HU228431B1 - Live recombined vaccines with adjuvant - Google Patents
Live recombined vaccines with adjuvant Download PDFInfo
- Publication number
- HU228431B1 HU228431B1 HU0101207A HUP0101207A HU228431B1 HU 228431 B1 HU228431 B1 HU 228431B1 HU 0101207 A HU0101207 A HU 0101207A HU P0101207 A HUP0101207 A HU P0101207A HU 228431 B1 HU228431 B1 HU 228431B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- vaccine
- virus
- antigen
- viral vector
- ehv
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims description 132
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims description 39
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 77
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 53
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 34
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 33
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 33
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 claims description 33
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 26
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims description 24
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 23
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 22
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 22
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 21
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 20
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 18
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 17
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 16
- 241000701081 Equid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 15
- 229940023860 canarypox virus HIV vaccine Drugs 0.000 claims description 14
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims description 14
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 claims description 14
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 14
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 14
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 13
- 241000178270 Canarypox virus Species 0.000 claims description 12
- 241000701089 Equid alphaherpesvirus 4 Species 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 241000701087 Felid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 11
- CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N Methacrylic acid Chemical compound CC(=C)C(O)=O CERQOIWHTDAKMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 241000287219 Serinus canaria Species 0.000 claims description 11
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 claims description 6
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 5
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims description 5
- 229920002126 Acrylic acid copolymer Polymers 0.000 claims description 3
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 claims description 3
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 claims description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 229920003145 methacrylic acid copolymer Polymers 0.000 claims description 3
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 claims description 3
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 2
- QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N Vinyl ether Chemical compound C=COC=C QYKIQEUNHZKYBP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- -1 allyl saccharose Chemical compound 0.000 claims description 2
- 235000013681 dietary sucrose Nutrition 0.000 claims description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 claims description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 2
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 claims description 2
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 claims description 2
- 229960000834 vinyl ether Drugs 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims 10
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 5
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 claims 4
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 claims 3
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 claims 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 claims 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 claims 3
- 101150086876 Amy gene Proteins 0.000 claims 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229940117841 methacrylic acid copolymer Drugs 0.000 claims 2
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims 2
- 241000701066 Bovine gammaherpesvirus 4 Species 0.000 claims 1
- 241000272201 Columbiformes Species 0.000 claims 1
- 240000007817 Olea europaea Species 0.000 claims 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 claims 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000700565 Swinepox virus Species 0.000 claims 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims 1
- WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N azocan-1-yl-(3,4,5-trimethoxyphenyl)methanone Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(C(=O)N2CCCCCCC2)=C1 WZSDNEJJUSYNSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 claims 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 1
- 238000002345 optical interference microscopy Methods 0.000 claims 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 claims 1
- 239000002893 slag Substances 0.000 claims 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 74
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 69
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 23
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 13
- 101150039660 HA gene Proteins 0.000 description 11
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 description 8
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 5
- 241000680578 Canid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 4
- 108010070778 Felid herpesvirus 1 glycoprotein C Proteins 0.000 description 4
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 4
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 4
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 3
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 101150002378 gC gene Proteins 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 2
- 108010012716 Felid herpesvirus 1 glycoprotein B Proteins 0.000 description 2
- HSRJKNPTNIJEKV-UHFFFAOYSA-N Guaifenesin Chemical compound COC1=CC=CC=C1OCC(O)CO HSRJKNPTNIJEKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 2
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 2
- 229940052303 ethers for general anesthesia Drugs 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 2
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- YKFHBIMJVFQOQL-UHFFFAOYSA-N 1-(3-chloro-4-methylphenyl)-3-[2-[3-[[1-(2,6-dioxopiperidin-3-yl)-2,5-dioxopyrrol-3-yl]amino]phenyl]propan-2-yl]urea Chemical compound ClC=1C=C(C=CC=1C)NC(=O)NC(C)(C)C1=CC(=CC=C1)NC=1C(N(C(C=1)=O)C1C(NC(CC1)=O)=O)=O YKFHBIMJVFQOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 2-(hydroxymethyl)-2-(prop-2-enoxymethyl)propane-1,3-diol Chemical compound OCC(CO)(CO)COCC=C RFIMISVNSAUMBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000002132 Beaucarnea recurvata Species 0.000 description 1
- 108010066310 Canid herpesvirus 1 glycoprotein B Proteins 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 244000260524 Chrysanthemum balsamita Species 0.000 description 1
- 235000005633 Chrysanthemum balsamita Nutrition 0.000 description 1
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 1
- 240000002943 Elettaria cardamomum Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 101150034814 F gene Proteins 0.000 description 1
- 241000714201 Feline calicivirus Species 0.000 description 1
- 241000701063 Gallid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000175212 Herpesvirales Species 0.000 description 1
- 101000856513 Homo sapiens Inactive N-acetyllactosaminide alpha-1,3-galactosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 101000829958 Homo sapiens N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase Proteins 0.000 description 1
- 102100025509 Inactive N-acetyllactosaminide alpha-1,3-galactosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 241000371980 Influenza B virus (B/Shanghai/361/2002) Species 0.000 description 1
- 101100281686 Mus musculus Fstl1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100460976 Mus musculus Nrif1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100023315 N-acetyllactosaminide beta-1,6-N-acetylglucosaminyl-transferase Human genes 0.000 description 1
- 206010029897 Obsessive thoughts Diseases 0.000 description 1
- BRUQQQPBMZOVGD-XFKAJCMBSA-N Oxycodone Chemical compound O=C([C@@H]1O2)CC[C@@]3(O)[C@H]4CC5=CC=C(OC)C2=C5[C@@]13CCN4C BRUQQQPBMZOVGD-XFKAJCMBSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Propanedioic acid Natural products OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001009851 Rattus norvegicus Guanylate cyclase 2G Proteins 0.000 description 1
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 1
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 101150104012 TOP2 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010055044 Tetanus Toxin Proteins 0.000 description 1
- 101150117115 V gene Proteins 0.000 description 1
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003929 acidic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001336 alkenes Chemical class 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000005365 aminothiol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 101150049515 bla gene Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 235000005300 cardamomo Nutrition 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 1
- 229920001038 ethylene copolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 229960003971 influenza vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 229940124590 live attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229940023012 live-attenuated vaccine Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000011976 maleic acid Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 102200072410 rs121917931 Human genes 0.000 description 1
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 1
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 1
- 238000009589 serological test Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 229940118376 tetanus toxin Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
A találmány tárgyát agy vagy több heterológ gént ín vívó integráló és expresszáló rekomhínáns élő oltóanyagok továbbfejlesztett változata képezi. A találmány tárgyát konkrétan adjutánst tartalmazó oltóanyagok, az oltóanyagokhoz alkalmazott adjuvánsok és az említett oltóanyagok alkalmazása képezi.. A találmány tárgyát képezi továbbá az említett oltóanyagok előállítására szolgáló- eljárás is.
Hagyományos megoldásnak számít az in-aktivált vagy alegység-oltóanyagok adjuvánssal való kiegészítése, amelynek. célja az oltóanyagban lévő antigének elleni immunválasz fokozása .
Legyengített élő oltóanyagokban is szoktak adjuvánst alkalmazni, ha a mikroorganizmusok legyengítess miatt csökken az immunválasz.
Nemrég merült fel, hogy több patogén ellen olyan kombinált oltóanyagot alkalmazzanak, amely az egyik valenciára egy inaktivált oltóanyagot, a másikra pedig egy legyengített élő oltóanyagot tartalmaz. 11vénkor a fagyasztva száAktaszérnünk: 926ö8-2709/SG
Ί φ ♦·*;*
Φ * « φΦ Φ *Φ ritott formában, tartósított, legyengített, élő oltóanyagot az adjuvánst tartalmazó ínaktívéit oltóanyag-készítményben kell rekonstituálni. Az említett készítmény az adjuvánst nem tartalmazó, élő oltóanyag rekonstitűciós' hordozójaként szerepel.
Az EP-A-532 833 számú iratban a szerzők egy, a lőherpeszvírus (EHVí által okozott betegség, a lórhínopneumonia elleni oltóanyagot ismertetnek. Az oltóanyag egy inaktívált, adjuvánstartalmú oltóanyag, amely inaktívált EHV-4 és EffV-1 vírust, Havlogen® adjuvánst és poliakr 1.1 -polimer hordozót tartalmaz.
Mint a legtöbb herpeszvírus esetében, jelenleg nincs hatásos -oltóanyag, amellyel a vírust a fertőzést követően gyorsan, el lehetne távolítani. Az ismert oltóanyagok a klinikai tünetek megjelenése ellen próbáinak védelmet biztosítani. A vírusexkrécíóra gyakorolt hatás általában csak korlátozott mértékű..
Az SF-A-532 833 szerint a kifejlesztett öltő-anyagról feltételezték, hogy 79-93%-ban csökkenti a vírusexkréciót (ld. az eredményeket bemutató részben). A kilenc kontroliállat közül nyolc a fertőzést követően átlagosan 1,4 napig választott ki vírust, pedig a fertőzés után a ví.rusexkréciö rendesen legalább 5 napig tart. Sz alacsony intenzitású fertőzést jelent, amely a kontrollal összehasonlítva mesterségesen fokozza a beoltott lovak védelmét. A vírusexkréció tehát nem volt szignifikáns ebben a kísérletben.
A karbomer típusú adjuvánsokat is alkalmaztak ínaktíváit vírust tartalmazó lőinfluenza-oltőanyagokban (1EV).
Φ* * dumford és zitsai., [Epidemíol. ínfect, 112, 421-437 (1992) 1 leírják, hogy két Iő-1EV oltó-anyag dózis szükséges ahhoz, hogy a lovakban a vírus ellen tranziens humorális választ és gyenge védelmet idézzenek elő. A szerzők inaktívált oltóanyagokban hasonlították Össze a karbomer és az alumínium·-· foszfát adjuváns hatását a tetanusztoxoid je~
| lenlétében és h | i anyában.- Az | első oltás után | SRH-val |
| {„singie rabiad t | semolysis - | egyetlen radiális he | molízis |
| eljárás; mindegy! | k esetben ki | tudtak mutatni egy a | laosony |
| antitesttitert a | H7N7- és -a | H3b 8-1 orz s e k ke1, a z | erősebb |
| tranziens válaszol | k kiváltásához azonban egy második | és egy |
harmadik oltásra is szükség volt.
Az US-A.--4 500 513 számú irat is Ίδ-ín.fluenzavirus elleni oltási kísérleteket ismertet, amelyekben karhomerek jelenlétében inaktivált oltóanyagok alkalmaztak. Az állatok eredetét és egészségi állapotát nem ismertették pontosan, de úgy tűnt földi állatok p’ground animals”) (2. bekezdés, 11. hasáb). A hemagglutinásiőgátlási eljárással mért magas antitesttifcerek azt jelzik, hogy az állatok valószínűleg már fertőzöttek voltak az influenzával és hogy az oltás után kiváltott válasz nem első oltási, hanem erősítő típusú vo.l tA Fort Dodge Solvay ínaktiváit iöinfluenza-oltóanyagokat ÍDuvaxyn® x'£ és l'E-T pius) és egy inaktivált lórhinopneumonia-oltóanyagot forgalmaz, karbomer sdjuvánsban.
Ismertek továbbá, kereskedelmi forgalomban kapható, aluminium-hidroxid adjuvánst tartalmazó Ínaktiváit ló»* « » « «
0** influenza-oltóanyagok is (például Tetagripiffa®, Mérial, Lyon, Franciaország).
A hagyományos inaktivált vagy alegység, oltóanyagokhoz nagyon sokféle más adjuvánst is alkalmaznak. Megemlíthetjük például az alumín.ium-hidroxídot, az alumínium-foszfátot, az Avr idi.ne®-t, a DDA~t, a monofoszforil-lipid-A-t, a Pluronic L121~efc és egyéb blokkpoiimereket, a muramiipeptideket, a szaponinokat, a ferehalóz-dimíkolátot, a maleinanhidrid- és etilén-kopolimereket, a sztircl- és akrilsav-, vagy metakrilsav-kppolimereket, a polifoszxazént, az olajos emulziókat, stb.
A WG-A-94 16681 számú irat egy burokkal rendelkező vírus egy heteroióg génjét expresszáló rekombináns élő oltóanyagot ismertet, amelyet víz az olajban, olaj a vízben vagy víz az olajban a vízben típusú emulzió formájú adjuvánsos olfőanyag-készitménnyel egészítettek ki.
Az ilyen oldatoknak azonban számos hátrányuk is van.
A gyakorlatban a felhasználónak egyrészről biztosítani keli a fagyasztva szárított aktív hatóanyagot, másrészről pedig egy olyan, már előre kialakított emulziót, amelyben rekonstítuálni tudja a fagyasztva szárított aktív hatóanyagot .
Ha a tárolás során az emulzió nem stabil, akkor az károsan befolyásolhatja a rekonstituált oltóanyag hatásosságát és biztonságát.
A legyengített élő mikroorganizmusok aktivitásának kérdése akkor merülhet fel, ha az olajos fázisban instabil0 0 V*
0*0 * nak bizonyulnak. Ez különösen azon vírusok esetében fordulhat elő, amelyek ezáltal elveszítik fertőzőképességüket.
Az emulziós oltóanyagok az oltás helyével kapcsolatos biztonság tekintetében is okozhatnak problémákat.
A találmány célja tehát legalább egy heterolog nukieotidszekvenciát, és különösen beterőlóg gént expresszálé rekombináns élő oltóanyagokon alapuló új oltóanyag-készítmények előállítása, amelyek, olyan adjuvánst tartalmaznak, amely ugyanannak az oltóanyagnak adjuváus nélküli alkalmazásához képest jelentős mértékben fokozza az immunitást és amely tökéletesen megfelel az ilyen tipusű oltóanyagnak.
