PL197405B1 - Rekombinowana żywa szczepionka, zastosowanie związków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych oraz zestaw do szczepień - Google Patents
Rekombinowana żywa szczepionka, zastosowanie związków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych oraz zestaw do szczepieńInfo
- Publication number
- PL197405B1 PL197405B1 PL342820A PL34282099A PL197405B1 PL 197405 B1 PL197405 B1 PL 197405B1 PL 342820 A PL342820 A PL 342820A PL 34282099 A PL34282099 A PL 34282099A PL 197405 B1 PL197405 B1 PL 197405B1
- Authority
- PL
- Poland
- Prior art keywords
- virus
- gene
- vaccine
- vector
- plasmid
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 105
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 33
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 22
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 20
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 14
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229960000834 vinyl ether Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 69
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 40
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 claims description 31
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 28
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 20
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 19
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 14
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 claims description 12
- 241000701089 Equid alphaherpesvirus 4 Species 0.000 claims description 12
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 241000230501 Equine herpesvirus sp. Species 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 9
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 6
- 241000680578 Canid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 claims description 4
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 4
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 3
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 claims description 3
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 claims description 3
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 claims description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 3
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 claims description 2
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 claims description 2
- 241000701063 Gallid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 claims 2
- 241000700626 Cowpox virus Species 0.000 claims 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 claims 1
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M Methacrylate Chemical compound CC(=C)C([O-])=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 241000700667 Pigeonpox virus Species 0.000 claims 1
- 241000700565 Swinepox virus Species 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 abstract description 36
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 abstract description 19
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 abstract 1
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 abstract 1
- 229920001038 ethylene copolymer Polymers 0.000 abstract 1
- 125000005395 methacrylic acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 abstract 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 93
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 86
- 241000701081 Equid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 24
- 229940023860 canarypox virus HIV vaccine Drugs 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 15
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 15
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 12
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 10
- 108010012716 Felid herpesvirus 1 glycoprotein B Proteins 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 8
- 108010070778 Felid herpesvirus 1 glycoprotein C Proteins 0.000 description 8
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 8
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 8
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 7
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 7
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 6
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 230000007485 viral shedding Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 5
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 4
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 101150029683 gB gene Proteins 0.000 description 4
- 101150002378 gC gene Proteins 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 4
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 2
- 101150034814 F gene Proteins 0.000 description 2
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 2
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 2
- 241000287219 Serinus canaria Species 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101900340951 Vaccinia virus Protein I3 Proteins 0.000 description 2
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 229940086737 allyl sucrose Drugs 0.000 description 2
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000009021 pre-vaccination Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 2
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 2
- WVXRAFOPTSTNLL-NKWVEPMBSA-N 2',3'-dideoxyadenosine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1CC[C@@H](CO)O1 WVXRAFOPTSTNLL-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- 125000003903 2-propenyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])=C([H])[H] 0.000 description 1
- GHUXAYLZEGLXDA-UHFFFAOYSA-N 8-azido-5-ethyl-6-phenylphenanthridin-5-ium-3-amine;bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N=[N+]=[N-])=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 GHUXAYLZEGLXDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001135961 Amsacta moorei entomopoxvirus Species 0.000 description 1
- 101150076489 B gene Proteins 0.000 description 1
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101000686824 Enterobacteria phage N4 Virion DNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 101000644628 Escherichia phage Mu Tail fiber assembly protein U Proteins 0.000 description 1
- 241000714201 Feline calicivirus Species 0.000 description 1
- 208000000666 Fowlpox Diseases 0.000 description 1
- 206010069767 H1N1 influenza Diseases 0.000 description 1
- 101700012268 Holin Proteins 0.000 description 1
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 description 1
- 208000009620 Orthomyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710124413 Portal protein Proteins 0.000 description 1
- 101710099276 Probable metalloendopeptidase Proteins 0.000 description 1
- 101710112672 Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 101710194975 Uncharacterized protein gp14 Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 description 1
- WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N avridine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCCN(CCCN(CCO)CCO)CCCCCCCCCCCCCCCCCC WXNRAKRZUCLRBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229950010555 avridine Drugs 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 229940052303 ethers for general anesthesia Drugs 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 101150072564 gE gene Proteins 0.000 description 1
- 101150118312 gp63 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001492 haemagglutinating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000003446 memory effect Effects 0.000 description 1
- 125000001446 muramyl group Chemical group N[C@@H](C=O)[C@@H](O[C@@H](C(=O)*)C)[C@H](O)[C@H](O)CO 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
1. Rekombinowana zywa szczepionka, znamienna tym, ze obejmuje wektor wirusowy inkor- poruj acy i wyra zaj acy in vivo heterologiczn a sekwencj e nukleotydow a, korzystnie genu czynnika pato- gennego oraz przynajmniej jeden adiuwant wybrany spo sród polimerów kwasu akrylowego lub meta- krylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych. 2. Szczepionka wed lug zastrz. 1, znamienna tym, ze obejmuje jako adiuwant polimer kwasu akrylowego lub metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru lub polialkoholu. 19. Zastosowanie zwi azków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopo- limerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, jak okre slone w zastrz. 1 do 6, do wytwarzania rekombinowanych zywych szczepionek inkorporuj acych i wyra zaj acych in vivo heterolo- giczn a sekwencj e nukleotydow a. 20. Zestaw do szczepie n do formu lowania rekombinowanej zywej szczepionki o zwi ekszonej immunogenno sci, znamienny tym, ze zawiera, zapakowane oddzielnie, (a) rekombinowan a zyw a szczepionk e obejmuj ac a wektor wirusowy, który zawiera i wyra za in vivo heterologiczn a sekwencj e nukleotydow a patogennego czynnika w postaci liofilizowanej i (b) roztwór przynajmniej jednego adiu- wanta wybranego z grupy polimerów kwasu akrylowego lub metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, jak okre slone w zastrz. 1 do 6. PL PL PL PL
Description
(21) Numer zgłoszenia: 342820 (13) (22) Data zgłoszenia: 01.03.1999 (51) IntCL
A61K 39/39 (2006.01) (86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego: A61K 48° (2006°1)
01.03.1999, PCT/FR99/00453 C12N 15/44 (MM.OI) (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego:
10.09.1999, WO99/44633 PCT Gazette nr 36/99
Urząd Patentowy Rzeczypospolitej Polskiej
| Rekombinowana żywa szczepionka, zastosowanie związków wybranych z polimerów (54) kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych oraz zestaw do szczepień | |
| (30) Pierwszeństwo: 03.03.1998,FR,98/02800 | (73) Uprawniony z patentu: |
| MERIAL,Lyon,FR | |
| (43) Zgłoszenie ogłoszono: 02.07.2001 BUP 14/01 | (72) Twórca(y) wynalazku: Jean-Christophe Francis Audonnet,Lyon,FR Jules Maarten Minke,Corbas,FR |
| (45) O udzieleniu patentu ogłoszono: | (74) Pełnomocnik: Janina Kossowska, PATPOL Sp. z o.o. |
| 31.03.2008 WUP 03/08 |
(57) 1. Rekombinowana żywa szczepionka, znamienna tym, że obejmuje wektor wirusowy inkorporujący i wyrażający in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową, korzystnie genu czynnika patogennego oraz przynajmniej jeden adiuwant wybrany spośród polimerów kwasu akrylowego lub metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
2. Szczepionka według zastrz. 1, znamienna tym, że obejmuje jako adiuwant polimer kwasu akrylowego lub metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru lub polialkoholu.
19. Zastosowanie związków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, jak określone w zastrz. 1 do 6, do wytwarzania rekombinowanych żywych szczepionek inkorporujących i wyrażających in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową.
20. Zestaw do szczepień do formułowania rekombinowanej żywej szczepionki o zwiększonej immunogenności, znamienny tym, że zawiera, zapakowane oddzielnie, (a) rekombinowaną żywą szczepionkę obejmującą wektor wirusowy, który zawiera i wyraża in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową patogennego czynnika w postaci liofilizowanej i (b) roztwór przynajmniej jednego adiuwanta wybranego z grupy polimerów kwasu akrylowego lub metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, jak określone w zastrz. 1 do 6.
PL 197 405 B1
Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest rekombinowana żywa szczepionka, zastosowanie związków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych oraz zestaw do szczepień.
Zazwyczaj do szczepionek inaktywowanych lub podjednostkowych włącza się adiuwanty, które mają za zadanie wzmacniać odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciw antygenom zawartym w szczepionce.
Adiuwanty są również zwykle dodawane do atenuowanych żywych szczepionek, gdy atenuacja mikroorganizmów prowadzi do redukcji odpowiedzi immunologicznej.
W ostatnim okresie zaproponowano wykonywanie złożonych szczepień przeciwko kilku patogenom przy użyciu inaktywowanej szczepionki dla jednej wartościowości i atenuowanej żywej szczepionki dla innych wartościowości. Zaproponowano także rekonstytuowanie atenuowanej żywej szczepionki przechowywanej w formie liofilizowanej, w kompozycji inaktywowanej szczepionki zawierającej adiuwant. Taka kompozycja działa jako nośnik do rekonstytucji żywej szczepionki i nie posiada aktywności adiuwanta.
W publikacji EP-A-532 833 opisano szczepionkę przeciw końskiemu zapaleniu płuc i nieżytowi nosa, chorobie wywoływanej przez końskiego wirusa opryszczki (EHV od ang. equine herpesvirus). Szczepionka jest inaktywowana i należy do grupy obejmującej inaktywowany wirus EHV-4 i wirus EHV-1 i zawiera adiuwant Havlogen® oparty na polimerze poliakrylowym.
Tak jak w przypadku większości wirusów opryszczki, nie ma w chwili obecnej efektywnej szczepionki pozwalającej na szybkie wyeliminowanie wirusa po infekcji. Znane szczepionki starają się zabezpieczać przed pojawieniem się objawów klinicznych. W rzeczywistości ich wpływ na wydalanie wirusa jest ograniczony.
Zgodnie z danymi przedstawionymi publikacji EP-A-532 833, opracowana szczepionka doprowadza do spadku wydalania wirusa w zakresie od 79 do 93% (patrz rozdział wyniki). Osiem na dziewięć zwierząt kontrolnych wydalało wirusa po teście prowokacji przez średnio 1,4 dnia, podczas gdy normalny okres wydalania wirusa po prowokacji jest większy lub równy 5 dni. Oznacza to prowokację na niskim poziomie, która sztucznie podwyższa ochronę szczepionych koni w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi. Redukcja wydalania wirusa nie jest więc znacząca w tym eksperymencie.
Adiuwanty typu karbomerów były także wykorzystywane w inaktywowanych szczepionkach, zawierających wirusa grypy końskiej (IEV).
Mumford et al. (Epidemiol. Infect. (1994), 112, 421-437) przypominają, że konieczne są dwie dawki końskiej szczepionki IEV, aby wywołać przejściową odpowiedź humoralną i słabą ochronę przeciw wirusowi u koni. Autorzy porównują efekt adiuwantów, karbomeru i fosforanu glinu w szczepionkach inaktywowanych, w obecności lub braku anatoksyny tężca. We wszystkich przypadkach niskie miano przeciwciał mierzone za pomocą techniki SRH (pojedynczej radialnej hemolizy, ang. single radial haemolysis) z użyciem szczepu H7N7 i H3N8 otrzymywane jest po pierwszym i drugim szczepieniu i dopiero trzecie szczepienie powoduje silniejszą przejściową odpowiedź.
W opisie patentowym US-A-4 500 513 przedstawiono również próby szczepień przeciw wirusowi grypy końskiej, przy użyciu szczepionki inaktywowanej, w obecności karbomeru. Źródło zwierząt i ich stan medyczny nie są dokładnie opisane i wygląda na to, że są to zwierzęta gospodarcze (kolumna 11, paragraf 2). Wysokie miano przeciwciał zmierzone za pomocą techniki inhibicji hemaglutynacji, wskazuje na to, że zwierzęta prawdopodobnie były już zakażone grypą i że odpowiedź wywołana po szczepieniu wynikała z pobudzenia odpowiedzi pamięci, a nie ze szczepienia typu pierwotnego.
Firma Fort Dodge Solvay sprzedaje inaktywowane szczepionki przeciw grypie końskiej (Duvaxyn® IE i IE-T plus) oraz inaktywowaną szczepionkę przeciwko końskiemu zapaleniu płuc i nieżytowi nosa (Duvaxyn® EHVit4), wraz z adiuwantem karbomerowym.
Dostępne są także w handlu inaktywowane szczepionki przeciwko grypie końskiej zawierające wodorotlenek glinu jako adiuwant (na przykład Tetagripiffa®, Merial, Lion, Francja).
W konwencjonalnych inaktywowanych lub podjednostkowych szczepionkach stosuje się także wiele innych adiuwantów. Wśród nich można wymienić na przykład wodorotlenek glinu, fosforan glinu, Avridine®, DDA, monofosforylowany lipid A, Pluronic L121 i inne polimery, peptydy muramylowe, saponiny, dimikolat trehalozy (ang. trehalose dimycolate), kopolimery bezwodnika maleinowego i etylenu, kopolimery styrenu i kwasu akrylowego lub metakrylowego, polifosfazen, emulsje olejowe i podobne.
