NO326871B1 - Nye peptidforbindelser med antiangiogene egenskaper, sammensetninger og medikamenter inneholdende disse. - Google Patents

Nye peptidforbindelser med antiangiogene egenskaper, sammensetninger og medikamenter inneholdende disse. Download PDF

Info

Publication number
NO326871B1
NO326871B1 NO20005890A NO20005890A NO326871B1 NO 326871 B1 NO326871 B1 NO 326871B1 NO 20005890 A NO20005890 A NO 20005890A NO 20005890 A NO20005890 A NO 20005890A NO 326871 B1 NO326871 B1 NO 326871B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
ile
tfa
fmoc
acetonitrile
gly
Prior art date
Application number
NO20005890A
Other languages
English (en)
Other versions
NO20005890D0 (no
NO20005890L (no
Inventor
Fortuna Haviv
Jack Henkin
Michael F Bradley
Douglas M Kalvin
Andrew J Schneider
Original Assignee
Abbott Lab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Abbott Lab filed Critical Abbott Lab
Publication of NO20005890D0 publication Critical patent/NO20005890D0/no
Publication of NO20005890L publication Critical patent/NO20005890L/no
Publication of NO326871B1 publication Critical patent/NO326871B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Description

Teknisk område
Oppfinnelsen vedrører nye forbindelser som har aktivitet som er nyttig for å behandle tilstander som oppstår eller forverres ved angiogenese, farmasøytiske sammensetninger omfattende disse forbindelser, en behandlingsmetode under anvendelse av nevnte forbindelser, og en metode for inhibering av angiogenese.
Bakgrunnen for oppfinnelsen
Angiogenese er den fundamentale prosess hvorved nye blodkar dannes og er essensiell for mange forskjellige normale kroppsaktiviteter (så som reproduksjon, utvikling og sårheling). Skjønt prosessen ikke er fullstendig forstått, an-tar man at den innebærer et kompleks vekselspill av molekyler som både stimulerer og inhiberer veksten av endotele celler, de primære celler i de kapillare blodkar. Under normale betingelser synes disse molekyler å holde mikrovas-kulaturen i hviletilstand (dvs. det skjer ikke noen kapil-lar vekst) over lengre tidsperioder som kan vare i ukevis eller i noen tilfeller i tiår. Når det er nødvendig (så som under sårheling), kan imidlertid disse samme celler gjen-nomgå hurtig proliferasjon og omsetning i løpet av en fem dagers periode. (Folkman, J. og Shing, Y., The Journal av Biological Chemistry, 267(16): 10931-10934, og Folkman, J. og Klagsbrun, M., Science, 235: 442-447 (1987)).
Selv om angiogenese er en meget regulert prosess under normale betingelser, drives mange sykdommer (karakterisertsom "angiogene sykdommer") av hardnakket uregulert angiogenese. Uttrykt på en annen måte kan uregulert angiogenese enten forårsake en spesiell sykdom direkte eller forverre en eksisterende patologisk tilstand. For eksempel har okular neovakularisasjon vært medvirkende som den vanligste årsak til blindhet. I visse eksisterende tilfeller, så som artritt, invaderer nylig dannede kapillare blodkar leddene og ødelegger leddbrusk. I diabetes invaderer nye kapillarer dannet i retina glasslegemet, blør og forårsaker blindhet. Vekst og metastase av faste tumorer er også angiogenese-avhengig (Folkman, J., Cancer Research, 46: 467-473 (1986), Folkman, J., Journal av the National Cancer Institute, 82: 4-6 (1989)). Det er for eksempel blitt vist at tumorer som utvides mer enn 2 mm, må få sin egen blodtilførsel, og det gjør de ved å indusere veksten av nye kapillare blodkar. Straks disse nye blodkar blir innkapslet i tumoren, gjør de det mulig for tumorcellene å entre sirkulasjonen og meta-statisere til fjerne steder, så som leveren, lungene eller knoklene (Weidner, N., et al., The New England Journal av Medicin, 324: 1-8 (1991)).
Selv om flere angiogeneseinhibitorer for tiden er under utvikling for bruk ved behandling av angiogene sykdommer (Gasparini, G. og Harris, A.L., J Clin Oncol 13(3): 765-782, (1995)), er der ulemper forbundet med flere av disse forbindelser. For eksempel er suramin en kraftig angioge-neseinhibitor, men forårsaker (ved doser som er nødvendige for å oppnå antitumoraktivitet) alvorlig systemisk toksisitet i mennesker. Andre forbindelser, så som retinoider, interferoner og antiøstrogener er ufarlige for menneskelig bruk, men de har bare en svak anti-angiogen virkning.
EP443404 viser peptidfragmenter og analoger av trombospondin. Peptidene inhiberer tumormetastase i pattedyr in vivo og er nyttige i forbindelse med angiogenese.
Oppsummering av oppfinnelsen
I et aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en forbindelse med formel: Ao-Ai-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-A9-Aio (I) (SEKV. ID NR. 1)
eller et farmasøytisk akseptabelt salt, en ester, et solvat eller en medisinforløper derav, hvori:
A0er hydrogen eller en acylgruppe valgt fra:
(1) R-(CH2)n-C(0)-; hvori n er et helt tall fra 0 til 8, og R er valgt fra hydroksyl; metyl; N-acetylamino; metoksyl; karboksyl; cykloheksyl eventuelt inneholdende en eller to dobbeltbindinger og eventuelt substituert med en til tre hydroksylgrupper; og en 5- eller 6-leddet aromatisk eller ikke-aromatisk ring eventuelt inneholdende en eller to heteroatomer valgt fra nitrogen, oksygen og svovel, hvori ringen er eventuelt substituert med en gruppe valgt fra alkyl, alkoksy og halogen; og (2) R^CHzCHz-(OCH2CH20) P-CH2-C (0)-; hvori R<1>er valgt fra hydrogen, alkyl og N-acetylamino, og p er et
helt tall fra 1 til 8;
Ai er en aminoacylrest valgt fra:
(1) alanyl,
(2) asparaginyl,
(3) citrullyl,
(4) glutaminyl,
(5) glutamyl,
(6) N-etylglycyl,
(7) metionyl,
(8) N-metylalanyl,
(9) prolyl,
(10) pyro-glutamyl,
(11) sarkosyl,
(12) seryl,
(13) treonyl,
(14) -HN-(CH2)q-C (0)-, hvori q er 1 til 8, og (15) -HN-CH2CH2-(OCH2CH2O) r-CH2-C (0)-, hvori r er 1 til 8;
A2er en aminoacylrest valgt fra:
(1) alanyl,
(2) asparaginyl,
(3) aspartyl,
(4) glutaminyl,
(5) glutamyl,
(6) leucyl,
(7) metionyl,
(8) fenylalanyl,
(9) prolyl,
(10) seryl,
(11) -HN- (CH2)q-C (0)-, hvori q er 1 til 8, og (12) -HN-CH2CH2- (OCH2CH2O) r-CH2-C (0)-, hvori r er 1 til 8;
A3er en aminoacylrest valgt fra:
(1) alanyl,
(2) asparaginyl,
(3) citrullyl,
(4) cykloheksylalanyl,
(5) cykloheksylglycyl,
(6) glutaminyl,
(7) glutamyl,
(8) glycyl,
(9) isoleucyl,
(10) leucyl,
(11) metionyl,
(12) norvalyl,
(13) fenylalanyl,
(14) seryl,
(15) t-butylglycyl,
(16) treonyl,
(17) valyl,
(18) penicillaminyl, og
(19) cystyl;
A4er en aminoacylrest av L- eller D-konfigurasjon valgt fra:
(2) glycyl,
(4) prolyl,
(5) dehydroleucyl,
(6) D-alanyl,
(7) D-3-(naft-l-yl)alanyl, (8) D-3-(naft-2-yl)alanyl, (9) D-(3-pyridyl)-alanyl,
(10) D-2-aminobutyryl,
(11) D-allo-isoleucyl,
(12) D-allo-treonyl;
(13) D-allylglycyl,
(14) D-asparaginyl,
(15) D-aspartyl,
(16) D-benzotienylalanyl,
(17) D-3-(4,4'-bifenyl)alanyl,
(18) D-klorfenylalanyl,
(19) D-3-(3-trifluormetylfenyl)alanyl, (20) D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, (21) D-3-(3,4-difluorfenyl)alanyl,
(22) D-citrullyl,
(23) D-cykloheksylalanyl,
(24) D-cykloheksylglycyl,
(25) D-cystyl,
(26) D-cystyl(S-t-butyl),
(27) D-glutaminyl,
(28) D-glutamyl,
(29) D-histidyl,
(30) D-homoisoleucyl,
(31) D-homofenylalanyl,
(32) D-homoseryl,
(33) D-isoleucyl,
(34) D-leucyl,
(35) D-lysyl(N-epsilon-nikotinyl),
(36) D-lysyl,
(37) D-metionyl,
(38) D-neopentylglycyl,
(39) D-norleucyl,
(40) D-norvalyl,
(41) D-ornityl,
(42) D-penicillaminyl,
(43) D-penicillaminyl(acetamidometyl), (44) D-penicillaminyl(5-benzyl),
(45) D-fenylalanyl,
(46) D-3-(4-aminofenyl)alanyl, (47) D-3-(4-metylfenyl)alanyl, (48) D-3-(4-nitrofenyl)alanyl,
(4 9) D-3-(3,4-dimetoksyfenyl)alanyl, (50) D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)alanyl,
(51) D-prolyl,
(52) D-seryl,
(53) D-seryl(O-benzyl),
(54) D-t-butylglycyl,
(55) D-tienylalanyl,
(56) D-treonyl,
(57) D-treonyl(O-benzyl),
(58) D-tryptyl,
(59) D-tyrosyl(O-benzyl),
(60) D-tyrosyl(O-etyl),
(61) D-tyrosyl, og
(62) D-valyl;
A5er en aminoacylrest med L- eller D-konfigurasjon valgt fra:
(1) alanyl,
(2) (3-pyridyl)alanyl,
(3) 3-(naft-l-yl)alanyl,
(4) 3-(naft-2-yl)alanyl,
(5) allo-treonyl,
(6) allylglycyl,
(7) glutaminyl,
(8) glycyl,
(9) histidyl,
(10) homoseryl,
(11) isoleucyl,
(12) lysyl(N-epsilon-acetyl),
(13) metionyl,
(14) norvalyl,
(15) oktylglycyl,
(16) ornityl,
(17) 3-(4-hydrometylfenyl)alanyl,
(18) prolyl,
(19) seryl,
(20) treonyl,
(21) tryptyl,
(22) tyrosyl,
(23) D-allo-treonyl,
(24) D-homoseryl,
(25) D-seryl,
(26) D-treonyl,
(27) penicillaminyl, og (28) cystyl;
A6er en aminoacylrest med L- eller D-konfigurasjon valgt fra:
(1) alanyl,
(2) 3-(naft-l-yl)alanyl, (3) 3-(naft-2-yl)alanyl,
(4) (3-pyridyl)alanyl,
(5) 2-aminobutyryl,
(6) allylglycyl,
(7) arginyl,
(8) asparaginyl,
(9) aspartyl,
(10) citrullyl,
(11) cykloheksylalanyl,
(12) glutaminyl,
(13) glutamyl,
(14) glycyl,
(15) histidyl,
(16) homoalanyl,
(17) homoleucyl,
(18) homoseryl,
(19) isoleucyl,
(20) leucyl,
(21) lysyl(N-epsilon-acetyl) , (22) lysyl(N-epsilon-isopropyl), (23) metionyl(sulfone), (24) metionyl(sulfoksid),
(25) metionyl,
(26) norleucyl,
(27) norvalyl,
(28) oktylglycyl,
(29) fenylalanyl,
(30) 3-(4-karboksyamidfenyl)alanyl, (31) propargylglycyl,
(32) seryl,
(33) treonyl,
(34) tryptyl,
(35) tyrosyl,
(36) valyl,
(37) D-3-(naft-l-yl)alanyl, (38) D-3-(naft-2-yl)alanyl,
(39) D-glutaminyl,
(40) D-homoseryl,
(41) D-leucyl,
(42) D-norvalyl,
(43) D-seryl,
(44) penicillaminyl, og (45) cystyl;
A7er en aminoacylrest med L- eller D-konfigurasjon valgt fra:
(1) alanyl,
(2) allylglycyl,
(3) aspartyl,
(4) citrullyl,
(5) cykloheksylglycyl,
(6) glutamyl,
(7) glycyl,
(8) homoseryl,
(9) isoleucyl,
(10) allo-isoleucyl,
(11) leucyl,
(12) lysyl(N-epsilon-acetyl),
(13) metionyl,
(14) 3-(naft-l-yl)alanyl, (15) 3-(naft-2-yl)alanyl,
(16) norvalyl,
(17) fenylalanyl,
(18) prolyl,
(19) seryl,
(20) t-butylglycyl,
(21) tryptyl,
(22) tyrosyl,
(23) valyl,
(24) D-allo-isoleucyl,
(25) D-isoleucyl,
(26) penicillaminyl, og
(27) cystyl;
A8er en aminoacylrest valgt fra:
(1) 2-amino-4-[(2-amino)-pyrimidinyl]butanoyl,
(2) alanyl(3-guanidino),
(3) alanyl[3-pyrrolidinyl(2-N-amidino)],
(4) alanyl[4-piperidinyl(N-amidino)],
(5) arginyl,
(6) arginyl (N<G>N<G>'dietyl) ,
(7) citrullyl,
(8) 3-(cykloheksyl)alanyl(4-N'-isopropyl), (9) glycyl[4-piperidinyl(N-amidino)],
(10) histidyl,
(11) homoarginyl,
(12) lysyl,
(13) lysyl(N-epsilon-isopropyl),
(14) lysyl(N-epsilon-nikotinyl),
(15) norarginyl,
(16) ornityl(N-delta-isopropyl),
(17) ornityl(N-delta-nikotinyl),
(18) ornityl[N-delta-(2-imidazolinyl)], (19) [4-amino(N-isopropyl)metyl)fenyl]alanyl,
(20) 3-(4-guanidinofenyl)alanyl, og
(21) 3-(4-amino-N-isopropylfenyl)alanyl; A9er en aminoacylrest med L- eller D-konfigurasjon valgt fra:
(1) 2-amino-isobutyryl
(2) 2-amino-isobutyryl,
(3) homoprolyl,
(4) hydroksyprolyl,
(5) isoleucyl,
(6) leucyl,
(7) fenylalanyl,
(8) prolyl,
(9) seryl,
(10) t-butylglycyl,
(11) 1,2,3,4-tetrahydroisokinolin-3-karbonyl,
(12) treonyl,
(13) valyl,
(14) D-alanyl, og
(15) D-prolyl; og
Aioer en hydroksylgruppe eller et aminosyreamid valgt fra:
1. azaglycylamid,
2. D-alanylamid,
3. D-alanyletylamid,
4 . glycylamid,
5. glycyletylamid,
6. sarkosylamid,
7. serylamid,
8. D-serylamid,
9. en gruppe representert ved formelen
R<2>
-NH-(CH2)S-CHR<3>.
og
10. en gruppe representert ved formelen -NH-R<4>;
hvori s er et helt tall valgt fra 0 til 8,
R<2>er valgt fra hydrogen, alkyl og en 5- til 6-leddet
cykloalkylring;
R<3>er valgt fra hydrogen, hydroksy, alkyl, fenyl, alkoksy,
og en 5- til 6-leddet ring eventuelt inneholdende fra et til to heteroatomer valgt fra oksygen, nitrogen og svovel, forutsatt at s ikke er null når R<3>er hydroksy
eller alkoksy; og
R<4>er valgt fra hydrogen og hydroksy.
I et annet aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en sammensetning for behandling av en pasient i behov av anti-angiogeneseterapi omfattende et peptid definert ovenfor i kombinasjon med en farmasøytisk aktiv bærer.
Enda et annet aspekt i foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en anvendelse av en terapeutisk effektiv mengde av et peptid som definert ovenfor i fremstillingen av et medikament for behandling av en pasient i behov av anti-angiogeneseterapi.
Enn ytterligere et annet aspekt i foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en sammensetning for behandling av en sykdom valgt fra cancer, artritt, psoriasis, øyenangiogenese forbundet med infeksjon eller kirurgisk inngrep, makular degenerasjon og diabetisk retinopati omfattende et peptid som definert ovenfor i kombinasjon med en farmasøytisk aktiv bærer.
I enda et annet aspekt tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en metode for å isolere en reseptor fra en endotel celle omfattende å binde et peptid som definert ovenfor til reseptoren for å danne et peptidreseptorkompleks, isolere peptidreseptorkomplekset og rense reseptoren.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen Definisjon av uttrykk
Uttrykket "alkyl", som er anvendt heri, refererer til en monovalent gruppe avledet fra et rettkjedet eller forgrenet mettet hydrokarbon ved å fjerne et hydrogenatom. Eksempler på alkyl omfatter, men er ikke begrenset til, metyl, etyl, propyl, isopropyl, butyl, sec-butyl, iso-butyl, tert-butyl, pentyl, heksyl og lignende. Foretrukne alkylgrupper for oppfinnelsen er Ci-C6alkylgrupper med fra et til seks karbonatomer. Alkylgrupper med et til tre karbonatomer (Ci-C3alkyl) er mer foretrukket for oppfinnelsen.
Uttrykket "nikotinyl", som er anvendt heri, refererer til acylgruppen avledet fra nikotinsyre, dvs. pyridin-3-karb-oksylsyre. Uttrykket "2-Me-nikotinyl" eller "2-metylniko tinyl" refererer til en nikotinylgruppe substituert med en metylgruppe på karbonatomet tilstøtende nitrogenatomet.
Uttrykket "shikimyl", som er anvendt heri, refererer til acylresten avledet fra shikimsyre eller [3R-(3a,4a,5P)-3,4,5-trihydroksy]-1-cykloheksen-l-karboksylsyre. En "di-hydroshikimyl"-gruppe betegner en fullt mettet analog av shikimsyre.
Uttrykket "succinyl", som er anvendt heri, refererer til acylresten avledet fra ravsyre eller (1,4-dioksobutyl)-1-karboksylsyre
Uttrykket "N-acetylamino", som er anvendt heri, refererer til en aminogruppe (-NH2) substituert på nitrogenatomet med en acetylgruppe (CH3C(0)-.
Uttrykket "karbonyl", som er anvendt heri, refererer til gruppen -C(0)-.
Uttrykket "karboksy" eller "karboksyl", som er anvendt heri, refererer til gruppen -C(0)OH.
Uttrykket "alkoksy", som er anvendt heri, refererer til en alkylgruppe som definert ovenfor bundet til en modermole-kylgruppe via en eterbinding. Eksempler på alkoksygrupper omfatter, men er ikke begrenset til, metoksy, etoksy, iso-propoksy og lignende.
Uttrykket "aromatisk ring", som er anvendt heri, refererer til et umettet cyklisk hydrokarbon forbundet med et system av Tt-elektronbindinger. Et til to karbonatomer i hydrokar-bonringen kan være substituert med et heteroatom valgt fra nitrogen, oksygen eller svovel. Eksempler på 5- eller 6-leddede aromatiske ringer omfatter, men er ikke begrenset til, benzyl, pyridyl, furyl, tetrahydrofuryl, tienyl og pyrrolyl. En aromatisk ring, inklusive ringer substituert med et heteroatom, kan eventuelt være substituert på et eller flere karbonatomer med substituenter valgt fra alkyl, alkoksy, karboksy og halogen, for eksempel tolyl, brom-benzyl, t-butylbenzyl, nikotinyl, 2-metylnikotinyl, 2-furoinsyre og lignende.
Uttrykket "ikke-aromatisk ring", som er anvendt heri, refererer til en mettet eller umettet cyklisk hydrokarbonring, som kan være eventuelt substituert med et eller to heteroatomer valgt fra nitrogen, oksygen eller svovel. Eksempler på ikke-aromatiske ringer er cykloheksyl, tetrahydropy-ranyl, pyrrolidinyl, og piperidinyl.
Uttrykket "N-beskyttende gruppe", som er anvendt heri, refererer til en lett fjernbar gruppe som er kjent i faget for å beskytte en aminogruppe mot uønsket reaksjon under syntetiske prosedyrer og for å være selektivt fjernbar. Anvendelse av N-beskyttende grupper er velkjent i faget for å beskytte grupper mot uønskede reaksjoner under en syntetisk prosedyre, og mange slike beskyttende grupper er kjent, cfr. for eksempel T.H. Greene og P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd edition, John Wiley&Sons, New York (1991) . Eksempler på N-beskyttende grupper omfatter, men er ikke begrenset til, acylgrupper inklusive acetyl, trifluoracetyl, acylisotiocyanat, aminokaproyl, benzoyl og lignende, og acyloksygrupper, inklusive t-butyloksykarbonyl (Boe) og karbobenzyloksy (Cbz), 9-fluorenyl-metoksykarbonyl (Fmoc) og lignende.
Anvendt heri refererer uttrykkene "Leu," "Sar," "Gin," "Gly," "Val," "Ile," "Thr," "Nva," "Arg," "Asn," "pyroGlu," "Ser," "Ala," "Homoala," "Cha," "Pro", "Phe," "Trp," "1-Nal," "2-Nal," "Azagly" og "Nie" til leucin, sarkosin (N-metylglycin), glutamin, glycin, valin, isoleucin, treonin, norvalin, arginin, aspargin, pyroglutaminsyre, serin, alanin, homoalanin, cykloheksylalanin, prolin, fenylalanin, tryptofan, 1-naftylalanin, 2-naftylalanin, azaglycin hen-holdsvis norleucin, i L-, D- eller DL-form. Hvis intet annet er angitt med et "D"-prefiks, f.eks. D-Ala eller D-Ile
(også D-Ile), er stereokjemien for a-karbonet i aminosyrene og aminoacylrestene i peptidene beskrevet i denne beskrivelse og de medfølgende krav den naturlige eller "L"-konfigurasjonen. Cahn-Ingold-Prelog "R"- og "S"- betegnel-sene er anvendt for å spesifisere stereokjemien for chirale sentre i visse acylsubstituenter ved N-terminusen i peptidene ifølge denne oppfinnelse. Betegnelsen "R,S" er ment å skulle angi en racemisk blanding av de to enantiomere former. Denne nomenklatur følger den som er beskrevet i R.S. Cahn, et al., Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 5, 385-415
(1966).
Til størstedelen følger navnene på naturlig forekommende og ikke-naturlig forekommende aminoacylrester anvendt heri be-nevningskonvensjonene foreslått av IUPAC-kommisjonen ved-rørende nomenklaturen i organisk kjemi og IUPAC-IUB-kommisjonen vedrørende biokjemisk nomenklatur som angitt i "Nomenclature of a-Amino Acids (Recommendations, 1974) " Biochemistry, 14(2), (1975). I den grad navnene og forkortelsene på aminosyrer og aminoacylrester anvendt i denne beskrivelse og de medfølgende krav adskiller seg fra disse angivelser, vil de forklares for leseren. Noen forkortelser som er nyttige for å beskrive oppfinnelsen, er definert nedenfor i følgende Tabell 1. Når de ikke forekommer i tabellen ovenfor, kan nomenklaturen og forkortelsene ytterligere forklares ved henvisning til Calbiochem-Novabiochem Corp. 1999 Catalog and Peptide Synthesis Handbook eller the Chem-Impex International, Inc. Tools for Peptide&Solid Phase Synthesis 1998- 1999 Catalogue.
Uttrykket "farmasøytisk akseptable salter", som er anvendt heri, refererer til salter som, innenfor omfanget av sunt medisinsk skjønn, er egnet for anvendelse i kontakt med vevene i mennesker og lavere dyrearter uten utilbørlig toksisitet, irritasjon, allergisk respons og lignende, og er forenlig med et rimelig fordel/risiko-forhold. Farmasøytisk akseptable salter er velkjent i faget. For eksempel beskri-ver S. M. Berge, et al. farmasøytisk akseptable salter detaljert i J. Pharmaceutical Sciences, 1977, 66: 1-19. Sal-tene kan fremstilles in situ under den endelige isolasjon og rensing av forbindelsene ifølge oppfinnelsen, eller separat ved å omsette den frie basefunksjon med en passende organisk syre. Representative syreaddisjonssalter omfatter acetat, adipat, alginat, askorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butyrat, kamferat, kamfer-sulfonat, citrat, cyklopentanpropionat, diglukonat, dode-cylsulfat, etansulfonat, fumarat, glukoheptonat, glycerofosfat, hemisulfat, heptonat, heksanoat, hydrobromid, hydroklorid, hydrojodid, 2-hydroksy-etansulfonat, laktobio-nat, laktat, laurat, laurylsulfat, malat, maleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, palmoat, pektinat, persulfat, 3-fenylpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, stea-rat, succinat, sulfat, tartrat, tiocyanat, toluensulfonat, undecanoat, valeratsalter og lignende. Representative alkali- og jordalkalimetallsalter omfatter natrium, litium, kalium, kalsium, magnesium og lignende, samt ikke-toksiske ammonium-, kvaternære ammonium- og aminkationer, inklusive, men ikke begrenset til ammonium, tetrametylammonium, tetra- etylammonium, metylamin, dimetylamin, trimetylamin, tri-etylamin, etylamin og lignende.
Uttrykket "farmasøytisk akseptabel ester" betegner en ester som hydrolyserer in vivo og omfatter de som nedbrytes lett i det menneskelige legeme og gir moderforbindelsen eller et salt derav. Egnede estergrupper omfatter for eksempel de som er avledet fra farmasøytisk akseptable alifatiske karboksylsyrer, spesielt alkan-, alken-, cykloalkan- og alkan-disyrer, hvori alkyl- eller alkenylgruppen med fordel ikke har mer enn 6 karbonatomer. Eksempler på spesielle estere omfatter formiater, acetater, propionater, butyrater, acrylater og etylsuccinater.
Uttrykket "farmasøytisk aksepabelt solvat" representerer et aggregat som omfatter et eller flere molekyler av løsningsproduktet, så som forbindelser med formel (I), med et eller flere molekyler av løsningsmiddelet.
Uttrykket "farmasøytisk akseptable medisinforløpere", som er anvendt heri, refererer til de medisinforløpere av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse som, innenfor omfanget av sunt medisinsk skjønn, er egnet for anvendelse i kontakt med vevene i mennesker og lavere dyrearter uten utilbørlig toksisitet, irritasjon, allergisk respons og lignende, forenlig med et rimelig fordel/risiko-forhold og effektive til sin tiltenkte bruk, samt de zwitterioniske former, hvor de forekommer, av forbindelsene ifølge oppfinnelsen. Uttrykket "medisinforløper" betegner forbindelser som hurtig omdannes in vivo og gir moderforbindelsene med ovennevnte formel, som for eksempel ved hydrolyse i blodet. T. Higuchi og V. Stella gir en grundig omtale av medisin-forløperkonseptet i "Prodrugs as Novel Delivery Systems," Vol. 14 av A.C.S. Symposium Series, American Chemical Society (1975) Edward B. Roche, ed. i Bioreversible Carri-ers in Drug Design, Amerikan Pharmaceutical Associasjon og Pergamon Press, 1987, som begge er innlemmet heri ifølge referanse.
Uttrykket "reseptor", som er anvendt heri, refererer til en kjemisk gruppe eller et molekyl på celleoverflaten eller i cellens indre som har affinitet for en spesifikk kjemisk gruppe, et molekyl eller et virus. Isolasjon av reseptorer som er relevante for den antiangiogene aktivitet av peptidet ifølge oppfinnelsen, kan tilveiebringe nyttige diagnostiske verktøy.
I en utførelsesform vedrører foreliggende oppfinnelse forbindelser med strukturen
hvori A0, Ai, A2, A3, A7, A8, A9, og Ai0er som definert ovenfor. N-terminusen i et nonapeptid representert ved A1-A9kan være modifisert med en aminoacylgruppe representert ved A0. A10representerer en gruppe egnet for modifisering av C-terminusen i forbindelsen.
I foreliggende utførelsesform er A4en aminoacylrest med D-konfigurasjon valgt fra D-allo-isoleucyl, D-allylglycyl, D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, D-cystyl, D-isoleucyl, D-leucyl, D-penicillaminyl, D-fenylalanyl, D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)-alanyl og D-3-(4-aminofenyl)alanyl; A5er en aminoacylrest valgt fra oktylglycyl, glycyl, penicillaminyl, seryl, treonyl og tyrosyl; og A6er en aminoacylrest valgt fra glutaminyl, leucyl, norvalyl og seryl.
I en annen utførelsesform av oppfinnelsen har forbindelsene strukturen (I) som definert ovenfor hvori Ai er sarkosyl, A2er glycyl, A3er valyl, A7er isoleucyl, A8er arginyl og A9er prolyl. Forbindelser ifølge foreliggende utførelses-form kan være representert ved strukturen
A0-Sar-Gly-Val-A4-A5-A6-Ile-Arg-Pro-Aio(II) (SEKV. ID NR. 2)
hvori A0er hydrogen eller en acylgruppe som modifiserer N-terminusen. Egnede grupper for A0kan representeres ved
formelen R-(CH2) n-C (0)-; hvori n er et helt tall fra 0 til 8, og R er valgt fra hydroksyl; metyl; N-acetylamino; metoksyl; karboksyl; cykloheksyl eventuelt inneholdende en eller to dobbeltbindinger og eventuelt substituert med en til tre hydroksylgrupper; og en 5- eller 6-leddet aromatisk eller ikke-aromatisk ring eventuelt inneholdende en eller to heteroatomer valgt fra nitrogen, oksygen og svovel, hvori ringen er eventuelt substituert med en gruppe valgt fra alkyl, alkoksy og halogen; eller R1-CH2CH2-(OCH2CH20) p-CH2-C(0)-; hvori R<1>er valgt fra hydrogen, alkyl og N-acetylamino, og p er et helt tall fra 1 til 8.
A4er en aminoacylrest med L- eller D-konfigurasjon valgt fra allo-isoleucyl, dehydroleucyl, glycyl, isoleucyl, prolyl, D-alanyl, D-3-(naft-l-yl)alanyl, D-3-(naft-2-yl)alanyl, D-(3-pyridyl)-alanyl, D-2-aminobutyryl, D-allo-isoleucyl, D-allo-treonyl, D-allylglycyl, D-asparaginyl, D-aspartyl, D-benzotienylalanyl, D-3-(4,4'-bifenyl)alanyl, D-klorfenylalanyl, D-3-(3-trifluormetylfenyl)alanyl, D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, D-3-(3,4-difluorfenyl)alanyl, D-citrullyl, D-cykloheksylalanyl, D-cykloheksylglycyl, D-cystyl, D-cystyl(5-t-butyl), D-glutaminyl, D-glutamyl, D-histidyl, D-homoisoleucyl, D-homofenylalanyl, D-homoseryl, D-isoleucyl, D-leucyl, D-lysyl(N-epsilon-nikotinyl), D-lysyl, D-metionyl, D-neopentylglycyl, D-norleucyl, D-norvalyl, D-ornityl, D-penicillaminyl, D-penicillaminyl(acetamidometyl), D-penicillaminyl(S-benzyl), D-fenylalanyl, D-3-(4-aminofen-yl) alanyl, D-3-(4-metylfenyl)alanyl, D-3-(4-nitro- fenyl)-alanyl, D-3-(3,4-dimetoksyfenyl)alanyl, D-3-(3,4,5-tri-fluorfenyl)alanyl, D-prolyl, D-seryl, D-seryl(O-benzyl), D-t-butylglycyl, D-tienylalanyl, D-treonyl, D-treonyl(0-benzyl), D-tryptyl, D-tyrosyl(O-benzyl), D-tyrosyl(0-etyl), D-tyrosyl og D-valyl.
A5er en aminoacylrest med L- eller D-konfigurasjon valgt fra alanyl, (3-pyridyl)-alanyl, 3-(naft-l-yl)alanyl, 3-(naft-2-yl)alanyl, allo-treonyl, allylglycyl, glutaminyl, glycyl, histidyl, homoseryl, isoleucyl, lysyl(N-epsilon- acetyl), metionyl, norvalyl, oktylglycyl, ornityl, 3-(4-hydroksymetylfenyl)alanyl, prolyl, seryl, treonyl, tryptyl, tyrosyl, D-allo-treonyl, D-homoseryl, D-seryl, D-treonyl, penicillaminyl og cystyl.
A6er en aminoacylrest med L- eller D-konfigurasjon valgt fra alanyl, 3-(naft-l-yl)alanyl, 3-(naft-2-yl)alanyl, (3-pyridyl)alanyl, 2-aminobutyryl, allylglycyl, arginyl, asparaginyl, aspartyl, citrullyl, cykloheksylalanyl, glutaminyl, glutamyl, glycyl, histidyl, homoalanyl, homoleucyl, homoseryl, isoleucyl, leucyl, lysyl(N-epsilon-acetyl), lysyl (N-epsilon-isopropyl) , metionyl(sulfon), metionyl(sulf-oksid), metionyl, norleucyl, norvalyl, oktylglycyl, fenylalanyl, 3-(4-karboksyamidfenyl)alanyl, propargylglycyl, seryl, treonyl, tryptyl, tyrosyl, valyl, D-3-(naft-l-yl)-alanyl, D-3-(naft-2-yl)alanyl, D-glutaminyl, D-homoseryl, D-leucyl, D-norvalyl, D-seryl, penicillaminyl og cystyl.
Aioer en hydroksylgruppe eller et aminosyreamid valgt fra azaglycylamid, D-alanylamid, D-alanyletylamid, glycylamid, glycyletylamid, sarkosylamid, serylamid, D-serylamid, eller Aioer en gruppe representert ved formelen
eller en gruppe representert ved formelen -NH-R4 r hvori s er et helt tall valgt fra 0 til 8; R2 er valgt fra hydrogen, alkyl og en 5- til 6-leddet cykloalkylring; R<3>er valgt fra hydrogen, hydroksy, alkyl, fenyl, alkoksy og en 5- til 6-leddet ring eventuelt inneholdende fra et til to heteroatomer valgt fra oksygen, nitrogen og svovel, forutsatt at s ikke er null når R<3>er hydroksy eller alkoksy; og R4 er valgt fra hydrogen og hydroksy. Foretrukne forbindelser ifølge oppfinnelsen har strukturen (II) som definert ovenfor, hvori A4er en aminoacylrest med D-konfigurasjon valgt fra D-alanyl, D-3-(naft-l-yl)alanyl, D-3-(naft-2-yl)alanyl, D-(3-pyridyl)-alanyl, D-2-aminobutyryl, D-allo-isoleucyl, D-allo-treonyl, D-allylglycyl, D-asparaginyl, D-aspartyl, D-klor-fenylalanyl, D-3-(3-tri-fluormetylfenyl)alanyl, D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, D-3-(3,4-difluorfenyl)alanyl, D-cykloheksylalanyl, D-cykloheksylglycyl, D-cystyl, D-glutaminyl, D-glutamyl, D-histidyl, D-homoisoleucyl, D-homofenylalanyl, D-homoseryl, D-isoleucyl, D-leucyl, D-lysyl(N-epsilon-nikotinyl), D-metionyl, D-neopentylglycyl, D-norleucyl, D-norvalyl, D-penicillaminyl, D-penicillaminyl(acetamidometyl), D-penicillaminyl(5-benzyl), D-fenylalanyl, D-3-(4-aminofenyl)alanyl, D-3-(4-metylfenyl)alanyl, D-3-(4-nitrofenyl)alanyl, D-3-(3,4-dimetoksyfenyl)alanyl, D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)alanyl, D-prolyl, D-seryl, D-seryl(O-benzyl), D-t-butylglycyl, D-tienylalanyl, D-treonyl, D-treonyl(O-benzyl), D-tyrosyl(0-etyl), D-tyrosyl, D-valyl og D-cystyl.
