N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-5-fluorofenylo)[(6-metoksy(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
430 (M+H) metylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
358 (M+H) N-(5-{[((3S)pirolidyn-3-ylo)metyloamino]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
458 (M+H) tert-butylo (3R)-3-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}pirolidynokarboksylan
358 (M+H) N-(5-{[((3R)pirolidyn-3-ylo)metyloamino]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
444 (M+H) N-etylo-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydy- lo)}metoksykarboksyamid
458 (M+H) etoksy-N-etylo-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-pi- perydylo)}karboksyamid
478 (M+H) N-[5-({4-[etylo(etylosulfonylo)amino]piperydylo}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]- karboksyamid
428 (M+H) N-etylo-N-{1-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo](4-piperydy- lo)}acetamid
413 (M+H) metylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fuorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
427 (M+H) etylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
441 (M+H) metyloetylo 4-[(3-{[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
397 (M+H) N-{5-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-cyjano(3-pirydylo))amino]karboksyamid
452 (M+H) metylo 4-[(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-5-(trifluorometylo)fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
398 (M+H) metylo 4-[(2-metylo-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
420 (M+H) metylo 4-[(2,6-difluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
436 (M+H) metylo 4-[(4-chloro-2-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
458 (M+H) tert-butylo 4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
416 (M+H) metylo 4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
430 (M+H) etylo 4-[(1R)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
444 (M+H) etylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
458 (M+H) metyloetylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
414 (M+H) [(6-acetylo(3-pirydylo))amino]-N-{5-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}karboksyamid
PL 216 049 B1 cd. tabeli
430 (M+H) metylo 4-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}piperydyn grupę karboksylową
414 (M+H) N-(5-{[(1-acetylo(4-piperydylo))metyloamino]metylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]- karboksyamid
464 (M+H) N-[5-({[1-(etylosulfonylo)(4-piperydylo)]metyloamino}metylo)-2-fluorofenylo][(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
446 (M+H) N-{5-[({2-[(tert-butoksy)-N-metylokarbonyloamino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-me- tylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
449 (M+H) N-{5-[({2-[(tert-butoksy)-N-metylokarbonyloamino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(4-flu- orofenylo)amino]karboksyamid
418 (M+H) metylo 4-[(2-chloro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
452 (M+H) metylo 4-[(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-(trifluorometylo)fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
458 (M+H) tert-butylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
416 (M+H) metylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
430 (M+H) etylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
430 (M+H) metylo 4-[(3-{[(6-acetylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}-4-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
348 (M+H) N-[2-fluoro-5-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid
346 (M+H) N-[2-fluoro-5-({metyl[2-(metyloamino)etylo]amino}metylo)fenyl][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
349 (M+H) N-[2-fluoro-5-({metyl[2-(metyloamino)etylo]amino}metylo)fenyl][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid
407 (M+H) N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}etylo)metoksy- -N-metylokarboksyamid
391 (M+H) N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}etylo)-N-me- tyloacetamid
409 (M+H) metylo 4-[(2-cyjano-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
420 (M+H) metylo 4-[(3,4-difluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
427 (M+H) N-{2-fluoro-5-[(metyl{2-[metylo(metylosulfonylo)amino]etylo}amino)metylo]fenylo}[(4-fluorofenylo)- amino]karboksyamid
441 (M+H) N-{5-[({2-[(etylosulfonylo)metyloamino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(4-fluorofenylo)- amino]karboksyamid
348 (M+H) N-[5-fluoro-3-(morfolin-4-ylometylo)fenylo][(4-fluorofenylo)amino]karboksyamid
404 (M+H) N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}ety- lo)metoksy-N-metylokarboksyamid
388 (M+H) N-(2-{[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]metyloamino}etylo)- -N-metyloacetamid
440 (M+H) tert-butylo 4-[(1S)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
340 (M+H) N-[3-((1S)-1-piperazynyletylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
PL 216 049 B1
cd. tabel
1 2
398 (M+H) metylo 4-[(1S)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
412 (M+H) etylo 4-[(1S)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
432 (M+H) N-(3-{(1S)-1-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]etylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
382 (M+H) N-{3-[(1S)-1-(4-acetylopiperazynylo)etylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
424 (M+H) N-{2-fluoro-5-[(metyl{2-[metylo(metylosulfonylo)amino]etylo}amino)metylo]fenylo}[(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
438 (M+H) N-{5-[({2-[(etylosulfonylo)metyloarnino]etylo}metyloamino)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-piry- dylo))amino]karboksyamid
398 (M+H) metylo 4-[(1R)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
412 (M+H) etylo 4-[(1R)-1-(3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
416 (M+H) metylo 4-[(1S)-1-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
430 (M+H) etylo 4-[(1S)-1-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
400 (M+H) N-{3-[(1S)-1-(4-acetylopiperazynylo)etylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
420 (M+H) metylo 4-[(2,4-difluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
420 (M+H) metylo 4-[(2,5-difluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
398 (M+H) metylo 4-[2-(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
412 (M+H) etylo 4-[2-(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylan
432 (M+H) N-(3-{2-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]etylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
430 (M+H) metylo 4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan
472 (M+H) tert-butylo 4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan
400 (M+H) metylo 4-[(2-hydroksy-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
434 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-hydroksyfenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
411 (M+H) N-(3-{2-[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperazynylo]etylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
447 (M+H) N-[3-(2-{4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}etylo)fenylo][-(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
418 (M+H) [(6-metylo(3-pirydylo))amino]-N-(3-{2-[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]etylo}fenylo)karboksyamid
414 (M+H) etylo 4-[(2-hydroksy-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
420 (M+H) N-(2-hydroksy-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]kar- boksyamid
382 (M+H) N-{3-[2-(4-acetylopiperazynylo)etylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
PL 216 049 B1 cd. tabeli
1 2
372 (M+H) N-[2-fluoro-3-(3-piperazynylpropylo)fenylo][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamid
464 (M+H) N-(3-{3-[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]propylo}-2-fluorofenylo)[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
414 (M+H) N-{3-[3-(4-acetylopiperazynylo)propylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo-(3-pirydylo))amino]karboksyamid
444 (M+H) etylo 4-[3-(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)propylo]piperazynokarboksylan
416 (M+H) metylo 4-[(3-{[(1-hydroksy-6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
434 (M+H) metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(1-hydroksy-6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
506 (M+H) fenylometylo (2S,6R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2,6-dimetylopiperazynokarboksylan
414 (M+H) N-{3-[((3S,5R)-4-acetylo-3,5-dimetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
444 (M+H) tert-butylo 4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
416 (M+H) etylo 4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
386 (M+H) ({3-[(4-acetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}amino)-N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid
451 (M+H) {[3-({4-[(dimetyloamino)sulfonylo]piperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo]amino}-N-(6-metylo(3-pirydy- lo))karboksyamid
415 (M+H) [(3-{[4-(N,N-dimetylokarbamoilo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydy- lo))karboksyamid
436 (M+H) [(3-{[4-(etylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo)karboksy- amid
422 (M+H) [(2-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo))karbo- ksyamid
430 (M+H) metylo (2S,6R)-4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]-2,6-dimetylopiperazynokarboksylan
372 (M+H) N-{3-[((3S,5R)-3,5-dimetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}-[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
392 (M+H) metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(5-metyloizoksazol-3-ylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
405 (M+H) metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(4-fluorofenylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
413 (M+H) metylo 4-[(3-{[N-(6-cyjano(3-pirydylo))karbamoilo]amino}-2-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
430 (M+H) metylo 4-[(3-{[N-(6-acetylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}-2-fluorofenylo)metylo]piperazynokarboksylan
456 (M+H) metylo 4-{[2-fluoro-3-({N-[6-(trifluorometylo)(3-pirydylo)]karbamoilo}amino)fenylo]metylo}piperazynokarboksylan
388 (M+H) metylo 4-({2-fluoro-3-[(N-(4-pirydylo)karbamoilo)amino]fenylo}metylo)piperazynokarboksylan
463 (M+H) [(3-{[4-(azetydynylosulfonylo)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-metylo(3-pirydylo))- karboksyamid
472 (M+H) tert-butylo (5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]-3,5-dimetylopiperazynokarboksylan
PL 216 049 B1 cd. tabeli
1 2
430 (M+H) metylo (5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]-3,5-dimetylopiperazynokarboksylan
414 (M+H) ({3-[((6S,2R)-4-acetylo-2,6-dimetylopiperazynylo)metylo]-2-fluorofenylo}amino)-N-(6-metylo(3-piry- dylo))karboksyamid
443 (M+H) {(5S,3R)-4-[(2-fluoro-3-{[N-(6-metylo(3-pirydylo))karbamoilo]amino}fenylo)metylo]-3,5-dimetylopipe- razynylo}-N,N-dimetylokarboksyamid
464 (M+H) [(3-{[(6S,2R)-4-(etylosulfonylo)-2,6-dimetylopiperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)amino]-N-(6-mety- lo(3-pirydylo))karboksyamid
479 (M+H) {[3-({(6S,2R)-4-[(dimetyloamino)sulfonylo]-2,6-dimetylopiperazynylo}metylo)-2-fluorofenylo]amino}- -N-(6-metylo(3-pirydylo))karboksyamid
382 (M+H) N-[2-fluoro-3-(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazyn-7-ylometylo)fenyl][(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbo- ksyamid
396 (M+H) N-{2-fluoro-3-[(3-metylo(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazyn-7-ylo))metylo]fenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))- amino]karboksyamid
410 (M+H) N-{3-[(3-etylo(1,2,4-triazolo[3,4-c]piperazyn-7-ylo))metylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo)ami- no]karboksyamid
408 (M+H) N-(2-fluoro-3-{[4-(metylosulfonylo)piperazynylo]metylo}fenylo)(4-pirydyloamino)karboksyamid
422 (M+H) N-(3-{[4-(etylosulfony(o)piperazynylo]metylo}-2-fluorofenylo)(4-pirydyloamino)karboksyamid
402 (M+H) metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylan
P r z y k ł a d 10
Oznaczenia rozpoznania celu
Oznaczenie specyficzności: Specyficzność względem miozyny z serca oceniano porównując wpływ związku chemicznego na stymulowaną aktyną aktywność ATPazy w izoformach miozyny: z mięśnia sercowego, szkieletowego i mięśnia gładkiego, przy określonym stężeniu związku badanego 50 μΜ lub wielu rożnych stężeniach tego zawiązku.
P r z y k ł a d 11
Modele in vitro modyfikacji zależnej od dawki aktywności ATPazy miozyny z serca
Oznaczenie sarkomeru z serca po rekonstrukcji: Zależność od dawki mierzono stosując oznaczanie aktywności ATPazy oparte na sprzężeniu kinazy pirogronianowej i dehydrogenazy mleczanowej z buforowaniem wapniem, w którym stosowano następujące odczynniki (stężenia wyrażono jako końcowe stężenie w teście): sól potasową PIPES (12 mM), MgCI2 (2 mM), ATP (1 mM), DTT (1 mM), BSA (0,1 mg/ml), NADH (0,5 mM), PEP (1,5 mM), kinazę pirogronianu (4 U/ml), dehydrogenazę mleczanową (8 U/ml) i środek przeciwpieniący (90 ppm). Wartość pH w temperaturze 22°C doprowadzono do 6,80 przez dodanie wodorotlenku potasu. Poziomy wapnia kontrolowano stosując układ buforujący zawierający 0,6 mM EGTA i różne stężenia wapnia, aby uzyskać stężenie wolnego wapnia równe 1 x 104 M do 1 x 10-8 M.
Składniki białkowe specyficznie stosowane w tym teście obejmują podfragment-1 bydlęcej miozyny sercowej (typowo 0,5 μΜ), bydlęcą aktynę sercową (14 μΜ), bydlęcą tropomiozynę sercową (typowo 3 μΜ) i bydlęcą troponinę sercową (typowo 3-8 μΜ). Dokładne stężenia tropomiozyny i troponiny wyznaczono doświadczalnie, miareczkując aby uzyskać największą różnicę w aktywności ATPazy po zmierzeniu w obecności 2 mM EGTA w porównaniu do zmierzonej w obecności 0,1 mM CaCI2. Dokładne stężenie miozyny w teście również wyznaczono doświadczalnie, miareczkując, aby uzyskać żądaną szybkość hydrolizy ATP. Wartość ta jest różna w różnych preparatach białkowych, ze względu na zmienny udział aktywnych cząsteczek w każdym preparacie.
Zależność od dawki jest typowo mierzona przy stężeniu wapnia odpowiadającym 25% lub 50% najwyższej aktywności ATPazy (pCa25 lub pCa50), tak więc wstępny eksperyment wykonuje się aby zbadać aktywność ATPazy w odpowiedzi na stężenie wolnego wapnia w zakresie 1x10-4 M do 1x10-8 M. Następnie, mieszaninę testową doprowadzono do pCa50 (typowo 3x10-7 M). Testy wykonywano przy62
PL 216 049 B1 gotowując na początku serię rozcieńczeń badanego związku, przy czym każda z mieszanin testowych zawierała sól potasową PIPES, MgCI2, BSA, DTT. kinazę pirogronianową, dehydrogenazę mleczanową, podfragment-1 miozyny, środek przeciwpieniący, EGTA, CaCI2 i wodę. Analizę rozpoczynano dodając równą objętość roztworu zawierającego sól potasową PIPES, MgCI2, BSA, DTT, ATP, NADH, PEP, aktynę, tropomiozynę, troponinę, środek przeciwpieniący i wodę. Hydrolizę ATP monitorowano na podstawie absorbancji przy długości fali 340 nm. Otrzymaną krzywą zależności od dawki dopasowano stosując równanie z 4 parametrami y = wartość dolna + ((wartość górna - wartość dolna)/(1+((EC50/X)Anachylenie))). AC1.4 zdefiniowano jako stężenie przy którym aktywność ATPazy jest 1,4-krotnie wyższa niż dolna wartość krzywej.
Oznaczenie z użyciem miofibrylli z mięśnia sercowego: Aby ocenić wpływ związku chemicznego według wynalazku na aktywność ATPazy w pełnej długości miozynie serca w odniesieniu do naturalnego sarkomeru, wykonywano testy na pozbawionym błony włókienku mięśniowym. Miofibrylle z mięśnia sercowego otrzymano homogenizując tkankę sercową w obecności niejonowego detergentu. Taka obróbka usuwa błony i większość rozpuszczalnych cytoplazmatycznych białek, lecz pozostawia nienaruszony aparat sarkomerowy akto-miozyny sercowej. Preparaty miofibrylli zachowują zdolność do katalizy ATP w sposób zależny od stężenia Ca++. Aktywność ATPazy w takich preparatach miofibrylli w obecności i przy braku związku chemicznego według wynalazku oznaczano przy stężeniach Ca++ w obrębie całego zakresu odpowiedzi wapniowej, lecz przy preferowanych stężeniach wapnia, dających 25%, 50% i 100% maksymalnej szybkości.
Miofibrylle mogą być uzyskiwane bądź ze świeżej tkanki mięśniowej bądź z mrożonej tkanki, która została bardzo szybko rozmrożona. Tkankę drobno posiekano i ponownie zawieszono w buforze rozkurczającym zawierającym następujące odczynniki (stężenia wyrażono jako końcowe stężenia roztworów): Tris-HCI (10 mM), MgCI2 (2 mM), KCI (75 mM), EGTA (2 mM), NaN3 (1 mM), ATP (1 mM), fosfokreatynę (4 mM), BDM (50 mM), DTT (1 mM), benzamidynę (1 mM), PMSF (0,1 mM), leupeptynę (1 μg/ml), pepstatynę (1 μg/ml) i triton X-100 (1%). Wartość pH w temperaturze 4°C doprowadzono do 7,2 przez dodanie HCI. Po dodaniu EDTA do 10 mM, tkankę rozdrobniono ręcznie w temperaturze 4°C, w zimnym pokoju i homogenizowano stosując duży homogenizator miksujący (Omni Mixer). Po obróbce przez 10 sekund, materiał osadzano przez wirowanie (5 minut, 2000 x g maksimum, 4°C). Miofibrylle następnie ponownie zawieszono w buforze standardowym zawierającym następujące odczynniki (stężenia wyrażono jako końcowe stężenia roztworów): Tris-HCI (10 mM) pH 7,2 w temperaturze 4°C, MgCI2 (2 mM), KCI (75 mM), EGTA (2 mM), NaN3 (1 mM), Triton X-100 (1%), stosując szklany homogenizator do tkanek ze szklanym ucierakiem (Kontes) do uzyskania gładkiej konsystencji, zwykle 4-5 przesunięć. Osad włókienek mięśniowych przemywano kilka razy krótko homogenizując, stosując homogenizator rotor-stator w 10 objętościach buforu standardowego, a następnie żwirowano. Aby usunąć detergent, miofibrylle przemywano dodatkowo kilka razy buforem standardowym bez Tritonu X-100. Miofibrylle następnie poddano trzem przebiegom filtracji grawitacyjnej stosując nylonową siatkę o oczkach 600, 300 i na koniec 100 μm (Spectrum Lab Products), aby uzyskać homogeniczne mieszaniny i osadzono osad. Na koniec, miofibrylle ponownie zawieszono w buforze do przechowywania zawierającym następujące odczynniki (stężenia wyrażono jako końcowe stężenia roztworów): sól potasową PIPES (12 mM), MgCI2 (2 mM) i DTT (1 mM). Stałą sacharozę dodano jednocześnie mieszając aby uzyskać stężenie 10% (masa/obj.), a następnie błyskawicznie zamrażano próbki przez zanurzenie w płynnym azocie i przechowywano w temperaturze -80°C.
Zależność od dawki mierzono stosując oznaczanie aktywności ATPazy oparte na sprzężeniu kinazy pirogronianowej i dehydrogenazy mleczanowej z buforowaniem wapniem, w którym stosowano następujące odczynniki (stężenia wyrażono jako końcowe stężenie w teście): sól potasową PIPES (12 mM), MgCI2 (2 mM), ATP (0,05 mM), DTT (1 mM), BSA (0,1 mg/ml), NADH (0,5 mM), PEP (1,5 mM), kinazę pirogronianu (4 U/ml), dehydrogenazę mleczanową (8 U/ml) i środek przeciwpieniący (90 ppm). Wartość pH doprowadzono do 6,80 w temperaturze 22°C przez dodanie wodorotlenku potasu. Poziomy wapnia kontrolowano stosując układ buforujący zawierający 0,6 mM EGTA i różne stężenia wapnia, aby uzyskać stężenie wolnego wapnia równe 1 x 10-4 M do 1 x 10-8 M. Stężenie miofibrylli w ostatecznym oznaczeniu wynosi typowo 0,2 do 1 mg/ml.
Zależność od dawki jest typowo mierzona przy stężeniu wapnia odpowiadającym 25%, 50%, lub 100% najwyższej aktywności ATPazy (pCa25, pCa50, pCa100), tak więc wstępny eksperyment wykonuje się aby zbadać aktywność ATPazy w odpowiedzi na stężenie wolnego wapnia w zakresie 1 x 10-4 M do 1 x 10-8 M. Następnie, mieszaninę testową doprowadzono do pCa50 (typowo 3 x 10-7 M). Testy wykonywano przygotowując na początku serię rozcieńczeń badanego związku, każdy z miePL 216 049 B1 szaniną testową zawierającą sól potasową PIPES, MgCI2, BSA, DTT, kinazę pirogronianową, dehydrogenazę mleczanową, miofibryle z serca, środek przeciwpieniący, EGTA, CaCI2 i wodę. Analizę rozpoczynano dodając równą objętość roztworu zawierającego sól potasową PIPES, MgCI2, BSA, DTT, ATP, NADH, PEP, środek przeciwpieniący i wodę. Hydrolizę ATP monitorowano na podstawie absorbancji przy długości fali 340 nm. Otrzymaną krzywą zależności od dawki dopasowano stosując równanie z 4 parametrami y = wartość dolna + ((wartość górna - wartość dolna)/(1+((EC50/X)A nachylenie))). AC1.4 zdefiniowano jako stężenie przy którym aktywność ATPazy jest 1,4-krotnie wyższa niż dolna wartość krzywej.
P r z y k ł a d 12
Oznaczenie włókien mięśniowych
Przygotowanie preparatu z włókien mięśniowych z mięśnia komory serca dorosłych szczurów
Dorosłe samce szczurów Sprague-Dawley usypiano mieszaniną izofluranu gazowego i tlenu. Serca szybko wycinano, przemywano i na aortę wstępującą zakładano kaniulę. Na sercu zainicjowano stałą perfuzję wsteczną przy ciśnieniu perfuzji 60 cm H2O. Serce poddawano wstępnie perfuzji zmodyfikowanym roztworem Krebsa nominalnie wolnym od Ca2+ o następującym składzie: 110 mM NaCI, 2,6 mM KCI, 1,2 mM KH2PO4 7H2O, 1,2 mM MgSO4, 2,1 mM NaHCO3, 11 mM glukoza i 4 mM Hepes (wszystkie odczynniki z Sigma). Roztwór ten nie jest ponownie wprowadzany do krążenia i jest stale nasycany gazowym O2. W przybliżeniu po 3 minutach serce poddawano perfuzji zmodyfikowanym buforem Krebsa uzupełnionym 3,3% kolagenazą (aktywność 169 μ/mg, klasa II, Worthington Biochemical Corp., Freehold, N.J.) i 25 μΜ końcowym stężeniem wapnia, aż serce stało się dostatecznie wybielone i miękkie. Serce usuwano z kaniuli, odrzucono przedsionki i naczynia, a komory pocięto na małe kawałki. Włókna mięśniowe zawieszono łagodnie wstrząsając tkanki komór w świeżym roztworze Krebsa zawierającym kolagenazę, przed poddaniem ich łagodnemu przetłaczaniu przez nylonową siatkę o wielkości oczek 200 μm w probówce a 50 cm. Otrzymane włókna mięśniowe ponownie zawieszono w zmodyfikowanym roztworze Krebsa zawierającym 25 μΙ^ wapnia. Włókna mięśniowe uzyskano tak, aby były tolerancyjne na wapń, dzięki dodaniu roztworu wapnia (roztwór wyjściowy 100 mM) w odstępach 10 minutowych, aż uzyskano 100 μΜ stężenie wapnia. Po 30 minutach supernatant odrzucono i do komórek dodano 30-50 ml buforu Tyrode'a (137 mM NaCI, 3,7 mM KCI, 0,5 mM MgCI, 11 mM glukozę, 4 mM Hepes i 1,2 mM CaCI2, pH 7,4). Komórki utrzymywano przez 60 minut w temperaturze 37°C przed rozpoczęciem eksperymentów i stosowano w przeciągu 5 godzin od uzyskania preparatu. Preparaty komórek stosowano tylko jeśli komórki najpierw przeszły kryteria QC w wyniku odpowiedzi na standard (>150% poziomu podstawowego) i izoproterenol (ISO; >250% poziomu podstawowego). Dodatkowo, tylko komórki, których podstawowa kurczliwość jest między 3 a 8% stosowano w kolejnych eksperymentach.
Badanie kurczliwości komorowego włókna mięśniowego dorosłych zwierząt.