PL 197 405 B1
W publikacji WO-A-94 16681 sugeruje się suplementowanie rekombinowanych żywych szczepionek prowadzących do ekspresji heterologicznego genu otoczkowego wirusa kompozycją adiuwanta w formie emulsji typu woda w oleju, olej w wodzie lub woda w oleju w wodzie.
Taki roztwór może jednak cechować się wieloma wadami.
W praktyce, użytkownik końcowy powinien mieć dostępny z jednej strony liofolizowany składnik aktywny, a z drugiej przygotowaną emulsję, która powinna umożliwiać rekonstytucję liofilizowanego składnika aktywnego.
Brak stabilności emulsji w czasie przechowywania może obniżyć skuteczność i bezpieczeństwo zrekonstytuowanej szczepionki.
Aktywność atenuowanych żywych mikroorganizmów może być zmienna z powodu ich niestabilności w fazie olejowej. W szczególności, może się tak zdarzyć w przypadku wirusów, które mogą w ten sposób stracić swoją żywotność.
Szczepionki w formie emulsji mogą także stwarzać problemy pod względem bezpieczeństwa w miejscu wstrzyknięcia.
Celem niniejszego wynalazku jest dostarczenie nowych kompozycji szczepionek opartych na rekombinowanych żywych szczepionkach wyrażających co najmniej jedną heterologiczną sekwencję nukleotydową, korzystnie genu heterologicznego, zawierających odpowiedni dla tego typu szczepionki adiuwant, który zdolny jest do znaczącego podniesienia immunogenności w stosunku do tej samej szczepionki bez adiuwanta.
Zgłaszający nieoczekiwanie stwierdził, że klasa substancji karbomerów zdolna jest do działania jako adiuwant w warunkach odpowiednich dla tego typu szczepionek i to w nieoczekiwanych proporcjach. Próby przeprowadzone na wirusach opryszczki zwierzęcej (EHV-1, opryszczka końska) wykazały, że dodanie karbomeru może zredukować wydalanie wirusa w czasie infekcji eksperymentalnej, w nieoczekiwanych proporcjach. Ponadto, inne próby przeprowadzone z wirusem końskiej grypy typu A umożliwiły otrzymanie u koni szybko pojawiającego się i bardzo wysokiego miana przeciwciał, wyższego od otrzymywanego za pomocą najlepszych, dostępnych w handlu szczepionek.
Wynalazek dotyczy rekombinowanej żywej szczepionki obejmującej wektor wirusowy inkorporujący i wyrażający in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową, korzystnie genu czynnika patogennego oraz przynajmniej jeden adiuwant wybrany spośród polimerów kwasu akrylowego lub metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
Szczepionka według wynalazku korzystnie obejmuje jako adiuwant polimer kwasu akrylowego lub metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru lub polialkoholu, korzystniej usieciowany allilosacharozą lub allilopentaerytrytolem.
Korzystna szczepionka według wynalazku obejmuje w charakterze adiuwanta kopolimer bezwodnika maleinowego i etylenu usieciowane, przykładowo, eterem diwinylowym.
Korzystnie adiuwant jest obecny w szczepionce w ilości od 0,01% do 2% wag./obj., korzystnie stężenie adiuwanta wynosi od 0,06 do 1% wag./obj., korzystniej 0,1 do 0,6% wag./obj.
Szczepionka według wynalazku korzystnie obejmuje wektor inkorporujący i wyrażający przynajmniej jeden gen zwierzęcego wirusa opryszczki, korzystnie wybranego z grupy składającej się z wirusa opryszczki końskiej EHV-1 i/lub EHV-4, wirusa opryszczki kociej FHV, wirusa opryszczki psiej CHV, wirusa opryszczki ptasiej ILTV lub Marek'a, wirusa opryszczki bydlęcej BHV i wirusa opryszczki świńskiej PRV.
W korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka zawiera wektor inkorporujący i wyrażający przynajmniej jeden gen wirusa grypy, korzystnie wybranego z grupy składającej się z wirusa grypy końskiej, wirusa grypy ptasiej i wirusa grypy świńskiej.
W kolejnym korzystnym wykonaniu szczepionki według wynalazku obejmuje wektor inkorporujący i wyrażający przynajmniej jeden gen zwierzęcego wirusa wybranego z grupy składającej się z wirusa białaczki kociej FeLV, wirusa nosówki psiej CDV lub toksyny tężcowej.
W korzystnym wykonaniu szczepionki wektor wirusowy wybrany jest z grupy składającej się z wirusa ospy, adenowirusa, wirusa opryszczki, przy czym wirus ospy korzystnie wybrany jest z grupy składającej się z wirusa ospy krowiej, wirusa ospy ptaków, wirusa ospy kanarków, wirusa ospy gołębiej, wirusa ospy świńskiej.
W innym korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka obejmuje wirus ospy kanarków inkorporujący i wyrażający geny gB, gC i gD końskiego wirusa opryszczki EHV-1 lub EHV-4.
PL 197 405 B1
Korzystnie szczepionka według wynalazku obejmuje dwa lub trzy wektory wirusa ospy kanarków, przy czym każdy z nich obejmuje gen HA wirusa grypy końskiej, a każdy gen HA otrzymany jest z innego szczepu.
Równie korzystnie szczepionka według wynalazku obejmuje wektor wirusa ospy kanarków, obejmujący dwa lub trzy geny HA wirusa grypy końskiej, przy czym każdy gen HA otrzymany jest z innego szczepu.
Ponadto korzystnie szczepionka według wynalazku zawiera wektor wirusa ospy kanarków, obejmujący i wyrażający geny gB, gC i gD kociego wirusa opryszczki FHV.
W innym korzystnym wykonaniu wynalazku szczepionka obejmuje wektor wirusa ospy kanarków inkorporujący i wyrażający geny HA i F wirusa nosówki CDV.
Wynalazek dotyczy też zastosowania związków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, do wytwarzania rekombinowanych żywych szczepionek inkorporujących i wyrażających in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową.
Wynalazek również dotyczy zestawu do szczepień do formułowania rekombinowanej żywej szczepionki o zwiększonej immunogenności zawierającego zapakowane oddzielnie: (a) rekombinowaną żywą szczepionkę obejmującą wektor wirusowy, który zawiera i wyraża in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową patogennego czynnika w postaci liofilizowanej i (b) roztwór przynajmniej jednego adiuwanta wybranego z grupy polimerów kwasu akrylowego lub metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
Zalecanymi adiuwantami są polimery kwasu akrylowego lub metakrylowego, usieciowane zwłaszcza eterami polialkenylowymi cukrów lub polialkoholi. Związki te znane są jako karbomery (Pharmeuropa, tom 8, nr 2, czerwiec 1996). W opisie US-A-2 909 462 ujawniono takie polimery akrylowe usieciowane związkami polihydroksylowymi, posiadającymi przynajmniej trzy grupy hydroksylowe, korzystnie nie więcej niż osiem, w których atomy wodoru przynajmniej trzech grup hydroksylowych zostały zastąpione nienasyconymi rodnikami alifatycznymi, zawierającymi przynajmniej dwa atomy węgla. Korzystne są rodniki zawierające od dwóch do czterech atomów węgla, np. winyle, allile i inne etylenowo nienasycone grupy. Nienasycone rodniki mogą zawierać inne podstawniki, takie jak metyl. Szczególnie wskazane są produkty sprzedawane pod nazwą Carbopol® (BF Goodrich, Ohio, USA). Są one usieciowane allilosacharozą lub allilopentaerytrytolem. Wśród nich wymienić należy Carbopol® 974P, 934P i 971P.
Wśród kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych korzystne są kopolimery EMA® (Monsanto), które są kopolimerami bezwodnika maleinowego i etylenu, liniowymi albo usieciowanymi, przykładowo usieciowanymi eterem diwinylowym. Zostało to opisane w publikacji J. Fields et al., Nature, 186: 778-780, 4 czerwca 1960, włączonej niniejszym jako referencje.
Z punktu widzenia struktury polimery kwasu akrylowego lub metakrylowego kopolimery EMA są korzystnie utworzone z podstawowych jednostek o następującym wzorze:
R1
----C-(CH2)xC OOH ę—<CH2yyC OOH w którym:
Ri i R2, które są identyczne lub różne, oznaczają H lub CH3; x = 0 lub 1, korzystnie x = 1; y = 1 lub 2, gdzie x + y = 2;
Dla kopolimerów EMA® x = 0 i y = 2. Dla karbomerów x = y = 1.
Rozpuszczenie tych polimerów w wodzie prowadzi do powstania roztworu kwaśnego, który należy zobojętnić, korzystnie do poziomu pH fizjologicznego, w celu otrzymania roztworu adiuwanta, do którego włączona będzie szczepionka. Grupy karboksylowe polimeru znajdują się wtedy częściowo w postaci COO'.
Korzystnie roztwór adiuwanta, stosowany w rozwiązaniach według wynalazku, zwłaszcza karbomeru, wytwarza się w wodzie destylowanej, korzystnie w obecności chlorku sodu, przy czym otrzymany roztwór ma pH kwasowe. Roztwór podstawowy rozcieńcza się przez dodanie go do odpowiedPL 197 405 B1 niej ilości wody (dla otrzymania żądanego stężenia końcowego) zawierającej NaCI, korzystnie soli fizjologicznej (NaCl 9 g/l) jednorazowo lub w kilku porcjach, z jednoczesnych lub późniejszym zobojętnieniem (pH 7,3 do 7,4), korzystnie przy użyciu NaOH. Roztwór ten o pH fizjologicznym stosuje się do rekonstytuowania szczepionki, szczególnie przechowywanej w postaci liofilizowanej.
Stężenie polimeru w ostatecznym roztworze szczepionki, wynosi 0,01% do 2% wag./obj., korzystniej 0,06% do 1% wag./obj., najkorzystniej 0,1% do 0,6% wag/obj.
Szczepionka według wynalazku jest szczególnie przydatna do szczepień przeciwko zwierzęcym wirusom opryszczki, szczególnie przeciwko wirusowi opryszczki końskiej (szczególnie EHV-1 i EHV-4), wirusowi opryszczki kociej (FHV), wirusowi opryszczki psiej (CHV), wirusowi opryszczki ptasiej (MMILTV), wirusowi opryszczki bydlęcej (BHV) i wirusowi opryszczki świńskiej (PRV = wirus choroby Aujeszky'ego).
W publikacji nr WO-A-92 15672 (włączonej jako referencje), opisano produkcję wektorów ekspresyjnych, opartych na wirusach ospy, zdolnych do wywołania ekspresji takich genów. Opisane są w powyższej publikacji wirus ospy kanarków, wywołujący ekspresję genów gB, gC i gD wirusa EHV-1 (vCP132), który można również stosować do EHV-4, do wirusa ospy krowiej, wywołującego ekspresję tych samych genów (vP 1043), wirusa ospy krowiej, wywołującego ekspresję genów gl (gB), gIII(gC) i gIV(gD) wirusa BHV-1, wirusa ospy kanarków, wywołującego ekspresję gD wirusa FHV-1 lub rekombinantów wywołujących ekspresję gII(gB), gIII(gC) i gp50(gD) wirusa PRV. Natomiast w publikacji WO-A-95/26 751 (włączonej przez cytowanie), opisane są rekombinowane wirusy vCP320, vCP322 i vCP294, wywołujące ekspresję genów, odpowiednio gB, gC i gD wirusa CHV. Natomiast w FR-A-2 647 808 oraz WO-A-9012882, włączonych przez cytowanie opisano rekombinanty wywołujące ekspresję genów wirusów FHV, PRV i BHV.
Szczepionki według wynalazku są szczególnie przydatne do prowadzenia szczepień przeciwko wirusom grypy, jak to wykazano na przykładzie EIV (wirusa grypy końskiej). Szczepionki według wynalazku można również stosować do prowadzenia szczepień przeciwko grypie ptasiej (AIV) i grypie świńskiej (wirus grypy świńskiej).
W publikacji WO-A-92 15 672, opisany został rekombinowany wirus ospy kanarków, wywołujący ekspresję genu HA wirusa EIV.
Żywe szczepionki opisane w opisie wynalazku, zawierają przynajmniej jeden wektor wirusowy, inkorporujący i wywołujący ekspresję przynajmniej jednego wirusa grypy oraz przynajmniej jeden adiuwant opisany w opisie wynalazku. W niektórych przypadkach taka szczepionka zawierać może mieszaninę dwóch lub trzech wektorów, z których każdy inkorporuje i wywołuje ekspresję genu HA, otrzymanego z różnych szczepów, np. wirusa grypy końskiej szczepu Praga, Kentucky i Newmarket. Podobnie pojedynczy wektor może być stosowany do inkorporacji i ekspresji genów HA dwóch lub trzech szczepów.