Andre foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse har strukturen med formel (II), hvori A5er valgt fra glycyl, oktylglycyl, penicillaminyl, seryl, treonyl og tyrosyl.
Ytterligere foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse har strukturen representert ved formel (II), hvori A6er valgt fra glutaminyl, leucyl, norvalyl og seryl.
De mer foretrukne aminosyrerester for å substituere posi-sjonen representert ved A4er D-konfigurasjonsaminosyrer valgt fra D-allo-isoleucyl, D-allylglycyl, D-3-(3-cyano-fenyl)alanyl, D-cystyl, D-isoleucyl, D-leucyl, D-penicillaminyl, D-fenylalanyl, D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)alanyl og D-3-(4-aminofenyl)alanyl.
Foretrukne A0grupper for å modifisere N-terminusen i forbindelsene innenfor omfanget av oppfinnelsen er valgt fra acetyl, butyryl, kaproyl, (4-N-acetylamino)butyryl, N-acetyl-beta-alanyl, (6-N-acetylamino)kaproyl, klornikotinyl, cykloheksylacetyl, furoyl, gamma-aminobutyryl, 2-metoksyacetyl, metylnikotinyl, nikotinyl, (8-N-acetylamino)-3,6-diokso-oktanoyl, fenylacetyl, propionyl, shikimyl, succinyl og tetrahydrofuroyl.
De foretrukne Ai0-grupper for å modifisere C-terminusen i oppfinnelsen er valgt fra D-alanylamid, azaglycylamid, serylamid, etylamid, hydroksylamid, isopropylamid, propylamid, 2-(cykloheksyl)etylamid, 2-(1-pyrrolidin)etylamid, 1-(cykloheksyl)etylamid, 2-(metoksy)etylamid, 2-(hydroksy)-etylamid, 2-(2-pyridin)etylamid, (2-pyridin)metylamid, 2-(3-pyridin)etylamid, 2-(2-(1-metyl)pyrrolidin)etylamid, 2-(N-morfolin)etylamid og cyklopropylmetylamid.
Forbindelser som er ment å falle innenfor omfanget av foreliggende oppfinnelse, omfatter, men er ikke begrenset til:
Det er velkjent i faget at modifikasjoner og forandringer kan utføres i strukturen av et polypeptid uten vesentlig endring av den biologiske funksjon av peptidet. For eksempel kan visse aminosyrer anvendes istedenfor andre aminosyrer i et gitt polypeptid uten nevneverdig tap av funksjon. Når slike forandringer utføres, kan substitusjoner av like aminosyrerester utføres på basis av den relative lik-het i side-kjedesubstituentene, for eksempel deres stør-relse, ladning, hydrofobisitet, hydrofilisitet og lignende.
I beskrivelsen av oppfinnelsen er visse forkortelser anvendt for lettvinthets skyld gjennom hele beskrivelsen, inklusive eksemplene, som referanse til reagenser og forbindelser som er nyttige for å fremstille forbindelsene ifølge oppfinnelsen. Når det er tilfelle, er følgende forkortelser ment å skulle referere til følgende: DMF betyr dimetylform-amid; DMA betyr dimetylacetamid; DIEA betyr diisopropyl-etylamin; HATU betyr 0-(7-aza-benzotriazol-l-yl)-N,N,N*, N*-tetrametyluroniumheksafluorfosfat; NMP betyr N-metylpyrrolidon; og TFA betyr trifluoreddiksyre.
Bestemmelse av biologisk aktivitet Pelletfremstilling
Ti mikroliter av en blanding inneholdende en slutt-konsentrasjon på 1, 5 eller 10 mM av peptidene ifølge oppfinnelsen, 100 ng bFGF (Collaborative Biomedical Products, Bedford, MA) og 6% Hydron (Sigma, St. Louis, MO) ble pipettert inn i spissen av en steril teflon-stav. Etter tørking i 1-2 timer ble pelletene lagret ved 4°C.
Pelletimplantasjon
Et lite (ca. 2 mm) radialt innsnitt på 1 mm fra senteret av hornhinnen ble utført i anestetiserte Sprague Dawley-rotter. Med en buet iris-spatel ble en intrastromal lomme laget i en avstand av 1 mm fra randen av de sirkelformede blodkar som omgir hornhinnen. En enkelt pellet ble implantert. Antibiotisk salve (neosporin) ble påført etter operasjonen til det opererte øye for å forhindre infeksjon og for å forminske inflammasjon.
Data- analyse
Syv dager etter implantasjonen ble neovaskularisasjonen målt ved hjelp av slisselampe-biomikroskopi (Nikon NS-1), forbundet til et avbildende analysesystem (Leica Qwin). Responsen ble beregnet ved kolorimetrisk påvisning av arealet av nye blodkar og beregne overflatearealet av nye blodkar i^m<2>. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen inhiberer neovaskularisasjon i rottehornhinner som vist i Tabell 2. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen, inklusive, men ikke begrenset til, de som er spesifisert i eksemplene, innehar anti-angiogenisk aktivitet. Som angiogenese-inhibitorer er slike forbindelser nyttige i behandlingen av både primære og metastatiske faste tumorer, inklusive karsinom i bryst, colon, rektum, lunger, munnsvelg, hypofarynks, spiserør, mavesekk, bukspyttkjertel, lever, galleblære og gallegan-ger, tynntarm, urinveier (inklusive nyrer, blære og uro-tel), den feminine genitale kanal, (inklusive livmorhals, livmor og ovarier samt koriokarsinom og gestasjonal trofo-blastisk sykdom), den maskuline genitale kanal (inklusive prostata, de seminale vesikler, testes og germinativcelle-tumorer), de endokrine kjertler (inklusive skjoldbrusk-, binyre- og hypofysekjertlene) og hud, samt hemangiom, melanom, sarkom (inklusive de som oppstår fra benvev og bløte vev samt Kaposis sarkom) og tumorer i hjernen, ner-vene, øynene og hjernehinnene (inklusive astrocytoma, glioma, glioblastoma, retinoblastoma, neuroma, neuroblas-toma, Schwannoma og meningioma). Slike forbindelser kan også være nyttige for å behandle faste tumorer som oppstår fra hematopoietiske ondartetheter så som leukemi (dvs. klorom, plasmacytom og plakk og tumorer av mycosis fungo-ides og kutan T-cellelymfom/leukemia) samt i behandlingen av lymfoma (både Hodgkins og ikke-Hodgkins lymfom). I tillegg kan disse forbindelser være nyttige i forebyggelsen av metastaser fra tumorene beskrevet ovenfor enten når de anvendes alene eller i kombinasjon med radioterapi og/eller andre kjemoterapeutiske midler.
Ytterligere anvendelser omfatter behandling og profylakse av autoimmune sykdommer så som reumatoid, immun og degene-rativ artritt; forskjellig okulare sykdommer så som diabetisk retinopati, retinopati av prematuritet, avvisning av hornhinneimplantat, retrolental fibroplasi, neovaskular glaukom, rubeosis, retinal neovaskularisasjon på grunn av makular degenerasjon, hypoksi, angiogenese i øynene forbundet med infeksjon eller kirurgisk inngrep og andre ab-norme neovaskularisasjonstilstander i øynene; hudsykdommer så som psoriasis; blodkarsykdommer så som hemangiom og ka-pillar proliferasjon innenfor ateroslerotisk plakk; Osler-Webbers syndrom; myokardial angiogenese; plakkneovaskulari-sasjon; telangiectasia; hemofililedd; angiofibroma; og sår-granulering. Andre anvendelser omfatter behandling av sykdommer som karakteriseres ved altfor stor eller abnorm sti-mulasjon av endotele celler, inklusive, men ikke begrenset til, intestinale adhesjoner, Crohns sykdom, aterosklerose, skleroderma og hypertrofe arr, dvs. keloider. En annen anvendelse er som prevensjonsmiddel, ved å inhibere ovulasjon og opprettelse av placenta. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er også nyttige i behandlingen av sykdommer som har angiogenese som patologisk konsekvens så som katterispsykdom ( Rochele minalia kintosa) og ulcus ( Helicobacter pylori). Forbindelsene ifølge oppfinnelsen er også nyttige for å re-dusere blødning ved administrasjon før operasjon, spesielt for behandling av opererbare tumorer.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i kombinasjon med andre sammensetninger og prosedyrer for behandling av sykdommer. For eksempel kan en tumor behandles konven-sjonelt med kirurgi, bestråling eller kjemoterapi kombinert med et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse, og deretter kan et peptid ifølge foreliggende oppfinnelse administreres til pasienten for å forlenge mikrometastasenes dvaletil-standen og for å stabilisere og inhibere veksten av enhver gjenværende primær tumor. I tillegg kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen kombineres med farmasøytisk akseptable eksipienser og eventuelt vedvarende frigivelsesmatrikser, så som biologisk nedbrytbare polymerer, for å danne terapeutiske sammensetninger.
En vedvarende frigivelsesmatriks, som anvendes heri, er en matriks fremstilt av materialer, vanligvis polymerer, som er nedbrytbare ved enzymatisk eller syre-basehydrolyse eller ved oppløsning. Med en gang den er innsatt i kroppen, virker enzymer og kroppsvæsker på den. En vedvarende frigivelsesmatriks velges med fordel fra biokompatible materia ler så som liposomer, polylaktider (polymelkesyre), polyglykolid (polymer av glykolsyre), polylaktid-ko-glykolid (kopolymerer av melkesyre og glykolsyre) polyanhydrider, poly(orto)estere, polypeptider, hyaluronsyre, Kollagen, kondroitinsulfat, karboksylsyrer, fettsyrer, fosfolipider, polysakkarider, nucleinsyrer, polyaminosyrer, aminosyrer så som fenylalanin, tyrosin, isoleucin, polynukleotider, poly-vinylpropylen, polyvinylpyrrolidon og silikon. En foretrukken biologisk nedbrytbar matriks er en matriks enten av polylaktid, polyglykolid eller polylaktid-ko-glykolid (kopolymerer av melkesyre og glykolsyre).
Anvendt i ovennevnte eller andre behandlinger kan en terapeutisk effektiv mengde av en av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse anvendes i ren form eller, hvor slike former forekommer, i farmasøytisk akseptabel saltform. Med en "terapeutisk effektiv mengde" av forbindelsen ifølge oppfinnelsen menes en tilstrekkelig mengde av forbindelsen til å behandle en angiogen sykdom, (for eksempel for å be-grense tumorvekst eller for å forsinke eller blokkere tumormetastase) ved et rimelig fordel/risiko-forhold som gjelder i enhver medisinsk behandling. Det bør imidlertid være underforstått at den totale daglige bruk av forbindelsene og sammensetningene ifølge foreliggende oppfinnelse bør bestemmes av den behandlende lege innenfor omfanget av sund medisinsk vurdering. Det spesifikke terapeutisk effektive dosenivå for hver enkelt pasient vil avhenge av mange forskjellige faktorer, inklusive lidelsen som behandles og lidelsens alvor; den anvendte forbindelses aktivitet; den anvendte sammensetning, pasientens alder, kroppsvekt, generelle helsetilstand, pasientens kjønn og diett; administra-sjonstiden, administrasjonsruten, den anvendte forbindelses ekskresjonshastighet; behandlingens varighet; medikamenter anvendt i kombinasjon eller samtidig med den anvendte forbindelse; og lignende faktorer som er velkjent i de medi-sinske fag. For eksempel er det velkjent innenfor fagkunn-skapen å begynne dosene av forbindelsen ved nivåer som er lavere enn nødvendig for å oppnå den ønskede terapeutiske virkning og å gradvis øke doseringen inntil den ønskede virkning er oppnådd.
Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan anvendes i form av salter avledet fra uorganiske eller organiske syrer. Disse salter omfatter, men er ikke begrenset til følgende: acetat, adipat, alginat, citrat, aspartat, benzoat, benzensulfonat, bisulfat, butyrat, kamferat, kam-fersulfonat, diglukonat, glycerofosfat, hemisulfat, hep-tanoat, heksanoat, fumarat, hydroklorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroksy-etansulfonat (isotionat), laktat, maleat, metansulfonat, nikotinat, 2-naftalensulfonat, oksalat, palmoat, pektinat, persulfat, 3-fenylpropionat, pikrat, pivalat, propionat, succinat, tartrat, tiocyanat, fosfat, glutamat, bikarbonat, p-toluensulfonat og undecanoat. Vann- eller oljeløselige eller dispergerbare produk-ter oppnås derved.
Eksempler på syrer som kan anvendes for å danne farmasøy-tisk akseptable syreaddisjonssalter omfatter slike uorganiske syrer som saltsyre, svovelsyre og fosforsyre og slike organiske syrer som eddiksyre, maleinsyre, ravsyre og sitronsyre. Andre salter omfatter salter med alkalimetaller eller jordalkalimetaller, så som natrium, kalium, kalsium eller magnesium eller med organisk basis. Foretrukne salter av forbindelsene ifølge oppfinnelsen omfatter fosfat, tris og acetat.
Alternativt kan en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse administreres som farmasøytiske sammensetninger inneholdende forbindelsen av interesse i kombinasjon med et eller flere farmasøytisk akseptable eksipienser. En farma-søytisk aktiv bærer eller eksipiens refererer til et ikke-toksisk fast, halvfast eller flytende fyllstoff, diluent, innkapslingsmaterial eller formuleringshjelpestoff av enhver type. Sammensetningene kan administreres parenteralt, intracisternalt, intravaginalt, intraperitonealt, topisk (så som ved hjelp av pulvere, salver, dråper eller et transdermalt plaster), rektalt, eller bukalt. Uttrykket "parenteral", som er anvendt heri, refererer til administ-rasjonsmåter som omfatter intravenøs, intramuskulær, intra-peritoneal, intrasternal, subkutan og intraartikulær injeksjon og infusjon.
Farmasøytiske sammensetninger for parenteral injeksjon omfatter farmasøytisk akseptable sterile vandige eller ikke-vandige løsninger, dispersjoner, suspensjoner eller emul-sjoner, samt sterile pulvere for rekonstitusjon i sterile injiserbare løsninger eller dispersjoner like før bruk. Eksempler på egnede vandige og ikke-vandige bærere, diluen-ter, løsningsmidler eller vehikler omfatter vann, etanol, polyoler (så som glycerol, propylenglykol, polyetylenglykol og lignende), karboksymetylcellulose og egnede blandinger derav, vegetabilske oljer (så som olivenolje) og injiserbare organiske estere så som etyloleat. Passende fluiditet kan opprettholdes for eksempel ved anvendelse av beleg-ningsmaterialer så som lecitin, ved opprettholdelse av den nødvendige partikkelstørrelse når det gjelder dispersjoner og ved anvendelse av surfaktanter.
Disse sammensetninger kan også inneholde adjuvanter så som konserveringsmidler, fuktemidler, emuleringsmidler og dis-pergeringsmidler. Forhindring av innvirkning av mikroorga-nismer kan besørges ved innlemmelse av forskjellige anti-bakterielle og antifungale midler, for eksempel paraben, klorbutanol, fenolsorbinsyre og lignende. Det kan også være ønskelig å inkludere isotoniske midler så som sukkerarter, natriumklorid og lignende. Forlenget absorpsjon av den injiserbare farmasøytiske form kan tilveiebringes ved å innlemme midler som forsinker absorpsjonen, så som aluminium-monostearat og gelatin.
Injiserbare depotformer fremstilles ved å danne mikroinn-kapslede matrikser av medikamentet i bionedbrytbare polymerer så som polylaktid-polyglykolid poly(ortoestere), poly-(anhydrides) og (poly)glykoler, så som PEG. Avhengig av forholdet mellom medikament og polymer og den anvendte polymers egenskaper, kan hastigheten for medikamentfrigi-velsen kontrolleres. Injiserbare depotformuleringer fremstilles også ved å innlemme medikamentet i liposomer eller mikroemulsjoner som er kompatible med kroppens vev.
De injiserbare formuleringer kan steriliseres, for eksempel ved filtrering gjennom et bakterietilbakeholdende filter, eller ved å innlemme steriliseringsmidler i form av sterile faste sammensetninger som kan oppløses eller dispergeres i sterilt vann eller et annet sterilt injiserbart medium like før bruk.
Topisk administrasjon omfatter administrasjon til huden eller slimhinnene, inklusive overfatene av lungene og øynene. Sammensetninger for topisk administrasjon, inklusive sammensetninger for inhalering, kan fremstilles som et tørt pulver som kan være trykksatt eller ikke-trykksatt. I ikke-trykksatte pulversammensetninger kan den aktive ingrediens i finfordelt form anvendes i blanding med en farma-søytisk akseptabel inert bærer av større størrelse, omfattende partikler som har en størrelse på for eksempel opp til 100 mikrometer i diameter. Egnede inerte bærere omfatter sukkerarter så som laktose. Med fordel har minst 95 vektprosent av partiklene i den aktive ingrediens en effektiv partikkelstørrelse i området 0,01 til 10 mikrometer.
Alternativt kan sammensetningen være trykksatt og inneholde en komprimert gass, så som nitrogen eller et flytende gass-drivstoff. Det flytende drivstoffmedium og faktisk hele sammensetningen er fortrinnsvis slik at den aktive ingrediens ikke oppløses deri i vesentlig grad. Den trykksatte sammensetning kan også inneholde et overflateaktivt middel, så som et flytende eller fast ikke-ionisk overflateaktivt middel eller kan være et fast anionisk overflateaktivt middel. Det er foretrukket å anvende det faste overflateaktive middel i form av et natriumsalt.
En ytterligere form av topisk administrasjon er til øyet. En forbindelse ifølge oppfinnelsen leveres i et farmasøy-tisk akseptabelt oftalmisk vehikkel, således at forbindelsen holdes i kontakt med den okulare overflate i tilstrekkelig lang tid til at forbindelsen skal kunne trenge igjen-nom hornhinnen og de indre regioner av øyet, som for eksempel det fremre kammer, bakre kammer, glass-legemet, humor aquosus, humor vitreus, cornea, iris/ciliarlegemet, lin-sene, choroidea/retina og sklera. Det farmasøytisk akseptable oftalmiske vehikkel kan for eksempel være en salve, en vegetabilsk olje eller et innkapslende material. Alternativt kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen injiseres direkte inn i humor vitreus og humor aquosus.
Sammensetninger for rektal eller vaginal administrasjon er fortrinnsvis suppositorier som kan fremstilles ved å blande forbindelsene ifølge denne oppfinnelse med egnede ikke-irriterende eksipienser eller bærere så som kakaosmør, polyetylenglyol eller en suppositoriumvoks som er fast ved romstemperatur, men flytende ved kroppstemperatur og derfor smelter i rektum eller det vaginale hulrom og frigir den aktive forbindelse.
Forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse kan også administreres i form av liposomer. Som kjent i faget, er liposomer generelt avledet fra fosfolipider eller andre lipid-substanser. Liposomene dannes ved mono- eller multi-lamel-lare hydratiserte flytende krystaller som dispergeres i et vandig medium. Ethvert ikke-toksisk, fysiologisk akseptabelt og metaboliserbart lipid som er istand til å danne liposomer, kan anvendes. Foreliggende sammensetninger i liposom form kan inneholde, i tillegg til en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse, stabilisatorer, konserveringsmidler, eksipienser og lignende. De foretrukne lipider er fosfolipidene og fosfatidylkolinene (lecitinene), både naturlige og syntetiske. Metoder for å danne liposomer er kjent i faget. Se for eksempel Prescott, Ed., Metods in
Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y.
(1976), s. 33 et seq.
Selv om forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan administreres som det eneste aktive farmasøytiske middel, kan de også anvendes i kombinasjon med et eller flere midler som konven-sjonelt administreres til pasienter for å behandle angiogene sykdommer. For eksempel er forbindelsene ifølge oppfinnelsen effektive på kort sikt for å gjøre tumorer mer sensitive overfor tradisjonelle cytotoksiske terapier så som kjemikalier og bestråling. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen også forsterke effektiviteten av eksisterende cytotoksiske anti-cancer adjuvantterapier. Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan også kombineres med andre antiangiogene midler for å forsterke deres effektivitet, eller kombineres med andre antiangiogene midler og administreres sammen med andre cytotoksiske midler. Spesielt når forbindelsene ifølge oppfinnelsen anvendes i behandlingen av faste tumorer, kan de administreres med IL-12, retinoider, interferoner, angiostatin, endostatin, talidomid, trombospondin-1, trombospondin-2, captopryl, angioinhibiner, TNP-470, pentosanpolysulfat, blodplatefaktor 4, LM-609, SU-5416, CM-101, Tecogalan, plasminogen-K-5, vasostatin, vitaxin, vasculostatin, squalamin, marimastat eller andre MMP-inhibitors, anti-neoplastiske midler så som alfa-inte-feron, COMP (cyklofosfamid, vincristin, metotrexat og prednison), etoposid, mBACOD (metortrexat, bleomycin, doxorubicin, cyklofosfamid, vincristin og dexametason), PRO-MACE/MOPP (prednison, metotrexat (w/leucovin-redningsut-styr), doxorubicin, cyklofosfamid, cisplatin, taksol, etoposid/mekloretamin, vincristin, prednison og prokarba-zin), vincristin, vinblastin og lignende samt med bestråling.
Den totale daglige dose av sammensetningene ifølge oppfinnelsen, som administreres til et menneske eller andre pattedyr i enkeltvise eller oppdelte doser, kan være i mengder for eksempel fra 0,0001 til 300 mg/kg kroppsvekt daglig og mer vanlig 1 til 300 mg/kg kroppsvekt.
Det bør være underforstått at midler som kan kombineres med forbindelsen ifølge foreliggende oppfinnelse for inhibisjon, behandling eller profylakse av angiogene sykdommer, ikke er begrenset til de som er angitt ovenfor, men omfatter i prinsipp ethvert middel som er nyttig for behandling eller profylakse av angiogene sykdommer.
Peptidene ifølge oppfinnelsen kan anvendes for utvikling av affinitetskolonner for isolasjon av reseptorer som er relevante for den antiangiogene aktivitet av peptidet ifølge oppfinnelsen, f.eks. TSP-l-reseptor, i for eksempel dyrkede endotele celler. Som kjent i faget, kan isolasjon og rensing av reseptoren etterfølges av aminosyresekvensering for å identifisere og isolere polynukleotider som koder for reseptoren. Rekombinant ekspresjon av denne reseptor vil kunne gjøre det mulig å fremstille større mengder av reseptor, f.eks. å fremstille en tilstrekkelig mengde til å anvende i høykapasitetsmasseundersøkelser for å identifisere andre angiogenese-inhibitorer.
Peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse kan være kjemisk koblet til isotoper, enzymer, bærerproteiner, cytotoksiske midler, fluorescerende molekyler, kjemisk luminescerende, bioluminescerende og andre forbindelser for mange forskjellige formål. For eksempel kan et peptid merkes for å under-lette testingen av dets evne til å binde antisera eller til å påvise celletyper som innehar en relevant reseptor. Koblingsteknikken velges generelt på basis av de funk-sjonelle grupper som er tilgjengelige på aminosyrene av peptidet, inklusive, men ikke begrenset til amino, sulf-hydral, karboksyl, amid, fenol og imidazol. Forskjellige reagenser som anvendes for å bevirke slike koblinger, omfatter bl.a. glutaraldehyd, diazodisert benzidin, karbo-diimid og p-benzokinon.
Effektiviteten av koblingsreaksjonen bestemmes ved hjelp av forskjellige teknikker som er passende for den spesifikke reaksjon. For eksempel radiomerking av peptidet med I<125>kan oppnås ved hjelp av kloramin T og Nal<125>av høy spesifikk aktivitet. Reaksjonen avsluttes med natriummetabisulfitt, og blandingen avsaltes på engangskolonner. Det merkede peptid elueres fra kolonnen, og fraksjoner oppsamles. Ali-kvoter tas fra hver fraksjon, og radioaktiviteten måles i en gammateller. På denne måte kan et merket peptid oppnås som er fritt for uomsatt Nal125.
Peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse kan også anvendes som antigener for å generere polyklonale eller monoklonale antistoffer. Slike antistoffer kan anvendes i diagnostiske metoder og utrustninger for å påvise eller kvantifisere peptidet ifølge oppfinnelsen, eller peptider som er beslek-tet med disse, i en kroppsvæske eller et vev. Resultatene fra disse tester vil kunne anvendes til diagnose eller bestemmelse av den prognostiske relevans av slike peptider.
Anvendelsen av peptidene ifølge foreliggende oppfinnelse til å generere monoklonale antistoffer i dyr, så som mus, kaniner eller får, følger teknikker som er velkjent i faget. Hvis ønskelig, kan antistoffene deretter anvendes for å fremstille anti-idiotype antistoffer som i sin tur kan humaniseres som kjent i faget for å forhindre immuno-logiske responser. De humaniserte antistoffer kan anvendes til å inhibere angiogenese eller til å fremstille utstyr ("kits") for å påvise reseptoren som beskrevet heri.
For fremstilling av polyklonale antisera i kaniner, får, gjeter eller andre dyr kobles peptidene ifølge oppfinnelsen for eksempel gjennom lysinrester, til renset bovint serumalbumin ved hjelp av glutaraldehyd. Effektiviteten av denne reaksjon kan bestemmes ved å måle inkorporasjonen av radio-merket peptid. Uomsatt glutaraldehyd og peptid kan separe-res ved dialyse, og konjugatet lagres for senere bruk. Serumprøver fra genereringen av polyklonale antisera eller medieprøver fra fremstillingen av monoklonale antisera kan analyseres for bestemmelse av antistofftiter og spesielt for bestemmelse av høytiter-antisera. Følgelig kan de høy-este titerantisera testes for å fastslå følgende: a) opti-mal antiserumfortynning for høyest spesifikk binding av antigenet og lavest ikke-spesifikk binding, b) evne til å binde økende mengder av peptid i en standard forskyvnings-kurve, c) potensiell kryss-reaktivitet med immunologisk be-slektede peptider og proteiner (inklusive plasminogen, TSP-1 og TSP-1 av relaterte arter) og d) evne til å påvise peptidet ifølge oppfinnelsen i ekstrakter av plasma, urin, vev og i cellekulturmedier.
Titer kan fastsettes på flere måter som er kjent i faget, så som ved "dot blot" og densitetsanalyse og også ved ut-felling av radiomerkede peptid-antistoffkomplekser ved hjelp av protein A, sekundære antisera, kald etanol eller trekull-dekstran etterfulgt av aktivitetsmåling med en gammateller. Hvis ønskelig kan de høyeste titerantisera renses på affinitetskolonner. For eksempel kan peptidene ifølge oppfinnelsen kobles til et kommersielt tilgjengelig resin og anvendes for å danne en affinitetskolonne. Antiserum-prøver kan deretter sendes gjennom kolonnen så at antistoffer til peptidene ifølge oppfinnelsen bindes (via peptidet) til kolonnen. Disse bundne antistoffer elueres deretter, oppsamles og evalueres for bestemmelse av titer og spesifisitet .
Utstyr for måling av forbindelsene ifølge oppfinnelsen er også ment å være en del av foreliggende oppfinnelse. Antisera som innehar den høyeste titer og spesifisitet og kan påvise peptidene ifølge oppfinnelsen i ekstrakter av plasma, urin, vev og i cellekulturmedier, kan anvendes til opprette undersøkelsesutstyr for hurtig, pålitelig, følsom og spesifikk måling og lokalisering av peptider ifølge oppfinnelsen. Disse undersøkelsesutrustninger kan benytte (men er ikke begrenset til) følgende teknikker: kompetitive og ikke-kompetitive undersøkelser, radioimmunoassay (RIA), bioluminescens- og kjemiluminescensundersøkelser, fluoro-metriske undersøkelser, "sandwich"-undersøkelser, immuno-radiometriske undersøkelser, "dot blot", enzymbundne under-søkelser inklusive ELISA, mikrotiterplater, antistoffbe-lagte strimler eller målepinner for hurtig overvåking av urin eller blod og immunocytokjemi. For hver utrustning fastsettes området, sensitiviteten, presisjonen, pålitelig-heten, spesifisiteten og reproduserbarheten av undersøkel-sen ved hjelp av midler som er velkjent for fagkyndige personer .
Den ovenfor beskrevne undersøkelsesutrustning bør tilveiebringe instruksjoner, antiserum, et eller flere peptider ifølge oppfinnelsen og muligens radiomerkede peptider ifølge oppfinnelsen og/eller reagenser for utfelning av bundne peptid/antistoffkomplekser. En slik utrustning vil kunne være nyttig for måling av peptidet ifølge oppfinnelsen i biologiske væsker og vevsekstrakter fra dyr og mennesker med og uten tumorer, hvilket er velkjent i faget.
En annen utrustning kan anvendes til å visualisere eller lokalisere peptidet ifølge oppfinnelsen i vev og celler. Immunohistokjemiske teknikker og utrustninger anvender for eksempel slike teknikker som er velkjent for personer med ordinære kunnskaper i faget. En slik utrustning tilveiebringer antisera til peptidet ifølge oppfinnelsen og muligens blokkerende serum og sekundært antiserum bundet til et fluorescerende molekyl så som fluoresceinisotiocyanat, eller til et annet reagens som anvendes for å visualisere det primære antiserum. Ved hjelp av denne metodologi kan biopsiderte tumorer undersøkes med hensyn til seter for peptidproduksjon eller seter for peptidreseptoren. Alternativt kan en utrustning tilveiebringe radiomerkede nuklein-syrer for anvendelse i hybridisering in situ for å sondere budbringer-RNA som koder for forbindelsen ifølge oppfinnelsen .
Syntese av peptidene