Podwielokrotności buforu Tyrode'a zawierającego włókna mięśniowe umieszczono w komorach do perfuzji (seria 20 RC-27NE; Warner Instruments) wyposażonych w platformę grzewczą. Włókna mięśniowe pozostawiono aby przylgnęły (do ścianek komory), komory ogrzewano do temperatury 37°C i komórki następnie perfundowano w temperaturze 37°C stosując bufor Tyrode'a. Włókna mięśniowe stymulowano polem przy 1 Hz elektrodami platynowymi (20% opisanej powyżej wartości progowej). Tylko komórki, które wykazują wyraźne prążkowanie i są unieruchomione przed kroczeniem stosowano w eksperymentach kurczliwości. Do wyznaczania kurczliwości podstawowej, włókna mięśniowe obserwowano przez obiektyw 40 x, stosując przyrząd obrazujący o zmiennej częstotliwości ramki (60-240 Hz) ze sprzężeniem ładunkowym, obrazy digitalizowano i wyświetlano na ekranie komputerowym przy szybkości próbkowania 240 Hz. [Urządzenie do wprowadzania i zapisywania obrazów, stymulator miocytów MyoPacer1 oprogramowanie do zbierania i analizy danych o kurczliwości komórek są dostępne z IonOptix (Milton, Mass., USA).] Po okresie podstawowej kurczliwości t rwaj ącym minimum 5 minut, związki badane (0,01-15 μΜ) perfundowano w obręb włókien mięśniowych przez 5 minut. Po tym czasie, świeży bufor Tyrode'a poddano perfuzji w celu oznaczania charakterystyki wymywania związku. Stosując strategię wykrywania krawędzi, stale rejestrowano kurczliwość włókien mięśniowych i szybkości skurczu i rozkurczu.
Analiza kurczliwości: każdy związek chemiczny badano wykorzystując trzy lub więcej osobne włókna mięśniowe, w tym dwa lub więcej różne preparaty włókien mięśniowych. Dla każdej komórki, dwadzieścia lub więcej przejść kurczliwości przy podstawowej wartości (zdefiniowanej jako 1 min przed wlewem cząsteczki chemicznej) i po dodaniu cząsteczki chemicznej, uśrednia się i porównuje. Te średnie przejść analizowano w celu wyznaczania zmian w długości rozkurczowej i wyznaczono
PL 216 049 B1 stosując oprogramowanie do analizy IonWizard (IonOptix), określono również skrócenie ułamkowe (% obniżenia długości rozkurczowej) i szybkość maksymalnego skurczu i rozkurczu ^m/sekunę). Analizy osobnych komórek połączono. Zwiększenie w skróceniu ułamkowym względem wartości podstawowej wykazuje na wzmocnienie kurczliwości włókna mięśniowego.
Analiza przejścia wapnia: wprowadzenie Fura: Komórki przepuszczalne dla Fura-2 (Molecular Probes) zawieszono w równej ilości pluroniku (Mol Probes) i FBS przez 10 min w temperaturze pokojowej. Roztwór wyjściowy 1 μΜ Fura przygotowano w buforze Tyrode'a zawierającym 500 mM probenecydu (Sigma). Aby wprowadzić odczynnik Fura do komórek, roztwór ten dodano do włókien mięśniowych w temperaturze pokojowej. Po 10 minach usuwano bufor, komórki przemywano buforem Tyrode'a zawierającym probenecyd i inkubowano w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Etap przemywania i inkubacji powtórzono. Jednoczesne pomiary kurczliwości i wapnia przeprowadzono w ciągu 40 minut od wprowadzania.
Obrazowanie: badany związek perfundowano do komórek. Jednocześnie wyznaczono stosunek kurczliwości i przejście wapnia w linii podstawowej i po dodaniu związku. Komórki obrazowano cyfrowo i wyznaczono kurczliwość jak opisano powyżej, stosując czerwony filtr w drodze światła, aby uniknąć interferencji z pomiarami fluorescencyjnymi wapnia. Oprogramowanie i sprzęt komputerowy do zbierania i analizy danych przejścia wapnia otrzymano z IonOptix. Oprzyrządowanie do mierzenia fluorescencji obejmuje lampę ksenonową o wyładowaniu łukowym i źródło światła o podwójnym wzbudzaniu HyperSwitch, które zmienia kolejno długości fal 340 i 380 z częstotliwością 100 Hz z użyciem lustra napędzanego galwanometrem. Wypełnione płynem włókno światłowodowe doprowadza podwójne światło wzbudzenia do mikroskopu i emisja fluorescencji jest wyznaczana przez powielacz fotoelektronowy (PMT). Końcówka układu fluorescencyjnego śledzi sygnał PMT i stosunki są zapisywane przez oprogramowanie gromadzące dane IonWizard.
Analiza: Dla każdej komórki wykonano dziesięć lub więcej pomiarów kurczliwości i po uśrednieniu wyznaczono stosunki przejścia wapnia przy wartościach początkowych i po dodaniu związku i wyniki porównywano. Średnie wartości przejścia skurczu analizowano stosując oprogramowanie do analiz IonWizard do wyznaczania zmian długości rozkurczowej i skrócenia ułamkowego (% obniżenia długości rozkurczowej). Uśrednione stosunki przejścia wapnia analizowano stosując oprogramowanie do analiz IonWizard do wyznaczania zmian w stosunku rozkurczu i skurczu, i 75% czasu względem linii podstawowej (T75).
Próba trwałości: Do wyznaczania trwałości odpowiedzi, włókna mięśniowe prowokowano badanym związkiem przez 25 minut, po którym następowało 2 minutowe przemywanie. Odpowiedź skurczową porównywano w 5 i 25 minucie po wlewie związku.
Potencjał wartości progowej: Włókna mięśniowe stymulowano polem przy napięciu w przybliżeniu 20% opisanej powyżej wartości progowej. W tych eksperymentach napięcie wartości progowej (minimalne napięcie aby uzyskać kroczenie komórki) wyznaczono doświadczalnie, komórki poddano kroczeniu przy wartości progowej, a następnie przeprowadzono wlew badanego związku. Po uzyskaniu stałej aktywności, napięcie obniżono na 20 sekund, a następnie rozpoczęto procedurę od nowa (zrestartowano). Zmiana aktywności kanałów jonowych odpowiada zwiększeniu lub obniżeniu wartości progowej potencjału czynnościowego.
Częstotliwość Hz: Kurczliwość włókien mięśniowych wyznaczono przy częstotliwości 3 Hz następująco: 1 minutowy czas punktu wyjściowego, po którym następuje perfuzja badanego związku przez 5 minut, po czym przez 2 minuty prowadzi się przemywanie. Po całkowitym powrocie kurczliwości komórek do linii podstawowej częstotliwość Hz jest obniżona do 1. Po wstępnym okresie aklimatyzacji komórka jest prowokowana tym samym związkiem. Ponieważ w przypadku szczurów, uzyskuje się częstotliwość siły ujemnej przy 1 Hz, przy 3 Hz FS komórek powinien być niższy, lecz komórki nadal powinny odpowiadać zwiększając swoje skrócenie ułamkowe w obecności badanego związku.
Dodatek izoproterenolu: Aby wykazać, że związek działa poprzez inny mechanizm, niż związek stymulujący receptory adrenergiczne, izoproterenol, do komórek wprowadzano fura-2 i jednocześnie mierzono kurczliwość i wyznaczono stosunki wapniowe. Włókna mięśniowe kolejno prowokowano 5 μm lub mniejszą ilością badanego związku, buforem, 2 nM roztworem izoproterenolu, buforem i połączeniem badanego związku i izoproterenolu.
P r z y k ł a d 13
Model in vitro zależności modyfikacji ATPazy miozyny serca od dawki
Bydlęca i szczurza miozyna sercowa została oczyszczona z odpowiednich tkanek sercowych, ze szkieletowych mięśni królika i z drugich żołądków kurcząt wyodrębniono odpowiednio szkieletową
PL 216 049 B1 miozynę i miozynę z mięśnia gładkiego, stosowane w badaniach specyficzności. Wszystkie miozyny stosowane w testach są przekształcane w rozpuszczalną formę jednogłowową (S1) w wyniku ograniczonej proteolizy chymotrypsiną. Inne składniki sarkomerowe: kompleks troponinowy, tropomiozynę i aktynę oczyszczono z serc bydlęcych (sarkomer sercowy) lub z mięśnia piersiowego krucząt (sarkomer szkieletowy).
Aktywność miozyny monitorowano mierząc szybkości hydrolizy ATP. ATPaza z miozyny jest znacząco aktywowana przez włókna aktynowe. Obrót ATP wykrywa się w teście opartym na sprzężeniu enzymów kinazy pirogronianowej (PK) i dehydrogenazy mleczanowej (LDH). W teście tym każda cząsteczka ADP wytwarzana w wyniku hydrolizy ATP ulega ponownej przemianie do ATP w wyniku działania kinazy pirogronianowej przy jednoczesnym utlenianiu cząsteczek NADH przez dehydrogenazę mleczanową. Utlenienie cząsteczki NADH może być dogodnie monitorowane jako obniżenie absorbancji przy długości fali 340 nm.
Zależność od dawki mierzono stosując oznaczanie aktywności ATPazy oparte na sprzężeniu kinazy pirogronianowej i dehydrogenazy mleczanowej z buforowaniem wapniem, w którym stosuje się następujące odczynniki (stężenia wyrażono jako końcowe stężenie w teście): sól potasową PIPES (12 mM), MgCI2 (2 mM), ATP (1 mM), DTT (1 mM), BSA (0,1 mg/ml), NADH (0,5 mM), PEP-(1,5 mM), kinazę pirogronianu (4 U/ml), dehydrogenazę mleczanową (8 U/ml) i środek przeciwpieniący (90 ppm). Wartość pH doprowadzono do 6,80 w temperaturze 22°C przez dodanie wodorotlenku potasu. Poziomy wapnia kontrolowano stosując układ buforujący zawierający 0,6 mM EGTA i różne stężenia wapnia, aby uzyskać stężenie wolnego wapnia równe 1 x 10-4 M do 1 x 10-8 M.
Składniki białkowe specyficzne dla tego oznaczenia obejmują podfragment-1 bydlęcej miozyny z serca, (typowo 0,5 μΜ), bydlęcą aktynę sercową (14 μΜ), bydlęcą tropomiozynę sercową (typowo 3 μΜ) i bydlęcą troponinę sercową (typowo 3-8 μΜ). Dokładne stężenia tropomiozyny i troponiny wyznaczono doświadczalnie, miareczkując, aby uzyskać największą różnicę w aktywności ATPazy, w pomiarach w obecności 1 mM EGTA, w porównaniu do zmierzonej w obecności 0,2 mM CaCI2. Dokładne stężenie miozyny w teście również wyznaczono doświadczalnie, miareczkując aby uzyskać żądaną szybkości hydrolizy ATP. Wartość ta jest różna w różnych preparatach białkowych, ze względu na zmienny poziom aktywnych cząsteczek w każdym preparacie.
Zależność wpływu związku od jego dawki typowo mierzono przy stężeniu wapnia odpowiadającym 50% najwyższej aktywności ATPazy (pCa50), tak więc wstępny eksperyment wykonuje się aby zbadać aktywność ATPazy w odpowiedzi na stężenie wolnego wapnia w zakresie 1 x 10-4 M do 1 x 10-8 M. Następnie, mieszaninę testową doprowadzono do pCa50 (typowo 3 x 10-7 M). Testy wykonywano przygotowując na początku serię rozcieńczeń badanego związku, każdy z mieszaniną testową zawierającą sól potasową PIPES, MgCI2, BSA, DTT, kinazę pirogronianową, dehydrogenazę mleczanową, podfragment-1 miozyny, środek przeciwpieniący, EGTA, CaCI2 i wodę. Analizę rozpoczynano dodając równą objętość roztworu zawierającego sól potasową PIPES, MgCI2, BSA, DTT, ATP, NADH, PEP, aktynę, tropomiozynę, troponinę, środek przeciwpieniący i wodę. Hydrolizę ATP monitorowano na podstawie absorbancji przy długości fali 340 nm. Otrzymaną krzywą zależności od dawki dopasowano stosując równanie z 4 parametrami y = wartość dolna + ((wartość górna - wartość dolna)/(1+((EC50/X)A nachylenie))). AC 1.4 zdefiniowano jako stężenie przy którym aktywność ATPazy jest 1,4-krotnie wyższa niż dolna wartość krzywej.