Szczepionki według wynalazku można również stosować do szczepień przeciwko innym patogenom zwierzęcym, szczególnie takim jak FeLV (patrz także np. rekombinanty wirusa ospy kanarków w WO-A-92 15672, wywołujące ekspresję białek env i gag = vCP93 i vCP97), tężec (patrz także WO-A-92 15672 i rekombinanty vCP161 i vP1075, wirus ospy kanarków i ospy krowiej, powodujące ekspresję toksyny tężca), wirus choroby Carre (wirus nosówki psiej, czyli CDV) (patrz rekombinant vCP 258 opisany w publikacji WO-A-95 27780, włączonej przez cytowanie).
Wynalazek można zrealizować wykorzystując dowolnego typu wektor dla ekspresji wirusowej, taki jak wirus ospy (wirus ospy krowiej, łącznie z NYVAC (patrz publikacja WO-A-92/15672), ospy drobiu, ospy kanarków, ospy gołębiej, ospy świńskiej i podobnych), adenowirusa i wirusa opryszczki. Wirus ospy kanarków, np. ALVAC (WO-A-95/27760 oraz WO-A-92/15672) jest szczególnie przydatny do zastosowania w niniejszym wynalazku.
W gotowej do użycia, korzystnie rekonstytuowanej szczepionce, wektor wirusowy obecny jest w ilościach normalnie stosowanych i opisywanych w literaturze.
Rekombinowane, żywe szczepionki zazwyczaj występują w formie liofilizowanej, umożliwiającej ich przechowywanie i rekonstytuowane są bezpośrednio przed użyciem w rozpuszczalniku lub rozczynniku, którym jest tutaj roztwór adiuwanta opisanego w wynalazku.
Rozwiązania według wynalazku umożliwiają szczepienie metodą polegającą na podawaniu szczepionki drogą pozajelitową, najlepiej podskórnie, domięśniowo, śródskórnie lub drogą dośluzówkową, tak jak to przedstawiono w opisie, w ilości jednej lub więcej dawek, ewentualnie ze wstępnym krokiem rekonstytucji liofilizowanej szczepionki (rekombinowanego wektora) w roztworze adiuwanta.
PL 197 405 B1
Stosowanie takiej metody szczepienia prowadzi do ochrony zwierząt z klinicznego punktu widzenia oraz zredukowania wydalania wirusów, w szczególności wirusów opryszczki.
Uzyskuje się w ten sposób również zwiększenie odpowiedzi immunologicznej oraz jej przyspieszenie, szczególnie przez indukcję przeciwciał w momencie podania pierwszej dawki.
Wykorzystanie adiuwantów opisanych w opisie wynalazku do produkcji rekombinowanych żywych szczepionek prowadzi do wywołanie silniejszej i wcześniejszej odpowiedzi immunologicznej i/lub zwiększonej redukcji wydalania wirusa. Wynalazek jest bardziej szczegółowo poniżej zilustrowany przy pomocy przykładów nie ograniczających jego zakresu i odnoszących się do rysunku, na którym: na figurze 1 przedstawiona jest sekwencja nukleotydowa genu EIV HA szczepu Newmarket 2/93; na figurze 2 przedstawiona jest sekwencja nukleotydowa genu FVH-1 gC; na figurze 3 przedstawiono zmianę wydalania wirusa po eksperymentalnym zakażeniu koni zaszczepionych za pomocą różnych szczepionek przeciw wirusowi opryszczki.
Przykłady
P r z y k ł a d 1. Wytworzenie plazmidów donorowych dla miejsc insercji C3, C5 i C6 do wirusa ospy kanarków „ALVAC”
Plazmidy donorowe dla różnych miejsc insercji do wirusa ospy kanarków „ALVAC” (Tartaglia et al. Virology, 1992, 188, 217-232, włączona przez cytowanie) opisane są w publikacji WO-A-95/27780, przykład 20.
Plazmidy te zostały oznaczone w niniejszej publikacji w następujący sposób:
„plazmid VQH6CP3LSA.2” dla miejsca „C3”' „plazmid HC5LSP28” dla miejsca „C5”;
„plazmid pC6L” dla miejsca „C6”.
P r z y k ł a d 2. Wytworzenie rekombinowanego wirusa vCP258 (ALVAC/CDV HA+F)
Szczep Onderstepoort wirusa CDV wykorzystano do izolacji genów HA i F (sekwencja genu HA opisana została przez Currana et al. Virology 1991,72, 443-447, a sekwencja genu F opisana została przez Berretta et al. Virus Research 1987, 8, 373-386, obie prace włączone przez cytowanie).
Konstrukcja plazmidu donorowego pMM103 do insercji kaset ekspresji H6 promotora wirusa ospy krowiej - genu CDV F oraz H6 promotora ospy krowiej - CDV HA w miejscu C6 wirusa ALVAC opisana została w przykładzie 19 publikacji WO-A-95/27780.
Plazmid ten wykorzystano jako donor do rekombinacji in vitro (Piccini et al. Methods in Enzymology. 1987, 153, 545-563, włączona przez cytowanie), z wirusem ALVAC, co doprowadziło do uzyskania rekombinowanego wirusa oznaczonego vCP258 jak w przykładzie 19 powyżej wspomnianej publikacji.
P r z y k ł a d 3. Wytworzenie rekombinowanego wirusa vCP1502 (ALVAC/EIV HA Praga)
Sekwencja genu HA (szczep EIV Praga) przedstawiona jest na figurze 23 publikacji WO-A-92/15672. RNA wirusowe genomu szczepu Praga 56 końskiego wirusa grypy, zostało wyizolowane ze 100 μΙ zawiesiny wirusa, przy pomocy zestawu do ekstrakcji „Total RNA separator kit” firmy Clontech (Palo Alto, CA) (nr kat. K1042-1). Pelet z RNA został rozpuszczony w 10 μl ultraczystej wody, a reakcja syntezy komplementarnego DNA oraz reakcja PGR (= reakcja „RT-PCR”) przeprowadzone zostały przy użyciu 2 μl matrycy oczyszczonego RNA wirusowego i następujących oligonukleotydów:
TAY51A (sekwencja identyfikacyjna nr 1) (70-merowa)
5'CGCGGCCATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTAATGAACACTCAAATTCTAATATTAG CCACTTCGG3' oraz
TAY53A (sekwencja identyfikacyjna nr 2) (36-merowa)
5'CGCGCGGCGGTACCTTATATACAAATAGTGCACCGC3' w celu amplifikacji genu HA wirusa EIV Praga. Otrzymany metodą PGR fragment został połączony z wektorem pCRII (Invitrogen, San Diego, CA) dając plazmid pJT007.
Plazmid pJT007 został strawiony za pomocą Nrul i Asp718 w celu izolacji fragmentu NruI-718 o wielkości ok. 1800 par zasad, zawierającego końcówkę promotora H6 i cały gen HA wirusa Praga 56. Fragment ten został połączony z plazmidem donorowym C5 HC5LSP28, uprzednio strawionym Nrul i Asp718, dając plazmid pJT008. Plazmid ten zawiera kasetę ekspresji H6 genu HA wirusa Praga 56 w miejscu C5 wirusa ALVAC. Struktura tego plazmidu potwierdzona została za pomocą sekwencjonowania i całkowitej mapy restrykcyjnej.
Plazmid ten jest plazmidem donorowym do insercji kasety ekspresji H6 genu HA wirusa Praga 56 w locus C5.
PL 197 405 B1
Po linearyzacji za pomocą Notl, plazmid pJT008 wykorzystany był jako plazmid donorowy do rekombinacji in vitro (Piccini et al. Methods in Enzymology. 1987, 153, 545-563) z wirusem ALVAC w celu wytworzenia wirusa rekombinowanego, oznaczonego vCP1502.
P r z y k ł a d 4. Wytworzenie wirusa rekombinowanego vCP1502 (ALVAC/EIV HA Kentucky 1/94)
RNA wirusowe genomu szczepu Kentucky 1/94 wirusa grypy końskiej (Dały et al. J. Gen. Virol. 1996, 77, 661-671, włączona przez cytowanie), wyizolowane zostało ze 100 μΙ zawiesiny wirusa przy pomocy zestawu do ekstrakcji „Total RNA separator kit” firmy Clontech (Palo Alto, CA) (nr kat. K1042-1). Pelet RNA został rozpuszczony w 10 μl ultraczystej wody, a reakcja syntezy komplementarnego DNA oraz reakcja PGR (= reakcja „RT-PCR”) przeprowadzone zostały przy użyciu 2 μl matrycy oczyszczonego RNA wirusowego i następujących oligonukleotydów:
TAY55A (sekwencja identyfikacyjna nr 3) (70-merowa)
5'CGCGGCCATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTAATGAAGACAACCATTATT TTGATA-CTACTGACCC3' oraz
TAY57A (sekwencja identyfikacyjna nr 4) (42-merowa)
5'CGCGCGGCGGTACCTCAAATGCAAATGTTGCATCTGATGTTG3' w celu amplifikacji genu HA. Otrzymany w ten sposób fragment został połączony z wektorem pCRII (Invitrogen, San Diego, CA) dając plazmid pJT001. Sekwencja genu HA wirusa EIV szczepu Kentucky 1/94 wklonowana w plazmid pJT001 nie jest różna od sekwencji genu HA wirusa EIV szczepu Kentucky 1/94, dostępnej w bazie danych GenBank (nr L 39914, włączone przez cytowanie).
Plazmid pJT001 zawierający gen HA (Kentucky 1/94) został strawiony za pomocą Nrul i Asp718 w celu izolacji fragmentu NruI-Asp718, o wielkości ok. 1800 par zasad (zawierającego końcówkę promotora H6 i cały gen HA wirusa Kentucky 1/94). Fragment ten został połączony z plazmidem donorowym C5 HC5LSP28, uprzednio strawionym Nrul i Asp718, dając plazmid pJT005. Plazmid ten zawiera kasetę ekspresji H6 genu HA wirusa Kentucky 1/94 w miejscu C5 wirusa ALVAC. Struktura tego plazmidu potwierdzona została za pomocą sekwencjonowania i kompletnej mapy restrykcyjnej.
Plazmid ten jest plazmidem donorowym do insercji kasety ekspresji H6 genu HA wirusa Kentucky 1/94 w miejscu C5.
Po linearyzacji za pomocą Notl, plazmid pJT005 wykorzystany był jako plazmid donorowy do rekombinacji in vitro (Piccini et al. Methods in Enzymology. 1987, 153, 545-563) z wirusem ALVAC w celu wytworzenia wirusa rekombinowanego, oznaczonego vCP1529.
P r z y k ł a d 5. Wytworzenie wirusa rekombinowanego vCP1533 (ALVAC/EIV HA Newmarket 2/93)
RNA wirusowe genomu szczepu Newmarket 2/93 wirusa grypy końskiej (Daly et al. J. Gen. Virol. 1996, 77, 661-671), wyizolowane zostało ze 100 μl zawiesiny wirusa, przy pomocy zestawu do ekstrakcji „Total RNA separator kit” firmy Clontech (Palo Alto, CA) (nr kat. K1042-1). Pelet RNA został rozpuszczony w 10 μl ultraczystej wody, a reakcja syntezy komplementarnego DNA oraz reakcja PGR (= reakcja „RT-PCR”) przeprowadzone zostały przy użyciu 2 μl matrycy oczyszczonego RNA wirusowego i następujących oligonukleotydów:
CCL007 (sekwencja identyfikacyjna nr 5) (40-merowa)
5'TTGTCGACTCAATCATGAAGACAACCATTATTTTGATACT3' oraz
CCL0018 (sekwencja identyfikacyjna nr 6) (34-merowa)
5'TTGGATCCTTACTCAAATGCAAATGTTGCAYCTG3' w celu amplifikacji genu HA. Otrzymany w ten sposób fragment został połączony z wektorem pCRII (Invitrogen, San Diego, CA) dając plazmid pCCL026. Sekwencja genu HA (wirusa EIV szczepu Newmarket 2/93)przedstawiona jest na figurze nr 1 (sekwencja identyfikacyjna nr 7).
Plazmid pCCL026 zawierający gen HA (szczepu Newmarket 2/93) został strawiony za pomocą Spel i AccI. Następujące oligonukleotydy:
TAY99N (sekwencja identyfikacyjna nr 8) (74-merowa)
5'CTAGTTCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTAATGAAGACAACCATTATTTTG ATACTA-CTGACCCATTGGGT3' oraz
TAY100N (sekwencja identyfikacyjna nr 9) (72-merowa)
5'AGACCCAATGGGTCAGTAGTATCAAAATAATGGTTGTCTTCATTACGATACAAA CTTAAC-GGATATCGCGAA3'
PL 197 405 B1 zostały połączone z plazmidem pCCL026 strawionym za pomocą Spel+AccI dając plazmid pJT003. Dwuniciowy nukleotyd TAY99N/TAY100N zawiera region 3' promotora H6 do miejsca Nrul i pierwszych 40 kodujących zasad genu HA.