Felismertük, hogy a karbomer tipusű vegyületek az adott tipusű oltóanyagokhoz szükséges körülmények között képesek adjuvánsként működni, és váratlan mértékben. Az állati herpeszvírusokon (EHV-1, lö-herpeszvirus) végzett kísérletek azt mutatták, hogy a karbomerek hozzáadása a kísérleti fertőzés során nem várt mértékben csökkentheti a vírusexkréciót. Az A-típusú ló-influenzavírussal végzett kísérletek eredményeként lovakban meglepően korai és magas szexológiai téteteket sikerült elérni, jobbat mint a legjobb kereskedelmi forgalomban kapható oltóanyagokkal.
A találmány tárgyát tehát rekombináns élő oltóanyag képezi, amely egy vírusvektort tartalmas, amely egy heterolog nukl.eotidszekvencíát, előnyösen egy patogén ágens génjét tartalmazza és .in vivő expresszálja, valamint legalább egy adjuvánst, amely lehet akrílsav- vagy metakriisavpolimer vagy maieinanhiőrid és aikenllszármazék kopolímere.
Az előnyös vegyüietek az akriisav és a metakrilsav polimerei, amelyek keresztkötöttek, különösen cukrok vagy polialkcholok polialkenil-étereível. Ezek a vegyüietek karbomerek (Pharmaeuropa 8. kötet, 2, szám, “j unxus í néven ismertek. A technikában, jártas szakember e célra fordulhat a (kitanítás részét képező) US-A-2 309 462 számú irathoz, is, amely legalább 3, előnyösen maximum. 8 hidroxílcsoportot tartalmazó, olyan polihidroxiláit vegyületekkel keresztkötött akrilpoiímereket ismertet, amely polihidroxilált vegyületekben legalább három hidroxiiban a hidrogénatomot legalább két szénatomot tartalmazó telítetlen, alifás gyökök helyettesítik. Az előnyös gyökök a 2-4 szénatomot tartalmazók, például a viníiek, aliilok és más étilénesen telítetlen csoportok. A telítetlen gyökök maguk is tartalmazhatnak szubsztitnensekef, például metilcsoportot. A. Carbopol® (BF Goodrich, Ohio, USA) márkanéven forgalmazott termékek különösen megfelelők e célra. Ezek a vegyületek allil-ssacharőzzal vagy allil-pentaerítritollai keresztkötöttek. Megemlíthető közülük a Carbopol® 974?, 934?
és 9?IP.
A maleinanhidrid és alkenilszármazék kopolimerek közül az ΕΜΛ® {Monsanto) előnyös, amely maleinanhidrid és etilén lineáris, - például diviní 1-éterrel. - keresztkötött kopolímere. E célra fordulhatunk a kiterítés részét képező következő publikációra; J. Fields és mtsai., Natúré 18 6, 778'780 (1960. június 4.).
ΧΦΦ Φ**
A szerkezet vonatkozásában az akrilsav- vagy metakrilsav~polimerek és az EMA^-kopolimerek előnyösen az alábbi képlettel jellemezhető alapegységekből épülnek fel:
lehet H vagy Cth és y ahol a képletben:
Rí és 3.2 azonos vagy különböző, x - 0 vagy 1, előnyösen x ~ 1 y - 1 vagy 2, és x + y = 2 Az EWk^-kopo litereknél x karcoméraknéi x - y - 1.
Ha ezeket a polimereket vízben oldjuk, akkor savas oldatot kapunk, amelyet - előnyösen fiziológiás pH-ra állítva - semlegesíteni kell ahhoz, hogy olyan adjuvánsol&athoz jussunk, amelyben az oltóanyagot magát feloldhatjuk. A polimer karhozélcsoportjai ekkor részleges €00'-formában lesznek jelen.
A .találmány szerinti adjuvánsoldat, különösen a karbomeroidat, előnyösen desztillált vízből készül, és előnyösen nátrium-klóridőt tartalmaz, és a kapott oldat savas pH-jú. Az igy kapott törzsoldatot azután - egyszerre vagy több adagban, egy időben vagy később, előnyösen NaOH-daí történő semlegesítés (pH 7,3-7,4} mellett - a (kívánt végkoncentráció előállításához·} szükséges vagy ezt közelitő
Φ *# * χ
»·** »«« 4 ί1* ** φ * »*« * * *ΧΛ *
Φ'** ** mennyiségben KaCl-dai töltött vízhez, előnyösen fiziológiás sooldathoz (9 g/1 haCl) adva meghlgitjuk. Ezt a fiziológiás pH-jű oldatot alkalmazzuk azután a - különösen a szárítva fagyasztott formában tárolt - oltóanyag rekonstitueiójához.
A végleges oltóanyag-készítményben a polimer koncentráció 0,01 és 2 vegyesszázalék között mozog, előnyösebben 0,06 és 1 vegyesszázalék között, még előnyösebben pedig 0,1 és 0,6 vegyesszázalék között.
A találmány különösen hasznos állati herpeszvírusok elleni oltásokhoz. A találmány tárgya különösen előnyösen a lő-herpeszvírushoz (különösen az E.W-1 és EHV-4)', a macskaherpeszvírushoz (FHV), a kutya-herpeszvírushoz (CHV), madár-herpesz vírushoz (Marék és ILTV) , s zár vasmarha -herpesz · vírushoz (BKV) és sertés-herpeszvlrushoz (BRV - Aujeszkyféle kór vírusa vagy más néven pszeudorábiesz-víras) kapA találmány tárgyát tehát olyan rekojnbináns élő oltóanyagok képezik, amelyek legalább egy, az említett herpeszvírusok legalább egy génjét tartalmazó és expresszálö vírusvektort, és legalább egy, a találmány szerinti adjuvánst tartalmaznak.
A technikában jártas szakember e célra fordulhat például a (kitanitás részét képező) WO-A-92 15762 S2ámú irathoz, amely az említett géneket expressz, élni képes poxvírusokon alapuló expressziós vektorok, igy például az SHV1 gB~, gC~ és gD-génjét expresszálö kanáripox (az EHV-4-re is alkalmazható), az ugyanezen géneket expresszálö vakcíniavirns (v? 1043), a BHV-1 gl(gB)-, glIT(gC)— és gÍV(gD)-génjét expresszáló vakolniavírus, az EHV-1 gD-jét expresszáló kanáripox, vagy a PRV gll(gb;-jót, glíl (gC)-gát és gp5O(gD)~jét expresszáló rekombinánsok előállítását ismerteti. A technikában jártas szakember fordulhat továbbá a (kitanítás részét képező) RO-A-95/26 751 számú irathoz is, amely a CHV gB~génjét expresszáló vCP320, a CHV gü~génjét expresszáló vCP322 és a CHV gD-génjét expresszáló vCP294 rekombináns vírusokat ismerteti, A technikában jártas szakember fordulhat továbbá a ki tanítás részét képező FR-A-2 647 808 vagy «O-A-S012882 számú, iratokhoz is, amelyek RHV-, FR7- és BHV-géneket expresszáló rekombínánsokat ismertetnek..
A találmány igen hasznos továbbá influenzavírusok elleni oltásokhoz, ahogy azt az EIV (lö-influenzavirus) esetében a leírásban megmutatjuk dár-inf luenzavlrust (Alt; és influenzavírus)..
A technikában jártas szakember e óéira fordulhat például a W-ö-A-92 15 672 számú irathoz, amely az SIV HA-génjét expresszáló rekombináns kanáripoxot ismertet.
A találmány tárgyát tehát olyan rekombináns élő oltóanyagok képezik, amelyek az említett influenzavírusok legalább egy génjét tartalmazó és expresszáló vlrusvektort, és legalább egy, a találmány szerinti adjuvánst tartalmaznak. Az oltóanyag konkrétan két vagy három vektor keverékét tartalmazza, amely vektorok mindegyike egy-egy üA-gént tartalmaz és expresszál, és a gének különböző törzsekből származnak, például a lő-influenzavírus Prága-, Kentucky- és
Megemlíthetjük továbbá a mas sertés-influenzát (sertés.ι Ο »«» »* *
Newmarket-törzseíből. Hasonló módon arra is lehetőség van, hogy egyetlen vektor tartalmazzon és expresszáljon 2 vagy 3 különböző törzsből származó HA-gént.
A találmány más állati patogének esetében is alkalmazható, különösen például a FeLV-hez (ld. még például a Wö-A92 15672-ben ismertetett, env- és gag- géneket express sáló kanáripox rekombinánsokat (vCP93 és vC'P97}], a tetanuszhoz íid, még a WO-A-92 15672-t és a tetanusztoxint expressxáló vCFlél rekombináns kanárípoxot és vPI072 rekombináns: vakciniát), a Carré-féle kér vírusához {kutyaszopornyicavírus, CDVj (ld. a kitanítás részét képező WO-A-95 27780 számú iratban Ismertetett rekombináns vCP 258-at;.
A találmány tárgyát tehát olyan rekombináns élő oltóanyagok képezik, amelyek az említett vírusok legalább egy génjét tartalmazó és expresszálö vírusvektort tartalmaznak.
| találmány tárgyát képezik továí | íbá multivalens - | - azaz |
| agy több betegség antigénjeit | expresszálö két | vagy |
| rekombináns vektort tartalmazó | - rekombináns | O .i. t O“ |
anyagok, a találmány szerinti adjuvánsoldattal előállított keverék formájában,
A találmány bármilyen típusú vitális expresszíös vektor, így
92/15672galsmbpox alkalmasa
95/27780 lálmány céljára poxvirusok (vskcin.íavirus, ben ismertetett KYVAC, b , sertéspox, stb.}, adenovír sára kiterjed. A kanáripox, és WO-A-92/15672} különösen ezen belül a WO-Aaromí ipox., kanáripox, ások es herpeszvrrusok pl. az ALVAC (WO-Ajöl alkalmazható a taII
V '·«·* '* » <-*·ν i-se * *
A használatkesz, és különösen a rekonstítuált oltóanyagok esetében a vírusvektor a szakirodalomban megadott normái mennyicégekben van jelen.
A rekomhínáns elő oltóanyagok általában fagyasztva szárított formában vannak, így jól tárolhatók és közvetlenül használat előtt kerülnek rekonstitúeíöra valamilyen oldatban vagy kötőanyagban, ami itt a találmány szerinti adjuvánsoldat.
A találmány tárgyát képezik tehát továbbá olyan oltóanyag-készletek, amelyekben külön csomagol tan. van a fagyasztva szárított oltóanyag és a találmány szerinti adjuvánsvegyületet tartalmazó oldat, amelyben a fagyasztva szárított oltóanyagot rekonstituáljuk.
A találmány tárgyát képezi továbbá oltási eljárás, amelynek során parenterálís, előnyösen szubkatán, intramnszkuláris vagy intradermáils úton vagy mukózán át beadjuk a találmány szerinti oltóanyagot, amelyet előzőleg a fagyasztva szárított oltóanyag (rekombináns vektor) adjuvánsoldatban történő rekonstitüciőjavai állíthatunk elő.
Az eljárás egyik célja lehet állatok klinikai védelme valamint a vírusexkrédó csökkentése, ami különösen a herpeszvírusok esetének felel meg.
További cél lehet az immunválasz fokozása és előbbre hozatala, különösen úgy, hogy az első oltás után már antitesteket indukálunk.
A találmány tárgyát képezi továbbá a találmány szerinti adjuvánsvegyületek alkalmazása rekomfoináns élő oltóanyagok előállítására, különösen azzal, hogy fokozottabb és ♦ -» korábbi immunválaszt indukál és/vagy csökkenti a vírusexkréciöt. .Eszel kapcsolatban hivatkozunk a korábbiakban e imondo 11 a kr a.
Az alábbiakban nem korlátozó példákon és a következőkben felsorolt ábrákon keresztül bemutatott megvalósítási módok segítségével részletesebben is ismertetjük a találmányt .
Az 1.. ábrán az EiV Ne«markét-2/93 törzséből származék HA-gén. nukieofidssekvenoiáját mutatjuk be.
A 2. ábrán az FHV-i gC-génjének nukreotidszekvenciéját mutatjuk be.
A 3. ábrán kísérletesen megfertőzött lovak különböző iő-herpeszvírus elleni oltóanyagokkal történő beoltása után kapott vírusexkrécíó változásait bemutató grafikon található.
PÉLDÁK
Donorplaznu.dok előállítása az ”ALVAC” kanárrpoxvírus
C3f C5 és CS inszerciós helyeihez
Az í!AbVAC kanárípoxvírus [Tartaglía és mtsaí., Viro-iogy 189, 217-232 <199-2); a kitanitás részét képezi] különböző inszerciós helyeihez alkalmazható donorplazmidokat a WÖ-A-95/27780 számú bejelentés 20. példája ismerteti .
Az említett bejelentésben a piazmidókat a következőképpen jelölték:
a C3~heuyhez: VQH6CP3LSA.2 plazmíd a Co-heívhez; HC5LSP28 plazmid
0 0 a C6-helyhez: pC6L plazsdd,
2. példa
A VÜP258 rekomhonáns vírus (ALVAC/CDV előállitása
A HA- és az F-gént -CDV-vlrus Onderstepoort-törzséfodl izoláltuk (a HA-géz- szekvenciáját id. Curran és m/fsaí .,, Virology 72, 443-447 (1991), az F~gén szekvenciáját id. B-arrett és mtsai., Vírus Research 8, 373-386 (1967) ; mindkettő a kitanitás részét képezi] ,
A Hö-vakcíniaprömöter-CDV-F-génnek és a H6-vakcÍni~ promöter-GDV-HA-génnek az ALVAC-vírus C6-iőkuszára történő inszerdójához alkalmazható- pHM103 donorpiazmíd előállítását a Wö-A-95/27780 számé bejelentés 19. példája ismerteti.
Ezt a plazmidot használtuk az ALV2.C-vírus in vit.ro rekombinációjához (Ficciní és mtsai., Methods in Enzymology 153, 545-563 (1987); a kiterítés részét képezi], aminek eredményeképpen a vCP258~nak nevezett refcombínáns vírust kaptuk, ahogy az az említett bejelentés 19. példájában szereoel.