Zdolność związku do aktywacji miozyny serca oceniano przez wpływ związku na stymulowaną aktyną aktywność ATPazy podfragmentu 1. Włókna aktynowe w teście dekorowano troponiną i tropomiozyną, i stężenie Ca++ doprowadzono do wartości, która będzie prowadzić do 50% najwyższej aktywacji. Aktywność ATPazy fragmentu S1 mierzono w obecności serii rozcieńczeń badanego związku. Stężenie związku wymagane do 40% aktywacji powyżej szybkości hydrolizy katalizowanej przez ATPazę, gdy szybkość mierzono w obecności kontroli (równoważnik objętości DMSO) przedstawiono jako AC40.
P r z y k ł a d 14
Oznaczenie skrócenia ułamkowego in vivo
Zwierzęta: samce szczurów Sprague Dawley z Charles River Laboratories (275-350 g) stosowano do badań skuteczności dawki uderzeniowej i wlewu. Niewydolność serca u zwierząt opisano poniżej. Zwierzęta hodowano po dwa osobniki na klatkę i miały one swobodny dostęp do pokarmu i wody. Zastosowano minimalny czas aklimatyzacji wynoszący trzy dni przed rozpoczęciem eksperymentów.
PL 216 049 B1
Echokardiografia: Zwierzęta usypiano izofluranem i utrzymywano na stole operacyjnym w trakcie całej procedury. Ciepłota głęboka ciała była utrzymywana na poziomie 37°C stosując poduszki grzejące. Po uśpieniu zwierzęta ogolono i stosowano golarkę, aby usunąć wszystkie ślady futra z okolic klatki piersiowej. Obszar klatki piersiowej przygotowywano dalej nanosząc 70% ETOH i żel ultrasonograficzny. Stosując sprzęt do ultrasonografii GE System Vingmed (General Electric Medical System), sondę 10 MHz umieszczono na ścianie klatki piersiowej i obrazy rejestrowano w widoku wzdłuż krótkiej osi na poziomie mięśni brodawkowych. Obrazy w trybie 2-D M lewej komory rejestrowano przed i po, związek wprowadzano jako dawkę uderzeniową lub wlew. Skrócenie ułamkowe in vivo ((końcowa średnica rozkurczowa - końcowa średnica skurczowa)/końcowa średnica rozkurczowa x 100) wyznaczono w wyniku analizy obrazów w trybie M stosując oprogramowanie GE EchoPak.
Skuteczność dawki uderzeniowej i wlewu: W przypadku dawki uderzeniowej, zgodnie z protokołem, skrócenie ułamkowe wyznaczono stosując echokardiografię jak opisano powyżej. W przypadku dawki uderzeniowej, zgodnie z protokołem, przed rozpoczęciem dawkowania zarejestrowano pięć obrazów w trybie M w 30 sekundowych odstępach przed iniekcją dawki uderzeniowej lub wlewu związków. Po iniekcji, obrazy w trybie M rejestrowano w 1 minucie i pięciominutowych odstępach, następnie do upłynięcia 30 minut. Iniekcję dawki uderzeniowej (0,5-5 mg/kg) lub wlewu prowadzono przez ogonowy cewnik żylny. Parametry wlewu wyznaczono na podstawie farmakokinetycznych profili związków. W przypadku wlewu, zwierzęta otrzymywały 1 minutową dawkę wprowadzającą, po czym natychmiast otrzymywały dawkę wlewu przez 29 minut przez ogonowy cewnik żylny. Dawkę wprowadzającą obliczono przez wyznaczenie stężenia docelowego x objętość rozmieszczenia w stanie stałym. Stężenie dawki podtrzymującej wyznaczono ze stężenia docelowego x klirens. Związki przygotowano w preparatach w 25% nośniku cavitron w przypadku protokołów dla dawki uderzeniowej i wlewu. Próbki krwi pobrano w celu wyznaczania stężenia związków w osoczu.
P r z y k ł a d 15
Badanie dynamiki krążenia u zwierząt zdrowych i z niewydolnością serca
Zwierzęta usypiano izofluranem, utrzymywano w płaszczyźnie operacyjnej, a następnie golono w celu przygotowania do cewnikowania. Nacięcie wykonano w obrębie regionu szyjnego i prawą tętnicę szyjną oczyszczono i wyodrębniono. Cewnik 2 French Millar Micro-tip Pressure (Millar Instruments, Houston, Tex., USA) założono na prawą tętnicę szyjną i przeciągnięto go przez aortę i do lewej komory. Koniec odczytów ciśnienia rozkurczowego, max +/-dp/dt, ciśnienie skurczowe i częstość akcji serca wyznaczano stale gdy związek lub nośnik był wlewany. Pomiary rejestrowano i analizowany stosując oprogramowanie PowerLab i Chart 4 (ADInstruments, Mountain View, Calif., USA). Badanie dynamiki krążenia wykonywano dla wlewów o dobranym stężeniu. Próbki krwi pobrano w celu wyznaczania stężenia związków w osoczu.
P r z y k ł a d 16
Model zastostoinowej niewydolności serca obejmujący zrośnięcie lewej tętnicy wieńcowej
Zwierzęta: w tym eksperymencie wykorzystywano samce szczurów Sprague-Dawley CD (220-225 g; Charles River). Zwierzętom pozostawiono wolny dostęp do wody i zakupionej karmy dla gryzoni, zgodnie ze standardowymi warunkami laboratoryjnymi. Temperaturę pokojową utrzymywano na poziomie 20-23°C i oświetlenie w zwierzętarni w trybie 12/12-godzin dzień/noc. Zwierzęta aklimatyzowano do środowiska laboratoryjnego przez 5 do 7 dni przed badaniem. Zwierzęta poddano głodówce przez noc przed zabiegiem.
Procedura zrośnięcia: Zwierzęta usypiano stosując ketaminę/ksylazynę (95 mg/kg i 5 mg/kg) i intubowano modyfikowanym dożylnym cewnikiem o wielkości 14-16-gauge. Poziom uśpienia badano przez szczypanie w palec. Głęboką temperaturę ciała utrzymywano na poziomie 37°C stosując koc grzejący. Obszar zabiegu został zamknięty klamrą i wyszorowany. Zwierzę umieszczono w pozycji leżącej na prawym boku i początkowo umieszczono na napowietrzaczu przy najwyższym ciśnieniu wdechowym 10-15 cm H2O i szybkości oddychania 60-110 oddechów/min. 100% O2 dostarczano zwierzęciu przez napowietrzacz. Miejsce zabiegu wyszorowano szczotką chirurgiczną i alkoholem. Nacięcie wykonano przez klatkę piersiową na poziomie 4-5 przestrzeni międzyżebrowej. Mięśnie leżące pod spodem ostrożnie rozcięto, aby uniknąć przecięcia bocznej aorty piersiowej, aby odsłonić mięśnie międzyżebrowe. Jamę klatki piersiowej udostępniono przez 4-5 przestrzeń międzyżebrową i nacięcie rozszerzono aby udostępnić wizualnie serce. Osierdzie otworzono aby odsłonić serce. Wykonano szew jedwabny 6-0 używając igły zwężającej się stopniowo przechodząc wokół lewej tętnicy wieńcowej w pobliżu jej początku, który leży w pobliżu z lewej krawędzi stożka tętniczego, o około 1 mm
PL 216 049 B1 od wprowadzenia lewego uszka przedsionka serca. Lewą tętnicę wieńcową połączono przez związanie szwu wokół tętnicy (LCL). Zwierzęta będące kontrolą poddano takiemu samemu zabiegowi, z tym, że szew nie został związany. Nacięcie zamykano w trzech warstwach. Szczurowi nadal podawano tlen, aż był w stanie oddychać samodzielnie. Szczurowi usunięto rurkę z tchawicy i pozostawiono go aby odzyskał siły na poduszce grzejnej. Zwierzęta otrzymywały buprenorfinę (0,01-0,05 mg/kg SQ) w celu zniesienia uczucia bólu pooperacyjnego. Gdy szczury się przebudziły, zostały przeniesione do swojej klatki. Zwierzęta monitorowano codziennie pod kątem oznak zakażeń lub wyczerpania. Zakażone lub konające zwierzęta usypiano. Zwierzęta ważono raz w tygodniu.
Analiza skuteczności: W przybliżeniu osiem tygodni po zabiegu wywołania zawału, szczury badano pod kątem oznak zawału mięśnia sercowego stosując echokardiografię. Tylko zwierzęta o obniżonym skróceniu ułamkowym, w porównaniu do szczurów kontrolnych wykorzystano w dalszych badaniach skuteczności. We wszystkich eksperymentach, zwierzęta podzielono na cztery grupy, kontrola + nośnik, kontrola + związek, LCL + nośnik i LCL + związek. Po 10-12 tygodniach po zabiegu (szczury LCL), szczurom podano przez wlew o wybranym stężeniu. Jak uprzednio, przed rozpoczęciem dawkowania pięć obrazów w trybie M zarejestrowano w 30 sekundowych odstępach przed wlewem związków i po iniekcji, obrazy w trybie M rejestrowano w 30 odstępach do upłynięcia 10 minut i co minutę lub następnie z pięciominutowymi odstępami. Skrócenie ułamkowe wyznaczono na podstawie obrazów w trybie M. Porównanie pomiędzy skróceniami ułamkowymi przed podaniem dawki i po podaniu związku wykonywano stosując oprogramowanie ANOVA I algorytm post-hoc Student-Newman-Keuls. Zwierzęta pozostawiono do wyzdrowienia i w ciągu 7-10 dni zwierzętom ponownie podawano przez wlew związki stosując protokół do badania dynamiki krwi do wyznaczania zmian hemodynamicznych związków u zwierząt z niewydolnością serca. Na koniec wlewu, szczury zabijano i wyznaczano masę serc.
W wyniku badań opisanych w przykładach 10-16, wykazano że opisane tutaj związki chemiczne wykazywały żądaną aktywność.
Podczas gdy niniejszy wynalazek opisano w odniesieniu do poszczególnych jego rozwiązań, specjalista w dziedzinie powinien zrozumieć, że różne zmiany są wprowadzane i równoważniki mogą być zastosowane bez oddalania się od idei i zakresu wynalazku. Ponadto, wiele modyfikacji w obrębie przedmiotu, idei i zakresu wynalazku można wykonać, aby dostosować się do danej sytuacji, materiału, kompozycji według wynalazku, procesu, etapu lub etapów procesu. Wszystkie takie modyfikacje mają być w zakresie wynalazku. Wszystkie patenty i publikacje cytowane i opisane powyżej są niniejszym włączone do opisu w całości jako odnośnik.