Polypeptidene ifølge foreliggende oppfinnelse kan synteti-seres ved hjelp av enhver teknikk som er kjent for fagkyndige personer. For fastfasisk peptidsyntese er en oppsummering av de mange teknikker å finne i J.M. Stewart og J.D. Young, Solid Phase Peptide Synthesis, W.H. Freeman Co. (San Francisco), 1963 og J. Meienhofer, Hormonal Proteins and Peptides, vol. 2, p. 46, Academic Press (New York), 1973. For klassisk oppløsningssyntese se G. Schroder og K. Lupke, Peptides, vol. 1, Acacemic Press (New York), 1965.
Reagenser, resiner, aminosyrer og aminosyrederivater er kommersielt tilgjengelige og kan kjøpes fra Chem-Impex International, Inc. (Wood Dale, IL, U.S.A.) eller Calbiochem-Novabiochem Corp. (San Diego, CA, U.S.A.) hvis intet annet er sagt heri.
Generelt omfatter disse metoder sekvensiell addisjon av en eller flere aminosyrer eller passende beskyttede aminosyrer til en voksende peptidkjede. Normalt beskyttes enten amino-eller karboksylgruppen i den første aminosyre av en egnet beskyttende gruppe. Den beskyttede eller derivatiserte aminosyre kan deretter enten bindes til et inert fast støtte-material eller utbyttes i løsning ved å tilsette den neste aminosyre i sekvensen som har den komplimentere (amino-eller karboksyl-) gruppe passende beskyttet, under betingelser som er egnet for å danne amidbindingen. Den beskyttende gruppe fjernes deretter fra denne nytilsatte amino-syrerest, og den neste aminosyre (passende beskyttet) tilsettes deretter og så videre. Etter at alle de ønskede aminosyrer er blitt bundet i passende sekvens, fjernes enhver gjenværende beskyttende gruppe (og ethvert fast støt-tematerial) sekvensielt eller simultant, for å gi det endelige polypeptid. Ved enkel modifisering av denne generelle prosedyre er det mulig å addere mer enn én aminosyre ad gangen til en voksende kjede, for eksempel ved å koble (under betingelser som ikke racemiserer chirale sentere) et beskyttet tripeptid med et passende beskyttet dipeptid for å danne, etter avbeskyttelse, et pentapeptid.
En spesielt foretrukken metod for å fremstille forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse omfatter fastfasisk peptidsyntese.
I denne spesielt foretrukne metode beskyttes alfa-aminofunksjonen av en syre- eller base-sensitiv gruppe. Slike beskyttende grupper bør har den egenskap at de er stabile overfor betingelsene for peptidbindingsdannelse, samtidig som de med letthet kan fjernes uten å ødelegge den voksende peptidkjede eller racemisere noen av de chirale sentere som forekommer deri. Egnede beskyttende grupper er 9-fluorenyl-metyloksykarbonyl (Fmoc), t-butyloksykarbonyl (Boe), benzyloksykarbonyl (Cbz), bifenylisopropyl-oksykarbonyl, t-amyloksykarbonyl, isobornyloksykarbonyl, (a,a)-dimetyl-3,5-dimetoksybenzyloksykarbonyl, o-nitrofenylsulfenyl, 2-cyano-t-butyloksykarbonyl og lignende. Den beskyttende gruppe 9-fluorenylmetyloksykarbonyl (Fmoc) er foretrukket.
Spesielt foretrukne sidekjede-beskyttende grupper er, for sidekjede-aminogrupper som i lysin og arginin: 2,2,5,7,8-pentametylkroman-6-sulfonyl (pmc), nitro, p-toluensulfonyl, 4-metoksybenzensulfonyl, Cbz, Boe og adamantyloksykarbonyl; for tyrosin: benzyl, o-brombenzyloksykarbonyl, 2,6-diklor-benzyl, isopropyl, t-butyl (t-Bu), cykloheksyl, cyklopenyl og acetyl (Ac); for serin: t-butyl, benzyl og tetrahydro-pyranyl; for histidin: trityl, benzyl, Cbz, p-toluensulfonyl og 2,4-dinitrofenyl; for tryptofan: formyl og Boe.
I den fastfasiske peptidsyntesemetode bindes den C-terminale aminosyre til et egnet fast støttematerial eller resin. Egnede faste støttematerialer som er nyttige for ovennevnte syntese, er de materialer som er inerte overfor rea-gensene og reaksjonsbetingelsene i de trinnvise kondensa-sjons-avbeskyttelsesreaksjoner, samt uløselige i de anvendte medier. Det foretrukne faste støttematerial for syn tese av C-terminale karboksypeptider er 4-hydroksymetyl-fenoksymetyl-kopoly(styren-1% divinylbenzen). Det foretrukne faste støttematerial for C-terminale amidpeptider er 4- (2',4'-dimetoksyfenyl-Fmoc-aminometyl)fenoksy-acetamido-etylresin tilgjengelig fra Applied Biosystems.
Den C-terminale aminosyre kobles til resinet ved hjelp av N,N'-dicykloheksylkarbodiimid (DCC), N, N'-diisopropylkarbo-diimid (DIC) eller O-benzotriazol-l-yl-N,N,n' ,n'-tetrametyluroniumheksafluorfosfat (HBTU), med eller uten 4-dimetylaminopyridin (DMAP), 1-hydroksybenzotriazol (HOBT), benzotriazol-l-yloksy-tris(dimetylamino)fosfonium-heksafluorfosfat (BOP) eller bis(2-okso-3-oksazolidinyl)-fosfinklorid (B0PC1), mediert kobling i fra ca. 1 til ca. 24 timer ved en temperatur av mellom 10° og 50°C i et løsningsmiddel så som diklormetan eller DMF. Når det faste støttematerial er 4-(2', 4 '-dimetoksyfenyl-Fmoc-aminometyl) - fenoksyacetamidoetylresin, spaltes Fmoc gruppen med et sekundært amin, fortrinnsvis piperidin, før koblingen med den C-terminale aminosyre som beskrevet ovenfor. Den foretrukne metode for kobling til det avbeskyttede 4-(2',4'-dimetoksyfenyl-Fmoc-aminometyl)fenoksyacetamido-etylresin er O-benzotriazol-l-yl-N,N,n',N'-tetrametyl-uroniumheksafluorfosfat (HBTU, 1 ekv.) og 1-hydroksybenzotriazol (HOBT, 1 ekv.) i DMF.
Koblingen av suksessive beskyttede aminosyrer kan utføres i en automatisk polypeptidsyntese som er velkjent i faget. I en foretrukken utførelsesform beskyttes a-aminofunksjonen i aminosyrene av den voksende peptidkjede med Fmoc. Fjerning av den Fmoc-beskyttende gruppe fra den N-terminale side av det voksende peptid utføres ved behandling med et sekundært amin, fortrinnsvis piperidin. Hver beskyttede aminosyre innføres deretter i ca. 3-foldig molart over-skudd, og koblingen utføres fortrinnsvis i DMF. Koblings-middelet er normalt O-benzotriazol-l-yl-N,N,N',N'-tetra-metyluroniumheksafluorfosfat (HBTU, 1 ekv.) og 1-hydroksybenzotriazol (HOBT, 1 ekv.).
Mot slutten av fastfasesyntesen fjernes polypeptidet fra resinet og avbeskyttes, enten påfølgende eller i en eneste operasjon. Fjerning av polypeptidet og avbeskyttelse kan oppnås i en eneste operasjon ved å behandle det resinbundne polypeptid med et spaltningsreagens, for eksempel tianisol, vann, etanditiol og trifluoreddiksyre.
I tilfeller hvor C-terminusen av polypeptidet er et alkyl-amid, spaltes resinet ved aminolyse med et alkylamin. Alternativt kan peptidet fjernes ved transesterifikasjon, f.eks. med metanol, etterfulgt av aminolyse eller ved direkte transamidasjon. Det beskyttede peptid kan renses ved dette punkt eller tas til det neste trinn direkte. Fjerning av de sidekjedebeskyttende grupper utføres ved hjelp av spaltningsblandingen beskrevet ovenfor.
Det fullt avbeskyttede peptid renses ved en sekvens av kro-matografiske trinn under anvendelse av en eller alle av de følgende måter: ionebytte på et svakt basisk resin i acet-atform; hydrofob adsorpsjonskromatografi på uderivatisert polystyren-divinylbenzen (for eksempel Amberlite® XAD); silikageladsorpsjonskromatografi; ionebyttekromatografi på karboksymetylcellulose; fordelingskromatografi, f.eks. på Sephadex® G-25, LH-20 eller motstrømsdistribusjon; Høy-ytelsesvæskekromatografi (HPLC), spesielt reverfasisk HPLC på oktyl- eller oktadecylsilyl-silikabundet fasekolonne-pakking.
Følgende eksempler vil tjene til å ytterligere illustrere fremstillingen av de nye forbindelser ifølge oppfinnelsen.
Fremstilling av spaltningsreagenset
Spaltningsreagenset (2 ml) fremstilles ved å blande, i føl-gende rekkefølge, tioanisol (100 yl), vann (50 yl), etanditiol (50 yl) og trifluoreddiksyre (1,8 ml). Den nyfrem-stilte blanding avkjøles til -5°C til -10°C og anvendes som beskrevet nedenfor.
Spaltnings- og avbeskyttelsesprosedyre
En blanding av resin-bundet polypeptid og spaltningsreagens omrøres ved 0°C i 10-15 minutter og deretter ved omgivelsestemperatur i ytterligere 1,75 timer. Tiden økes med 0,5 time for hvert ytterligere arginin opp til sammenlagt tre timer. Mengden av spaltningsreagens som anvendes bestemmes ved hjelp av følgende formel:
Resinet avfiltreres deretter og renses med ublandet trifluoreddiksyre. Filtratet tilsettes deretter i 0,5 ml porsjoner til et sentrifugerør inneholdende ca. 8 ml kald dietyleter. Suspensjonen sentrifugeres deretter, og super-natanten avdekanteres. Bunnfallet suspenderes på nytt i ca. 8 ml eter, ytterligere 0,5 ml av filtratet, og prosessen gjentas inntil alt peptid er utfelt. Det utfelte filtrat vaskes dereetter med eter, tørkes og lyofiliseres.
Hvis peptidet ikke faller ut ved tilsetning til eter, rystes blandingen med vandig 30% eddiksyre. Den organiske fase ekstraheres deretter to ganger med vandig 30% eddiksyre, og de kombinerte vandige ekstrakter lyofiliseres.
Eksempel 1
I peptidsyntesekolonnens posisjon i et Perkin Eimer/Applied Biosyntese Synergy®-peptidsyntetiseringsapparat anbringes en Pro(2-ClTrt)-peptidsyntesekolonne (25 uM aminosyre; Nova Biochem). Aminosyrer tilsettes sekvensielt i henhold til følgende syntetiske cyklus: 1. Oppløsning av resinet ved hjelp av DMF i ca. 5 minutter; 2. Vasking med DMF i ca. 5 minutter; 3. Aktivering av den innkommende Fmoc-beskyttede aminosyre (75 uM) ved hjelp av en 0,2 M løsning av HBTU (75 uM) og HOBT (75 uM) i DMSO-NMP (N-metylpyrrolidon); 4. Kobling ved hjelp av en løsning i DMF av den aktiverte Fmoc-beskyttede aminosyre fremstilt i trinn 3 ovenfor
i ca. 30 minutter;
5. Vasking med DMF i 5 minutter; og
6. For peptider innkapslet med acetyl ved N-terminusen, anvende eddiksyre (87 uM) istedenfor en Fmoc-beskyttet
aminosyre og anvende 87 uM av hver av HBTU og HOBT.
7. For peptider innkapslet med etylamid ved C-terminusen, tilsette DMF til resinet etterfulgt av ByProp (1,1
ekvivalenter) og etylamin (20 ekvivalenter) i THF. Aminosyrene ble koblet til resinet i følgende rekkefølge under anvendelse av betingelsene som er angitt.
Ved fullførelsen av syntesen ble resinet vasket med THF i ca. 5 minutter for å fjerne DMF og krympe resinet. Resinet ble deretter gasstørket med argon i ca. 10 minutter og nitrogen i ytterligere 10 minutter for å tilveiebringe det resinbundne peptid (85 mg). Spaltning og avbeskyttelse ut-føres ved hjelp av prosedyren beskrevet ovenfor (40 mg av tørt resin-bundet peptid, 700 yl spaltningsreagens, spalt-ningstid 2,5 timer) for å tilveiebringe råpeptidet (14 mg). Rensing ved hjelp av HPLC med en 7ym Symmetry Prep C18-kolonne (7,8x300 mm) med løsningsmiddelblandinger i en gradient varierende fra 5% til 100% acetonitril-vann over en periode på 50 minutter etterfulgt av lyofilisering gav det ønskede peptid.
De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 26,5 min (10% til 40% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA, i en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>.
Eksempel 2
Det ønskede peptid ble fremstilt under anvendelse av betingelsene beskrevet for Eksempel 1. Aminosyrene ble koblet til resinet i følgende rekkefølge under anvendelse av de angitte betingelser.
De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe pyroGlu-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 23,5 min (gradient fra 10% til 40% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA, under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>.
Eksempel 3
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av metylamin (2,0 M løsning i THF) istedenfor etylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-
Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH3som
trifluoracetatsalt: Rt = 3,224 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 930 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,09 Sar; 1,03 Gly; 0,98 Val; 0,98 Ile; 0,54 Thr; 1,72 Nva; 1,01 Arg; 1,08 Pro.
Eksempel 4
N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av isopropylamin istedenfor etylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekroma-tografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHIsopropyl som trifluoracetatsalt: Rt = 3,648 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,10 Sar; 0,99 Gly; 0,96 Val; 1,88 Ile; 0,56 Thr; 1,67 Nva; 0,96 Arg; 1,09 Pro.
Eksempel 5
Resinfremstilling
4-(4-Formyl-3-metoksyfenoksy)butyryl-AM-resin (0,5 g, 0,54 mmol/g substitusjon) ble anbragt i et reaksjonskar for fastfasesyntese inneholdende (9:1) DMA/eddiksyre (4 ml). Blandingen ble rystet i 5 min. Resinet ble tørrlagt, og denne prosess ble gjentatt tre ganger. Til det oppsvulmede resin ble tilsatt 10-15 korn av aktivert 4A molekylsikt og
(9:1) DMA/eddiksyre (4ml) og 10 molarekvivalenter av l-(2-aminoetyl)pyrrolidin. Oppslemmingen ble rystet i lh ved rt, og til dette ble tilsatt 10 molarekvivalenter av natriumtriacetoksyborhydrid. Oppslemmingen ble rystet i 2 h ved rt. Resinet ble tørrlagt og vasket tre ganger med DMA, tre ganger med metanol, tre ganger med diklormetan, tre ganger med dietyleter og tørket in vacuo ved rt over natten. Det tørre resin ble oppsvulmet i DMA (4 ml) og rystet i 5 min. Denne prosess ble gjentatt to ganger.
Kobling av Fmoc- Pro
Til det oppsvulmede resin i reaksjonskaret ble tilsatt sekvensielt følgende kjemikalier: DMA (4 ml), en ekvivalent av DIEA, en DMA-løsning inneholdende 3,0 ekvivalenter av Fmoc-Pro, 3,0 ekvivalenter av HATU og 3,0 ekvivalenter av DIEA. Oppslemmingen ble rystet over natten. Resinet ble tørrlagt og vasket tre ganger med DMA, tre ganger med metanol, tre ganger med diklormetan, tre ganger med dietyleter og tørket in vacuo ved rt over natten. En liten del av resinet ble anvendt for å bestemme Fmoc-Pro-belastningen. Resten av resinet ble rystet med DMA (4 ml) tre ganger i 5 min og deretter i 1 h ved rt med en løsning av (8:1:1) DMA/pyridin/eddiksyreanhydrid (5 ml). Resinet ble tørrlagt og vasket tre ganger med DMA, tre ganger med metanol, tre ganger med diklormetan og tre ganger med dietyleter. Resinet ble tørket in vacuo ved rt over natten og deretter anvendt i den påfølgende fastfasiske peptidsyntese.
Syntese av ovennevnte peptid
I syntesen av ovennevnte peptid var aminosyrene, koblings-betingelsene og den anvendte synteseprotokoll identisk med det som er beskrevet i Eksempel 1. Ved fullførelsen av syntesen ble peptidet og de beskyttende grupper spaltet ved rt ved hjelp av (95:5) TFA/anisol (3 ml) i 3h. Resinet ble filtrert og vasket tre ganger med metanol. De kombinerte filtrater ble konsentrert in vacuo, og til residuet ble tilsatt dietyleter. Den faste utfeining ble filtrert. Råproduktet ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHetyl(1-pyrro-lidin) som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 4,40 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inne 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1063 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,95 Sar; 1,0 Gly; 0,86 Val; 1,63 Ile; 0,56 Thr; 1,38 Nva; 0,88 Arg; 1,07 Pro.
Eksempel 6
Prosedyren beskrevet i Eksempel 5 ble benyttet, men under anvendelse av 1-(2-amino-etyl)piperidin istedenfor l-(2-aminoetyl)pyrrolidin i det reduktive alkyleringstrinn. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolon-nekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblan-ding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHetyl-(1-piperidin) som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 4,437 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1077 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,11 Sar; 1,04 Gly; 0,99 Val; 1,77 Ile; 0,61 Thr; 1,61 Nva; 0,97 Arg; 1,10 Pro.
Eksempel 7
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av (aminoetyl)cyklopropan istedenfor 1-(2-amino-etylpyrrolidin). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løs-ningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHmetylcyklopropyl som trifluoracetatsalt: Rt = 3,815 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1020 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,01 Sar; 0,96 Gly; 0,96 Val; 1,66 Ile; 0,53 Thr; 1,65 Nva; 1,08 Arg; 1,0 9 Pro.
Eksempel 8
Prosedyren beskrevet i Eksempel 5 ble benyttet, men under anvendelse av (R)-1-cykloksyletylamin istedenfor l-(2-aminoetylpyrrolidin). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(R)-cykloheksyl som trifluoracetatsalt: Rt = 5,196 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1076 (M+H)<+>; Aminosyre analyse: 1,19 Sar; 0,99 Gly; 0,62 Val; 1,47 Ile; 0,48 Thr; 1,57 Nva; 1,01 Arg; 0,83 Pro.
Eksempel 9
Prosedyren beskrevet i Eksempel 5 ble benyttet, men under anvendelse av O-TBDMS-etanolamin istedenfor 1-(2-aminoetyl-pyrrolidin). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løs-ningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH(2-hydroksyetyl) som trifluoracetatsalt: Rt = 4,04 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1010 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,04 Sar; 1,01 Gly; 0,98 Val; 1,59 Ile; 0,44 Thr; 1,45 Nva; 0,99 Arg; 1,0 6 Pro.
Eksempel 10
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Pro-Sieber-amidresin istedenfor H-Pro-2-ClTrt-resin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml), ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH2som trifluoracetatsalt: Rt = 4,063 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 966 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,87 Sar; 0,98 Gly; 0,94 Val; 1,73 Ile; 0,47 Thr; 1,35 Nva; 1,02 Arg; 1,05 Pro.
Eksempel 11
Prosedyren beskrevet i Eksempel 5 ble benyttet, men under anvendelse av 2-metoksy-etylamin istedenfor l-(2-amino-etylpyrrolidin). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH2-OCH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,40 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,02 Sar; 1,06 Gly; 0,97 Val; 1,54 Ile; 0,47 Thr; 1,81 Nva; 0,97 Arg; 1,25 Pro.
Eksempel 12
Prosedyren beskrevet i Eksempel 5 ble benyttet, men under anvendelse av cykloheksyletylamin istedenfor l-(2-amino-etylpyrrolidin). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH2-cykloheksyl som trif luoracetatsalt: Rt = 4,97 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1076 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,87 Sar; 1,00 Gly; 0,88 Val; 1,34 Ile; 0,44 Thr; 1,61 Nva; 1,07 Arg; 1,05 Pro.
Eksempel 13
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av propylamin istedenfor etylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,68 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4Ac i en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,94 Sar; 1,09 Gly; 0,96 Val; 1,58 Ile; 0,51 Thr; 1,78 Nva; 0,96 Arg; 1,2 3 Pro.
Eksempel 14
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 22,5 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,95 Sar; 0,96 Gly; 0,97 Val; 0,99 Ile; 0,54 Thr; 1,66 Nva; 1,14 Arg; 1,08 Pro.
Eksempel 15
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,54 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,00 Sar; 0,93 Gly; 0,96 Val; 1,02 Leu; 0,58 Thr; 1,50 Nva; 0,99 Ile; 1,14 Arg; 1,08 Pro.
Eksempel 16
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ile istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,28 min (gradient fra 10% til 30% aceto nitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,95 Sar; 0,94 Gly; 0,89 Val; 1,70 Ile; 0,52 Thr; 1,67 Nva; 0,99 Ile; 1,27 Arg; 1,06 Pro.
Eksempel 17
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gly istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-Gly-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 2,47 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 938 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,10 Sar; 1,94 Gly; 1,03 Val; 0,98 Ile; 0,54 Thr; 1,61 Nva; 1,28 Arg; 1,05 Pro.
Eksempel 18
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Val istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Val-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,13 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 980 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,07 Sar; 1,0 Gly; 2,01 Val; 0,99 Ile; 0,62 Thr; 1,54 Nva; 1,49 Arg; 1,11 Pro.
Eksempel 19
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-allolle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,174 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,02 Sar; 0,99 Gly; 0,95 Val; 1,29 Ile; 0,45 Thr; 1,52 Nva; 1,54 Arg; 1,07 Pro.
Eksempel 20
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Ala istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ala-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,826 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 952 (M)<+>og 908 (M-44) + .
Eksempel 21
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Lys(Boe) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Lys-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,544 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1009 (M)<+>og 965 (M-44)<+>.
Eksempel 22
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Met istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Met-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,141 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1012 (M)<+>.
Eksempel 23
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Nle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Nle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,383 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 994 (M)<+>.
Eksempel 24
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Phe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Phe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,476 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1028 (M)<+>.
Eksempel 25
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Trp(Boe) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Trp-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,430 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1024 (M)<+>.
Eksempel 2 6
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Tyr(2-ClTrt) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Tyr-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 964 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1045 (M)<+>.
Eksempel 27
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-4,4'-BifenylAla istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-4,4'-Bifenylala -Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,005 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1104 (M)<+>.
Eksempel 28
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Cha istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Cha-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 5,005 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1034 (M)<+>.
Eksempel 2 9
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Chg istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Chg-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,377 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 977 (M)<+>.
Eksempel 30
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-4-ClPhe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-4-ClPhe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,674 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1018 (M)<+>.
Eksempel 31
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Hphe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Hphe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,597 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1042 (M)<+>og 998 (M-44) + .
Eksempel 32
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-DehydroLeu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-Dehydroleu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,1707 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 992 (M)<+>og 949 (M-44)<+>.
Eksempel 33
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-3-CF3Phe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3-CF3Phe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,825 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1097 (M)<+>og 1053 (M-44)<+>.
Eksempel 34
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-pentaFPhe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-pentaFPhe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,810 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1118 (M)<+>og 1075 (M-44)<+>. Eksempel 35
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-3,4-diClPhe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3,4-diClPhe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,911 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1100 (M+3)<+>.
Eksempel 36
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-3-ClPhe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3-ClPhe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,689 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1062 (M)<+>.
Eksempel 37
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-2-TienylAla istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-2-Tienylala-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4, 388 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1034 (M)<+>.
Eksempel 38
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-3-CN-Phe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3-CNPhe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,361 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1009 (M)<+>.
Eksempel 39
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-3,3'-DifenylAla istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3,3'-Difenylala-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,778 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1104 (M)<+>.
Eksempel 4 0
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-3-BenzotienylAla istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3-Benzotienylala-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,797 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1084
(M) + .
Eksempel 41
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-3,4-diF-Phe istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3,4-diF-Phe-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4, 608 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1064
(M)<+>.
Eksempel 42
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-DNva istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-DNva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,75 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,08 Sar; 0,96 Gly; 0,95 Val; 1,74 Ile; 0,50 Thr; 1,69 Nva; 1,26 Arg; 1,09 Pro.
Eksempel 4 3
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 047 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1023 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,15 Sar; 0,96 Gly; 0,63 Val; 1,7 Ile; 0,46 Thr; 0,65 Glu; 1,45 Arg; 1,04 Pro.
Eksempel 4 4
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Cha istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Cha-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4, 503 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1048 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,18 Sar; 0,94 Gly; 0,59 Val; 1,65 Ile; 0,45 Thr; 0,37 Cha; 1,45 Arg; 1,06 Pro.
Eksempel 4 5
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gly istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gly-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,11 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 952 (M+H)<+>.
Eksempel 4 6
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ala istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Ala-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,16 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 966 (M+H)<+>.
Eksempel 4 7
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Val istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Val-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,36 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>.
Eksempel 4 8
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Abu istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Abu-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,23 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 980 (M+H)<+>.
Eksempel 4 9
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-AltlGly istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Altlgly-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,40 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 992 (M+H)<+>.
Eksempel 50
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-OktylGly istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Oktylgly-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,30 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1064 (M+H)<+>. Eksempel 51
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Met istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Met-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,48 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1027 (M+H)<+>)<+>.
Eksempel 52
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av cykloheksyleddiksyre istedenfor eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Cykloheksylacetyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 5,11 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1076 (M+H)<+>)<+>; Aminosyreanalyse: 1,15 Sar; 0,97 Gly; 0,95 Val; 1,79 Ile; 0,54 Thr; 1,66 Nva; 1,28 Arg; 1,08 Pro.
Eksempel 53
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av 2-Me-nikotinsyre istedenfor eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-(2-Me-Nikotinyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,11 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1071 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,19 Sar; 1,01 Gly; 0,99 Val; 1,79 Ile; 0,57 Thr; 1,70 Nva; 1,59 Arg; 1,17 Pro.
Eksempel 54
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under acylering av peptidresinet (etter Fmoc-Sar koblingen og avbeskyttelsen) med en (1:1) ravsyreanhydrid/pyridin-blanding (2 ml) over natten. Etter vasking av resinet og spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,72 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1052 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,16 Sar; 1,05 Gly; 0,95 Val; 1,85 Ile; 0,57 Thr; 1,70 Nva; 1,59 Arg; 1,17 Pro.
Eksempel 55
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av nikotinsyre istedenfor eddiksyre ved den siste kobling. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Nikotinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,6 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1057 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,03 Sar; 0,89 Gly; 0,81 Val; 1,48 Ile; 0,40 Thr; 1,46 Nva; 1,07 Arg; 1,04 Pro.
Eksempel 56
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av propionsyre istedenfor eddiksyre ved den siste kobling. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Propionyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,7 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008
(M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,93 Sar; 0,97 Gly; 0,88 Val; 1,60 Ile; 0,44 Thr; 1,58 Nva; 1,17 Arg; 1,10 Pro.
Eksempel 57
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av metoksyeddiksyre istedenfor eddiksyre ved den siste kobling. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-MeOacetyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,45 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,12 Sar; 1,06 Gly; 0,94 Val; 1,62 Ile; 0,48 Thr; 1,91 Nva; 1,40 Arg; 1,27 Pro.
Eksempel 58
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av shikimsyre istedenfor eddiksyre ved den siste kobling. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Shikimyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,0 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1108
(M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,22 Sar; 1,06 Gly; 0,94 Val; 1,80 Ile; 0,55 Thr; 1,70 Nva; 1,28 Arg; 1,26 Pro.
Eksempel 59
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av 2-furoinsyre istedenfor eddiksyre ved den siste kobling. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-(2-Furoyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,0 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1046 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,02 Sar; 1,00 Gly; 0,99 Val; 1,66 Ile; 0,45 Thr; 1,75 Nva; 1,45 Arg; 1,21 Pro.
Eksempel 60
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av smørsyre istedenfor eddiksyre ved den siste kobling. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Butyryl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,03 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1022
(M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,13 Sar; 0,99 Gly; 1,01 Val; 1,93 Ile; 0,67 Thr; 1,61 Nva; 1,45 Arg; 1,08 Pro.
Eksempel 61
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av tetrahydro-2-furoinsyre istedenfor eddiksyre ved den siste kobling. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi i en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-(tetrahydro-2furoyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,91 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1050 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,12 Sar; 0,97 Gly; 0,88 Val; 1,41 Ile; 0,42 Thr; 1,60 Nva; 1,43 Arg; 1,03 Pro.
Eksempel 62
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under kobling med Fmoc-8-amino-3,6-diokso-okatansyre etter Fmoc-Sar-koblingen, etter fjerning av det terminale Fmoc ble peptidresinet koblet med eddiksyre som beskrevet ovenfor. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N- [CH3C (0) NH- (CH2) 2-0- (CH2) 2-0-CH2-C (0) ] -Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,32 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1139 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,04 Sar; 1,01 Gly; 0,91 Val; 1,67 Ile; 0,53 Thr; 1,77 Nva; 1,39 Arg; 1,02 Pro.
Eksempel 63
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under kobling med Fmoc-6-amino-heksansyre etter Fmoc-Sar-koblingen, etter fjerning av det terminale Fmoc ble peptidresinet koblet med eddiksyre som beskrevet ovenfor. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N- [6-N -Acetyl-(CH2) 5C (0)]-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,60 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1107 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,13 Sar; 0,96 Gly; 0,89 Val; 1,42 Ile; 0,43 Thr; 1,68 Nva; 1,44 Arg; 1,04 Pro.
Eksempel 64
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av heksansyre istedenfor eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Heksanoyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,95 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1050 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,07 Sar; 0,93 Gly; 1,02 Val; 1,95 Ile; 0,56 Thr; 1,31 Nva; 1,52 Arg; 1,05 Pro.
Eksempel 65
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under kobling med Fmoc-4-amino-smørsyre etter Fmoc-Sar-koblingen, etter fjerning av det terminale Fmoc ble peptidresinet koblet med eddiksyre som beskrevet ovenfor. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi i en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-[4-n'-Acetyl-butyryl]-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,09 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1079 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,03 Gaba; 1,07 Sar; 0,93 Gly; 1,00 Val; 1,90 Ile; 0,54 Thr; 1,30 Nva; 1,54 Arg; 1,06 Pro.
Eksempel 66
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under utelatelse av eddiksyrekoblingen ved slutten. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe H-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som bistrifluoracetatsalt: Rt = 3,65 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 952 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,00 Sar; 1,00 Gly; 0,99 Val; 1,67 Ile; 0,50 Thr; 1,76 Nva; 1,47 Arg; 1,22 Pro.
Eksempel 67
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asn(Trt) istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Asn-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som bistrif luoracetatsalt: Rt = 2,45 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1009 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,05 Sar; 0,98 Gly; 0,96 Asp; 1,7 Ile; 0,48 Thr; 1,54 Nva; 1,32 Arg; 1,07 Pro.
Eksempel 68
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-8-amino-3,6-diokso-okatansyre istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N- [CH3C (0) NH- (CH2) 2-0- (CH2) 2-0-CH2-C (0) ] - Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,12 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1068 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,93 Gly; 1,02 Val; 1,97 Ile; 0,57 Thr; 1,31 Nva; 1,54 Arg; 1,05 Pro.
Eksempel 69
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Pro istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Pro-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,30 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1020 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,92 Gly; 0,99 Val; 1,80 Ile; 0,50 Thr; 1,32 Nva; 1,53 Arg; 2,09 Pro.
Eksempel 70
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gly istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Gly-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,08 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 980 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,89 Gly; 1,02 Val; 1,91 Ile; 0,52 Thr; 1,35 Nva; 1,57 Arg; 1,09 Pro.
Eksempel 71
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ala istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Ala-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,00 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 1,01 Ala; 0,93 Gly; 1,01 Val; 1,92 Ile; 0,56 Thr; 1,30 Nva; 1,51 Arg; 1,05 Pro.
Eksempel 72
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-NEtGly istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-NEtGly-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,24 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,95 Gly; 1,04 Val; 1,99 Ile; 0,59 Thr; 1,34 Nva; 1,50 Arg; 1,01 Pro.
Eksempel 73
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Leu-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4, 348 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,88 Sar; 0,99 Gly; 0,95 Val; 1,03 Ile; 0,55 Thr; 1,12 Leu; 1,53 Arg; 1,07 Pro.
Eksempel 74
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,963 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 982 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,91 Sar; 0,97 Gly; 1,00 Val; 1,03 Ile; 0,56 Thr; 0,23 Ser; 1,52 Arg; 1,08 Pro.
Eksempel 75
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Ala-Sieber-amidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt: Rt = 4,117 min (gradient fra 10% til
30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1037 (M+H)<+>; Aminosyreanalyse: 0,85 Sar; 0,94 Gly; 0,92 Val; 1,83 Ile; 0,54 Thr; 1,18 Nva; 1,01 Arg; 1,04 Pro; 1,01 Ala.
Eksempel 7 6
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Pro-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-D-Pro-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,20 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M+H)<+>.
Eksempel 77
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Abu-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi i en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-AbuNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,35 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 982 (M+H)<+>.
Eksempel 78
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Phe-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Phe-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,73 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1044 (M+H)<+>.
Eksempel 7 9
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Tic-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Tic-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,68 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1056 (M+H)<+>.
Eksempel 80
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Hyp-Sieber-etylamidresin istedenfor
Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Hyp-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,95 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1010 (M+H)<+>.
Eksempel 81
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Aib-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Aib-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 4,25 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 982 (M+H)<+>.
Eksempel 82
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Ala-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-D-Ala-NHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,95 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 968 (M+H)<+>.
Eksempel 83
Prosedyren beskrevet i Eksempel 10 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Pip-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-Pro-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pip-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,30 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M+H)<+>.
Eksempel 84
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Tyr(Et) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Tyr(Et)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 6,01 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1072 (M)<+>.
Eksempel 85
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Cys(tBu) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Cys(tBu)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,96 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1040 (M)<+>.
Eksempel 86
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Cys(Acm) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Cys(Acm)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,12 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1044 (M)<+>.
Eksempel 87
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Tyr(Bzl) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Tyr(Bzl)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 6,74 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1135 (M+H)<+>.
Eksempel 88
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Ser(Bzl) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ser(Bzl)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,95 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1058 (M)<+>.
Eksempel 89
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-lNal istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-lNal-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 6,30 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1081 (M+3)<+>.
Eksempel 90
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-tButylGly istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-tButylgly-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,46 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 994 (M)<+>.
Eksempel 91
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Orn(Boe) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Orn-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 1,69 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 995 (M)<+>.
Eksempel 92
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Thr(Bzl) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Thr(Bzl)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 6,10 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1072 (M)<+>.
Eksempel 93
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-2Nal istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-2Nal-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 6,33 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (APCI) m/e 1078 (M)<+>.
Eksempel 94
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Phe(4-Me) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Phe(4-Me)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 654 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1042 (M)<+>.
Eksempel 95
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Phe(3,4-diMeO) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Phe(3,4-diMeO)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,006 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1088 (M)<+>.
Eksempel 96
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Phe(3,4,5-triF) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Phe(3,4,5-triF)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,848 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1082 (M)<+>.
Eksempel 97
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Phe(4-N02) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Phe (4-N02) -Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 483 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1073 (M)<+>.
Eksempel 98
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Pen(Trt) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 928 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1012 (M)<+>.
Eksempel 99
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Pen(Acm) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(Acm)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,415 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1083 (M)<+>.
Eksempel 100
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Pen(Bzl) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Pen(Bzl)-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,124 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1102 (M)<+>.
Eksempel 101
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Abu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Abu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 533 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 966 (M)<+>.
Eksempel 102
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Phe(4-Boc-NH2) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Phe (4-NH2) -Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 545 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1043 (M)<+>.
Eksempel 103
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ala istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ala-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 675 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 952 (M)<+>.
Eksempel 104
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Gln-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,46 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1009 (M)<+>.
Eksempel 105
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Met istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Met-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,219 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1012 (M)<+>.
Eksempel 106
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Phe istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Phe-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 579 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1028 (M)<+>.
Eksempel 107
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Pro istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Pro-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 704 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 978 (M)<+>.
Eksempel 108
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ser-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,510 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 968 (M)<+>.
Eksempel 109
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Trp(Boe) istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Trp-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 625 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1067 (M)<+>.
Eksempel 110
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Tyr(tBu) istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Tyr-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,017 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1044 (M)<+>.
Eksempel 111
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Nva istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Nva-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,139 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 980 (M)<+>.
Eksempel 112
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asp(OtBu)-0H istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Asp-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 082 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 996 (M)<+>.
Eksempel 113
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gly istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Gly-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 623 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 938 (M)<+>.
Eksempel 114
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Lys(Ac) istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Lys(Ac)-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 599 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1051 (M)<+>.
Eksempel 115
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Leu-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 403 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M)<+>.
Eksempel 116
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-2Nal istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-2Nal-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,198 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1078 (M)<+>.
Eksempel 117
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-lNal istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-lNal-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4,217 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1078 (M)<+>.
Eksempel 118
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-AltlGly istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Altlgly-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 993 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 978 (M)<+>.
Eksempel 119
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Cit istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Cit-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 408 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1038 (M)<+>.
Eksempel 120
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ala istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ala-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,481 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 964 (M)<+>.
Eksempel 121
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Pro istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Pro-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,621 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 990 (M)<+>.
Eksempel 122
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Trp(Boe) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Trp-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4, 378 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1079 (M)<+>.
Eksempel 123
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Tyr(tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Tyr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 606 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1056 (M)<+>.
Eksempel 124
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Nva istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Nva-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 870 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 992 (M)<+>.
Eksempel 125
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gly istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Gly-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 397 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 950 (M)<+>.
Eksempel 126
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Lys(Ac) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Lys(Ac)-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 365 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1063 (M)<+>.
Eksempel 127
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-2Nal istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-2Nal-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4, 992 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1090 (M)<+>.
Eksempel 128
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-lNal istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-lNal-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5, 032 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1090 (M)<+>.
Eksempel 129
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-OktylGly istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Oktylgly-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 5,90 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1062 (M)<+>.
Eksempel 130
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Gln-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 323 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1021 (M)<+>.
Eksempel 131
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Met istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Met-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,901 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M)<+>.
Eksempel 132
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,414 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 980 (M)<+>.
Eksempel 133
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-AltlGly istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Altlgly-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,801 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 990 (M)<+>.
Eksempel 134
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ile istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ile-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 4, 028 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1006 (M)<+>.
Eksempel 135
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Thr(tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-D-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 437 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M)<+>.
Eksempel 136
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ile istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Ile-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,54 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M)<+>; Aminosyreanalyse: 1,07 Sar; 0,94 Gly; 0,91 Val; 3,02 Ile; 0,47 Thr; 1,24 Arg; 1,04 Pro.
Eksempel 137
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Nle istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nle-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,80 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1006 (M)<+>.
Eksempel 138
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Cit istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Cit-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,83 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1052 (M)<+>; Syreanalyse: 1,05 Sar; 1,00 Gly; 1,00 Val; 2,13 Ile; 0,65 Thr; 1,11 Cit; 1,49 Arg; 1,10 Pro.
Eksempel 139
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Met(C>2) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Met (02) -Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt =2,701 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1058 (M)<+>; Syreanalyse: 1,36 Sar; 0,94 Gly; 0,62 Val; 2,06 Ile; 0,13 Thr; 0,66 Met(02); 1,50 Arg; 0,68 Pro.
Eksempel 140
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Arg(Pmc) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Arg-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 0,54 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1049 (M)<+>; Syreanalyse: 0,92 Sar; 0,74 Gly; 0,86 Val; 2,00 Ile; 0,49 Thr; 2,67 Arg; 1,00 Pro.
Eksempel 141
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Tyr(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Tyr-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 048 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1058 (M)<+>; Syreanalyse: 0,88 Sar; 0,99 Gly; 0,97 Val; 1,97 Ile; 0,52 Thr; 0,92 Tyr; l,58Arg; 1,08 Pro.
Eksempel 142
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Glu(OtBu)-0H istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Glu-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 348 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M)<+>; Syreanalyse: 1,05 Sar; 1,024 Gly; 0,94 Val; 2,67 Ile; 0,47 Thr; 0,94 Glu; 2,20 Arg; 1,09 Pro.
Eksempel 143
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Lys(Ac) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Lys(Ac)-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 744 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1065 (M)<+>; Syreanalyse: 1,03 Sar; 0,99 Gly; 0,95 Val; 2,04 Ile; 0,66 Thr; 1,05 Lys; 1,41 Arg; 1,02 Pro.
Eksempel 144
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-PropargylGly istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Propargylgly-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 003 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 990 (M)<+>; Syreanalyse: 1,05 Sar; 1,00 Gly; 0,93 Val; 2,10 Ile; 0,54 Thr; 1,71 Arg; 0,97 Pro.
Eksempel 145
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 2,704 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1023 (M)<+>; Syreanalyse: 0,93 Sar; 0,94 Gly; 0,94 Val; 2,10 Ile; 0,51 Thr; 0,87 Glu; 1,45 Arg; 1,03 Pro. Eksempel 146
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 685 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1023 (M)<+>; Syreanalyse: 0,98 Sar; 0,74 Gly; 0,95 Val; 1,04 Ile; 0,49 Thr; 1,04 Leu; 0,94 Glu; 1,63 Arg; 0,97 Pro.
Eksempel 147
Prosedyren beskrevet i Eksempel 65 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-beta-alanin istedenfor Fmoc-4-amino-smørsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Bala-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,92 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1065 (M)<+>; Syreanalyse: 0,99 Sar; 0,99 Gly; 1,00 Val; l,86lle; 0,49 Thr; 1,07 Nva; 1,51 Arg; 1,02 Pro.
Eksempel 148
Prosedyren beskrevet i Eksempel 60 ble benyttet, men under anvendelse av fenyleddiksyre istedenfor smørsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Fenylacetyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,83 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1070 (M)<+>; Syreanalyse: 1,04 Sar; 0,979 Gly; 1,01 Val; 1,90 Ile; 0,59 Thr; 1,09 Nva; 1,53 Arg; 1,03 Pro.
Eksempel 149
Til en løsning av N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr(tBu)-Nva-Ile-Arg(Pmc)-Pro-OH (0,1288 g) i DMF ble tilsatt semikarbazid-hydroklorid (0,222 g) etterfulgt av DIEA (0,346 ml) og PyBrop (0,0513 g). Løsningen ble omrørt ved rt i 36 hr. Løsningsmiddelet ble fjernet in vacuo, og residuet ble behandlet med dietyleter. Det faste stoff ble filtrert og deretter behandlet med (9:1) TFA/anisol (3 ml) ved rt i 4 hr. Løsningsmiddelet ble igjen fjernet in vacuo, og residuet ble behandlet med dietyleter. Utfeiningen ble filtrert for å tilveiebringe råproduktet som et fast stoff. Dette ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro- Azagly-NH2som trifluoracetatsalt: Rt = 2,67 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M)<+>; Syreanalyse: 0,99 Sar; 0,98 Gly; 1,00 Val; 2,13 Ile; 0,56 Thr; 1,09 Nva; 0,92 Arg; 1,02 Pro.
Eksempel 150
Prosedyren beskrevet i Eksempel 76 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Sar-Sieber-etylamidresin istedenfor Fmoc-D-Pro-Sieber-etylamidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Sar-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 2,93 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 968 (M)<+>; Syreanalyse: 1,96 Sar; 0,96 Gly; 0,98 Val; 2,07 Ile; 0,55 Thr; 1,05 Nva; 1,49 Arg.
Eksempel 151
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu)-Sieber-amidresin istedenfor Fmoc-D-Ala-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar- Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-SerNH2som trifluoracetatsalt: Rt = 2,65 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1053 (M)<+>; Syreanalyse: 0,99 Sar; 0,95 Gly; 1,00 Val; 1,96 Ile; 0,57 Thr; 1,12 Nva; 1,03 Arg; 1,03 Pro; 0,27 Ser.
Eksempel 152
Prosedyren beskrevet i Eksempel 54 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,85 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1052 (M)<+>; Syreanalyse: 1,01 Sar; 0,93 Gly; 0,95Val; 1,16 Leu; 1,10 Ile; 0,51 Thr; 1,04 Nva; 1,67 Arg; 0,96 Pro.
Eksempel 153
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ala istedenfor Fmoc-Gly. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å til veiebringe N-Ac-Sar-Ala-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 056 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M)<+>; Syreanalyse: 1,32 Sar; 0,96 Ala; 0,94 Val; 2,10 Ile; 0,52 Thr; 0,98 Nva; 1,65 Arg; 1,01 Pro.
Eksempel 154
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Gly. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Leu-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3, 628 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1050 (M)<+>.
Eksempel 155
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Gly. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Ser-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 955 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M)<+>.
Eksempel 156
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Phe istedenfor Fmoc-Gly. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Phe-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,83 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1084 (M)<+>.
Eksempel 157
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Glu(OtBu)-OH istedenfor Fmoc-Gly. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Glu-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,08 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1065 (M)<+>.
Eksempel 158
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Pro istedenfor Fmoc-Gly og Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Pro-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,343 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1034 (M)<+>.
Eksempel 159
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asn(Trt) istedenfor Fmoc-Gly og Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Asn-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,112 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1051 (M)<+>.
Eksempel 160
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asp(OtBu)-0H istedenfor Fmoc-Gly og Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Asp-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 2,9113 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1052 (M)<+>.
Eksempel 161
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asn(Trt) istedenfor Fmoc-Sar og Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Asn-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,06 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1037 (M)<+>. Eksempel 162
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under
anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Sar og Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Gln-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,10 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1051 (M)<+>.
Eksempel 163
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Sar og Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Ser-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,15 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1010 (M)<+>. Eksempel 164
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Cit istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Cit-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,97 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1080 (M)<+>.
Eksempel 165
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Glu(tBu)-OH istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Glu-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,69 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1052 (M)<+>.
Eksempel 166
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-gamma-aminosmørsyre istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Gaba-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,17 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M)<+>.
Eksempel 167
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-beta-alanin istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Bala-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,14 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M)<+>.
Eksempel 168
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Sar. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Gln-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 3,00 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1051 (M)<+>.
Eksempel 169
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gly istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Gly-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,46 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 952 (M)<+>.
Eksempel 170
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Glu(OtBu)-OH istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Glu-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 1,74 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M)<+>.
Eksempel 171
Prosedyren beskrevet i Eksempel 4 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2(CH3) 2 som trifluoracetatsalt: Rt = 2,80 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1037 (M)<+>; Syreanalyse: 0,98 Sar; 0,94 Gly; 0,97 Val; 2,23 Ile; 0,51 Thr; 0,90 Glu; 1,16 Arg; 1,03 Pro.
Eksempel 172
Prosedyren beskrevet i Eksempel 4 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt: Rt = 2,90 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1037 (M)<+>; Syreanalyse: 1,05 Sar; 0,97 Gly; 0,99 Val; 1,30 Leu 1,11 Ile; 0,52 Thr; 0,89 Glu; 1,20 Arg; 1,04 Pro.
Eksempel 173
Prosedyren beskrevet i Eksempel 172 ble benyttet, men under utelatelse av den siste kobling med eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe H-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2(CH3) 2 som trifluoracetatsalt: Rt = 2,55 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 981 (M)<+>; Syreanalyse: 1,02 Sar; 0,93 Gly; 1,02 Val; 1,05 Leu; 1,02 Ile; 0,55 Thr; 0,84 Gin; 1,31 Arg; 1,03 Pro.
Eksempel 174
Prosedyren beskrevet i Eksempel 54 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,02 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1081 (M)<+>; Syreanalyse: 1,00 Sar; 0,94 Gly; 1,00 Val; 2,00 Ile; 0,52 Thr; 0,87 Gin; 1,37 Arg; 1,05 Pro.
Eksempel 175
Prosedyren beskrevet i Eksempel 174 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,284 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1081 (M)<+>.
Eksempel 176
Prosedyren beskrevet i Eksempel 4 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter koblingen med Fmoc-Sar og beskyttelse ble resinet behandlet med ravsyreanhydrid/pyridin som beskrevet i Eksempel 54. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2(CH3) 2 som trifluoracetatsalt: Rt = 2,56 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1095 (M)<+>; Syreanalyse: 0,95 Sar; 0,94 Gly; 1,02 Val; 1,02 Leu; 1,05 Ile; 0,56 Thr; 0,86 Gin; 1,00 Arg; 1,07 Pro.
Eksempel 177
Prosedyren beskrevet i Eksempel 14 6 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asp(OtBu)-OH istedenfor Fmoc-Gln(Trt). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Asp-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,53 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1010 (M)<+>; Syreanalyse: 1,00 Sar; 0,95 Gly; 1,01 Val; 1,02 Leu; 1,00 Ile; 0,56 Thr; 0,99 Asp; 1,4 3 Arg; 1,03 Pro.
Eksempel 178
Prosedyren beskrevet i Eksempel 142 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asp(OtBu)-OH istedenfor Fmoc-Glu(OtBu)-OH. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Asp-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 455 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1010 (M)<+>.
Eksempel 179
Prosedyren beskrevet i Eksempel 43 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asn(Trt) istedenfor Fmoc-Gln(Trt). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Asn-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,68 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1009 (M)<+>.
Eksempel 180
Prosedyren beskrevet i Eksempel 139 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Met(O) istedenfor Fmoc-Met(02) . Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Met(0)-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,713 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1042 (M)<+>.
Eksempel 181
Prosedyren beskrevet i Eksempel 14 6 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Asn(Trt) istedenfor Fmoc-Gln(Trt). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Asn-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2, 752 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1009 (M)<+>.
Eksempel 182
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 anvendes, men ved separat i syntesene å erstatte Fmoc-D-Ile med følgende aminosyrer:
Fmoc-D-Thr(tBu), Fmoc-D-Ser(tBu), Fmoc-D-Hser(tBu), Fmoc-D-Gln(Trt), Fmoc-D-Asn(Trt), Fmoc-D-Cit, Fmoc-D-Hcit, Fmoc-D-Hle, Fmoc-D-Neopentylgly. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe trifluoracetatsaltet av følgende peptider: Eksempel 183
Prosedyren beskrevet i Eksempel 43 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Phe[4-CONH(Trt)] istedenfor Fmoc-Gln(Trt). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Phe(4-CONH2) - Ile-Arg-ProNHCH2CH3.
Eksempel 184
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-His(Boe) istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-His-ProNHCH2CH3.
Eksempel 185
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Lys(N-epsilon-Isp,N-epsilon-Boc) istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Lys(Isp)-ProNHCH2CH3 .
Eksempel 186
Prosedyren beskrevet i Eksempel 185 anvendes, men ved separat å anvende i hver syntese Fmoc-Lys(N-epsilon-nikotinyl), Fmoc-Orn(N-delta-nikotinyl), Fmoc-Orn-(N-delta-Isp,N-epsilon-Boc), Fmoc-Phe(4-N-Isp,4-N-Boc), Fmoc-Cha-(4-N-Isp,4-N-Boc) istedenfor Fmoc-Lys(N-epsilon-Isp,N-epsilon-Boc) . Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning
av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3
ml) renses råproduktene ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider: Eksempel 187
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Harg(Pmc) istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Harg-ProNHCH2CH3.
Eksempel 188
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Norarg(N,N-bis-Boc) istedenfor Fmoc-Arg (Pmc) . Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne- kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Norarg-ProNHCH2CH3.
Eksempel 189
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Cit istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Cit-ProNHCH2CH3.
Eksempel 190
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Lys(Boe) istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Lys-ProNHCH2CH3.
Eksempel 191
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Phe[4-CH20 (Trt) ] istedenfor Fmoc-Thr (Trt) . Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Phe(4-CH2OH) -Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3.
Eksempel 192
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Phe(4-bis-Boc-guanidino) istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Phe(4-guanidino) -ProNHCH2CH3 som trif luoracetatsalt: Rt = 3,423 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1042 (M+H)<+>.
Eksempel 193
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-2-amino-4-[(2-amino)-pyrimidinyl]-butansyre istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Aminopyrimidinylbutanoyl-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,303 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1016 (M+H)<+>.
Eksempel 194
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Phe(4-CH2NIsp-Boc) istedenfor Fmoc-Arg (Pmc) . Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Phe(4-CH2NHIsp)-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 195
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gly-4-piperidinyl[N-amidino(BOC)2]istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Gly(4-Pip-amidino)-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 196
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ala-[4-piperidinyl-(N',N"-bis-Boc-amidino)] istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Ala[4-Pip(N-amidino)]-Pro-NHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 197
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ala-[3-(bis-Boc)guanidino] istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Ala(3-guanidino)-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 198
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ala[3-pyrroli-dinyl-(2-N,N'-bis-Boc-amidino)] istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Ala-(3-pyrrolidinyl-amidino)-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 199
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Orn-[N-2-(1-Boc)imidazolinyl] istedenfor Fmoc-Arg(Pmc). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Orn(2-imidazo)-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 200
Prosedyren beskrevet i Eksempel 54 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 201
Prosedyren beskrevet i Eksempel 54 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 202
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva og etter koblingen med Fmoc-Sar, acylering av peptidresinet med ravsyreanhydrid som beskrevet i Eksempel 54. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 203
Prosedyren beskrevet i Eksempel 201 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 204
Prosedyren beskrevet i Eksempel 202 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 205
Prosedyren beskrevet i Eksempel 175 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2(CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 206
Prosedyren beskrevet i Eksempel 205 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-alloIle. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 207
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-Ala-NH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 208
Prosedyren beskrevet i Eksempel 4 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 209
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 210
Prosedyren beskrevet i Eksempel 4 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 211
Prosedyren beskrevet i Eksempel 209 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 212
Prosedyren beskrevet i Eksempel 210 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 213
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Sar-Seiberamid-resin istedenfor Fmoc-D-Ala-Seiberamid-resin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av
(9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en
løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-SarNH2som
trifluoracetatsalt.
Eksempel 214
Prosedyren beskrevet i Eksempel 213 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-SarNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 215
Prosedyren beskrevet i Eksempel 213 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-SarNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 216
Prosedyren beskrevet i Eksempel 215 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-SarNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 217
Prosedyren beskrevet i Eksempel 207 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Ser-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 218
Prosedyren beskrevet i Eksempel 208 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 219
Prosedyren beskrevet i Eksempel 15 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 220
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Orn(Ac) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Orn(Ac)-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt .
Eksempel 221
Prosedyren beskrevet i Eksempel 14 9 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-AzaglyNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 222
Prosedyren beskrevet i Eksempel 14 9 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-AzaglyNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 223
Prosedyren beskrevet i Eksempel 222 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-AzaglyNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 224
Prosedyren beskrevet i Eksempel 61 benyttes, men under anvendelse av tetrahydro-2-furoinsyre istedenfor eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-(2-THFkarbonyl)-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 225
Prosedyren beskrevet i Eksempel 61 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-(2-THFkarbonyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 226
Prosedyren beskrevet i Eksempel 225 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-(2-THFkarbonyl)-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 227
Prosedyren beskrevet i Eksempel 209 benyttes, men under anvendelse av tetrahydro-2-furoinsyre istedenfor eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-(2-THFkarbonyl)-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 228
Prosedyren beskrevet i Eksempel 227 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-(2-THFkarbonyl)-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 229
Prosedyren beskrevet i Eksempel 4 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile, Fmoc-Gln (Trt) istedenfor Fmoc-Nva og tetrahydro-2-furoinsyre istedenfor eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-(2-THFkarbonyl)-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 230
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 224, 225, 226, 227, 228 og 229 benyttes, men under anvendelse av N-acetyl-6- aminokapronsyre (6-Ac-Aca) istedenfor tetrahydro-2-furoyl. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 231
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 224, 225, 226, 227, 228 og 229 benyttes, men under anvendelse av N-acetyl-4-amino-smørsyre (4-Ac-Gaba) istedenfor N-acetyl-6-aminokapronsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 232
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 224, 225, 226, 227, 228 og 229 benyttes, men under anvendelse av 2-furoinsyre istedenfor tetrahydro-2-furoinsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 233
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 224, 225, 226, 227, 228 og 229 benyttes, men under anvendelse av shikimsyre istedenfor tetrahydro-2-furoinsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 234
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 224, 225, 226, 227, 228 og 229 benyttes, men under anvendelse av 2-metyl-nikotinsyre istedenfor tetrahydro-2-furoinsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider: Eksempel 235
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Leu-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 236
Prosedyren beskrevet i Eksempel 4 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses rå produktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Leu-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt .
Eksempel 237
Prosedyren beskrevet i Eksempel 73 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Leu-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 238
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Leu-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 239
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva og acylering med ravsyreanhydrid etter koblingen med Fmoc-Sar og avbeskyttelse som beskrevet i Eksempel 54. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Leu-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 240
Prosedyren beskrevet i Eksempel 206 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Gln(Trt) og acylering med ravsyreanhydrid etter koblingen med Fmoc-Sar og avbeskyttelse som beskrevet i Eksempel 54. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Leu-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 241
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 201, 202 og 203 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-
Gin(Trt). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider: Eksempel 242
Prosedyren beskrevet i Eksempel 14 9 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva og acylering med ravsyreanhydrid etter koblingen med Fmoc-Sar og avbeskyttelse som beskrevet i Eksempel 54. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Leu-Ile-Arg-Pro-AzaglyNH2som trifluoracetatsalt.
Eksempel 243
Prosedyren beskrevet i Eksempel 5 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHetyl-(1-pyrrolidin) som trifluoracetatsalt.
Eksempel 244
Prosedyren beskrevet i Eksempel 8 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH(etyl-l-cykloheksyl) som trifluoracetatsalt.
Eksempel 245
Prosedyren beskrevet i Eksempel 5 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHetyl-(1-pyrrolidin) som trifluoracetatsalt.
Eksempel 246
Prosedyren beskrevet i Eksempel 8 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNH(etyl-1-cykloheksyl) som trifluoracetatsalt.
Eksempel 247
Prosedyren beskrevet i Eksempel 24 6 anvendes, men under acylering av peptidresinet med ravsyreanhydrid etter koblingen med Fmoc-Sar og avbeskyttelse som beskrevet i Eksempel 54. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNH(etyl-l-cykloheksyl) som trifluoracetatsalt.
Eksempel 248
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 11 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrevet i Eksemplene 14, 43, 74, 73, 54, 174 og 132 respektive. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 249
Prosedyrene beskrevet i Eksemplene 4 9 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrevet i Eksemplene 14, 4, 75, 54 og 132 respektive. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt: Eksempel 250
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ser(tBu)-Sieber-amidresin istedenfor Fmoc-D-Ala-Sieber-amidresin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-D-SerNH2som
trifluoracetatsalt.
Eksempel 251
Prosedyren beskrevet i Eksempel 14 9 anvendes, men hydroksylaminhydroklorid anvendes istednfor semikarbazid-hydroklorid. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHOH som trifluoracetatsalt.
Eksempel 252
Prosedyren beskrevet i Eksempel 132 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 253
Prosedyren beskrevet i Eksempel 132 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 254
Prosedyren beskrevet i Eksempel 132 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Hser(tBu) istedenfor Fmoc-Ser(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Hser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 255
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Gln-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,36 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1023 (M)<+>.
Eksempel 256
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Nva istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Nva-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,28 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 994 (M)<+>.
Eksempel 257
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ile istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac- Sar-Gly-Ile-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,55 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M)<+>.
Eksempel 258
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Phe istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Phe-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,77 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1042 (M)<+>.
Eksempel 259
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Leu-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,56 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1008 (M)<+>.
Eksempel 260
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Ser-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trif luoracetatsalt: Rt = 2,41 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 982 (M)<+>.
Eksempel 261
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Thr(tBu) istedenfor Fmoc-Sar og Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Thr-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt: Rt = 3,33 min (gradient fra 10% til 30% acetonitril i vann inneholdende 0,01% TFA under en 30 min periode); MS (ESI) m/e 1024 (M)<+>.
Eksempel 262
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 4 6 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrives i Eksemplene 75, 4, 54 og 132. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 263
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 262 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Val istedenfor Fmoc-Ala. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 264
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 263 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-DNva istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt: Eksempel 265
Prosedyren beskrevet i Eksempel 132 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-Leu og Fmoc-Gln (Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel- blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 266
Prosedyren beskrevet i Eksempel 132 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 267
Prosedyren beskrevet i Eksempel 75 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Ser (tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som
trifluoracetatsalt.
Eksempel 268
Prosedyren beskrevet i Eksempel 267 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-Leu og Fmoc-Ser (tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som
trifluoracetatsalt.
Eksempel 269
Prosedyren beskrevet i Eksempel 54 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Ser (tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 270
Prosedyren beskrevet i Eksempel 269 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 271
Prosedyren beskrevet i Eksempel 270 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Gln (Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 272
Prosedyren beskrevet i Eksempel 270 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 273
Prosedyren beskrevet i Eksempel 265 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 274
Prosedyren beskrevet i Eksempel 266 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 275
Prosedyren beskrevet i Eksempel 13 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Ser (tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt.
Eksempel 276
Prosedyren beskrevet i Eksempel 13 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetatsalt .
Eksempel 277
Prosedyren beskrevet i Eksempel 132 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Leu-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 278
Prosedyren beskrevet i Eksempel 277 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Ser-Leu-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 279
Prosedyren beskrevet i Eksempel 132 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 280
Prosedyren beskrevet i Eksempel 265 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 281
Prosedyren beskrevet i Eksempel 270 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Succinyl-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 282
Prosedyren beskrevet i Eksempel 276 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2 (CH3) 2 som trifluoracetat.
Eksempel 283
Prosedyren beskrevet i Eksempel 268 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres til N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Nva-Ile-Arg-Pro-D-AlaNH2som trifluoracetat.
Eksempel 284
Prosedyren beskrevet i Eksempel 265 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile og Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Gln(Trt). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Leu-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 285
Prosedyren beskrevet i Eksempel 276 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloIle istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 286
Prosedyren beskrevet i Eksempel 125 anvendes, men ved separat å anvende Fmoc-D-Ile og Fmoc-D-alloIle, respektive, istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres til de følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 287
Prosedyren beskrevet i Eksempel 125 og 286 anvendes, men ved separat å anvende Fmoc-D-Ile og Fmoc-D-alloIle, respektive, istedenfor Fmoc-D-Leu og anvende Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva . Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe trifluoracetatsaltet av:
Eksempel 288
Prosedyren beskrevet i Eksempel 123 anvendes, men ved separat å anvende Fmoc-D-Ile og Fmoc-D-alloIle, respektive, istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe trifluoracetatsaltet av:
Eksempel 289
Prosedyren beskrevet i Eksempel 123 og 288 anvendes, men ved separat å anvende Fmoc-D-Ile og Fmoc-D-alloIle, respektive, istedenfor Fmoc-D-Leu og anvende Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe trifluoracetatsaltet av: Eksempel 290 Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ser-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 291
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Thr(tBu) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Thr-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 292
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Gln-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 293
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Asn(Trt) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Asn-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 294
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Arg(Pmc) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Arg-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 295
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-3-Pal istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-3-Pal-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 296
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Glu(OtBu)-OH istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Glu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 297
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Asp(OtBu)-OH istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Asp-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 298
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-His(Boe)-OH istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-His-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 299
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Hser(tBu) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Hser-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 300
N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloThr-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-alloThr(tBu) istedenfor Fmoc-D-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloThr-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 301
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-Ile. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-D-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 302
Prosedyren beskrevet i Eksempel 290 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ser-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 303
Prosedyren beskrevet i Eksempel 291 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Thr-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 304
Prosedyren beskrevet i Eksempel 300 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloThr-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 305
Prosedyren beskrevet i Eksempel 290 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres til N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ser-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 306
Prosedyren beskrevet i Eksempel 291 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Thr-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 307
Prosedyren beskrevet i Eksempel 300 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloThr-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 308
Prosedyren beskrevet i Eksempel 304 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloThr-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 309
Prosedyren beskrevet i Eksempel 303 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Thr-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 310
Prosedyren beskrevet i Eksemplene 132 og 266 benyttes, men under anvendelse av N-acetyl-6-aminokapronsyre (6-Ac-Aca) istedenfor eddiksyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 311
Prosedyren beskrevet i Eksemplene 310 benyttes, men under anvendelse av N-acetyl-gamma-aminosmørsyre (4-Ac-Gaba) istedenfor N-acetyl-6-aminokapronsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 312
Prosedyren beskrevet i Eksemplene 311 benyttes, men under anvendelse av 2-furoinsyre istedenfor N-acetyl-gamma-amino-smørsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/- anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 313
Prosedyren beskrevet i Eksemplene 311 benyttes, men under anvendelse av shikimsyre istedenfor 2-furoinsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 314
Prosedyren beskrevet i Eksemplene 311 er å anvende shikimsyre istedenfor 2-furoinsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 315
Prosedyren beskrevet i Eksemplene 312 benyttes, men under anvendelse av 2-metyl-nikotinsyre istedenfor 2-furoinsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt: Eksempel 316
Prosedyren beskrevet i Eksempel 8 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-DLeu istedenfor Fmoc-DIle og Fmoc-Ser (tBu) istedenfor Fmoc-Thr(tBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Nva-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(R)-cykloheksyl som trifluoracetat.
Eksempel 317
Prosedyren beskrevet i Eksempel 8 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-DIle-Thr-Ser-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(R)-cykloheksyl som trifluoracetat.
Eksempel 318
Prosedyren beskrevet i Eksempel 8 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Leu istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-DIle-Thr-Leu-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(R)-cykloheksyl som trifluoracetat.
Eksempel 319
Prosedyren beskrevet i Eksempel 8 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Leu istedenfor Fmoc-DIle. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(R)-cykloheksyl som trifluoracetat.
Eksempel 320
Prosedyren beskrevet i Eksempel 316 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Ser(tBu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(R)-cykloheksyl som trifluoracetat.
Eksempel 321
Prosedyren beskrevet i Eksempel 316 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Ser-Gln-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(R)-cykloheksyl som trifluoracetat.
Eksempel 322
Prosedyren beskrevet i Eksempel 8 benyttes, men under anvendelse av (S)-1-cykloksyletylamin istedenfor (R)-1-cykloksyletylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-DIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHetyl-1-(S)-cykloheksyl som trifluoracetatsalt.
Eksempel 323
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 98 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrives i Eksemplene 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 324
Prosedyren beskrevet i Eksempel 98 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-D-Cys(Trt) istedenfor Fmoc-D-Pen(Trt). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe N- N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Cys-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetat.
Eksempel 325
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 324 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrives i Eksemplene 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 326
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Pen(Trt) istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Pen-DIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 327
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Cys(Trt) istedenfor Fmoc-Val. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonne- kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Cys-DIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 328
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 326 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrives i Eksemplene 14, 15, 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt: Eksempel 329
Prosedyren beskrevet i Eksempel 120 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Pen(Trt) istedenfor Fmoc-Ala. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyt tende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Leu-Pen-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 330
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 329 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrives i Eksemplene 14, 15, 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt: Eksempel 331
Prosedyren beskrevet i Eksempel 11 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Pen(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Pen-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 332
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 331 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrives i Eksemplene 14, 15, 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt: Eksempel 333
ProNHCH2CH3
Prosedyren beskrevet i Eksempel 96 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Gln(Trt) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Phe(3,4,5-triF)-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 334
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 333 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrives i Eksemplene 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 335
Prosedyren beskrevet i Eksempel 153 benyttes, men under anvendelse av Fmoc-Dallolle istedenfor Fmoc-DIle. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Ala-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt.
Eksempel 336
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 335 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrevet i Eksemplene 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 337
Prosedyren beskrevet i Eksempel 231 ble benyttet, men under anvendelse av N-acetyl-beta-alanin (3-Ac-Bala) istedenfor N-acetyl-4-aminosmørsyre. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt:
Eksempel 338
Prosedyren beskrevet i Eksempel 1 benyttes, men ved å ute-late koblingen med etylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble råproduktet renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-Pro-OH som trifluoracetatsalt.
Eksempel 339
Prosedyrene beskrevet i Eksempel 338 benyttes, men under anvendelse av de passende beskyttede aminosyrer som beskrevet i Eksemplene 14, 15, 132, 43, 54 og 75. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ved hjelp av (9:1) TFA/anisol (3 ml) renses råproduktet ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,01% TFA. De rene fraksjoner lyofiliseres for å tilveiebringe følgende peptider som trifluoracetatsalt: Eksempel 340
I en Applied Biosystems 433Et-peptidsyntetiserer ble 0,1 mM Fmoc-Pro-Sieber-etylamidresin anbragt i reaksjonskaret og patroner av 1 mM aminosyrer ble sekvensielt innsatt. Fastmoc 0,1 med tidligere overvåkende protokoll vedrørende toppen ble anvendt. Den syntetiske cyklus er følgende: 1. Oppløsning av resinet med N-metylpyrrolidon (NMP) i ca. 5 minutter; 2. Vasking med NMP i ca. 5 minutter; 3. Fjerning av Fmoc-gruppen ved hjelp av 50% piperidin-løsning i NMP i 5 minutter, vasking og gjentagelse av prosessen 3 til 4 ganger; 4. Aktivering av Fmoc-aminosyren ved hjelp av 1 mM av en 0,5 M løsning av 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyluroniumheksafluorfosfat (HBTU) i DMF; 5. Tilsetning av den aktiverte Fmoc-aminosyre til reaksjonskaret etterfulgt av 1 mM av 2 M diiso-propylamin i NMP-løsning; 6. Kobling av Fmoc-aminosyren i 20 minutter; 7. Vasking og fjerning av Fmoc-gruppen ved hjelp av 50 % piperidin in NMP.
Følgende beskyttede aminosyrer ble sekvensielt koblet til resinet ved hjelp av ovennevnte protokoll i Tabell 2 nedenfor:
Ved fullførelsen av syntesen ble det resinbundne peptid vasket med metanol tre ganger og tørket in vacuo, deretter behandlet med en (95:5) TFA/vannløsning (3ml) ved romstemperatur over natten. Resinet ble filtrert og vasket 3 ganger med metanol. Filtratene og vaskeløsningene ble kombinert og konsentrert in vacuo. Residuet ble behandlet med eter, og utfelningen ble filtrert for å tilveiebringe råpeptidet som et amorft pulver. Dette ble renset ved preparativ HPLC ved hjelp av en C-18-kolonne med en blanding av løsningsmidler varierende i gradient fra 5 % til 100 % acetonitril/vann inneholdende 0,1% TFA under en periode på 50 min. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Asp-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt; Rt = 2,23 min (ved hjelp av en C-18-kolonne og løsningsmiddelblanding varierende i gradient fra 20 % til 95 % acetonitril/vann inneholdende 10 mM ammoniumacetat under en periode på 10 min); MS (ESI) m/e 1010 (M+) .
Eksempel 341
Prosedyren beskrevet i Eksempel 340 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Ala istedenfor Fmoc-Asp(OtBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble produktet utfelt med eter. Råproduktet ble renset ved preparativ HPLC for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Ala-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt; Rt = 2,828 min (ved hjelp av en C-18-kolonne og løsningsmiddelblandinger varierende i gradient fra 20 % til 95 % acetonitril/vann inneholdende 10 mM ammoniumacetat
under en periode på 10 min); MS (ESI) m/e 966 (M+) .
Eksempel 342
Prosedyren beskrevet i Eksempel 340 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Cha istedenfor Fmoc-Asp(OtBu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble produktet utfelt med eter. Råproduktet ble renset ved preparativ HPLC for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Cha-D-Leu-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt; Rt = 4,48 min (ved hjelp av en C-18-kolonne og løsningsmiddelblandinger varierende i gradient fra 20 % til 95 % acetonitril/vann inneholdende 10 mM ammoniumacetat under en periode på 10 min); MS (ESI) m/e 1048 (M+) .
Eksempel 343
Prosedyren beskrevet i Eksempel 340 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Met istedenfor Fmoc-Asp(OtBu) og Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble produktet utfelt med eter. Råproduktet ble renset ved preparativ HPLC for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Met-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt; Rt = 3,25 min (ved hjelp av en C-18-kolonne og løsningsmiddelblandinger varierende i gradient fra 20 % til 95 % acetonitril/vann inneholdende 10 mM ammoniumacetat under en periode på 10 min); MS (ESI) m/e 1026 (M+H); Aminosyreanalyse: 1,09 Sar; 0,97 Gly; 0,94 Met; 2,08 Ile; 0,47 Thr; 1,00 Nva; 1,34 Arg; 1,01 Pro.
Eksempel 344
Prosedyren beskrevet i Eksempel 340 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Cit istedenfor Fmoc-Sar, Fmoc-Val istedenfor Fmoc-Asp(OtBu) og Fmoc-D-Ile istedenfor Fmoc-D-Leu. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble produktet utfelt med eter. Råproduktet ble renset ved preparativ HPLC til N-Ac-Cit-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt; Rt = 2,97 min (ved hjelp av en C-18-kolonne og løsningsmiddelblandinger varierende i gradient fra 20 % til 95 % acetonitril/vann inneholdende 10 mM ammoniumacetat under en periode på 10 min); MS (ESI) m/e 1080 (M+H); Aminosyreanalyse: 0,98 Cit; 0,93 Gly; 0,98 Val; 2,05 Ile; 0,51 Thr; 0,99 Nva; 1,37 Arg; 1,01 Pro.
Eksempel 345
Prosedyren beskrevet i Eksempel 340 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Hser(t-Bu) istedenfor Fmoc-Nva. Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble produktet utfelt med eter. Råproduktet ble renset ved preparativ HPLC for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Hser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3som trifluoracetatsalt; Rt = 2,782 min (ved hjelp av en C-18-kolonne og løsningsmiddelblandinger varierende i gradient fra 10 % til 40 % acetonitril/vann inneholdende 0,1 % TFA under en periode på 33 min); MS (ESI) m/e 996 (M+H); Aminosyreanalyse: 1,00 Sar; 0,95 Gly; 1,01 Val; 1,99 Ile; 0,60 Thr; 1,07 Arg; 1,04 Pro.
Eksempel 346
Prosedyren beskrevet i Eksempel 340 ble benyttet, men under anvendelse av Fmoc-Val istedenfor Fmoc-Asp(OtBu), Fmoc-Dallolle istedenfor Fmoc-D-Leu og Fmoc-His(Boe) istedenfor Fmoc-Thr(t-Bu). Etter spaltning av peptidet fra resinet og fjerning av de beskyttende grupper ble produktet utfelt med eter. Råproduktet ble renset ved preparativ HPLC for å tilveiebringe N-Ac-Sar-Gly-Val-Dallolle-His-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3; Rt = 3,12 min (ved hjelp av en C-18-kolonne og løsningsmiddelblandinger varierende i gradient fra 10 % til 40 % acetonitril/vann inneholdende 0,1 % TFA under en periode på 33 min); MS (ESI) m/e 1030 (M+) .
Eksempel 347
Resinfremstilling
4-(4-Formyl-3-metoksyfenoksy)butyryl-AM-resin (0,5 g, 0,54 mmol/g substitusjon) ble anbragt i et reaksjonskar for fastfasesyntese inneholdende (9:1) DMA/eddiksyre (4 ml). Blandingen ble rystet i 5 min. Resinet ble tørrlagt, og denne prosess ble gjentatt tre ganger. Til det oppsvulmede resin ble tilsatt 10-15 korn av aktivert 4A molekylsikt og (9:1) DMA/eddiksyre (4ml) og 10 molarekvivalenter av n-butylamin. Oppslemmingen ble rystet i lh ved rt, og til dette ble tilsatt 10 molarekvivalenter av natriumtriacetoksyborhydrid. Oppslemmingen ble rystet i 2 h ved rt. Resinet ble tørrlagt og vasket tre ganger med DMA, tre ganger med metanol, tre ganger med diklormetan, tre ganger med dietyleter og tørket in vacuo ved rt over natten. Det tørre resin ble oppsvulmet in DMA (4 ml) og rystet i 5 min. Denne prosess ble gjentatt to ganger.
Kobling av Fmoc- Pro
Til det oppsvulmede resin i reaksjonskaret ble tilsatt sekvensielt følgende kjemikalier: DMA (4 ml), en ekvivalent av DIEA, en DMA-løsning inneholdende 3,0 ekvivalenter av Fmoc-Pro, 3,0 ekvivalenter av HATU og 3,0 ekvivalenter av DIEA. Oppslemmingen ble rystet over natten. Resinet ble tørrlagt og vasket tre ganger med DMA, tre ganger med metanol, tre ganger med diklormetan, tre ganger med dietyleter og tørket in vacuo ved rt over natten. En liten del av resinet ble anvendt for å bestemme Fmoc-Pro-konsentra-sjonen. Resten av resinet ble rystet med DMA (4 ml) tre ganger i 5 min og deretter i 1 h ved rt med en løsning av (8:1:1) DMA/pyridin/eddiksyreanhydrid (5 ml). Resinet ble tørrlagt og vasket tre ganger med DMA, tre ganger med metanol, tre ganger med diklormetan og tre ganger med dietyleter. Resinet ble tørket in vacuo ved rt over natten og ble deretter anvendt i den påfølgende fastfasiske peptidsyntese.
Syntese av ovennevnte peptid
I syntesen av ovennevnte peptid var aminosyrene, koblings-tilstandene og den anvendte synteseprotokoll identisk med det som er beskrevet i Eksempel 340. Ved fullførelsen av syntesen ble peptidet og de beskyttende grupper spaltet ved rt ved hjelp av (95:5) TFA/vann (3 ml) i 3h. Resinet ble filtrert og vasket tre ganger med metanol. De kombinert filtrater ble konsentrert in vacuo, og til residuet ble tilsatt dietyleter. Den faste utfeining ble filtrert. Råproduktet ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert for å tilveiebringe NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH-n-Butyl som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 3,792 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1022 (M+) .
Eksempel 348
NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH-iso-Butyl
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av isobutylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH-iso-Butyl som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 3,731 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode) ; MS (ESI) m/e 1022 (M+) .
Eksempel 349
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av isoamylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH-iso-Amyl som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 4,086 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1036 (M+) .
Eksempel 350
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av n-heksylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH-n-Heksyl som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 4,527min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1050 (M+) .
Eksempel 351
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av (3,3-dimetyl)butylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg- ProNH-(3,3-dimetyl)butyl som bistrif luoracetatsalt : Rt = 4,366min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1050 (M+) .
Eksempel 352
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av (2-etoksy)etylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH-(2-etoksy)etyl som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 3,356 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1038 (M+) .
Eksempel 353
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av (2-isopropoksy)etylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg- ProNH-(2-isopropoksy)etyl som bistrif luoracetatsalt : Rt = 3,57 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1052 (M+) .
Eksempel 354
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av (3-metoksy)propylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddel-blanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNH-(3-metoksy)propyl som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 3,26 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1038 (M+) .
Eksempel 355
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av (cyklopentyl)metylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonnekromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg- ProNH-(cyklopentyl)metyl som bistrif luoracetatsalt : Rt = 4,148 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1048 (M+) .
Eksempel 356
Prosedyren beskrevet i Eksempel 347 ble benyttet, men under anvendelse av cykloheksylamin istedenfor n-butylamin. Etter spaltning av peptidet fra resinet og utfelning med eter ble råproduktet oppnådd. Dette ble renset ved C-18-kolonne-kromatografi under anvendelse av en løsningsmiddelblanding med en gradient varierende fra 10% til 50% acetonitril-vann inneholdende 0,1% TFA. De rene fraksjoner ble lyofilisert til NAcSar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg- ProNH-cykloheksyl som bis-trifluoracetatsalt: Rt = 4,070 min (gradient fra 20% til 95% acetonitril i vann inneholdende 0,01 M NH4ACi en 10 min periode); MS (ESI) m/e 1048 (M+) .
In Vi tro- undersøkelse med hensyn til angiogen aktivitet
Human mikrovaskular endotel (HMVEC) migrasjonsundersøkelse ble kjørt i henhold til prosedyren beskrevet av S. S. Tolsma, 0. V. Volpert, D. J. Good, W. F. Frazier, P. J. Polverini og N. Bouck, J. Celle Biol. 122, 497-511 (1993).
HMVEC migrasjonsundersøkelsen ble utført under anvendelse av humane mikrovaskulære endotele celler, dermale (én donor) og humane mikrovaskulare endotele celler, (neo-natale). BCE- eller HMVEC-cellene ble sultet over natten i DME inneholdende 0,1% bovint serumalbumin (BSA). Cellene ble deretter høstet med trypsin og suspendert på nytt i DME med 0,1% BSA ved en konsentrasjon på 1,5 X 10^ celler pr. ml. Cellene ble tilsatt til bunnen av et 48 brønners modifisert Boyden-kammer (Nucleopore Corporation, Cabin John, MD). Kammeret ble satt sammen og snudd, og cellene fikk bindes i 2 timer ved 37 °C til polykarbonatkjemotakse-membraner (5 porestørrelse) som var blitt fuktet i 0,1% gelatin over natten og tørket. Kammeret ble deretter snudd på nytt og testsubstansene (totalt volum på 50^1), inklusive aktivatorer, 15 ng/ml bFGF/VEGF, ble tilsatt til brønnene i det øvre kammer. Apparatet ble inkubert i 4 timer ved 37°C. Membranene ble tatt ut, fiksert og farvet (Diff Quick, Fisher Scientific), og antallet celler som hadde migrert til det øvre kammer pr. 3 høyintensitetsfelt, ble talt. Bakgrunnsmigrasjonen til DME +0,1 BSA ble sub-trahert og dataene angitt som antall celler som hadde migrert pr. 10 høyintensitetsfelt (400X) eller, når resultatene fra multiple eksperimenter ble kombinert, som den prosentuelle migrasjonsinhibisjon sammenlignet med en positiv kontrol.
Forbindelsene beskrevet i Eksemplene 1 til 339 inhiberte human endotel cellemigrasjon i ovennevnte undersøkelse fra ca. 30% til ca. 95% inhibisjon når de ble testet i konsen-trasjoner på 10 nM eller 20 nM, som angitt nedenfor i Tabell 3.

Claims (32)

1. Forbindelse med formelen
eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller en medisinforløper derav, hvori: Ai er sarkosyl, A2er glycyl, A3er valyl, A7er isoleucyl, A8er arginyl, A9er prolyl, og A0, A4, A5, A6og Aio er som følger: A0er hydrogen eller en acylgruppe valgt fra: (1) R-(CH2)n-C (0)-; hvori n er et helt tall fra 0 til 8, og R er valgt fra hydroksyl; metyl; N-acetylamino; metoksyl; karboksyl; cykloheksyl eventuelt inneholdende en eller to dobbeltbindinger og eventuelt substituert med en til tre hydroksylgrupper; og en 5- eller 6-leddet aromatisk eller ikke-aromatisk ring eventuelt inneholdende ett eller to heteroatomer valgt fra nitrogen, oksygen og svovel, hvori ringen eventuelt er substituert med en gruppe valgt fra alkyl, alkoksy og halogen; og (2) R^CHzCHs-(OCH2CH20) P-CH2-C (0)-; hvori R<1>er N- acetylamino, og p er 1; A4er en aminoacylrest med D-konfigurasjon valgt fra: (2) glycyl, (5) dehydroleucyl, (6) D-alanyl, (7) D-3-(naft-l-yl)alanyl, (8) D-3-(naft-2-yl)alanyl, (9) D-(3-pyridyl)-alanyl, (10) D-2-aminobutyryl, (11) D-allo-isoleucyl, (12) D-allo-treonyl; (13) D-allylglycyl, (14) D-asparaginyl, (15) D-aspartyl, (16) D-benzotienyl, (17) D-3-(4,4'-bifenyl)alanyl, (18) D-klorfenylalanyl, (19) D-3-(3-trifluormetylfenyl)alanyl, (20) D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, (21) D-3-(3,4-difluorfenyl)alanyl, (22) D-citrullyl, (23) D-cykloheksylalanyl, (24) D-cykloheksylglycyl, (25) D-cystyl, (26) D-cystyl(S-t-butyl), (27) D-glutaminyl, (28) D-glutamyl, (29) D-histidyl, (30) D-homoisoleucyl, (31) D-homofenylalanyl, (32) D-homoseryl, (33) D-isoleucyl, (34) D-leucyl, (35) D-lysyl(N-epsilon-nikotinyl), (36) D-lysyl, (37) D-metionyl, (38) D-neopentylglycyl, (39) D-norleucyl, (40) D-norvalyl, (41) D-ornityl, (42) D-penicillaminyl, (43) D-penicillaminyl(acetamidometyl), (44) D-penicillaminyl(5-benzyl), (45) D-fenylalanyl, (46) D-3-(4-aminofenyl)alanyl, (47) D-3-(4-metylfenyl)alanyl, (48) D-3-(4-nitrofenyl)alanyl, (49) D-3-(3,4-dimetoksyfenyl)alanyl, (50) D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)alanyl, (51) D-prolyl, (52) D-seryl, (53) D-seryl(O-benzyl), (54) D-t-butylglycyl, (55) D-tienylalanyl, (56) D-treonyl, (57) D-treonyl(O-benzyl), (58) D-tryptyl, (59) D-tyrosyl(O-benzyl), (60) D-tyrosyl(O-etyl), (61) D-tyrosyl, (62) D-valyl, og A5er en aminoacylrest valgt fra: (I) alanyl, (3) 3-(naft-l-yl)alanyl, (4) 3-(naft-2-yl)alanyl, (6) allylglycyl, (7) glutaminyl, (8) glycyl, (10) homoseryl, (II) isoleucyl, (12) lysyl(N-epsilon-acetyl), (13) metionyl, (14) norvalyl, (15) oktylglycyl, (17) 3-(4-hydrometylfenyl)alanyl, (18) prolyl, (19) seryl, (20) treonyl, (21) tryptyl, (22) tyrosyl, (26) D-treonyl, og (27) penicillaminyl; A6er en aminoacylrest valgt fra: (1) alanyl, (5) 2-aminobutyryl, (6) allylglycyl, (7) arginyl, (8) asparaginyl, (9) aspartyl, (10) citrullyl, (11) cykloheksylalanyl, (12) glutaminyl, (13) glutamyl, (14) glycyl, (19) isoleucyl, (20) leucyl, (21) lysyl(N-epsilon-acetyl) , (23) metionyl(sulfon), (24) metionyl(sulfoksid), (25) metionyl, (26) norleucyl, (27) norvalyl, (28) oktylglycyl, (30) 3-(4-karboksyamidfenyl)alanyl, (31) propargylglycyl, (32) seryl, (35) tyrosyl, (36) valyl, (42) D-norvalyl, og (44) penicillaminyl; Aio er valgt fra: (1) hydroksyl, (2) azaglycylamid, (3) D-alanylamid, (7) sarkosylamid, (8) serylamid, (9) D-serylamid, (10) en gruppe representert ved formelen (11) en gruppe representert ved formelen -NH-R<4>; hvori: s er et helt tall valgt fra 0 og 1, R<2>er valgt fra hydrogen, alkyl og en 6-leddet cykloalkylring; R<3>er valgt fra hydrogen, hydroksy, alkyl, alkoksy og en 6- leddet ring inneholdende ett nitrogen, forutsatt at s ikke er null når R<3>er hydroksy eller alkoksy; ogR<4>er valgt fra hydrogen og hydroksy.
2. Forbindelse ifølge krav 1, hvori A4er en aminoacylrest valgt fra: 1. D-alanyl, 2. D-3-(naft-l-yl)alanyl, 3. D-3-(naft-2-yl)alanyl, 4. D-(3-pyridyl)-alanyl, 5. D-2-aminobutyryl, 6. D-allo-isoleucyl, 7. D-allo-treonyl, 8. D-allylglycyl, 9. D-asparaginyl, 10. D-aspartyl, 11. D-klorfenylalanyl, 12 . D-3-(3-trifluormetylfenyl)alanyl, 13. D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, 14 . D-3-(3,4-difluorfenyl)alanyl, 15. D-cykloheksylalanyl, 16. D-cykloheksylglycyl, 17. D-cystyl, 18. D-glutaminyl, 19. D-glutamyl, 20. D-histidyl, 21. D-homoisoleucyl, 22. D-homofenylalanyl, 23. D-homoseryl, 24. D-isoleucyl, 25. D-leucyl, 26. D-lysyl(N-epsilon-nikotinyl), 27. D-metionyl, 28. D-neopentylglycyl, 29. D-norleucyl, 30. D-norvalyl, 31. D-penicillaminyl, 32. D-penicillaminyl(acetamidometyl), 33. D-penicillaminyl(S-benzyl), 34. D-fenylalanyl, 35. D-3-(4-aminofenyl)alanyl, 36. D-3-(4-metylfenyl)alanyl, 37. D-3-(4-nitrofenyl)alanyl, 38 . D-3-(3,4-dimetoksyfenyl)alanyl, 39. D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)alanyl, 40. D-prolyl, 41. D-seryl, 42. D-seryl(O-benzyl), 43. D-t-butylglycyl, 44. D-tienylalanyl, 45. D-treonyl, 46. D-treonyl(O-benzyl), 47. D-tyrosyl(O-etyl), 48. D-tyrosyl, og 49. D-valyl,
3. Forbindelse ifølge krav 2, hvori A4er en aminoacylrest med D-konfigurasjon valgt fra: 1. D-allo-isoleucyl, 3. D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, 4. D-cystyl, 5. D-isoleucyl, 6. D-leucyl, 7. D-penicillaminyl, 8. D-fenylalanyl, 9. D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)alanyl, og 10. D-3-(4-aminofenyl)alanyl.
4. Forbindelse ifølge krav 1, hvori A5er valgt fra: 1. glycyl, 2. oktylglycyl, 3. seryl, 4. treonyl, 5. tyrosyl, and 6. penicillamyl.
5. Forbindelse ifølge krav 1, hvori A6er valgt fra: 1. glutaminyl, 2. leucyl, 3. norvalyl, og 4. seryl.
6. Forbindelse ifølge krav 2, hvori A0er valgt fra: 1. acetyl, 2. butyryl, 3. N-acetyl-beta-alanyl, 4. (6-N-acetylamino)kaproyl, 5. cykloheksylacetyl, 6. furoyl, 7. gamma-aminobutyryl, 8. 2-metoksyacetyl, 9. metylnikotinyl, 10. nikotinyl, 11. fenylacetyl, 12. propionyl, 13. shikimyl, 14. succinyl, og 15. tetrahydrofuroyl.
7. Forbindelse ifølge krav 2, hvori Ai0er valgt fra: 1. D-alanylamid, 2. azaglycylamid, 3. serylamid, 4. etylamid, 5. hydroksylamid, 6. isopropylamid, 7. propylamid, 8. 2-(cykloheksyl)etylamid, 9. 2-(1-pyrrolidin)etylamid, 10. 1-(cykloheksyl)etylamid, 11. 2-(metoksy)etylamid, and 12. 2-(hydroksy)etylamid,
8. Forbindelse ifølge krav 1, hvori A4er en aminoacylrest valgt fra: 1. D-allo-isoleucyl, 2. D-3-(3-cyanofenyl)alanyl, 3. D-cystyl, 4. D-isoleucyl, 5. D-leucyl, 6. D-penicillaminyl, 7. D-fenylalanyl, 8. D-3-(3,4,5-trifluorfenyl)alanyl, og 9. D-3-(4-aminofenyl)alanyl; og A5er en aminoacylrest valgt fra: 1. oktylglycyl, 2. glycyl, 3. penicillaminyl, 4. seryl, 5. treonyl, og 6. tyrosyl; og A6er en aminoacylrest valgt fra: 1. glutaminyl, 2. leucyl, 3. norvalyl, og 4. seryl.
9. Forbindelse ifølge krav 8, hvori A0er valgt fra: 1. acetyl, 2. butyryl, 3. N-acetyl-beta-alanyl, 4. (6-N-acetylamino)kaproyl, 5. cykloheksylacetyl, 6. furoyl, 7. gamma-aminobutyryl, 8. 2-metoksyacetyl, 9. metylnikotinyl, 10. nikotinyl, 11. fenylacetyl, 12. propionyl, 13. shikimyl, 14. succinyl, og 15. tetrahydrofuroyl.
10. Forbindelse ifølge krav 8, hvori Ai0er valgt fra: 1. D-alanylamid, 2. azaglycylamid, 3. serylamid 4. etylamid, 5. hydroksylamid, 6. isopropylamid, 7. propylamid, 8. 2-(cykloheksyl)etylamid, 9. 2-(1-pyrrolidin)etylamid, 10. 1-(cykloheksyl)etylamid, 11. 2-(metoksy)etylamid, 12. 2-(hydroksy)etylamid,
11. Forbindelse, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, ifølge krav 1 valgt fra:
12. Forbindelse ifølge krav 11, valgt fra:
13. Farmasøytisk sammensetning omfattende en forbindelse ifølge krav 1 og en farmasøytisk aktiv bærer.
14. Anvendelse av en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse ifølge krav 1 for fremstilling av et medikament for behandling av en pasient med behov for antiangiogenese-terapi hvor medikamentet administreres til pasienten.
15. Sammensetning for behandling av en sykdom valgt fra cancer, artritt, psoriasis, øyenangiogenese forbundet med infeksjon eller kirurgisk inngrep, makular degenerasjon og diabetisk retinopati omfattende et peptid som definert i krav 1 i kombinasjon med en farmasøytisk aktiv bærer.
16. forbindelse, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, ifølge krav 11 valgt fra gruppen bestående av
17. Forbindelse ifølge krav 16, eller farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, som er N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3.
18. Forbindelse ifølge krav 16, eller farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, som er N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3.
19. Forbindelse ifølge krav 16, eller farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, som er N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3.
20. Forbindelse ifølge krav 16, eller farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, som er N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3.
21. Sammensetning omfattende en forbindelse ifølge krav 13, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, valgt fra gruppen bestående av
og en farmasøytisk akseptabel bærer.
22. Sammensetning ifølge krav 21, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
23. Sammensetning ifølge krav 21, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
24. Sammensetning ifølge krav 21, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
25. Sammensetning ifølge krav 21, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
26. Sammensetning ifølge krav 15, omfattende en forbindelse, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat, eller medisinforløper derav, valgt fra gruppen bestående av
og en farmasøytisk akseptabel bærer.
27. Sammensetning ifølge krav 26, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat, eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
28. Sammensetning ifølge krav 26, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Thr-Nva-Ile-Arg-ProNHCH2CH3eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat, eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
29. Sammensetning ifølge krav 26, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-Ile-Thr-Gln-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat, eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
30. Sammensetning ifølge krav 26, omfattende forbindelsen N-Ac-Sar-Gly-Val-D-alloIle-Ser-Ser-Ile-Arg-ProNHCH2CH3, eller et farmasøytisk akseptabelt salt, ester, solvat, eller medisinforløper derav, og en farmasøytisk akseptabel bærer.
31. Anvendelse ifølge krav 14 hvori pasienten er et ikke-humant dyr.
32. Anvendelse ifølge krav 14 hvori pasienten er et menneske. 33 * Avendelsei€iet hviiket 96krav" «Matten* 33 hvorl ^ 8t lkke-humant 35• Anvendelse i f , -ennes.e. lf0lge **** 33 nvori pas. , Pasienten er et
NO20005890A 1998-05-22 2000-11-21 Nye peptidforbindelser med antiangiogene egenskaper, sammensetninger og medikamenter inneholdende disse. NO326871B1 (no)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US8374598A 1998-05-22 1998-05-22
US25057499A 1999-02-16 1999-02-16
US27746699A 1999-03-26 1999-03-26
PCT/US1999/011448 WO1999061476A1 (en) 1998-05-22 1999-05-21 Peptide antiangiogenic drugs

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO20005890D0 NO20005890D0 (no) 2000-11-21
NO20005890L NO20005890L (no) 2001-01-12
NO326871B1 true NO326871B1 (no) 2009-03-09

Family

ID=27374598

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20005890A NO326871B1 (no) 1998-05-22 2000-11-21 Nye peptidforbindelser med antiangiogene egenskaper, sammensetninger og medikamenter inneholdende disse.

Country Status (26)

Country Link
EP (1) EP1078002B1 (no)
JP (3) JP3753612B2 (no)
KR (1) KR100447696B1 (no)
CN (1) CN1311796A (no)
AR (1) AR018371A1 (no)
AT (1) ATE396204T1 (no)
AU (1) AU764277B2 (no)
BG (1) BG65065B1 (no)
BR (1) BR9910639A (no)
CA (1) CA2329250C (no)
CO (1) CO5080726A1 (no)
CY (1) CY1109118T1 (no)
CZ (1) CZ299639B6 (no)
DE (1) DE69938782D1 (no)
ES (1) ES2307337T3 (no)
HK (1) HK1037376A1 (no)
HU (1) HUP0102579A3 (no)
NO (1) NO326871B1 (no)
NZ (1) NZ507912A (no)
PL (1) PL200471B1 (no)
PT (1) PT1078002E (no)
SI (1) SI1078002T1 (no)
SK (1) SK286554B6 (no)
TR (1) TR200003442T2 (no)
TW (1) TWI247748B (no)
WO (1) WO1999061476A1 (no)

Families Citing this family (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6774211B1 (en) 1998-05-22 2004-08-10 Abbott Laboratories Peptide antiangiogenic drugs
CA2622786A1 (en) * 1998-10-16 2000-04-27 Naoto Oku Neovascular-specific peptides
US7488590B2 (en) 1998-10-23 2009-02-10 Amgen Inc. Modified peptides as therapeutic agents
CN1810832B (zh) 1998-10-23 2012-12-12 麒麟-安姆根有限公司 与MPl受体结合并具有血小板生成活性的模拟二聚体血小板生成素肽
US20020183242A1 (en) * 2001-04-11 2002-12-05 Jack Henkin Peptide antiangiogenic drugs
US20030050246A1 (en) * 2001-07-26 2003-03-13 Fortuna Haviv Peptides having antiangiogenic activity
US20030105025A1 (en) * 2001-10-31 2003-06-05 Fortuna Haviv Tri-and tetrapeptides having antiangiogenic activity
US7001984B2 (en) 2001-10-31 2006-02-21 Abbott Laboratories Di-, tri-, and tetra-peptides having antiangiogenic activity
US7067490B2 (en) 2001-10-31 2006-06-27 Abbott Laboratories Hepta-, Octa-and nonapeptides having antiangiogenic activity
US7037897B2 (en) 2001-10-31 2006-05-02 Abbott Laboratories TRI-, TETRA-, and penta-peptides having antiangiogenic activity
BR0209758A (pt) * 2001-10-31 2005-10-04 Abbott Lab Hepta-, octa- e nonapeptìdeos possuindo atividade anti-angiogênica
US20030125260A1 (en) * 2001-10-31 2003-07-03 Fortuna Haviv Tetra-and pentapeptides having antiangiogenic activity
US20030119746A1 (en) * 2001-10-31 2003-06-26 Fortuna Haviv Hepta-and octapeptides having antiangiogenic activity
US7122625B2 (en) 2001-10-31 2006-10-17 Abbott Laboratories Hexa-, hepta-, and octapeptides having antiangiogenic activity
US7169888B2 (en) 2001-10-31 2007-01-30 Abbott Laboratories Tetra-, penta-, hexa- and heptapeptides having antiangiogenic activity
EP1451209A4 (en) * 2001-10-31 2009-06-03 Abbott Lab TETRA-, PENTA-, HEXA- AND HEPTAPEPTIDES HAVING ANTI-ANGIOGENIC ACTIVITY
US20030125259A1 (en) 2001-10-31 2003-07-03 Fortuna Haviv Octa- and nonapeptides having antiangiogenic activity
MXPA04009228A (es) 2002-03-22 2005-08-16 Gpc Biotech Ag Compuestos inmunosupresores, metodos y usos relacionados con los mismos.
US7432245B2 (en) 2002-06-07 2008-10-07 Abbott Laboratories Inc. Pharmaceutical formulation comprising a peptide angiogenesis inhibitor
US20030228365A1 (en) * 2002-06-07 2003-12-11 Fortuna Haviv Pharmaceutical formulation
EP1853294A4 (en) 2005-03-03 2010-01-27 Covx Technologies Ireland Ltd ANTIANGIOGENIC COMPOUNDS
US8008453B2 (en) 2005-08-12 2011-08-30 Amgen Inc. Modified Fc molecules
JP2007255910A (ja) * 2006-03-20 2007-10-04 Hokkaido Univ Ｎｍｒシグナルの帰属方法
JO3324B1 (ar) 2006-04-21 2019-03-13 Amgen Inc مركبات علاجية مجففة بالتبريد تتعلق بالعصارة الهضمية
WO2008003013A2 (en) * 2006-06-29 2008-01-03 Abbott Laboratories Antitumorigenic drug combination comprising an hdac inhibitor and a tsp-1 peptidomimetic
CN104004057B (zh) * 2013-02-25 2016-08-24 上海市第一人民医院 一类抑制新生血管的小肽及其应用
CN107778355B (zh) * 2016-08-25 2021-04-20 成都圣诺生物制药有限公司 一种合成西曲瑞克的方法
WO2023033016A1 (ja) * 2021-09-01 2023-03-09 積水メディカル株式会社 アルギニン誘導体

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5200397A (en) * 1990-02-22 1993-04-06 W. R. Grace & Co.-Conn. Use of peptide analogs of thrombospondin for the inhibition of angiogenic activity
WO1993016716A1 (en) * 1992-02-24 1993-09-02 Northwestern University Method and composition for inhibiting angiogenesis
ES2246513T3 (es) * 1996-05-03 2006-02-16 Abbott Laboratories Nuevos peptidos anti-angiogenicos, polinucleotidos que los codifican y procedimientos de inhibicion de la angiogenesis.
DE69827223T2 (de) * 1997-03-17 2006-02-02 Northwestern University, Chicago Antiangiogene substanz zur behandlung von krebs, arthritis und netzhauterkrankungen

Also Published As

Publication number Publication date
AU4407599A (en) 1999-12-13
CA2329250A1 (en) 1999-12-02
CO5080726A1 (es) 2001-09-25
NZ507912A (en) 2002-10-25
SK286554B6 (sk) 2008-12-05
EP1078002A1 (en) 2001-02-28
CN1311796A (zh) 2001-09-05
JP3753612B2 (ja) 2006-03-08
BG65065B1 (bg) 2007-01-31
TWI247748B (en) 2006-01-21
ES2307337T3 (es) 2008-11-16
HUP0102579A3 (en) 2002-02-28
HK1037376A1 (en) 2002-02-08
KR20010025093A (ko) 2001-03-26
EP1078002B1 (en) 2008-05-21
JP2002516342A (ja) 2002-06-04
CZ20004327A3 (cs) 2001-08-15
CZ299639B6 (cs) 2008-10-01
TR200003442T2 (tr) 2001-03-21
PT1078002E (pt) 2008-09-02
DE69938782D1 (de) 2008-07-03
KR100447696B1 (ko) 2004-09-08
BR9910639A (pt) 2002-01-15
NO20005890D0 (no) 2000-11-21
ATE396204T1 (de) 2008-06-15
JP2006001923A (ja) 2006-01-05
BG105064A (en) 2001-08-31
CY1109118T1 (el) 2014-07-02
AR018371A1 (es) 2001-11-14
PL200471B1 (pl) 2009-01-30
PL344415A1 (en) 2001-11-05
AU764277B2 (en) 2003-08-14
JP3795906B2 (ja) 2006-07-12
SK17632000A3 (sk) 2001-07-10
WO1999061476A1 (en) 1999-12-02
SI1078002T1 (sl) 2008-10-31
CA2329250C (en) 2012-03-27
JP2006232840A (ja) 2006-09-07
NO20005890L (no) 2001-01-12
HUP0102579A2 (hu) 2002-01-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO326871B1 (no) Nye peptidforbindelser med antiangiogene egenskaper, sammensetninger og medikamenter inneholdende disse.
US5932545A (en) Antiangiogenic drug to treat cancer, arthritis and retinopathy
JP2005272480A (ja) トロンボスポンジン−様活性を有するペプチド及びその治療のための使用
JP2009001576A (ja) 癌、関節炎および網膜症の治療用抗脈管形成薬
US6465614B1 (en) High-affinity response-selective C-terminal analogs of C5a anaphylatoxin
DE60025648T2 (de) Peptide mit antiangiogener aktivität
US6716963B1 (en) Peptide antiangiogenic drugs
US6774211B1 (en) Peptide antiangiogenic drugs
JP2003514920A (ja) 抗血管新生活性を有するｎ−アルキル化ペプチド
BG108587A (bg) Пептиди притежаващи анти -ангиогенна активност
EP3647319A1 (en) Peptide compound, application thereof and composition containing same
US6777535B1 (en) N-alkylated peptides having antiangiogenic activity
MXPA00011490A (en) Peptide antiangiogenic drugs
MXPA98009612A (en) Antiangiogenic drug to treat cancer, arthritis and retinopathy
JP4362064B2 (ja) 抗血管新生活性を有するヘプタ−、オクタ−、およびノナペプチド
US20030105023A1 (en) Tetra-, penta-, hexa- and heptapeptides having antiangiogenic activity

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees