NO326831B1

NO326831B1 - Pyrimidinderivater samt anvendelse og fremgangsmate for fremstilling derav, og farmasoytisk preparat

Info

Publication number: NO326831B1
Application number: NO20033635A
Authority: NO
Inventors: Andrew Peter Thomas
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 2001-02-17
Filing date: 2003-08-15
Publication date: 2009-02-23
Also published as: DK1362050T3; MXPA03007351A; KR100829035B1; NO20033635D0; ATE288436T1; AU2002231960B2; PT1362050E; WO2002066481A1; CN1524081A; IL157282A; ZA200306081B; GB0103926D0; EP1362050B1; NO20033635L; IL157282A0; BR0207294A; EP1362050A1; CN1307179C; DE60202844D1; ES2236494T3

Description

KJEMISKE FORBINDELSER

Oppfinnelsen angår pyrimidinderivater eller farmasøytisk akseptable salter eller in vivo hydrolyserbare estere derav, som har celle-cyklus hemmende aktivitet og er følgelig anvendelige for deres anti-celle-proliferasjon (så som anti-kreft) aktivitet og er derfor anvendelige i metoder for behandling av menneske- eller dyrekroppen. Oppfinnelsen angår også fremgangsmåter for fremstilling av nevnte pyrimidinderivater, farmasøytiske preparater inneholdende dem og anvendelse av dem ved fremstilling av medikamenter anvendelig ved dannelse av en anti-celle-proliferasjons effekt i et varmblodig dyr så som mennesker.

En familie av intracellulære proteiner betegnet cycliner spiller en sentral rolle i cellecyklusen. Syntesen og nedbrytning av cycliner er nært kontrollert slik at deres ekspresjonsnivå varierer under cellecyklusen. Cycliner binder seg til cyclin-avhengige serin/treonin kinaser (CDKs) og denne assosieringen er essensiell for CDK (så som CDK1, CDK2, CDK4 og/eller CDK6) aktiviteten innen cellen. Selv om de nøyaktige detaljer angående hvorledes hver av disse faktorer kombinerer for å regulere CDK aktivitet er dårlig forstått, dikterer balanse mellom de to hvorvidt eller ikke cellen vil gå gjennom cellecyklusen.

Nyere konvergens av oncogen og tumor suppressor genforskning har identifisert reguleringen av inngang inn i cellecyklusen som et nøkkelkontrollpunkt i mitogenesen i tumorer. Videre, synes CDKs å være nedstrøms av flere oncogene signaliseringsbaner. Disregulering av CDK aktivitet ved oppregulering av cycliner og/eller delesjon av endogene inhibitorer synes å være en viktig akse mellom mitogene signaliseringsbaner og proliferasjon av tumorceller.

Følgelig er det blitt oppdaget en inhibitor for cellecyklus kinaser, spesielt inhibitorer av CDK2, CDK4 og/eller CDK6 (som opererer i henholdsvis S-fase, Gl-S og Gl-S fase) burde være verdifulle som en selektiv inhibitor for celleproliferasjon, så som vekst av pattedyr-kreftceller.

Foreliggende oppfinnelse er basert på oppdagelsen av at visse pyrimidinforbindelser overraskende hemmer virkningene av cellecyklus kinaser som viser selektivitet for CDK2, CDK4 og CDK6 og således har anti-celle-proliferasjons egenskaper. Slike egenskaper er forventet å være verdifulle ved behandling av sykdomstilstander forbundet med avvikende celle cykler og celleproliferasjon så som kreft (faste tumorer og leukemier), fibroproliferative og differensierende lidelser, psoriasis, revmatoid artritt, Kaposi's sarkom, haemangiom, akutte og kroniske nephropathier, aterom, aterosklerose, arteriell restenose, autoimmune sykdommer, akutt og kronisk inflammasjon, bensykdommer og okulære sykdommer med retinal kar proliferasjon.

Følgelig tilveiebringer foreliggende oppfinnelse en forbindelse med formel (I):

hvor:

Ring A er en gruppe med formel (IA) eller (IB):

hvor én eller flere av X<1>, X<2>, X<3> og X<4> er nitrogen og de andre er CR<5> hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige;

R og R er uavhengig av hverandre valgt fra hydrogen, trifluormetoksy, C|.6alkyl, Ci-6alkoksy, Af-(Ci-6alkyl)amino, Af,AKCi-6alkyl)2amino,; hvor hvilken som helst R eller R kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<7>;

R er halogen eller sulfamoyl;

p er 0-4; hvor verdiene av R3 kan være like eller forskjellige;

R4 er en gruppe A-E-; hvor

A er valgt fra C|.6alkyl, C3.gcykloalkyl, (heterocyklisk gruppe)Ci.6alkyl eller C3_8cykloalkylCi-6alkyl; hvor A kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<9>;

E er -N(R<a>)S02-; hvor Ra er hydrogen eller C|.6alkyl;

R<9> er uavhengig valgt fra hydroksy, Ci-6alkyl, C2-6alkenyl, C2-6alkynyl, Ci-6alkoksy, Af,Af-(Ci-6alkyl)2amino, C|.6alkylS, C].6alkoksykarbonyl, C|.6alkoksykarbonylamino, benzyloksykarbonylamino, N-(Ci.6alkyl)sulfamoyl og A^Af-(Ci-6alkyl)2Sulfamoyl; hvor R<9> kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere. R 1 0;

q er 0-2; hvor verdiene av R4 kan være like eller forskjellig; og hvor p + q < 5;

R7 er halogen;

og hvor en hvilken som helst "heterocyklisk gruppe" er en mettet, delvis mettet eller umettet, mono eller bicyklisk ring inneholdende 5 eller 6 atomer hvor minst ett atom er valgt fra nitrogen, svovel eller oksygen som kan være karbon eller nitrogen koblet, hvor en -CH2-gruppe i ringen kan eventuelt bli erstattet ved en -C(O)- og et ringsvovelatom kan eventuelt bli oksydert for å danne S-oksidet(ene);

eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

I denne beskrivelsen omfatter betegnelsen "alkyl" både lineære og forgrenede alkylgrupper men referanser til individuelle alkylgrupper så som "propyl" er spesifikk for kun den lineære versjonen. For eksempel omfatter "C|_6alkyl" CMalkyl, Cualkyl, propyl, isopropyl og f-butyl. Imidlertid, er referanser til individuelle alkylgrupper så som 'propyl' spesifikke for kun den lineære versjonen og referanser til individuelle forgrenede alkylgrupper så som 'isopropyl' er spesifikke for kun den forgrenete versjonen. En lignende konvensjon gjelder for andre rester, for eksempel "fenylCi.6alkyl" omfatter fenylCj^alkyl, benzyl, 1-fenyletyl og 2-fenyletyl. Betegnelsen "halogen" angir fluor, klor, brom og jod.

Hvor eventuelle substituenter er valgt fra "en eller mer" grupper skal det forstås at denne definisjonen omfatter at alle substituenter er valgt fra én av de spesifiserte grupper eller at substituentene er valgt fra to eller flere av de spesifiserte grupper.

Eksempler og egnet verdier av betegnelsen "heterocyklisk gruppe" er morfolino, piperidyl, pyridyl, pyranyl, pyrrolyl, isotiazolyl, tienyl, tiadiazolyl, piperazinyl, tiazolidinyl, pyrrolidinyl, tiomorfolino, pyrrolinyl, 3,5-dioksapiperidinyl, tetrahydropyranyl, imidazolyl, pyrimidyl, pyrazinyl, pyridazinyl, isoksazolyl, 4-pyridon, 2-pyrrolidon og 4-tiazolidon. Ytterligere eksempler og egnete verdier av betegnelsen "heterocyklisk gruppe" er morfolino, piperidyl, pyridyl, pyranyl, pyrrolyl, pyrazolyl, isotiazolyl, tienyl, tiadiazolyl, piperazinyl, tiazolidinyl, pyrrolidinyl, tiomorfolino, pyrrolinyl, 3,5-dioksapiperidinyl, tetrahydropyranyl, imidazolyl, pyrimidyl, pyrazinyl, pyridazinyl, isoksazolyl, 4-pyridon, 2-pyrrolidon og 4-tiazolidon, spesielt morfolino, pyrazolyl og pyrrolidinyl. En "heterocyklisk gruppe" en mettet, delvis mettet eller umettet, mono eller bicyklisk ring inneholdende 5 eller 6 atomer hvor minst ett atom er valgt fra nitrogen, svovel eller oksygen, den kan, hvis ikke på annen måte spesifisert, være karbon eller nitrogen bundet, en -CH2- gruppe kan eventuelt erstattes av en -C(0)-og et ringsvovelatom kan være eventuelt oksydert for å danne S-oksyder.

Et eksempel på "Ci.6alkanoyloksy" er acetoksy. Eksempler på "Ci_6alkoksykarbonyl" omfatter metoksykarbonyl, etoksykarbonyl, n- og f-butoksykarbonyl. Eksempler på "Ci.6alkoksy" omfatter metoksy, etoksy og propoksy. Eksempler på "Ci.6alkanoylamino" omfatter formamido, acetamido og propionylamino. Eksempler på "Ci_6alkylS(0)a hvor a er 0 til 2" omfatter metyltio, etyltio, metylsulfinyl, etylsulfinyl, mesyl og etylsulfonyl. Eksempler på "Ci_6alkanoyl" omfatter propionyl og acetyl. Eksempler på 'W-(Ci.6alkyl)amino" omfatter metylamino og etylamino. Eksempler på "Af,Af-(Ci-6alkyl)2amino" omfatter di-iV-metylamino, di-(Af-etyl)amino og Af-etyl-Af-metylamino. Eksempler på "C2-6alkenyl" er vinyl, allyl og 1-propenyl. Eksempler på "C2-6alkynyl" er etynyl, 1-propynyl og 2-propynyl. Eksempler på 'W-(Ci-6alkyl)sulfamoyl" er A^-(metyl)sulfamoyl og iV-(etyl)sulfamoyl. Eksempler på

'W-(Ci-6alkyl)2Sulfamoyl" er AT,iV-(dimetyl)sulfamoyl og AT-(metyl)-AT-(etyl)sulfamoyl.

Eksempler på 'W-(Ci-6alkyl)karbamoyl" er metylaminokarbonyl og etylaminokarbonyl. Eksempler på 'W,A^-(Ci.6alkyl)2karbamoyl" er dimetylaminokarbonyl og metyletylaminokarbonyl. Eksempler på "C3.gcykloalkyl" er cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopropyl og cykloheksyl. Eksempler på "(heterocyklisk gruppe)Ci-6alkyl" omfatter pyridylmetyl, 3-morfolinopropyl og 2-pyrimid-2-yletyl. Eksempler på "(heterocyklisk gruppe)tio" omfatter pyridyltio, 3-morfolinotio og 2-pyrimid-2-yltio. Eksempler på "C3_8cykloalkylCi-6alkyl" er cyklopropyletyl, cyklobutylmetyl, 2-cyklopropylpropyl og cykloheksyletyl. Eksempler på "fenylCi_6alkyl" er fenetyl, benzyl og 2-fenylpropyl.

Et egnet farmasøytisk akseptabelt salt av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse er for eksempel et syre-addisjonssalt av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som er tilstrekkelig basisk, for eksempel et syre-addisjonssalt med, for eksempel en uorganisk eller organisk syre, for eksempel saltsyre, bromhydrogensyre, svovelsyre, fosforsyre, trifluoreddiksyre, sitronsyre eller maleinsyre. I tillegg er et egnet farmasøytisk akseptabelt salt av en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse som er tilstrekkelig surt et alkalimetall-salt, for eksempel et natrium- eller kalium-salt, et jordalkalimetall-salt, for eksempel et kalsium eller magnesiumsalt, et ammonium-salt eller et salt med en organisk base som gir et fysiologisk-akseptabelt kation, for eksempel et salt med metylamin, dimetylamin, trimetylamin, piperidin, morfolin eller tris-(2-hydroksyetyl)amin.

En in vivo hydrolyserbar ester av en forbindelse med formel (I) inneholdende karboksy eller hydroksygruppe er for eksempel en farmasøytisk akseptabel ester som blir hydrolysert i menneske- eller dyrekroppen for å produsere opphavs syre eller alkohol. Egnete farmasøytisk akseptable estere for karboksy omfatter Ci_6alkoksymetylestere for eksempel metoksymetyl, Ci-6alkanoyloksymetylestere for eksempel pivaloyloksymetyl, ftalidylestere, C3.8cykloalkoksykarbonyloksyCi.6alkylestere for eksempel 1-cykloheksylkarbonyloksyetyl; l,3-dioksolen-2-onylmetylestere for eksempel 5-metyl-l,3-dioksolen-2-onylmetyl; og Ci-6alkoksykarbonyloksyetylestere for eksempel 1-metoksykarbonyloksyetyl og kan dannes ved hvilken som helst karboksygruppe i forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse.

En in vivo hydrolyserbar ester av en forbindelse med formel (I) inneholdende en hydroksygruppe omfatter uorganiske estere så som fosfatestere og oc-acyloksyalkyletere og relatert forbindelser som som et resultat av in vivo hydrolyse av esternedbrytning, hvilket gir opphavs hydroksygruppen. Eksempler på a-acyloksyalkyletere omfatter acetoksymetoksy og 2,2-dimetylpropionyloksy-metoksy. En seleksjon av in vivo hydrolyserbar ester dannende grupper for hydroksy omfatter alkanoyl, benzoyl, fenylacetyl og substituert benzoyl og fenylacetyl, alkoksykarbonyl (hvilket gir alkylkarbonatestere), dialkylkarbamoyl og A^-(dialkylaminoetyl)-A^-alkylkarbamoyl (hvilket gir karbamater), dialkylaminoacetyl og karboksyacetyl. Eksempler på substituenter på benzoyl omfatter morfolino og piperazino bundet fra et ringnitrogenatom via en metylengruppe til 3- eller 4- stillingen av benzoylringen.

Noen forbindelser med formel (I) kan ha chirale sentere og/eller geometrisk isomere sentre (E- og Z- isomerer) og det skal forstås at oppfinnelsen omfatter alle slike optiske, diastereoisomerer og geometriske isomerer som har CDK hemmende aktivitet.

Oppfinnelsen angår hvilken som helst og alle tautomere former av forbindelsene med formel (I) som har CDK hemmende aktivitet.

Det skal også forstås at visse forbindelser med formel (I) kan eksistere i solvatert så vel som usolvaterte former så som for eksempel hydratiserte former. Det skal forstås at oppfinnelsen omfatter alle slike solvaterte former som har CDK hemmende aktivitet.

Foretrukne verdier for variable grupper er som følger. Slike verdier kan anvendes hvor passende med hvilken som helst av definisjonene, kravene eller utførelsesformer definert ovenfor eller nedenfor.

I ett aspekt ved foreliggende oppfinnelse, er fortrinnsvis Ring A en gruppe med formel

(IA).

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse, er fortrinnsvis Ring A en gruppe med formel (IB).

Fortrinnsvis er én av X<1>, X2, X<3> og X<4> nitrogen og de andre er CR<5> hvor verdiene av R5 kan være like eller forskjellige.

I ett aspekt ved foreliggende oppfinnelse, er X<1> fortrinnsvis nitrogen og de andre er CR5 hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er X fortrinnsvis nitrogen og de andre er CR hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse, er X fortrinnsvis nitrogen og de andre er CR5 hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse, er X4 fortrinnsvis nitrogen og de andre er CR<5> hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige.

Fortrinnsvis er R<2> hydrogen.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er fortrinnsvis R<2> valgt fra hydrogen, Ci_6alkyl eller N, N-( C i -6alkyl)2amino.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, mer foretrukket er R valgt fra hydrogen, metyl, etyl eller AT,iV-dimetylamino.

Fortrinnsvis er R<5> hydrogen.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er fortrinnsvis R<5> valgt fra hydrogen, Ci^alkyl eller Ci-6alkoksy; hvor R<5> kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<7>; hvor R<7 >er valgt fra halogen.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, mer foretrukket er R<5> valgt fra hydrogen, metyl, metoksy eller 2,2,2-trifluoretoksy.

Fortrinnsvis er R<3> sulfamoyl.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er fortrinnsvis R sulfamoyl eller halogen.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, mer foretrukket er R3 sulfamoyl eller fluor. Fortrinnsvis er p 0 eller 1.