Plazmid JT003 został strawiony za pomocą Nrul i Xhol w celu izolacji fragmentu NruI-XhoI, o wielkości ok. 1800 par zasad, zawierającego końcówkę promotora H6 i cały gen HA. Fragment ten został połączony z plazmidem donorowym C5 HC5LSP28, uprzednio strawionym Nrul i Xhol, dając plazmid pJT004. Plazmid ten zawiera kasetę ekspresji H6 genu HA wirusa Newmarket 2/93 w miejscu C5 wirusa ALVAC. Struktura tego plazmidu potwierdzona została za pomocą sekwencjonowania i kompletnej mapy restrykcyjnej.
Plazmid ten jest plazmidem donorowym do insercji kasety ekspresji H6 genu HA wirusa Newmarket 2/93 w miejscu C5.
Po linearyzacji za pomocą Pvul, plazmid pJT004 wykorzystany był jako plazmid donorowy do rekombinacji in vitro (Piccini et al. Methods in Enzymology. 1987, 153, 545-563) z wirusem ALVAC w celu wytworzenia wirusa rekombinowanego, oznaczonego vCP1533.
P r z y k ł a d 6. Wytworzenie wirusa rekombinowanego vCP132 (ALVAC/EHV-1 gB+gC+gD)
Konstrukcja tego rekombinowanego wirusa opisana została w przykładach 25 i 26 publikacji WO-A-92/15672. Wirus ten został wytworzony przez rekombinację in vitro pomiędzy wirusem ALVAC i plazmidem donorowym pJCA049. Plazmid ten zawiera następujące 3 kasety ekspresji wklonowane w miejscu insercji C3:
I3L promotor wirusa ospy krowiej - gen gB wirusa EHV-1;
H6 promotor wirusa ospy krowiej - gen gC wirusa EHV-1;
42K promotor entomowirusa ospy - gen gD wirusa EHV-1.
Sekwencje genów gB, gC i gD wirusa EHV-1 opisane są w publikacji WO-A-92/15672, na figurze nr 2 (sekwencja genu gp13 EHV-1 = gC), nr 6 (sekwencja genu gp14 EHV-1 = gB) i nr 12 (sekwencja genów gD, gp63 i gE EHV-1).
P r z y k ł a d 7. Wytworzenie wirusa rekombinowanego vCP243 (ALVAC/FHV-1 gB+gC+gD)
Sekwencja genu gB FHV-1 (szczep CO) przedstawiona jest na figurze nr 34 publikacji WO-A-90/12882.
Gen gC FHV-1 (szczep CO) (sekwencja przedstawiona na figurze nr 2) (sekwencja identyfikacyjna nr 10) został sklonowany z fragmentu F EcoRI (7,6 tysięcy par zasad). Posiada on wielkość 1599 par zasad i koduje białko składające się z 533 aminokwasów.
Gen gD FHV-1 (szczep CO) (sekwencja przedstawiona na figurze nr 28 publikacji WO-A-92/15672) został sklonowany z fragmentu M EcoRI (4,4 tysięcy par zasad) (plazmid pFHVEco-RIM).
Konstrukcja kasety ekspresji I3L-FHV-1 genu gB zmutowała na poziomie sygnałów wczesnej terminacji transkrypcji (TTTTTNT).
Następujące oligonukleotydy:
MP287 (sekwencja identyfikacyjna nr 11) (20-merowa)
5'GATTAAACCTAAATAATTGT3' oraz
JCA158 (sekwencja identyfikacyjna nr 12) (21-merowa)
5'TTTTTCTAGACTGCAGCCCGGGACATCATGCAGTGGTTAAAC3' wykorzystane były do amplifikacji PGR na matrycy plazmidu zawierającego promotor wirusa ospy krowiej I3L (Riviere et al. J. Virol. 1992, 66, 3424-3434, włączona przez cytowanie) w celu wytworzenia fragmentu Xbal o wielkości 120 tysięcy par zasad (zawierającego promotor I3L wirusa ospy krowiej) = fragment A.
Następujące oligonukleotydy:
JCA213 (sekwencja identyfikacyjna nr 13) (18-merowa)
5'GGGTTTCAGAGGCAGTTC3' oraz
JCA238 (sekwencja identyfikacyjna nr 14) (21-merowa)
5'ATGTCCACTCGTGGCGATCTT3' wykorzystane zostały do wytworzenia za pomocą reakcji PGR na matrycy plazmidu pJCA001, fragmentu BamHI o tępych końcach o wielkości 720 par zasad (zawierającego część 5' genu gB FHV-1) = fragment B.
Fragment A został strawiony za pomocą Xbal, a następnie ufosforylowany. Fragment B został strawiony za pomocą BamHI, a następnie ufosforylowany. Fragmenty A i B zostały następnie połączone za pomocą wektora pBluescript SK+, uprzednio strawionego za pomocą Xbal i BamHI, dając plazmid pJCA075.
PL 197 405 B1
Następujące oligonukleotydy:
JCA158 (sekwencja identyfikacyjna nr 15) oraz
JCA211 (sekwencja identyfikacyjna nr 16) (21-merowa)
5'GTGGACACATATAGAAAGTCG3' wykorzystane były do wytworzenia za pomocą techniki PGR, na matrycy plazmidu pJCA075, tępo zakończonego fragmentu Xbal o wielkości 510 par zasad (zawierającego promotor I3L połączony z końcem 5' genu gB FHV-1 zmutowanego na poziomie sygnału TTTTTNT) = fragment C.
Następujące oligonukleotydy:
JCA212 (sekwencja identyfikacyjna nr 17) (21-merowa)
5'CACCTTCAGGATCTACTGTCG3' oraz
JCA213 (sekwencja identyfikacyjna nr 13) (18-merowa) wykorzystane zostały do wytworzenia za pomocą matrycy plazmidu pJCA001, fragmentu BamHI o wielkości 330 par zasad (zawierającego środkową część genu gB FHV-1) = fragment D.
Fragment C został strawiony za pomocą Xbal, a następnie ufosforylowany. Fragment D został strawiony za pomocą BamHI, a następnie ufosforylowany. Fragmenty C i D zostały następnie połączone za pomocą wektora pBluescript SK+, uprzednio strawionego za pomocą Xbal i BamHI, dając plazmid pJCA076.
Następujące oligonukleotydy:
JCA239 (sekwencja identyfikacyjna nr 18) (24-merowa)
5'ACGCATGATGACAAGATTATTATC3' oraz
JCA249 (sekwencja identyfikacyjna nr 19) (18-merowa):
5'CTGTGGAATTCGCAATGC3' wykorzystane były do wytworzenia za pomocą techniki PGR, na matrycy plazmidu pJCA001 tępo zakończonego fragmentu EcoRI o wielkości 695 par zasad (zawierającego pierwszą część 3' genu gB FHV-1) = fragment E.
Następujące oligonukleotydy:
JCA221 (sekwencja identyfikacyjna nr 20) (48-merowa)
5'AAAACTGCAGCCCGGGAAGCTTACAAAAATTAGATTTGTTTCAGTATC3' oraz
JCA247 (sekwencja identyfikacyjna nr 21) (36-merowa)
5'GGTATGGCAAATTTCTTTCAGGGACTCGGGGATGTG3' wykorzystane zostały do wytworzenia za pomocą matrycy plazmidu pJCA001 fragmentu Pstl o wielkości 560 par zasad (zawierającego drugą część 3' genu gB FHV-1 zmutowanego na poziomie sygnału TTTTTNT) = fragment F.
Fragment E został strawiony za pomocą EcoRI, a następnie ufosforylowany. Fragment F został strawiony za pomocą Pstl, a następnie ufosforylowany. Fragmenty C i D zostały następnie połączone za pomocą wektora pIBI24 (International Biotechnologies Inc., New Haven, CT), uprzednio strawionego za pomocą EcoRI i Pstl, dając plazmid pJCA077 (zawierający kasetę I3L promotora wirusa ospy krowiej genu B FHV-1).
Konstrukcja kasety ekspresji 42K-FHV-1 gD.
Następujące oligonukleotydy:
RG286 (sekwencja identyfikacyjna nr 22) (17-merowa)
5'TTTATATTGTAATTATA3' oraz
M13F (sekwencja identyfikacyjna nr 23) (17-merowa)
5'GTAAAACGACGGCCAGT3' wykorzystane były do wytworzenia za pomocą techniki PGR, na matrycy plazmidu zawierającego promotor AmEPV entomowirusa ospy 42 K (opisanego w przykładzie 21 patentu US-A-5 505 941), fragmentu EcoRI o wielkości 130 par zasad (zawierającego promotor entomowirusa 42 K) = fragment A.
Następujące oligonukleotydy:
JCA234 (sekwencja identyfikacyjna nr 24) (21-merowa)
5'ATGATGACACGTCTACATTTT3' oraz
JCA235 (sekwencja identyfikacyjna nr 25) (21-merowa)
5'TGTTACATAACGTACTTCAGC3' wykorzystane zostały do wytworzenia za pomocą techniki PGR, na matrycy plazmidu pFHVEcoRIM, fragmentu BamHI o wielkości 185 par zasad (zawierającego część 5' genu gD FHV-1) = fragment B. Fragment A został strawiony za pomocą EcoRI, a następnie ufosforylowany. Fragment B został strawiony za pomocą BamHI, a następnie ufosforylowany. Fragmenty A i B zostały następnie połączone
PL 197 405 B1 za pomocą wektora pBluescript SK+, uprzednio strawionego za pomocą EcoRI i BamHI, dając plazmid pJCA078.
Plazmid pFHVEcoRIM (patrz wyżej) został strawiony za pomocą BamHI i Xhol w celu izolacji fragmentu BamHI-XhoI o wielkości 1270 par zasad (zawierającego koniec 3' genu gD FHV-1). Fragment ten został następnie połączony z wektorem pIBI24, uprzednio strawionym za pomocą BamHI i Xhol, dając plazmid pJCA072.
Następujące oligonukleotydy:
JCA242 (sekwencja identyfikacyjna nr 26) (18-merowa)
5'GAGGATTCGAAACGGTCC3' oraz
JCA237 (sekwencja identyfikacyjna nr 27) (53-merowa):
5'AATTTTCTCGAGAAGCTTGTTAACAAAAATCATTAAGGATGGTAGATTGCATG3 wykorzystane były do wytworzenia za pomocą techniki PCR, na matrycy plazmidu pFHVEcoRIM, fragmentu XbaI-XhoI o wielkości 290 par zasad. Fragment ten został strawiony Xbal i Xhol i uzyskano fragment C (zawierający koniec genu gD FHV-1).
Plazmid pJCA072 został strawiony za pomocą Xbal i Xhol w celu izolacji fragmentu XbaI-XhoI o wielkości 3575 par zasad (wektor pIBI24 + początek części 3' genu gD FHV-1) = fragment D. Fragmenty C i D zostały następnie połączone, dając plazmid pJCA073.Plazmid pJCA073 został strawiony za pomocą BamHI i Xhol w celu izolacji fragmentu BamHI-XhoI o wielkości 960 par zasad (zawierającego koniec 3' genu gD FHV-1) = fragment A. Plazmid pJCA078 został strawiony Hpal i BamHI w celu izolacji fragmentu Hpal-BamHI o wielkości 310 par zasad (zawierającego promotor 42 K połączony z końcem 5' genu gD FHV-1) = fragment B. Fragmenty A i B zostały połączone za pomocą wektora pBlu-escropt SK+, uprzednio strawionego za pomocą EcoRV i Xhol, dając plazmid pJCA080 (zawierający kasetę promotora 42K-gen gD FHV-1).
Wytworzenie kasety H6-FHV-1 gC.
Genomowe DNA wirusa FHY-1 (szczep CO) zostało strawione za pomocą EcoRI, a fragment F EcoRI o wielkości około 7500 par zasad został wklonowany do pBluescript SK+, dając plazmid pFHVEcoRIF.
Następujące oligonukleotydy:
JCA274 (sekwencja identyfikacyjna nr 28) (55-merowa)
5'CATTATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGTAATGAGACGATATAGGATGGGA 3' oraz
JCA275 (sekwencja identyfikacyjna nr 29) (18-merowa)
5'ACTATTTTCAATACTGAC3' wykorzystane były do wytworzenia za pomocą techniki PGR, na matrycy plazmidu pFHVEcoRIF, fragmentu, który został strawiony za pomocą Nrul i Sali, dając fragment NruI-Sall o wielkości 107 par zasad (zawierający część 3' promotora wirusa ospy krowiej H6 połączony z końcem 5' genu gC FHV-1) = fragment A.