P r z y k ł a d 17
Kurczliwości serca in vitro i in vivo w szczurzym modelu niewydolności serca
Test z wykorzystaniem włókienek mięśniowych stosowano do identyfikacji związków (aktywatorów miozyny), które bezpośrednio aktywują ATPazę miozyny serca. Komórkowy mechanizm działania, funkcjonowania in vivo serca u szczurów Sprague Dawley (SD), a następnie wyznaczono skuteczność związku w aktywacji u szczurów SD o zdefiniowanej niewydolności serca. Komórkowe kurczliwości oznaczono ilościowo stosując strategię wykrywania krawędzi i przejście wapnia mierzone stosując wprowadzoną fura-2 we włóknach mięśniowych z serca dorosłego szczura. Komórkowe kurczliwości zwiększyły się ponad linię podstawową w ciągu 5 minut od kontaktu ze związkiem aktywnym (0,2 μΜ) nie zmieniając przejścia wapnia. Połączenie związku aktywnego z izoproterenolem (agonista O-adrenergiczny) powinno prowadzić tylko do addycyjnego zwiększenia kurczliwości, bez dalszych zmian w przejściu wapnia, wykazując że związek aktywny nie hamował szlaku PDE. Funkcja kurczliwa in vivo u uśpionych szczurów SD została określona ilościowo stosując echokardiografię (tryb M) i jednoczesne pomiary ciśnienia. Szczurom SD podawano przez wlew nośnik lub związek aktywny przy 0,25-2,5 mg/kg/godzinę. Związek aktywny powinien zwiększać skrócenie ułamkowe (FS) i frakcja wyrzutowa (EF) w sposób zależny od dawki bez znaczącej zmiany w obwodowym ciśnieniu krwi lub częstości akcji serca, z wyjątkiem przy dawce najwyższej. Szczury o zdefiniowanej niewydolności serca indukowanej przez podwiązanie lewej tętnicy wieńcowej lub szczury kontrolne mają podobne i znaczące wzrosty w FS i EF gdy traktowane były 0,7-1,2 mg/kg/godzinę związku aktywnego. Podsumowując, związek aktywny zwiększał kurczliwości serca bez zwiększania przejścia wapnia i był skuteczny w szczurzym modelu niewydolności serca, wskazując, że związek aktywny może być użyteczny terapeutycznie w leczeniu ludzkiej niewydolności serca.
PL 216 049 B1
P r z y k ł a d 18
Farmakologia
Farmakologię przynajmniej jednego związku chemicznego opisanego tutaj badano na wyodrębnionych włóknach mięśniowych z serc dorosłych szczurów, które usypiano i na chronicznym uzyskanym narzędziami chirurgicznymi, psim modelu niewydolności serca indukowanej przez zawał mięśnia sercowego połączony z szybką komorową rytmiczną impulsacją serca. Związek aktywny zwiększa kurczliwości sercowego włókna mięśniowego (EC20=0,2 μΜ) lecz nie zwiększa się wielkości lub zmiany kinetyki przejścia wapnia przy stężeniach do 10 μΜ we włóknach mięśniowych z wprowadzoną Fura-2. Związek aktywny (30 μΜ) nie hamuje aktywności fosfodiesterazy typu 3.
U uśpionych szczurów, związek aktywny zwiększa echokardiograficzne skrócenie ułamkowe z 45±5,1% do 56±4,6% po 30 minutach wlewu z szybkością 1,5 mg/kg/godzinę (n=6, p<0,01).
U świadomych psów z niewydolnością serca, związek aktywny (dawka uderzeniowa 0,5 mg/kg, następnie 0,5 mg/kg/godzinę dożylnie przez 6-8 godzin) zwiększa skrócenie ułamkowe o 74+7%, pojemność minutową serca o 45±9% i pojemność wyrzutową serca o 101±19%. Obniża częstość akcji serca o 27+4% i obniża ciśnienie w lewym przedsionku z 22+2 mmHg do 10+2 mmHg (p<0,05 dla wszystkich). Ponadto, ani średnie ciśnienie tętnicze, ani wieńcowy przepływ krwi nie ulega znaczącej zmianie. Funkcja rozkurczowa nie jest uszkodzona przy tej dawce. Nie ma znaczących zmian w grupie, w której podawano nośnik. Związek aktywny poprawiał funkcjonowanie serca w sposób, który sugerował, że związki z tej klasy mogą być korzystne dla pacjentów z niewydolnością serca.
P r z y k ł a d 19
Kompozycja farmaceutyczna
Kompozycję farmaceutyczną do podawania dożylnego przygotowuje się w następujący sposób.
mg/ml (w postaci wolnej zasady) roztworu IV z nośnikiem o stężeniu 50 mM, będącym kwasem cytrynowym, pH doprowadzone do 5,0 stosując NaOH:
T a b e l a
Skład Postać jednostkowa (mg/ml)
Substancja czynna 1,00
Kwas cytrynowy 10,51
Wodorotlenek sodu do uzyskania pH 5,0
Woda do iniekcji (WFI) uzupełnienie do 1 ml
*Wszystkie składniki inne niż związek aktywny są klasy czystości USP/odpowiadającej Ph. Eur.
Odpowiednie naczynie do przygotowywania związku wypełnia się wodą do iniekcji do w przybliżeniu 5% objętości roztworu. Kwas cytrynowy (10,51 g) odważa się, dodaje do naczynia do przygotowywania związku i miesza się do wytworzenia 1 M kwasu cytrynowego. Substancję czynną (1,00 g) waży się i rozpuszcza w 1 M roztworze kwasu cytrynowego. Otrzymany roztwór przenosi się do odpowiednio większego naczynia do przygotowywania związku i wodę do iniekcji dodaje się do w przybliżeniu 85% objętości roztworu. Mierzy się pH objętościowe roztworu i doprowadza się do 5,0 stosując 1 N NaOH. Roztwór rozcieńcza się wodą do iniekcji do końcowej objętości (1 litr).

Claims (30)

1. Związek, który jest metylo 4-[(3-fluoro-5-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem
PL 216 049 B1 lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
2. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, nośnik lub adiuwant i związek określony w zastrz. 1 lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
3. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 1 lub farmaceutycznie dopuszczalnej soli tego związku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek lub jego sól do leczenia niewydolności serca u ssaka, który tego potrzebuje.
4. Zastosowanie według zastrz. 3, w którym niewydolność serca jest zastoinową niewydolnością serca.
5. Zastosowanie według zastrz. 3, w którym niewydolność serca jest skurczową niewydolnością serca.
6. Związek, który jest etylo 4-[(4-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
7. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, nośnik lub adiuwant i związek określony w zastrz. 6 lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
8. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 6 lub farmaceutycznie dopuszczalnej soli tego związku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek lub jego sól do leczenia niewydolności serca u ssaka, który tego potrzebuje.
9. Zastosowanie według zastrz. 8, w którym niewydolność serca jest zastoinową niewydolnością serca.
10. Zastosowanie według zastrz. 8, w którym niewydolność serca jest skurczową niewydolnością serca.
11. Związek, który jest metylo 4-[(2-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
PL 216 049 B1
12. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, nośnik lub adiuwant i związek określony w zastrz. 11 lub farmaceutycznie dopuszczalną sól tego związku.
13. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 11 lub farmaceutycznie dopuszczalnej soli tego związku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek lub jego sól do leczenia niewydolności serca u ssaka, który tego potrzebuje.
14. Zastosowanie według zastrz. 13, w którym niewydolność serca jest zastoinową niewydolnością serca
15. Zastosowanie według zastrz. 13, w którym niewydolność serca jest skurczową niewydolnością serca.
16. Związek, który jest metylo 4-[(3-{[(6-metylo-3-pirydylo)amino]karbonyloamino}fenylo)metylo]piperazynokarboksylanem lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
17. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, nośnik lub adiuwant i związek określony w zastrz. 16, lub farmaceutycznie dopuszczalną sól tego związku.
18. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 16 lub farmaceutycznie dopuszczalnej soli tego związku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek lub jego sól do leczenia niewydolności serca u ssaka, który tego potrzebuje.
19. Zastosowanie według zastrz. 18, w którym niewydolność serca jest zastoinową niewydolnością serca.
20. Zastosowanie według zastrz. 18, w którym niewydolność serca jest skurczową niewydolnością serca.
21. Związek, który jest metylo 4-[(1S)-1-(5-fluoro-3-{[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karbonylkamino}fenylo)etylo]piperazynokarboksylanem lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
22. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, nośnik lub adiuwant i związek określony w zastrz. 21, lub farmaceutycznie dopuszczalną sól tego związku.
23. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 21 lub farmaceutycznie dopuszczalnej soli tego związku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek lub jego sól do leczenia niewydolności serca u ssaka, który tego potrzebuje.
24. Zastosowanie według zastrz. 23, w którym niewydolność serca jest zastoinową niewydolnością serca.
25. Zastosowanie według zastrz. 23, w którym niewydolność serca jest skurczową niewydolnością serca.
26. Związek, który jest N-{3-[(1S)-1-(4-acetylopiperazynylo)etylo]-2-fluorofenylo}[(6-metylo(3-pirydylo))amino]karboksyamidem
PL 216 049 B1 lub farmaceutycznie dopuszczalna sól tego związku.
27. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca farmaceutycznie dopuszczalną zaróbkę, nośnik lub adiuwant i związek określony w zastrz. 26, lub farmaceutycznie dopuszczalną sól tego związku.
28. Zastosowanie związku określonego w zastrz. 27 lub farmaceutycznie dopuszczalnej soli tego związku lub kompozycji farmaceutycznej zawierającej ten związek lub jego sól do leczenia niewydolności serca u ssaka, który tego potrzebuje.
29. Zastosowanie według zastrz. 28, w którym niewydolność serca jest zastoinową niewydolnością serca.
30. Zastosowanie według zastrz. 28, w którym niewydolność serca jest skurczową niewydolno-
PL381801A 2004-06-17 2005-06-16 Pochodne mocznika, kompozycje zawierajace pochodne mocznika oraz zastosowanie pochodnych mocznika do wytwarzania leku do leczenia niewydolnosci serca PL216049B1 (pl)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US58119704P 2004-06-17 2004-06-17

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL381801A1 PL381801A1 (pl) 2007-07-09
PL216049B1 true PL216049B1 (pl) 2014-02-28

Family

ID=35785669

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL381801A PL216049B1 (pl) 2004-06-17 2005-06-16 Pochodne mocznika, kompozycje zawierajace pochodne mocznika oraz zastosowanie pochodnych mocznika do wytwarzania leku do leczenia niewydolnosci serca
PL05761304T PL1765327T3 (pl) 2004-06-17 2005-06-16 Związki, kompozycje i sposoby

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL05761304T PL1765327T3 (pl) 2004-06-17 2005-06-16 Związki, kompozycje i sposoby

Country Status (32)

Country Link
US (12) US8110595B2 (pl)
EP (2) EP2862859B1 (pl)
JP (2) JP5080970B2 (pl)
KR (1) KR101276136B1 (pl)
CN (1) CN101035525A (pl)
AR (1) AR053405A1 (pl)
AU (1) AU2005264988B2 (pl)
BR (1) BRPI0512193B8 (pl)
CA (1) CA2570999C (pl)
CY (1) CY1115716T1 (pl)
DK (2) DK1765327T3 (pl)
EA (1) EA016138B1 (pl)
EC (1) ECSP077180A (pl)
ES (2) ES2686357T3 (pl)
HR (1) HRP20141048T1 (pl)
IL (1) IL180026A (pl)
MA (1) MA28738B1 (pl)
ME (1) ME01942B (pl)
MX (1) MXPA06014495A (pl)
MY (1) MY144470A (pl)
NO (1) NO340030B1 (pl)
NZ (1) NZ552404A (pl)
PE (1) PE20060438A1 (pl)
PL (2) PL216049B1 (pl)
PT (1) PT1765327E (pl)
RS (1) RS53600B1 (pl)
RU (1) RU2410384C2 (pl)
SG (1) SG149027A1 (pl)
SI (1) SI1765327T1 (pl)
TW (1) TWI359812B (pl)
WO (1) WO2006009726A2 (pl)
ZA (1) ZA200700351B (pl)

Families Citing this family (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6495337B1 (en) * 2000-03-29 2002-12-17 Cytokinetics, Inc. High throughput sarcomeric assay
JP4613157B2 (ja) * 2003-01-14 2011-01-12 サイトキネティクス・インコーポレーテッド 化合物、組成物および方法
PL216049B1 (pl) 2004-06-17 2014-02-28 Cytokinetics Inc Pochodne mocznika, kompozycje zawierajace pochodne mocznika oraz zastosowanie pochodnych mocznika do wytwarzania leku do leczenia niewydolnosci serca
TW200630337A (en) * 2004-10-14 2006-09-01 Euro Celtique Sa Piperidinyl compounds and the use thereof
US7612200B2 (en) * 2004-12-07 2009-11-03 Locus Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
WO2006062982A2 (en) * 2004-12-07 2006-06-15 Locus Pharmaceuticals, Inc. Urea inhibitors of map kinases
US7538223B2 (en) * 2005-08-04 2009-05-26 Cytokinetics, Inc. Compounds, compositions and methods
US7825120B2 (en) * 2005-12-15 2010-11-02 Cytokinetics, Inc. Certain substituted ((piperazin-1-ylmethyl)benzyl)ureas
WO2007075377A2 (en) * 2005-12-15 2007-07-05 Cytokinetics, Inc. Certain chemical entities, compositions and methods
US20070161617A1 (en) * 2005-12-15 2007-07-12 Morgan Bradley P Certain chemical entities, compositions and methods
US20070208000A1 (en) * 2005-12-15 2007-09-06 Morgan Bradley P Certain chemical entities, compositions and methods
WO2007078815A2 (en) 2005-12-16 2007-07-12 Cytokinetics, Inc. Certain chemical entities, compositions, and methods
JP5178526B2 (ja) * 2005-12-19 2013-04-10 サイトキネティクス・インコーポレーテッド 化合物、組成物および方法
CA2635888A1 (en) * 2006-01-04 2007-07-19 Locus Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of protein kinases
WO2007110449A1 (en) * 2006-03-29 2007-10-04 Euro-Celtique S.A. Benzenesulfonamide compounds and their use
TW200812963A (en) * 2006-04-13 2008-03-16 Euro Celtique Sa Benzenesulfonamide compounds and the use thereof
TW200815353A (en) 2006-04-13 2008-04-01 Euro Celtique Sa Benzenesulfonamide compounds and their use
WO2008124118A1 (en) * 2007-04-09 2008-10-16 Purdue Pharma L.P. Benzenesulfonyl compounds and the use therof
US8765736B2 (en) * 2007-09-28 2014-07-01 Purdue Pharma L.P. Benzenesulfonamide compounds and the use thereof
US20090192168A1 (en) * 2008-01-04 2009-07-30 Alex Muci Compounds, Compositions and Methods
WO2012145677A2 (en) 2011-04-20 2012-10-26 The Regents Of The University Of Michigan Spectrum filtering for visual displays and imaging having minimal angle dependence
CN102288601B (zh) * 2011-05-16 2012-12-12 中国药科大学 一种肌球蛋白atp酶活性微量测定方法及其应用
AR091516A1 (es) * 2012-06-22 2015-02-11 Actelion Pharmaceuticals Ltd Derivados de 1-[m-carboxamido(hetero)aril-metil]-heterociclil-carboxamida
US9709649B2 (en) * 2013-02-08 2017-07-18 Regents Of The University Of Minnesota System and method for assessing adenosine triphosphate hydrolysis rate using double saturation transfer magnetic resonance imaging and spectroscopy
EP2968180B1 (en) 2013-03-14 2019-04-24 Amgen Inc. Heterocyclic compounds and their uses
EA031185B1 (ru) 2013-03-14 2018-11-30 Эмджен Инк. Гетероциклические соединения и способы их применения
US9547107B2 (en) 2013-03-15 2017-01-17 The Regents Of The University Of Michigan Dye and pigment-free structural colors and angle-insensitive spectrum filters
WO2015142001A2 (ko) * 2014-03-21 2015-09-24 충남대학교산학협력단 강심 활성을 갖는 화합물 및 이를 함유하는 심부전 예방 또는 치료용 약학적 조성물
FI3247707T3 (fi) * 2015-01-22 2023-08-22 Myokardia Inc Sydänhäiriöiden kuten dilatoivan kardiomyopatian (dcm) hoitoon hyödyllisiä 4-metyylisulfonyylisubstituoituja piperidiiniureayhdisteitä
US10758525B2 (en) 2015-01-22 2020-09-01 MyoKardia, Inc. 4-methylsulfonyl-substituted piperidine urea compounds
KR101766731B1 (ko) 2015-06-23 2017-08-10 충남대학교산학협력단 강심 활성을 갖는 크로메논 유도체 및 이를 포함하는 심부전의 예방 또는 치료용 약학 조성물
MX379899B (es) 2015-06-26 2025-03-11 Cytokinetics Inc Terapia de combinacion de activador de miosina cardiaca e inhibidor de corriente if del nodo sinusal
TWI773657B (zh) 2015-12-18 2022-08-11 美商亞德利克斯公司 作爲非全身ｔｇｒ５促效劑之經取代之4-苯基吡啶化合物
US12084472B2 (en) 2015-12-18 2024-09-10 Ardelyx, Inc. Substituted 4-phenyl pyridine compounds as non-systemic TGR5 agonists
KR20160108281A (ko) 2016-09-06 2016-09-19 충남대학교산학협력단 강심 활성을 갖는 화합물 및 이를 함유하는 심부전 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2018069278A1 (de) * 2016-10-10 2018-04-19 Basf Se Katalysatormodifikation mit alkalimetall-, erdalkalimetall- oder seltenerdmetallionen in der kontinuierlichen flüssigphasen-hydrierung von nitroverbindungen
US10256925B2 (en) * 2017-01-19 2019-04-09 Samsung Electronics Co., Ltd. Methods and wireless communication systems for wireless re-calibration of RF components of communication devices
SI3645518T1 (sl) 2017-06-30 2021-11-30 Amgen Inc. Sinteza omekamtiv mekarbila
PL3645002T3 (pl) 2017-06-30 2025-03-24 Amgen Inc. Sposoby leczenia niewydolności serca za pomocą aktywatorów sarkomerów serca
AR112804A1 (es) 2017-09-13 2019-12-11 Amgen Inc Compuestos de bisamida que activan el sarcómero y sus usos
BR112020014428A2 (pt) 2018-01-19 2020-12-01 Cytokinetics, Inc. composto, composição farmacêutica, e, métodos para o tratamento de uma doença cardíaca em um indivíduo, para o tratamento de uma doença ou condição que está associada com cavidade ventricular esquerda pequena e obliteração da cavidade, contração hiperdinâmica do ventrículo esquerdo, isquemia do miocárdio ou fibrose cardíaca, para o tratamento de uma doença ou condição selecionada dentre distrofias musculares e doenças de armazenamento do glicogênio e para inibição do sarcômero cardíaco
EA039850B1 (ru) * 2018-04-30 2022-03-21 Эмджен Инк. Синтез омекамтива мекарбила
JP7610985B2 (ja) 2018-06-26 2025-01-09 サイトキネティックス， インコーポレイテッド 心臓サルコメア阻害剤
US11964967B2 (en) 2018-06-26 2024-04-23 Cytokinetics, Inc. Cardiac sarcomere inhibitors
PL3594199T3 (pl) 2018-07-09 2020-11-16 F.I.S.- Fabbrica Italiana Sintetici S.P.A. Krystaliczny 2-fluoro-3-nitrotoluen i sposób jego wytwarzania
EP3820851A1 (en) 2018-07-12 2021-05-19 Assia Chemical Industries Ltd Solid state forms of omecamtiv mecarbil & omecamtiv mecarbil dihcl
US11465969B2 (en) 2018-08-17 2022-10-11 Cytokinetics, Inc. Salts and crystal forms of omecamtiv mecarbil
JP7447089B2 (ja) 2018-08-31 2024-03-11 サイトキネティックス， インコーポレイテッド 心筋サルコメア阻害剤
WO2020131574A1 (en) 2018-12-18 2020-06-25 Amgen Inc. Method of reducing aromatic nitro compounds
KR20220035176A (ko) 2019-07-16 2022-03-21 미요카디아, 인크. (r)-4-(1-((3-(디플루오로메틸)-1-메틸-1h-피라졸-4-일)술포닐)-1-플루오로에틸)-n-(이속사졸-3-일)피페리딘-1-카르복스아미드의 다형체 형태
WO2021053189A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Synthon B.V. Salts of omecamtiv mecarbil and solid forms thereof
WO2021053175A1 (en) 2019-09-19 2021-03-25 Synthon B.V. Salts of omecamtiv mecarbil and solid forms thereof
WO2021070124A1 (en) * 2019-10-09 2021-04-15 Dr. Reddy’S Laboratories Limited Alternate processes for the preparation of omecamtiv mecarbil
KR20230107282A (ko) 2020-11-12 2023-07-14 암젠 인크 오메캄티브 메카빌을 투여하여 심부전을 치료하는 방법
WO2022177927A1 (en) 2021-02-16 2022-08-25 Assia Chemical Industries Ltd Unhydrous crystalline form of omecamtiv mecarbil dihydrobromide salt
MX2023010125A (es) 2021-03-04 2023-09-11 Cytokinetics Inc Inhibidores del sarcomero cardiaco.
BR112023018095A2 (pt) 2021-03-10 2023-12-12 Amgen Inc Processos para sintetizar 2-fluoro-3-nitrotolueno, 1-(bromometil)-2-fluoro-3-nitrobenzeno e para preparar omecamtiv mecarbil ou um sal do mesmo, um hidrato do mesmo ou um hidrato de sal do mesmo
WO2024081611A1 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Cytokinetics, Incorporated Methods for treating heart failure by administering cardiac sarcomere activators
US11986474B1 (en) 2023-06-27 2024-05-21 Cytokinetics, Incorporated Methods for treating heart failure by administering cardiac sarcomere activators

Family Cites Families (148)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US397782A (en) * 1889-02-12 Plunger water-closet
NL254871A (pl) 1959-08-14
GB1339764A (en) 1971-03-29 1973-12-05 Ici Ltd Pyridine derivatives
US3939169A (en) * 1971-03-29 1976-02-17 Imperial Chemical Industries Limited Alkylene bis(pyridiniumareylene quaternary salts)
DE2942930A1 (de) 1979-10-24 1981-05-27 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen Substituierte harnstoffe, deren herstellung und verwendung als herbizide
DE3147879A1 (de) 1981-12-03 1983-06-16 Basf Ag, 6700 Ludwigshafen 1,3,5-triazinone, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung zur bekaempfung unerwuenschten pflanzenwuchses
DE3271848D1 (en) 1981-12-03 1986-07-31 Basf Ag 1,3,5-triazinones, process for their preparation and their use in combating undesired plant growth
AU2818584A (en) 1983-03-29 1984-10-25 Fmc Corporation N-phenyl-n-(pyridinyl-n-oxide)urea plant regulators
US4787931A (en) * 1984-03-06 1988-11-29 Fmc Corporation N-phenyl-N'-(pyridinyl-N-oxide)urea plant regulators
US4672066A (en) * 1985-04-22 1987-06-09 Hoffmann-La Roche Inc. Derivatives of 4-acetyl-3-hydroxy-2-alkyl-phenoxycarboxylic acids
GB9027023D0 (en) 1990-12-12 1991-01-30 Wellcome Found Anti-atherosclerotic aryl compounds
US5162360A (en) * 1991-06-24 1992-11-10 Warner-Lambert Company 2-heteroatom containing urea and thiourea ACAT inhibitors
GB9201180D0 (en) 1992-01-21 1992-03-11 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
CA2134359C (en) * 1992-05-28 1997-07-01 Ernest S. Hamanaka New n-aryl and n-heteroarylurea derivatives as inhibitors of acyl coenzyme a: cholesterol acyl transferase (acat)
ES2051647B1 (es) 1992-12-10 1995-01-16 Lipotec Sa Procedimiento para la preparacion de calcitonina de salmon.
GB9304920D0 (en) * 1993-03-10 1993-04-28 Celltech Ltd Chemical compounds
EP0634402A1 (en) * 1993-07-14 1995-01-18 Takeda Chemical Industries, Ltd. Isochinolinone derivatives, their production and use
US5547966A (en) * 1993-10-07 1996-08-20 Bristol-Myers Squibb Company Aryl urea and related compounds
JPH10510512A (ja) 1994-10-04 1998-10-13 藤沢薬品工業株式会社 尿素誘導体とａｃａｔ阻害剤としての用途
WO1996013485A1 (en) 1994-10-27 1996-05-09 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Pyridopyrimidones, quinolines and fused n-heretocycles as bradykinin antagonists
US6010026A (en) 1994-11-22 2000-01-04 Aluminum Company Of America Assembly of aluminum can and threaded sleeve
US5556969A (en) * 1994-12-07 1996-09-17 Merck Sharp & Dohme Ltd. Benzodiazepine derivatives
US5624937A (en) * 1995-03-02 1997-04-29 Eli Lilly And Company Chemical compounds as inhibitors of amyloid beta protein production
GB9504361D0 (en) 1995-03-04 1995-04-26 Glaxo Spa Heterocyclic compounds
GB9511355D0 (en) 1995-06-06 1995-08-02 Fujisawa Pharmaceutical Co Urea derivatives
US5972975A (en) 1995-12-08 1999-10-26 Merck & Co., Inc. Substituted 2-aminopyridines as inhibitors of nitric oxide synthase
US6005008A (en) * 1996-02-16 1999-12-21 Smithkline Beecham Corporation IL-8 receptor antagonists
DK0915859T3 (da) * 1996-07-23 2003-03-03 Neurogen Corp Visse substituerede benzylaminderivater; en ny klasse af Neuropeptid Y1-specifikke ligander
IT1284198B1 (it) 1996-07-30 1998-05-08 Beniamino Anzalone Carne vegetale
US6174905B1 (en) 1996-09-30 2001-01-16 Mitsui Chemicals, Inc. Cell differentiation inducer
AUPO390996A0 (en) 1996-11-29 1996-12-19 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Urea derivatives
JP2002241368A (ja) 1997-02-18 2002-08-28 Shionogi & Co Ltd 新規ベンゾラクタム誘導体およびそれを含有する医薬組成物
WO1998041510A1 (en) 1997-03-14 1998-09-24 Shionogi & Co., Ltd. Novel benzolactam derivatives and medicinal compositions comprising the same
AU7526798A (en) 1997-04-18 1998-11-27 Smithkline Beecham Plc Acetamide and urea derivatives, process for their preparation and their use in the treatment of cns disorders
WO1998052558A1 (en) 1997-05-23 1998-11-26 Bayer Corporation INHIBITION OF p38 KINASE ACTIVITY BY ARYL UREAS
AU7585598A (en) 1997-05-23 1998-12-11 Bayer Corporation Raf kinase inhibitors
AU9188698A (en) 1997-11-05 1999-05-24 Choongwae Pharma Corporation Novel genipin derivative having liver protection activity
CA2315717C (en) 1997-12-22 2011-02-01 Bayer Corporation Inhibition of raf kinase using substituted heterocyclic ureas
US7517880B2 (en) * 1997-12-22 2009-04-14 Bayer Pharmaceuticals Corporation Inhibition of p38 kinase using symmetrical and unsymmetrical diphenyl ureas
IL136737A0 (en) 1997-12-22 2001-06-14 Bayer Ag Inhibition of p38 kinase using symmetrical and unsymmetrical diphenyl ureas
DE1049664T1 (de) 1997-12-22 2001-05-03 Bayer Corp., Pittsburgh Hemmung der raf-kinase unter verwendung von symmetrisch und unsymmetrisch substituierten harnstoffen
WO1999032111A1 (en) 1997-12-22 1999-07-01 Bayer Corporation INHIBITION OF p38 KINASE ACTIVITY USING SUBSTITUTED HETEROCYCLIC UREAS
JP4405602B2 (ja) 1998-04-16 2010-01-27 バイエル・シエーリング・ファーマ アクチエンゲゼルシャフト ヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
WO1999064394A1 (en) 1998-06-08 1999-12-16 Schering Corporation Neuropeptide y5 receptor antagonists
US6329395B1 (en) * 1998-06-08 2001-12-11 Schering Corporation Neuropeptide Y5 receptor antagonists
US6407124B1 (en) 1998-06-18 2002-06-18 Bristol-Myers Squibb Company Carbon substituted aminothiazole inhibitors of cyclin dependent kinases
CN1152879C (zh) 1998-08-11 2004-06-09 住友制药株式会社 萘啶衍生物
US6331541B1 (en) 1998-12-18 2001-12-18 Soo S. Ko N-ureidoalkyl-piperidines as modulators of chemokine receptor activity
JP2000256194A (ja) 1999-01-06 2000-09-19 Mitsui Chemicals Inc 核内レセプタ作動薬およびその効果増強剤
US7928239B2 (en) 1999-01-13 2011-04-19 Bayer Healthcare Llc Inhibition of RAF kinase using quinolyl, isoquinolyl or pyridyl ureas
WO2000041698A1 (en) 1999-01-13 2000-07-20 Bayer Corporation φ-CARBOXY ARYL SUBSTITUTED DIPHENYL UREAS AS p38 KINASE INHIBITORS
US6402960B1 (en) * 1999-03-01 2002-06-11 The Regents Of The University Of California Thiacrown polymers for removal of mercury from waste streams
PT1169038E (pt) * 1999-04-15 2012-10-26 Bristol Myers Squibb Co Inibidores cíclicos da proteína tirosina cinase
US6410254B1 (en) 1999-05-18 2002-06-25 Cytokinetics Compositions and assays utilizing ADP or phosphate for detecting protein modulators
DE19921498A1 (de) * 1999-05-08 2000-11-16 Clariant Gmbh Verfahren zur Herstellung von wäßrigen Diazoniumsalzlösungen
ATE312823T1 (de) * 1999-07-09 2005-12-15 Boehringer Ingelheim Pharma Verfahren zur herstellung heteroarylsubstituierter ureaverbindungen
CA2380389A1 (en) 1999-07-26 2001-02-01 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Biarylurea derivatives
WO2001025190A1 (en) 1999-10-01 2001-04-12 Japan Energy Corporation Novel diarylamide derivatives and use thereof as medicines
DE60036726T2 (de) 1999-11-16 2008-02-07 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc., Ridgefield Harnstoff derivate als entzündungshemmende mittel
HN2001000008A (es) 2000-01-21 2003-12-11 Inc Agouron Pharmaceuticals Compuesto de amida y composiciones farmaceuticas para inhibir proteinquinasas, y su modo de empleo
JP2001278886A (ja) * 2000-03-28 2001-10-10 Dai Ichi Seiyaku Co Ltd ベンゾオキサジン誘導体及びこれを含有する医薬
US6495337B1 (en) 2000-03-29 2002-12-17 Cytokinetics, Inc. High throughput sarcomeric assay
EP1363881A2 (en) 2000-06-21 2003-11-26 Bristol-Myers Squibb Pharma Company N-ureidoalkyl-piperidines as modulators of chemokine receptor activity
GB0015601D0 (en) 2000-06-26 2000-08-16 Ferring Bv Novel antidiuretic agents
GB0015904D0 (en) 2000-06-28 2000-08-23 Hoffmann La Roche Inhibitors of HPV E1 helicase enzyme
AU2001271631A1 (en) * 2000-06-30 2002-01-14 Ortho-Mcneil Pharmaceutical, Inc. Useful aroyl aminoacyl pyrrole compounds
DE60130766T2 (de) 2000-07-18 2008-07-17 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Serotoninwiederaufnahme-inhibitoren
GB0017676D0 (en) 2000-07-19 2000-09-06 Angeletti P Ist Richerche Bio Inhibitors of viral polymerase
US20020173507A1 (en) 2000-08-15 2002-11-21 Vincent Santora Urea compounds and methods of uses
US6645990B2 (en) * 2000-08-15 2003-11-11 Amgen Inc. Thiazolyl urea compounds and methods of uses
US6573264B1 (en) 2000-10-23 2003-06-03 Cv Therapeutics, Inc. Heteroaryl alkyl piperazine derivatives
US20030045552A1 (en) 2000-12-27 2003-03-06 Robarge Michael J. Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
US7091353B2 (en) * 2000-12-27 2006-08-15 Celgene Corporation Isoindole-imide compounds, compositions, and uses thereof
MXPA03006666A (es) * 2001-01-25 2004-05-31 Guilford Pharm Inc Compuestos de union de ciclofilina carbociclicos trisubstituidos y su uso.
JP2002220338A (ja) 2001-01-26 2002-08-09 Banyu Pharmaceut Co Ltd ビアリールウレア化合物又はその塩を有効成分として含有するＣｄｋ４及び／又はＣｄｋ６阻害剤
GB0117950D0 (en) * 2001-02-16 2001-09-19 Aventis Pharma Inc Novel heterocyclic urea derivatives andd their use as dopamine D3 receptor ligands
DE10110749A1 (de) 2001-03-07 2002-09-12 Bayer Ag Substituierte Aminodicarbonsäurederivate
JP4366936B2 (ja) 2001-04-20 2009-11-18 バイエル コーポレイション キノリル、イソキノリルまたはピリジル尿素を使用するｒａｆキナーゼの阻害
CA2445003A1 (en) 2001-05-16 2002-11-21 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Diarylurea derivatives useful as anti-inflammatory agents
MXPA03010724A (es) * 2001-05-25 2004-03-02 Boehringer Ingelheim Pharma Compuestos de carbamato y oxamida como inhibidores de la produccion de citocina.
WO2002099388A2 (en) 2001-06-07 2002-12-12 Merck & Co., Inc. Benzodiazepine bradykinin antagonists
AU2002316459A1 (en) * 2001-07-11 2003-01-29 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating cytokine mediated diseases
DE10134482A1 (de) 2001-07-16 2003-01-30 Bayer Ag Substituierte Isoindole und ihre Verwendung
AUPR688101A0 (en) 2001-08-08 2001-08-30 Luminis Pty Limited Protein domains and their ligands
WO2003022820A1 (en) 2001-09-06 2003-03-20 Bristol-Myers Squibb Pharma Company. Heteroaromatic substituted cyclopropane as corticotropin releasing hormone
US7361679B2 (en) 2001-09-12 2008-04-22 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. 2-phenyl-3-heteroarylpropionic acid derivative or salt thereof and medicine containing the same
US7320126B2 (en) * 2001-11-06 2008-01-15 Sandisk Corporation Implementation of in system programming to update firmware on memory cards
TWI249515B (en) * 2001-11-13 2006-02-21 Theravance Inc Aryl aniline beta2 adrenergic receptor agonists
WO2003059258A2 (en) 2001-12-21 2003-07-24 Cytokinetics, Inc. Compositions and methods for treating heart failure
US20030207872A1 (en) * 2002-01-11 2003-11-06 Bayer Corporation Omega-carboxyaryl substituted diphenyl ureas as raf kinase inhibitors
US7148236B2 (en) 2002-01-17 2006-12-12 Merck & Co., Inc. Modulators of acetylcholine receptors
EP1467986A1 (en) 2002-01-17 2004-10-20 Eli Lilly And Company Aza-cyclic compounds as modulators of acetylcholine receptors
WO2003068228A1 (en) 2002-02-11 2003-08-21 Bayer Pharmaceuticals Corporation Aryl ureas with angiogenesis inhibiting activity
DE10208986A1 (de) 2002-02-28 2003-09-11 Aventis Pharma Gmbh Verwendung substituierter 3-Phenyl-5-alkoxi-1,3,4-oxdiazol-2-one zur Herstellung von Arzneimitteln mit hemmender Wirkung an der pankreatischen Lipase
JP4471262B2 (ja) 2002-03-07 2010-06-02 株式会社エス・ディー・エス バイオテック 置換イソキサゾールアルキルアミン誘導体及び農園芸用殺菌剤
TW200400035A (en) 2002-03-28 2004-01-01 Glaxo Group Ltd Novel compounds
AU2003240757B2 (en) 2002-03-28 2008-07-03 Merck Serono Sa Thiazolidine carboxamide derivatives as modulators of the prostaglandin F receptor
WO2003082808A1 (en) 2002-04-03 2003-10-09 Sumitomo Pharmaceuticals Company, Limited. Benzamide derivatives
DK1499316T3 (da) 2002-04-18 2008-07-21 Schering Corp (1-4-piperidinyl)benzimidazolderivater anvendelige som histamin-H3-antagonister
US7105505B2 (en) 2002-04-18 2006-09-12 Schering Corporation Benzimidazole derivatives useful as histamine H3 antagonists
ATE418546T1 (de) 2002-04-23 2009-01-15 Bristol Myers Squibb Co Als kinase inhibitoren geeignete arylketonpyrrolotriazin-verbindungen
US20030236287A1 (en) 2002-05-03 2003-12-25 Piotrowski David W. Positive allosteric modulators of the nicotinic acetylcholine receptor
EP1515940A2 (en) 2002-05-17 2005-03-23 Lica Pharmaceuticals A/S Aminoalkoxy-functional chalcones
TW200406374A (en) 2002-05-29 2004-05-01 Novartis Ag Diaryl urea derivatives useful for the treatment of protein kinase dependent diseases
JP4326468B2 (ja) 2002-06-24 2009-09-09 シェーリング コーポレイション ヒスタミンｈ３アンタゴニストとして有用なインドール誘導体
BR0312023A (pt) 2002-06-27 2005-03-22 Novo Nordisk As Composto, composto ativador da glicose cinase, método para evitar a hipoglicemia, uso de um composto, e, composição farmacêutica
RU2005105683A (ru) * 2002-07-31 2006-01-20 Шеринг Акциенгезельшафт (De) Обладающие ингибирующим действием на vegfr-2 и vegfr-3 антраниламидопиридины
GB0218147D0 (en) 2002-08-05 2002-09-11 Oxford Glycosciences Uk Ltd Novel compounds
WO2004019958A1 (ja) 2002-08-27 2004-03-11 Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. ピラゾール誘導体、それを含有する医薬組成物及びその医薬用途
EP1537116B1 (en) 2002-09-04 2010-06-02 Schering Corporation Pyrazolopyrimidines suitable for the treatment of cancer diseases
US6915814B2 (en) * 2002-09-04 2005-07-12 Dara Cheng Transparent pipe trap with means of enhancing the biodegradation of sink effluents
EP1551843A1 (en) 2002-09-10 2005-07-13 Pfizer Products Inc. Diazabicyclic compounds useful in the treatment of cns and other disorders
DE60313791T2 (de) 2002-10-29 2008-01-24 L'oreal Zusammensetzung für die Haarbehandlung, die ein Styrolpyrazol enthält
JP4613157B2 (ja) 2003-01-14 2011-01-12 サイトキネティクス・インコーポレーテッド 化合物、組成物および方法
US7557129B2 (en) * 2003-02-28 2009-07-07 Bayer Healthcare Llc Cyanopyridine derivatives useful in the treatment of cancer and other disorders
US7531553B2 (en) * 2003-03-21 2009-05-12 Amgen Inc. Heterocyclic compounds and methods of use
AU2003902073A0 (en) * 2003-05-01 2003-05-15 Kevin Raymond Deguara A lighting substrate
ZA200508439B (en) * 2003-05-05 2007-03-28 Probiodrug Ag Medical use of inhibitors of glutaminyl and glutamate cyclases
JPWO2004101529A1 (ja) 2003-05-19 2006-07-13 小野薬品工業株式会社 含窒素複素環化合物およびその医薬用途
DE602004007382T2 (de) * 2003-05-20 2008-04-17 Bayer Pharmaceuticals Corp., West Haven Diaryl-harnstoffe für durch pdgfr vermittelte krankheiten
GB0316915D0 (en) * 2003-07-18 2003-08-20 Glaxo Group Ltd Compounds
PE20051046A1 (es) 2003-11-28 2006-01-11 Novartis Ag Derivados de diaril-urea en el tratamiento de enfermedades dependientes de la quinasa de proteina
TW200530236A (en) 2004-02-23 2005-09-16 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Heteroaryl phenylurea
CA2564355C (en) 2004-05-07 2012-07-03 Amgen Inc. Protein kinase modulators and method of use
PL216049B1 (pl) 2004-06-17 2014-02-28 Cytokinetics Inc Pochodne mocznika, kompozycje zawierajace pochodne mocznika oraz zastosowanie pochodnych mocznika do wytwarzania leku do leczenia niewydolnosci serca
WO2006009729A2 (en) 2004-06-18 2006-01-26 Medtronic, Inc. Methods and devices for occlusion of an atrial appendage
US7176222B2 (en) * 2004-07-27 2007-02-13 Cytokinetics, Inc. Syntheses of ureas
WO2006089871A2 (en) 2005-02-23 2006-08-31 Neurosearch A/S Diphenylurea derivatives useful as erg channel openers for the treatment of cardiac arrhythmias
US7538223B2 (en) * 2005-08-04 2009-05-26 Cytokinetics, Inc. Compounds, compositions and methods
WO2007075377A2 (en) * 2005-12-15 2007-07-05 Cytokinetics, Inc. Certain chemical entities, compositions and methods
US20070208000A1 (en) * 2005-12-15 2007-09-06 Morgan Bradley P Certain chemical entities, compositions and methods
US7825120B2 (en) * 2005-12-15 2010-11-02 Cytokinetics, Inc. Certain substituted ((piperazin-1-ylmethyl)benzyl)ureas
US20070161617A1 (en) * 2005-12-15 2007-07-12 Morgan Bradley P Certain chemical entities, compositions and methods
WO2007078815A2 (en) 2005-12-16 2007-07-12 Cytokinetics, Inc. Certain chemical entities, compositions, and methods
JP5178526B2 (ja) * 2005-12-19 2013-04-10 サイトキネティクス・インコーポレーテッド 化合物、組成物および方法
US7672247B2 (en) * 2006-02-23 2010-03-02 International Business Machines Corporation Evaluating data processing system health using an I/O device
EA031185B1 (ru) 2013-03-14 2018-11-30 Эмджен Инк. Гетероциклические соединения и способы их применения
EP2968180B1 (en) 2013-03-14 2019-04-24 Amgen Inc. Heterocyclic compounds and their uses
MX379899B (es) 2015-06-26 2025-03-11 Cytokinetics Inc Terapia de combinacion de activador de miosina cardiaca e inhibidor de corriente if del nodo sinusal
CN105572945B (zh) 2016-03-10 2019-06-14 京东方科技集团股份有限公司 阵列基板、偏光片贴附膜及其制备方法
SI3645518T1 (sl) 2017-06-30 2021-11-30 Amgen Inc. Sinteza omekamtiv mekarbila
PL3594199T3 (pl) 2018-07-09 2020-11-16 F.I.S.- Fabbrica Italiana Sintetici S.P.A. Krystaliczny 2-fluoro-3-nitrotoluen i sposób jego wytwarzania
US11465969B2 (en) 2018-08-17 2022-10-11 Cytokinetics, Inc. Salts and crystal forms of omecamtiv mecarbil
WO2020131574A1 (en) 2018-12-18 2020-06-25 Amgen Inc. Method of reducing aromatic nitro compounds
US20230090391A1 (en) 2020-02-10 2023-03-23 Amgen Inc. Omecamtiv mecarbil tablet
KR20230107282A (ko) 2020-11-12 2023-07-14 암젠 인크 오메캄티브 메카빌을 투여하여 심부전을 치료하는 방법
BR112023018095A2 (pt) 2021-03-10 2023-12-12 Amgen Inc Processos para sintetizar 2-fluoro-3-nitrotolueno, 1-(bromometil)-2-fluoro-3-nitrobenzeno e para preparar omecamtiv mecarbil ou um sal do mesmo, um hidrato do mesmo ou um hidrato de sal do mesmo
US11986474B1 (en) 2023-06-27 2024-05-21 Cytokinetics, Incorporated Methods for treating heart failure by administering cardiac sarcomere activators

Also Published As

Publication number Publication date
US20160115133A1 (en) 2016-04-28
RU2007101619A (ru) 2008-08-10
EP1765327A4 (en) 2009-06-17
US8513257B2 (en) 2013-08-20
HRP20141048T1 (hr) 2015-01-02
US20140038983A1 (en) 2014-02-06
US20210198203A1 (en) 2021-07-01
ES2522579T3 (es) 2014-11-17
NO20070257L (no) 2007-01-16
PL381801A1 (pl) 2007-07-09
US10035770B2 (en) 2018-07-31
PL1765327T3 (pl) 2015-01-30
RU2410384C2 (ru) 2011-01-27
KR20070046070A (ko) 2007-05-02
US20170267638A1 (en) 2017-09-21
ZA200700351B (en) 2008-05-28
US20090036447A1 (en) 2009-02-05
US20060014761A1 (en) 2006-01-19
US20220185779A1 (en) 2022-06-16
MA28738B1 (fr) 2007-07-02
SG149027A1 (en) 2009-01-29
BRPI0512193B1 (pt) 2018-11-21
US20180305316A1 (en) 2018-10-25
AU2005264988B2 (en) 2011-09-22
US8110595B2 (en) 2012-02-07
AU2005264988A1 (en) 2006-01-26
US7507735B2 (en) 2009-03-24
US12264133B2 (en) 2025-04-01
WO2006009726A3 (en) 2006-11-30
US9643925B2 (en) 2017-05-09
EA016138B1 (ru) 2012-02-28
NZ552404A (en) 2010-04-30
ECSP077180A (es) 2007-04-26
EP2862859A3 (en) 2015-05-06
BRPI0512193B8 (pt) 2021-05-25
MY144470A (en) 2011-09-30
JP5080970B2 (ja) 2012-11-21
SI1765327T1 (sl) 2014-12-31
US8871769B2 (en) 2014-10-28
US20120172372A1 (en) 2012-07-05
ME01942B (me) 2015-05-20
EP2862859B1 (en) 2018-07-25
PE20060438A1 (es) 2006-07-01
IL180026A0 (en) 2007-05-15
US20090099198A1 (en) 2009-04-16
JP2008503467A (ja) 2008-02-07
CA2570999A1 (en) 2006-01-26
US8101617B2 (en) 2012-01-24
US9150564B2 (en) 2015-10-06
PT1765327E (pt) 2014-11-24
JP2012097093A (ja) 2012-05-24
US10975034B2 (en) 2021-04-13
RS53600B1 (sr) 2015-02-27
US20190352267A1 (en) 2019-11-21
EA200700058A1 (ru) 2007-08-31
US10385023B2 (en) 2019-08-20
EP1765327A2 (en) 2007-03-28
MXPA06014495A (es) 2007-03-01
HK1209729A1 (en) 2016-04-08
CN101035525A (zh) 2007-09-12
TW200616996A (en) 2006-06-01
BRPI0512193A (pt) 2008-02-19
US20150005296A1 (en) 2015-01-01
HK1101060A1 (en) 2007-10-05
ES2686357T3 (es) 2018-10-17
TWI359812B (en) 2012-03-11
NO340030B1 (no) 2017-02-27
AR053405A1 (es) 2007-05-09
CA2570999C (en) 2014-01-07
DK1765327T3 (da) 2014-11-03
WO2006009726A2 (en) 2006-01-26
EP1765327B1 (en) 2014-08-13
KR101276136B1 (ko) 2013-06-18
CY1115716T1 (el) 2017-01-25
DK2862859T3 (en) 2018-08-13
EP2862859A2 (en) 2015-04-22
IL180026A (en) 2011-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12264133B2 (en) Compounds, compositions and methods
US8445495B2 (en) Certain Chemical entities, compositions and methods
JP5178526B2 (ja) 化合物、組成物および方法
AU2011253934B2 (en) Substituted urea derivatives for treating cardiac diseases
HK1209729B (en) Compounds, compositions and methods