Spesielt er R<4> A^-(2-dimetylaminoetyl)sulfamoyl, A^-(2-metoksyetyl)sulfamoyl, iV-metylsulfamoyl eller A^-(3-dimetylaminopropyl)sulfamoyl.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er fortrinnsvis R<4> en gruppe A-E-; hvor

A er valgt fra Ci-6alkyl, C3.scykloalkyl, (heterocyklisk gruppe)Ci-6alkyl eller C3-8cykloalkylCi.6alkyl; hvor A kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<9>;

E er -N(R<a>)S02-; hvor Ra er hydrogen eller C|.6alkyl;

R<9> er uavhengig valgt fra hydroksy, Ci^alkyl, C2-6alkenyl, C2-6alkynyl, Ci.6alkoksy, MA^-(Ci.6alkyl)2amino eller Ci^alkylS.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, mer foretrukket er R4 en gruppe A-E-; hvor

A er valgt fra metyl, etyl, propyl, isopropyl, f-butyl, cyklopropyl, cyklobutyl, morfolinoetyl, pyrrolidin-l-yletyl, pyrazol-l-yletyl eller cyklopropylmetyl; hvor A kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<9>;

E er -N(R<a>)SC«2-; hvor Ra er hydrogen eller metyl;

R<9> er uavhengig valgt fra hydroksy, metyl, etenyl, etynyl, metoksy, etoksy, propoksy, iV,Af-dimetylamino eller metyltio.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er spesielt R4 Af-metylsulfamoyl, AT-cyklopropylmetylsulfamoyl, Af-etylsulfamoyl, iV-propylsulfamoyl, iV-allylsulfamoyl, Af-2-propynylsulfamoyl, AT-cyklobutylsulfamoyl, AT-f-butylsulfamoyl, iV-cyklopropylsulfamoyl, Af-(2-dimetylaminoetyl)sulfamoyl, N-(2-metoksyetyl)sulfamoyl, Af-(2-pyrazol-l-yletyl)sulfamoyl, Af-metyl-AK2-metoksyetyl)sulfamoyl, N-(l-cyklopropyletyl)sulfamoyl, A^-(3-dimetylaminopropyl)sulfamoyl, AT-(3-metoksypropyl)sulfamoyl, A^-(3-hydroksy-2-hydroksymetylprop-2-yl)sulfamoyl, N-( 1,3-dihydroksyprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-morfolino-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, N-( 1,3-dimetoksyprop-2-yl)sulfamoyl, AKI ,3-dietoksyprop-2-yl)sulfamoyl, N-( 1 -metoksyprop-2-yl)sulfamoyl, N-( l -etoksyprop-2-yl)sulfamoyl, Af-(l-hydroksyprop-2-yl)sulfamoyl, AT-(3-metyltio-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-pyrrolidin-l-yl-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-metoksy-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, AT-(2-metoksy-2-metylpropyl)sulfamoyl, N-( 1 -propoksyprop-2-yl)sulfamoyl eller A^-(3-hydroksy-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl.

Fortrinnsvis er q 0 eller 1.

Fortrinnsvis er p + q 1 eller 2.

Mer foretrukket er p + q 1.

Spesielt er p + q 1 og R<3> eller R4 gruppen er i para stilling av anilinogruppen.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen er fortrinnsvis p + q 0,1 eller 2; hvor verdiene av R 1 kan være like eller forskjellige og verdiene av R Å.kan være like eller forskjellige.

Derfor i et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse, tilveiebringes en forbindelse med formel (I) (som vist ovenfor) hvor: Ring A er en gruppe med formel (IA);

en av X<1>, X<2>, X<3> og X<4> er nitrogen og de andre er CH;

R er hydrogen;

R er sulfamoyl;

p er 0 eller 1;

R<4> er A^-(2-dimetylaminoetyl)sulfamoyl, A7-(2-metoksyetyl)sulfamoyl, N-metylsulfamoyl eller A^-(3-dimetylaminopropyl)sulfamoyl.

q er 0 eller 1;

p + q er 1 og R<3> eller R<4> gruppen er i parastilling av anilinogruppen;

Derfor i et annet aspekt ved oppfinnelsen, tilveiebringes en forbindelse med formel (I)

(som vist ovenfor) hvor:

Ring A er en gruppe med formel (IA) (som vist ovenfor)

hvor én av X1, X<2>, X<3> og X<4> er nitrogen og de andre er CR<5>; hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige;

R<2> er valgt fra hydrogen, Ci^alkyl eller A/iAT-(Ci.6alkyl)2amino;

R<5> er valgt fra hydrogen, Ci_6alkyl eller Ci-6alkoksy; hvor R<5> kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<7>; hvor R<7> er valgt fra halogen;

R<3> er sulfamoyl eller halogen;

p er 0 eller 1;

R<4> er en gruppe A-E-; hvor

A er valgt fra Ci^alkyl, C3.8cykloalkyl, (heterocyklisk gruppe)C|.6alkyl eller C3.8cykloalkylCi-6alkyl; hvor A kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<9>;

E er -N(R<a>)S02-; hvor Ra er hydrogen eller Ci.6alkyl;

R<9> er uavhengig valgt fra hydroksy, Ci_6alkyl, C2-6alkenyl, C2.6alkynyl, Ci-6alkoksy, N,AKCi_6alkyl)2amino eller C|.6alkylS(0)en hvor a er 0;

q er 0 eller 1;

p + q er 0,1 eller 2; hvor verdiene av R<3> kan være like eller forskjellige og verdiene av R<4> kan være like eller forskjellige;

Derfor i et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse, tilveiebringes en forbindelse med formel (I) (som vist ovenfor) hvor:

Ring A er en gruppe med formel (IA) (som vist ovenfor)

hvor én av X<1>, X2, X<3> og X<4> er nitrogen og de andre er CR<5>; hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige;

R er valgt fra hydrogen, metyl, etyl eller iV.iV-dimetylamino;

R<5> er valgt fra hydrogen, metyl, metoksy eller 2,2,2-trifluoretoksy;

R3 er sulfamoyl eller fluor;

p er 0 eller 1;

R4 er N-metylsulfamoyl, Af-cyklopropylmetylsulfamoyl, iV-etylsulfamoyl, Af-propylsulfamoyl, iV-allylsulfamoyl, Af-2-propynylsulfamoyl, N-cyklobutylsulfamoyl, Af-f-butylsulfamoyl, iV-cyklopropylsulfamoyl, A<7->(2-dimetylaminoetyl)sulfamoyl, Af-(2-metoksyetyl)sulfamoyl, AT-(2-pyrazol- l-yletyl)sulfamoyl, A^-metyl-A?-(2-metoksyetyl)sulfamoyl, N-( 1 -cyklopropyletyl)sulfamoyl, A^-(3-dimetylaminopropyl)sulfamoyl, Af-(3-metoksypropyl)sulfamoyl, Ar-(3-hydroksy-2-hydroksymetylprop-2-yl)sulfamoyl, N-( 1,3-dihydroksyprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-morfolino-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(l,3-dimetoksyprop-2-yl)sulfamoyl, N-( 1,3-dietoksyprop-2-yl)sulfamoyl, N-( 1 -metoksyprop-2-yl)sulfamoyl, N-{ 1 -etoksyprop-2-yl)sulfamoyl, N-( 1 -hydroksyprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-metyltio-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-pyrrolidin-l-yl-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-metoksy-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(2-metoksy-2-metylpropyl)sulfamoyl, A^-(l-propoksyprop-2-yl)sulfamoyl eller N-(3-hydroksy-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl;

q er 0 eller 1;

p + q er 0,1 eller 2; hvor verdiene av R kan være like eller forskjellige og verdiene av R<4> kan være like eller forskjellige;

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse hvilket som helst av eksemplene eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

I et annet aspekt ved oppfinnelsen, er foretrukne forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse hvilket som helst av Eksemplene 7, 27,29, 39,41,42,46, 63, 64 eller 66 eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

Foretrukne aspekter ved foreliggende oppfinnelse er de som angår forbindelsen med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav.

Et annet aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav idet fremgangsmåten (hvor variable grupper er, hvis ikke på annen måte spesifisert, som definert i formel (I)) omfatter av:

a) omsetning av en pyrimidin med formel (II):

hvor L er en utskiftbar-gruppe; med et amin med formel (III): b) omsetning av en pyrimidin med formel (IV): med en forbindelse med formel (V):

hvor én av M og Q er en utskiftbar-gruppe X og de andre er et metallisk reagens Y; eller

c) omsetning av en forbindelse med formel (VI):

med en forbindelse med formel (VII): hvor R5 er C|_6alkyl; d) omsetning av en aminoforbindelse med formel (VIII): med en forbindelse med formel (IX):

hvor E er en utskiftbar-gruppe;

og deretter hvis nødvendig:

i) omdannelse av en forbindelse med formel (I) til en annen forbindelse med formel (I); ii) fjerning av hvilke som helst beskyttelsesgrupper;

iii) dannelse av et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester.

L er en utskiftbar-gruppe, egnete verdier for L er for eksempel en halogen, metyltio eller sulfonyloksygruppe, for eksempel en klor, brom, metansulfonyloksy eller

toluen-4-sulfonyloksygruppe.

E er en utskiftbar-gruppe, egnete verdier for E er for eksempel en halogen eller sulfonyloksygruppe, for eksempel en klor, brom, jod eller trifluormetansulfonyloksygruppe.

En egnet utskiftbar gruppe X er for eksempel en halogen eller sulfonylgruppe, for eksempel en brom, jod eller trifluormetylsulfonylgruppe.

En egnet metallisk gruppe Y, er for eksempel kobber, litium, et organoboronreagens så som -B(OH)2, -B(OPr')2 eller -B(Et)2 eller en organotinforbindelse så som S11BU3, en organosilisiumforbindelse så som Si(Me)F2, en organozirkoniumforbindelse så som ZrC^, en organoaluminiumforbindelse så som AlEt2, en organomagnesiumforbindelse så som MgBr, en organosinkforbindelse så som ZnCl eller en organokvikksølv forbindelse så som HgBr.

Spesifikke reaksjonsbetingelser for reaksjonen ovenfor er som følger,

a) Pyrimidiner med formel (II) og aminer med formel (III) kan omsettes sammen:

i) i nærvær av et egnet løsningsmiddel for eksempel et keton så som aceton eller en alkohol så

som etanol eller butanol eller et aromatisk hydrokarbon så som toluen eller Af-metyl pyrrolidin, eventuelt i nærvær av en egnet syre for eksempel en uorganisk syre så som saltsyre eller svovelsyre eller en organisk syre så som eddiksyre eller maursyre (eller en egnet Lewis-syre) og ved en temperatur i området 0°C til tilbakeløp, er fortrinnsvis tilbakeløp; eller ii) under standard Buchwald conditions (for eksempel se J. Am. Chem. Soc, 118, 7215; J. Am. Chem. Soc, 119, 8451; J. Org. Chem., 62, 1568 og 6066) for eksempel i nærvær av palladiumacetat, i et egnet løsningsmiddel for eksempel en aromatisk løsningsmiddel så som toluen, benzen eller xylen, med en egnet base for eksempel en uorganisk base så som cesiumkarbonat eller en organisk base så som kalium-t-butoksyd, i nærvær av en egnet ligand så som 2,2'-bis(difenylfosfino)-l,l'-binaftyl og ved en temperatur i området 25 til 80°C.

Pyrimidiner med formel (II) kan fremstilles i henhold til det følgende skjema:

hvor én av M og Q er en utskiftbar-gruppe X som definert ovenfor og de andre er et metallisk reagens Y som definert ovenfor.

Kryss-koblingsbetingelser er velkjent på området. Egnede betingelser omfatter, for eksempel de beskrevet under b) nedenfor.

Hvor Ring A er en gruppe med formel (IA) og L er metyltio, kan forbindelser med formel (II) også fremstilles i henhold til det følgende skjema:

K er en egnet utgående gruppe (for eksempel Ci_6alkanoyloksy), R<5> er som definert ovenfor, Q er en egnet utgående gruppe (for eksempel Ci-6alkoksy).

Hvor Ring A er en gruppe med formel (IB) og L er metyltio, kan forbindelser med formel (II) også fremstilles i henhold til det følgende skjema:

hvor R<5> er som definert ovenfor.

Forbindelser med formel (Ilg) eller (III) kan bli ytterligere modifisert for å produsere forbindelser med formel (Un):

Det vil forstås av fagfolk på området at forbindelser med formel (lin) kan i tillegg bli modifisert ved standard funksjonell gruppe modifikasjonsreaksjoner kjent på området for å produsere forbindelser med formel (II) hvor L er andre utgående grupper for eksempel klor, brom, tosyl og mesyl.

Forbindelser med formel (Ila), (Hb), (Ile), (Ild), (Ili) og (Ilj) er kommersielt tilgjengelige forbindelser eller de er kjent i litteraturen eller de blir fremstilt ved standard fremgangsmåter kjent på området. b) Forbindelser med formel (IV) og forbindelser med formel (V) kan omsettes sammen under standard kryss-koblingsbetingelser. Eksempler på disse er i nærvær av en katalysator, for eksempel en metallisk katalysator så som tetrakis(trifenylfosfin)palladium(0), palladium(II) klorid, palladium(II) bromid, nikkel(II) klorid, nikkel(II) bromid eller bis(trifenylfosfin)nikkel(II) klorid, i nærvær av et egnet inert løsningsmiddel eller fortynningsmiddel, for eksempel tetrahydrofuran, 1,4-dioksan, 1,2-dimetoksyetan, benzen, toluen, xylen, metanol eller etanol. Reaksjonen blir fortrinnsvis utført i nærvær av en egnet base så som for eksempel natriumkarbonat eller kaliumkarbonat, pyridin, 4-dimetylaminopyridin, trietylamin eller morfolin og hensiktsmessig ved en temperatur i området, for eksempel 10 til 250°C, fortrinnsvis i området 60 til 120°C.

Forbindelser med formel (IV) kan fremstilles i henhold til det følgende skjema:

Forbindelser med formel (V) er kommersielt tilgjengelige forbindelser eller de er kjent i litteraturen eller de blir fremstilt ved standard fremgangsmåter kjent på området. c) forbindelser med formel (VI) og forbindelser med formel (VII) blir omsatt sammen i et egnet løsningsmiddel så som iV-metylpyrrolidinon eller butanol ved en temperatur i området

100-200°C, er fortrinnsvis i området 150-170°C. Reaksjonen blir fortrinnsvis utført i nærvær av en egnet base så som for eksempel natriummetoksyd eller kaliumkarbonat.

Forbindelser med formel (VI) og (VII) er kommersielt tilgjengelige forbindelser eller de er kjent i litteraturen eller de blir fremstilt ved standard fremgangsmåter kjent på området eller forbindelser med formel (VII) kan fremstilles ved en fremgangsmåte lignende den beskrevet for (Hf) og (Ilk) ovenfor.

d) Aminoforbindelser med formel (VIII) og forbindelser med formel (IX) kan omsettes sammen under standard Buchwald betingelser så som de beskrevet under prosess a(ii)

ovenfor.

Forbindelser med formel (VIII) blir fremstilt som beskrevet ovenfor.

Forbindelser med formel (IX) er kommersielt tilgjengelige forbindelser eller de er kjent i litteraturen eller de blir fremstilt ved standard fremgangsmåter kjent på området.

Det vil forstås at visse av de forskjellige ringsubstituenter i forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan innføres ved standard aromatiske substitusjonsreaksjoner eller dannet ved konvensjonelle funksjonell gruppe modifikasjoner enten før eller umiddelbart etter prosessene nevnt ovenfor og som sådanne er omfattet ved fremgangsmåteaspektet til foreliggende oppfinnelse. Slike reaksjoner og modifikasjoner omfatter, for eksempel innføring av en substituent ved hjelp av en aromatisk substitusjonsreaksjon, reduksjen av substituenter, alkylering av substituenter og oksydasjon av substituenter. Reagensene og reaksjonsbetingelser for slike prosedyrer er velkjent i det kjemiske området. Spesielle eksempler på aromatiske substitusjonsreaksjoner omfatter innføringen av en nitrogruppe ved anvendelse av konsentrert salpetersyre, innføringen av en acylgruppe ved anvendelse av, for eksempel et acylhalogenid og Lewis-syre (så som aluminiumtriklorid) under Friedel Crafts betingelser; innføringen av en alkylgruppe ved anvendelse av et alkylhalogenid og Lewis-syre (så som aluminiumtriklorid) under Friedel Crafts betingelser; og innføringen av en halogengruppe. Spesielle eksempler på modifikasjoner omfatter reduksjonen av en nitrogruppe til en aminogruppe ved for eksempel katalytisk hydrogenering med en nikkelkatalysator eller behandling med jern i nærvær av saltsyre med oppvarmning; oksydasjen av alkyltio til alkylsulfinyl eller alkylsulfonyl.

Det vil også forstås at i noen av reaksjonene nevnt her kan det være nødvendig/ønskelig for å beskytte hvilke som helst sensitive grupper i forbindelsene. Tilfellene hvor beskyttelse er nødvendig eller ønskelig og egnede metoder for beskyttelse er kjent for fagfolk på området. Konvensjonelle beskyttelsesgrupper kan anvendes i henhold til standard praksis (for illustrasjon se T.W. Grønn, Protective groups in organic synthesis, John Wiley and Sons, 1991). Således, hvis reaktanter omfatter grupper så som amino, karboksy eller hydroksy kan det være ønskelig å beskytte gruppen i noen av reaksjonene nevnt her.

En egnet beskyttelsesgruppe for en amino eller alkylaminogruppe er for eksempel en acylgruppe, for eksempel en alkanoylgruppe så som acetyl, en alkoksykarbonylgruppe, for eksempel en metoksykarbonyl, etoksykarbonyl eller f-butoksykarbonylgruppe, en arylmetoksykarbonylgruppe, for eksempel benzyloksykarbonyl eller en aroylgruppe, for eksempel benzoyl. Avbeskyttelsesbetingelser for ovenfor beskyttelsesgrupper varierer nødvendigvis med valget av beskyttelsesgruppe. Således, kan for eksempel en acylgruppe så som en alkanoyl eller alkoksykarbonylgruppe eller en aroylgruppe fjernes for eksempel ved hydrolyse med en egnet base så som et alkalimetallhydroksyd, for eksempel litium eller natriumhydroksyd. Alternativt kan en acylgruppe så som en f-butoksykarbonylgruppe fjernes, for eksempel ved behandling med en egnet syre som saltsyre, svovelsyre eller fosforsyre eller trifluoreddiksyre og en arylmetoksykarbonylgruppe så som en benzyloksykarbonylgruppe kan fjernes, for eksempel ved hydrogenering over en katalysator så som palladium-på-karbon eller ved behandling med en Lewis-syre for eksempel bortris(trifluoracetat). En egnet alternativ beskyttelsesgruppe for en primær aminogruppe er for eksempel en ftaloylgruppe som kan fjernes ved behandling med et alkylamin, for eksempel dimetylaminopropylamin eller med hydrazin.

En egnet beskyttelsesgruppe for en hydroksygruppe er for eksempel en acylgruppe, for eksempel en alkanoylgruppe så som acetyl, en aroylgruppe, for eksempel benzoyl eller en arylmetylgruppe, for eksempel benzyl. Avbeskyttelsesbetingelser for ovenfor beskyttelsesgrupper vil nødvendigvis variere med valget av beskyttelsesgruppe. Således, kan for eksempel en acylgruppe så som en alkanoyl eller en aroylgruppe fjernes, for eksempel ved hydrolyse med en egnet base så som et alkalimetallhydroksyd, for eksempel litium eller natriumhydroksyd. Alternativt kan en arylmetylgruppe så som en benzylgruppe fjernes, for eksempel ved hydrogenering over en katalysator så som palladium-på-karbon.

En egnet beskyttelsesgruppe for en karboksygruppe er for eksempel en foresteringsgruppe, for eksempel en metyl eller en etylgruppe som kan fjernes, for eksempel ved hydrolyse med en base så som natriumhydroksyd eller for eksempel en f-butylgruppe som kan fjernes, for eksempel ved behandling med en syre, for eksempel en organisk syre så som trifluoreddiksyre eller for eksempel en benzylgruppe som kan fjernes, for eksempel ved hydrogenering over en katalysator så som palladium-på-karbon.

Beskyttelsesgruppene kan fjernes ved hvilket som helst hensiktsmessig trinn i syntesen ved anvendelse av konvensjonelle teknikker velkjent innen det kjemiske området.

Som angitt ovenfor har forbindelsene definert i foreliggende oppfinnelse anti-celle-proliferasjonsktivitet så som anti-kreft aktivitet som er antatt at oppstår fra den CDK hemmende aktiviteten til forbindelsen. Disse egenskaper kan bli bedømt, for eksempel ved anvendelse av metoden angitt nedenfor:-

Forsøk

De følgende forkortelser er blitt anvendt:-

HEPES er A^-[2-hydroksyetyl]piperazin-A<7>'-[2-etansulfonsyre]

DTT er Ditiothretiol

PMSF er Fenylmetylsulfonylfluorid

Forbindelsene ble testet i et in vitro kinase forsøk i 96 brønn format ved anvendelse av Scintillasjon Nærhet Forsøk (SPA - oppnådd fra Amersham) for å måle innføring av [y-33-P]-Adenosin Trifosfat inn i et testsubstrat (GST-Retinoblastoma protein; GST-Rb). I hver brønn ble det plassert forbindelsen som skal testes (fortynnet i DMSO og vann til korrekte konsentrasjoner) og i kontrollbrønner enten roscovitin som en inhibitor kontroll eller DMSO som en positiv kontroll.

Omtrent 0,2uU av CDK2/Cyclin E delvis-renset enzym (mengde avhengig av enzymaktivitet) fortynnet i 25jj1 inkuberingsbuffer ble satt til hver brønn deretter 20ul av GST-Rb/ATP/ATP33 blandingen (inneholdende 0,5ug GST-Rb og 0,2uM ATP og 0,14|iCi [y-33-P]-Adenosin Trifosfat i inkuberingsbuffer) og den resulterende blandingen ble ristet forsiktig, deretter inkubert ved romtemperatur i 60 minutter.

Til hver brønn ble det deretter tilsatt 150uL stoppløsning inneholdende (0,8 mg/brønn av Protein A-PVT SPA kule (Amersham)), 20pM/brønn av Anti-Glutation Transferase, Kanin IgG (oppnådd fra Molekylær Prober), 61mM EDTA og 50mM HEPES pH 7,5 inneholdende 0,05% natriumazid.

Platene ble forseglet med Topseal-S plate forseglere, latt stå i to timer og deretter sentrifugert ved 2500rpm, 1124xg., i 5 minutter. Platene ble lest på en Topcount i 30 sekunder pr. brønn.

Inkuberingsbufferen anvendt for å fortynne enzym og substratblandinger inneholdt 50mM HEPES pH7,5, lOmM MnCl2, ImM DTT, lOOuM Natriumvanadat, lOOuM NaF, lOmM Natrium Glycerofosfat, BSA (1 mg/ml, endelig).

Testsubstrat

I dette forsøket ble bare en del av retinoblastomaprotein (Science 1987 Marl3;235(4794): 1394-1399; Lee W.H., Bookstein R., Hong F., Young L.J., Shew J.Y., Lee E.Y.) anvendt, kondensert til en GST tagg. PCR av retinoblastomagen som koder for aminosyrene 379-928 (oppnådd fra retinoblastomaplasmid ATCC pLRbRNL) ble utført og sekvensen klonet inn i pGEX 2T fusjonsvektor (Smith D.B. og Johnson, K.S. Gen 67, 31

(1988); som inneholdt en tac promoter for induserbar ekspresjon, indre lac Iq gen for anvendelse i hvilken som helst E.Coli vert og en kodende region for trombin spaltning - oppnådd fra Pharmacia Biotech) som ble anvendt for å amplifisere aminosyrene 792-928. Denne sekvensen ble igjen klonet inn i pGEX 2T.

Retinoblastoma 792-928 sekvens slik oppnådd ble uttrykt i E.Coli (BL21 (DE3) pLysS celler) ved anvendelse av standard induserbare ekspresjonsteknikker og renset som følger.

E.coli pasta ble resuspendert i 10 ml/g av NETN buffer (50mM Tris pH 7,5,120mM NaCl, ImM EDTA, 0,5%volum/volum NP-40, ImM PMSF, lug/ml leupeptin, lug/ml aprotinin og lug/ml pepstatin) og ultralydbehandlet i 2 x 45 sekunder pr. 100 ml homogenat. Etter sentrifugering, ble supernatanten applisert på en 10 ml glutation Sepharose kolonne (Pharmacia Biotech, Herts, UK) og vasket med NETN buffer. Etter vasking med kinasebuffer (50mM HEPES pH 7,5, lOmM MgC12, ImM DTT, ImM PMSF, lug/ml leupeptin, lug/ml aprotinin og lug/ml pepstatin) ble proteinet eluert med 50mM redusert glutation i kinasebuffer. Fraksjoner inneholdende GST-Rb(792-927) ble samlet og dialysert natten over mot kinase buffer. Sluttproduktet ble analysert av Natrium Dodeca Sulfat (SDS) PAGE (Polyakrylamid gel) ved anvendelse av 8-16% Tris-Glycin geler (Novex, San Diego, USA).

CDK2 og Cvclin E

De åpne leserammene av CDK2 og Cyclin E ble isolert ved revers transkriptase-PCR ved anvendelse av HeLa celle og aktivert T-celle mRNA som et templat og klonet inn i insekt ekspresjonsvektor pVL1393 (oppnådd fra Invitrogen 1995 kataloge nummer: V1392-20). CDK2 og cyclin E ble deretter uttrykt [ved anvendelse av en standard virus Baculogold co-infeksjonsteknikk] i insekt SF21 cellesystem (Spodoptera Frugiperda celler avledet fra eggstokk- vev av Fall Anny Worm - kommersielt tilgjengelig).

Eksempelvis fremstilling av Cvclin E/ CDK2

De følgende Eksempel tilveiebringer detaljer av fremstilling av Cyclin E/CDK2 i SF21 celler (i TC 100 + 10% FBS(TCS) + 0,2% Pluronic) som har dobbel infeksjon MOI 3 for hvert virus av Cyclin E & CDK2.

SF21 celler dyrket i en rulleflaske kultur til 2,33 x 106 celler/ml ble anvendt for å inokuleret 10 x 500 ml rulleflasker med 0,2 x 10E6 celler/ml. Rulleflasker ble inkubert på en ruUeinnretning ved 28°C.

Etter 3 dager (72 timer.) ble cellene tellet og gjennomsnittet av 2 flasker ble funnet å være 1,86 x 10E6 celler/ml. (99% levedyktig). Kulturene ble deretter infisert med dobbel virus ved en MOI 3 for hvert virus.

Viruset ble blandet sammen før tilsetning til kulturene og kulturene returnert til rulleinnretningen 28°C.

Etter 2 dager (48 timer.) post infeksjon ble 5 Liter av kulturen høstet. Det totale celletallet ved høsting var 1,58 x 10E6 celler/ml.(99% levedyktig). Cellene ble sentrifugert ut ved 2500rpm, 30 minutter., 4°C i Heraeus Omnifuge 2,0 RS i 250 ml.porsjoner. Supernatanten ble kastet.

Partiell co-rensning av Cdk2 og Cyclin E

Sf21 celler ble resuspendert i lyse buffer (50mM Tris pH 8,2, lOmM MgCl2, ImM DTT, lOmM glycerofosfat, O.lmM natriumortovanadat, O.lmM NaF, ImM PMSF, lug/ml leupeptin og lug/ml aprotinin) og homogenisert i 2 minutter i en 10 ml Dounce homgenisator. Etter sentrifugering, ble supernatanten applisert på en Poros HQ/M 1,4/100 anion-bytter kolonne (PE Biosystems, Hertford, UK). Cdk2 og Cyclin E ble coeluert ved begynnelsen av en 0-1M NaCl gradient (kjørt i lysebuffer minus proteaseinhibitorer) over 20 kolonne volumer. Co-eluering ble kontrollert ved western blot ved anvendelse av både anti-Cdk2 og anti-Cyclin E antistoffer (Santa Cruz Bioteknologi, California, US).

Analogt kan forsøk utformet for å bedømme hemning av CDK4 og CDK6 konstrueres. CDK2 (EMBL Accession No. X62071) kan anvendes sammen med Cyclin A eller Cyclin E (se EMBL Accession No. M73812) og ytterligere detaljer for slikt forsøk er inneholdt i PCT Internasjonal Publikasjon No. W099/21845, de relevante Biokjemiske & Biologiske Evalueringsdelene som herved inntas ved referanse.

Selv om de farmakologiske egenskapene til forbindelsene med formel (I) varierer med strukturell forandring, kan generelt aktiviteten til forbindelser med formel (I) demonstreres ved IC50 konsentrasjoner eller doser i området 250(iM til lnM.

in vivo aktivitet til forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse kan bedømmes ved standardteknikker, for eksempel ved å måle hemning av cellevekst og vurdering av cytotoksisitet.

Hemning av cellevekst kan måles ved å merke celler med Sulforhodamin B (SRB), et fluorescerende fargestogg som farger proteiner og som derfor gir et estimat på mengde av protein (dvs. celler) i en brønn (se Boyd, M.R.(1989) Status of the NCI preclinical antitumour drug discovery screen. Prin. Prae Oncol 10:1-12). Således, er de følgende detaljer gitt for måling av hemning av cellevekst :-

Celler ble plated i passende medium i et volum på 100 ml i 96 brønn plater; media var Dulbecco's Modifiserte Eagle media for MCF-7, SK-UT-1B og SK-UT-1. Cellene fikk tilkobles natten over, deretter ble inhibitorforbindelser tilsatt ved forskjellige konsentrasjoner i en maksimum konsentrasjon på 1% DMSO (volum/volum). En kontrollplate ble analysert, hvilket gir en verdi for celler før dosering. Celler ble inkubert ved 37°C, (5% CO2) i tre dager.

Ved slutten av tre dager ble TCA satt til platene til en endelig konsentrasjon på 16%

(volum/volum). Plater ble deretter inkubert ved 4°C i 1 time, supernatanten fjernet og platene vasket i springvann. Etter tørking, ble 100 ml SRB fargestoff (0,4% SRB i 1% eddiksyre) tilsatt i 30 minutter ved 37°C. Overskudd av SRB ble fjernet og platene vasket i 1% eddiksyre. SRB bundet til protein ble solubilisert i lOmM Tris pH7,5 og ristet i 30 minutter ved romtemperatur. ODs ble lest ved 540nm og konsentrasjonen av inhibitor som forårsaker 50% hemning av vekst ble bestemt fra et semi-log plott av inhibitorkonsentrasjon versus absorbans. Konsentrasjonen av forbindelsen redusert den optiske tettheten til under det oppnådd når cellene ble plated ved starten av forsøket ga verdien for toksisitet.

Typiske IC50 verdier for forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse når testet i SRB forsøk er i området ImM til lnM.

I henhold til et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes et farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer.

Preparatet kan være i en form egnet for oral administrering, for eksempel som en

tablett eller kapsel, for parenteral injeksjon (omfattende intravenøs, subkutan, intramuskulær, intravaskulær eller infusjon) som en steril løsning, suspensjon eller emulsjon, for topisk administrering som en salve eller krem eller for rektal administrering som et suppositorium.

Generelt kan preparatene ovenfor fremstilles på konvensjonell måte ved anvendelse av konvensjonelle tilsetningsmidler.

Forbindelsen med formel (I) vil normalt administreres til et varmblodig dyr ved en enhetsdose innen området 5-5000 mg pr. kvadratmeter kroppsareal av dyret, dvs. omtrent 0,1-100 mg/kg og dette tilveiebringer normalt en terapeutisk-effektiv dose. En enhetsdoseform så som en tablett eller kapsel vil vanligvis inneholde, for eksempel 1-250 mg aktiv bestanddel. Fortrinnsvis blir en daglig dose i området 1-50 mg/kg anvendt. Imidlertid vil den daglige dosen nødvendigvis variere avhengig av verten som blir behandlet, den spesielle administreringsvei og alvorlighetsgraden av sykdommen som behandles. Følgelig kan den optimale dosen bestemmes av legen som behandler en hvilken som helst spesiell pasient.