A VCP1502 (ALVAC/E1V HA Prága) rekombináne vírus előállítása
A HA-gén (EIV Prága-törzs) szekvenciáját a WO-A92/15672 számú bejelentés 23. ábrája mutatja be. A léinfluenzavírus Rrága-56: törzse genomjának megfelelő virusRNS-t 100 μΐ vírusszuszpenzlóból, Totál RRA Separator Kit (CLONTECH, Faló Aito, CA; kát. sz. K1042-1) segítségévei állítottuk elő. Az RNS-pelletet 10 μΐ ultrátiszta vízben « « l »'« felvettük, majd DNS-komplementer reakciót és PCR-reakciót i;“ ”RT~PCR~reakció”} végeztünk, amelyhez templátként a megtisztított RNS 2 ui-ét és az alábbi oligonukleotídokat használtuk;
TAY51A (1. azonosítószámú szekvencia) (70 tagú) * CGCGGCCATCGCGAYATCCGTTAAGTTTGTATCGTAATGAACACTCAAATTCTAATA
TTAGCGACTTCGG3’ és TAY53A (2. azonos! tő-számú szekvencia) (36 tagú)
ÍR ? z*^ z-z''/-» ,··'.·» σι r« ,·-< z- cr? rr. 7« m >·. --17% 7·. 7\ m ?> : n z^z-y— z^*> 5 és így amplifikáltuk az E1V Prága-törzsének JíA-génjét. Az így kapott PCR~fragmenst ezután pCRll-vsktorba (invitrogen, San Diego, CA) ligái tűk és Így jutottunk a pJTö0'7 plazmádhoz.
A púYOO plazmádét Nrul-gyel és &sp718-cal emésztet-
| túk, így | k.spt | •.uk a | Ηβ-promóter végét és a Frága-56 te | í V | es |
| HA-génj ét | tar) | is ima | zó körülbelül 1800 bp hosszúságú Nrul | -7 | 18 |
| fragmenst | ... Ez; | i a f. | ragmenst az előzőleg Nrul-gyel és Asp | 7i | 8- |
| cal emész | tét t | C5 l· | ÍÜ5LSP28 donorpaismldhoz .ligáltuk, és | i | gy |
| kaptuk tv | égül | a p | JY008 piazmidot. A plazmid szerhez | et | ét |
| szekvenál | ássa. | L és | teljes restrikciós térképezéssel ell | .·-;> r; | Ő” |
| Γ ,i Z L ti x» | |||||
| Ez a | plazmid | szolgál donorpiazmídként a HG-Préga | -5 | 6- |
HA~gén expressziős kazetta CS-lőkuszra történő ínszerdójához.
A. pJTOOB plazmidot NőtI-gyei linearizáltuk, majd Így használtuk az ALVAC-virus in vit.ro rekombinációjához [Piccini és mtsai., Kethods in Snzvxnology 153, 545-563 (1987)3, aminek eredményeképpen a rekomfoináns vírust kaptuk.
vCPl502-nek reve nett
A vCP1529 (AhVAC/EIV HA Kentuc.ky-1/94) rékorabináns vírus előállítása
A ló-influenzavírus Kentucky-l/'94 törzse genoxajának megfelelő vírus-RNS-t [Daly és mtsai., J. Gén. Viroi. 77,, 661-671 (1996}; a. kitanítás részét képezi] 100 ul vírusszuszpenziőből, Totál RNA Separator Kit (CLONTECH, Palo Alto, CA; kát. sz. K1642-1} segítségévei állítottuk elő. Az KNS-pelletet 10 μΐ ultratiszta vízben felvettük, majd RTPCR-reakciót végeztünk, amelyhez templátként a megtisztított RNS 2 μΐ-ét és az alábbi oügonukleotidokat használtuk:
TAY55A [3. azonosítószámú szekvencia) (70 tagú) * C GC G G CCAT C GC GATAT C CG 7 T AAG T T TGTAT CGTAATGA AGA.C A AC GATT AT T ? TG
ATACTACTGACCC3’ és TAYS7.A (4. azonositószamú szekvencia;· (42 tagú}· ’ CGCGCGGCGGTACCTCAAATGCAAATGTTGCATCTGAT GTTG35
| és b | gy ampi. | i. fikái tűk a H. | A-gént. Az így kapott ?CR~ |
| fragmenst | ezután ] | oCRJT-vek torba. | (Invítregen, San Diego, CA.) |
| ligáitok | és így | jutottunk a | pGTOOl plazmádhoz, Az E1V |
| Kentucky-3 | ,/94 tó: | őrséből száraié | iző és a pJTOOl plazmádba |
| klónozott | .HA-gén | szenvenciáj a | megegyezik a GenBank adat- |
bankban található EIV Kentucky-1 gén szekvenciájával (hozzáférési törzséből származó HAszám: L33914, a kitanítás részét képezií *♦* *
X * » » *· ·*
A ηΑ-gént (Kentucky-1/94) tartalmazó püTOOl pl.azmi.dot Nrul-gyel és Asp7i8-cal emésztettük, így kaptuk a CHSpromóter végét és a Kentucky-1/94 teljes HA-génjét tartalmazó) körülbelül 1800 bp hosszúságú NruX-718 fragmenst. Ezt a. fragmenst az előzőleg NruX-gyel és Asp'?l8--cal emésztett C5 HC5LSP28 douorpalzm.idhoz ligáltuk, és így kaptuk végül a puTOGS plazmidot. A plazmád sz ALYAC-virus C5-lókuszán tartalmazza a H6-Kentucky~3/94-KA~gén e-xpressziős kazettát. A plazmád szerkezetét szekvenálással és teljes restrikciós térképezéssel ellenőriztük.
Ez a plazmád szolgál donorplazmádként a H6-Kentucky1/94-HA-géu ezpressziós kazetta CS-fókuszra történő leszerelőiához.
.A pJTöOS p3.azm.idot Notl-gyel linearizáltuk, majd így használtuk az ALYAC-vírus in vitro rekombinációjához [Picci.nl és másai.., Hethods in Enzymology 153, 545-563 {1987)1, aminek eredményeképpen- a vCPl 529-nek nevezett rekombináns vírust kaptuk.
A VCP1.533 (ALYAC/EXV HA Kewmarket-2/93) rekombináns város előállítása
A ló~influenzavírus .He-wmarket-2/93 törzse genom janak megfelelő vírus-RNS-t [Daly és másai., J. Gén. Virol. 77, 661-671 {1996)1 ICO μι vírusszuszpenziőbó-f, Totál SNA
Separator Kit (CLONTECH; kát. sz. KI 042-1} segítségévei állítottuk elő. Az RNS-pelletet. lö pl ultratiszta vízben felvettük, majd RT-PCR-reakciót végeztünk, amelyhez templát* * * * ként a megtisztított RNS 2 μϊ-ét és az alábbi oligonukleotidokat használtuk:
CCLOO? (5, azonos!tőszámú szekvencia) (40 tagúi ’ lúGTCGACTCáA7GATGAAGACAACCAT7A7T77GA7AC7 3 ’ és CCL0013 |v, azonosítószámú szekvencia) (34 tagú) ’ TTGGATGCT’rACTCAAATGCAAATGTTGCATCTGS ’ és így amplifíkál tűk a HA-gént, Az igy kapott PCRfragmenst ezután pCRíI-vsktorfoa (Invitrogen, San Diego, CA) 1ágáltuk és így jutottunk a pCCL02S plazmádhoz, Az EIV bíewraarket-2/93 törzséből származó HA-gén szekvenciája az 1., ábrán látható (7. azonosítószámú szekvencia).
A HA-gént (Newmarket-2/93) tartalmazó pCCL026 plazmádat Spel-gyei és Aeel-gyel emésztettük. Ezt követően hibriöázáltattuk az alábbi oiigonukleotidokat:
TAY99N (3,. azonosítószámú szekvencia) (74 tagú) ’ CTAGTTCGCGATATCCGTT/ÚIGTTTGYATCGTAATGAAGACAACCATTATTIYGATA.
C1ACTGACCCATTGGGT3' és TAY100N (9, azonosítószámú szekvencia) (72 tagú) * AGAeCCAATGGGTGAGTAGTATCAAAATAATGGTTGTCTTCATTACGATACAAACTT
AACGGATA7CGCGAA3 * majd hozzáligáitűk őket az Spel-gyei és Acci-gyel emésztett pCCLü26 plazmádhoz, és Így kaptuk a pJTOOG plazmídot, A kettősszáiú TAY99N/TAYI00N oiigonukleotíd tartalmazza a HG-promóter 3'-régióját, egészen az Nrul-helyig, valamint a HA-gén első 40 kódoló bázisát,
A pJTOÖ3 plazmádét Nrul-gyei és Xhol-gyel emésztettük, igy kaptuk a HS~promőter végét és a teljes HA-génjét tartalmazó körülbelül 1800 bp hosszúságú Nrul-Xhol fragmenst.
Ezt a fra.gm.enst az előzőleg drui-gyel és Xhol-gyel emésztett CS HC5LSF28 donorpa.I z.midhoz ligáitok, és így kaptuk végül a pJTüöd plszmidot. A plazmád az ALVAC-vírus C5ióknszán tartalmazza a H6-Newmarket-2/93~.HA-gén expressziós kazettát. A plazmád szerkezetét szekvenálássál és teljes restrikciós térképezéssel ellenőriztük.
Sz a plazmid szolgál donorpiazmidként a H6-dewmarket2/93-BA-gén expressziós kazetta CS-Iókuszra történő ínszer•dójához.
A pJT004 plazmdot Pvul-gyel imearizáituk, majd így használtuk az ALVAC-vírus ín vitro rekombinációjához (Piccini és másai., Methods in {1987;j, aminek eredményeképpen rekombináns vírust kaptuk.
Enzymoiogy 153, 545-563 a vCP1533~nak nevezett
A VCP132 (ALVAC/EHV-l gB-s-gCfgDj rekombináns vírus előállítása
A rekombináns vírus előállítását a WO-A-92/15672 számé bejelentés 25.: és 26. példája ismerteti. A vírust az ALVACvírus és a pJCA04 9 donorplazmíd in vítro rekombinációjává1 állítottuk elő. A plazma a C3 ínszerciős helyre beklőnozva az alábbi 3 expressziós kazettát tartalmazza;
L - va k c í n i ap r omő t e r - EH V- .1 - gb - gé n
H 6-vakcíní apromő t er-EHV-1-gC -gén
42K-entomopoxproiaőter-rH2-l-gD-gén
Az EHV-1 gö-,- gC- és gD-génjének szekvenciáját a Wö-A92/15672 számú bejelentés 2. (az EHV-1 gPI3-génjének szekvenciája - gCi, 6, (az EHV-1 gP14-génjének szekvenciája ·«**< » « * ·» φ φ gb! és 12. (az EHV-I gD~, gP63~ és gE-génjének szekvenciája) mutatja.
.
| A VCP243 | (ALVAC/FHV-1 | gS*gC*gD> | rekomfcxnáns vírus | •ÖXÖ |
| állítása | ||||
| Az FHV-1 | (GO-törzs) í | jB-génj ének | s z e kv en c i á j á t a S | 40-A- |
| 90/12882 számú | bejelentés | 34. ábrája | mutatja. | |
| Az FHV-1 | (CO-törzs) g | C~génjót (a | szekvenciát a 2. | ab ra |
az mutatja) (10, azonos!tószámú szekvencia) az EcoRX-Ffragaensbői (7,6 kbp) klónoztuk. Mérete 1599 bp és egy 533 aminosav hosszúságú fehérjét kódol.
Az FHV-1 (CO-tÖrzs) gD-génjét (a szekvenciát a WQ~A~ 92/15672 számú bejelentés 28. ábrája mutatja) az EcoRi-Mfragxaens-foől (4,4 kbp) klónoztuk (pFHVEooRIM plazmád) .
A korai transzkrípcíotermínácíós szignál (TVTTTHT) szintjén Kiutált ISL-EHV-l-gB-gén expressssiós kazetta előállítása
Egy PCR-ampiífirációhoz az alábbi oligonukleotidokat: MP257 (il. azonosítószámú szekvencia) (20 tagú) ’GATTAAACCTAAATAATIGT3 ’ és JCA1SS (12. azonosítószámú szekvencia) (21 tagú) ’ TTTTTCTAGACTGCAGCCCGGGACATCATGCAGTGGTTAAAC3 ’ és templátként egy, az IoL-vakciniapromötert tartalmazó plazmidot (Kiviére és mtsai., J. Virol. 66, 3424-3434 (1992); a kitanitás részét képezi) alkalmazva kaptuk az (izL-promötert tartalmazó) 1.2.0 bp hosszúságú tompa végű Xbal-fragmenst ~ A-fragmens. Egy másik PCR-amplífikáoióhoz alábbi oligonukleotidokat:
JCA213 (13. azonosítószámú szekvencia? (IS tagú) ö uTkjC.T .t A a í. 1 C J és JCA238 (14. azonosítószámú szekvencia? (21 tagú) s AGGTGCACTCGTSGCGATCTTS 1 és tempiátként pJGAúOl plazmádét alkalmazva kaptuk az (FúV-l gB-génjének 5*-részét tartalmazó) 720 bp hosszúságú tcmpavégó BamHi-fragmenst ~ 8-fragmens.
Az A-fragmenst Xbal-gyeí emésztettük, majd megfőszfórHáltuk, a B-fragmenst pedig Bambi-gyei emésztettük, majd ugyancsak magfoszforiláltnk. A két fragmenst ezután előzőleg Xbal-gyel és BamHI-gyel emésztett pBluescrl.pt SK+ vektorba ligáitűk, így kaptuk a pJCA075 plezmidot.