Następujące oligonukleotydy:
JCA276 (sekwencja identyfikacyjna nr 30) (18-merowa)
5'AAATGTGTACCACGGGAC3' oraz
JCA277 (sekwencja identyfikacyjna nr 31) (54-merowa)
5'AAGAAGCTTCTGCAGAATTCGTTAACAAAAATCATTATAATCGCCGGGGATGAG 3' wykorzystane zostały do wytworzenia za pomocą techniki PGR, na matrycy plazmidu pFHVEcoRIF, fragmentu, który został strawiony za pomocą EcoRV i Hindlll, dając fragment EcoRV-Hindlll o wielkości 370 par zasad (zawierający część 3' genu gC FHV-1 i miejsca Hpal-EcoRI-Pstl-Hindlll) = fragment B.
Plazmid pJCA020 (patrz wyżej) został strawiony za pomocą Nrul i Hindlll w celu izolacji fragmentu Hindlll-NruI (zawierającego część 5' promotora wirusa ospy krowiej H6) = fragment C. Plazmid pFHVEcoRIF został strawiony za pomocą BamHI i EcoRV w celu izolacji fragmentu BamHI-EcoRV o wielkości 580 par zasad (zawierającego środkową część genu gC FHV-1) fragment D. Fragmenty A i C zostały połączone za pomocą wektora pBluescript SK+, uprzednio strawionego za pomocą Hindlll i Sali, dając plazmid pJCA097. Fragmenty B i D zostały połączone z wektorem pBluescript SK+ uprzednio strawionym za pomocą BamHI i Hindlll, dając plazmid pJCA099.
Plazmid pJC097 został strawiony za pomocą Pstl i Sali w celu izolacji fragmentu Pstl-Sall o wielkości 200 par zasad (zawierającego kasetę H6 - część 5' gC) = fragment E. Plazmid pFHV1EcoRIF został strawiony za pomocą BamHI i Sali w celu izolacji fragmentu Sall-BamHI o wielkości 600 par zasad (druga środkowa część gC FHV-1) = fragment F. Fragmenty E i F zostały połączone za pomocą wektora Bluescript SK+ uprzednio strawionego za pomocą BamHI i Pstl, dając plazmid pJCA098.
PL 197 405 B1
Plazmid pJCA098 został następnie strawiony za pomocą EcoRI i BamHI w celu izolacji fragmentu EcoRI-BamHI o wielkości 820 par zasad (zawierającego kasetę H6 - część 5' gC FHV-1) = fragment G. Plazmid pJCA099 (patrz powyżej) został strawiony za pomocą BamHI i Hindlll w celu izolacji fragmentu BamHI-Hindlll o wielkości 960 par zasad (zawierającego część 3' genu gC FHV-1) = fragment H. Fragmenty G i H zostały następnie połączone za pomocą wektora pBluescript SK+ uprzednio strawionego za pomocą EcoRV i Hindlll, dając plazmid pJCA100 (zawierający kasetę ekspresji H6 promotora wirusa ospy krowiej - gen gC FHV-1).
Plazmid pJCA100 został strawiony Nrul i EcoRI w celu izolacji fragmentu NruI-EcoRI o wielkości 1650 par zasad, zawierającego część 3' promotora H6 połączoną z genem gC FHV-1. Fragment ten został połączony z plazmidem pJCA053 (kaseta VQH6-IBV M w wektorze pBluescript SK+), uprzednio strawionym za pomocą Nrul i EcoRI, dając plazmid pJCA108 (zawierający kasetę VQH6-gC w pBluescript SK+). Plazmid pJCA079 (patrz wyżej) został strawiony Smal i BatnHI w celu izolacji fragmentu BatnHI-Smal o wielkości 840 par zasad (zawierającego kasetę I3L-część 5' genu gB FHV-1) = fragment A. Plazmid pJCA079 został również strawiony za pomocą BamHI i Hindlll w celu izolacji fragmentu BamHI-Hindlll o wielkoci 2155 par zasad (zawierającego część 3' genu gB FHV-1) = fragment B. Plazmid pJ-CA108 (patrz wyżej) został strawiony za pomocą Hindlll i Eco-RI w celu izolacji fragmentu Hindlll-EcoRI o wielkości 1830 par zasad (zawierającego kasetę VQH6-gC FHV-1) = fragment C. Plazmid pJCA080 (patrz wyżej) został strawiony za pomocą Eco-RI i Xhol w celu izolacji fragmentu Eco-RI-XhoI o wielkości 1275 par zasad (zawierającego kasetę 42K- gen gD FHV-1) = fragment D. Fragmenty A, B, C i D zostały następnie połączone za pomocą plazmidu donorowego pC6L, dając plazmid pJCA109. Plazmid ten zawiera kasety ekspresji H6-FHV-1 gen gC, I3L-FHV-1 gen gB i 42K--FHV-1 gen gD w miejscu C6 wirusa ALVAC. Struktura tego plazmidu potwierdzona została za pomocą sekwencjonowania i kompletnej mapy restrykcyjnej.
Plazmid ten jest plazmidem donorowym do insercji kasety ekspresji H6-FHV-1 genu gC, I3L-FHV-1 genu gB i 42K-FHV-1 genu gD w miejsce C6 wirusa ALVAC.
Po linearyzacji za pomocą Notl, plazmid pJCA109 wykorzystany był jako plazmid donorowy do rekombinacji in vitro (Piccini et al. Methods in Enzymology. 1987, 153, 545-563) z wirusem ALVAC w celu wytworzenia wirusa rekombinowanego, oznaczonego vCP243.
P r z y k ł a d 8. Adiuwant
Karbomer wykorzystywany w szczepionkach opisanych w niniejszym wynalazku to Carbopol® 974P produkowany przez firmę BF Goodrich (masa atomowa około 3 miliony).
Roztwór podstawowy zawierający 1,5% wag/obj. Carbopol® 974P został najpierw przygotowany przy użyciu wody destylowanej zawierającej chlorek sodu w ilości 1 g/l.
Roztwór podstawowy był następnie wykorzystywany do wytwarzania roztworu Carbopol® w soli fizjologicznej w ilości 4 mg/ml. Roztwór podstawowy wlewany był do całej ilości soli fizjologicznej (lub do jej większej części) jednorazowo lub w porcjach. Za każdym razem dokonywano wyrównania pH do wartości 7,3-7,4 za pomocą roztworu NaOH (na przykład 1N lub bardziej stężonego).
W ten sposób otrzymywany jest gotowy do użycia Carbopol®, który może być następnie stosowany przez użytkownika końcowego do rekonstytucji liofilizowanej szczepionki.
P r z y k ł a d 9. Szczepienie koni za pomocą zrekombinowanego wektora vCP132 wirusa ospy kanarków (patrz przykład 6) wyrażającego glikoproteiny gB, gC i gD wirusa opryszczki końskiej typu 1 (EHV-1)
1. Protokół immunizacji i prowokacji kucyków (rasy walijskiej, górskiej) nie wykazujących oznak serologicznych wskazujących na niedawny kontakt z wirusem EHV-1 lub EHV-4 zostało podzielonych losowo na 4 grupy (A do D) po 5 kucyków.
Grupy A i B zostały zaszczepione z pomocą zrekombinowanego wektora vCP132 wirusa ospy kanarków wyrażającego glikoproteiny gB, gC i gD wirusa opryszczki końskiej typu 1 (EHV-1) szczepu Kentucky D. Szczepionka została zrekonstytuowana w sterylnej wodzie (grupa A) lub w roztworze karbomeru 4 mg/ml (grupa B), przygotowanego zgodnie z przykładem 8.
Grupa C została zaszczepiona dostępną w handlu inaktywowaną pełną szczepionką EHV zawierającego w ilości 1,5 mL inaktywowane patogeny EHV-1 i EHV-4 i 6 mg karbomeru.
Grupa D jest grupą kontrolną, w której zwierzęta zostały zaszczepione za pomocą zrekombinowanego wektora vCP1502 wirusa ospy kanarków powodującego ekspresję glikoproteiny HA wirusa grypy A/equi-1/Praga 56 (patrz przykład 3) zrekonstytuowanego w karbomerze w takich samych warunkach jak grupa B. Szczepionki zostały szczegółowo opisane w tabeli nr 1.
PL 197 405 B1
T a b e l a 1
| Grupa | Szczepionka | Antygeny | Rozpuszczalnik/adiuwant | Dawka (1 mL) |
| A | vCP132 | EHV-1 | sterylna woda | 1080 TCI D50 |
| B | vCP132 | EHV-1 | Carbopol® 974P | 1080 TCI D50 |
| C | szczepionka komercyjna | EHV-1, EHV-4 | Carbopol® | 107'3 TCI D5o przed maWywacją EHV-1; 1073 TCI D50 przed inaktywacją EHV-4 |
| D | vCP1502 | HA- Praga 56 | Carbopol® 974P | 108° TCI d50 |
Każde zwierzę otrzymało 1 dawkę szczepionki odpowiednio dla dnia 0 i dnia 35, przez głęboki zastrzyk domięśniowy w kark.
W dniu 56 kucyki poddane zostały prowokacji przez donosowe podanie 105 TCID50 wirusa EHV-1 szczepu Ab4/8.
2. Badania serologiczne
Testy neutralizacji SN zostały przeprowadzone zgodnie z techniką opisaną przez Thompson et al., Equine Vet. J., 8, 58-65, 1976. Jako antygenu użyto wirusa EHV-1 (RACH). Miana SN zostały wyrażone jako odwrotność rozcieńczenia serum dającego 50% neutralizację (log10).
3. Kontrola wirologiczna
Ekspresja wirusa monitorowana była codziennie przez 10 dni przy użyciu wacików nosowogardłowych, które wkładane były do podłoża do transportowania wirusów. Ekstrakty z wacików były miareczkowane na komórkach nerki królika RK13 w płytkach testowych. Miana obliczane były przy użyciu wzoru Karber wyrażonego w log10 TCID50 na 1 ml.
4. Wyniki
Po szczepieniach nie zaobserwowano większej lokalnej ani systemowej reakcji. Średnia odpowiedź przeciwciał w neutralizowanym serum wynosiła (logw z rozcieńczenia powodującego 50% neutralizację):
| Grupa | Miano w dniu 0 | Miano w dniu 56 (przed prowokacją) |
| A | 1,69 ± 0,49 | 1,93 ± 0,15 |
| B | 1,69 ± 0,47 | 2,61 ± 0,42 |
| C | 1,19 ± 0,30 | 2,47 ± 0,32 |
| D | 1,57 ± 0,45 | 1,55 ± 0,37 |
Znaczne podwyższenie miana przeciwciał obserwowane jest w przypadku szczepionki vCP132 w karbomerze.
Wszystkie kucyki kontrolne wydalają wirusa przez nos i gardło. Wydalanie wirusa u tych nie szczepionych kucyków trwało średnio 5 dni, a maksymalne wydalanie pojawiało się 4 dni po infekcji.
Wszystkie kucyki w grupach A, C i D wydalały wirusa po prowokacji. Jednak tylko dwa kucyki spośród 5 z grupy B zaszczepionych zgodnie z wynalazkiem, wydalały wirusa. Poza tym, ilość wirusa wydalanego w grupie B jest znamiennie niższa niż ilość wydalana przez inne grupy, łącznie z grupą C. Podobnie, czas trwania wydalania u zwierząt w grupie B jest o wiele krótszy niż w innych grupach.
Wyniki zobrazowane na figurze 1 i obszar pod krzywą wartości przedstawioną poniżej pokazują bardzo wyraźnie brak wydalania wirusa u kucyków zaszczepionych za pomocą vCP132 w obecności karbomeru. Wynik jest bardzo istotny, jeśli porówna się go w szczególności ze szczepionką dostępną w handlu. Znamienne obniżenie wydalania wirusa obserwowane jest u zwierząt w grupie B w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi, podczas gdy pomiędzy zwierzętami w grupie C i zwierzętami kontrolnymi nie obserwuje się różnicy znamiennej statystycznie. Obniżenie wydalania wirusa o tak nieoczekiwany procent jest szczególnie przydatne, ponieważ pozwala ono ograniczyć rozprzestrzenianie się choroby z konia na konia.
Całkowita ilość wirusa na kucyka (powierzchnia pod krzywą):
A: 17,1
B: 3,0
C: 9,7
D: 16,3
PL 197 405 B1
P r z y k ł a d 10. Szczepienie koni za pomocą zrekombinowanego wektora vCP1533 wirusa ospy kanarków (patrz przykład 5) powodującego ekspresję glikoproteiny HA wirusa grypy A/equi-2/-/Newmarket/2/93 w obecności karbomeru
1. Protokół immunizacji i prowokacji
Do testu wykorzystano 20 kucyków (rasy walijskiej, górskiej), w wieku 7-8 miesięcy, nie wykazujących obecności przeciwciał przeciw wirusom H3N8 i H7N7, sprawdzanej za pomocą pojedynczej radialnej hemolizy (SRH). Negatywny wynik badania SRH pozwala przestudiować w najlepszych warunkach wydajność różnych szczepionek pod względem odpowiedzi humoralnej. Kucyki zostały podzielone losowo na 4 grupy (A do D) składające się z 5-6 kucyków.