Vi har funnet at forbindelsene definert i foreliggende oppfinnelse eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, er effektive cellecyklus inhibitorer (anti-celleproliferasjonsmidler), hvilken egenskap er antatt å oppstå fra deres CDK hemmende egenskaper. Følgelig er forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse forventet å være anvendelige ved behandling av sykdommer eller medisinske tilstander mediert alene eller delvis av CDK enzymer, dvs. forbindelsene kan anvendes for å produsere en CDK hemmende effekt i et varmblodig dyr med behov for slik behandling. Således gir forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse en metode for behandling av proliferasjonen av ondartede celler karakterisert ved hemning av CDK enzymer, dvs. forbindelsene kan anvendes for å produsere en anti-proliferative effekt mediert alene eller delvis ved hemning av CDKs. En slik forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse er forventet å ha en rekke anti-kreft egenskaper idet CDKs er implisert i mange vanlige humane kreftformer så som leukemi og bryst, lunge, kolon, rektal, mage, prostata, blære, bukspyttkjertel og eggstokk- kreft. Således er det forventet at en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse vil ha anti-kreft aktivitet mot disse kreftformene. Det er i tillegg forventet at en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse vil har aktivitet mot et område av leukemier, lymfoide ondartede sykdommer og faste tumorer så som karsinomer og sarkomer i vev så som leveren, nyre, prostata og bukspyttkjertel. Spesielt er slike forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse forventet å redusere fordelaktig veksten av primære og tilbakevendende faste tumorer i, for eksempel kolon, bryst, prostata, lunger og hud. Mer spesielt er slike forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, forventet å hemme veksten av de primære og tilbakevendende faste tumorer som er forbundet med CDKs, spesielt de tumorer som er betydelig avhengig av CDKs for deres vekst og spredning, omfattende for eksempel visse tumorer i tarm, bryst, prostata, lunge, vulva og hud.

Det er videre forventet at en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse vil ha aktivitet mot andre celle-proliferasjons sykdommer i et vidt område av andre sykdomstilstander omfattende leukemier, fibroproliferative og differensierende lidelser, psoriasis, revmatoid artritt, Kaposi's sarkom, haemangioma, akutte og kroniske nefropatier, aterom, aterosklerose, arteriell restenose, autoimmune sykdommer, akutt og kronisk inflammasjon, bensykdommer og okulære sykdommer med retinal kar proliferasjon.

Således i henhold til dette aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor for anvendelse som et medikament; og anvendelse av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor ved fremstilling av et medikament for anvendelse ved fremstilling av en cellecyklus hemmende (anti-celle-proliferasjon) effekt i et varmblodig dyr så som mennesker. Spesielt er, en hemmende effekt blir produsert ved forhindring av inngang inn i eller progresjon gjennom S fasen ved hemning av CDK2, CDK4 og/eller CDK6, spesielt CDK2.

I henhold til et ytterligere trekk ifølge foreliggende oppfinnelse tilveiebringes anvendelse av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor ved fremstilling av et medikament for anvendelse ved behandling av kreft (faste tumorer og leukemier), fibroproliferative og differentiative lidelser, psoriasis, revmatoid artritt, Kaposi's sarkom, haemangioma, akutte og kroniske nephropathier, aterom, aterosklerose, arteriell restenose, autoimmune sykdommer, akutt og kronisk inflammasjon, bensykdommer og okulære sykdommer med retinal kar proliferasjon, spesielt ved behandling av kreft.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan bli anvendt for å danne en cellecyklus hemmende (anti-celle-proliferasjon) effekt i et varmblodig dyr, så som mennesker, med behov for slik behandling som omfatter administrering til nevnte dyr en effektiv mengde av en forbindelse som definert umiddelbart ovenfor. Spesielt blir en hemmende effekt produsert ved forhindring av inngang inn i eller progresjon gjennom S fasen ved hemning av CDK2, CDK4 og/eller CDK6, spesielt CDK2.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i en metode for behandling av kreft (faste tumorer og leukemier), fibroproliferative og differensierende lidelser, psoriasis, revmatoid artritt, Kaposi's sarkom, haemangioma, akutte og kroniske nephropathier, aterom, aterosklerose, arteriell restenose, autoimmune sykdommer, akutt og kronisk inflammasjon, bensykdommer og okulære sykdommer med retinal kar proliferasjon, i et varmblodig dyr, så som mennesker, med behov for slik behandling som omfatter administrering til nevnte dyr en effektiv mengde av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav som definert ovenfor.

Spesielt kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen bli anvendt i en metode for behandling av kreft i et varmblodig dyr, så som mennesker, med behov for slik behandling som omfatter administrering til nevnte dyr en effektiv mengde av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav som definert ovenfor.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes et farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer for anvendelse ved fremstilling av en cellecyklus hemmende (anti-celle-proliferasjon) effekt i et varmblodig dyr så som mennesker.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes et farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer for anvendelse ved behandling av kreft (faste tumorer og leukemier), fibroproliferative og differensierende lidelser, psoriasis, revmatoid artritt, Kaposi's sarkom, haemangioma, akutte og kroniske nephropathier, aterom, aterosklerose, arteriell restenose, autoimmune sykdommer, akutt og kronisk inflammasjon, bensykdommer og okulære sykdommer med retinal kar proliferasjon, i et varmblodig dyr så som mennesker.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes et farmasøytisk preparat som omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer for anvendelse ved behandling av kreft i et varmblodig dyr så som mennesker.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor, for anvendelse ved fremstilling av en cellecyklus hemmende (anti-celle-proliferasjon) effekt i et varmblodig dyr så som mennesker.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor for anvendelse ved behandling av kreft (faste tumorer og leukemier), fibroproliferative og differensierende lidelser, psoriasis, revmatoid artritt, Kaposi's sarkom, haemangiom, akutte og kroniske nephropathier, aterom, aterosklerose, arteriell restenose, autoimmune sykdommer, akutt og kronisk inflammasjon, bensykdommer og okulære sykdommer med retinal kar proliferasjon, i et varmblodig dyr så som mennesker.

I et ytterligere aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert ovenfor for anvendelse ved behandling av kreft i et varmblodig dyr så som mennesker.

Forhindring av celler fra å gå inn i DNA syntese ved hemning av essensielle S-fase initierende aktiviteter så som CDK2 initiering kan også være anvendelige ved beskyttelse av normale celler i kroppen fra toksisitet av cyklus-spesifikke farmasøytiske midler. Hemning av CDK2 eller 4 vil forhindre progresjon inn i cellecyklusen i normale celler som vil kunne begrense toksisiteten til cyklus-spesifikke farmasøytiske midler som virker i S-fasen, G2 eller mitose. Slik beskyttelse kan resultere i forhindring av hårtap normalt forbundet med disse midler.

Forbindelsen med formel (I) som definert ovenfor eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav kan være nyttig som et cellebeskyttende middel.

Forbindelsen med formel (I) som definert ovenfor eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav kan være nyttig for forhindring av hårtap som oppstår ved behandling av ondartete tilstander med farmasøytiske midler.

Eksempler på farmasøytiske midler for behandling av ondartete tilstander som er kjent å forårsake hårtap omfatter alkyleringsmidler så som ifosfamid og cyklofosfamid; antimetabolitter så som methotrexat, 5-fluoruracil, gemcitabin og cytarabin; vinca alkaloider og analoger så som vincristin, vinbalstin, vindesin, vinorelbin; taxaner så som paclitaxel og docetaxel; topoisomerase I inhibitorer så som irintotecan og topotecan; cytotoksisk antibiotika så som doxorubicin, daunorubicin, mitoksantron, actinomycin-D og mitomycin; og andre så som etoposid og tretinoin.

Forbindelsen med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, administreres sammen med en én eller flere av ovenfor farmasøytiske midler. I dette tilfelle kan forbindelsen med formel (I) administreres ved systemiske eller ikke systemiske metoder. Spesielt kan forbindelsen med formel (I) administreres ved ikke-systemiske metoder, for eksempel topisk administrering.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i en metode for forhindring av hår tap under behandling for én eller flere ondartet betingelser med farmasøytiske midler, i et varmblodig dyr, så som mennesker, som omfatter administrering til nevnte dyr en effektiv mengde av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i en metode for forhindring av hår tap under behandling for én eller flere ondartete tilstander med farmasøytiske midler, i et varmblodig dyr, så som mennesker, som omfatter administrering til nevnte dyr en effektiv mengde av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav i samtidig, sekvensiell eller separat administrering med en effektiv mengde av nevnte farmasøytiske middel.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i et farmasøytisk preparat for anvendelse ved forhindring av hår tap som oppstår ved behandling av ondartete tilstander med farmasøytiske midler som omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav og nevnte farmasøytiske middel, sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer.

Forbindelene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i et sett omfattende en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav og et farmasøytisk middel for behandling av ondartete tilstander som er kjent å forårsake hår tap.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i et sett omfattende:

a) en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, i en først enhetsdoseform; b) et farmasøytisk middel for behandling av ondartete tilstander som er kjent å forårsake hår tap; i en andre enhetsdoseform; og

c) beholder innretninger for å inneholdende nevnte først og andre doseformer.

Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan anvendes i en kombinasjonsbehandling for

forhindring av hår tap omfattende administreringen av en effektiv mengde av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, eventuelt sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer, med samtidig, sekvensiell eller separat administrering av en effektiv mengde av et farmasøytisk middel for behandling av ondartete tilstander til et varmblodig dyr, så som mennesker.

Som angitt ovenfor vil størrelsen av dosen nødvendig for terapeutisk eller profylaktisk behandling av en spesiell celle-proliferasjonssykdom nødvendigvis variere avhengig av verten som blir behandlet, administreringsveien og alvorlighetsgraden av sykdommen som behandles. En enhetsdose i området, for eksempel 1-100 mg/kg, er fortrinnsvis 1-50 mg/kg kommer i betraktning.

CDK hemmende aktivitet definert ovenfor kan anvendes som eneste terapi eller kan involvere, i tillegg til en forbindelse ifølge foreliggende oppfinnelse, én eller flere andre substanser og/eller behandlinger. Slik samtidig behandling kan oppnås ved samtidig, sekvensiell eller separat administrering av de individuelle komponenter av behandlingen. I området medisinsk onkologi er det normal praksis å anvende en kombinasjon av forskjellige former av behandling for å behandle hver pasient med kreft. I medisinsk onkologi kan andre komponent(er) av slik samtidig behandling i tillegg til cellecyklus hemmende behandling definert ovenfor være: kirurgi, radioterapi eller kjemoterapi. Slik kjemoterapi kan omfatte tre hovedkategorier av terapeutisk middel: (i) andre cellecyklus hemmende midler som virker ved samme eller forskjellige mekanismer fra de definert ovenfor; (ii) cytostatiske midler så som antiøstrogener (for eksempel tamoxifen, toremifen, raloxifen, droloxifen, jodxyfa), progestogener (for eksempel megestrolacetat), aromatase inhibitorer (for eksempel anastrozol, letrazol, vorazol, exemestan), antiprogestogener, antiandrogener (for eksempel flutamid, nilutamid, bicalutamid, cyproteron acetat), LHRH agonister og antagonister (for eksempel goserelinacetat, luprolid), inhibitorer av testosteron 5oc-dihydroreduktase (for eksempel finasterid), anti-invasjonsmidler (for eksempel metalloproteinase inhibitorer som marimastat og inhibitorer av urokinaseplasminogen activator reseptor funksjon) og inhibitorer av vekstfaktor funksjonen, (slik vekstfaktorer omfatter for eksempel blodplate avledet vekstfaktor og hepatocytt vekstfaktor og slike inhibitorer omfatter vekstfaktor antistoffer, vekstfaktor reseptor antistoffer, tyrosinkinase inhibitorer og serin/treonin kinase inhibitorer); og (iii) antiproliferative/antineoplastiske medikamenter og kombinasjoner derav, som anvendt i medisinsk onkologi, så som antimetabolitter (for eksempel antifolater som methotrexat, fluorpyrimidiner som 5-fluoruracil, purin og adenosin analoger, cytosin arabinosid); antitumor antibiotika (for eksempel antracycliner som doxorubicin, daunomycin, epirubicin og idarubicin, mitomycin-C, dactinomycin, mithramycin); platinaderivater (for eksempel cisplatin, karboplatin); alkyleringsmidler (for eksempel nitrogensennep, melphalan, chlorambucil, busulfan, cyklofosfamid, ifosfamid, nitrosoureaer, tiotepa); antimitotiske midler (for eksempel vincaalkaloider som vincrisitin og taxoider som taxol, taxotere); topoisomerase-inhibitorer (for eksempel epipodophyllotoksiner som etoposid og teniposid, amsacrin, topotecan). I henhold til dette aspekt ved foreliggende oppfinnelse tilveiebringes et farmasøytisk produkt omfattende en forbindelse med formel (I) som definert ovenfor og en ytterligere anti-tumor substans som definert ovenfor for samtidig behandling av kreft.

I tillegg til anvendelse av dem i terapeutisk medisin, er forbindelsene med formel (I) og deres farmasøytisk akseptable salter også anvendelige som farmakologiske verktøy i utviklingen og standardisering av in vitro og in vivo testsystemer for evalueringen av virkningene av inhibitorer av cellecyklus aktivitet i laboratoriedyr så som katter, hunder, kaniner, aper, rotter og mus, som del av søking etter nye terapeutiske midler.

I ovenfor andre farmasøytiske preparat, fremgangsmåte, metode, anvendelse og medikament fremstillingstrekk, gjelder alternative og foretrukne utførelsesformer av forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse beskrevet her også.

Eksempler

Oppfinnelsen vil nå bli illustrert ved de følgende eksempler hvor, hvis ikke angitt på annen måte: (i) temperaturer er gitt i grader Celsius (°C); operasjoner ble utført ved room eller omgivelsestemperatur, dvs. ved en temperatur i området 18-25°C; (ii) organisk løsninger ble tørket over vannfritt magnesiumsulfat; inndampning av løsningsmiddel ble utført ved anvendelse av en rotasjonsinndamper under redusert trykk (600-4000 Pascal; 4,5-30mmHg) med en badtemperatur på opptil 60°C; (iii) kromatografi betyr flash kromatografi på silikagel; tynnskiktskromatografi (TLC) ble utført på silikagelplater; hvor en amino isolute kolonne er referert til, betyr dette en kolonne inneholdende 10 g NH2 SPE løsningsmiddel av 40 mikron partikkelstørrelse, idet løsningsmiddelet er inneholdt i en 60 ml en-gangs sprøyte og undertstøttet av en porøs skive, oppnådd fra IST, Mid Glamorgan, UK under navnet "Isolute NH2", "Isolute" er et varemerke; (iv) generelt, blir reaksjonsforløpet fulgt ved TLC og reaksjonstider er kun gitt for illustrasjon; (v) sluttprodukter hadde tilfredsstillende proton kjernemagnetisk resonans (NMR) spektra og/eller massespektraldata; (vi) utbytter er gitt kun for illustrasjon og er ikke nødvendigvis de som kan oppnås ved grundig prosessutvikling; prepareringene ble gjentatt hvis mere materiale var nødvendig; (vii) når gitt, NMR data er i form av deltaverdier for hoved diagnostiske protoner, gitt i deler pr. million (ppm) i forhold til tetrametylsilan (TMS) som en indre standard, bestemt ved 300 MHz ved anvendelse av perdeuteriodimetylsulfoksyd (DMSO-dg) som løsningsmiddel hvis ikke annet er angitt; (viii) kjemiske symboler har deres vanlige betydninger; SI enheter og symboler blir anvendt; (ix) løsningsmiddelforholdet er gitt i volum:volum (volum/volum) betegnelser; og (x) massespektra ble kjørt med en elektronenergi på 70 elektron volt i kjemisk ioniserings-(CI) måte ved anvendelse av en direkte eksponeringsprobe; hvor angitt ble ionisasjon utført ved elektron innvirkning (EI), hurtig atombombardement (FAB) eller elektrospray (ESP); verdier for m/z er gitt; generelt, er bare ioner som indikerer opphavsmasse angitt; (xi) hvis ikke angitt på annen måte er forbindelser inneholdende et asymmetrisk substituert karbon og/eller svovelatom ikke gjenoppløst; (xii) hvor en syntese er angitt å være analog med den beskrevet i et tidligere eksempel er mengdene anvendt millimolar forhold ekvivalenter med de anvendt i tidligere eksempel; (xvi) de følgende forkortelser er blitt anvendt:

Eksempel 1

2-( 4- Sulfamoylanilino)- 4-( imidazor 1. 2alpwazin- 3- v0pvrimidin

Tionylklorid (4 ml) og deretter DMF (5|il) ble satt til 2-(4-sulfonoylanilino)-4-(imidazo[l,2a]pyrazin-3-yl)pyrimidin (Metode 4; 75 mg, 0,204 mmol) under nitrogen og blandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 48 timer. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning og metanolisk ammoniakk (6 ml av en 7M løsning) ble tilsatt direkte til residuet under nitrogen og blandingen omrørt i 1 time ved omgivelsestemperatur. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning og residuet renset ved preparativ HPLC (på en Gilson, 1" Cl8 kolonne med gradienteluering av 0,01% TFA bufret acetonitril / vann 5% til 50% over 10 minutter og 50% til 95% over 3,5 minutter). Fraksjoner inneholdende produkt ble samlet og lyofilisert, hvilket gir tittelforbindelsen (17 mg, 23%) som et hvitt, fast stoff. NMR: 7,20 (s, 2H), 7,60 (d, 1H), 7,72 (d, 2H), 7,95 (d, 2H), 8,18 (d, 1H), 8,62 (d, 1H), 8,85 (s, 1H), 9,28 (s, 1H), 10,01(s, 1H), 10,20 (s, 1H); m/z: 368 [MH]<+>.

Eksempel 2

2-( 4-{ A;-[ 2-( dimetvlamino) etvllsulfamovl} anilino)- 4-( imidazori. 2alpvrazin- 3- vl) pvrimidin

2-(4-Sulfonoylanilino)-4-(imidazo[l,2a]pyrazin-3-yl)pyrimidin (Metode 4; 67 mg, 0,181 mmol) ble oppløst i acetonitril (1 ml) og sulfolan (1 ml) og omrørt under nitrogen. Fosforylklorid (67ul, 0,724 mmol) og tyJV-dimetylacetamid (lOul) ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet under tilbakeløp i 30 minutter, fikk avkjøles og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Den resulterende løsning ble plassert under nitrogen og en vannfri løsning av trietylamin (252|il, 1,81 mmol) og 1,1-dimetyletyldiamin (40jxl, 0,362 mmol) i metanol (2 ml) ble tilsatt langsomt. Blandingen fikk stå ved omgivelsestemperatur i 30 minutter, deretter ble diklormetan (15 ml) og vann (15 ml) tilsatt. Det vandige laget ble separert og regulert til pH 9 ved forsiktig tilsetning av 2M vandig natriumhydroksyd-løsning. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann (2x15 ml) og eter (3 x 15 ml) og tørket over fosforpentoksyd i 16 timer, hvilket gir tittelforbindelsen (16 mg, 20%). NMR: 2,1 (s, 6H), 2,3 (t, 2H), 2,8 (t, 2H), 7,3 (br s, 1H), 7,5 (d, 1H), 7,75 (d, 2H), 7,95 (d, 2H), 8,2 (d, 1H), 8,6 (d, 1H), 8,8 (s, 1H), 9,3 (s, 1H), 9,95 (d, 1H), 10,2 (s, 1H); m/z: 440 [MH]<+>.

Eksempel 3

2- ( 4- rA7-( 2- metoksvetvl) sulfamovllanilino) - 4-( imidazo[ 1, 2alpvrazin- 3- yl) pyrimidin

Tionylklorid (6 ml) og DMF (lOul) ble satt til 2-(4-sulfonoylanilino)-4-(imidazo[l,2a]pyrazin-3-yl)pyrimidin (Metode 4; 110 mg, 0,299 mmol) under og blandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 12 timer. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning og residuet plassert under nitrogen. Vannfri pyridin (7 ml) fulgt av 2-metoksyetylamin (26uJ, 0,299 mmol) ble tilsatt direkte og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 3 timer. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning og residuet renset ved kolonnekromatografi under eluering med diklormetan/metanol (100:0 økende i polaritet til 95:5), hvilket gir tittelforbindelsen (6 mg, 5%) som et hvitt, fast stoff. NMR: 2,9 (t, 2H), 3,2 (s, 3H), 3,4 (t, 2H), 7,5 (t, 1H), 7,7 (d, 1H) 7,8 (d, 2H) 7,95 (d, 2H), 8,2 (d, 1H), 8,6 (d, 1H), 8,9 (s, 1H), 9,3 (s, 1H), 10,0 (d,lH) 10,2 (s, 1H); m/z: 426 [MH]<+>.

Eksempel 4

2- { 4- rAK2- metoksvetvl) sulfamovllanilino) - 4-( imidazor 1, 2alpvrimidin- 3- yl) pvrimidin

2-[4-Sulfonoylanilino]-4-(imidazo[l,2a]pyrimidin-3-yl)pyrimidin (Metode 8; 180 mg, 0,49 mmol) ble oppløst i acetonitril (1 ml) og sulfolan (1 ml) og omrørt under nitrogen.

Fosforylklorid (136u,l, 1,46 mmol) og Af,iV-dimetylacetamid (l,8uX) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 4 timer, deretter oppvarmet under tilbakeløp i 30 minutter, fikk avkjøles og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Den resulterende løsning ble plassert under nitrogen og en løsning av 2-metoksyetylamin (85ul, 0,978 mmol), trietylamin (204 ml, 1,47 mmol) i metanol (5 ml) ble tilsatt og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 1 time. Det resulterende faste stoffet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med eter (3 x 20 ml) og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (89 mg, 43%). NMR: 2,9 (dd, 1H), 3,08 (m, 2H), 3,18 (s, 3H), 3,3 (t, 2H), 7,56 (d, 1H) 7,77 (d, 2H) 7,98 (d, 2H), 8,6 (d, 1H), 8,86 (dd, 1H), 8,98 (s, 1H), 10,3 (s,lH) 10,54 (s, 1H); m/z: 426 [MH]<+>.

Eksempel 5

2-( 4- sulfamoylanilino)- 4-( imidazor 1. 2blpyridazin- 3- vl) pvrimidin

2-Anilino-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 10; 100 mg, 0,347 mmol) ble oppløst i tionylklorid (2,0 ml) og løsningen omrørt og avkjølt til 0°C. Klorsulfonsyre (92ui, 1,39 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 30 minutter og deretter ved omgivelsestemperatur i 1 time og til slutt oppvarmet ved 80°C i 90 minutter. Blandingen fikk avkjøles og de flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning. 2M metanolisk ammoniakk (6,0 ml) ble satt til residuet i kolben og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 1 time. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning og destillert vann satt til residuet og blandingen omrørt i 30 minutter. Fellingen ble oppsamlet ved

filtrering, vasket med vann og tørket. Råproduktet ble utgnidd med diklormetan inneholdende spor av metanol, oppsamlet ved filtrering vasket med diklormetan / metanol og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (81 mg, 64%) som et hvitt, fast stoff. NMR: 7,1 (s, 2H), 7,45 (d, 1H), 7,8 (d, 2H), 8,03 (m, 3H), 8,32 (d, 1H), 8,64 (m, 2H), 8,8 (d, 1H); 10,05 (s, 1H); m/z: 368 [MH]<+>.

Eksempel 6

2-[ 4-( Af- metvlsulfamovl) anilino1- 4-( imidazo[ l, 2blpvridazin- 3- vl) pyrimidin

2-Anilino-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 10; 100 mg, 0,347 mmol) ble behandlet ved metoden beskrevet i Eksempel 5, hvilket gir rå sulfonylklorid som ble behandlet med 2,0M løsning av metylamin i metanol (6,0 ml) og reaksjonen ble opparbeidet som beskrevet i Eksempel 5, hvilket gir tittelforbindelsen (78 mg, 59%) som et

hvitt, fast stoff. NMR: 2,4 (d, 3H), 7,16 (q, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,75 (d, 2H), 8,07 (m, 3H), 8,33 (d, 1H), 8,67 (m, 2H), 8,8 (d, 1H); 10,11 (s, 1H); m/z: 380 [M-H]\

Eksempel 7

2- { 4- r/ v'-( 2- metoksyetyl) sulfamovl1anilino} - 4-( imidazor 1, 2blpvridazin- 3- vl) pyrimidin

2-Anilino-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 10; 100 mg, 0,347 mmol) ble behandlet ved metoden beskrevet i Eksempel 5, hvilket gir rå sulfonylklorid som ble behandlet med en løsning av 2-metoksyetylamin (0,452 ml) i metanol (1,0 ml) og reaksjonen ble opparbeidet som beskrevet i Eksempel 5, hvilket gir tittelforbindelsen (39 mg, 26%) som et hvitt, fast stoff. NMR (DMSO d6 + d4 Eddiksyre): 2,87 (t, 2H), 3,15 (s, 3H), 3,27 (t, 2H), 7,4 (dd, 1H), 7,74 (d, 2H), 8,05 (m, 3H), 8,3 (d, 1H), 8,64 (m, 2H), 8,76 (d, 1H).

m/z: 424 [M-H]'.

Eksempel 8

2-[ 4-( A^-( 3- dimetylaminopropvl") sulfamovl) anilinol- 4-( imidazori, 2b1pvridazin- 3- vl) pvrimidin

2- Anilino-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 10; 100 mg, 0,347 mmol) ble behandlet ved metoden beskrevet i Eksempel 5, hvilket gir rå sulfonylklorid som ble behandlet med en løsning av 3-dimetylaminopropylamin (87u,l), dimetyletylamin (2,16 ml) i metanol (4,0 ml) og den resulterende suspensjonen omrørt ved omgivelsestemperatur i 90 minutter. Flyktige stoffer ble fjernet ved inndampning, destillert vann ble satt til residuet og blandingen omrørt i 30 minutter. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med destillert vann og tørket. Råproduktet oppløst i DMF ble renset på en 10 g amino isolut kolonne prekvilibrert med metanol. Produktet ble eluert med metanol, det rensede produktet ble utgnidd med eter / etylacetat, oppsamlet ved filtrering, vasket med eter og tørket til tittelforbindelsen (53 mg, 26%) som et hvitt, fast stoff. NMR: 1,48 (m, 2H), 2,03 (s, 6H), 2,13 (t, 2H), 2,75 (t, 2H), 7,33 (s, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,73 (d, 2H), 8,07 (m, 3H), 8,33 (d, 1H), 8,65 (s, 1H), 8,68 (d, 1H), 8,8 (d, 1H), 10,11 (s, 1H); m/z: 451 [M-H]\

Eksempel 9

2- Anilino- 4-( imidazor 1. 2alpvrazin- 3- vl) pvrimidin

3- (3-dimetylaminoprop-2-en-l-oyl)imidazo[l,2a]pyrazin (Metode 3; 400 mg, 1,85 mmol), fenylguanidinhydrogenkarbonat (365 mg, 1,85 mmol) og natriummetoksyd (199 mg,

3,7 mmol) ble oppløst i vannfri dimetylacetamid (15 ml) og blandingen oppvarmet under tilbakeløp ved 160°C under nitrogen i 2 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles, eddiksyre (212u.l, 3,7 mmol) ble tilsatt og blandingen hellet forsiktig på is-vann (40 ml). Isen fikk smelte og den vandige løsningen ekstrahert med diklormetan (2 x 20 ml). Ekstraktene ble samlet, tørket og løsningsmidlet fjernet ved inndampning, hvilket gir tittelforbindelse (392 mg, 72%) som et brunt, fast stoff. NMR: 7,0 (t, 1H), 7,35 (t, 2H), 7,48 (d, 1H), 7,75 (d, 2H), 8,1 (d, 1H), 8,52 (d, 1H), 8,88 (s, 1H), 9,21 (s, 1H), 9,86 (s, 1H), 9,98 (d, 1H); m/z: 299 [MH]<+>.

Eksempel 10

2- Anilino- 4-( imidazor 1, 2b1pyridazin- 3- vl) pyrimidin

3-(3-dimetylaminoprop-2-en-l-oyl)imidazo[l,2b]pyridazin (Metode 17; 600 mg, 2,78 mmol), fenylguanidinhydrogenkarbonat (603 mg, 3,06 mmol) og natriummetoksyd (300 mg, 5,56 mmol) ble suspendert i tørr dimetylacetamid (25 ml) under nitrogen og blandingen ble omrørt og oppvarmet ved 160°C i 2 timer. Reaksjonen ble deretter omrørt ved romtemperatur i 20 timer og deretter ble ytterligere fenylguanidinhydrogenkarbonat (273 mg) og natriummetoksyd (150 mg) tilsatt og reaksjonsblandingen oppvarmet ved 160°C i 2 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og eddiksyre (0,5 ml) tilsatt og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Vann ble satt til residuet og den resulterende suspensjonen omrørt i 30 minutter. Produktet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (705 mg, 88%) som et brunt, fast stoff. NMR: 6,96 (t, 1H), 7,33 (m, 2H), 7,42 (dd, 1H), 7,85 (d, 2H), 7,97 (d, 1H), 8,30 (d, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,61 (d, 1H), 8,77 (d, 1H), 9,63 (s, 1H). m/z: 289 [MH]<+>.

Eksempel 11

2- Anilino- 4-( imidazor 1, 2alpvrimidin- 3- yl) pyrimidin

3-(3-dimetylaminoprop-2-en-l-oyl)imidazo[l,2a]pyrimidin (Metode 7; 450 mg, 2,08 mmol) ble behandlet som beskrevet i Eksempel 9, hvilket gir råproduktet som ble utgnidd med eter, hvilket gir tittelforbindelsen som hovedkomponenten (70%) i en isomer-blanding med 2-anilino-4-(imidazo[l,2a]pyrimidin-2-yl)pyrimidin (392 mg, 65%). NMR: 7,0 (t, 1H), 7,26 (dd, 1H), 7,34 (t, 2H), 7,73 (d, 2H), 8,46 (d, 1H), 8,69 (dd, 1H), 8,76 (s, 1H), 9,67 (s, 1H), 10,38 (d, 1H).

Eksempel 12

2-( 2- fluoranilino)- 4-( imidazo[ 1. 2blpvridazin- 3- yl) pvrimidin

3-(3-dimetylaminoprop-2-en-l-oyl)imidazo[l,2b]pyridazin (Metode 17,1,0 g, 4,63 mmol), 2-fluorfenylguanidinhydrogenkarbonat (Metode 25; 1,1 g, 5,09 mmol) og natriummetoksyd (550 mg, 10,2 mmol) ble suspendert i DMA (42 ml) og blandingen omrørt og oppvarmet ved 140°C i 5,5 timer. Blandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og deretter ble eddiksyre (0,33 ml) tilsatt og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Residuet ble utgnidd med vann og produktet oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket, hvilket gir tittelforbindelse (406 mg, 29 %) som et brunt, fast stoff. NMR: 7,13 (m, 1H), 7,2 (m, 2H), 7,4 (dd, 1H), 7,93 (m, 2H), 8,8 (d, 1H), 8,43 (s, 1H), 8,58 (d, 1H), 8,77 (d, 1H), 9,05 (s, 1H); m/z: 307 [MH]<+>.

Eksempel 13

2- Anilino- 4-( 2- metylimidazor 1. 2blpyridazin- 3- vl) pyrimidin

3-(3-dimetylaminoprop-2-en-l-oyl)-2-metylimidazo[l,2b]pyridazin (Metode 18; 1,5 g, 6,52 mmol), fenylguanidinhydrogenkarbonat (1,41 g, 7,17 mmol) og natriummetoksyd (704 mg, 13,04 mmol) ble suspendert i dimetylacetamid (62 ml) og blandingen omrørt og oppvarmet ved 160°C i 2,5 timer. Blandingen fikk avkjøles og mer fenylguanidin

hydrogenkarbonat (642 mg, 3,25 mmol) og natriummetoksyd (352 mg, 6,52 mmol) ble tilsatt og reaksjonsblandingen oppvarmet i ytterligere 2 timer ved 160°C. Blandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og eddiksyre (1,16 ml) ble tilsatt og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning, utgnidd med vann og det utfelte faste stoff oppsamlet ved filtrering, vasket

med vann, tørket og omkrystallisert fra metanol, hvilket gir tittelforbindelsen (785 mg, 40%) som et blekgult, fast stoff. NMR: 2,77 (s, 3H), 6,95 (t, 1H), 7,27 (t, 2H), 7,35 (dd, 1H), 7,76 (d, 2H), 7,83 (d, 1H), 8,15 (d, 1H), 8,58 (d, 1H), 8,65 (d, 1H), 9,5 (s, 1H); m/z: 303 [MH] <+>.

Eksempler 14- 19

De følgende forbindelser ble fremstilt ved metoder analoge med den beskrevet i Eksempel 13.

Eksempel 20

2- { 2- fluor- 4- rAr-( 2- metoksvetvl) sulfamoyllanilino) - 4-( imidazor 1. 2blpvridazin- 3- vl) pvrimidin

Klorsulfonsyre (109u.l, 1,64 mmol) ble satt til en omrørt løsning av 2-(2-fluoranilino)-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 12; 130 mg, 0,41 mmol) i tionylklorid (2,6 ml) avkjølt til 0°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 0°C i 5 minutter, deretter oppvarmet ved 90°C i 80 minutter, fikk avkjøles og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. 2-metoksyetylamin (0,75 ml, 8,58 mmol) i metanol (2,0 ml) ble satt til residuet og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 20 timer. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning, vann satt til residuet og blandingen omrørt i 30 minutter. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (217 mg, 86 %) som et hvitt, fast stoff. NMR: 2,94 (t, 2H), 3,17 (s, 3H), 3,28 (t, 2H), 7,43 (dd, 1H), 7,65 (dd, 3H), 8,06 (d, 1H), 8,32 (d, 1H), 8,41 (t, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,66 (d, 1H), 8,78 (d, 1H), 9,45 (s, 1H); m/z: 444 [MH]<+>.

Eksempel 21

2-( 2- fluor- 4- sulfamoylanilino)- 4-( imidazo[ l, 2blpvridazin- 3- vl) pvrimidin

2-(2-fluoranilino)-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 12; 175 mg, 0,572 mmol) ble behandlet ved metoden i Eksempel 20 og omsatt med en 2,0M løsning av ammoniakk i metanol (4,3 ml), hvilket gir tittelforbindelsen (112 mg, 51%) som et hvitt, fast stoff. NMR: 7,33 (s, 2H), 7,45 (dd, 1H), 7,67 (m, 2H), 8,07 (d, 1H), 8,33 (m, 2H), 8,53 (s, 1H), 8,66 (d, 1H), 8,8 (d, 1H), 9,45 (s, 1H); m/z: 386 [MH]<+>.

Eksempler 22- 26

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Eksempel 21.

Eksempler 27- 38

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Eksempel 20.

Eksempel 40

2- ( 4- \ N -( 1 - metylcykloprop- 1 - vDsulfamoyll anilino} - 4-( imidazo r 1. 2bl pvridazin- 3- yl) pvrimidin

Klorsulfonsyre (0,22 ml, 3,3 mmol) ble satt til en løsning av 2-anilino-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 10; 300 mg, 1,04 mmol) i tionylklorid (6 ml) avkjølt ved 5°C. Blandingen ble omrørt ved 5°C i 30 minutter, deretter ved omgivelsestemperatur i 1,5 timer og deretter oppvarmet ved tilbakeløp i 1,5 timer. 1-amino-1-metylcyklopropan (Metode 48; 2 ml) i isopropanol (10 ml) og dimetyletylamin (3 ml) ble tilsatt og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 18 timer. Løsningsmidlet ble avdampet og residuet renset ved kromatografi på silikagel under eluering med diklormetan / isoheksan (1 : 1) økende i polaritet til diklormetan / metanol (95 : 5). Det rensede produktet ble utgnidd med eter / metanol, hvilket gir tittelforbindelsen (89 mg, 21%). NMR: 0,16-0,19 (m, 2H), 0,40-0,44 (m, 2H), 0,92 (s, 3H), 7,25 (dd, 1H), 7,55-7,60 (m, 3H), 7,86-7,90 (m, 3H), 8,15 (d, 1H), 8,48 (s, 1H), 8,53 (d, 1H), 8,62 (d, 1H), 9,95 (s, 1H); m/z: 422 [MH]<+.>

Eksempler 41- 57

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Eksempel 40.

Eksempel 58

2- ( 4 -\ N -( l- metoksv- 2- metvlprop- 2- vl") sulfamovl1anilino} - 4-( imidazor 1. 2blpvridazin- 3-vDpvrimidin

Natriummetoksyd (96 g 1,8 mmol) ble satt til 2-{4-[A^-(2,2-dimetylaziridyl) sulfonyl]anilino}-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Metode 46; 150 mg, 0,36 mmol) i metanol (5 ml) og blandingen oppvarmet ved 50°C i 1,5 timer. Løsningsmidlet ble fjernet ved inndampning, residuet oppløst i etylacetat / metanol, vasket med vann, tørket (MgSCu) og løsningsmidlet fjernet ved inndampning. Råproduktet ble renset ved revers fase kromatografi, hvilket gir tittelforbindelsen (19 mg, 12%). NMR: 1,12 (s, 6H), 1,88 (m, 2H), 3,15 (s, 3H), 7,42 (d, 1H), 7,77 (dd, 2H), 8,0-8,05 (m, 3H), 8,27 (d, 1H), 6,25 (s, 1H), 8,64 (d, 1H), 8,74 (d,lH); m/z: 454 [MH]<+>.

Eksempel 59

2- { 4- rAf-( 2- metoksv- 2- metylprop- 1 - vDsulfamoyllanilino) - 4-( imidazor 1. 2blpyridazin- 3-vDp<y>rimidin

Den andre fraksjonen fra kromatografisk rensning beskrevet i Eksempel 58 ga tittelforbindelsen (10 mg, 7%). NMR: 1,09 (s, 6H), 2,65 (d, 2H), 3,05 (s, 3H), 7,25 (t, 1HX 7,46 (dd, 1H), 7,78 (d, 2H), 8,05-8,10 (m, 3H), 8,30 (d, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,68(d,lH), 8,80 (d, 1H), 10,1 (s, 1H); m/z: 454 [MH]<+>.

Eksempel 60

2- ( 4 -\ N -( 1 -( Pvrolidin- 1 vD- 2- metylprop- 2- vDsulfamoyllanilino I - 4-( imidazor 1, 2blpyridazin- 3-vPp<y>rimidin

2- {4- [AT-(2,2-dimetylaziridyl)sulfonyl] anilino} -4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Metode 46; 150 mg, 0,35 mmol) i pyrrolidin (4 ml) ble omrørt og oppvarmet ved 50°C i 2 timer og deretter ved, omgivelsestemperatur i 65 timer. De flyktige stoffene ble inndampet og residuet oppløst i etylacetat / metanol, vasket med vann og tørket (Na2SC«4). Løsningsmidlet ble fjernet ved inndampning og residuet utgnidd med eter, hvilket gir tittelforbindelsen (96 mg, 55%). NMR: 1,05 (s, 6H), 1,58-1,63 (m, 4H), 2,43 (s, 2H), 2,53-2,58 (m, 4H), 6,96 (s, 1H), 7,44 (dd, 1H), 7,79 (d, 2H), 8,05 (d, 2H), 8,07 (d, 1H), 8,36 (d, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,69 (d, 1H), 8,80 (d, 1H), 10,08 (s, 1H); m/z: 493 [MH]<+>.

Eksempel 61

2- { 4- rAr-( l- metvltio- 2- metvlprop- 2- yl) sulfamoyllanilino) - 4-( imidazor 1. 2blpyridazin- 3-vDp<y>rimidin

En blanding av 2-{4-[A?<->(2,2-dimetylaziridyl)sulfonyl]anilino}-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Metode 46; 150 mg, 0,36 mmol) og natriummetantiolat (125 mg, 1,8 mmol) i DMF (4 ml) ble oppvarmet ved 80°C i 18 timer. Løsningsmidlet ble fjernet ved inndampning, residuet oppløst i etylacetat / metanol, vasket med vann, tørket (MgSC>4) løsningsmidlet inndampet. Residuet ble utgnidd med eter, hvilket gir tittelforbindelsen (90 mg, 54%). NMR: 1,15 (s, 6H), 2,10 (s, 3H), 2,65 (s, 2H), 7,40 (s, 1H), 7,50 (dd, 1H), 7,82 (d, 2H), 8,08-8,1 (m, 3H), 8,39 (d, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,73 (d, 1H), 8,80 (d, 1H), 10,15 (s,lH); m/z: 470 [MH]<+>.

Eksempel 62

2- { 4 -\ N -( l- Morfolino- 2- metvlprop- 2- yl) sulfamovllanilino} - 4-( imidazor 1, 2blpvridazin- 3-vDpvrimidin

2- {4-[Ar-(2,2-dimetylaziridyl)sulfonyl]anilino} -4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (120 mg, 0,29 mmol) i morfolin (5 ml) ble oppvarmet ved tilbakeløp 3 timer. Løsningsmidlet ble avdampet, residuet ble oppløst i etylacetat / metanol, vasket med vann, tørket (MgSCv) og løsningsmidlet inndampet. Residuet ble utgnidd med eter, hvilket gir tittelforbindelsen (50 mg, 35%). NMR: 1,05 (s, 6H), 2,29 (s, 2H), 2,43-2,50 (m, 4H), 3,48-3,52 (m, 4H), 7,04 (s, 1H), 7,43 (dd, 1H), 7,78 (d, 2H), 8,02-8,08 (m, 3H), 8,35 (d, 1H), 8,64 (s, 1H), 8,71 (d, 1H), 8,80 (d, 1H), 10,08 (s, 1H).

Eksempel 63

2- { 4- riV~-( 1, 3- dimetoksvprop- 2- vl) sulfamovllanilino )- 4-( imidazor 1. 2blpvridazin- 3-vDpvrimidin

Klorsulfonsyre (0,23 ml, 3,3 mmol) ble satt til en løsning av 2-anilino-4-(imidazo[l,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 10; 300 mg, 1,04 mmol) i tionylklorid (6 ml) ved 5°C. Blandingen ble omrørt ved 5°C i 30 minutter, deretter ved omgivelsestemperatur i 1 time og til slutt oppvarmet ved tilbakeløp i 1,5 time. Blandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og en løsning av l,3-dimetoksy-2-aminopropan (Metode 57; 14 mmol) i etanol (20 ml) og dimetyletylamin (1 ml) ble satt til residuet og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 18 timer. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning, residuet utgnidd med vann og det faste produktet oppsamlet ved filtrering og deretter tørket under vakuum ved 60°C, hvilket gir tittelforbindelsen (322 mg, 66%). NMR: 3,10 (s, 6H), 3,21 (d, 4H), 7,42-7,58 (m, 2H), 7,78 (d, 2H), 8,02-8,08 (m, 3H), 8,35 (d, 1H), 8,65-8,70 (m, 2H), 8,80 (d, 1H), 10,09 (s, 1H); m/z: 470 [MH]<+>.

Eksempler 64- 66

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Eksempel 63.

Fremstilling av Utgangsmaterialer

Utgangsmaterialene for eksemplene ovenfor er enten kommersielt tilgjengelig eller blir lett fremstilt ved standard metoder fra kjente materialer. For eksempel de følgende reaksjoner er illustrasjoner, men ikke begrensninger, for fremstilling av noen av utgangsmaterialene anvendt i reaksjonen ovenfor.

Metode 1

3-( l- hydroksyetvDimidazor 1. 2alpvrazin

Vannfri nøytral aluminiumoksyd (aktivitet 1) (28,5 g) ble satt til en omrørt løsning av 2- aminopyrazin (2,85 g, 30 mmol) i tørr diklormetan (100 ml) under nitrogen. En løsning av 2,3-epoksybutanal (5,58 g, 30 mmol) i diklormetan (10 ml) ble tilsatt og reaksjonsblandingen omrørt i 18 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og aluminiumoksydkaken vasket med diklormetan (100 ml) og metanol/diklormetan (1:1,100 ml). Filtratene ble samlet, de flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning (ved å holde badetemperaturen under 40°C). Den resulterende råe gule oljen ble utgnidd med diklormetan og det faste stoffet oppsamlet ved filtrering, hvilket gir tittelforbindelsen (586 mg, 12%) som et blekt oransje farget fast stoff. NMR: 1,6 (d, 3H), 5,18 (kin, 1H), 5,5 (d, 1H), 7,7 (s, 1H), 7,88 (d,lH), 8,5 (d, 1H), 9,0 (s, 1H).

Metode 2

3- acetylimidazor 1, 2a1pyrazin

3-(l-hydroksyetyl)imidazo[l,2a]pyrazin (Metode 1; 3,87 g, 23,7 mmol) ble oppløst i aceton (30 ml) med mangandioksyd (21,1 g, 237 mmol) og omrørt ved omgivelsestemperatur i 72 timer. Løsningen ble filtrert gjennom diatoméjord, vasket med aceton (4 x 50 ml) og deretter med metanol (3 x 50 ml). Løsningsmidlet ble fjernet fra filtratet ved inndampning. Residuet ble renset ved kolonnekromatografi under eluering med metanol/diklormetan (0:100 økende i polaritet til 10:90), hvilket gir tittelforbindelsen (349 mg, 10%) som et rent krystallinsk hvitt fast stoff. NMR: 2,60 (s, 1H), 8,22 (d, 1H), 8,75 (s, 1H), 9,35 (m, 2H).

Metode 3

3-( 3- dimetylaminoprop- 2- en- 1 - oyl) imidazo[ 1, 2alpyrazin

En blanding av 3-acetylimidazo[l,2a]pyrazin (Metode 2; 340 mg, 2,11 mmol) og DMFDMA (20 ml) ble oppvarmet under tilbakeløp, under nitrogen i 18 timer. Blandingen fikk avkjøles og løsningsmidlet fjernet ved inndampning. Residuet ble utgnidd med eter, oppsamlet ved filtrering og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (406 mg, 89%) som et mørkt rødt fast stoff. NMR: 2,91 (br s, 3H) 3,15 (br s, 3H), 5,4 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 8,18 (d, 1H), 8,6 (s, 1H), 9,19 (s, 1H), 9,55 (dd, 1H); m/z: 218 [MH]<+>.

Metode 4

2- [ 4- Sulfonovlanilmol- 4-( imidazo[ 1. 2alpyrazin- 3- yl) pyrimidin

2-Anilino-4-(imidazo[l,2a]pyrazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 9; 350 mg, 1,22 mmol) ble tilsatt i porsjoner til konsentrert svovelsyre (6 ml) omrørt og avkjølt med et isbad for å opprettholde temperaturen ved <25°C. Reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur og omrørt i 1 time. Blandingen ble deretter forsiktig hellet i is-vann (150 ml) og isen latt bli smeltet. Natriumhydroksyd pellets og deretter IM vandig natriumhydroksyd-løsning ble forsiktig satt til for å regulere løsningen fra pH0,5 til pH2. Blandingen ble omrørt ved omgivelsestemperatur i 18 timer og det resulterende utfelte stoff oppsamlet ved filtrering, vasket med vann (2x15 ml) og tørket. Råproduktet ble utgnidd med diklormetan deretter gjenoppsamlet ved filtrering og deretter på ny utgnidd med diklormetan/metanol (1:1) reoppsamlet ved filtrering og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (191 mg, 52%). NMR: 7,54 (d, 1H), 7,60 (d, 2H), 7,64 (d, 2H), 8,15 (d, 1H), 8,54 (d, 1H), 8,81 (s, 1H), 9,95 (br s, 1H); m/z: 367 [M-H]\

Metode 5

3- ( 1 - hvdroksvetyl) imidazo[ 1. 2alpvrimidin

2- aminopyrimidin (2,85 g, 30 mmol) ble behandlet ved metoden beskrevet i Metode 1, hvilket gir råprodukt som ble renset ved kolonnekromatografi på nøytral aluminiumoksyd (aktivitet 3) under eluering med diklormetan/metanol (100:0 økende i polaritet til 95:5), hvilket gir tittelforbindelsen (662 mg, 14%). NMR: 1,59 (d, 3H), 5,12 (kin, 1H), 5,39 (d, 1H), 7,15 (dd, 1H), 7,60 (s, 1H), 8,53 (dd, 1H), 8,96 (dd, 1H); m/z: 164 [MH]<+>.

Metode 6

3- acetylimidazor 1. 2a1pvrimidin

3- (l-hydroksyetyl)imidazo[l,2a]pyrimidin (Metode 5; 630 mg, 3,87 mmol) ble behandlet med mangandioksyd (3,44 g, 38,7 mmol) som beskrevet i Metode 2 men uten kromatografisk rensning, hvilket gir tittelforbindelsen (379 mg, 60%) som et blekgult, fast stoff. NMR: 2,56 (s, 3H), 7,29 (t, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,80 (m, 1H), 9,78 (dd, 1H).

Metode 7

3 -( 3 - dimetylaminoprop- 2- en- 1 - ovDimidazo [ 1. 2a1pyrimidin

3-acetylimidazo[l,2a]pyrimidin (Metode 6; 370 mg, 2,29 mmol) ble behandlet som beskrevet i Metode 3, hvilket gir tittelforbindelsen (479 mg, 96%). NMR: 2,94 (br s, 1H), 3,15 (br s, 3H), 5,83 (d, 1H), 7,22 (dd, 1H), 7,70 (s, 1H), 8,60 (s, 1H), 8,68 (dd, 1H), 8,96 (dd, 1H);

m/z: 217 [MH]<+>.

Metode 8

2- r4- Sulfonovlanilinol- 4-( imidazor 1, 2alpyrimidin- 3- yl) pyrimidin

2-Anilino-4-(imidazo[l,2a]pyrimidin-3-yl)pyrimidin (70% isomer-blanding med 2-anilino-4-(imidazo[l,2a]pyrimidin-2-yl)pyrimidin) (Eksempel 11; 392 mg, 1,36 mmol) ble behandlet som beskrevet i Metode 4, hvilket gir tittelforbindelsen som hovedkomponenten (70%) i en isomer-blanding med 2-[4-sulfonoylanilino]-4-(imidazo[l,2a]pyrimidin-2-yl)pyrimidin (363 mg, 73%). NMR: 7,47 (d, 1H), 7,45-7,7 (m, 5H), 8,57 (d, 1H), 8,93 (dd, 1H), 9,02 (s, 1H), 9,82 (s, 1H), 10,4 (d, 1H).

Metode 9

5- klorimidazo[ 1, 2b1pyridazin

En blanding av 3-amino-6-klorpyridazin (5,0 g, 38,6 mmol) og kloracetaldehyd (5,9 ml en 7,9M løsning i vann, 46,3mM ) i 1-butanol (37 ml) ble oppvarmet ved 120°C med i 20 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og krystallisert fast stoff oppsamlet ved filtrering, vasket med litt 1-butanol og deretter eter. Det faste stoffet ble oppløst i vann (50 ml) og løsningen regulert til pHIO ved forsiktig tilsetning av 40% vandig natriumhydroksyd-løsning . Den resulterende suspensjonen ble ekstrahert med etylacetat. De organiske ekstrakter ble samlet, vasket med mettet saltvann, tørket (Na2S04) og de flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning. Residuet ble utgnidd med isoheksan, oppsamlet ved filtrering, vasket med isoheksan og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (4,35 g, 74%) som et blekbrunt, fast stoff. NMR: 7,33 (d, 1H), 7,83 (s, 1H), 8,20 (d, 1H), 8,32 (s, 1H); m/z: 154

[MH]<+>.

Metode 10

Imidazori. 2blpyridazin

En blanding av 5-klorimidazo[l,2b]pyridazin (Metode 9; 5,82 g, 37,9 mmol), trietylamin (5,28 ml, 37,9 mmol) og 5% palladium på trekull (300 mg) i etylacetat (233 ml) ble omrørt kraftig under en atmosfære av hydrogen inntil hydrogenopptagelsen opphørte. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom diatoméjord. Filterputen ble vasket med etylacetat og de flyktige stoffene fjernet fra filtratet ved inndampning. Residuet ble utgnidd med iskald pentan, oppsamlet ved filtrering, vasket lett med kald pentan og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (3,65 g, 81%) som et hvitt, fast stoff. NMR (CDC13): 7,03 (dd, 1H), 7,78 (s, 1H), 7,95 (m, 2H), 8,30 (d, 1H); m/z: 120 [MH]<+>.

Metode 11

3- bromimidazor 1. 2b1pyridazin

AT-bromsuccinimid (2,7 g, 15,1 mmol) ble satt til en løsning av imidazo[l,2b]pyridazin (Metode 10; 1,8 g, 15,1 mmol) i kloroform (15 ml) og blandingen ble omrørt og oppvarmet ved tilbakeløp i 20 minutter. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og mettet vandig natriumkarbonat-løsning (15 ml) ble tilsatt og blandingen omrørt kraftig. Mer kloroform og vann ble satt til oppløste utfelt faste stoffer. Det organiske laget ble separert, tørket (Na2SC«4) og løsningsmidlet fjernet ved inndampning. Residuet ble omkrystallisert fra etanol (50 ml), oppsamlet ved filtrering, vasket med kald etanol og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (2,61 g, 88%) som et gråhvitt, fast stoff. NMR (CDCI3): 7,10 (dd, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,95 (d, 1H), 8,47 (d, 1H); m/z: 198 [MH]<+>.

Metoder 12- 13

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 11, bortsett fra at de ble omsatt ved omgivelsestemperatur i 4 timer.

Metode 14

3- acetvlimidazor 1. 2blpyridazin

Isopropylmagnesiumbromid (12,5 ml av en IM løsning i THF, 12,5 mmol) ble tilsatt dråpevis over 5 minutter til en omrørt løsning av 3-bromimidazo[l,2b]pyridazin (Metode 11;

1,98 g, 10 mmol) i tørr THF (100 ml) under nitrogen ved -40°C. Reaksjonsblandingen ble omrørt i 105 minutter ved -40°C og deretter tørr Af-metoksy-Af-metylacetamid (1,65 ml, 16 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt i ytterligere 30 minutter ved -40°C og deretter fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur og omrørt i ytterligere 90 minutter. Eddiksyre (1,26 ml) ble tilsatt og de flyktige stoffene deretter fjernet ved inndampning. Residuet ble fordelt

mellom diklormetan (120 ml) og vann (30 ml). Lagene ble separert og det vandige laget ble ekstrahert med diklormetan. De organiske lag ble samlet, tørket (Na2S04) og flyktige stoffer fjernet ved inndampning. Residuet ble utgnidd med eter og isoheksan, oppsamlet ved

filtrering, vasket med isoheksan og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (1,25 g, 78%) som et brunt, fast stoff. NMR (CDC13): 2,75 (s, 3H), 7,27 (dd, 1H), 8,08 (d, 1H), 8,45 (s, 1H), 8,62 (d, 1H); m/z: 162 [MH]<+>.

Metoder 15- 16

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 14.

Metode 17

3-( 3- dimetylaminoprop- 2- en- l- ovl) imidazor 1, 2blpyridazin

3-acetylimidazo[l,2b]pyridazin (Metode 14; 1,25 g, 7,76 mmol) ble suspendert i DMFDMA (32 ml) og blandingen oppvarmet under nitrogen ved 100°C i 42 timer. Overskudd av dimetylacetal ble fjernet ved inndampning og residuet utgnidd med eter og isoheksan. Produktet ble oppsamlet ved filtrering, vasket med isoheksan og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (1,58 g, 94%) som et brunt, fast stoff. NMR (CDC13): 3,00 (s, 3H), 3,17 (s,

3H), 6,20 (d, 1H), 7,13 (dd, 1H), 7,92 (d,lH), 8,03 (d, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,50 (d, 1H); m/z: 217 [MH]<+>.

Metoder 18- 24

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 17.

Metode 25

2- fluorfenylguanidinbikarbonat

Konsentrert saltsyre (6 ml) i vann (4,8 ml) ble satt til en blanding av 2-fluoranilin (7,94 g, 71,2 mmol) og cyanamid (6,98 g, 166 mmol) og blandingen oppvarmet ved 115°C i 2,5 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og løsningen ble regulert til pH 13 ved forsiktig tilsetning av 40% vandig natriumhydroksyd-løsning. Den vandige løsningen ble ekstrahert med etylacetat og de samlede organiske ekstrakter ble tørket (Na2S04) og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Råproduktet ble oppløst i vann (40 ml) og karbondioksydgass boblet gjennom løsningen inntil pH i suspensjonen forble konstant (omtrent pH 9). Det utfelte faste stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket litt med vann og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (11,95 g, 78%) som et hvitt, fast stoff. NMR: 6,83 (m, 2H), 7,0 (m, 2H); m/z: 154 [MH]<+>.

Metode 26

N , ALdimetvl- A/ M6- kloipyridazin- 3 - vDacetamidin

3-amino-6-klorpyridazin (1,29 g, 10 mmol) ble suspendert i tørr toluen (20 ml) og dimetylacetamid dimetylacetal (1,46 ml, 10 mmol) ble tilsatt. Blandingen ble omrørt og oppvarmet ved tilbakeløp i 3 timer og fikk deretter stå ved omgivelsestemperatur i 18 timer. Uoppløselige stoffer ble fjernet fra reaksjonsblandingen ved filtrering og filteret vasket med etylacetat. Filtratet ble deretter inndampet og residuet utgnidd med isoheksan, det faste produktet ble oppsamlet ved filtrering og vasket med isoheksan, hvilket gir tittelforbindelsen (1,7 g, 85%) som et gult, fast stoff. NMR: (CDC13) 2,13 (s, 3H), 3,1 (s, 6H), 6,92 (d, 1H), 7,25 (d, 1H); m/z: 199 [MH]<+>.

Metoder 27- 28

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 26.

Metode 29

3- acetyl- 5- klor- 2- metvlimidazor 1, 2blpyridazin

Kloraceton (2,9 ml, 36,2 mmol) ble satt til en suspensjen av pulverisert natriumbromid (3,73 g, 36,2 mmol) i etanol (75 ml) og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 2 timer. A/,A<r->dimetyl-A<r>'-(6-klorpyridazin-3-yl)acetamidin (Metode 26; 6,0 g, 30,2 mmol) ble tilsatt og suspensjonen omrørt og oppvarmet ved tilbakeløp i 5,5 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles til omgivelsestemperatur og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Vann (60 ml) ble satt til residuet og det resulterende utfelte stoff oppsamlet ved filtrering, vasket med vann og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (4,93 g, 79%) som et blekgult, fast stoff. NMR: 2,6 (s, 3H), 2,7 (s, 3H), 7,57 (d, 1H), 8,23 (d, 1H); m/z: 209 [MH]<+>.

Metoder 30- 33

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 29.

Metode 34

3- acetvl- 2- metvlimidazor 1, 2b1pyridazin

En blanding av 3-acetyl-5-klor-2-metylimidazo[l,2b]pyridazin (Metode 29; 4,8 g, 22,9 mmol), trietylamin (3,21 ml, 22,9 mmol) og 5% palladium på trekull (1,6 g) i etylacetat (180 ml) ble omrørt kraftig under en atmosfære av hydrogen inntil hydrogenopptagelsen opphørte. Reaksjonsblandingen ble filtrert gjennom diatoméjord. Filterputen ble vasket med etylacetat og flyktige stoffer fjernet fra filtratet ved inndampning. Residuet ble utgnidd med isoheksan, oppsamlet ved filtrering, vasket lett med isoheksan og tørket, hvilket gir tittelforbindelsen (3,7 g, 92%) som et hvitt, fast stoff. NMR: 2,6 (s, 3H), 2,73 (s, 3H), 7,43 (dd, 1H), 8,15 (d, 1H), 8,67 (d, 1H); m/z: 176 [MH]<+>.

Metoder 35- 38

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 34.

Metode 39

MA^- rftmetvl- A^^ få- klorpvridazin- S- vnpropionamidin

En løsning av fosforoksytriklorid (9,32 ml, 100 mmol) i tørr toluen (30 ml) ble tilsatt dråpevis over 15 minutter til en omrørt løsning av dimetylpropionamid (10,88 ml, 100 mmol) i tørr toluen (180 ml) og blandingen ble deretter omrørt i 24 timer ved omgivelsestemperatur. 3-amino-6-klorpyridazin (12,9 g, 100 mmol) ble tilsatt som et fast stoff og blandingen omrørt og oppvarmet ved 85°C i 18 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles og satt seg og toluenlaget dekantert fra. Residuet ble vasket med mer tørr toluen og dette ble dekantert fra. Residuet ble oppløst i vann og ekstrahert med diklormetan og det vandige laget ble regulert til pH 12 ved forsiktig tilsetning av 40% vandig natriumhydroksyd-løsning. Diklormetan ble tilsatt og blandingen ble filtrert for å fjerne uoppløselig urenhet. Det organiske laget ble separert og det vandige laget ekstrahert med diklormetan. De organiske ekstrakter ble samlet, tørket (Na2SC>4) og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Råproduktet ble renset ved kolonnekromatografi på silikagel under eluering med diklormetan / metanol (96,5 : 3,5), hvilket gir tittelforbindelsen (4,4 g, 21%) som en brun olje. NMR (CDC13): 1,18 (t, 3H), 2,53 (q, 2H), 3,1 (s, 6H), 6,93 (d, 1H), 7,27 (d, 1H); m/z: 213 [MH]<+>.

Metode 40

Den følgende forbindelse ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 39.

Metode 41

5- metoksvimidazor 1. 2b1pvridazin

Natriummetoksydløsning (25% vekt løsning i metanol, 56,5 g, 261,4 mmol) ble satt til en løsning av 5-klorimidazo[l,2b]pyridazin (Metode 9; 10,0 g, 65,6 mmol) i vannfri metanol (100 ml) ved omgivelsestemperatur og reaksjonsblandingen omrørt i 18 timer. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning og en gul, oljeaktig residue ble oppløst i diklormetan (100 ml). Løsningen ble vasket med vann (5 x 100 ml) inntil den vandige vasken ble nøytral. Den organiske løsningen ble tørket (MgSC^) og løsningsmidlet fjernet, hvilket gir tittelforbindelsen (8,87 g, 91%) som et blekgult, fast stoff. NMR: 3,92 (s, 3H), 6,82 (d, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,99 (d, 1H), 8,03 (s, 1H); m/z: 150 [MH]<+>.

Metode 42

5-( 2. 2. 2- trifluoretoksv) imidazol 1. 2blpvridazin

Natriumhydrid (432 mg, 10,8 mmol) ble tilsatt i porsjoner til en løsning av 2,2,2-trifluoretanol (10,8 mmol) og 5-klorimidazo[l,2b]pyridazin (1,5 g, 9,8 mmol), i vannfri DMF (15 ml)ved omgivelsestemperatur og blandingen omrørt i 18 timer. De flyktige stoffene ble fjernet ved inndampning og det resulterende faste stoffet ble oppløst i diklormetan (20 ml). Løsningen ble vasket med vann (2 x 15 ml), det organiske laget tørket (MgS04) og løsningsmidlet fjernet ved inndampning, hvilket gir tittelforbindelsen (2,05 g, 92%) som et blekgult, fast stoff. NMR: 5,0 (q, 2H), 7,0 (d, 1H), 7,64 (s, 1H), 8,1 (m, 2H); m/z: 219 [MH]<+>.

Metode 43

3- amino- 6- klor- 5- metvlpvrazin

En blanding av 3,6-diklor-5-metylpyrazin (5 g, 30,7 mmol) i etanolisk ammoniakk løsning (50 ml) ble oppvarmet i 8 timer i en høy-trykk celle ved 135°C. Løsningsmidlet ble deretter fjernet ved inndampning og residuet oppløst i kloroform (40 ml). Den organiske løsningen ble vasket med vann (2 x 25 ml) tørket (MgS04) og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning. Rå fast stoff ble semi-renset ved kolonnekromatografi på silikagel under eluering med diklormetan / metanol (95 : 5) til tittelforbindelsen (1,3 g, 31%) som en 10:17 blanding med dens regioisomer. NMR: 2,06 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 6,2 (br s, 4H), 6,74 (s, 1H), 7,26 (s, 1H); m/z: 143 [MH]<+>.

Metode 44

1- ( 2- aminoetyl) pvrazol

Natriumhydroksyd (22,96 g, 0,57 mol) ble satt til en løsning av pyrazol (10,88 g, 0,16 mol) i tørr acetonitril (80 ml) og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 30 minutter. Tetrabutylammoniumhydrogensulfat (2,18 g, 6,4 mmol) og 2-kloretylamin-hydroklorid (19,78 g, 0,172 mol) ble tilsatt og blandingen oppvarmet ved tilbakeløp i 24 timer. Blandingen fikk avkjøles og uoppløslige stoffer ble fjernet ved filtrering. De flyktige stoffene ble fjernet fra filtratet ved inndampning og 49% hydrogenbromid (30 ml) fulgt av etanol (100 ml) satt til residuet. Blandingen ble oppvarmet til tilbakeløp og deretter avkjølt i is. Det resulterende utfelte stoff ble oppsamlet ved filtrering, vasket med kald etanol, hvilket gir tittelforbindelsen. NMR: 3,20-3,24 (m, 2H), 4,38 (t, 2H), 6,30 (s, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,79 (s, 1H), 7,98 (s, 2H).

Metode 45

2- { 4- rA^-( l-( 4- Toluensulfonvloksv)- 2- metylprop- 2- vl) sulfamovllanilino}- 4-( imidazor 1. 2b1pvridazin- 3- vl) pvrimidin

4-Toluensulfonylklorid (4,44 g, 0,23 mol) ble satt til en løsning av 2-{4-[7V-(l-hydroksy-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl]anilino} -4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin (Eksempel 57; 3,41 g, 0,008 mol) i pyridin (50 ml) og blandingen omrørt ved omgivelsestemperatur i 24 timer. Blandingen ble deretter fortynnet med vann og ultralydbehandlet. Den vandige fasen ble dekantert og residuet oppløst i etylacetat / metanol. Løsningen ble vasket med vann, tørket (MgSCv), løsningsmidlet fjernet ved inndampning og residuet ble utgnidd med eter, hvilket gir tittelforbindelsen (1,92 g, 42%). NMR: 1,0 (s, 6H), 2,38 (s, 3H), 3,79 (s, 2H), 7,40-7,45 (m, 3H), 7,59 (s, 1H), 7,65-7,75 (m, 4H), 8,05 (d, 2H), 8,09 (d, 1H), 8,35 (d, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,70 (d, 1H), 8,80 (d, 1H), 10,13 (s, 1H).

Metode 46

2- { 4- rA7-( 2, 2- dimetvlaziridvl) sulfonyllanilino) - 4-( imidazor 1. 2blpvridazin- 3- vl) pvrimidin

Kaliumkarbonat (57 mg, 0,4 mmol) og deretter aceton (5 ml) ble satt til 2-{4-|7v'-(l-(4-toluensulfonyloksy)-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl]anilino}-4-(imidazo[l,2b] pyridazin-3-yl)pyrimidin (Metode 45; 220 mg, 0,38 mmol) og blandingen omrørt og oppvarmet ved tilbakeløp i 2 timer. Blandingen fikk avkjøles, uoppløslige stoffer ble fjernet ved filtrering, filteret vasket med aceton og løsningsmidlet fjernet ved inndampning, hvilket gir tittelforbindelsen (123 mg, 77%) som et oransje farget, fast stoff. NMR: 1,42 (s, 6H), 2,43 (s, 2H), 7,43 (dd, 1H), 7,84 (d, 2H), 8,08-8,12 (m, 3H), 8,35 (d, 1H), 8,68 (d, 1H), 8,70 (d, 1H), 8,8 (d, 1H), 10,2 (s, 1H).

Metode 47

1 -( 1 - metvlcvklopropan) karboksamid

Oksalylklorid (8,24 ml, 0,095 mol) og deretter DMF (få drops) ble satt til en løsning av l-(l-metylcyklopropan)karboksylsyre (9,42 g, 0,094 mol) i diklormetan (150 ml) avkjølt ved 5°C og blandingen omrørt ved 5°C i 30 minutter og deretter i 3 timer ved omgivelsestemperatur. Løsningsmidlet og overskudd av oksalylklorid ble fjernet ved inndampning, residuet oppløst i diklormetan og satt til en løsning av ammoniakk (overskudd av) i metanol avkjølt ved 5°C. Blandingen fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning, hvilket gir tittelforbindelsen. NMR: 0,29 (q, 2H), 0,71 (q, 2H), 1,02 (s, 3H), 6,62 (s, 1H), 6,85 (s, 1H).

Metode 48

1 - amino- 1 - metvlcvklopropan

Brom (2,87 ml, 0,056 mol) ble satt til en løsning av natriumhydroksyd (13,5 g, 0,338 mol) i vann (100 ml) ved 0-5°C. En oppslemning av l-(l-metylcyklopropan)karboksamid (5,70 g 0,056 mol) i vann (50 ml) ble deretter tilsatt og reaksjonsblanding omrørt ved 5°C i 2 timer, deretter fikk dette stå ved omgivelsestemperatur i 24 timer. Blandingen ble deretter oppvarmet ved 80°C i 2,5 timer, fikk avkjøles og blanding destillert, hvilket gir tittelforbindelsen (kp 75-80°C). NMR: 0,2 (q, 2H), 0,14 (q, 2H), 0,96 (s, 3H), 1,42 (s, 2H).

Metode 49

L3- dimetoksv- 2- metansulfon<y>loksv<p>ropan

Trietylamin (5 ml, 0,036 mol) fulgt av langsom tilsetning av metansulfonylklorid (2,72 ml, 0,035 mol) ble satt til en løsning av l,3-dimetoksy-2-hydroksypropan (3,84 g, 0,032 mol) i diklormetan (70 ml) avkjølt ved 5°C. Blandingen ble deretter omrørt ved omgivelsestemperatur i 24 timer. Blandingen ble deretter absorbert på silikagel og renset ved kromatografi under eluering med diklormetan / isoheksan (1 : 1), hvilket gir tittelforbindelsen (3,74 g, 59%). NMR: 3,15 (s, 3H), 3,28 (s, 6H), 3,52 (d, 4H), 4,78 (q, 1H).

Metoder 50- 52

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 49.

Metode 53

1, 3 - dimetoksv- 2- azidopropan

l,3-dimetoksy-2-metansulfonyloksypropan (Metode 49; 3,74 g, 19 mmol) og natriumazid (2,03 g, 31 mmol) i DMA (55 ml) ble oppvarmet ved 100°C i 8 timer fikk deretter stå ved omgivelsestemperatur i 24 timer. Blandingen ble fortynnet med vann, ekstrahert med etylacetat, ekstraktene kombinert og vasket med vann, tørket (MgSCU) og de flyktige stoffene fjernet ved inndampning, hvilket gir tittelforbindelsen (2,0 g, 74%) som en klar olje.

Metoder 54- 56

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 53.

Metode 57

1, 3- dimetoksv- 2- aminopropan

10% Palladium på trekull (500 mg) ble satt til en løsning av l,3-dimetoksy-2-azidopropan (Metode 53; 2 g, 0,014 mol) i etanol (40 ml) og blandingen omrørt under en atmosfære av hydrogen ved omgivelsestemperatur i 6 timer. Katalysatoren ble fjernet ved

filtrering gjennom diatoméjord og filterputen vasket med etanol, hvilket gir en løsning av tittelforbindelsen i etanol (20 ml).

Metoder 58- 60

De følgende forbindelser ble fremstilt ved en metode analog med den beskrevet i Metode 57.

Eksempel 67

Det følgende illustrerer representative farmasøytiske doseformer inneholdende forbindelsen med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav (nedenfor forbindelse X), for terapeutisk eller profylaktisk anvendelse hos mennesker:-

Anmerkning

Preparatene ovenfor kan oppnås ved konvensjonelle prosedyrer velkjent innen det farmasøytiske området. Tablettene (a)-(c) kan være enterisk belagt ved konvensjonelle metoder, for eksempel for å gi et belegg av celluloseacetatftalat.

Claims

1. Forbindelse, karakterisert ved a t den har formel (I): hvor: Ring A er en gruppe med formel (IA) eller (IB): hvor én eller flere av X<1>, X2, X<3> og X<4> er nitrogen og de andre er CR5 hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige; R og R er uavhengig av hverandre valgt fra hydrogen, trifluormetoksy, Ci^alkyl, Ci_6alkoksy, AKCi_6alkyl)amino, A^AHCi-ealkyl^amino,; hvor hvilken som helst R<2> eller R<5 >kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<7>; R<3> er halogen eller sulfamoyl; p er 0-4; hvor verdiene av R3 kan være like eller forskjellige; R<4> er en gruppe A-E-; hvor A er valgt fra C|.6alkyl, C3_8cykloalkyl, (heterocyklisk gruppe)Ci_6alkyl eller C3_8cykloalkylCi-6alkyl; hvor A kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<9>; E er -N(R<a>)S02-; hvor Ra er hydrogen eller Ci.6alkyl; R<9> er uavhengig valgt fra hydroksy, Ci-6alkyl, C2-6alkenyl, C2-6alkynyl, Ci_6alkoksy, A<7>,A<7->(Ci_6alkyl)2amino, C|.6alkylS, Ci_6alkoksykarbonyl, Ci-6alkoksykarbonylamino, benzyloksykarbonylamino, A^-(Ci.6alkyl)sulfamoyl og A/,N-(Ci.6alkyl)2Sulfamoyl; hvor R<9> kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<12>; q er 0-2; hvor verdiene av R4 kan være like eller forskjellig; og hvor p + q < 5; R<7> er halogen; og hvor en hvilken som helst "heterocyklisk gruppe" er en mettet, delvis mettet eller umettet, mono eller bicyklisk ring inneholdende 5 eller 6 atomer hvor minst ett atom er valgt fra nitrogen, svovel eller oksygen som kan være karbon eller nitrogen koblet, hvor en -Cffe-gruppe i ringen kan eventuelt bli erstattet ved en -C(O)- og et ringsvovelatom kan eventuelt bli oksydert for å danne S-oksidet(ene); eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

2. Forbindelse med formel (I) ifølge krav 1, karakterisert ved at Ring A er en gruppe med formel (IA) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

3. Forbindelse med formel (I) ifølge et av kravene 1 eller 2, karakterisert ved at én av X<1>, X<2>, X<3> og X<4> er nitrogen og de andre er CR5 hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

4. Forbindelse med formel (I) ifølge et hvilket som helst av kravene 1-3, karakterisert ved at R<2> er valgt fra hydrogen, C i .6alkyl eller A<7>,A<f->(Ci-6alkyl)2amino eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

5. Forbindelse med formel (I) ifølge et hvilket som helst av kravene 1-4, karakterisert ved at R5 er valgt fra hydrogen, Ci-6alkyl eller C|.6alkoksy; hvor R5 kan være eventuelt substituert på karbon med én eller flere R<7>; hvor R7 er valgt fra halogen eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

6. Forbindelse med formel (I) ifølge et hvilket som helst av kravene 1-5, karakterisert ved atperO eller 1 eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

7. Forbindelse med formel (I) ifølge et hvilket som helst av kravene 1-6, karakteris ert ved at qerO eller 1 eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

8. Forbindelse med formel (I) ifølge et hvilket som helst av kravene 1-7, karakteris ert ved at p + qerO, 1 eller 2; hvor verdiene av R •akan være like eller forskjellige og verdiene av R<4> kan være like eller forskjellige; eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

9. Forbindelse med formel (I) som vist i kravl, karakterisert ved at Ring A er en gruppe med formel (IA) (som vist i krav 1) en av X<1>, X<2>, X<3> og X<4> er nitrogen og den andre er CR<5>; hvor verdiene av R<5> kan være like eller forskjellige; R<2> er valgt fra hydrogen, metyl, etyl eller A^N-dimetylamino; R<5> er valgt fra hydrogen, metyl, metoksy eller 2,2,2-trifluoretoksy; R3 er sulfamoyl eller fluor; p er 0 eller 1; R4 er AT-metylsulfamoyl, iV-cyklopropylmetylsulfamoyl, N-etylsulfamoyl, Af-propylsulfamoyl, N-allylsulfamoyl, Af-2-propynylsulfamoyl, Af-cyklobutylsulfamoyl, AT-f-butylsulfamoyl, AT-cyklopropylsulfamoyl, AK2-dimetylaminoetyl)sulfamoyl, AK2-metoksyetyl)sulfamoyl, Af-(2-pyrazol-1 -yletyl)sulfamoyl, Af-met<y>l-AK2-metoksyetyl)sulfamoyl, N-( 1 -cyklopropyletyl)sulfamoyl, N-( 3 -dimetylaminopropyl)sulfamoyl , N-( 3 -metoksypropyl)sulfamoyl, A?-(3-hydroksy-2-hydroksymetylprop-2-yl)sulfamoyl, A</->(l,3-dihydroksyprop-2-yl)sulfamoyl, A^-(3-morfolino-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, AK 1,3-dimetoksyprop-2-yl)sulfamoyl, AK 1,3 -dietoksyprop-2-yl)sulfamoyl, AK 1 -metoksyprop-2-yl)sulfamoyl, AK 1 -etoksyprop-2-yl)sulfamoyl, AK 1 -hydroksyprop-2-yl)sulfamoyl, AK3-metyltio-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, A<7->(3-pyrrolidin-l-yl-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, AK3-metoksy-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl, AT-(2-metoksy-2-metylpropyl)sulfamoyl, AK 1 -propoksyprop-2-yl)sulfamoyl eller AK3-hydroksy-2-metylprop-2-yl)sulfamoyl; qerO eller 1; p + q er 0,1 eller 2; hvor verdiene av R3 kan være like eller forskjellige og verdiene av R<4> kan være like eller forskjellige; eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

10. Forbindelse med formel (I) som vist i krav 1,karakterisert ved at den er valgt fra: 2- {4-[N-(2-metoksyetyl)sulfamoyl]anilino} -4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2-{4-[N-(3-metoksypropyl) sulfamoyl]anilino}-4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2-[4-(N-Propylsulfamoyl) anilino]-4-(imidazo[ 1,2b] pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2-{4-[N-(2-metoksyetyl) sulfamoyl]anilino}-4-(2-metylimidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2-[4-(N-metylsulfamoyl) anilino]-4-(2-metylimidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2-{4-[N-(2-(l-pyrazolyl)etyl) sulfamoyl]anilino}-4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2- {4-[N-(l ,3-dietoksyprop-2-yl)sulfamoyl]anilino} -4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2- {4-[N-(l ,3-dimetoksyprop-2-yl)sulfamoyl]anilino }-4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2- {4-[N-(l -etoksyprop-2-yl)sulfamoyl]anilino} -4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; 2-{4-[N-(2-etoksyetyl) sulfamoyl]anilino}-4-(imidazo[ 1,2b]pyridazin-3-yl)pyrimidin; eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav.

11. Fremgangsmåte for fremstilling av en forbindelse med formel (I) ifølge krav 1 eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller en in vivo hydrolyserbar ester derav, karakterisert v ed at den omfatter (hvor variable grupper er, hvis ikke på annen måte spesifisert, som definert i krav 1) a) omsetning av en pyrimidin med formel (II): hvor L er en utskiftbar-gruppe; med et amin med formel (III): b) omsetning av en pyrimidin med formel (IV): med en forbindelse med formel (V): hvor én av M og Q er en utskiftbar-gruppe og de andre er et metallisk reagens; eller c) omsetning av en forbindelser med formel (VI): med en forbindelse med formel (VII): hvor R erCi^alkyl; d) omsetning av en aminoforbindelse med formel (VIII): med en forbindelse med formel (IX): hvor E er en utskiftbar-gruppe; og deretter hvis nødvendig: i) omdannelse av en forbindelse med formel (I) til en annen forbindelse med formel (I); ii) fjerning av hvilken som helst beskyttelsesgrupper; iii) dannelse av et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester.

12. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10 sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer.

13. Forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10, karakterisert ved at den er for anvendelse som et medikament.

14. Anvendelse av en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, som definert i hvilket som helst av kravene 1-10 ved fremstilling av et medikament for anvendelse ved fremstilling av en cellecyklus hemmende (anti-celle-proliferasjons) -effekt i et varmblodig dyr så som mennesker.

15. Farmasøytisk preparat, karakterisert ved at det omfatter en forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10 sammen med et farmasøytisk akseptabelt fortynningsmiddel eller bærer for anvendelse ved fremstilling av en cellecyklus hemmende (anti-celle-proliferasjons) -effekt i et varmblodig dyr så som mennesker.

16. Forbindelse med formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10, karakterisert ved at den er for anvendelse ved fremstilling av en cellecyklus hemmende (anti-celle-proliferasjons) -effekt i et varmblodig dyr så som mennesker.

17. Anvendelse av en forbindelse med formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10, for fremstilling av et medikament for behandling av cancer.

18. Anvendelse av en forbindelse ifølge formel (I), eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10, for fremstilling av et medikament for behandling av: i) leukemi, bryst, lunge, tarm, rektalt, mage, prostata, blære, bukspyttkjertel eller ovarie-cancer; ii) leukemier, lymfoide maligne eller faste tumorer så som karsinomer eller sarkomer i vev så som lever, nyre og prostata eller bukspyttkjertel; iii) faste tumorer i tarm, bryst, prostata, lunger eller hud; eller iv) tumorer i tarm, bryst, prostata, lunge, vulva eller hud.

19. Anvendelse av en forbindelse ifølge formel (I) eller et farmasøytisk akseptabelt salt eller in vivo hydrolyserbar ester derav, ifølge et hvilket som helst av kravene 1-10, for fremstilling av et medikament for behandling av cancer, fibroproliferative forstyrrelser, differensierende forstyrrelser, psoriasis, reumatoid artritt, Kaposis sarkom, haemangiom, akutt eller kroniske nefropatier, aterom, aterosklerose, arteriell restenose, autoimmune sykdommer, akutt eller kronisk inflammasjon, bensykdommer eller okulære sykdommer med retinal karproliferasjon.