Egy következő PCR-amplifikációhoz az alábbi oligonukleetidokat;
JCA158 (IS. azonosé tószámú szekvencia) és JCA211 (lö. azonosítószámú szekvencia) (21 tagú) ’ GTGGACACATAZAGAAAGTCG3 ’ és tempiátként púCAOlő plazmidot alkalmazva kaptuk a (TTTTTNT-szignál szintjén mutált FHV-1 gS-génjének 5’részét és hozzáfuzíenáltatva az I3L~promötert tartalmazó) 510 bp hosszúságú tompavégű Xbal-fragmenst - C-fragmens.
Egy következő PCR-amplifíkáciöhoz az alábbi oligonukleotidókati
JCA212 (17. azonosítószámú szekvencia) (21 tagú) s/ ’νΛύυ ά A LHwí'n V ΙΛλ* i U Α ΠΛ1 Ο és ÚCA2I3 (13. azonosítószámú szekvencia) (18 tagú) *«*« φ««φ φ. * **
Φ Φ# Μ* * *·♦·' * * 1 *« X ♦ * * - * . * * » X « ♦ » * ** * ♦ * * és templétként púCAOOi plazmádét alkalmazva kaptuk az (FHV-1 gB-génjének középső részét tartalmazó) 330 bp hosszúságú tompavégű BamHl-fragmenst - D-fragmens.
A C-fragmenst Xbal-gyei emésztettük, majd megfőszforíláltuk, a. D-fragmenst pedig BamHI-gyeí emésztettük, majd ugyancsak megfoszíoriláltuk. A két fragmenst ezután előzőleg Xbal-gyel és SamHT-gyel emésztett pBIusscrlpt SK-t vektorba lígáltuk, így kaptuk a pJCA076 pi.azm.idot.
Egy kővetkező PCR-amplifikáciőhoz az alábbi oiigonukieotidokat:
JCA239 Í1S. azonosítószámú szekvencia) (18 tagúj ! ACGCATGATGACAAGATTATTATCB ’ •és ÚCA249 (19. azonosítószámú szekvencia) (18 tagú)
5- CTGTGGAATTCGCAATGC3 ’ és fcemplátként pJCAOOl plazmádat alkalmazva kaptuk az (FHV-l gB-génjének első 3’-részét tartalmazó) 695 bp hosszúságú tompavégű EcoRI-fragmenst - E-fragmens. Egy kővetkező PCR-amplifikációboz az alábbi oiígonukieotidokat: (ICA22.1 (20. azonosítószámú szekvencia) (48 tagú) ‘ AAAACTGCAGCCCGGGAAGCTTACAAAAAAlTAGATTTGTTTCAGTATCa ’ és JÜA247 (21. azonosítószámú szekvencia.) (36 tagú)
5’GGTA?GGCAáATTTC7TTCAGGGACTCGGGGATGTG3’ és templátként pőGAGOl plazmidot alkalmazva kaptuk a {TT?77MT-szignáI szintjén mutált EHV-Í gB-génjének második 3’-részét tartalmazó) 560 bp hosszúságú tompavégű Psfclfragmenst = P~fragmens.
Az S-fragmenst EcoRI-gyel emésztettük, majd megfőszforíláltuk, az F-fragmenst pedig Fstl-gyel emésztettük, ♦ X «« « ♦ __ χ « « ♦ ♦ * t a«* *♦ ♦ ** * majd ugyancsak megfoszforiláituk.. A két fragmenst ezután előzőleg EcoRl-gyel és Pstl-gyei emésztett pl'BI24 vektorba (International Blotecbnoiogies Inc., Név: Havon, CT) ligáitűk, így kaptuk a (az 13L~va.kcíníapromóter~FHV~l~gB~gén kazettát tartalmazó) pÚCA077 plazmidot.
A 42K-FHV-l-gD expressziós kazetta előállítása
Egy PCR~a®piifakácáéhoz az alábbi oiigonukleotidokat: RG286 <22. azonosítószámú szekvencia) (17 tagú)
5’TTTATATTGTAATTATAÜ’ és M13F <23. azonosítószámú szekvencia) (17 tagú)
5’GTAAAACGACGGCCAGT3» és templátként egy, az Bntomopox AmEBV 42K-promótert tartalmazó plazmidot (id. az US-A-S, 505, 941 számú szabadalom 21. példájában) alkalmazva kaptuk a (42K-entomopoxpromötert tartalmazó) 130 bp hosszúságú tompavégű EcoRlfragmenst - A-fragmens.. Egy másik PCR-ampií £ akácáéhoz az alábbi, oiigonukleotidokat:
JCA234 (24. azonosítószámú szekvencia) (ki tagú)
5' ATGATGACACGTCTACATTTT35 és JCA235 <25. azonosítószámú szekvencia) (21 tagú) ’ TGTTACATAACG1ACTTCAGC3» és templátként pFHVEcoRIM plazmidot alkalmazva kaptuk az (FEV-1 gD-génjének 5’-részét tartalmazó) 185 bp hosszúságú tompavégű BamHX-fragmenst ~ S-fragmsns. Az A~frag.menst EcoRI-gyei emésztettük, majd megfoszforíláltuk, a Bfragmenst pedig BamHl-gyel emésztettük, majd ugyancsak megfoszforíláltuk. A két fragmenst ezután előzőleg EcoRIgyei. és BamBI-gyel emésztett pBluescript SKt vektorba ligáitok, igy kaptuk a púCAö78 plsamidot.
A pFHVEcoRIM plazmidot <ld. fent; Sa.mHl-gyei és Xholgyel emésztve izoláltuk az (FHV-.1 gD~génjének 3?-részét tartalmazó) 1270 bp hosszúságé BaiaHX-Xho'I fragmenst, Ezt a fragmenst ezután előzőleg BamHl-gyei és Xhol-gyel emésztett pIBI24 vektorba ligáitűk, és igy kaptuk a pJCA072 plazmidot. Sgy következő FCB-amplifstációhoz az alábbi ο1igonuklsot idő kát:
JCA242 (26, azonos!tőszámú szekvencia) (18 tagú)
51 GAGGATTCCAAACGGXCCÓ ’ é s JC A2 37 (27. a z on o s i tó szárná s z e k veneía; (53 t a gű) ’ AATTiTCTCGAGAAGCTTGTTAACAAAAATCAXTAAGGATGGTAGATTGCATGS ’ és templétként pFHVEeoBIM plazmidot alkalmazva kaptunk sgy 290 bp hosszúságú. Xbal-Xhol fragmenst. Ezt a fragmenst Xbal-gyei és Xhol-gyei emésztve kaptuk az (FHV-i gD~ génjének végét tartalmazói C-fragmenst,
A pJCA072 plazmidot Xbal-gyei és Xbol-gyel emésztve izoláltuk a (pIB124 vektort + az FHV-l gD-génjének 3*-részét tartalmazó; 3575 bp hosszúságú Xbal-Xhoi fragmenst ~ D~fragmens. A C- és a D-fragmenst Ősszeligáivá kaptuk a p JCAO 73 pia zni do t.
A pJCA0?3 plazmidot. BamHI-gyel és Xhol-gyei emésztve izoláltuk az (FBV-1 gD-géngének 3’-részét tartalmazó) 960 bp hosszúságú BamHI-XhoI fragmenst (= A-fragmens), A PJCA078 plazmidot Hpa.I~gyel és BamHl-gyei emésztve izoláltuk az (FHV-1 gD~génjének 55-részét és hozzáfuzionáltatva a 42K~promőtert tartalmazó) 310 bp hosszúságú Hpal-BamHl
| fragmenst | (= B~f | tagmens), | Az A- és a | B-fragmenst | előzőleg |
| EcoRV-tel | és Xho | I-gyel em | észtett puli | lescript SKt | vektorba |
| ligáivá k | aptuk a | (42X-prc | ®sót.er~FHV~l~ | -gD-gén. kaze | ttát tar- |
talmazó) pJCAOOS plazmádét.
A Bó-FHV-X-gC kazetta előállítása
Az FHV-l (CO-törzs} genomíáiis DNS-ét E-coRJ-gyel emésztettük, majd a körülbelül 7500 bp hosszúságú FcoRI-Ffragmenst pBluescript SKi vektorba klónozva kaptuk a pFHVEcoRIF plazmídot. Egy PCR-ampiifíkáqíóhoz az alábbi oligonukleotidókat:
JCA274 (28. azonosítószámú szekvencia) (55 tagú) ’ CATTATCGCGATATCCGTTAAGTTTGTATCGT.AATGAGACGATATAGGATGGGAC3 ’ és JCA275 (29, azonosítószámú szekvencia) (18 tagúi ? ACTATTTTCAATACTGACo:* és tempíátként a pFHVEcoRIF plazmidot alkalmazva kaptunk egy fragmenst, amelyet Nrul-gyel és Sail-gyel emésztve jutottunk a 107 bp hosszúságú (az FHV-l gC-génjének 5’részét és hozzáíuzionáltatva a Hő-vakciniproinóter 3’-részét tartalmazói .Nrul-Sall frag.rn.ensb.ez (:~ A-fragmens) .
Egy másik PCR-aimpIífikáoiőhoz az alábbi öli gonukleoti dókat :i
JCA276 (30, azonosítószámú szekvencia) (18 tagú) ’ AAATGTGTACCAC6GGAC3: ·’ és JCA277 (31, azonos!tőszámú szekvencia) (54 tagú) ’ AAGAAGCTTCTGCAGAATTC61T3ÜiCAAAAA.TCATTATAATCGCCGGGGATGAG3f és templátként pFHVScoRIF plazmídot alkalmazva kaptunk egy fragmenst, amelyet EcoRV-tel és Bi.ndIXl-m.ai emésztve jutottunk az (FHV-l gC-génjének 3’-részét és a Bpai-EooRlPstϊ-HindiΪΙ helyeket, tartalmazó) 370 bp hosszúságú BcoBVHindll'l fragmenshez (~ B-fragmens) .
A púCAö2Q plazmídot fid, fent) Nru.I-gyel és HindiII— •mai emésztve izoláltuk a (HS-vakeiniapromőter 5’-részét tartalmazó) Hindi II-HruI fragmenst {- C-fragmeo.s) . A. pFHVEcoRIF plazmídot BamHI-gyel és ScoRV-tel. emésztve izoláltuk az CFHV-1 gC-génjének középső részét tartalmazó) 580 bp hosszúságú BamHI-EeoRV fragmenst (- D-fragmens) . Az Aés a C-fragmenst előzőleg Hindlll-mal és Sáli-gyei emésztett pBluescript .SKt vektorba ligáivá kaptuk a púCA.097 plazmídot. A B~ és a B-fragmenst előzőleg BamHI-gyel és HindXII-mal emésztett pBluescript SKt vektorba ligáivá kaptuk a pJCA099 plazmídot.
A pőCA037 plazmídot Psti-gyei és SaII-gyei emésztve izoláltuk a (Hú-gC-S’-rész kazettát tartalmazó) 200 bp hosszúságú. Pstl-Sal'I. fragmenst E-fragmens) . A pF'HVEcoRIF plazmádat BamHI-gyel és Sail-gyei emésztve- izoláltuk az (FHV-'l. gC-génjének második középső részét tartalmazó) 600 bp hosszúságú BamHl-SalI fragmenst F-fra-gmens) . Az E- és az F-fragmenst előzőleg BamHI-gyel és Pst.I-gyel emésztett pBluescript SK+ vektorba ligáivá kaptuk a pJCA098 plazmídot. A pJCAÖáS plazmídot ezután EcoRI-gye.1 és BamHIgyel emésztve izoláltuk a (H6-FHV-I-gC-S’-rész kazettát tartalmazó) 820 bp hosszúságú EcoRI-BsmHI fragmenst í- Gfragmens) . A pJCA099 (id. fent) plazmídot ezután BamHI-gyel és Hindlll-mal emésztve izoláltuk az (FHV-1 gC-génjének 3’részét tartalmazó) 960 bp hosszúságú BamHI-HindiII fragmenst \- H-fra-qmens) . A G- és a H-fragmenst előzőleg »*
EcoRV-tel és Hindi11-mal emésztett pBiuescript SK+- vektorba ligáivá kaptuk a (H6--vakclniapromóter~FHV 1-gC-gén expressziós kazettát tartalmazó) pJCAlOO piazmi.dot.
A pJCAlOO plazmádét Nrul-gysl és EcoRI-gyel emésztve izoláltuk az FHV-1 gC-génjét és hozzáfuzíonáltatva a H8-
| promőter 3’-részét t | artalmaző | 1550 bp .hosszúságú | íiruI-EeoRI |
| fragmenst. Ezt a fi | zag.me.nst | azután előzőleg Nru | il~gyei és |
| Eco-R 1-gyel emésztett | pú€AöS3 | plazmidba (VQH6---T3V | M kazetta |
| pBluescri.pt SK+ vek | torban) 1 | .ágáltuk. A pJCAö79 | piazmidot |
| (Id. fent) SmaT-gyel | és BamHI | -gyei emésztve izolá | ltuk a (Az |
X3L~FHV-l~gS-gén-5'’~rész kazettát tartalmazó) 840 bp hosszúságú BamHI-Smal-frsgmenst (~ A-fragmens). A pJCAOVS piazmidot BamHI-gyei és HindlH-mal emésztve izoláltuk az {FHV-l yB-génjenek 3 * -részét tartalmazó) 2155 bp hosszúságú BamHI-HindiII fragmenst £- B-fragmens). A pJCAlOS (lő. fent) piazmidot üindlll-mai és EcoRI-gyei emésztve izoláltuk a (VQHB-FBV-l-gC kazettát tartalmazó) 1830 bp hosszúságú Hindi11-EcoRI fragmenst C-fragmens) . A puCAOOO (id. fent) piazmidot EeoRI-gyel és Xhol-gyel emésztve izoláltuk a (42K~FHV-~I-g.D kazettát tartalmazó) 1275 bp hosszúságú EccRI-XhoI fragmenst (~ D-fragmens) . Az A-, B~, C- és Dfragmenst a pC5L donorplazmidba ligáivá kaptuk a pJCAlOS piazmidot.
E2 a piazmid az AhVAC-vírus C6~lőkuszán tartalmazza a H6-FRV~l~gC~gén, az I3L-FHV~l-gB~gén és a ézK-FHV-l-gB-gén expresszi-ős kazettákat. A plazmád szerkezetét szekve™ Hálással és teljes restrikciós térképezéssel ellenőriztük.
φ χ X 0 0
♦ * ♦
Ez a plazmád szolgál donorpl.azmidként arra, hogy a H6FKV-l-gC-gén, az IFíL-EBV-l-gB-gén és a 42K-EBV~l~gD---gén expressriós kazettákat az ALVAC-vlrus C6-iőkuszára inszertálj uk.
A pJCA.109 plazma dót NotX-gyel linearizáltuk, majd Így használtuk az ALVAC-virus in vibro rekombinációjához (Picoíni és mtsaiMethods in Enzymology 153, 545-563 (1387;), aminek eredményeképpen a vCP243-nak nevezett rekombináns vírust kaptuk.
8. példa
Az adjuváns
A találmány szerinti oltóanyagokban alkalmazott karbomer a BF Goodrich cég által gyártott Carbopol® S74P (molekulatömege körülbelül 3 millió).
Először az alábbiak szerint egy törzsoldatot készítettünk: i g/i nátrium-kloridot tartalmazó desztillált vízben 1,5 vegyesszázalékban feloldottuk a Carbopol® 374P-t.
Ebből a törzs-oldatból kiindulva állítottunk elő fiziológiás sóoldatban a 4 mg/ml~e-s Carbopoi®-oldatot. A törzsoldatot egy lépésben, vagy több adagban beletőltjük a fiziológiás söoldatba (vagy annak nagy részébe), és a pH-t (például IN vagy töményebb) NaOH-dal minden alkalommal körülbelül 7,3-7,4-re állítjuk.
így kaptuk a használat kész CarbopoW-oldatot, amelyben azután a felhasználó rekonstítuá-lhatja a fagyasztva szárított rekombináns. oltóanyagot ♦ * χ·
V* .ί.
Lovak beoltása az I. típusú lő-herpeszvírúg (EHV-1) qC~ és gD-giikoprofceínjelt expresszálö vCP132 rekombináns kanáripox vektor (id. 6. példa) segítségévei
I, Immunizálási és fertőzési protokoll
Nemrégiben történt EHV-1 vagy EHV-4 fertőzés szexológiai jegyeit mutató 20 pönilovat {velszi hegyi póni) ötösével ‘véletlenszerűen négy csoportba osztottunk (A-B csoport) .
Az A- és a S-csoportban a lovakat az SHV--1 Xentncky-D törzséből -származó gB~, gC- és gD-glikoprote ineket expresszálö vCP132. rekombínáns kanáripoxszal oltottuk be. Az oltóanyagot steril vízben (A-csoport) vagy a 8. példa szerinti 4 mg/ml-es karbonétoldatban (B-csoport) rekonstiL Ud 1 <. A A C-csoportban a lovakat kereskedelmi forgalomban kapható inaktiv.ált teljes EHV~olfőanyaggal, 1,5 ml-es dózisban oltottuk be, amely inaktívált EHV-1 és EHV-4 valenciákat és 6 mg kardomért tartalmazott.
A D-csoport a kontrollcsoport, amelyben az állatokat az A/equí-l/Prága-56 influenzavírus HA-glíkoproteinjét expresszálö vGPiSOz rekombínáns kanáripoxszal (id. 3. példa) oltottuk be, és az oltóanyagot a B-csoportnál leírtakkal megegyezően karbomeroldatban rekonstituáltuk.
Az oltóanyagokat részletesen az I.
luk be,· táblázatban matat29
Λ « ν * ♦ ♦
«. ♦·> ** ábl at
j ekei óban 1 dózis oltóanyagot kapott, a 0. (D0) és a 35.
(D35) napon.
Az 56. napon (556; a lovakat intranazálís cseppentő segítségével lö°TCIí>50 dózisban az EHV-1 Abi/S~törzsévei fertőztük.
. 5 zérói égi al tesztek.
SN nsutralizáciés teszteket végeztünk a Thompson és latsai. (Equine Vet. 8, 58-65 (1976) ) által ismertetett eljárás szerint. Antigénként az EHV-1 vírust (.RACH) használ<, n k.
Az Sb~ ti. tere két az 5öé-os reutralizációhoz tartozó szérumhígitás reoiprokában (log10) fejeztük 'ki.
3. VIrolőglai vizsgálatok
A vírus expresszlóját 10 napon át naponta mértük nasofaríngeáiis tamponok segítségével, amelyeket vírnsátviν « * Φ * ί *
ΦΧ* *** X
| vő közegben c | ?yüj töttúr |
| natokát AKI 3 | nyúlvese- |
| mezeken. A t | íterek k; |
| alkalmaztuk, | és logK, |
| jeztük ki. |
4......Eredmények
Az oltások beadása után semmilyen szignifikáns lokális vagy szisztémás reakciót nem figyeltünk meg.
Az átlagos szeroneutralizáoiós SK~antítest válaszok (az 501-os neutralizációhoz tartozó hígítás 10-es alapú Ιο-
ί íkánsan nőtt az antitest!,iter.
A kontroll csoportba tartozó 5 ló mindegyike mutatott mazofaringeális vlrusexkrécíőt. Az oltatlan lovakban a víriisexkréciö átlagosan 5 napig tartott, és a vírusexkréciő a fertőzés után 4. napon érte el a maximumát.
Az A-, C- és D-osoportba tartozó lovakban a fertőzés után volt vírusexkréció. A találmány szerint beoltott lovaknál ~ a B-csoportban - azonban -az 5 állat közül csak kettőnél figyeltünk meg vírusexkréciót. A B-csoportfoan -ezen ♦ *
O J;
kívül a virusexkrécio szignifikánsan alacsonyabb mértékű volt, mint a többi csoportokban, esen belül a C-csoportban, sőt a virnsexkrécíó időtartama is sokkal rövidébe volt.
Megemlíthetjük az 1. ábrát és a megadott görbe alatti területértékeket, amelyek egyértelműén, jelzik, hogy, hogy a karfoomerben adott vCP132~vel oltott lovaknál látszólag nem jelentkezik vírusexkréoíó. Az eredmény erősen szignifikáns, különösen ha a kereskedelmi forgalomban kapható oltóanyaggal hasonlítjuk össze. A B-cseportban a kontrollal összehasonlítva Is szignifikánsan csökkent a vírusexkréciő, mig a C-csoportot és a kontrollcsoportot Összehasonlítva nem láthatunk szignifikáns különbséget. A virusexkréció tekintetében megfigyel nagy és váratlan különbség különösen előnyös, mivel kedvezően befolyásolja (korlátozza) a vírus átadását.
Az egyes csoportokban a lovakban mért vírus ősszmennyíségek (görbe alatti területek) a következőképpen alakultak :
A: 17,1
B: 3,0
C: 9, 7 .16, 3
0.0-1 * ♦** * ί *
000 *♦« **
Lovak beoltása karbomerrel kiegészített, az Influenza A/equz~2/Rewíarket~2/á3~vi rus HA-glíkoprofceiníét expresszálő VCP1S33 rekombináns kanáripox vektor <ld. 5. példa) se ‘ ‘ .fff.fmm, - - i.nriflfLpipj-.nrn(wlf»iirtíWffxrrrrrrrrfrffffrr fj-rrrrrrtfinnfKfífiyiT-irirrr^- γγ.*ιΓιΓιΓιΓιΓ jjL-rf>ti»wií»—»0i»i»imuinnrLr.TnArÍP.*inrLnnrLnnrninaiwinwwl»l»l»iMii u ιτιτιι u 4mrLrLivir/in nnniMmnnnoiiiwiir-'u-Lr.r.rLr -i.-.v
A* l^unlzáiási és fertőzési protokoll
A kísérletben 2Ö, H3NS- és H7N7-vírus elleni antitesttel kimutatható mennyiségben nem rendelkező (mérés: SRKval; egyetlen radiális hemolízis teszt) ?-8 hónapos ponilovat (velszi hegyi póni) használtunk. Az állatok negatív státusa lehetővé teszi, hogy a legkedvezőbb körülmények között vizsgáljuk a különböző oltóanyagok hatásosságát a humoráiís válasz tekintetében. A lovakat ötös-ével-hatosával véletlenszerűen í csoportba osztottuk (A-D csoport).
Az A-csoportban a lovakat as infiuenza-A/equi2 / Ne wa r k e t™2/9 3-ví rus HA- gli kaprokéin j ét expresssálö rekombínáns kán-ár ipox vektorral {vCPl.533} oltottuk be. Az oltóanyagot 4 mg/mi-~es karfcomert (Carbopol® 9748} tartalmazó oldatban rekonstítuáifuk.
A B-csopqrtban az állatokat egy kereskedelmi forgalomban kapható oltóanyaggal, 1,5 mi-es dózisban oltottuk be, amely 3 ínaktivált influenzatörzset - Prága-56,- Suf.f.olk-89 és Miami-63 tetanusztoxoidot, valamint adjuvánsként (4 mg) kardomért. és (2,2 mg) aiuminíum-hidroxídot tartalmaA C-csoportban a lovakat a C-oltóanyaggal oltottuk he, amely 2 ínaktivált intiuenzavaienciát - Prága-56 és > X ** (ί *·*· t * χ· χ χχχ β » * * χχ «*χ -ν*
Mewmarket-2/93 valamint tetanusztoxoidot és alumíniumhidroxidot tartalmazott.
A D-csoportban az állatokat a fenti vCP132 rekombináns kanáripox vektorral oltottuk be, amelyet 4 mg/ml karbemer 974P-t tartalmazó oldatban rekonstituáltunk. Ez volt a kontrollcsoport..
Az oltóanyagokat részletesen a II. táblázatban, mutatII. táblázat
Maaai-ő.3;
t e t a mi sz t οχ o i <á
zer/adjuváns Oözis (1 si rbopoW 974? I lO'-OXUöss -------------—-—-----------------...............,..
Carbopöi® | 15 iig HA ü& Al {OH} 3 j degyik törzs bői • oltóanyag vCPl.32
Zrága-56;
b'ewroax kér - 2./93 i ί
tetannsztoxoid i
SKV-1. gb, gC és gD CarfcopoW 974? 1 1ÖS'VTCIÖS
Minden állat 2, egyenként 1 ml-es dózist kapott 5 hetes időközzel, a nyakba adott mély intramuszkuiáris injekció formajában.
A második oltás után 2 héttel mindegyik állatot influenza-A/equí-2/Sussex“89 vírussal fertőztük. A fertőzés a kővetkezőképpen történt: az állatokat ULTRA 2800 sprékészülék (De vlllbiss, Somerset, PA) segítségével, lö',: *
* « * * -ί
ΕΠΜ: mennyiségű vírust tartalmasé körülbelül 20 ml aliantoiszfolyadékból nyert aeroszollal kezeltük íid. Mumford és mtsai., Equine Vet. J«. 22, 93-98 (1990}] .
· Sze.ro lógj a í teszt ek
Az állatoktól teljes vérmintát vettünk s 0. (az első oltás napján, a kezelés előtt), a 7., a. 14., a 35, (a második oltás napján, a kezelés előtt), a 49, (a fertőzés napján, a kezelés előtti, az 53. és a 63. napon.
Elkészítettük a szérumot, majd -20°C-ra lefagyasztva tartósítottuk és tároltak. A szérummin.tákban az InfluanzaA/equi-l/Prága-56 és az In.fluenza~A/equi'-2/Newmarket-2/93 elleni SEH-antitesfceket mértük [ld. Wood és mtsai., J, Hyg. 90, 371-384 (1983)],
A hemo11ziszéna átmérőjét egymással derékszöget bezáró két irányban mértük meg automata leolvasó segítségévei. Ezt követően kiszámítottuk a zónák területét és 50%—o-s növekedést tekintettünk szignifikánsnak. A litereket hemolízts mmf-b.en fejeztük ki.
3. Virológiái vizsgélatok
A vírusexkrécíőt lö napon át naponta mértük nazofaríngeálís tamponok segítségével, amelyeket vlrusátvívő közegben gyűjtöttünk össze. A tamponokból váladékából PBSben (pH 7,2) lö-sseres hígítási sort készítettünk és a hígításokból 0,1-0,1 ml~t 10 napos embriónált tojások allantoiszüregébe oltottunk. A tamponokból készült kivonatok vírus ti terét (EiD;i<j/nl} a tojások 34°C~on történő 72 órás inkubálása után allantóiszíolvadékban mért hemaggiutináió aktivitás alapján számoltuk ♦ ** *
*** χ
ΛΛΦ* »** csoportban sem /Newxra r ke t - 2 / 93
4»
Az első oltás beadása után semmilyen szignifikáns lokális vagy szisztémás reakciót nem figyeltünk meg, kivéve a B-csoportban egy állatnál,.
Meg keli említeni, hogy a Suffolk- és Newmarkst-törzs igen hasonló |Daly és mtsai,, J. Gén. Viroi,, 661-671 (1996)], amelynek alapján a kereskedelmi forgalomban kapható oltóanyaggal való összehasonlítás a kísérleti körülmények között tökéletesen érvényesnek tekinthető.
A vizsgálat kezdetekor egyik lóban sem volt kimutatható mennyiségű Influenza~A/egui~2/Newmarket~2/93 vagy Infiuenza-A/equí-l/Prága-Sö elleni SRH-antítest. Az első oltás után egy héttel kapott szexológiai eredmények azt mutatták, hogy egyik lő sem fertőződött korábban influenzával (nem figyeltünk meg erősítő hatást) .
Az első oltás után két héttel még egyik állatban sem tapasztaltunk Influsnza-A/equi-l/Prága-56 elleni antitést;váias2t, A C-oitóanyaggal kezeit 6 állat közül egyiknél sem, a B típusú kereskedelmi forgalomban, kapható oltóanyaggal kezelt 5 állat közül pedig 4-néi nem, és a kontroll D~ volt kimutatható Influenza-A/eqyíelleni SRH-antitest. A karbomer adjavánssal kiegészített kanáripoxszsl oltott 5 lónál azonban. nagyon magas SRH-antitest titereket mértünk: az átlag 155,4 ± 32,9 volt. Az egyes állatokban mért SRH-antitest titereket a III, táblázat mutatja.
Φ* Λ φ > φ X Φ φ.
λ,. \«·
ΙΠ. táblázat
REKMARRET uó- I Csoport I PRAGA (DG,· D?, Dl45
| f! | «·η χ | ||
| ί Αίγνΐ | iúij J. |
A találmány szer serxnr
Inti oltóanyag hatására az első oltá;
után 14 nappal magas antitesttitsr mérhető, a B~ és a C~ oltóanyag esetében azonban az első oltás hatására ennyi idő alatt nem jelenik meg kimutatható mennyiségű antitest. Az antitestek ilyen korán éa ilyen magas tlterben való megjelenése olyan jelentős és váratlan eredmény, amelyet korábban .sosem figyeltek meg.
XX „ példa
Lovak beoltása karbomerrel kiégésa:itett, ar XnfXuenzaii-l/Prága- 5 δ-vírus HA-glrí
VCP1502 rekombináns kanáripox vektor (Id. 3. példa} segít
Az I. példában alkalmazott, vCP15ő2~veI beoltott kon.t~ rollokát szerológiai vizsgálatoknak is alávetettük.
A 10* pfn vC?1502-t és Carbopol® 974P-t tartalmazó oltóanyaggal a ö. (1. injekció, 71} , és a 35. napon <2. injekció, 72} immunizált állatokban IHA-fcitereket (IüA ~ inhibítion of haemaggiutinatíon; hemagglütináciégátlás} a
IV. táblázat mutatja.
** >
Mint az előző példában, itt is megfigyeltük, hogy az (A/equi-1/Prága vírus Ha-génjét expresszálő) kanáripox-EIV, ha karbonért adunk hozzá, nagyon magas specifikus IHAtitereket Indukál, amelyek az oltás után már 14 nappal jelentkeznek. Sőt, az eleve magas litereket az emlékeztető oltás szignifikánsan tovább fokozta és olyan magas átlagos tétért mértünk, amelyet az EIV H7N7 vírus KA-génje esetében korábban soha nem figyeltek meg olyan, lovaknál, amelyek előzőleg na stimuláltak.
12. Alkalmazás macskákban
A vizsgált rekombináns vírus egy olyan rekombináns kanáripoxvírus, amely a. macska-herpeszvírus ÍFHV; gB-, gCés gD-génjéfc expresszálja. A vírus neve VCP243 (Id. a 7. példában),
Az FHV-modell esetében az oltási és fertőzési kísérletek az alábbiak szerint történtek.
j Csoport |;A macskák szá- ; Oltóanyag
VCPZ43
CORIFEriN®
VCF243
Oldós z-e r / adj uván s j nos i s viz pia
Carbopol® 9743?
keresk«d«ljai oozís
A macskákat a es a xapon szubkután úton olto «-Λ··»· *V'v
A CORIEELIN® oltóanyag egy alegység-FHV oltóanyag, amelyet a Máriái (Lyon, Franciaország}' forgalmaz. .Legalább 200 1D.R egység FHV-vírusfrakciőt, 25 pg tisztított macskacalicivirus-antigént, 0,1 mg tiomerzálfc és 1 ml -QS olajos kötőanyagot tartalmaz.
A fertőzést a. 49, napon végeztük, egy fertőző- FHVtörzssel, orona-zális úton.
A klinikai vizsgálatokat a fertőzés után 14 nappal végeztük, amelynek során rögzítettük a klinikai tüneteket (az European Pharmacopoeia szerint).
A fertőzés után a védelmet az alábbi kritériumok alapján- értékeltük:
···· az egyes csoportok átlagos klinikai pontszáma, egymással és a kontroll csoport átlagos klinikai pontszámával összehasonlítva
- az FHV-virusoxkréció szintje a fertőzés után (a fertőzés után a 0.-tól a 10. napig naponta mérjük a faringeálís tamponokban összegyűlő vírusokat)
- FBV-neatraiizáló antitest títer a D0, D28, .04 9 és D63- napokon levett vérmintákban
Az említett kritériumokra minden egyes csoport átlagos szintjeit össze keli hasonlítani egymással és a kontroll csoport átlagos szintjével..
13. Alkalmazás
A vizsgált rekombináns vírus egy olyan rekombináns kanáripoxvírus, amely a Carré-féie kór vírusának {kutyaszopornyicavírus, CDV) HA- és F-génjét expresszálja. A vírus neve vCP2SS 11-d. a 2. példában) .
»
A CDV-modell esetében az oltási és fertőzési kíserle;ek az alábbiak szerint történtek.
vcpzss
I s-??.xc,ui®
A kutyák s-s-ástsa Oltóanyag- S OlSószer/atíjuváns
i) Ő ZÍ S ví:
107-° pfu | vCP258 I Carbopol'® '9743? i 10;,G pft.
( 1 kereskedőim t dózis
A kutyákat a 0. és a 28. napon szubkutén úton oltottuk
Az EU.RICAW oltóanyag egy élő oltóanyag# amelyet íérial (Lyon, Franciaország) lósis legalább 10« pfu. CDV i :artalmaz.
| örgalmas. | Egy kereskedelmi |
| lerstepoort | -oltóanyagtörzset |
| égéztűk, a | fér t őz ő ”Synde r- |
| : (a tör2so | Idatot készítette |
| a z US PA ) | , intrakraniáiis |
| a. fertő zé | s után 21 nappal |
| -.ettük a k. | línikai tüneteket |
| .nt) . | |
| az alábbi | kritériumok alap- |
(az European Pharmaoopoe-ia szerint) .
A fertőzés után a vedel® ián értékeltük:
~ az egyes csoportok átlagos klinikai pontszáma, egymással és á kontroll csoport átlagos klinikai pontszámával
Összehasonlítva ·♦·»»'«·
- a CBV-virémia szintje a fertőzés után (a DS6, D61, D63, DS6, D7Q és ü77 napokon mérjük a limfociták összvlrustarPálmát)
- CBV-neutralízáló antitest títer a DG, D14, D2Ö, D42, D56, D63 és D77 napokon
Az említett kritériumokra minden egyes csoport átlagos szintjeit Össze keli hasonlítani egymással és a kontroll csoport átlagos szintjével.
Claims (60)
1. Oltóanyag., áradj' (i) legalább egy, influenzavírus- vagy állati herpeszvírusantígént kódoló, heteroióg nukleotidszekvenciát hordozó és azt in vivő expresszáló vírusvektort, valamint (ii) adjuváns végyüieteí tartalmaz, amely adjuváns vegyület akriísav- vagy metakrllsav-polímert tartalmaz vagy maleinanhidrid és alkenilszármazék kopolimerét tartalmazza,
2. Az 1, igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az.adjuváns vegyület akrilsavvagy metakrilsav-poliraert tartalmaz cukor vagy poliaikohol polidkenil éterével keresztkötve,
3. A 2, igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a polimer allíl-szaharőzzal vagy al Is I - pentaeritri tollal kereszt kot ott.
4. Az 1. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az adjuváns vegyület maleinanhidrid és etilén lineáris vagy keresztkötött kopolimerét tartalmazza.
5. A 4. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az kopolimer maleinanhidrid és etilén kopolimere, amely divinil-éterrel keresztkötött.
6. Az 1, igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az adjuváns karhoraert tartalmaz.
7. Az 1-6, igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben az oltóanyagban lévő adjuváns koncentrációja. 0,01-2 vegyes%.
8. A 7. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az adjuváns koncentrációja 0,06-1 vegyes%„
9. A 8. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben az adjuváns koncentrációja 0,10,6 vegyés%,
10. Az 1-9, igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a vírusvektor legalább egy ióinrluenzavírns-antlgént, madárinfíuenzavírus-antigént vagy sertésInfíuenzavirus-antigéni hordoz és expresszál in vi vő,
11. Az 1-9., igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a v.írusvektor legalább egy lóherpeszvírns-antigént {EtíV-antigéní} kódoló nukleotidszekvenciát hordoz és expresszál in Ww.
12. A 11. igénypont szerinti vakcina, amelyben a vírusvektor in vivő EHV-Íantigént kódoló vagy irHV-4-antigém kódoló nukleotidszekvenciát vagy EHV-1- 43 antigént és EBV-4-anrigént kódoló nukleoíidszekvextciát vagy nukieoüdszekveaciákat hordoz és expresszái«? vívó.
13. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a vírosvekíor macskaherpeszvirusból, kotyaherpeszvírnsbök madárherpeszvírushól, lETV-ből vagy Marek-féte betegség vírusából, szarvasmarna-herpeszvirusból vagy sertésherpeszvírusból származó antigént kódoló nukleotidszekveneiát hordoz és expresszái ifi vivő.
14. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a virusvektor ínfínenzaantigánt vagy töherpeszvírns-antigént kódoló nukieotidszekvonoiát hordoz és expresszái in vivő, I© beoltására.
15. A 14. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a virusvektor EHV-1-antigént kódoló nukleotidsxekveneiái, EHV-4-antígént kódoló nukleotldszekveneiát vagy EHV1-antigént és EHV-4-antigént kódoló nukieotidszekveneiát vagy nukleotidszekvencíákat hordoz és expresszái m v/vo.
ló. A 14. igénypont szerinti vakcina, amelyben a virusvektor lőtnfíuenzavírusantigént kódoló nukieotidszekveneiát hordoz és expresszái in vivő.
17. Az Hl 6. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a vírusvektor poxvirus-, adenoyúus- vagy herpeszvirus-vektor.
Í8. A 17. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a pox vírus vakeiniavírus.
19. A IS. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a vakeiniavírus NYVAC.
20. A 17. Igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a pox vírus baromripox vírus.
21. A 17. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a poxvírus kanáripoxvirus.
77, A 21. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a kanáripoxvirus ALVAC.
23. A 17. igénypont szerinti: oltóanyag, amelyben a poxvírus gslanibpoxvirus.
24, A 1.7. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a poxvírus sertéspoxvirus.
25. A 21. vagy 22, igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a kanáripox EHV-1 és/vagy EHV-4 gB-, gC- és gl>-génieit expresszálja.
26, A 19. igénypont szerinti oltóanyag, amelyben a NYVAC EHV-1 és/vagy EHV-4 gB-, gC- és gö-gémeit expresszália..
.
27. Az i -9. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amely két vagy károm, rekombináns kanári pox vírust tartalmaz, amelyek mindegyike - különböző lóiníinenzatorzsből származó - lóiníluenza-HÁ-t kódoló nukieotidszekveneiát tartalmaz és expresszái in vívó.
? J*.
«*♦ ♦„ » Ίη
28. Áz 1-9. igénypontok bármelyike szeriiái oltóanyag, amely rekombináns kanári pox vírust -tartalmaz, amely különböző lóínfíueza vírus törzsekből származó, két vagy bárom lőiofínenza-HA-t kódoló rmkleotídszekvenciát tartalmaz és expresszál m vi ró,
29. A. 27-28. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a lóinfluenza-törzs Prága-, Kemueky- és/vagy 'Newmarket-törzs,
3-0. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag, amelyben a. vírusvektor influenza-antigént kódoló rmkieoddsxekvencíát tartalmaz és expresszál ín vivő, madár beoltására.
31. Akril- vagy meíakríi sav-polimer, vagy raaleinanhidrid és alkenflszá-rmazék alkotta kopollmer, valamint legalább egy influenzavírus- vagy állati berpeszvlmsantigént kódoló nukleotidszekveneiát tartalmazó és azt in vrvo expresszáló rekombinánsvírnsvektor alkalmazása, állat részére az influenzavírus vagy az állati herpeszvírus által okozott betegség elleni védelem biztosítására szolgáló adja vált oltóanyag előállítására.
32. öltőanyagkészleí 1-9. igénypontok bármelyike szerinti oltóanyag előállítására, amely (i) fagyasztva szárított fo-nnában, legalább egy influenzavírus- vagy állati herpeszvrrus-aotigént kódoló nukleotidszekverreiát tartalmazó és in vivő expresszáló rekombináns virosvektort, valamim tii) legalább egy. akrilsav- vagy metakrilsavpoflmert vagy malemanhidrid és aíkeoilszármazék alkotta kopolimeri tartalmazó adjuvánst tartalmaz, ahol (i) és (ti) külön, és használat. előtti összekeverésre alkalmas formában csomagolt.
33. A 32. igénypont szerinti oltóanyagkésztet, amelyben az adjuváns karbomert tartalmaz.
34. A 32, vagy 33. igénypont szerinti oltóanyagkészlet, amelyben a vírusvektor lóiníluenzavims-antigént, madármfluenzavíras-amigéní vagy sertésinflnenzavírusantigéní kódoló nnkleoiidszekvenciát tartalmaz és expresszál in vivő,
35. A 32. vagy 33. igénypont szerinti oltóanyagkészleí, amelyben a vírus-vektor legalább egy lóherpeszviras-antigént (EHV-amigér·) kódoló nnkleotkíszekenciát tartalmaz és expresszál in vivő.
36. A 35. igénypont szerinti oltóanyagkészleí. amelyben a vírusvektor EHV-Iamigént, bklV-4-antigént vagy EHV-l-antigént és EHV-4-andgém kódoló nukfeotidszekvenciát tartalmaz és expresszál m r/vn.
*♦ * * * *
37. A 32-36. igénypontok bármelyike szerinti oltoanyagkésziet, amelyben a vírusvektor poxvírus, adenovims vagy herpeszvírus.
38. A 37. igénypont szerinti oltóanyagkészlet, amelyben a poxvírus vakeíniavíras.
39. A 38. igénypont szerinti oltóanyagkészlet, amelyben a vakcíniavírus AYVAC.
40. A 37. igénypont szerinti oltóanyagkészlet, amelyben a poxvírus baromfípoxvírus.
41. A 37. igénypont szerinti oltoanyagkésziet, amelyben a poxvírus kanáripoxvírus',
42. A 3ri igénypont szerinti olióanyagkésxiet, amely ben a kanári poxvírus ALVAC,
43. A 37. igénypont szerinti oltéanyagkésxlet, amelyben a poxvírus galambpoxvírus.
44. A 37. igénypont szerinti oltóanyagkészlet, amelyben a poxvírus sertéspoxvírus.
43. A 31. vagy 32. igénypont szerinti oltoanyagkésziet, amelyben a vírusvektor kanáripoxvrms, amely EHV-Ί és/vagy EHV-4 gB-, gC- és gD-génjeit expressxália.
46. A 39 igénypont szerinti, olióanyagkésxiet, amelyben a vírusvektor NYVAC, amely EHV-Í és/vagy E11V-4 gR~, gC- és gD-génjeít expresszálja
47. A 41. vagy 42. igénypont szerinti oltoanyagkésziet, amely két vagy bárom rekombináns kanári poxv írást tartalmaz, amelyek mindegyike - különböző lóinfluenzavírus-törzsböl származó - lóinfluenza HÁ-t kódoló nukleotidszekvenciát tartalmaz és expresszál öt vívó.
48. A 41.. vagy 42. igénypont szerinti oltóanyagkészlet, amely kanári poxvírnst tartalmaz, amely különböző lómfktenzavírus törzsek két vagy hamm lóinfluenza HA-ií kódoló nukleotidszekveneiát tartalmaz és expresszál ín vívó.
49. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott akriisav- vagy metakrilsav-polimer vagy makmaníódrid és alkenílszánoaxék által alkotott kopoümer, valamint állati herpeszvírus amigént kódoló nukleotidszekvenciát tartalmazó és azt /» vivn expresszáló rekőmbmáns vírusvektor alkalmazása adjuvánst tartalmazó, állatnak az adott berpeszvírus által okozott fertőzéssel szembeni védelmére szolgáló oltóanyag előállítására.
* t** Wy * φ / <<·*<.
50. A 49. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a nukleotidszekvencia EHV-i és/vagy EHV-4 lóherpeszvirosbóí származó antigént ködöt adiuvánssal ellátott, lónak a fenti betpeszvírus által okozott' betegséggel szembeni védelmére szolgáló oltóanyag,
51. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott, akrilsav- vagy metakrilsav polimer vagy maleinanhidrid es afkenilszánnazék által alkotott kopolimer, valamint iníloenzaviras antigént kódoló nukieotidszekvenciát tartalmazó es őr vivő expresszálö rekombináns vírusvektor alkalmazása adjovánst. tartalmazó, állat influenzával szembeni védelmére szolgáló oltóanyag előállítására.
52. Az 51. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a nukleotidszekvencia lóinfluenzavinss-anbgént kódok sdjuváost tartalmazó, lónak lóinfiuenzával szembeni védelmére szolgáló oltóanyag előállítására.
53. Az 1 -9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott akrilsav vagy métákrilsav polimer vagy maleinanhidrid és a 1 kend származék által alkotott kopolimer, továbbá lóherpeszvírusantigént kódoló nukieotidszekvenciát tartalmazó és ?« vivő expresszálö rekombináns vírusvektor alkalmazása, adjnvánst tartalmazó, lóban lóherpeszvímsexkréeió jelentős csökkenését kiváltani szolgáló oltóanyag előállítására.
54. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott, akrilsav vagy metakrilsav polimer vagy maleinanhidrid és. alkenilszárrnazék kopeiimere, valarmnt inílisenzavitusantigént kódoló nukieotidszekvenciát tartalmazó és m vivő expresszálörekombináns vírusvektor alkalmazása adjnvánst tartalmazó, lóban Influenzavírusexkréáó jelentős csökkenésének kiváltására szolgáló oltóanyag előállítására.
55. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott, akrilsav vagy metakrilsav polimer vagy maleinanhidrid és alkeniíszármaxék kopolimere, valamint influenzavírusaorigeni kódoló nukleotídszekveodát tartalmazó és in v/vo expresszálö rekombináns vírusvektor alkalmazása adjnvánst tartalmazó, lóban ínfluenzavírussl szembeni antitestek korai, termelődésének kiváltására szolgáló oltóanyag előállítására.
'
56·. Az 55. igénypont szerinti alkalmazás, ahol az rmtitest termelődése már egyszeri beadás mán megfigyelhető.
57, Az 1-9. igénypontok bármelyike szerint meghatározott, akrilsav vagy metakriisav polimer vagy maleinanhidrid és alkenilszárrnazék kopolimere, valamint infiuenzavírusautigént kódoló nukieotidszekvenciát tartalmazó és ín vívó expresszálö rekombináns vírusvektor alkalmazása adjuvánst tartalmazó, madárnak, madárinfluenzával szembeni védelmére szolgáló szolgáló oltóanyag előállítására.
58 A 49-57. Igénypontok bármelyike szerint alkalmazás, ahol az adjuváns kardomért tartalmaz.
59. A 49-58. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, ahol a vírnsvektor poxvúust tartalmaz,
60. Az 59. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a poxvfrus az alábbiak bármelyike: vakeímavlrus, baromfipoxvirns, fcanáripoxvirus, gaiambpoxvirns és/vagy sertéspoxvírns.
61. Áz 52.., 54., 55. vagy 56. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vfrusvektor influenzavírus-HA-t kódoló nnkleotidszekvenriáí tartalmazó rekombináns kanári pox.
62. A 61, igénypont szerinti alkalmazás, amely két vagy három rekombináns kanári poxvíras együttes alkalmazása, és ezek mindegyike - különböző iómíluenzatorzsekből származó ~ löínílusnxa-HA-l kódoló nukleotidszekvenclát tartalmaz és expresszál In v/vo,
63. A 61. igénypont szerinti alkalmazás, amely - lóinrtnenzavíras különböző törzseiből származó ~ két vagy három lölnfluenza-HA-t kódoló nukleotídszekveneiát tartalmazó és b< vivő expresszáló kanári pox vírus alkalmazása.
64. A 62. vagy 63. Igénypont szerinti alkalmazás, ahol a ióinűuenzavírus törzs az alábbiak bármelyike; Prága-, Keniueky- és/vagy Newmarket-törzs.
65. Az 50. vagy 52. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a vírasvektor EHV-Ieredetü és/vagy BHV-4~eredetö gB~t, gC-t és gD-t expresszáló rekombináns kanáripoxvirns.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9802800A FR2775601B1 (fr) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Vaccins vivants recombines et adjuves |
| PCT/FR1999/000453 WO1999044633A1 (fr) | 1998-03-03 | 1999-03-01 | Vaccins vivants recombines et adjuves |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0101207A2 HUP0101207A2 (hu) | 2001-08-28 |
| HUP0101207A3 HUP0101207A3 (en) | 2003-10-28 |
| HU228431B1 true HU228431B1 (en) | 2013-03-28 |
Family
ID=9523775
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0101207A HU228431B1 (en) | 1998-03-03 | 1999-03-01 | Live recombined vaccines with adjuvant |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6713068B1 (hu) |
| EP (1) | EP1058558B1 (hu) |
| JP (1) | JP2002505300A (hu) |
| KR (1) | KR20010041507A (hu) |
| CN (2) | CN1846786A (hu) |
| AR (1) | AR018135A1 (hu) |
| AT (1) | ATE287728T1 (hu) |
| AU (1) | AU762479B2 (hu) |
| BR (1) | BR9908496A (hu) |
| CA (1) | CA2321903C (hu) |
| DE (1) | DE69923434T2 (hu) |
| DK (1) | DK1058558T3 (hu) |
| ES (1) | ES2237931T3 (hu) |
| FR (1) | FR2775601B1 (hu) |
| HU (1) | HU228431B1 (hu) |
| IL (1) | IL137872A0 (hu) |
| NZ (1) | NZ506370A (hu) |
| PL (1) | PL197405B1 (hu) |
| PT (1) | PT1058558E (hu) |
| TW (1) | TW592700B (hu) |
| WO (1) | WO1999044633A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA991662B (hu) |
Families Citing this family (69)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6551598B2 (en) | 2000-01-21 | 2003-04-22 | Merial | Vaccination against canine herpesvirosis and vaccines therefor |
| FR2804026B1 (fr) * | 2000-01-21 | 2004-06-11 | Merial Sas | Vaccination contre l'herpesvirose canine et vaccins |
| US20150231227A1 (en) * | 2000-03-02 | 2015-08-20 | Emory University | Compositions and methods for generating an immune response |
| US20040105871A1 (en) * | 2000-03-02 | 2004-06-03 | Robinson Harriet L. | Compositions and methods for generating an immune response |
| AU2001256582A1 (en) * | 2000-05-24 | 2001-12-03 | Merial | Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (prrsv) recombinant avipoxvirus vaccine |
| US7627145B2 (en) * | 2000-09-06 | 2009-12-01 | Hitachi, Ltd. | Personal identification device and method |
| MY129765A (en) * | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
| US20040037848A1 (en) * | 2001-04-06 | 2004-02-26 | Audonnet Jean-Christophe Francis | Recombinant vaccine against West Nile Virus |
| US7740863B2 (en) * | 2001-04-06 | 2010-06-22 | Merial | Recombinant vaccine against West Nile Virus |
| ZA200700457B (en) * | 2004-06-15 | 2008-08-27 | New York Blood Ct Inc | Adjuvancy and immune potentiating properties of natural products of onchocerca volvulus |
| US7959929B2 (en) | 2005-04-21 | 2011-06-14 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
| US11865172B2 (en) | 2005-04-21 | 2024-01-09 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Materials and methods for respiratory disease control in canines |
| US20070178115A1 (en) | 2005-08-15 | 2007-08-02 | Tang De-Chu C | Immunization of avians by administration of non-replicating vectored vaccines |
| US7425336B2 (en) * | 2005-08-25 | 2008-09-16 | Mevial Limited | Canine influenza vaccines |
| US20080241184A1 (en) | 2005-08-25 | 2008-10-02 | Jules Maarten Minke | Canine influenza vaccines |
| US7682619B2 (en) | 2006-04-06 | 2010-03-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Canine influenza virus |
| US8097419B2 (en) | 2006-09-12 | 2012-01-17 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Compositions and method for rapid, real-time detection of influenza A virus (H1N1) swine 2009 |
| US9481912B2 (en) | 2006-09-12 | 2016-11-01 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences in biological samples |
| US8652782B2 (en) | 2006-09-12 | 2014-02-18 | Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting, identifying and quantitating mycobacterial-specific nucleic acids |
| US8080645B2 (en) | 2007-10-01 | 2011-12-20 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological specimen collection/transport compositions and methods |
| US20090181078A1 (en) * | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| LT2484375T (lt) | 2006-09-26 | 2018-07-10 | Infectious Disease Research Institute | Vakcinos kompozicija, turinti sintetinio adjuvanto |
| UA100370C2 (uk) | 2006-12-11 | 2012-12-25 | Мериал Лимитед | Спосіб вакцинації птахів проти salmonella |
| TW200907058A (en) * | 2007-05-30 | 2009-02-16 | Wyeth Corp | Raccoon poxvirus expressing rabies glycoproteins |
| CL2008001806A1 (es) * | 2007-06-20 | 2008-09-05 | Wyeth Corp | Composicion de vacuna en emulsion agua en aceite que comprende un antigeno y un adyuvante en la fase acuosa; y metodo de elaboracion. |
| US9683256B2 (en) | 2007-10-01 | 2017-06-20 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Biological specimen collection and transport system |
| US11041215B2 (en) | 2007-08-24 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | PCR ready compositions and methods for detecting and identifying nucleic acid sequences |
| AU2008293504B2 (en) | 2007-08-27 | 2012-04-12 | Longhorn Vaccines & Diagnostics, Llc | Immunogenic compositions and methods |
| US10004799B2 (en) | 2007-08-27 | 2018-06-26 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Composite antigenic sequences and vaccines |
| US11041216B2 (en) | 2007-10-01 | 2021-06-22 | Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc | Compositions and methods for detecting and quantifying nucleic acid sequences in blood samples |
| DK2535428T3 (en) | 2007-10-01 | 2015-11-23 | Longhorn Vaccines & Diagnostics Llc | Biological prøvesamlings- and transport system, and methods of using |
| GB0805356D0 (en) * | 2008-03-25 | 2008-04-30 | Isis Innovation | Vaccine adjuvant composition |
| MX2010012069A (es) | 2008-05-08 | 2010-12-14 | Merial Ltd | Vacuna de la leishmaniasis con el uso del inmunogeno salival de la mosca de la arena. |
| US8168200B2 (en) * | 2008-10-24 | 2012-05-01 | Merial Limited | Vaccine against african horse sickness virus |
| BRPI1011072B1 (pt) | 2009-06-05 | 2021-09-28 | Infectious Disease Research Institute | Composto de gla, composições de vacina e farmacêutica compreendendo dito composto, bem como uso dos mesmos para estimular, induzir ou acentuar uma resposta imune em um indivíduo |
| US20130197612A1 (en) * | 2010-02-26 | 2013-08-01 | Jack W. Lasersohn | Electromagnetic Radiation Therapy |
| MX350795B (es) | 2011-04-08 | 2017-09-19 | Inmune Design Corp | Composiciones inmunogenicas y metodos para utilizar las composiciones para inducir respuestas inmunes humorales y celulares. |
| LT2734230T (lt) | 2011-07-20 | 2019-03-25 | Merial Limited | Rekombinantinė kačių leikemijos viruso vakcina, turinti optimizuotą kačių leukemijos viruso apvalkalo geną |
| CA2844927C (en) | 2011-08-12 | 2017-10-31 | Merial Limited | Vacuum-assisted preservation of biological products, in particular of vaccines |
| CN104203272A (zh) | 2012-01-26 | 2014-12-10 | 长角牛疫苗和诊断有限责任公司 | 复合抗原序列及疫苗 |
| ES2729967T3 (es) | 2012-02-07 | 2019-11-07 | Infectious Disease Res Inst | Formulaciones de adyuvante mejoradas que comprenden agonistas de TLR4 y métodos para usar las mismas |
| US9567606B2 (en) | 2012-02-14 | 2017-02-14 | Merial Inc. | Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and OX40 proteins, and vaccines made therefrom |
| WO2013142371A1 (en) | 2012-03-20 | 2013-09-26 | Merial Limited | Recombinant equine herpesvirus-1 vaccine containing mutated glycoprotein c and uses thereof |
| PL2850431T3 (pl) | 2012-05-16 | 2018-09-28 | Immune Design Corp. | Szczepionki przeciwko HSV-2 |
| CA2883296A1 (en) | 2012-08-30 | 2014-03-06 | Merial, Inc. | Hyperbaric device and methods for producing inactivated vaccines and for refolding/solubilizing recombinant proteins |
| BR112015025709A2 (pt) | 2013-04-18 | 2017-07-18 | Immune Design Corp | monoterapia com gla para uso em tratamento de câncer |
| US9463198B2 (en) | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| WO2015077717A1 (en) | 2013-11-25 | 2015-05-28 | The Broad Institute Inc. | Compositions and methods for diagnosing, evaluating and treating cancer by means of the dna methylation status |
| US11725237B2 (en) | 2013-12-05 | 2023-08-15 | The Broad Institute Inc. | Polymorphic gene typing and somatic change detection using sequencing data |
| WO2015095811A2 (en) | 2013-12-20 | 2015-06-25 | The Board Institute Inc. | Combination therapy with neoantigen vaccine |
| CA2948845C (en) | 2014-05-14 | 2022-05-31 | Merial, Inc. | Methods for freeze-drying and rehydrating biologics |
| WO2016100975A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Massachsetts Institute Ot Technology | Molecular biomarkers for cancer immunotherapy |
| EP3757211A1 (en) | 2014-12-19 | 2020-12-30 | The Broad Institute, Inc. | Methods for profiling the t-cell-receptor repertoire |
| CA2985652C (en) | 2015-05-14 | 2020-03-10 | Gerald W. FISHER | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples |
| CA2986235A1 (en) | 2015-05-20 | 2016-11-24 | The Broad Institute, Inc. | Shared neoantigens |
| US10442607B2 (en) | 2015-07-31 | 2019-10-15 | Philip Morris Products S.A. | Creased blank for forming a container with round or beveled corners |
| US20190346442A1 (en) | 2016-04-18 | 2019-11-14 | The Broad Institute, Inc. | Improved hla epitope prediction |
| EP4112638A1 (en) | 2016-05-16 | 2023-01-04 | Access to Advanced Health Institute | Formulation containing tlr agonist and methods of use |
| EP3463300A1 (en) | 2016-06-01 | 2019-04-10 | Infectious Disease Research Institute | Nanoalum particles containing a sizing agent |
| CN109475615B (zh) | 2016-06-17 | 2023-04-07 | 勃林格殷格翰动物保健美国公司 | 包含直链或支链聚丙烯酸聚合物佐剂的新免疫原性制剂 |
| WO2018140391A1 (en) | 2017-01-24 | 2018-08-02 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for detecting a mutant variant of a polynucleotide |
| WO2019051149A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-14 | Infectious Disease Research Institute | LIPOSOMAL FORMULATIONS COMPRISING SAPONIN AND METHODS OF USE |
| WO2020072700A1 (en) | 2018-10-02 | 2020-04-09 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Hla single allele lines |
| US20220062394A1 (en) | 2018-12-17 | 2022-03-03 | The Broad Institute, Inc. | Methods for identifying neoantigens |
| CN110846284B (zh) * | 2019-11-07 | 2020-12-29 | 衡阳师范学院 | 一种犬细小病毒CPV-HuN1703株及其应用 |
| CN111500633B (zh) * | 2020-04-07 | 2022-09-16 | 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 | 基于基因编辑技术的重组金丝雀痘病毒构建方法 |
| KR20230029673A (ko) | 2020-05-26 | 2023-03-03 | 디오니스 테라퓨틱스, 아이엔씨. | 핵산 인공 미니-프로테옴 라이브러리 |
| CN113308441B (zh) * | 2021-06-02 | 2022-05-10 | 华中农业大学 | 一株猫疱疹病毒i型病毒株及其应用 |
| WO2023076733A1 (en) | 2021-11-01 | 2023-05-04 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Biologically selected nucleic acid artificial mini-proteome libraries |
Family Cites Families (27)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3790665A (en) | 1968-02-23 | 1974-02-05 | Haver Lockhart Labor Inc | Injectable adjuvant,method of preparing same and compositions including such adjuvant |
| US3651213A (en) | 1969-05-29 | 1972-03-21 | Monsanto Co | Method for the immunization of a living animal body against viral disease |
| US3919411A (en) | 1972-01-31 | 1975-11-11 | Bayvet Corp | Injectable adjuvant and compositions including such adjuvant |
| US3869546A (en) * | 1972-12-22 | 1975-03-04 | Cutter Lab | Adjuvant compositions and medicinal mixtures comprising them |
| US3920811A (en) * | 1972-12-22 | 1975-11-18 | Cutter Lab | Adjuvant compositions |
| US4309413A (en) | 1979-01-22 | 1982-01-05 | Monsanto Company | Method of producing immune response by administering polymeric composition |
| US4567042A (en) | 1983-06-15 | 1986-01-28 | American Home Products Corporation | Inactivated canine coronavirus vaccine |
| US4920213A (en) * | 1985-06-20 | 1990-04-24 | Biotechnology Research Partners, Ltd. | Method and compositions useful in preventing equine influenza |
| JPS62201575A (ja) * | 1986-02-27 | 1987-09-05 | Shionogi & Co Ltd | 家禽用インフルエンザ生ワクチン |
| US5731188A (en) * | 1986-11-20 | 1998-03-24 | Syntro Corporation | Recombinant equine herpesviruses |
| ZA881694B (en) * | 1987-03-17 | 1988-09-06 | Akzo N.V. | Adjuvant mixture |
| US5843456A (en) * | 1991-03-07 | 1998-12-01 | Virogenetics Corporation | Alvac poxvirus-rabies compositions and combination compositions and uses |
| EP0532833A1 (en) * | 1991-05-28 | 1993-03-24 | Miles Inc. | Vaccine for equine rhinopneumonitis |
| EP0615453B1 (en) * | 1991-11-29 | 1997-05-14 | Chiron Viagene, Inc. | Anti-cancer immunotherapeutic vector constructs |
| FR2700957B1 (fr) * | 1993-01-29 | 1995-03-03 | Seppic Sa | Composition de vaccin sous-unitaire recombinant vivant et procédé de préparation. |
| CA2158040A1 (en) | 1993-03-11 | 1994-09-15 | Jacqueline D. Duncan | Polymeric mucoadhesives in the delivery of immunogens at mucosal surfaces |
| JPH07170982A (ja) * | 1993-09-09 | 1995-07-11 | Nisshin Oil Mills Ltd:The | ワクチンおよびその製造方法 |
| BR9507717A (pt) | 1994-05-10 | 1997-09-23 | American Home Prod | Vacina brsv viva modificada aperfeiçoada |
| US5820869A (en) * | 1995-06-07 | 1998-10-13 | American Home Products Corporation | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection |
| US5849303A (en) | 1995-06-07 | 1998-12-15 | American Home Products Corporation | Recombinant feline Immunodeficiency virus subunit vaccines employing baculoviral-expressed envelope glycoproteins derived from isolate NCSU-1 and their use against feline immunodeficiency virus infection |
| US6300118B1 (en) | 1995-06-07 | 2001-10-09 | American Home Products Corporation | Plasmids comprising a genetically altered feline immunodeficiency virus genome |
| ZA97452B (en) * | 1996-01-25 | 1997-08-15 | Trinity College Dublin | Streptococcus equi vaccine. |
| DE19612967A1 (de) * | 1996-04-01 | 1997-10-02 | Behringwerke Ag | Verfahren zur Vermehrung von Influenzaviren in Zellkultur, sowie die durch das Verfahren erhältlichen Influenzaviren |
| FR2750865B1 (fr) * | 1996-06-27 | 1998-12-04 | Rhone Merieux | Vaccin vivant recombinant a base d'herpesvirus canin, notamment contre la maladie de carre, la rage ou le virus parainfluenza de type 2 |
| FR2751226B1 (fr) * | 1996-07-19 | 1998-11-27 | Rhone Merieux | Formule de vaccin polynucleotidique contre les pathologies du cheval |
| US6004777A (en) * | 1997-03-12 | 1999-12-21 | Virogenetics Corporation | Vectors having enhanced expression, and methods of making and uses thereof |
| US6044777A (en) * | 1998-02-09 | 2000-04-04 | Walsh; Michael J. | Composite metal safe and method of making |
-
1998
- 1998-03-03 FR FR9802800A patent/FR2775601B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1999
- 1999-03-01 PL PL342820A patent/PL197405B1/pl unknown
- 1999-03-01 HU HU0101207A patent/HU228431B1/hu unknown
- 1999-03-01 DK DK99937879T patent/DK1058558T3/da active
- 1999-03-01 PT PT99937879T patent/PT1058558E/pt unknown
- 1999-03-01 CA CA2321903A patent/CA2321903C/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 WO PCT/FR1999/000453 patent/WO1999044633A1/fr active IP Right Grant
- 1999-03-01 DE DE69923434T patent/DE69923434T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 NZ NZ506370A patent/NZ506370A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-03-01 CN CNA2006100086258A patent/CN1846786A/zh active Pending
- 1999-03-01 US US09/622,951 patent/US6713068B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 BR BR9908496-1A patent/BR9908496A/pt not_active Application Discontinuation
- 1999-03-01 ES ES99937879T patent/ES2237931T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 IL IL13787299A patent/IL137872A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1999-03-01 KR KR1020007009675A patent/KR20010041507A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-03-01 EP EP99937879A patent/EP1058558B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 JP JP2000534234A patent/JP2002505300A/ja active Pending
- 1999-03-01 AU AU32571/99A patent/AU762479B2/en not_active Expired
- 1999-03-01 CN CNB998035750A patent/CN1263511C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1999-03-01 AT AT99937879T patent/ATE287728T1/de active
- 1999-03-02 ZA ZA9901662A patent/ZA991662B/xx unknown
- 1999-03-02 AR ARP990100873A patent/AR018135A1/es not_active Application Discontinuation
- 1999-03-03 TW TW088103231A patent/TW592700B/zh not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-12-12 US US10/735,429 patent/US7507416B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2002505300A (ja) | 2002-02-19 |
| CN1291899A (zh) | 2001-04-18 |
| DK1058558T3 (da) | 2005-06-06 |
| TW592700B (en) | 2004-06-21 |
| EP1058558A1 (fr) | 2000-12-13 |
| HUP0101207A2 (hu) | 2001-08-28 |
| US7507416B2 (en) | 2009-03-24 |
| AU762479B2 (en) | 2003-06-26 |
| HUP0101207A3 (en) | 2003-10-28 |
| IL137872A0 (en) | 2001-10-31 |
| NZ506370A (en) | 2003-07-25 |
| ATE287728T1 (de) | 2005-02-15 |
| ZA991662B (en) | 2000-10-12 |
| US20060057163A1 (en) | 2006-03-16 |
| CA2321903C (en) | 2011-05-31 |
| ES2237931T3 (es) | 2005-08-01 |
| CN1263511C (zh) | 2006-07-12 |
| EP1058558B1 (fr) | 2005-01-26 |
| DE69923434D1 (de) | 2005-03-03 |
| CN1846786A (zh) | 2006-10-18 |
| FR2775601A1 (fr) | 1999-09-10 |
| PT1058558E (pt) | 2005-06-30 |
| DE69923434T2 (de) | 2006-01-05 |
| WO1999044633A1 (fr) | 1999-09-10 |
| KR20010041507A (ko) | 2001-05-25 |
| US6713068B1 (en) | 2004-03-30 |
| FR2775601B1 (fr) | 2001-09-21 |
| AU3257199A (en) | 1999-09-20 |
| BR9908496A (pt) | 2000-12-05 |
| PL197405B1 (pl) | 2008-03-31 |
| PL342820A1 (en) | 2001-07-02 |
| AR018135A1 (es) | 2001-10-31 |
| CA2321903A1 (en) | 1999-09-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU228431B1 (en) | Live recombined vaccines with adjuvant | |
| KR101943171B1 (ko) | 유성 아쥬반트 | |
| JP3993230B2 (ja) | 改良された修飾ｂｒｓｖ生ワクチン | |
| JP2004518655A (ja) | 改良されたマイコプラズマハイオニューモニエバクテリンワクチン | |
| US7163926B1 (en) | Adjuvant-containing vaccines | |
| WO2003024354A2 (en) | Interleukin-12 as a veterinary vaccine adjuvant | |
| WO2000029016A1 (en) | Intradermal avian immunization with inactivated vaccines | |
| US20040002472A1 (en) | Vaccination or immunization using a prime-boost regimen | |
| EP1594537B1 (en) | Vaccination or immunization using a prime-boost regimen against brsv, bhv-1, bvdv, bpi-3 | |
| AU2003246343B2 (en) | Live recombined vaccines injected with adjuvant | |
| MXPA00008524A (en) | Live recombined vaccines injected with adjuvant | |
| PL215173B1 (pl) | Zestaw do przeprowadzania szczepienia przeciwko patogenowi bydła, zastosowanie czynnika patogennego bydła (BRSV) do wytwarzania szczepionki, szczepienie oraz inaktywowana szczepionka | |
| AU2002335754A1 (en) | Interleukin-12 as a veterinary vaccine adjuvant |