Kucyki w grupie A były szczepione za pomocą rekombinowanego wirusa ospy kanarków (vCP1533) wywołującego ekspresję glikoproteiny HA wirusa grypy A/equi-2/Newmarket/2/93. Szczepionka ta została rozpuszczona w roztworze zawierającym 4 mg/ml karbomeru Carbopol® 974P.
Grupa B została zaszczepiona za pomocą dostępnej komercyjnie szczepionki zawierającej w dawce o objętości 1,5 ml, mieszaninę 3 inaktywowanych szczepów grypy, tj. Praga/56, Suffolk/89 i Miami/63, anatoksynę tężca oraz karbomer (4 mg) oraz wodorotlenek glinu (2,2 mg) jako adiuwanty.
Grupa C została zaszczepiona za pomocą szczepionki C zawierającej 2 inaktywowane patogeny grypy tj. Praga/56, Newmarket/2/93 oraz anatoksynę tężca i wodorotlenku glinu.
Grupa D została zaszczepiona za pomocą rekombinowanego wektora wirusa ospy kanarków vCP132 zrekonstytuowanego w roztworze zawierającym 4 mg/ml karbomeru 974P. Ostatnia grupa służyła jako kontrola dla prowokacji. Szczepionki opisano dokładnie w tabeli 2.
T a b e l a 2
| Grupa | Szczepionka | Antygeny | Rozpuszczalnik/adiuwant | Dawka (1 mL) |
| A | vCP1533 | Carbopol® 974P | 1077 TCI D50 | |
| B | szczepionka komercyjna | Praga/ 56; Suffolk/89; Miami/63; anatoksyna tężca | Carbopol® Al(OH)e | 15 pg HA każdego szczepu |
| C | szczepionka C | Praga/ 56; HA-Newmarket/2/93; anatoksyna tężca | Al(OH)3 | 15 pg HA każdego szczepu |
| D | vCP132 | gB, gC, gD EHV-1 | Carbopol® 974P | 1080 TCI d50 |
dawki 1 ml każdej szczepionki zostały podane każdemu zwierzęciu w odstępie 5 tygodni przez głęboki zastrzyk domięśniowy w kark.
tygodnie po drugim szczepieniu każdy kucyk został zainfekowany przez kontakt z aerozolem otrzymanym z około 20 ml płynu omoczniowego i 107'3 EID50 wirusa grypy A-equi-2-/Sussex/89, przy użyciu urządzenia rozpryskującego ULTRA 2000 (De Villbiss, Somerset PA), jak to opisał Mumford et al., Equine Vet, J., 22: 93-98, 1990.
2. Testy serologiczne
Próbki pełnej krwi pobierane były w następujące dni: 0 (w dniu pierwszego szczepienia, przed szczepieniem), 7, 14, 35 (w dniu drugiego szczepienia, przed szczepieniem), 49 (w dniu prowokacji, przed prowokacją), 56 i 63.
Serum przygotowane zostało i przechowywane było do momentu użycia w zamrożeniu w temp. -20 stopni C°. Wszystkie surowice przetestowane zostały pod względem przeciwciał SRH przeciw grypie A/equi-l/Praga/56 i A/equi-2/Newmarket/2/93, jak to opisał Wood et al. (J. Hyg., 90: 371-384, 1983).
Średnice obszarów hemolizy zostały zmierzone w dwóch kierunkach pod kątem prostym, przy użyciu miernika automatycznego. Pole powierzchni obszarów zostało obliczone, a różnica 50% uważana była za znamienną. Miana wyrażone zostały w mm2 hemolizy.
3. Kontrola wirologiczna
Wydalanie wirusa monitorowane było codziennie przez 10 dni przy użyciu wacików nosowogardłowych, które wkładane były do podłoża do transportowania wirusów. Wysięk z każdego wacika rozcieńczany był przez 10-krotne seryjne rozcieńczenia w PBS przy pH 7,2 i 0,1 ml każdego roztworu nakładane było na obszar omoczni 10-dniowych jaj. Miano wirusa ((EID50/ml) w ekstraktach z wacików obliczone zostało z aktywności hemaglutynizacyjnej w płynie omoczniowym zebranym po inkubacji jaj w temperaturze 34 stopnie C przez 72 godziny.
PL 197 405 B1
4. Wyniki
Po pierwszej dawce szczepienia nie zaobserwowano większej lokalnej ani systemowej reakcji, z wyjątkiem jednego konia w grupie B.
Należy zauważyć, że szczepy Suffolk i Newmarket są podobne (Daly et al. J. Gen. Virol. 1996, 77, 661-671), dzięki czemu porównanie ze szczepionkami dostępnymi w handlu jest rozsądne w warunkach eksperymentu.
Żaden z kucyków nie miał wykrywalnego miana przeciwciał SRH przeciw grypie A/equi-2/-/Newmarket/2/93 lub A/equi-1/Praga/56 na początku eksperymentu. Wyniki serologiczne w 1 tydzień po pierwszym szczepieniu wykazały, że żaden z kucyków nie był wcześniej zainfekowany grypą (brak efektu pamięci).
tygodnie po pierwszym szczepieniu u żadnego z kucyków nie pojawiło się wykrywalne miano przeciwciał przeciw grypie A/equi-1/Praga/56.
Poza tym, brak było wykrywalnego miana przeciwciał SRH przeciw grypie A/equi-2/Newmarket/93 u 6 zwierząt spośród 6 zaszczepionych szczepionką C, u 4 spośród 5 zaszczepionych szczepionką komercyjną B i w grupie kontrolnej D.
Jednakże bardzo wysokie miano przeciwciał zaobserwowano u wszystkich 5 kucyków zaszczepionych wirusem grypy kanarków w obecności adiuwanta typu karbomer: średnio 155,4 ± 32,9.
Tabela 3 poniżej przedstawia wyniki otrzymane dla każdego zwierzęcia, dotyczące mian przeciwciał SRH.
T a b e l a 3 Wyniki SRH (mm2)
| Kucyki | Grupa | Praga (D0, D7, D14) | Newmarket | ||
| D0 | D7 | D14 | |||
| M26 | A | 0 | 0 | 0 | 158,0 |
| M27 | A | 0 | 0 | 0 | 104,2 |
| M28 | A | 0 | 0 | 0 | 160,3 |
| M29 | A | 0 | 0 | 0 | 196,4 |
| M30 | A | 0 | 0 | 0 | 158,0 |
| M31 | B | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M32 | B | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M33 | B | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M34 | B | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M35 | B | 0 | 0 | 0 | 81,2 |
| M36 | C | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M37 | C | 0 | 0 | 0 | śladowe |
| M38 | C | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M39 | C | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M40 | C | 0 | 0 | 0 | śladowe |
| M41 | C | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M42 | D | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M43 | D | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M44 | D | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M45 | D | 0 | 0 | 0 | 0 |
| M46 | D | 0 | 0 | 0 | 0 |
PL 197 405 B1
Szczepionka według wynalazku prowadzi do pojawienia się wysokiego miana przeciwciał od 14 dni po pierwszym szczepieniu, podczas gdy w przypadku szczepionek B i C, pierwsze szczepienie nie powoduje pojawienia się w tym dniu przeciwciał na wykrywalnym poziomie.
Tak wczesna produkcja miana przeciwciał jest wynikiem bardzo dobrym i nieoczekiwanym, którego nigdy wcześniej nie obserwowano.
P r z y k ł a d 11. Szczepienie koni za pomocą zrekombinowanego wektora vCP1502 wirusa ospy kanarków (patrz przykład 3) powodującego ekspresję glikoproteiny HA wirusa grypy A/equi-1/-/Praga 56 w obecności karbomeru
Zwierzęta kontrolne w przykładzie 1, zaszczepione za pomocą vCP1502 były także monitorowane z punktu widzenia serologicznego.
Tabela 4 przedstawia miana IHA (inhibicji hemaglutynacji) otrzymane u zwierząt immunizowanych za pomocą 108 pfu vCP1502 z Carbopol® 974P w dniu 0 (pierwsza iniekcja VI) oraz 35 (druga iniekcja V2).
T a b e l a 4
| Miana anty-H7N7 IHA | |||||
| Kucyki | Dzień 0 (VI) | Dzień 7 | Dzień 14 | Dzień 35 (V2) | Dzień 56 |
| RM16 | 0 | 0 | 128 | 64 | 128 |
| RM17 | 0 | 0 | 32 | 128 | 256 |
| RM18 | 0 | 0 | 16 | 64 | 512 |
| RM19 | 0 | 0 | 32 | 32 | 256 |
| RM20 | 0 | 0 | 128 | 64 | 128 |
Jak w poprzednim przypadku, obserwuje się, że iniekcja wirusa ospy kanarków EIV (powodującego ekspresję genu HA wirusa A equi-1/Praga) wymieszanego z karbomerem pozwala na uzyskanie wysokiego miana specyficznej IHA od dnia 14 po szczepieniu.
Co istotne, wysokie miana podwyższane są jeszcze w odpowiedzi pamięci, osiągając bardzo wysoki poziom, jaki nie był jeszcze nigdy obserwowany dla antygenu HA wirusa EIV H7N7 dla koni, które nie przeszły wzmacnianej stymulacji.
P r z y k ł a d 12. Zastosowanie u kotów
Testowany był rekombinowany wirus ospy kanarków powodujący ekspresję genów gB, gC i gD kociego wirusa opryszczki (FHV, ang. Feline Herpesvirus). Taki rekombinowany wirus oznaczony został jako vCP243 (patrz przykład 7).
Protokół szczepienia/prowokacji w modelu FHV jest następujący:
| Grupa | Liczba kotów | Szczepionka | Rozpuszczalnik/adiuwant | Dawka |
| A | 6 | vCP243 | woda | 1075 pfu |
| B | 6 | vCP243 | Carbopol® 974P | 1075 pfu |
| C | 6 | CORIFELIN® | - | 1 dawka komercyjna |
| D (kontrolna) | 6 | - | - | - |
Koty szczepione są w dniu 0 i 28 drogą podskórną. Szczepionka CORIFELIN®jest podjednostkową szczepionką FHV sprzedawaną przez firmę Merial, Lion, Francja, zawierającą przynajmniej 200 jednostek IDR frakcji wirusowych FHV, 25 pg oczyszczonego antygenu kociego kaliciwirusa, 0,1 mg tiomersalu i oleistej zarobki QS 1 ml.
Prowokacja wykonywana jest dnia 49 drogą ustno-nosową przy użyciu szczepu prowokacyjnego FHV.
Monitoring kliniczny prowadzony jest przez 14 dni po prowokacji, notując objawy kliniczne (przy użyciu zasad opisanych w farmakopei europejskiej).
PL 197 405 B1
Ochrona oceniana jest po prowokacji na następujących kryteriach:
- średnie kliniczne wyniki dla każdej grupy, w porównaniu z inną grupą i ze średnim klinicznym wynikiem dla grupy kontrolnej,
- poziom wydalania wirusa FHV po prowokacji (pomiar ilości wirusa w wacikach nosowogardłowych przygotowywanych codziennie od dnia 0 do 10 po prowokacji),
- miana przeciwciał neutralizujących wirusa FHV w próbkach krwi zebranych dnia 0, 28, 49 i 63.
Dla wszystkich tych kryteriów średni poziom dla każdej grupy porównywany jest także z inną grupą i ze średnim poziomem grupy kontrolnej.
P r z y k ł a d 13. Zastosowanie u psów
Testowanym wirusem był rekombinowany wirus ospy kanarków prowadzący do ekspresji genów HA i F wirusa choroby Carre (wirus nosówki psiej, CDV). Ten rekombinowany wirus opisywany jest jako vCP258 (patrz przykład 2).
Protokół szczepienia/prowokacji w modelu CDV jest następujący:
| Grupa | Liczba psów | Szczepionka | Rozpuzzhzalnia/adiuwant | Dawka |
| A | 6 | vCP258 | woda | 1070 pfu |
| B | 6 | vCP258 | 974P | 1070 pfu |
| C | 6 | CORIFELIN® | - | 1 dawka komercyjna |
| D (kontrolna) | 6 | - | - | - |
Psy szczepione są w dniu 0 i 28 drogą podskórną.
Szczepionka EURICAN® (CHPPI2) jest żywą szczepionką sprzedawaną przez firmę Merial, Lion, Francja. Jedna dawka komercyjna zawiera minimum 104 pfu szczepu CDV Onderstepoort.
Prowokacja dokonywana jest w dniu 56 przez podanie śródczaszkowe roztworu 1/10 szczepu prowokacyjnego CDV „Snyder-Hill” (przygotowanego i dostarczonego przez USDA). Monitoring kliniczny prowadzony jest przez 21 dni po prowokacji, notując objawy kliniczne (przy użyciu zasad opisanych w farmakopei europejskiej).
Ochrona oceniana jest po prowokacji na następujących kryteriach:
- średnie kliniczne wyniki dla każdej grupy, w porównaniu z inną grupą i ze średnim klinicznym wynikiem dla grupy kontrolnej,
- poziom wiremii CDV po prowokacji (pomiar ilości wirusa w limfocytach w dniach 56, 61,63, 66, 70, 77),
- miana przeciwciał neutralizujących wirusa CDV w próbkach krwi zebranych dnia 0, 14, 28, 42, 56, 63 i 77.
Dla wszystkich tych kryteriów średni poziom dla każdej grupy porównywany jest także z inną grupą i ze średnim poziomem grupy kontrolnej.
Claims (19)
- Zastrzeżenia patentowe1. Rekombinowana żżwaszzczeionka,zznmieenntym. żż ooejmujewektorwirusowy inkorpprujący i wyrażający in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową, korzystnie genu czynnika patogennego oraz przynajmniej jeden adiuwant wybrany spośród polimerów kwasu akrylowego lub metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych.
- 2. Szzczeionkowaełus zzasz. 1, z znmieenntym. żż oObjmujej anoaaiuwantpplimbrkwanz akrylowego lub metakrylowego usieciowany eterem polialkenylowym cukru lub polialkoholu.
- 3. Szzczeionkowaełuszzntzz. 2, z znmieenntym. żż pplimbrjektu sizeiowenk allilonzaharooą lub allilopektaerwtrwtolem.
- 4. Szzczeionkowaełus zzałsz^ 1 z znmieenntym. żż o Objrΐ^ujew chamraterzz aaiuwanta kooplimer bezwodnika maleinowego i etylenu usieciowane, przykładowo eterem diwinylowym.
- 5. Szzczeionkowaełus zzałsz^ d d 4 , z znmieenntym. żż aaiuwentjekt o0benkw ezzczeionkc w ilości od 0,01% do 2% wag./obj.PL 197 405 B1
- 6. Szczepionka według zastrz. 5, znamienna tym, że stężenie adiuwanta wynosi od 0,06 do 1% wag./obj., korzystnie 0,1 do 0,6% wag./obj.
- 7. Szczepionka według zasSirz. od 1 do 6, znamienna tym. że obejmuje wektor inkorporujący i wyrażający przynajmniej jeden gen zwierzęcego wirusa opryszczki.
- 8. Szczepionka według zastrz. 7, znamienna tym, że gen oorzzmann j eet z wiruua opryysccki wybranego z grupy składającej się z wirusa opryszczki końskiej EHV-1 i/lub EHV-4, wirusa opryszczki kociej FHV, wirusa opryszczki psiej CHV, wirusa opryszczki ptasiej ILTV lub Marek'a, wirusa opryszczki bydlęcej BHV i wirusa opryszczki świńskiej PRV.
- 9. Szczepionka według zasSrz. 1 do 6, znamienna tym, ze zawieea wektoo iin^c^r^p^c^r^Lu£^c^\y i wyrażający przynajmniej jeden gen wirusa grypy.
- 10. Szczepionkawedług zasSi^. 9, znamienna tym, że inkorponLuący wektor wyrazagern wirusa grypy wybranego z grupy składającej się z wirusa grypy końskiej, wirusa grypy ptasiej i wirusa grypy świńskiej.
- 11. Szczepionka według zasSrz. 1 do 6, znamienna tym, że obejmuje wektor inkorporujący i wyrażający przynajmniej jeden gen zwierzęcego wirusa wybranego z grupy składającee się z wirusa białaczki kociej FeLV, wirusa nosówki psiej CDV lub toksyny tężcowej.
- 12. Szczepionka według zasSc^. 1 do 11, znamienna tym, że wekkor wimsowy wybrany jesS z grupy składającej się z wirusa ospy, adenowirusa, wirusa opryszczki.
- 13. Szczepionka według zas^z. 12, znamienna tym. ze wkus ospy wybrany jesS z grupy skkadającej się z wirusa ospy krowiej, wirusa ospy ptaków, wirusa ospy kanarków, wirusa ospy gołębiej, wirusa ospy świńskiej.
- 14. Szczepionka według z^^St^^. 1 do 6, znamienna tym, że obejmuje wirus ospy kanarków inkorporujący i wyrażający geny gB, gC i gD końskiego wirusa opryszczki EHV-1 lub EHV-4.
- 15. Szczepionka według zas^z. 1 do 6, znam ienna tym, że obejmuje dwa iu b irzy wektory wl· rusa ospy kanarków, przy czym każdy z nich obejmuje gen HA wirusa grypy końskiej, a każdy gen HA otrzymany jest z innego szczepu.W. Szczepionka według zas^z. 1 do 6, znam ienna tym, że obeemuue wektoo wirusa ospy kanarków, obejmujący dwa lub trzy geny HA wirusa grypy końskiej, przy czym każdy gen HA otrzymany jest z innego szczepu.
- 17. Szczepionka według zas^z. 1 do 6, znamienna tym. ze zawieea welkor wiiusa ospy kanap ków, obejmujący i wyrażający geny gB, gC i gD kociego wirusa opryszczki FHV.
- 18. Szczepionka według zas^z. 1 do 6, znamienna tym, że obejmuje wektor wirusa ospy kanarków inkorporujący i wyrażający geny HA i F wirusa nosówki CDV.
- 19. Zastosowanie związków wybranychz pollmerów kwasu akrylowego i mejakry-owego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, jak określone w zastrz. 1 do ,, do wytwarzania rekombinowanych żywych szczepionek inkorporujących i wyrażających in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową.
- 20. ZesSaw do szczepień do fonmuuowania rekombinowanee żywce β^<^^^|^ϊοι^Ι^ϊ o zwiększonee immunogenności, znaiienny tyi, że zawiera, zapakowane oddzielnie, (a) rekombinowaną żywą szczepionkę obejmującą wektor wirusowy, który zawiera i wyraża in vivo heterologiczną sekwencję nukleotydową patogennego czynnika w postaci liofilizowanej i (b) roztwór przynajmniej jednego adiuwanta wybranego z grupy polimerów kwasu akrylowego lub metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych, jak określone w zastrz. 1 do ,.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9802800A FR2775601B1 (fr) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Vaccins vivants recombines et adjuves |
| PCT/FR1999/000453 WO1999044633A1 (fr) | 1998-03-03 | 1999-03-01 | Vaccins vivants recombines et adjuves |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| PL342820A1 PL342820A1 (en) | 2001-07-02 |
| PL197405B1 true PL197405B1 (pl) | 2008-03-31 |
Family
ID=9523775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| PL342820A PL197405B1 (pl) | 1998-03-03 | 1999-03-01 | Rekombinowana żywa szczepionka, zastosowanie związków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych oraz zestaw do szczepień |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6713068B1 (pl) |
| EP (1) | EP1058558B1 (pl) |
| JP (1) | JP2002505300A (pl) |
| KR (1) | KR20010041507A (pl) |
| CN (2) | CN1846786A (pl) |
| AR (1) | AR018135A1 (pl) |
| AT (1) | ATE287728T1 (pl) |
| AU (1) | AU762479B2 (pl) |
| BR (1) | BR9908496A (pl) |
| CA (1) | CA2321903C (pl) |
| DE (1) | DE69923434T2 (pl) |
| DK (1) | DK1058558T3 (pl) |
| ES (1) | ES2237931T3 (pl) |
| FR (1) | FR2775601B1 (pl) |
| HU (1) | HU228431B1 (pl) |
| IL (1) | IL137872A0 (pl) |
| NZ (1) | NZ506370A (pl) |
| PL (1) | PL197405B1 (pl) |
| PT (1) | PT1058558E (pl) |
| TW (1) | TW592700B (pl) |
| WO (1) | WO1999044633A1 (pl) |
| ZA (1) | ZA991662B (pl) |
Families Citing this family (69)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6551598B2 (en) | 2000-01-21 | 2003-04-22 | Merial | Vaccination against canine herpesvirosis and vaccines therefor |
| FR2804026B1 (fr) * | 2000-01-21 | 2004-06-11 | Merial Sas | Vaccination contre l'herpesvirose canine et vaccins |
| US20150231227A1 (en) * | 2000-03-02 | 2015-08-20 | Emory University | Compositions and methods for generating an immune response |
| US20040105871A1 (en) * | 2000-03-02 | 2004-06-03 | Robinson Harriet L. | Compositions and methods for generating an immune response |
| AU2001256582A1 (en) * | 2000-05-24 | 2001-12-03 | Merial | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (prrsv) recombinant avipoxvirus vaccine |
| US7627145B2 (en) * | 2000-09-06 | 2009-12-01 | Hitachi, Ltd. | Personal identification device and method |
| MY129765A (en) * | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| US20040037848A1 (en) * | 2001-04-06 | 2004-02-26 | Audonnet Jean-Christophe Francis | Recombinant vaccine against West Nile Virus |
| US7740863B2 (en) * | 2001-04-06 | 2010-06-22 | Merial | Recombinant vaccine against West Nile Virus |
| ZA200700457B (en) * | 2004-06-15 | 2008-08-27 | New York Blood Ct Inc | Adjuvancy and immune potentiating properties of natural products of onchocerca volvulus |
| US7959929B2 (en) | 2005-04-21 | 2011-06-14 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
| US11865172B2 (en) | 2005-04-21 | 2024-01-09 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
| US20070178115A1 (en) | 2005-08-15 | 2007-08-02 | Tang De-Chu C | Immunization of avians by administration of non-replicating vectored vaccines |
| US7425336B2 (en) * | 2005-08-25 | 2008-09-16 | Mevial Limited | Canine influenza vaccines |
| US20080241184A1 (en) | 2005-08-25 | 2008-10-02 | Jules Maarten Minke | Canine influenza vaccines |
| US7682619B2 (en) | 2006-04-06 | 2010-03-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine influenza virus |
| US8097419B2 (en) | 2006-09-12 | 2012-01-17 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009 |
| US9481912B2 (en) | 2006-09-12 | 2016-11-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples |
| US8652782B2 (en) | 2006-09-12 | 2014-02-18 | Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting, identifying and quantitating mycobacterial-specific nucleic acids |
| US8080645B2 (en) | 2007-10-01 | 2011-12-20 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection/transport compositions and methods |
| US20090181078A1 (en) * | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| LT2484375T (lt) | 2006-09-26 | 2018-07-10 | Infectious Disease Research Institute | Vakcinos kompozicija, turinti sintetinio adjuvanto |
| UA100370C2 (uk) | 2006-12-11 | 2012-12-25 | Мериал Лимитед | Спосіб вакцинації птахів проти salmonella |
| TW200907058A (en) * | 2007-05-30 | 2009-02-16 | Wyeth Corp | Raccoon poxvirus expressing rabies glycoproteins |
| CL2008001806A1 (es) * | 2007-06-20 | 2008-09-05 | Wyeth Corp | Composicion de vacuna en emulsion agua en aceite que comprende un antigeno y un adyuvante en la fase acuosa; y metodo de elaboracion. |
| US9683256B2 (en) | 2007-10-01 | 2017-06-20 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system |
| US11041215B2 (en) | 2007-08-24 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | PCR ready compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences |
| AU2008293504B2 (en) | 2007-08-27 | 2012-04-12 | Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc | Immunogenic compositions and methods |
| US10004799B2 (en) | 2007-08-27 | 2018-06-26 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
| US11041216B2 (en) | 2007-10-01 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and quantifying nucleic acid sequences in blood samples |
| DK2535428T3 (en) | 2007-10-01 | 2015-11-23 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological prøvesamlings- and transport system, and methods of using |
| GB0805356D0 (en) * | 2008-03-25 | 2008-04-30 | Isis Innovation | Vaccine adjuvant composition |
| MX2010012069A (es) | 2008-05-08 | 2010-12-14 | Merial Ltd | Vacuna de la leishmaniasis con el uso del inmunogeno salival de la mosca de la arena. |
| US8168200B2 (en) * | 2008-10-24 | 2012-05-01 | Merial Limited | Vaccine against african horse sickness virus |
| BRPI1011072B1 (pt) | 2009-06-05 | 2021-09-28 | Infectious Disease Research Institute | Composto de gla, composições de vacina e farmacêutica compreendendo dito composto, bem como uso dos mesmos para estimular, induzir ou acentuar uma resposta imune em um indivíduo |
| US20130197612A1 (en) * | 2010-02-26 | 2013-08-01 | Jack W. Lasersohn | Electromagnetic Radiation Therapy |
| MX350795B (es) | 2011-04-08 | 2017-09-19 | Inmune Design Corp | Composiciones inmunogenicas y metodos para utilizar las composiciones para inducir respuestas inmunes humorales y celulares. |
| LT2734230T (lt) | 2011-07-20 | 2019-03-25 | Merial Limited | Rekombinantinė kačių leikemijos viruso vakcina, turinti optimizuotą kačių leukemijos viruso apvalkalo geną |
| CA2844927C (en) | 2011-08-12 | 2017-10-31 | Merial Limited | Vacuum-assisted preservation of biological products, in particular of vaccines |
| CN104203272A (zh) | 2012-01-26 | 2014-12-10 | 长角牛疫苗和诊断有限责任公司 | 复合抗原序列及疫苗 |
| ES2729967T3 (es) | 2012-02-07 | 2019-11-07 | Infectious Disease Res Inst | Formulaciones de adyuvante mejoradas que comprenden agonistas de TLR4 y métodos para usar las mismas |
| US9567606B2 (en) | 2012-02-14 | 2017-02-14 | Merial Inc. | Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and OX40 proteins, and vaccines made therefrom |
| WO2013142371A1 (en) | 2012-03-20 | 2013-09-26 | Merial Limited | Recombinant equine herpesvirus-1 vaccine containing mutated glycoprotein c and uses thereof |
| PL2850431T3 (pl) | 2012-05-16 | 2018-09-28 | Immune Design Corp. | Szczepionki przeciwko HSV-2 |
| CA2883296A1 (en) | 2012-08-30 | 2014-03-06 | Merial, Inc. | Hyperbaric device and methods for producing inactivated vaccines and for refolding/solubilizing recombinant proteins |
| BR112015025709A2 (pt) | 2013-04-18 | 2017-07-18 | Immune Design Corp | monoterapia com gla para uso em tratamento de câncer |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| WO2015077717A1 (en) | 2013-11-25 | 2015-05-28 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status |
| US11725237B2 (en) | 2013-12-05 | 2023-08-15 | The Broad Institute Inc. | Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data |
| WO2015095811A2 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | The Board Institute Inc. | Combination therapy with neoantigen vaccine |
| CA2948845C (en) | 2014-05-14 | 2022-05-31 | Merial, Inc. | Methods for freeze-drying and rehydrating biologics |
| WO2016100975A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Massachsetts Institute Ot Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
| EP3757211A1 (en) | 2014-12-19 | 2020-12-30 | The Broad Institute, Inc. | Methods for profiling the t-cell-receptor repertoire |
| CA2985652C (en) | 2015-05-14 | 2020-03-10 | Gerald W. FISHER | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples |
| CA2986235A1 (en) | 2015-05-20 | 2016-11-24 | The Broad Institute, Inc. | Shared neoantigens |
| US10442607B2 (en) | 2015-07-31 | 2019-10-15 | Philip Morris Products S.A. | Creased blank for forming a container with round or beveled corners |
| US20190346442A1 (en) | 2016-04-18 | 2019-11-14 | The Broad Institute, Inc. | Improved hla epitope prediction |
| EP4112638A1 (en) | 2016-05-16 | 2023-01-04 | Access to Advanced Health Institute | Formulation containing tlr agonist and methods of use |
| EP3463300A1 (en) | 2016-06-01 | 2019-04-10 | Infectious Disease Research Institute | Nanoalum particles containing a sizing agent |
| CN109475615B (zh) | 2016-06-17 | 2023-04-07 | 勃林格殷格翰动物保健美国公司 | 包含直链或支链聚丙烯酸聚合物佐剂的新免疫原性制剂 |
| WO2018140391A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide |
| WO2019051149A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-14 | Infectious Disease Research Institute | LIPOSOMAL FORMULATIONS COMPRISING SAPONIN AND METHODS OF USE |
| WO2020072700A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Hla single allele lines |
| US20220062394A1 (en) | 2018-12-17 | 2022-03-03 | The Broad Institute, Inc. | Methods for identifying neoantigens |
| CN110846284B (zh) * | 2019-11-07 | 2020-12-29 | 衡阳师范学院 | 一种犬细小病毒CPV-HuN1703株及其应用 |
| CN111500633B (zh) * | 2020-04-07 | 2022-09-16 | 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 | 基于基因编辑技术的重组金丝雀痘病毒构建方法 |
| KR20230029673A (ko) | 2020-05-26 | 2023-03-03 | 디오니스 테라퓨틱스, 아이엔씨. | 핵산 인공 미니-프로테옴 라이브러리 |
| CN113308441B (zh) * | 2021-06-02 | 2022-05-10 | 华中农业大学 | 一株猫疱疹病毒i型病毒株及其应用 |
| WO2023076733A1 (en) | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Biologically selected nucleic acid artificial mini-proteome libraries |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3790665A (en) | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US3651213A (en) | 1969-05-29 | 1972-03-21 | Monsanto Co | Method for the immunization of a living animal body against viral disease |
| US3919411A (en) | 1972-01-31 | 1975-11-11 | Bayvet Corp | Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant |
| US3869546A (en) * | 1972-12-22 | 1975-03-04 | Cutter Lab | Adjuvant compositions and medicinal mixtures comprising them |
| US3920811A (en) * | 1972-12-22 | 1975-11-18 | Cutter Lab | Adjuvant compositions |
| US4309413A (en) | 1979-01-22 | 1982-01-05 | Monsanto Company | Method of producing immune response by administering polymeric composition |
| US4567042A (en) | 1983-06-15 | 1986-01-28 | American Home Products Corporation | Inactivated canine coronavirus vaccine |
| US4920213A (en) * | 1985-06-20 | 1990-04-24 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Method and compositions useful in preventing equine influenza |
| JPS62201575A (ja) * | 1986-02-27 | 1987-09-05 | Shionogi & Co Ltd | 家禽用インフルエンザ生ワクチン |
| US5731188A (en) * | 1986-11-20 | 1998-03-24 | Syntro Corporation | Recombinant equine herpesviruses |
| ZA881694B (en) * | 1987-03-17 | 1988-09-06 | Akzo N.V. | Adjuvant mixture |
| US5843456A (en) * | 1991-03-07 | 1998-12-01 | Virogenetics Corporation | Alvac poxvirus-rabies compositions and combination compositions and uses |
| EP0532833A1 (en) * | 1991-05-28 | 1993-03-24 | Miles Inc. | Vaccine for equine rhinopneumonitis |
| EP0615453B1 (en) * | 1991-11-29 | 1997-05-14 | Chiron Viagene, Inc. | Anti-cancer immunotherapeutic vector constructs |
| FR2700957B1 (fr) * | 1993-01-29 | 1995-03-03 | Seppic Sa | Composition de vaccin sous-unitaire recombinant vivant et procédé de préparation. |
| CA2158040A1 (en) | 1993-03-11 | 1994-09-15 | Jacqueline D. Duncan | Polymeric mucoadhesives in the delivery of immunogens at mucosal surfaces |
| JPH07170982A (ja) * | 1993-09-09 | 1995-07-11 | Nisshin Oil Mills Ltd:The | ワクチンおよびその製造方法 |
| BR9507717A (pt) | 1994-05-10 | 1997-09-23 | American Home Prod | Vacina brsv viva modificada aperfeiçoada |
| US5820869A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | American Home Products Corporation | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection |
| US5849303A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-15 | American Home Products Corporation | Recombinant feline Immunodeficiency virus subunit vaccines employing baculoviral-expressed envelope glycoproteins derived from isolate NCSU-1 and their use against feline immunodeficiency virus infection |
| US6300118B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-10-09 | American Home Products Corporation | Plasmids comprising a genetically altered feline immunodeficiency virus genome |
| ZA97452B (en) * | 1996-01-25 | 1997-08-15 | Trinity College Dublin | Streptococcus equi vaccine. |
| DE19612967A1 (de) * | 1996-04-01 | 1997-10-02 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren in Zellkultur, sowie die durch das Verfahren erhältlichen Influenzaviren |
| FR2750865B1 (fr) * | 1996-06-27 | 1998-12-04 | Rhone Merieux | Vaccin vivant recombinant a base d'herpesvirus canin, notamment contre la maladie de carre, la rage ou le virus parainfluenza de type 2 |
| FR2751226B1 (fr) * | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval |
| US6004777A (en) * | 1997-03-12 | 1999-12-21 | Virogenetics Corporation | Vectors having enhanced expression, and methods of making and uses thereof |
| US6044777A (en) * | 1998-02-09 | 2000-04-04 | Walsh; Michael J. | Composite metal safe and method of making |
-
1998
- 1998-03-03 FR FR9802800A patent/FR2775601B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-03-01 PL PL342820A patent/PL197405B1/pl unknown
- 1999-03-01 HU HU0101207A patent/HU228431B1/hu unknown
- 1999-03-01 DK DK99937879T patent/DK1058558T3/da active
- 1999-03-01 PT PT99937879T patent/PT1058558E/pt unknown
- 1999-03-01 CA CA2321903A patent/CA2321903C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 WO PCT/FR1999/000453 patent/WO1999044633A1/fr active IP Right Grant
- 1999-03-01 DE DE69923434T patent/DE69923434T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 NZ NZ506370A patent/NZ506370A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-03-01 CN CNA2006100086258A patent/CN1846786A/zh active Pending
- 1999-03-01 US US09/622,951 patent/US6713068B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 BR BR9908496-1A patent/BR9908496A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-03-01 ES ES99937879T patent/ES2237931T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 IL IL13787299A patent/IL137872A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-03-01 KR KR1020007009675A patent/KR20010041507A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-03-01 EP EP99937879A patent/EP1058558B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 JP JP2000534234A patent/JP2002505300A/ja active Pending
- 1999-03-01 AU AU32571/99A patent/AU762479B2/en not_active Expired
- 1999-03-01 CN CNB998035750A patent/CN1263511C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 AT AT99937879T patent/ATE287728T1/de active
- 1999-03-02 ZA ZA9901662A patent/ZA991662B/xx unknown
- 1999-03-02 AR ARP990100873A patent/AR018135A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-03-03 TW TW088103231A patent/TW592700B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-12-12 US US10/735,429 patent/US7507416B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2002505300A (ja) | 2002-02-19 |
| CN1291899A (zh) | 2001-04-18 |
| DK1058558T3 (da) | 2005-06-06 |
| TW592700B (en) | 2004-06-21 |
| EP1058558A1 (fr) | 2000-12-13 |
| HUP0101207A2 (hu) | 2001-08-28 |
| US7507416B2 (en) | 2009-03-24 |
| AU762479B2 (en) | 2003-06-26 |
| HUP0101207A3 (en) | 2003-10-28 |
| HU228431B1 (en) | 2013-03-28 |
| IL137872A0 (en) | 2001-10-31 |
| NZ506370A (en) | 2003-07-25 |
| ATE287728T1 (de) | 2005-02-15 |
| ZA991662B (en) | 2000-10-12 |
| US20060057163A1 (en) | 2006-03-16 |
| CA2321903C (en) | 2011-05-31 |
| ES2237931T3 (es) | 2005-08-01 |
| CN1263511C (zh) | 2006-07-12 |
| EP1058558B1 (fr) | 2005-01-26 |
| DE69923434D1 (de) | 2005-03-03 |
| CN1846786A (zh) | 2006-10-18 |
| FR2775601A1 (fr) | 1999-09-10 |
| PT1058558E (pt) | 2005-06-30 |
| DE69923434T2 (de) | 2006-01-05 |
| WO1999044633A1 (fr) | 1999-09-10 |
| KR20010041507A (ko) | 2001-05-25 |
| US6713068B1 (en) | 2004-03-30 |
| FR2775601B1 (fr) | 2001-09-21 |
| AU3257199A (en) | 1999-09-20 |
| BR9908496A (pt) | 2000-12-05 |
| PL342820A1 (en) | 2001-07-02 |
| AR018135A1 (es) | 2001-10-31 |
| CA2321903A1 (en) | 1999-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| PL197405B1 (pl) | Rekombinowana żywa szczepionka, zastosowanie związków wybranych z polimerów kwasu akrylowego i metakrylowego i kopolimerów bezwodnika maleinowego i pochodnych alkenylowych oraz zestaw do szczepień | |
| ES2866108T3 (es) | Vectores poxvirales recombinantes que expresan proteínas de la rabia y OX40 y vacunas fabricadas a partir de los mismos | |
| JP5898632B2 (ja) | 組換えｃｄｖ組成物およびその使用 | |
| US10493144B2 (en) | Recombinant adenovirus vectored FMDV vaccines and uses thereof | |
| JP6818748B2 (ja) | イヌパルボウイルス（ｃｐｖ）ウイルス様粒子（ｖｌｐ）ワクチン及びその使用 | |
| PL191551B1 (pl) | Kompozycje immunogenne, plazmidy, zastosowania plazmidów, zestawy oraz szczepionki | |
| US7163926B1 (en) | Adjuvant-containing vaccines | |
| TWI744260B (zh) | Fmdv及e2融合蛋白及其用途 | |
| AU2003246343B2 (en) | Live recombined vaccines injected with adjuvant | |
| US20040002472A1 (en) | Vaccination or immunization using a prime-boost regimen | |
| EP1594537B1 (en) | Vaccination or immunization using a prime-boost regimen against brsv, bhv-1, bvdv, bpi-3 | |
| MXPA00008524A (en) | Live recombined vaccines injected with adjuvant | |
| PL215173B1 (pl) | Zestaw do przeprowadzania szczepienia przeciwko patogenowi bydła, zastosowanie czynnika patogennego bydła (BRSV) do wytwarzania szczepionki, szczepienie oraz inaktywowana szczepionka | |
| NZ617072B2 (en) | Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile | |
| NZ617072A (en) | Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile |