NL1027787C2

NL1027787C2 - Pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diaminen als PDE 2 remmers.

Info

Publication number: NL1027787C2
Application number: NL1027787A
Authority: NL
Inventors: Andrew Ian Morrell; David Duane Thompson; Robert James Chambers; Thomas Arthur Beyer; Kelvin Lam; Mei Li
Original assignee: Pfizer Prod Inc
Priority date: 2003-12-16
Filing date: 2004-12-15
Publication date: 2006-03-09
Also published as: SI1697356T1; HRP20080142T3; CA2549510A1; AR046766A1; RS50575B; CN1894245A; JP2007513996A; DK1697356T3; KR20060105776A; WO2005061497A1; MXPA06006777A; ECSP066643A; PL1697356T3; DE602004012154D1; TNSN06186A1; US20070135457A1; CN100439366C; NL1027787A1; TW200522952A; TWI291961B

Description

1 'l

Pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diaminen als PDE 2 remmers

5 GEBIED VAN DE UITVINDING

De uitvinding betreft bepaalde pyrido[2,3-d]pyrimi-dine-2,4-diaminen toepasbaar als PDE 2 remmers; farmaceutische formuleringen daarvan; combinaties daarvan; en 10 toepassingen daarvan.

ACHTERGROND VAN DE UITVINDING

De fosfodiesterase (PDE) familie van enzymen regelt 15 intracellulaire niveaus van secundaire boodschapper cAMP of cGMP door hydrolytische regeling. Fosfodiesterase type II (PDE 2) bezit een katalytisch domein met lage affiniteit en een allosterisch domein specifiek voor cGMP. De katalytische plaats met lage affiniteit kan zowel cAMP 20 als cGMP hydrolyseren met een lagere schijnbare KM voor cGMP ten opzichte van cAMP. Als cGMP bindt aan de allo-stere plaats ondergaat de katalytische plaats echter een conformationele verandering en toont hoge affiniteit voor cAMP. PDE 2 toont de hoogste expressie in de hersenen, 25 maar wordt ook gevonden in vele andere weefsels, en heeft derhalve een brede reeks functies en potentieel therapeutisch nut (J.A. Beavo, c.s., Rev. Physio. Biochem.

Pharm., 135, 67 (1999). Voorbeelden van PDE 2 functie en therapeutisch potentieel zijn in neuronale ontwikkeling, 30 leren en geheugen (W.C.G. van Staveren, c.s., Brain Res., 888, 275 (2001) en J. O’Donnell, c.s., J. Pharm. Exp.

Ther., 302, 249 (2002); ptolactine- en aldosteronuit- scheiding (M.O. Velardez, c.s., Eur. J. Endo., 143, 279 (2000) en N. Gallo-Payet, c.s., Endo., 140, 3594 (1999); 35 botceldifferentiatie, groei en botresorptie (C. Allardt-Lamberg, c.s., Biochem. Pharm., 59, 1133 (2000) en S. Wa- 1027787 2 kabayashi, c.s., J. Bone. Miner. Res., 17, 249 (2002); immunologische reactie (M.D. Houslay, c.s., Cell. Sig-nal., 8, 97 (1996); vasculaire angiogenese (T. Keravis, c.s., J. Vac. Res., 3J_, 235 (2000); ontstekingscelover- 5 dracht (S.L. Wolda, c.s., J. Histochem. Cytochem., 47, 895 (1999); hartcontractie (R. Fischmeister, c.s., J.

Clin. Invest. 99, 2710 (1997), P. Donzeau-Gouge, c.s., J. Physiol, 533, 329 (2001) en D.J. Paterson, c.s., Card.

Res., 52, 446 (2001); plaatjesaggregatie (R.J. Haslam, 10 c.s., Biochem. J., 323, 371 (1997); vrouwelijke seksuele opwindingsaandoening (FSAD) (C.P. Wayman, c.s., Europese Octrooiaanvrage Publicatie Nrs. EP 1.097.7707 en 1.0977.06); en hypoxische longvasoconstrictie (J. Haynes, c.s. J. Pharm. Exp. Ther., 276, 752 (1996). Er is getoond 15 dat EHNA (erythro-9-(2-hydroxy-3-nonyl)adenine), een krachtige adenosinedeaminaseremmer, selectief PDE 2 remt, maar de toepassing van EHNA als een PDE 2 gebaseerd therapeutisch middel is beperkt tengevolge van lage kracht bij remmen van PDE 2, en hoge kracht bij remmen van ade-20 nosinedeaminase (R. Fischmeister c.s., Mol. Pharm., 48, 121 (1995)) .

Er is nu gevonden dat bepaalde pyrido[2,3-d]pyrimi-dine-2,4-diaminederivaten met formule (I) hieronder PDE 2 remmen en derhalve nuttig zijn bij de behandeling van fy-25 siologische aandoeningen gemedieerd door het cAMP of cGMP cellulair-signaleringspad.

Amerikaans Octrooischriften Nrs. 5.547.954 en 5.710.157 beschrijven bepaalde 2,4-diamino-5,6-digesub-. stitueerde en 5,6,7-trigesubstitueerde 5-deazapteridinen, 30 preparaten daarvan en toepassingen daarvan bij het bestrijden van insecten in landbouwgewassen.

3

SAMENVATTING VAN DE UITVINDING

De uitvinding verschaft verbindingen met formule (I) 5 0(C-i-C6)alkyl J—r1 f'vS *' io IL ^

^N^^N^NHiCHzJn-X-Y

(I) ; 15 prodrugs. ervan, en de farmaceutisch aanvaardbare zoutén van de verbindingen of prodrugs, waarbij η, X en Y zijn zoals hieronder gedefinieerd, farmaceutische preparaten daarvan, combinaties daarvan en toepassingen daarvan.

20 GEDETAILLEERDE BESCHRIJVING VAN DE UITVINDING

De onderhavige uitvinding verschaft verbindingen met formule (I) 25 p(Ci-Ce)all<yl \—R1 r2

L JL

30 ^xN<^N'!^NH(CH2)n-X-Y

(O ; 35 de prodrugs daarvan en de farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen of prodrugs, waarbij:

» ' » J

4 R1 en R2 waterstof of methoxy zijn, met dien verstande dat R1 en R2 niet beide waterstof of beide methoxy zijn; η 1, 2, 3 of 4 is; 5 X een binding; O;. S; C=0; -N(R)-, waarbij R water stof of - (C1-C3) alkyl is.; -C(OH)-; of -SO2 is; en Y benzoxazolyl; benzothiazolyl; benzofurazanyl; ben-zofuranyl; benzothiadiazolyl; benzisoxazolyl; benzisothi-azolyl; benzimidazolyl; pyridyl; isatinyl; oxindolyl; in-10 dazolyl; indolyl, fenyl; thienyl; of furanyl is; waarbij Y eventueel onafhankelijk is gesubstitueerd met één tot drie halogeen; trifluormethyl, methoxy; -C(=0)CH3; cyano; -C (CH3) 2OH; -CH (CH3) OH; -CH(CF3)OH; -C(=0)CF3; -S02NH2; -C (=0) OCH3; -CH2COOH; 15 & thiazolyl of oxadiazolyl.

Een subgroep die in het algemeen de voorkeur heeft 20 waaronder verbindingen met formule (I) omvat die verbindingen waarbij X een binding is en Y benzofurazanyl; thienyl, pyridyl of fenyl, waarbij fenyl eventueel onafhankelijk is gesubstitueerd met één of twee halogeen; trifluormethyl; methoxy; -C(=0)CH3; cyano; -C(CH3)2OH; 25 -CH (CH3) OH; -CH(CF3)OH; -C(C=0)CF3; -S02NH2; -C(=0)0CH3; -CH2COOH; thiazolyl of oxadiazolyl is.

Een subgroep met bijzondere voorkeur van de verbindingen met formule (I) omvat die verbindingen waarbij X een binding is, n 2 of 3 is en Y thienyl; pyridyl of fe-30 nyl, waarbij fenyl eventueel onafhankelijk is gesubstitueerd met één of twee methoxy; halogeen; -C(CH2)OH; -CH(CF3)0H of -C(C=0)CF3 is.

Een cyclische groep kan zijn gebonden aan een andere groep op meer dan één wijze. Als geen bepaalde bindings-35 rangschikking is gespecificeerd, dan zijn alle mogelijke rangschikkingen bedoeld. Bijvoorbeeld omvat de term "py- 5 ridyl" 2-, 3- of 4-pyridyl en omvat de thermoplastisch "thienyl" 2- of 3-thienyl.

De verbindingen en tussenproducten volgens de onderhavige uitvinding kunnen worden genoemd volgens hetzij de 5 IUPAC (Internationale Union for Pure and Applied Chemis-try) of CAS (Chemical Abstracts Service, Columbus, OH) nomenclatuur systemen.

Het koolstofatoomgehalte van de diverse koolwaterstof bevattende delen kan worden aangegeven door een 10 voorzetsel dat het minimale en maximale aantal koolstof-atomen in het deel aangeeft, d.w.z. het voorzetsel "-(Ca-Cb)alkyl” geeft een alkyldeel aan van het geheel getal "a" tot "b" koolstofatomen, inclusief.

De term "alkyl" duidt rechte of vertakte, monovalen-15 te ketens van koolstofatomen aan. Voorbeelden van alkyl-groepen omvatten methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, en dergelijke.

De term "halogeen" stelt, chloor, fluor, broom en jood voor.

20 De term "prodrug" betreft een verbinding die een ge neesmiddel voorloper is welke, volgend op toediening, het geneesmiddel in vivo afgeeft, via een chemisch of fysiologisch proces (b.v. na te zijn gebracht tot fysiologische pH of door enzymactiviteit). Een bespreking van de berei-25 ding en toepassing van prodrugs wordt verschaft door T.

I · · '

Higuchi en W. Stella, "Prodrugs as Novel. Delivery Systems", band 4 van de ACS Symposium Series, en in "Biore-ver.sible Carriers in Drug Design", red. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press 30 (1987) .

De term "zoogdier" betekent dieren waaronder, bijvoorbeeld, honden, katten, koeien, schapen, paarden en mensen. Zoogdieren die de voorkeur hebben omvatten mensen van elk geslacht.

35 De term "zouten" betreft organische en anorganische zouten van een verbinding met formule (I), of een prodrug « ’ J ’ 6 daarvan. Deze zouten kunnen in situ worden bereid tijdens de laatste isolatie en zuivering van een verbinding, of door afzonderlijke verbinding met formule (I) of een pro-drug daarvan te laten reageren met een geschikt organisch 5 of anorganisch zuur of base en het aldus gevormde zout te isoleren. Representatieve zouten omvatten de hydrobromi-de-, hydrochloride-, sulfaat-, bisulfaat-, nitraat-, acetaat-, oxalaat-, besylaat-, palmitaat-, stearaat-, lau-raat-, boraat-, benzoaat-, lactaat-, fosfaat-, tosylaat-, 10 citraat-, maleaat-, fumaraat-, succinaat-, tartraat-, naftylaat-, mesylaat-, glucoheptonaat-, lactobionaat- en laurylsulfonaatzouten, en dergelijke. Deze kunnen ook kationen omvatten gebaseerd op de alkali- en aardalkalimetalen, zoals natrium, lithium, kalium, calcium, magne-15 sium, en dergelijke, alsmede niet-toxisch ammonium-, qua-ternaire ammonium- en amine kationen waaronder, maar zijn niet beperkt tot, ammonium, tetramethylammonium, tetra-ethylammonium, methylamine, dimethylamine, trimethylami-ne, triethylamine, ethylamine, en dergelijke. Voor addi-20 tionele voorbeelden zie bijvoorbeeld Berge, c.s., J. ;

Pharm. Sci., _66, 1-19 (1977) . j

De term "gesubstitueerd" betekent dat een waterstofatoom op een molecuul is vervangen door een ander atoom of molecuul. Het atoom of molecuul dat het waterstofatoom 25 vervangt, wordt aangeduid als een "substituent".

Zoals hierin gebruikt, betekent de term "therapeutisch effectieve hoeveelheid" een hoeveelheid van een verbinding die in staat is tot het behandelen van een beschreven pathologische aandoening.

30 De termen "behandelen", "behandeling" en "behande lend" omvatten preventieve (b.v. profylactische) en pal-liatieve (b.v. helende of curatieve) behandeling of behandeling van het verschaffen van de preventieve of pal-liatieve behandeling.

35 De verbindingen met formule (I) kunnen asymmetrische of chirale centra bevatten en derhalve voorkomen in ver- ·· 7 schillende stereoisomere vormen. Er wordt bedoeld dat alle stereoisomere vormen van de verbindingen en prodrugs met formule (I), alsmede mengsels daarvan, waaronder ra-cemische mengsels, deel van de onderhavige uitvinding 5 vormen. Bovendièn omvat de onderhavige uitvinding alle geometrische en positionele isomeren. Als bijvoorbeeld een verbinding of prodrug met formule (I) een dubbele binding (dubbele bindingen) omvat, worden zowel de cisals trans-vormen, alsmede mengsels daarvan, omvat binnen 10 de omvang van de uitvinding.

Diastereomere mengsels kunnen worden gescheiden in . hun afzonderlijke diastereomeren op basis van hun fy-sisch-chemische .verschillen met behulp van de vakman algemeen bekende methoden, zoals door chromatografie en/of 15 fractionele kristallisatie. Enantiomerén kunnen worden gescheiden door het enantiomere mengsel om te zetten in een diastereomeer mengsel door reactie met een geschikte optisch actieve verbinding (b.v. alcohol), de diastèreo-meren te scheiden en de afzonderlijke diastereomeren om 20 te zetten (b.v. hydrolyseren) in de overeenkomstige zuivere enantiomeren.

De verbindingen en prodrugs volgens de uitvinding met formule (I) kunnen voorkomen in ongesolvateerde alsmede gesolvateerde vormen met farmaceutisch aanvaardbare 25 oplosmiddelen, zoals water, ethanol en dergelijke, en er wordt bedoeld dat de uitvinding zowel gesolvatëerde als ongesolvateerde vormen omvat.

Het is ook mogelijk dat de.verbindingen en.prodrugs met formule (I) kunnen voorkomen, als tautomere isomeren 30 in evenwicht en al dergelijke vormen worden omvat binnen de omvang van de uitvinding.

De onderhavige uitvinding omvat ook isotoop-gelabel-de verbindingen met formule (I), welke identiek zijn aan de hierin aangehaalde, behalve voor het feit dat één of 35 meer atomen zijn vervangen door een atoom met een atoom-massa of massagetal verschillend van de atoommassa of het • · J ‘ 8 massagetal gewoonlijk gevonden in de natuur. Voorbeelden van isotopen die kunnen worden opgenomen in verbindingen met formule (I) omvatten isotopen van respectievelijk waterstof, koolstof, stikstof, zuurstof, fosfor, fluor en 5 chloor, zoals 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 180, 31P, 32P,. ?6F en 36C1. De verbindingen met formule (I), de prodrugs daarvan en de farmaceutisch aanvaardbaar zouten van de verbindingen en prodrugs, die de hiervoor genoemde isotopen en/of andere isotopen van de andere atomen bevatten, zijn be-10 doeld binnen de omvang van de onderhavige uitvinding te zijn.

Bepaalde isotoop-gelabelde verbindingen met formule (I) bijvoorbeeld die verbindingen waarin radioactieve isotopen zoals 3H en 14C zijn opgenomen, zijn nuttig in 15 verbinding en/of substraatweefselverdelingsassays. Getri-tieerde, d.w.z. 3H en koolstof-14, d.w.z. 14C, isotopen hebben bijzondere voorkeur voor hun relatieve gemak van bereiding en gemakkelijke detectie. Verder kan substitutie met zwaardere isotopen zoals deuterium, d.w.z. 2H, 20 bepaalde therapeutische voordelen leveren resulterend uit grotere metabole stabiliteit, bijvoorbeeld verlengde in vivo halfwaardetijd of verminderde doseringsvereisten, en kunnen derhalve de voorkeur hebben onder sommige omstandigheden. De isotoop-gelabelde verbindingen met formule 25 (I) kunnen in het algemeen worden bereid door procedures uit te voeren analoog aan die beschreven in de Schema's en/of Voorbeelden hieronder vermeld, door een isotoop-gelabeld reagens te substitueren voor een niet-isotoop-gelabeld reagens.

30 In een ander aspect verschaft de uitvinding werkwij zen voor het behandelen van PDE 2-gemedieerde aandoeningen, ziekten of symptomen bij een zoogdier die een dergelijke behandeling nodig heeft, welke werkwijzen omvatten het toedienen aan het zoogdier van een therapeutisch ef-35 fectieve hoeveelheid van een verbinding met formule (I), een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar .* ' i ' 9 zout van de verbinding of prodrug, of een farmaceutisch preparaat omvattende een verbinding met formule (I), een prodrug daarvan, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van de verbinding of prodrug en eèn farmaceutisch aan-5 vaardbaar vehikel, drager of verdunningsmiddel.

Voorkeursomstandigheden, ziekten of symptomen behandelbaar volgens de onderhavige werkwijzen omvatten osteoporose, long hoge bloeddruk, vrouwelijke seksuele opwin-dingsaandoening, verminderd geheugen of cognitie, plaat-10 jesaggregatie, vasculaire angiogenese, dementie, kanker, arritmie, trombose, botbreuk en/of defect, vertraagde of niet-vereniging breuk, ruggengraatfusie, botingroei, cra-niale gezichtsreconstructie of hypoxie. Een aandoening met bijzondere voorkeur is botbreuk en/of defect.

15 In een ander aspect verschaft de uitvinding werkwij zen voor het remmen van PDE 2 activiteit bij een zoogdier dat een dergelijke remming nodig heeft, welke werkwijzen omvatten het toedienen aan het zoogdier van een PDE 2 remmende hoeveelheid van een verbinding met formule (I), 20 een prodrug ervan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van de verbinding of.prodrug, of een farmaceutisch preparaat omvattende een verbinding met formule (I), een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van de verbinding of prodrug, en een farmaceutisch aanvaard-.25 baar vehikel, drager of verdunningsmiddel.

De verbindingen met formule (I), de prodrugs daarvan en de farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen en prodrugs kunnen worden toegediend aan een zoogdier in doseringsniveaus in het traject van ongeveer 0,001 mg 30 tot ongeveer 200 mg per dag. Voor een normaal volwassen mens een lichaamsmassa van ongeveer 70 kg heeft een dosering in het traject.van ongeveer 0,01 mg tot ongeveer 100 mg per kg lichaamsmassa in het algemeen de voorkeur, maar enige variabiliteit in het algemene doseringstraject kan 35 vereist zijn afhankelijk van de leeftijd en massa van de patiënt die wordt behandeld, '· de bedoelde route van toe- * ’ > ' 10 diening, de bepaalde. verbinding die wordt toegediend, en dergelijke. De bepaling van doseringstrajecten en optimale doseringen voor een bepaalde zoogdierpatiënt is binnen het vermogen van de vakman die voordeel van de onderhavi-5 ge. beschrijving.

In nog een ander aspect verschaft de uitvinding farmaceutische preparaten omvattende een combinatie van een . PDE 2 remmer, een EP2 selectieve agonist; en een farmaceutisch aanvaardbaar vehikel, drager of verdunningsmid-10 del; en werkwijzen voor het behandelen van osteoporose, long hoge bloeddruk, vrouwelijke seksuele opwindingsaan-doening, verminderd geheugen of cognitie, plaatjesaggre-gatie, vasculaire angiogenese, dementie, kanker, arrit-mie, trombose, botbreuk en/of defect, vertraagde of niet-15 eenheidsbreuk, ruggengraatfusie, botingroei, craniale ge-zichtsreconstructie of hypoxie met behulp van dergelijke samenstellingen. Een aandoening met bijzondere voorkeur is botbreuk en/of defect.

In nog een ander aspect verschaft de uitvinding 20 werkwijzen voor het behandelen van botbreuk en/of defect bij een zoogdier die een dergelijke behandeling nodig heeft, welke werkwijzen omvatten het toedienen aan het zoogdier van een therapeutisch effectieve hoeveelheid van een PDE 2 remmer, een prodrug daarvan of een farmaceu-25 tisch aanvaardbaar zout van genoemde remmer of prodrug.

Elke PDE 2 remmer, waaronder de verbindingen met formule (I) hierin, kan worden toegepast bij de werkwijzen. en combinaties volgens de uitvinding. Voorbeelden van bekende PDE 2 remmers omvatten EHNA, 6-(3,4-diméthoxy-30 benzyl)-1-[(1-hydroxy-ethyl)-4-fenyl-butyl]-3-methyl-l,5-dihydro-pyrazool[3,4 —d]pyrimidin-4-on (BAY-60-7550; Amerikaans Octrooischrift Nr. 6.174.884) en 9-(l-acetyl-4-fenyl-butyl) -2- (3, 4-dimethoxybenzyl) ^-1,9-dihydropurin-6-on (Amerikaans Octrooischrift Nr. 5.861.396). Additionele 35 voorbeelden van PDE 2 remmers worden beschreven in Amerikaanse Octrooischriften Nrs. 5.861.396; 5.401.774; 11 • ‘ , ' 6.458.796 en 6.555.547 en in PCT Internationale Aanvrage Publicatie Nr. 98/32755.

Elke EP2 selectieve receptoragonist kan worden toegepast in de combinatieaspecten van de onderhavige uit-5 vinding, maar een categorie die in het algemeen de voorkeur heeft van EP2 selectieve receptoragonisten beschreven in gemeenschappelijk toegewezen Amerikaans Octrooi-schrift Nr. 6.498.172, omvat verbindingen met formule AA

10 G"NrQ'z

M

15

Formule AA

prodrugs daarvan en de farmaceutisch aanvaardbare zouten daarvan, waarbij G, A, B, K, M, Q.en Z zijn zoals daarin 20 gedefinieerd.

Verbindingen die in het algemeen de voorkeur hebben met formule AA zijn (3-(((pyridine-3-sulfonyl)-(4-pyrimi-din-5-yl-benzyl)-amino)-fenyl)-azijnzuur; (3-(( (5-fenyl-furan-2-ylmethyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-25 fenyl)-azijnzuur; (3-(((pyridine-3-sulfonyl)-(4-pyrimi-din-2-yl-benzyl)amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; (3- (((pyridine-3-sulfonyl)-(4-thiazol-2-yl-benzyl)amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; (3-(((4-pyrazin-2-yl-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; (3-30 (((4-cyclohexyl-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)- methyl)-fenoxy)-azijnzuur; (3-(((pyridine-3-sulfonyl)-(4-pyridin-2-yl-benzyl)amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur; (3-(((pyridine-3-sulfonyl)-(4-pyridin-3-yl-benzyl)amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur; (3-(((pyridine-3-sulfonyl)-(4-35 pyridin-4-yl-benzyl)amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur; (3-(((pyridine-3-sulfonyl)-(4-thiazol-2-yl-benzyl)amino)- • ‘ ; ' ' 12 ί methyl)-fenoxy)-azijnzuur; 5- (3-((pyridine-3-sulfonyl)-(4-thiazol-*2-yl-benzyl)amino)-propyl)-thiofeen-2-carbon-zuur; (3-(((2,3-dihydro-benzo[1,4]dioxin-6-ylmethyl)- (pyridine-3-sulfonyl.) -amino) -methyl )'-fenyl) -azijnzuur; en 5 (3-((benzofuran-2-ylmethyl-(pyridine-3-sulfonyl)-)amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur;,. (3-(((4-butyl-benzyl)-(pyridi-ne-3-sulfonylj-amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; (3- ((benzeensulfonyl-(4-butyl-benzyl)-amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; (3-(((4-butyl-benzyl)-(1-methyl-lH-imidazool-10 4-sulfonyl)-amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; en (3-(((4-dimethylamino-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; (3-{((4-dimethylamino-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur; en (3-(((4-tert-butyl-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)- 15 amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur; trans-(3-(((3-(3,5- dichloor-fenyl)-allyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-fenyl)-azijnzuur; (3-(((2- (3,5-dichloor-fenoxy)-ethyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur; prodrugs daarvan en farmaceutisch aanvaardbare 20 zouten van de verbindingen en de prodrugs.

Een verbinding met bijzondere voorkeur met formule A is (3-(((4-tert-butyl-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)- amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur, een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van de verbinding of 25 prodrug. Een zout met bijzondere voorkeur is het natrium-zout.

Een andere categorie die in het algemeen de voorkeur heeft van EP2 selectieve receptoragonisten toepasbaar in de combinatieaspecten van de uitvinding omvat de verbin-30 dingen, prodrugs en farmaceutisch aanvaardbare zouten met Formule BB hieronder, welke worden besproken in gemeenschappelijk toegewezen Amerikaans Octrooischrift Nr.

6.288.120 35 .

« · - ' 13 A\ /'Q\ B 2

5 K-M

Formule BB

10 Waarbij A, B, K, M, Q en Z zijn zoals daarin gedefinieerd.

Verbindingen die in het algeméén de voorkeur hebben met Formule BB zijn 7-{(2’-hydroxymethyl-bifenyl-4-ylmethyl)-methaansulfonyl-amino]-heptaanzuur; 7-[ (4-(3-15 thiofen-r2-yl)-benzyl]-methaansulfonyl-amino]-heptaanzuur; . 7-[(21-chloor-bifenyl-4-ylmethyl)-methaansulfonyl-amino]-heptaanzuur; 7-[(4-(1-hydroxy-hexyl-benzyl)-methaansulfonyl-amino] -heptaanzuur; 7-[(5-(l-hydroxy-hexyl)-thiofen-2-ylmethyl)-methaansulfonyl-amino]-heptaanzuur; 3—{[(4 — 20 butyl-benzyl)-methaansulfonyl-amino]-methyl}-fenyl)- azijnzuur; 7-{[3-(3-chloor-fenyl)-propyl]-methaansulfonyl-amino] -heptaanzuur ; 7-{ [3-(3,5-dichloor-fenyl)pro- pyl]-methaansulfonyl-amino]-heptaanzuur; 5—(3—{(3— chloorfenyl)-propyl]-methaansulfonyl-amino-propyl)-thio-25 feen-2-carbonzuur; 5-(3-{[2-(3,5-chloorfenoxy)-ethylj-methaansulfonyl-amino-propyl)-thipfeen-2-carbonzuur; N-[2- (3,5-dichloorfenoxy)-ethyl]-N-[6-(lH-tetrazol-5-yl)-. hexyl]-methaansulfonamide; trans-(4-{[3-(3,5-dichloor-fenyl).-allyl] -methaansulfonyl-amino}-butoxy) -azijnzuur; 30 trans-N-[3-(3,5-dichloorfenyl)-allyl]-N-[6-(lH-tetrazo-lyl-5-yl)-hexyl]-methaansulfonamide; trahs-5-(3-(3,5- dichloorfenyl)-allyl]-methaansulfonyl-amino}-propyl)-thiofeen-2-carbonzuur; trans-[3-({[3-(3,5-dichloorfenyl)-allyl]-methaansulfonyl-amino}-methyl)-fenyl]-azijnzuur; 35 de prodrugs daarvan en de farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen en prodrugs.

14 - • * . '

Een verbinding met bijzondere voorkeur met Formule BB is 7-[(4-butyl-benzyl)-methaansulfonyl-amino]heptaan-zuur, een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van de verbinding of prodrug. Een voorkeurszout 5 is het mononatriumzout.

Andere EP2 selectieve receptoragonisten toepasbaar in de combinatieaspecten van de onderhavige uitvinding omvatten de prostaglandine receptoragonisten beschreven in Amerikaanse Octrooischriften Nrs. 6.531.485; 10 6.376.533; 6.1214.314; 5.877.211; 5.716.835; 5.698.598 en 5.462.968; Amerikaanse gepubliceerde Octrooiaanvrage Nr. 2002/187961; N. Duckworth, c.s., Journal of Endocrinolo-gy, 172 (2), 263-269 (2002); K. Tani, c.s., Synlett, 2, 239-242 (2002); K. Tani, c.s., Bioorganic & Medicinal 15 Chemistry, 10 (4), 1107-1114 (2002); K. Tani, c.s., Bio organic & Medicinal Chemistry, 1_0 (4), 1093-1106 (2002); J. Michelet, c.s., EP 1.175.891 Al; K. Tani, c.s. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 11^, (15), 2025-2028 (2001); J.Y. Crider, c.s., International Journal of Envi-20 ronmental Studies, _58 (1), 35-46 (2000); J.Y. Crider, c.s., Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics, 17 (1), 35-46 (2001); D.F. Woodward, c.s., Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics, 11_ (3) , 447-54 (1995) ; A.T. Nials, c.s., Cardiovascular Drug Reviews, 1_1 (2), 25 165-79 (1993); en D.F. Woodward, c.s., Prostaglandins, 46, (4), 371-83 (1993) .

In de combinatieaspecten van de uitvinding kunnen de EP2 selectieve receptoragonisten worden toegediend aan zoogdieren in doseringsniveaus variërend van ongeveer 30 0,001 mg/kg tot ongeveer 100 mg/kg massa per dag. Voor een normaal volwassen mens die een lichaamsmassa van ongeveer 70 kg heeft, heeft een dosering in het traject van ongeveer 0,01 mg/kg tot ongeveer 50 mg/kg lichaamsmassa in het algemeen de voorkeur, maar enige variabiliteit in 35 het algemene doseringstraject kan vereist zijn afhankelijk van de leeftijd en massa van de patiënt die wordt 15 behandeld, de bedoelde route van toediening, de bepaalde . verbinding die wordt toegediend, en dergelijke. De bepaling van combinatiedoseringstrajecten en optimale doseringen voor een bepaalde zoogdierpatiënt is binnen het 5 vermogen van de vakman met voordeel van de onderhavige beschrijving.

Farmaceutische preparaten geschikt voor parenterale injectie kunnen farmaceutisch aanvaardbare steriele waterige of niet-waterige. oplossingen, dispersies, suspensies 10 of emulsies, en steriele poeders voor onvoorbereid opnieuw samenstellen tot steriele injecteerbare oplossingen of dispersies omvatten. Voorbeelden van geschikte waterige en niet-waterige dragers, vehikels en verdunningsmid-delen omvatten water, ethanol, polyolen (zoals propyleen-15 glycol, polyethyleenglycol, glycerol, en dergelijke), geschikte mengsels daarvan, plantaardige oliën (zoals olijfolie) en injecteerbare organische esters zoals ethyloleaat. Geschikte vloeibaarheid kan bijvoorbeeld worden gehandhaafd door de toepassing van een bekleding 20 zoals lecithine, door het handhaven van de vereiste deeltjesgrootte in het geval van dispersies, en door de toepassing van. oppervlakteactieve stoffen.

De farmaceutische preparaten volgens de uitvinding kunnen verder adjuvanten omvatten, zoals conserveer-, be-25 vochtigings-, emulgeer- en dispergeermiddelen. Preventie : van verontreinigingen van micro-organismen van de onder havige preparaten kan worden bewerkstelligd met diverse antibacteriële en antischimmelmiddelen, bijvoorbeeld pa-rabens, chloorbutanol/ fenol, sorbinezuur, en dergelijke. 30 Het kan ook gewenst zijn om isotone middelen op te nemen, bijvoorbeeld, suikers, natriumchloride, en dergelijke. Langdurige absorptie van injecteerbare farmaceutische preparaten kan worden bewerkstelligd door de toepassing van middelen in staat tot het vertragen van absorptie, 35 bijvoorbeeld aluminiummonostearaat en gelatine.

t I

4 β 16

Vaste doseringsvormen voor orale toediening omvatten capsules, tabletten, poeders en granules. In dergelijke vaste doseringsvormen wordt de actieve verbinding gemengd met ten minste één inert conventioneel farmaceutisch ex- 5 cipiënt (of drager) zoals natriumcitraat of dicalciumfos- faat, of (a) vulmiddelen of uitbreidingsmiddelen, zoals bijvoorbeeld zetmelen, lactose, sucrose, mannitol en kie- zelzuur; (b) bindmiddelen, zoals bijvoorbeeld carboxyme- thylcellulose, alginaten, gelatine, polyvinylpyrrolidon, 10 sucrose en acacia; (c) humectanten, zoals bijvoorbeeld glycerol; (d) desintegratiemiddelen, zoals bijvoorbeeld agar-agar, calciumcarbonaat, aardappel- of tapiocazet- meel, alginezuur, bepaalde complexen silicaten en natri- umcarbonaat; (e) oplossingsvertragers, zoals bijvoorbeeld 15 paraffine; (f) absorptieversnellers, zoals bijvoorbeeld quaternaire ammonium verbindingen; (g) bevochtigingsmid- delen, zoals bijvoorbeeld cetylalcohol en glycerolmono- stearaat; (h) adsorbentia, zoals bijvoorbeeld kaolien en bentoniet; en/of (i) smeermiddelen, zoals bijvoorbeeld 20 talk, calciumstearaat, magnesiumstearaat, vaste polyethy- leenglycolen, natriumlaurylsulfaat of mengsels daarvan.

In het geval van capsules en tabletten kunnen de dose-* ringsvormen verder buffermiddelen omvatten.

Vaste preparaten van een vergelijkbaar type kunnen 25 ook worden toegepast als vulmiddelen in zachte of hard gevulde gelatinecapsules met behulp van zulke excipiënten als lactose of melksuiker, alsmede hoogmoleculaire poly-ethyleenglycolen, en dergelijke.

Vaste doseringsvormen zoals tabletten, dragees, cap-30 sules en granules kunnen worden bereid met bekledingen en mantels, zoals enterische bekledingen en andere, de vakman algemeen bekend. Deze kunnen ook ondoorzichtig makende middelen omvatten en kunnen ook een zodanige samenstelling hebben dat deze de actieve verbinding(en) afge-35 ven op een vertraagde, onderhouden of geregelde wijze. Voorbeelden van het inbedden van samenstellingen die kun- 17 * · • .1 nen worden toegepast zijn polymere substanties en wassen. De actieve verbinding(en) kan/kunnen ook in micro-inge-kapselde vorm zijn, indien geschikt, met één of meer van de hierboven genoemde excipiënten.

5 Vloeibare doseringsvormen voor orale toediening om vatten farmaceutisch aanvaardbare emulsies, oplossingen, suspensies, stropen en elixers. Behalve de actieve verbindingen kunnen de vloeibare doseringsvormen inerte ver-dunningsmiddelen bevatten, gebruikelijk toegepast in de 10 techniek zoals water of andere oplosmiddelen, oplosbaar makende middelen en emulgatoren, zoals bijvoorbeeld ethylalcohol, isopropylalcohol, ethylcarbonaat, ethylace-taat, benzylalcohol, benzylbenzoaat, propyleenglycol, 1,3-butyleenglycol, dimethylformamide, oliën, in het bij-15 zonder katoenzaadolie, pindaolie, maïskiemolie, olijfolie, castorolie en sesamzaadolie, glycerol, tetrahydro-furfurylalcohol, polyethyleenglycolen en vetzüuresters van sorbitan of mengsels van deze substanties, en dergelijke.

20 Behalve dergelijke inerte verdunningsmiddelen kan het farmaceutische preparaat ook adjuvanten omvatten, zoals bevochtigingsmiddelen, emulgeer- en suspendeermidde-len, zoet-, smaak- en parfumeringsmiddelen.

Suspensies kunnen, behalve de actieve verbinding(en) 25 verder suspendeermiddelen omvatten, zoals bijvoorbeeld geëthoxyleerde isostearylalcoholen, polyoxyethyleensorbi-tol- en sorbitanesters, microkristallijne cellulose, alu-miniummetahydroxide, bentoniet, agar-agar en tragacanth of mengsels van de hiervoor genoemde substanties, en der-30 gelijke.

Preparaten voor rectale of vaginale toediening omvatten bij voorkeur zetpillen, welke kunnen worden bereid door het mengen van een actieve verbinding (actieve verbindingen) met geschikte niet-irriterende excipiënten of 35 dragers zoals cacaoboter, polyethyleenglycol of een zet-pilwas, welke vast zijn bij gebruikelijke kamertempera- » * β ' 18 tuur, maar vloeibaar bij lichaamstemperatuur en derhalve smelten in het rectum of vaginale holte en daardoor het actieve bestanddeel afgeven.

Doseringsvormen voor tópische toediening kunnen zal-5 ven, poeders, sprays en inhaleringsmiddelen omvatten. Het actieve middel (de actieve middelen) wordt/worden gemengd onder steriele omstandigheden met een farmaceutisch aanvaardbare drager, vehikel of verdunningsmiddel, en alle conserveermiddelen, buffers of drijfmiddelen die vereist 10 kunnen zijn.

Een samenstelling die in het algemeen de voorkeur heeft voor het toedienen van PDE 2 remmers, waaronder de verbindingen met formule (I) alsmede de combinaties omvattende PDE 2 remmers en EP2 selectieve receptoragonis-15 ten bij de behandeling van botbreuken, omvat een injec-teerbaar, vloeibaar preparaat dat onderhouden afgifte verschaft op een lokale plaats van injectie door het vormen van een bio-afbreekbaar vast of gel depot, matrix of implantaat. Een voorbeeld van een dergelijk toedienings-20 systeem omvat een langzame afgifte, bio-afbreekbaar poly-meer-gebaseerd afleveringsysteem. Zie bijvoorbeeld Amerikaans gepubliceerde Octrooiaanvrage Nr. 2003-0104031 Al.

Eén dergelijk polymeer-gebaseerd afleveringssysteem omvat in het algemeen een therapeutisch nuttig middel 25 (therapeutisch nuttige middelen) opgelost of gedisper-geerd in een vloeibare, bio-afbreekbare, thermoplastische polymeeroplossing of dispersie in een organisch oplosmiddel. Na injectie van het preparaat diffundeert het organische oplosmiddel weg van de injectieplaats en veroor-30 zaakt dat het polymeer precipiteert of geleert, waardoor het middel (de middelen) worden gevangen in een onderhouden afgiftedepot. Het middel (de middelen) wordt/worden vervolgens afgegeven door diffusie uit en erosie van de polymere matrix. De matrix erodeert langzaam door hydro-35 lyse en verdwijnt uiteindelijk van de plaats van toediening. Het mólecuulgewicht en de concentratie van het po- • 19 • ► •p lymeer kan de in vivo afgifte van het middel (de middelen) regelen alsmede de afbraaksnelheid van de matrix.

Het polymeer-gebaseerde afleveringssysteem verschaft onderhouden afgifte van een actief middel (actieve midde-5 len) in vivo gedurende een onderhouden tijdsperiode met minimale of verminderde uitbarsting bij een patiënt die dit nodig heeft. Een grote uitbarsting van middel(en) zou resulteren in slechts lokale tolerantie tengevolge van lokale effecten (b.v. irritatie) en zou de hoeveelheid 10 middel(en) beschikbaar voor werkzaamheid minimaliseren. Het voordeel dat deze toedieningsmethode biedt, is dat deze de aanvankelijke uitbarsting minimaliseert of vermindert maar nog altijd het middel (de middelen) aflevert op werkzame niveaus voor onderhouden tijdsperioden na een 15 enkelvoudige lokale injectie.

Het polymere systeem wordt bereid door de vloeibare samenstelling in contact te brengen met een geleringsme-dium om de samenstelling te coaguleren of te geleren tot een vaste, microporeuze polymere matrix of een gelpolyme-20 re matrix. De vloeibare samenstelling bevat een thermoplastisch polymeer of copolymeer in combinatie met een geschikt oplosmiddel. De polymeren of copolymeren welke het lichaam van de matrix vormen, zijn in hoofdzaak onoplosbaar, bij voorkeur in hoofdzaak volledig onoplosbaar 25 in water en lichaamsvloeistoffen. De onoplosbaarheid van .het. matrixlichaam maakt mogelijk dat dit fungeert als een enkelvoudige plaats voor de geregelde afgifte van het middel (de middelen). De polymeren of copolymeren zijn ook bio-verenigbaar en bio-afbreekbaar en/of bio-ero-30 deerbaar in het lichaam van een dier, b.v. zoogdier. De bio-afbraak maakt mogelijk dat de patiënt de polymere matrix zodanig metaboliseert en uitscheidt dat er geen noodzaak is voor chirurgische verwijdering. Omdat de vloeibare samenstelling en het polymeersysteem biovere-35 nigbaar zijn, veroorzaakt de invoegingswerkwijze en de aanwezigheid van het polymere systeem in het lichaam geen 20 .

aanzienlijke Weefselirritatie of necrose op de implan-taatplaats. De samenstelling volgens de onderhavige uitvinding wordt toegediend als een vloeibare samenstelling direct in lichaamsweefsels.

5 Geschiktè thermoplastische polymeren voor. opname in de vaste matrix van het geregelde-afgiftesysteem zijn vaste stoffen farmaceutisch verenigbare en bio-afbreekbaar door cellulaire werking en/of door de werking van lichaamsvloeistoffen. Voorbeelden van geschikte ther-10 moplastische polymeren omvatten polyesters van diolen en dicarbonzuren of van hydroxycarbonzuren, zoals polylacti-den, polyglycoliden en copolymeren daarvan. Met meer voorkeur omvat het polymeer het copolymeer poly-melk-co-glycolzuur (afgekort PLGH) dat, na hydrolyse, melk- en 15 glycolzuur produceert. De uitbarsting van afgifte van dit copolymeer kan verder worden geminimaliseerd door de toevoeging van polyethyleenglycol (PEG) om het PEG-eind-gekapte PLGH te vormen.

Voorkeursmaterialen omvatten polylactiden, polygly-20 coliden en copolymeren daarvan. Deze polymeren kunnen met voordeel worden toegepast in het polymeersysteem gedeeltelijk omdat deze uitstekende bioverenigbaarheid vertonen. Ze produceren weinig of geen weefselirritatie, ontsteking, necrose of toxiciteit. In aanwezigheid van water 25 produceren de polymeren melk- en glycolzuur, respectievelijk, welke gemakkelijk worden gemetaboliseerd. De polylactiden kunnen ook glycolidemonomeer omvatten om de resulterende polymere afbraak te versterken. Deze polymeren hebben ook de voorkeur, omdat deze de snelheid van 30 afgifte van middel(en) uit het polymere systeem effectief regelen en omdat deze resulteren in de lokale retentie van het middel (de middelen) op de plaats van de plaats van toediening.

De oplosbaarheid of mengbaarheid van een thermoplas-35 tisch polymeer in het organische oplosmiddel van het preparaat zal variëren afhankelijk van factoren zoals kris- 21 tallinitëit, hydrofiliciteit, capaciteit voor waterstof-binding en het molecuulgewicht van het polymeer. Dientengevolge worden het molecuulgewicht en de concentratie van het polymeer in het oplosmiddel bij gesteld om gewenste 5 mengbaarheid te bereiken, alsmede een gewenste afgifte-snelheid voor het opgenomen middel (de opgenomen middelen) .

De vloeibare samenstelling van thermoplastisch polymeer, oplosmiddel en het middel (de middelen) omvat een 10 stabiele vloeibare substantie. Een homogene oplossing van het middel (de middelen) in een organisch oplosmiddel re-! sulteert bij voorkeur. Het thermoplastische polymeer is in hoofdzaak oplosbaar in het organische oplosmiddel. Na plaatsing van de vloeibare samenstelling in het lichaam 15 dissipeert het oplosmiddel en stolt het of geleert het polymeer om het polymere systeem te vormen met het middel (de middelen) in een vaste of gelpolymere matrix.

Voor bepaalde.voorkeurspolymeren wordt het molecuulgewicht van het polymeer of copolymeer bijgesteld tot in 20 het een traject van ongeveer 0,2 tot ongeveer 0,4 inherente viscositeit I.V. in deciliter/g) voor effectieve onderhouden afgifte van de botgroei bevorderende verbinding. De typerende snelheid van afgifte van het opgenomen middel (de opgenomen middelen) treedt op bij een I.V. van 25 ongeveer .0,2 (ongeveer 8.000 tot ongeveer 16.000 molecuulgewicht) of ongeveer 0,3 (ongeveer 23.000 tot ongeveer 445.000 molecuulgewicht), maar kan variëren afhankelijk van de bepaalde bestanddelen van de samenstelling. Voor de meeste systemen heeft het de voorkeur om het mo-30 lecuulgewicht van het polymeer bij te stellen tot ongeveer 0,2 I.V. voor een effectieve onderhouden afgifte van het middel (de middelen).

Voor een poly(DL-lactide) of een lactide-co-glyco-lide polymeersysteem is het gewenste molecuulgewichtstra-35 ject ongeveer 0,2 tot ongeveer 0,4 I.V., waarbij een I.V. van ongeveer 0,2 de voorkeur heeft. Het molecuulgewicht 22 . · van een polymeer kan worden gemodificeerd met behulp van conventionele methoden.

Commercieel verkrijgbare thermoplastische polymeren met bijzondere voorkeur omvatten de volgende: PLGH copo-5 lymeer met 1:1 verhouding van melk- en glycolzuur met een inherente viscositeit van ongeveer 0,2 dl/g (commercieel verkrijgbaar bij Boehringer Ingelheim als Copolymer RESOMER® RG 502 H) (ongeveer 12.000 molecuulgewicht); PLGH copolymeer met 1:1 verhouding van melk- en glycolzuur met 10 een inherente viscositeit van ongeveer 0,3 dl/g (commercieel verkrijgbaar bij Boehringer Ingelheim als Copolymer RESOMER® RG 503 H) (ongeveer 37.000 molecuulgewicht); PLGH copolymeer met 1:1 verhouding van melk- en glycolzuur met een inherente viscositeit van ongeveer 0,4 dl/g (com-15 mercieel verkrijgbaar bij Boehringer Ingelheim als Copolymer RESOMER® RG 504 H) (ongeveer 47.000 molecuulgewicht) en polyethyleenglycol (PEG) eind-gekapt PLGH copolymeer met 1:1 verhouding van melk- en glycolzuur met een inherente viscositeit van ongeveer. 0,79 dl/g (commercieel 20 verkrijgbaar bij Boehringer Ingelheim als PLG-PEG) (ongeveer 52.000 molecuulgewicht).

De oplosmiddelen toegepast bij de thermoplastische preparaten zijn bij voorkeur farmaceutisch aanvaardbaar, bio-verenigbaar en zullen dissiperen in lichaamsvloeistof 25 in situ zodanig dat deze kunnen worden geclassificeerd als hebbende een oplosbaarheid in water variërend van zeer oplosbaar tot onoplosbaar. Bij voorkeur veroorzaken deze weinig of geen weefselirritatie of necrose op de plaats van injectie en implantatie. Bij voorkeur zal het 30 oplosmiddel ten minste een minimale mate van wateroplos-baarheid hebben. Als het organische oplosmiddel wateron-oplosbaar of minimaal oplosbaar in water is, zal het oplosmiddel langzaam dispergeren uit de vloeibare polymere samenstelling. Het resultaat zal een implantaat zijn dat, 35 tijdens het verloop van de levensduur ervan, variërende hoeveelheden overblijvend oplosmiddel kan bevatten. Bij 23 • r ι - ι voorkeur heeft het organische oplosmiddel een matige tot hoge mate van wateroplosbaarheid zodat dit gemakkelijk uit de polymere samenstelling in lichaamsvloeistoffen zal dispergeren. Met de meeste voorkeur, dispergeert het op-5 losmiddel snel uit de polymere samenstellingen om snel een vast implantaat te vormen. Gelijktijdig met de dispersie van oplosmiddel coaguleert of geleert het thermoplastische polymeer tot het vaste polymere systeem. Bij voorkeur veroorzaakt, als het thermoplastische polymeer 10 coaguleert, de oplosmiddeldispersie porievorming in het polymeersysteem. Als resultaat zal de vloeibare samenstelling die thermoplastisch polymeer, oplosmiddel en middel(en) bevat een poreus vast polymeersysteem vormen. Ook kan, als het oplosmiddel enigszins wateroplosbaar is, 15 of wateronoplosbaar is, de oplosmiddeldispersie resulteren in de vorming van een vast poreus implantaat, of als enig oplosmiddel met het implantaat blijft, kan het resultaat vorming van een gèlimplantaat met weinig of geen poriën zijn.

20 Geschikte oplosmiddelen omvatten die vloeibare orga- nische verbindingen die voldoen aan de voorgaande criteria. Een oplosmiddel dat in het algemeen de voorkeur heeft omvat N-methyl-2-pyrrolidon (NMP).

De oplosmiddelen voor de thermoplastisch polymeer 25 vlpeibare samenstellingen worden gekozen voor verenigbaarheid en geschikte oplosbaarheid van het polymeer en oplosmiddel. Laagmoleculaire thermoplastische, polymeren zullen gewoonlijk gemakkelijker oplossen in de oplosmiddelen dan hoogmoleculaire polymeren. Als resultaat ver-.30 schilt de concentratie van een thermoplastisch polymeer opgelost in de diverse oplosmiddelen afhankelijk van het type polymeer en het molecuulgewicht ervan. Omgekeerd zullen de hoogmoleculaire thermoplastische polymeren de neiging hebben sneller te coaguleren, geleren of stollen 35 dan de zeer laagmoleculaire thermoplastische polymeren. Bovendien hebben de hoogmoleculaire polymeren de neiging 4 » ' 24 hogere oplossingsviscositeiten·te geven dan de laagmole-culaire materialen.. Derhalve worden, voor voordelige in-jectie-efficiëntie, behalve voordelige afgiftesnelheid, het molecuulgewicht en de concentratie van het polymeer 5 in het oplosmiddel geregeld.

Na vorming van het po.lymeersysteem uit de vloeibare samenstelling wordt/worden het middel (de middelen) opgenomen in de polymeermatrix. Na invoegen van de vloeibare samenstelling om het polymere systeem te vormen, wordt/ 10 worden het middel (de middelen) uit de matrix afgegeven in de aangrenzende weefsels of vloeistoffen door diffusie en afbraakmechanismen. Manipulatie van deze mechanismen kan ook afgifte van het middel (de middelen) in de omgeving met een geregelde snelheid beïnvloeden. Bijvoorbeeld 15 kan de polymere matrix worden geformuleerd om af te breken, nadat een effectieve en/of aanzienlijke hoeveelheid van het middel (de middelen) uit de matrix is afgegeven. Derhalve kan afgifte van het middel (de middelen) uit de matrix worden gevarieerd door, bijvoorbeeld, de oplos-20 baarheid van het middel (de middelen) in water, de verdeling van de botgroei bevorderende verbinding in de matrix, of de grootte, vorm, porositeit, oplosbaarheid en bio-afbreekbaarheid van de polymeermatrix, onder andere factoren. De afgifte van het middel (de middelen) uit de 25 matrix wordt geregeld ten opzichte van de inherente snelheid ervan door het variëren van het polymeer molecuulgewicht om een gewenste duur en snelheid van afgifte te verschaffen. .

Bijvoorbeeld omvat een voorkeursdoseringsvorm van 30 het middel (de middelen) een lyofiel dat opnieuw moet worden samengesteld met een oplossing van PLGH in NMP voorafgaande aan toediening. De doseringsvorm, bestaande uit de gelyofiliseerde verbinding in één injectiespuit (injectiespuit A) en een oplossing van PLGH in NMP in een 35 tweede injectiespuit (injectiespuit B) is bekend als het A/B samenvoegsysteem. De inhoud van beide injectiespuiten I · 25 wordt met elkaar vermengd onmiddellijk voorafgaande aan dosisaflevering op of nabij, de plaats. Na opnieuw samenstellen wordt de inhoud overgebracht in een van maatverdeling voorziene doseerinjectiespuit voor aflevering. De 5 toegediende doseringsvormen zullen éen oplossing vormen en zullen resulteren in de dispersie van de verbinding van PLGH in NMP in gewenste sterkten van, bijvoorbeeld, 5 en 50 mgA/ml (mgA/ml betreft het vrije zuurequivalent van de natriumzoutvorm van het middel (de middelen)) . De do-.10 seringsvorm is een parenterale (b.v. subcutane, intramus-culaire of intramedulaire) onderhouden afgifte injectie voor lokale toediening. Deze verbinding in een langzame afgifte polymeermatrix (depotinjectie) is ontworpen voor toediening op of nabij een plaats, en is niet bedoeld 15 voor intraveneuze toediening. Om adequate opslag levens-duurstabiliteit voor de doseringsvorm te verschaffen, kan een 2-injectiespuitsysteem (A/B), zoals hierboven beschreven, worden toegepast, bij voorkeur met de natriumzoutvorm van de verbinding. Een éénfaseformülering, bij. 20 voorkeur met de vrije zuurvorm van.de verbinding, is een alternatieve, formulering die de voorkeur heeft. Gebaseerd op het middel (de middelen) en polymeerstabiliteit kan steriele filtratie van het middel (de middelen) en bestraling van de polymeeroplossing de voorkeur hebben voor 25 het bereiden.van. een stabiel steriel product. In één uitvoeringsvorm kan de doseringvorm worden bereid en verscheept als afzonderlijke aluminium zakjes die injectiespuiten bevatten gevuld met de lyofiele vorm van het middel (de middelen) in één zakje en de polymeeroplossing in 30 het andere zakje. Afleveringshouders, systemen en werkwijzen voor de lyofilisatie van botgroei bevorderende verbindingen wordt beschreven in gepubliceerde PCT Internationale Octrooiaanvrage Publicatie Nr. WO 01/73363. Andere werkwijzen van toediening omvatten lokale toediening 35 door injectie aan een bepaalde plaats van aflevering door een katheter aan een plaats. Additionele voorbeelden kun- i * 26 nen worden gevonden in Amerikaanse Voorlopige Aanvrage Nr. 60/335.156, ingediend op 30 november 2001.

De beschrijvingen van alle hierin beschreven Amerikaans Octrooischriftnummers worden door verwijzing in hun 5 geheel hierin opgenomen.

De verbindingen met formule (I), de prodrugs daarvan en de farmaceutisch aanvaardbaar zouten van de verbindingen en prodrugs kunnen worden bereid door de illustrerende synthetische routes beschreven in de onderstaande 10 Schema's en Voorbeelden, alsmede met behulp van andere conventionele organische preparatieve werkwijzen, bekend of duidelijk in het licht van de onderhavige beschrijving, voor de vakman in de relevante techniek. De werkwijzen beschreven in de onderhavige Schema's zijn bedoeld 15 voor illustreren van de onderhavige uitvinding en dienen niet op enigerlei wijze te worden geconstrueerd als beperkingen daarop.

Schema 1 20 STAP 1 0(Ci-C6)alkyl _ 0(CrC6)a!kyl /=\ 9' Η9"Λ_/~R1 frS ·—--w ► OfS r2 E,0H;RT ΛΑΑα 30 m m STAP 2

H2N-(CH2)„-X-Y

(VII) (VI) -► (I)

DIPEA; DMSO; 120° C

35 27 * k * ι

In Schema 1, Stap 1 wordt 2,4-dichloor-pyrido[2,3- d]pyrimidine (IV) in reactie gebracht met een geschikt gesubstitueerd benzylamine (V) in aanwezigheid van een tri-gesubstitueerde aminebase, zoals triethylamine (TEA) 5 of diisopropylethylamine (DIPEA) of een aromatische base zoals pyridine. De reactie wordt in het algemeen bewerkstelligd in een polair alcoholisch oplosmiddel, zoals methanol (MeOH), ethanol (EtOH) of isopropanol (IPA), bij een temperatuur variërend van ongeveer 0°C tot ongeveer 10 100°C. Bij voorkeur wordt de reactie uitgevoerd in aanwezigheid van DIPEA in ethanol bij ongeveer kamertemperatuur (RT) . In Stap 2 wordt het resulterende condensatie-product (VI) vervolgens in reactie gebracht met een geschikt gesubstitueerd amine (VII) in aanwezigheid van een 15 tri-gesubstitueerde aminebase, zoals TEA of DIPEA of een aromatische base, zoals pyridine om een verbinding (I) te leveren. De reactie wordt in het algemeen bewerkstelligd in een polair aprotisch oplosmiddel, zoals N,N-dimethyl-formamide (DMF), dimethylsulfoxide, (DMSO), N-methylpyrro-20 lidinon of sulfolaan, bij een verhoogde temperatuur variërend van ongeveer 60°C tot ongeveer 250°C. Bij voorkeur wordt de reactie bewerkstelligd in aanwezigheid van DIPEA in DMSO tussen ongeveer 90°C tot ongeveer 120°C.

Alhoewel Schema 1 is afgebeeld als een afzonderlijke 25 tweestapswerkwijze waarbij tussenproduct (VI) wordt geïsoleerd en vervolgens in reactie gebracht met amine (VII), is het ook geschikt gevonden om (IV) in situ te bereiden en te laten reageren met amine (VII) in een enkelvoudige stap. In een dergelijke werkwijze wordt een 30 aprotisch oplosmiddel, bij voorkeur DMSO toegepast. Deze reactie wordt ook bewerkstelligd in aanwezigheid van DIPEA in DMSO bij een temperatuur tussen ongeveer 90°C tot ongeveer 120°C, 28

* I

I (

PREPARATIEF EXPERIMENTEEL

Tenzij anderszins opgemerkt, werden alle toegepaste reagentia commercieel verkregen. Tenzij, anderszins opge-5 merkt hebben de volgende experimentele afkortingen de aangegeven betekenissen:.

AcGH - azijnzuur Dec - ontleding DMAP - 4-dimethylaminopyridine 10 EtOAc - ethylacetaat hr - uur LAH - lithiumaluminiumhydride min - minuut (minuten) MS - massaspectrometrie.

15 NMR - kernmagnetische resonantie THF - tetrahydrofuran .

p-TsOH -p-tolueensulfonzuur

Bereiding 1 20 (2-Chloor-pyrido[2,3-d]pyrimidin-4-yl)-(3,5-dimethoxy-benzyl)-amine

Aan een geroerde oplossing van 2,4-dichloorpyrido-25 [2,3-]pyrimidine) 1,3 g, 6,7 mmol) en 3,5-dimethoxy-benzylamine (1,1 g, 6,7 mmol) in 30 ml EtOH werd bij kamertemperatuur TEA (4 ml, 28,7 mmol) toegevoegd. Een pre-cipitaat werd gevormd dat werd afgefiltreerd en gewassen met koude EtOH gevolgd door hexanen en gaf 1,8 g van de 30 titelverbinding (82%) als een vaste stof. Smeltpunt 185°C (ontl.).

1H-NMR (DMSO-d6) δ: 9,5 (t, 1H) , 8,9 (dd, 1H) , 8,7 (dd, 1H), 7,5 (m, 1H), 6,5 (d, 2H) , 6,4 (t, 1H) , 4,6 (d, 2H) , .

3,7 (s, 6H). MS (m/z, %): 331 (100).

35 29

Bereiding 2 * J.

• .

(2-chloor-pyrido[2,3-d]pyrimidin-4-yl) - (3f 4-dimethoxy-benzyl)-amine 5

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die beschreven in Bereiding 1 met behulp van geschikte uitgangsmaterialen.

1H-NMR (DMSO-de) δ: 9,5 (t, 1H), 8,9 (dd, 1H), 8,7 (dd, .

10 1H), 7,0 (s, 1H), 6,9 (d, 2H) , 4,6 (d, 2H), 3,7 (s, 3H), 3,7 (s, 3H). MS (m/z, %): 331 (100).

Bereiding 3 15 2-(4-Aminomethyl-fenyl)-propan-2-ol

Aan een geroerde oplossing van 4-(1-hydroxy-l-methyl-ëthyl)-benzonitril (2,0 g, 12,4 mmol) in 30 ml THF werd bij 0°C druppelsgewijs 1,0. N LAH in THF (26 ml, 26,1 , 20 mmol) toegevoegd. Men liet het mengsel opwarmen tot kamertemperatuur, en het werd vervolgens 0 min. onder te-rugvloeikoeling gekookt. Het mengsel werd vervolgens afgekoeld tot 0°C en geblust met 5 ml MeOH druppelsgewijs toegevoegd. Het mengsel werd verdund met 300 ml chloro-25 form en gewassen met water (1 x 80 ml)., gedroogd boven magnesiumsulfaat en geconcentreerd en gaf 1,9 g (95%) van de titelverbinding als een vaste stof.

1H-NMR (CDC13) δ: 7,45 (d, 2H) , 7,26 (d, 2H) , 3,83 (s, 2H) , 1,57. (s, 6H) . GC-MS (m/e, %) : 164 (M+, 15), 150 30 (80), 132 (75), 106. (100).

Bereiding 4 30 k , » · 3-(4-Acetyl-fenyl)-propionitril 5 Een mengsel van 4-(2-broomethyl) acetofenon ..(2-, 0 g, 8.8 mmol) en KCN (0,6 g, 8,8 mmol) in 30 ml DMSO werd 4 uur verwarmd tot 75°C. Het mengsel werd verdund met water en geëxtraheerd met EtOAc. Het organische extract werd . achtereenvolgens gewassen met water en pekel, gedroogd en 10 geconcentreerd en gaf een olie. Chromatografie over sili-cagel eluerend met 40% EtOAc/hexanen gaf 0,8 g van een olie.

1H-NMR (CD30D) δ: 7,9 (d, 2H) , 7,4 (d, 2H), 3,3 (t, 2Hj , 2.8 (t, 2Ή) , 2,6 (s, 3H) . GC-MS (m/e, %) : 173 (M4, 20), 15158 (100).

Bereiding 5 3-[4-(1-Hydroxy-l-methyl-ethyl)-fenyl]-propionitril 20

Aan een geroerde oplossing van 3 M methylmagnesium-chloride in THF (3^3 ml, 9,8 mmol), verder verdund met 10 ml THF, werd druppelsgewijs een oplossing van 3-(4-acetyl-fenyl)-propionitril (0,7 g, 3,9 mmol) in 10 ml THF 25 bij -40°C toegevoegd. Men liet het reactiemengsel langzaam gedurende de nacht opwarmen tot kamertemperatuur, dit werd afgekoeld tot 0°C, vervolgens geblust met waterige AcOH druppelsgewijs toegevoegd. Het reactiemengsel werd verdund en geëxtraheerd met EtOAc. Het organische 30 extract werd achtereenvolgens gewassen met water en pekel, gedroogd en geconcentreerd en gaf 0,8 g van een olie.

XH-NMR (CD3OD) δ: 7,4 (d, 2H) , 7,2 (d, 2H) , 2,9 (t, 2H) , 2,7 (t, 2H), 1,5 (s, 6H) . GC-MS (m/e, %) : 189 (M+, 5), 35 174 (100).

4 · ., * 31

Bereiding 6 2- [4- (3-Aminopropyl)-fenyl)-propan-2-ól 5 Aan een geroerde oplossing van 1 M LAH in THF,- ver der verdund met 20 ml THF, werd bij 0°C druppelsgewijs een oplossing van 3-[4-(1-hydroxy-l-methyl-ethyl)-fenyl]-propionitril (0,8 g, 4,0 mmol) in 10 ml THF toegevoegd. Men liet de reactie langzaam opwarmen tot kamertempera-10 tuur, vervolgens werd deze 4 uur onder terugvloéikoeling gekookt. Het reactiemengsel werd vervolgens afgekoeld tot 0°C en geblust met MeOH langzaam druppelsgewijs toegevoegd. Het mengsel werd verdund met chloroform en gewassen met water. Het organische extract werd gefiltreerd 15 door diatomeeënaarde, het filtraat geconcentreerd, vervolgens verdund met ethylacetaat, gedroogd en geconcentreerd en gaf 0,5 g van een olie.

1H-NMR (CD30D) δ:. 7,4 (d, 2H), 7,1 (d, 2H), 2,6 (m, 4H), 1,7 (m, 2H), 1,5 (s, 6H). MS (m/e, %): 194 (M+ + 1, 100), 20 176 (90) .

Bereiding 7 3- [4-(2-Methyl-[1,3]dioxolan-2-yl)-fenyl]-propionitril.

25

Een mengsel van 3-(4-acetylfenyl)propionitril (2,2 g, 13 mmol), ethyleenglycol (2,8 ml, 5l mmol) en een katalytische hoeveelheid p-TsOH (-200 mg) in 100 ml tolueen werd 18 uur onder terugvloeikoeling gekookt over een De-30 an-Stark val. Het mengsel werd verdund met EtOAc en achtereenvolgens gewassen met 5% natriumbicarbonaatoplos-sing, water en pekel, gedroogd (MgSCu) en geconcentreerd en gaf een olie. Chromatografie over silicagel eluerend met EtOAc/hexaanoplossing gaf 2,5 g van een olie.

• » 32 ^H-NMR (CD3OD) δ: 7,4 (d, 2H) , 7,2 (d, 2H) , 4,0 (m, 2H) , 3.8 (m, 2H) , 2,9 (t, 2H) , 2,6 (t, 2H), 1,6 (s, 3H) . MS (m/e, %): 216 (M+ - 1, 1), 202 (100).

5 Bereiding 8 2-[4-(2-Methyl[1,3]dioxolan-2-yl)-fenyl)-propylamine

Aan een geroerde oplossing van 3-[4-(2-methyl-10 [1,3]dioxolan-2-yl)-fenyl]-propionitril (2,4 g, 11 mmol) in 30 ml THF werd druppelsgewijs een oplossing van 1 M LAH in THF toegevoegd. Men liet het mengsel opwarmen tot kamertemperatuur, vervolgens werd dit 1 uur onder terug-vloeikoeling gekookt. Het mengsel werd afgekoeld tot 0°C, 15 vervolgens geblust met MeOH druppelsgewijs toegevoegd. Het mengsel werd verdund met chloroform en gewassen met water. De resulterende suspensie werd gefiltreerd door diatomeeënaarde en de filtraatlagen gescheiden. Het organische extract werd gedroogd boven MgSO<i en geconcen-20 treerd en gaf 2,4 g van een olie.

1H-NMR (CDCI3) δ: 7,4 (m, 2H), 7,1 (d, 2H) , 4,0 (m, 2H) , 3.8 (m, 2H) , 2,7 (m, 2H) , 2,6 (m, 2H) , 1,7 (m, 2H), 1,6 (s, 3.H) . MS (m/e, %): 221 (M+, 10), 206 (60), 189 (100).

25 Bereiding 9 2,2,2-Trifluor-l-(4-joodfenyl)-ethanol

Aan een geroerde oplossing van 4-joodbenzaldehyde 30 (2,0 g, 8,6 mmol) in 20 ml THF werd bij kamertemperatuur 0,5 M oplossing van trimethyl(trifluormethyl)silaan in THF (19 ml, 9,5 mmol) toegevoegd, gevolgd door tetra- butylammoniumfluoride (112. mg, 0,4 mmol). Het mengsel werd gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd, ge-35 goten in 0,1 N chloorwaterstofzuur én geëxtraheerd met EtOAc. Het organische extract werd op zijn beurt gewassen , 33 1 9 me water en pekel, gedroogd (MgS04) en geconcentreerd en gaf 2,6 g van een olie.

^H-NMR (CDCI3) 5: 7,7 (m, 2H), 7,2 (d, 2H), 5,0 (m, 1H) , 2,7 (d, 1H). MS (m/e, %): 302 (M+, 100), 233 (100).

• 5

Bereiding 10 2-{3-[4-(2,2,2-Trifluor-l-hydroxy-ethyl)-fenyl]-prop-2-.. ynyl)-isoindool-1, 3-dion 10

Aan een geroerde suspensie van 2,2,2-trifluor-l-(4-joodfenyl)-ethanol (2,6 g, 8,5 mmol), N-propargyl- ftalimide (1,6 g, 8,5 mmol), dichloorbis(trifenylfos-fine)palladium (298 mg, 0,43 mmol) en koper(I)jodide (82 .15 mg, 0,43 mmol) in 20 ml THF werd bij kamertemperatuur 5 ml TEA toegevoegd. Het mengsel werd kort ontlucht onder een stroom stikstof en vervolgens 6 uur onder terugvloei-koeling gekookt. Het mengsel werd verdund met chloroform, gewassen met water, gedroogd boven MgS04 en geconcen- 20 treerd en gaf een vaste stof. De vaste stof werd gewreven met EtOAc en leverde 2,2 g van een vaste stof.

^H-NMR (CDCI3) δ: 7,9 (m, 2H) , 7,7 (m, 2H) , 7,5 (d, 2H) , 7,4 (d, 2H), . 5,0 (m, 1H), 4,7 (s, 2H) . MS (m/e, %) : 359 (M+, 100) . · 25

Bereiding 11 2-{3-[4-(2,2,2-Trifluor-l-hydroxy-ethyl)-fenyl]-pröpyl)-isoindool-1,3-dion 30

Een mengsel van 2-{3-(4-(2,2,2-trifluor-l-hydroxy-ethylj-fenyl]-prop-2-ynyl}-isoindool-1,3-dion (2,2 g, 6,1 mmol) en 10% Pd/C (220 mg) in 150 ml EtOH en 150 ml THF werd bij kamertemperatuur in een Parr-apparaat 2 uur ge-35 schud onder 50 psi waterstof. Een additionele 220 mg 10% Pd/C werd toegevoegd en het mengsel bij kamertemperatuur * . . β 34 gedurende een additionele 2 uur geschud onder 50 psi waterstof. Een additionele 220 mg 10% Pd/C werd vervolgens toegevoegd en het mengsel bij kamertemperatuur gedurende de nacht geschud onder psi waterstof. Het méngsel werd 5 gefiltreerd door diatomeeënaarde en het filtraat geconcentreerd om een olie te geven. Chromatografie over sili-cagel eluerend met EtOAc/hexanen leverde 1,8 g van een olie.

1H-NMR (CDC13) δ: 7,8 (m, 2H), 7,7 (m, 2H) , 7,3 (d, 2H), 10 7,2 (d, 2H) , 4,9 (m, 1H) , 3,7 (t, 2H) , 2,7 (t, 2H) , 2,0 (m, 2H) . MS (m/e, %) : 363 (M+, 15), 345 (35), 325 (50), 161 (100).

Bereiding 12 15 .

1-[4-(3-Aminopropyl)-fenyl]-2,2,2-trifluorethanol

Aan een geroerde suspensie van 2-{3-[4-(2,2,2-tri-fluor-l-hydroxyethyl-fenyl]-propyl}-isoindool-1,3-dion (1,8 g, 5,0 inmol), in 50 ml Me OH werd bij kamertempera-20 tuur hydrazinehydraat (0,46 ml, 15,0 mmol) toegevoegd. I

Het mengsel werd 18 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd gefiltreerd en het filtraat geconcentreerd en gaf een olie. De olie werd gewreven met chloroform, gefiltreerd en het filtraat geconcentreerd en gaf 25 1,0 g van een olie.

1H-NMR (CDCI3) δ: 7,3 (d, 2H) , 7,2 (d, 2H) , 5,0 (m, 1H) , 2,6 (m, 2H), 2,5 (m, 2H) , 1,6 (m, 2H) . MS (m/e, %) : 363 (M\ 10) , 216 (100) .

35 * * »

Bereiding 13

Trifluormethaansulfonzuurbenzo[1,2,5]oxadiazol-5-ylester.

5 Aan een geroerde oplossing van 5-hydroxybenzofurazan (1,8 g, 13,0 mmol), TEA (2,4 ml, 33,0 mmol) en DMAP (79 mg, 7,0 mmol) in 40 ml dichloormethaan werd bij -78°C druppelsgewijs een oplossing van trifluormethaansulfon-zuuranhydride (2,8 ml, 17,0 mmol) in .10 ml dichloorme-10 thaan toegevoegd. Men liet het mengsel langzaam gedurende 3 uur opwarraen tot kamertemperatuur, dit werd verdund me dichloormethaan en gewassen met water. Het organische extract werd gedroogd en geconcentreerd en gaf een olie. Chromatografie over silicagel eluerend met dichloorme-15 thaari leverde 3,1 g van een olie.

1H-NMR (CDC13) δ: 8,09 (dd, 1H), 7,8 (dd, 1H), 7,3 (dd, 1H). MS (m/e, %): 268 (M+, 60), 146 (60), 69 100),

Bereiding 14 20 2-(Benzo[1,2,5]oxadiazol-5-yl-prop-2-ynyl)-isoindool-1,3-dion

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan 25 die in Bereiding 10 met behulp van geschikte uitgangsmaterialen.

1H-NMR (CDCI3) δ: 8,2 (s, 1H) , 8,0 (dd, 1H), 7,9 (m, 2H) , 7,8 (m, 2H), 7,5 (dd, 2H) , 4,7 (s, 2H). MS (m/e, %): 303 (M\ 100) ..

30 -.36

Bereiding 15 • * .

2-(3-Benzo[1,2,5]oxadiazol-5-yl-propyl)-isoindool-1,3-dion 5

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan dié in Bereiding. 11 met behulp, van geschikte uitgangsmaterialen.

l'H-NMR (CDC13) δ: 7,8 (m, 2H) , 7,7 (m, 3H) , 7,6 (s, 1H) , 10 7,2 (m, 1H), 3,8 (t,.3H), 2,8 (t, 2H) , 2,1 (m, 2H) . MS (m/e, %): 307 (M+, 40), 290 (30), 272 (20), 160 (100).

Bereiding 16 15 3-Benzo[1,2,5]oxadiazol-5-yl-propylamine

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 12 met behulp van geschikte uitgangsma- i terialen. ί 20^H-NMR (DMSO-de) δ: 7,9 (m, 2H) , 7,7 (m, 1H) , 7,5 (m, 1H) , 2,7 (m, 2H) , 2,5 (m, 2H) , 1,7 (m, 2H) . MS (m/e, %) : 177 . (M+, (40), 160 (100).

Bereiding 17 25 .Trifluormethaansul·fonzuurbenzothiazol-6-ylester !

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan j die in Bereiding 13 met behulp van geschikte uitgangsma- | 30 terialen. ί XH-NMR (CDCI3) δ: 9,1 (s, 1H) , 8,2 (d, 1H) , 7,9 (d, 1H) , 7,4 (dd, 1H). MS (m/e, %): 283 (M+, 80), 150 (100).

. 37 * -h

Bereiding 18 2-(3-Benzo[ly 2,5]oxadiazol-5-yl-propyl)-isoindool-1,3-. dion • 5

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 10, waarbij trifluormethaansulfonzuur-benzothiazol-6-ylester (Bereiding 17) werd gesubstitueerd voor 2,2,2-trifluor-l-(4-joodfenyl)-ethanol.

10 1H-NMR (de-DMSO) δ: 9,4 (s, 1H), 8,3 (d, 1H), 8,0 (d, 2H),

7,9 (xn, 1H), 7,8 (m, 2H) , 7,5 (dd, 1H) , 4,6 (s, 2H) . MS

(m/e, %): 318 (M+, 100).

Bereiding 19 15 2- (3-Benzothiazol-6-yl-propyl)-isoindool-1,3-dion

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 11, waarbij 2-(3-benzathiazol-6-yl-prop-20 2-ynyl)-isoindool-1,3-dion (Bereiding 19) werd gesubstitueerd voor 2-{3-[4-(2,2,2-tri£luor-l-hydroxyethyl)- fenyl]-prop-2-ynyl}-isoindool-1,3-dion (Bereiding 10). 1H-NMR (CDC13) δ: 8,9 (s, 1H) , 8,0 (d, 1H) , 7,8 (m, 2H) , 7,7 (m, 2H) , 7,3 (dd, 1H), 3,8 (t, 2H), 2,8 (t, 2H) , 2,1 25 (m, 2H). MS (m/e, %): 322 (M+, 80), 174 (40), 162 (100).

Bereiding 20 3- Benzothiazol-6-yl-propylamine 30

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 12,waarbij 2-(3-benzathiazol-6-yl-prop-2-ynyl)-isoindool-1,3-dion (Bereiding 20) werd gesubstitueerd voor 2-{3-[4-(2,2,2-trifluor-l-hydroxyethyl)- 35 fenyl]-prop-2-ynyl}-isoindool-l,.3-dion (Bereiding 11).

MS (m/e, %): 192 (M+, .20), 175 (100):.

Bereiding 21 38 2-(3-Joodfenyl)-2-methyl-[1,3]dioxolaan 5

Een mengsel van 3-joodacetofenon. (3,0 g, 12 mmol), ethyleenglycol (2,7 ml, 48 mmol). en p-tolueênsulfonzuur (30 mg) in 50 ml tolueen werd 18. uur onder een Dean-Stark val onder terugvloeikoeling gekookt. Het . mengsel werd 10 verdund met EtOAc en achtereenvolgens gewassen met 5% natriumbicarbonaat oplossing, water en pekel, gedroogd boven MgS04 en geconcentreerd en gaf een olie. Chromatogra-fie over silicagel eluerend met EtOAc/hexanen gaf 3,1 g van een olie.

.15-lH-NMR (CDC13) δ: 7,8 (m, 1H), 7,6 (dd, 1H) , 7,4 (dd, 1H) , .7,0 (m, 1H), 4,0 (m, 2H) , .3,7 (m, 2H) , 1,6 (s, 2H) . MS

(m/e, %) : 290 (M+, 20) , 275 (100).

Bereiding 22 20 2-{3-[3-(2-Methyl-[1,3]dioxolan-2-yl)-fenyl]-prop-2-ynyl}-isoindool-1,3-dion

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan 25 die in Bereiding 10, waarbij 2-(3-joodfenyl)-2-methyl- [1,3]dioxolaan (Bereiding 21) werd gesubstitueerd voor (2,2,2-trifluor-l-(4-joodfenyl)-ethanol.

1H-NMR (CDCI3) δ: 7,9 (m, 2H) , 7,7 (m, 2H), 7,5 (s, 1H) , 7,4 (m, 1H), 7,3 (m, 1H) , 7,2 (m, 1H), 4,7 (s, 2H) , 4,0 30 (m, 2H) , 3,7 (m, 2H) , 1,6 (s, 6H) . MS (m/e, %) : 347 (M+, 15), 332 (100).

Bereiding 23 39 « , • ft 2- {3-[3-(2-methyl-[1,3]dioxolan-2-yl)-fenyl]-propyl}-isoindool-Γ, 3-dion 5

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 11, waarbij 2-{3[3-(2-methyl-[l,3]-dioxolan-2-yl)-fenyl]-prop-2-ynyl)-isoindool-1,3-dion (Bereiding 22) werd gesubstitueerd voor 2-(3-(4-(2,2,2-10 trifluor-l-hydroxyethyl)-fenyl]-prop-2-ynyl)-isoindooi-l>3-dion (bereiding 10).

^H-NMR (CDCI3) δ: 7,8 (m, 2H) , 7,7 (m, 2H) , 7,2 (m, 4H) , 7,1 (d, 1H), 4,0 (m, 2H), 3,7 (m, 4H) , 2,6 (t, 2H, 2,0 (m, 2H), 1,6 (s, 3H) . MS (m/e, %) : 351 (M+, 5), 336 15 (100). . .

Bereiding 24 3- [3-(2-Methyl-[1,3]dioxolan-2-yl)-fenyl]-propylamine 20

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 12, waarbij 2-{3[3-(2-methyl-[l,3]-dioxolan-2-yl)-fenyl]-propyl)-isoindool-1,3-dion (Bereiding 23) werd gesubstitueerd voor 2-{3-[4-(2,2,2-tri-25 fluor-l-hydroxyethyl)-fenyl]-propyl]-isoindool-1,3-dion. 1H-NMR (CDCI3) δ: 7,3 (m, 3H) , 7,1 (dd, 1H) , 4,0 (m, 2H) ,

3,8 (m, 2H) , 2,6 (t, 2), 1,8 (m, 2H), 1,6 (s, 3Hj. MS

(m/e, %): 221 (M+, 20), 206 (60), 189 (100).

30 Bereiding 25 2- (3-Joodfenyl)-propan-2-ol

Aan een geroerde oplossing van methylmagnesiumchlo-35 ride (65 mmol) in 100 ml THF werd bij 0°C druppelsgewijs 3- joodacetofenon (4,0 g, 16,3 mmol) toegevoegd. Het reac- 40

« J

• ί tiemengsel liet men opwarmen tot kamertemperatuur en werd vervolgens afgekoeld tot 0°C en een additioneel equivalent methylmagnesiumchloride werd toegevoegd. Men liet het mengsel opwarmen tot kamertemperatuur. en dit werd 5 5 uur geroerd. Het reactiemengsel werd geblust met MeOH, verdund met water, aangezuurd met ijsazijn en geëxtraheerd met dichloormethaan. Het organische extract werd gewassen met 5% natriumbicarbonaatoplossing, vervolgens geconcentreerd. Chromatografie over silicagel eluerend 10 met dichloormethaan gaf een olie die stolde na staan.

MS (m/e, %): 262 (M+, 80), 247 (100).

Voorbeeld 26 15 2-{3-[3-(1-Hydroxy-l-methylethyl)-fenyl]-prop-2-ynyl)-isoindool-1,3-dion

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 10, waarbij 2-{3-joodfenyl)-propan-2-ol 20 (Bereiding 25) werd gesubstitueerd voor 2,2,2-trifluor-l-(4-joodfenyl)-ethanol (bereiding 10).

MS (m/e, %) : 319 (M+, 90), 301 (80), 160 (100).

Bereiding 27 25 2-{3-[3-(1-Hydroxymethylethyl)-fenyl]-propyl}-isoindool- 1,3-dion

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan 30 die in Bereiding 11, waarbij 2-{3[3-(1-hydroxy-l-methyl-ethyl)-fenyl]-prop-2-ynyl)-isoindool-1,3-dion (Bereiding 26) werd gesubstitueerd voor 2-{3-[4-(2,2,2-trifluor-l-hydroxyethyl)-fenyl]-prop-2-ynyl}-isoindool-1,3-dion (bereiding 10) .

35 MS (m/e, %) : 305 (M+-H20, 80), 145 (100).

* · 41 ·

Bereiding 28 2- [3-(3-Aminopropyl}-fenyl]-propan-2-ol 5 Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 12, waarbij 2-{3[3-(1-hydroxy-l-methyl-ethyl)-fenyl]-propyl)-isoindool-1,3-dion (Bereiding 27) werd gesubstitueerd voor 2-{3-[4-(2,2,2-trifluor-l-hydroxyethyl)-fenyl)-propyl}-isoindool-1,3-dion (berei-10 ding 10) .

MS (m/e, %): 193 (M+, 30), 162 (60) , 145 (100) .

Bereiding 29 .

15 4-[3-(1,3-Dioxo-l,3-dihydro-isoindol-2-yl)-prop-l-ynyl]-benzonitril

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 10 met behulp van geschikte uitgangsma-20 terialen.

'1H-NMR (CDC13) δ: 7,8 (m, 6H) , 7,6 (d, 2H), 4,6 (s, 2H) .

MS (m/e, %) : 286 (M+, 100) .

Bereiding 30 25 4- [3--(1, 3-Dioxo-l, 3-dihydro-isoindol-2-yl) -propyl] -benzonitril •Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan .30 die in Bereiding 11, waarbij 4-[3-(1,3-dioxo-l,3-dihydro-isoindol-2-yl)-prop-l-ynyl]^benzonitril (Bereiding 27) werd gesubstitueerd voor 2—{3—[4-(2,2,2-trifluor-l-hydroxyethyl)-fenyl]-prop-2-ynyl}-isoindool-1,3-dion (bereiding 10) .

42 1HtNMR (CDCI3) δ: 7,8 (dd, 2H), 7,7 (dd, 2H) , 7,5 (d, 2H) , 7.3 (d, 2H), 3,7 (t, .2H), 2,0 (m, 2H) . MS .(m/e, %) : 290 (M\ 60) , 161 (100) .

5 Bereiding 31 4-(3-Aminopropyl)-benzonitril

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan 10 die in Bereiding 12, waarbij 4-[3-(1,3-dioxo-l,3-dihydro-ispindol-2-yl)-propyl]-benzonitril (Bereiding 30) werd gesubstitueerd voor 2-{3- [4-(2,2,2-trifluor-l-hydroxy-ethyl)-fenyl]-propyl}-isoindool-l,3-dion (bereiding 10). 1H-NMR (CDCI3) δ: 7,5 (d, 2H), 7,3 (d, 2H) , 2,7 (m, 4H) , 151,8 (m, 2H) . MS (m/e, %): 160 (M+, 20), 143 (100).

Bereiding 32 2-Chloor-3,4-dimethoxybenzaldehyde-oxim 20

Een mengsel van 2-chloor-3,4-dimethoxybenzaldehyde (1,5 g, 7,5 mmol), hydroxylamine hydrochloride (650 mg, 9.4 mmol) en natriumacetaat (1,5 g, 18,8 mmol) in 30 ml

MeOH en 15 ml water werd 18 uur verwarmd tot 65°C. Het 25 mengsel werd verdund met water en geëxtraheerd met EtOAc.

Het organische extract werd achtereenvolgens gewassen met water en pekel, gedroogd boven MgS04 en geconcentreerd en gaf 1,7 g van een vaste stof.

1H-NMR (CDCI3) δ: 8,5 (s, 1H) , 7,6 (d, 1H) , 6,8 (d, 1H) , 30 3,9 (s, 3H), 3,8 (s, 3H) . MS (m/e, %) : 215 (M+, 40), 199 (100).

Bereiding 33 43 .

' t 2- Chloor-3,4-dimethoxybenzylainine

5 Aan een geroerde oplossing van het product van Bereiding 32 (1,7 g, 7,8 mmol) in 40 ml THF werd bij 0°C

langzaam druppelsgewijs in. 1 M oplossing van LAH in THF (17 ml, 17 mmol) toegevoegd. Men liet het. mengsel langzaam opwarmen tot kamertemperatuur en dit werd vervolgens 10 2 uur onder terugvloeikoeling gekookt. Het mengsel werd afgekoeld tot 0°C en de reactie geblust met. MeOH langzaam druppelsgewijs toegevoegd. Het mengsel werd verdund met water en geëxtraheerd met chloroform. De resulterende emulsie werd gefiltreerd door diatomeeënaarde en de fil-15 traatlagen gescheiden. Het organische extract werd gewassen met water, gedroogd (MgS04) en geconcentreerd en gaf 1,1 g van een olie. MS (m/e, %): 202 (M+, 100).

Bereiding 34 20 3- Ethoxy-4-mëthoxybenzaldehyde-oxim

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 32 met behulp van geschikte uitgangsma-25 terialen.

1H-NMR (CDCI3) δ: 8,1 (s,16H) , 7,2 (d, 1H) , 7,0 (m, 1H) , 6,8 (d, 1H), 4,1 (q, 2H) , 3,9 (s, 3H) , 1,5 (t, 3H) . MS (m/e, %): 195 (M+, 100).

30 Bereiding 35 3-Ethoxy-4-methoxybenzaldehydeamine

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan 35 die in Bereiding 33 met behulp van geschikte uitgangsma terialen.

( 44 XH“NMR (CDC13) δ: 8,1 (s,16H), 6,9 (s, 1H), 6,8 (s, 2H), 4.1 (q, 2H), 3,8 (s, 2H), 1,5 (t, 3H) . MS (m/e, %) : 181 (M+, 100).

5 Bereiding 36 2- (3-Pyridin-4-yl-propyl)-isoindool-1,3-dion

Aan een geroerde oplossing yan 4-pyridinepropanol 10 (2,0 g, 14,5 mmol), ftaalimide (2,1 g, 14,5 mmol) en tri-fenylfosfine (4,9 g, 15,2 mmol) in 50 ml THF werd bij 0°C druppelsgewijs diethylazodicarboxylaat (2,5 ml, . 16,0 mmol) toegevoegd. Men liet het mengsel langzaam opwarmen tot kamertemperatuur en dit werd vervolgens gedurende de 15 nacht geroerd. Het mengsel werd verdund met 0,1 N chloor-waterstofzuur en gewassen met diethylether. Het waterige extract werd basisch gemaakt met 6 N natriumhydroxide en geëxtraheerd met EtOAc. Het organische extract werd gewassen met 1 N natriumhydroxide en water, gedroogd boven 20 MgS04 en geconcentreerd en gaf 1,8 g van een vaste stof.

1H-NMR (CDCI3) δ: 8,5 (s,2H), 7,8 (m, 2H) , 7,7 (m, 2H) , 7.2 (m, 2H), 3,7 (t, 2H), 2,7 (t, 2H), 2,0 (m, 2H).

Bereiding 37 25 3- Pyridin-4-yl-propylamine

Deze verbinding werd bereid op een wijze analoog aan die in Bereiding 12 met behulp van de titelverbinding van 30 Bereiding 36.

1H-NMR (CDCI3) δ: 8,4 (m, 2H), 7,1 (m, 2H), 2,7 (t, 2H) , 2,6 (t, 2H) , 1,8 (m, 2H) . MS (m/e, %) : 136 (M+, 30), 119 (35), 107 (100).

De verbindingen met formule (I) werden bereid zoals 35 beschreven in de volgende Voorbeelden.

k t N4-(3,5-Dimethoxybenzyl)-N2-(2-pyridin-2-yl-ethyl)-pyrido-.

[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine 5 45

Voorbeeld 1

Een mengsel van de titelverbinding van Bereiding 1 (174 mg, 0>5 mmol), 2-(2-aminoethyl)-pyridine (386 mg, 3.2 mmol) en DIPEA (0,2 ml, 1,1 mmol) in 1 ml DMSO werd 18 uur verwarmd tot 90°C. Het mengsel werd in water gego- 10 ten en geëxtraheerd met methyleenchloride. Het organische extract werd gewassen met pekel, gedroogd boven MgSC>4 en geconcentreerd. De resulterende rest werd gewreven met EtOAc en gaf 83 mg (40%) van de titelverbinding. Smeltpunt 157-8 °C.

15 XH-NMR (DMSO-de) : δ 8,6 (dd, 1 H) , 8,5 (d, 1H) , 8,4 (dd, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,2 (m, 1H) , 7,0 (m, 2H), 6,5 (m, 2H) , 6.3 (m, 1H), 4,6 (m, 2H), 3,7 (s, 6H), 3,6 (m, 2H) , 3,0 (m, 2H). MS (m/z, %): 417 (100).

Analyse berekend voor C23H24N6O2: C, 66,3; H, 5,8; N, 20,2. 20 Gevonden: C, 65,3; H, 6,3; N, 18,3.

De verbindingen van Voorbeelden 2 tot 5 werden bereid op een wijze analoog aan die beschreven in Voorbeeld 1 met behulp van geschikte uitgangsmaterialen.

25 Voorbeeld 2 N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-(2-pyridin-2-yl-ethyl)-pyrido-[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine . 30 Smeltpunt 185-6°C.

Analyse berekend voor C23H24N602: C, 66,3; H, 5,8; N, 20,2.

. Gevonden: C,.64,'5; H, 5,6; N, 19,6.

" » N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-(2-pyridin-2-yl-ethyl)-pyrido- [ 2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine 5 46

Voorbeeld 3

Smeltpunt 234-5°C.

Analyse berekend voor C23H24N6O2: C, 66,3; H, 5,8; N, 20,2. Gevonden: C, 66,0; H, 5,6; N, 20,0.

10 Voorbeeld 4 N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-2-pyridin-3-ylmethyl-pyrido-[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine 15 Smeltpunt 223-3°C.

Analyse berekend voor C22H22N6O2: C, 65,7; H, 5,5; N, 20,9. Gevonden: C, 65,5; H, 5,5; N, 20,8

Voorbeeld 5 20 N2-N4-Bis-(3,5-dimethoxybenzyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine- 2,4-diamine

Smeltpunt 159-160°C.

25 Analyse berekend voor C25H27N5O4: C, 65,1; H, 5,9; N, 15,2. Gevonden: C, 65,3; H, 5,9; N, 15,1.

Voorbeeld 6 30 N4-(3,5-Dimethoxyben2yl)-N2-[2-(4-methoxyfenyl)-ethyl]-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine

Een mengsel van de titelverbinding van Bereiding 1 (100 mg, 0,5 mmol) , p-methoxyfenetylamine (89 yl, 0,61 35 mmol) en DIPEA (105 yl, 0,61 mmol) in 0,8 ml DMSO we.rd 18 uur verwarmd tot 90°C. De verbinding werd geïsoleerd en » 1 * 47 gezuiverd van het ruwe reactiemengsel door directe injectie op een omgekeerde fase preparatieve HPLC (Shimadzu Corp.; Kyoto, Japan) met behulp van een stap gradiënt van acetonitril/water die 0,1% ammoniumhydroxi.de bevatte als 5 een eluent. Fracties die het gewenste product bevatten, werden gecombineerd, geconcentreerd eri de rest omgekristalliseerd uit IPA om 80 mg (60%) van de titelverbinding të geven. Smeltpunt 88-9°C.

Analyse berekend voor C25H27N5O3: C, 67,4; H, 6,1; N, 15,7. 10 Gevonden: C, 67„0; H, 6,3; N, 15,2.

De verbindingen van Voorbeelden 7 tot 31 werden bereid op een wijze analoog aan die beschreven in Voorbeeld 6 met behulp van geschikte uitgangsmaterialen. Specifieke uitzonderingen op de toegepaste reactie- en/bf zuive-15 ringsomstandigheden worden opgemerkt.

'Voorbeeld 7 N*-(3,5-Dimethoxybenzyl)-N2-(3-fenylpropyl)-pyrido[2,3-d]-20 pyrimidine-2,4-diamine XH-NMR (DMSO-de) : δ 8,6 (dd, 1 H) , 8,4 (d, 1H) , 7,2 (m, br, 3H) , 7,1 (m, br, 2H) , 7,0 (m, br, 1H) , 6,5 (s, br, 2H) , 6,3 (s, br, 1H) , 4,6 (m, br, 2H), 3,7 (s, br, 25 6H), 2,6 (m, br, 2H), 1,8 (m, br, 2H), 1,7 (m, br, 2. MS (m/z, %): 430 (100).

Voorbeeld 8 30 N2-[2-(4-Chloorfenyl)-ethyl-N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine

Smeltpunt 85-90°C.

Analyse berekend voor C24H24N5O2CI: C, 64,1; H, 5,4; N, 35.15,6. Gevonden: C, 63,6; H, 5,7; N, 15,3.

. N2-Benzyl-N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-pyrido[2,3-djpyrimi- dine-2,4-diamine 5 48

Voorbeeld 9 ' t

Smeltpunt 84-85°C.

Analyse berekend voor C23H23N5O2: C, 68,8; H, 5,8; N, 17,4. Gevonden: C, 68,5; H, 6,0; N, 17,4.

10 Voorbeeld 10 N4-(3,5-Dimethoxybenzyl)-N2-(2-thiofen-2-yl-ethyl)-pyrido-[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine 15 Smeltpunt T20-1°C.

Analyse berekend voor C22H23N6O2S: C, 62,7; H, 5,5; N, 16,6. Gevonden: C, 62,2; H, 6,0; N, 15,6.

Voorbeeld 11 20 2-(4-{[4-(3,5-Dimethoxybenzyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidin-2-ylamino]-methyl}-fenyl)-propan-2-ol

Smeltpunt 105-9°C.

25 Analyse berekend voor C26H29N5O3: C, 68,0; H, 6,4; N, 15,2. Gevonden: C, 67,7; H, 6,6; N, 14,4.

Voorbeeld 12 30 N4-(3,5-Dimethoxybenzyl)-N2-2-fenethyl-pyrido[2,3-d]-pyrimidine-2,4-diamine

Smeltpunt 112-4°C.

Analyse berekend voor C24H25N5O2: C, 69,4; H, 6,1; N, 16,9.

35 Gevonden: C, 68,5; H, 6,9; N, ' 15,3.

'4 9

Voorbeeld 13 • » « ♦ N4-(3,5-Dimethoxybenzyl)-N2-[2-(3,5-dimethoxyfenyl)ethyl]-pyrido[2,3-d3pyrimidine-2,4-diamine • 5

Smeltpunt 95-100°C.

Analyse berekend voor C26H29N5O4: C, 65,7; H, .6,2; N, 14,7. Gevonden: C, 65,5; H, 6,6; N, 14,5.

10 Voorbeeld 14 N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-[2-(3—fluorfenyl)ethyl]-pyrido[2,3-djpyrimidine-2,4-diamine 15 Smeltpunt 227.-8 °C.

Analyse berekend voor C24H24N5O2F: C, 66,5; H, 5,6; N, 16.2. Gevonden: C, 66,6; H, 5,6; N, 16,2.

Voorbeeld 15 20 N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-[2-(2—fluorfenyl)ethyl]-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine

Smeltpunt 220-2°C.

25 Analyse berekend voor C24H24N5O2F: C, 66,5; H, 5,6; N, 16.2. Gevonden: C, 66,4; H, 5,5; N, 16,1.

Voorbeeld 16 30 N4^(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-[2-(4-fluorfenyl)ethyl]-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine

Smeltpunt 225-6°C.

Analyse berekend voor C24H24N5O2F: C, 66,5; H, 5,6; N, 35 16,2. Gevonden: C, 66,4; H, 5,6; N, 16,2.

N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-fenethyl-pyrido[2,3—d]pyrimi- dine-2, 4-diamine 5 50

Voorbeeld 17

Smeltpunt 217-8°C.

Analyse berekend voor C24H24N5O2: C, 69,5; H, 6,1; N, 16,9. Gevonden: C, 69,4; H, 6,0; N, 16,8.

10 Voorbeeld 18 N4- (3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-(4-fenylbutyl)-pyrido[2,3—d]-pyrimidine-2,4-diamine 15 Smeltpunt 194-5°C.

Analyse berekend voor C26H29N5O2: C, 70,4; H, 6,6; N, 15,8. Gevonden: C, 70,5; H, 6,6; N, 15,9.

Voorbeeld 19 20 N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-(2-fenoxyethyl)-pyrido[2,3-d]-pyrimidine-2,4-diamine

Smeltpunt 227-8°C.

25 Analyse berekend voor C24H25N5O3: C, 66,8; H, 5,8; N, 16,2. Gevonden: C, 66,7; H, 5,7; N, 16,2.

Bereiding 20 30 N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-(2-trifluormethylbenzyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine

Smeltpunt 227-8°C.

Analyse berekend voor C24H22N5O2F: C, 61,4; H, 4,7; N, 35 14,9. Gevonden: C, 60,6; H, 4,9; N, 14,8.

Voorbeeld 21 1 # . 51 2-(4-{3-[4-(3, 4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyri-xaidin-2-ylamino-propyl} -fenyl) -propan-2-ol 5

Omgekeerde fase preparatieve HPLC-fracties die ruw gewenst product bevatten werden geconcentreerd en de rest werd omgekristalliseerd uit EtOAc.

Smeltpunt 198-9°C.

10 Analyse berekend voor C2eH33N503: C, 69,0; H, 6,8; N, 14,4. Gevonden: C, 68,7; H; 6,9; N, 14,3.

Voorbeeld 22 15 2-(4-{3-[4-(3, 4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyri-midin-2-ylamino-propyl}-fenyl)-propan-2-ol (amorfe vaste stof) smeltpunt 70-5°C.

^-NMR (DMSO-de) : 8,6 (dd, 1H) , 8,4 (d, 1H) , 7,3 (m, br, 20 2H), 7,1 (m, br, 2H)., 7,0 (m, br, 2H), 6,5 (s, br, 2H) , 6,3 (s, br, 1H),.4,6 (m, br, 2H) , 3,7 (s, br,. 6H) , 2,6 (m, br, 6H) , 2,6 (m, br, 2H) , 1,8 (m, br, 2H) , 1,7 (m, / br, 2H) , 1,4 (s, 6H) . MS (m/z, .%) : 430 (100). MS (m/z) : 488 (M+ + 1, 100), 470 (50) . .

25 Analyse berekend voor C28H33N5O2: C,.69,0; H, 6,8; N, 14,4. Gevonden: C, 67,1; H, 7,0; N, 12,1.

Voorbeeld 23 . . . 30 1-(4-([4-(3,4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyrimi-din-2-ylamino]-methyl}-fenyl)-2,2,2-trifluorethanol

Omgekeerde fase preparatieve HPLC-fracties die ruw . gewenst product bevatten werden geconcentreerd en de rest 35 werd omgekristalliseerd uit acetonitril/water.

Smeltpunt 121-2°C.

' * 52

Analyse berekend voor C25H24N5O3F3: C, 60,1; H, 4,8; N, 14,0. Gevonden: C,.58,0; H, 5,0; N, 13,4.

Voorbeeld 24 5 . -1-(4-{3-[4-(3,4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyri-midin-2-ylamino]-propyl}-fenyl)-ethanon

Het reactiëmengsel wat ruw product bevatte, werd in 10 water gegoten en het resulterende precipitaat werd afgefiltreerd. De rest werd opgelost in 30 ml MeOH en 10 ml 1 N chloorwaterstofzuur werd toegevoegd. Het mengsel werd 4 uur bij kamertemperatuur geroerd, geconcentreerd, geneu-. traliseerd met 5% natriumbicarbonaatoplossing, en geëx-15 traheerd met dichloormethaan. De organische extracten werden gecombineerd en gewassen met pekel, gedroogd boven MgS04 en geconcentreerd. Het ruwe product werd gezuiverd met behulp van omgekeerde fase .HPLC zoals beschreven in Voorbeeld 6. Fracties die gewenst product bevatten, wer-20 den gecombineerd, geconcentreerd en de rest omgekristalliseerd uit acetonitril/water om een vaste stof te leveren.

Smeltpunt 184-5°C.

Analyse berekend voor C27H29N5O3: C, 68,8; H, 6,2; N, 14,9. 25 Gevonden: C, 68,7; H, 6,0; N, 14,6.

Voorbeeld 25 1-(4—{3—[4-(3,4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyri-30 mldin-2-ylaminoJ-propyl)-fenyl)-2,2,2-trifluorethanol

Smeltpunt 222-4°C.

^-NMR (DMSO-dgj : 8,6 (dd, 1H) , 8,4 (d, 1H) , 7,4 (m, br, 2H) , 7,3 (m, 1H), 7,0 (m, br, 2H) , 6,8 (s, br, 2H), 6,7 35 (d, 1H), 5,0 (m, br, 1H) , 4,6 (s, br, 2H) , 3,7 (m, 6H) , 3,3 (m, 2H), 2,6 (m, br, 6H) , 2,6 (m, br, 2H) , 1,8 (m, .53 - : . br, 2H), 1,7-. (m, br, 2H), 1,8 (m, br, 2H). MS (m/z, %) : 528 (M+, 100) .

Voorbeeld 26 5 N2-3-(Benzo[1,2,5] oxadiazol-5-yl-propyl)-N4- (3,4-di- methoxybenzyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine I 1 '

Het.product werd geïsoleerd door chromatografie over . 10 silicagel eluerend' met 2,5% MeOH in 2N ammonium/dichloor-methaan en-gaf een ruwe vaste stof. Wrijven met EtOAc leverde een vaste stof ^-NMR (DMSO-de) : 8,6 (dd, . 1H) , 8,4 (dd, 1H), 7,9 (m, br, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,5 (m, br, 1H), 7,0 (m, br, 2H), 6,8 15 (m, 2H) , 4,6 . (m, br, ,2H) , 3,7 (m, 6H), .3,4 (m, 2H) , 2,7 (m, br, 2H), 1,9 (m, br, 2H) . MS (m/z, %) : 472 (M% 100).

Voorbeeld 27 20 N2-3-(Benzothiazol-6-yl-propyl)-N4-(3,4-dimethoxybenzyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine

Het product werd geïsoleerd door chromatografie over silicagel eluerend met 2,5% MeOH in 2 N ammoniak/di-.25 chloormethaan om een ruwe vaste stof te geven. Smetpunt 191-3°C. .

MS (m/z, %): 487 (M+, 100).

Analyse berekend voor C26H2eN602S: C, 64,2; H, .5,4; N, 17,3. Gevonden: C, 64,5; H, 5,5; N, 16,8.

30 54

Voorbeeld 28 • * . ’ N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-{3-[3-(2-methyl-[1,3]-dioxo-lan-2-yl)-fenyl]-propyl}-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-5 diamine 1H-NMR (DMSO-d6) : 8,6 (d, 1H) , 8,3 (d, 1H) , 7,2 (m, br, 3H), 7,0 (m, br, 3H), 6,9 (m, br, 2H), 4,6 (m, br, 2H) , 4,1 (m, 2H), 3,9 (m, 2H), 3,7 (m, br, 8H), 2,6 (m, br, 10 2H), 1,8 (m, br, 2H), 1,5 (s, 3H). MS (m/z, %): 516 (M++ 1, 100).

Voorbeeld 29 15 2-(3-{3-[4-(3,4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyri-midin-2-ylamino]-propyl}-fenyl)-propan-2-ol

Smeltpunt 204-5°C.

1H-NMR (DMSO-d6) 8,6 (d, 1H) , 8,3 (d, 1H) , 7,3 (m, br, 20 1H), 7,2 (m, br, 1H) , 7,1 (m, br, 1H) , 7,0 (m, br, 3H) , 6,8 (s, br, 2H) , 4,6 (s, br, 2H) , 3,7 (m, br, 6H) , 3,3 (m, br, 2H) , 2,6 (m, br, 2H), 1,8 (m, br, 2H), 1,4 (s, 6H). MS (m/z, %): 488 (M++l, 100).

25 Voorbeeld 30 4—{3—[4—(3,4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyrimi-din-2-ylamino]-propyl}-benzonitril 30 Smeltpunt 220-2°C.

1H-NMR (DMS0-d6) : 8,6 (d, 1H), 8,3 (d, 1H) , 7,7 (m, br, 2H) , 7,4 (m, br, 2H), 7,0 (m, br, 2H), 6,8 (s, br, 2H) , 4,6 (s, br, 2H) , 3,7 (m, br, 6H) , 3,3 (m, br, 2H) , 2,7 (m, br, 2H), 1,8 (m, br, 2H) . MS (m/z, %) : 455 (M+ + 1, 35 100).

• *

Voorbeeld 31 55 N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-(3-pyridin-4-yl)-propyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2/4-diamine 5 1H-NMR (CD2C12) : δ 9,1 (d, 1H) , 8,9 (m, br, 1H) , 8,4 (m, br, 3H), 7,2 (m, br, 2H) , 7,1 (m, br, 1H) , 7,0 (s, br,.

1H), 6,9 (d, 1H), 6,6 (d, 1H) , 4,8 (d, 2H), 3,7 (s, 3H) , .

3,7 (s, 3H) , 3, 6 (m, 2H), 2,7 (m, 2H) , 2,0 (m, 2H) . MS

10 (m/z, %) : .432 (M+ + 1, 20), 256 (15), 237 (30), 216 (100).

De verbindingen van Voorbeelden 32-35 werden bereid volgens de volgende gegeneraliseerde procedure. Specifie-15 ke uitzonderingen op de toegepaste reactie- en/of zuive-ringsomstandigheden worden vermeld.

Aan een geroerde oplossing van 2,4-dichloorpyrido-[2,3-d]pyrimidine (0,75 inmol) en DIPËA (1,5 mmol) in 3 ml DMSO werd 0,75 mmol . van een amine overeenkomend met for- 2.0 mule (V) , Schema 1, stap 1, bij kamertemperatuur toegevoegd. Het mengsel werd 1 uur bij kamertemperatuur geroerd, vervolgens werden 2,25 mmol van een amine overeenkomend met formule (VII), Schema 1, stap 2 en additioneel DIPEA (2,25 mmol) toegevoegd en het mengsel 2 uur ver-25 warrad tot 90°C.

Voorbeeld 32 N4-(3,4-Dimethoxybenzyl)-N2-(3-fenylpropyl)-pyrido[2,3-d]-30 pyrimidine-2,4-diamine

De verbinding werd geïsoleerd en gezuiverd uit het ruwe reactiemengsel door directe injectie op een omgekeerde fase preparatieve HPLC met behulp van een stapgra-35 dient van acetonitril/water dat 0,1% ammoniumhydroxide bevatte als een eluent. Fracties die de verbinding bevat- * t .

56 ten, werden gecombineerd en geconcentreerd en gaven een vaste stof.

Smeltpunt 165-7°C.

1H-NMR (d6-DMSO): 8,6 (dd, 1H) , 8,4 '(dd, 1H) , 7,2 (m, br, . 5 3H), 7,1 (m, br, 2H), 7,0 (m, br, 2H), 6,8 (m, br, 2H), 4,6 (m, br, 2H), 3,7 (d, br, 6H), 3,3 (m, br, 2H), 2,6 (m, br, 2H), 1,8 (m,. 2H) . MS (m/e, %) : 431 (M+ + 1,50), 430 (M+, 100) .

10 Voorbeeld 33 N4-(3,5-Dimethoxybenzyl)-N2-(3-fenoxy-ethyl)-pyrido[2,3- d]pyrimidine-2,4-diamine 15 De verbinding werd geïsoleerd en gezuiverd uit het ruwe reactiemengsel door directe injectie op een omgekeerde fase preparatieve HPLC met behulp van een stapgra-diënt van acetonitril/water dat 0,1% ammoniumhydroxide bevatte als een eluent. Fracties die de verbinding bevat-20 ten, werden gecombineerd en geconcentreerd en de rest omgekristalliseerd uit IPA/water.

Smeltpunt 165-7°C.

1H-NMR (de-DMSO) 8,6 (dd, 1H) , 8,4 (d, 1H) , 7,2 (m, br, 3H) , 7,1 (m, br, 2H) , 7,0 (m, 1H), 6,9 (m, br, 2H), 6,8 25 (m, br, 1H) , 6,5 (d, 2H), 6,4 (s, 1H) , 4,6 (m, br, 2H), 4,0 (m, br, 2H), 3,7 (m, br, 8H) . MS (m/e, %) : 433 (M+ + 1,50) , 432 (M+, 100) .

Voorbeeld 34 30 N4-(3-Ethoxy-4-methoxybenzyl)-N2-(3-fenylpropyl)-pyrido-. . [2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine

De verbinding werd geïsoleerd en gezuiverd uit het 35 ruwe reactiemengsel door directe injectie op een omgekeerde fase preparatieve HPLC met behulp van een stapgra- • » 57 diënt van acetonitril/water dat 0,1% ammoniumhydroxide bevatte als een eluent. Fracties die de verbinding bevatten, werden gecombineerd, geconcentreerd en omgekristalliseerd uit acetonitril/water.

5 Smeltpunt 181-2°C.

Analyse berekend voor C28H29N5O2: C, 70,4; H, 6,6; N, 15,8. Gevonden: C, 70,7; H, 6,9; N, 15,9.

Voorbeeld 35 10 2-(4 — {3 —[4-(3-Ethoxy-4-methoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]-pyrimidin-2-ylamino-propyl}-fenyl)-propan-2-ol

De verbinding werd geïsoleerd en gezuiverd uit het 15 ruwe reactiemengsel door directe injectie op een omgekeerde fase preparatieve HPLC met behulp van een stapgra-diënt van acetonitril/water dat 0,1% ammoniumhydroxide bevatte als een éluent. Fracties die de gewenste verbinding bevatten, werden gecombineerd, geconcentreerd en om-20 gekristalliseerd uit acetonitril/water.

Smeltpunt 150-2°C.

Analyse berekend voor C29H35N5O3: C, 69,4; H, 7,0; N, 13,7.. Gevonden: C, 69,1; H, 6,9; N, 13,7.

25 Voorbeeld 36 1-(4-{3-[4— (3, 4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyri-midin-2-ylamino]-propyl}-fenyl)-2,2,2-trifluor-ethanon 30 Aan een geroerde oplossing van de titelverbinding van Voorbeeld 25 (150 mg,.0,28 mmol) in 15 ml dichloorme-thaan werd bij kamertemperatuur 1,1,1-triacetoxy-l,1-di-hydro-1,2-benziodoxol-3(1H)-on (180 mg, 0,43 mmol) toegevoegd. Het mengsel werd 6 uur bij kamertemperatuur ge-35 roerd, vervolgens werd een additionele portie 1,1,1-tri-acetoxy-1,1-dihydro-l,2-benziodoxol-3(1H)-on (180 mg, 58 I t ' ψ 0,43 mmol) toegevoegd en werd het mengsel gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. Het mengsel werd verdund met chloroform, gewassen met water, gedroogd boven MgSO* en geconcentreerd en gaf een olie. .Chromatografie 5 over silicagël eluerend met 5% MeOH 2 N in ammoniak/di-chloormethaan.leverde een olie. Wrijven met EtOAc gaf 45 mg van een vaste stof.

Smeltpunt 198-200°C.

1H-NMR (de-DMSO.).: 8,6 (dd, 1H) , 8,4 .(dd, 1H) , 7,9 (m, br, 10 2H), 7,5 (m, br, 2H) , 7,0 (m, 2H) , 6,8 (m, br, 2H) , 4,6 (m, 2H), 3.,7 (m> 6H) , 3,3 (m, 2H), 2,7 (m, br, 2H), 1,9 (m, br, 2H) . MS (m/e, %) : 526 (M+, 100).

Voorbeeld 37 . .

15 1-(3-{3-[4-(3,4-Dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyri-midin-2—ylamino]-propyl}-fenyl)-ethanon

Een mengsel van de titelverbinding van Bereiding 27 20 (419 mg, 0,81 mmol) in 8 ml THF dat 10 ml 6 N chloorwa-terstofzuur bevatte, werd 6 uur bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd geëxtraheerd met EtOAc, het organische extract werd gewassen met 5% natriumbicar-bonaatoplossing en vervolgens geconcentreerd en gaf een 25 vaste stof.

Smeltpunt 152-5°C.

1H-NMR (de-DMSO) : 8,8 (d, 1H) , 8,7 (d, 1H) , 7,7 (m, 2H) , 7,4 (m, 3H) , 7,0 (s, 1H) , 6,8 (m, 2H) , 4,6 (d, 2H), 3,7 (s, 3H) , 3,6 (s, 3H) , 3,5 (m, 2H) , 2,7 (m, 2H), 2,5 (s, 30 3H), 1,9 (m, 2H). MS (m/e, %): 471 (M\ 30), 470 (100).

59 4 j · - • . > . BIOLOGISCHE METHQDOLOGIEËN PDE 2 Enzymisolatie 5 PDE 2 enzym werd geïsoleerd uit menselijke plaatjes met ongeveer 1,4 1 bloed van meervoudige donoren, toegepast om de plaatjespellets te maken. Plaatjes werden opnieuw gesuspendeerd in ongeveer 75 ml. lyse buffer [20 mM Tris pH 7,2, 5 mM MgCl2, 250 mM sucróse, 1 mM DTT, 1 μ1/2. 10 ml Sigma Protease remmer #8340; Sigma-Aldrich; St. Louis, MO] en gelyseerd door behandeling met ultrageluid bij 4°C, met 3 ronden van uitbarstingen van 1 min., vervolgens gedurende de nacht bij 4°C afgedraaid bij 100.000 x g. Opgehelderde lysaten werden geladen op AKTA Explorer 15 FPLC (Amersham Biosciences; Piscataway, NJ) in een reeks van. drie chromatografische scheidingen met een gemiddeld laadvolume van 24 ml. Een 5 ml HiTrap W anionenwisselaar-kolom (Amersham Biosciences) werd gebruikt. Een buffer [20 mM Tris pH 7,2, 5 mM MgCl2, Ι.μί/2 ml Sigma Protease 20 remmer #8340] werd gemengd met een gradiënt van B-buffer [20 mM Tris pH 7,2, 500 mM NaCl, 5 mM MgCl2, 1 μ1/2 ml Sigma Protease remmer #8340] over 20 kolomvolumina van een aanvankelijke B-buffer concentratie van 0% tot een eindconcentratie van 100%. cGMP-hydrolyserende pieken 25 werden opgemerkt met een gemiddelde resolutie bij laag zout- 125 mM NaCl (PDE 5) en hoog zout- 325 mM NaCl (PDE 2) . Twee grote cGMP activiteitsfracties (PDE 5 en PDE 2) werden afzonderlijk geïsoleerd en samengevoegd. De PDE 2-samengevoegde fractie totaal was ongeveer 40 ml dat werd 30 toegediend in cryo-flesjes van 200 μΐ/flesje en bij -80°C in opslag geplaatst.

PDE 2 Enzymbindingsassay 35 De remmende activiteit van de verbindingen met for mule (I) op recombinant of geïsoleerd PDE 2 en andere 60 « · · « t PDE’s werd bepaald met behulp van de [3H]cAMP scintilla-tieproximiteitsassay (SPA) pakketten van Amersham International (Little Chalfont, Engeland). De SPA assays werden uitgevoerd met behulp van 96-putjes platen. De PDE 5 SPA yttrium silicaat parels (Amersham Biosciences). binden bij voorkeur aan het lineaire nücleotide, GMP, vergeleken met het cyclische nücleotide, cGMP. 3H-cGMP· werd aan de reactie toegevoegd en toen het product, 3H-GMP, in dichte, nabijheid met de parels was, werd het scintillatiemiddel 10 in de parel aangeslagen, dat werd gedetecteerd met behulp vari. een Packard scintillatiëteller (Perkin-Elmer Life Sciences; Boston, MA). De toegepaste enzymconcentratie was in het lineaire traject en de K„, van het enzym werd bepaald (15 uM) . De uiteindelijke substraatconcentratie 15 was < 1/3 van Km (1 μΜ) zodat ICso-waarden de Ki-waarden zouden benaderen. De assay werd gevalideerd met behulp van literatuur verbindingen als controles voorafgaande aan het testen van verbindingen. Vervolgens werden PDE katalytische activiteitsmetingen verkregen in aanwezig-20 heid van de testverbinding en die verkregen in afwezigheid van de testverbinding, vergeleken en de ICso-waarden wordt bepaald.

De radioactieve substraten en de producten van de PDE-reactie werden kwantitatief bepaald met behulp van 25 een RACK-BETA 1219 vloeistofscintillatieteller (LKB Wal-lac; Freiburg, Duitsland). De ICso-waarden (concentraties met 50% remming) werden bepaald met 1 μΜ cAMP of c GMP met behulp van de piekfracties. De gegevens werden gepast met vier parameters met behulp van de sigmoldale logis-30 tieke functie.

Met behulp van het eerder beschreven PDE 2 enzym geïsoleerd uit menselijke plaatjes en de werkwijze voor het bepalen van testverbindingen voor remming van het enzym, werd een IC50 van 1,7 μΜ bepaald voor EHNA. Bovendien werd 35 een IC50 van 3 nM voor 9- (l-acetyl-4-fenylbutyl) -2-(3,4- 61

• V

• > dimethoxybenzyl)-1,9-dihydropurin-6-on ook bepaald met behulp van de hiervoor genoemde werkwijze.

De verbindingen met formule (I) vertonen in het algemeen remmende activiteit, uitgedrukt als ICso's tegen 5 PDE 2, welke < 1.000 nM zijn. Trajecten van PDE 2 remmende activiteit voor de verbindingen met formule (I) in Voorbeelden 1-37 worden vermeld in Tabel 1.

Tabel 1 10

Voorbeeld PDE 2 remmer Voorbeeld PDE 2 remmer 1 ++ 22 ++ 2 ++ 23 + 3 + 24 + 4 + 25 ++ 5 +++ 26 + 6 + 27 + 7 ++ 28 + 8 + 28 + 9 + 30 - + 10 +++ 31 . + 11 + 32 + 12 ++ 33 ++ 13 ·.++. 34 + 14 ++ 35 + 15 . ++ 36 + 16 +++ 37 + 17 +++ ..

18 ++ .19 ++ 20 + 21 + PDE 2 remming: +++ (IC50 < 50 nM), ++ (IC50 50-250 nM) , + (IC50 250-1.000 riM) 62 • » ' *

Het vermogen van PDE 2 remmers, waaronder de verbindingen met formule (I) om botbreuk en/of defect te behandelen of botingroei te bevorderen, kan worden gedemonstreerd volgens de volgende protocollen.

. 5 . ·

Ratten dwarse dijbreukmodel

Mannelijke Sprague-Dawley ratten van 3 tot 4 maanden leeftijd werden gebruikt. De dieren werden geanestheti-10 seerd met ketamine en xylazine in doses van respectievelijk 110 en 10 mg/kg. De rechterachterpoot van elke rat werd geschoren en gereinigd. Een incisie van 1 cm werd gemaakt juist dwars ten opzichte van de patella en de dijcondylus werd bloot gesteld. Een Kirschner draad 15 (0,045" in diameter) werd ingebracht in het intramedul-laire kanaal door het intercondylaire gedeelte om te dienen als inwendige stabilisatie. De spierincisie werd gesloten met vicryl en de huidincisié werd gesloten met roestvrij stalen wondclips. De midden-diafyse van de ge-20 pende dij werd gebroken met behulp van een driepunts buiginrichting aangedreven door een valgewicht. De ratten werden volledig gewichtdragende en onbeperkte activiteit toegelaten na ontwaken uit anesthesie. De testverbindin-gen werden toegediend op diverse dagen na chirurgie door 25 percutane injectie op de breukplaats. De dieren werden opgeofferd na behandeling en de dijen werden verzameld voor analyse. Breukgenezing werd geëvalueerd door toepassen van radiografie, histologische en biomechanische test (F. Bonnarens, c.s., Journal of Orthopaedic Research, 2, 30 97-101 (1984).

Onderzoeksprotocol en resultaten in het ratten dwarse dijbreukmodel 35 Drie maanden oude mannelijke ratten werden onderwor pen aan dwarse breuk in hun rechterdijen onder algemene

* V

63 anesthesie. Een enkelvoudige dosis (5 mg) van N4-(3,4-di-methoxybenzyl)-N2- (3-fenylpropyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidi-ne-2,4-diamine werd percutaan geïnjecteerd in de breuk-plaatsen bij de voltooiing van breukgenerering. Drie we-5 ken na de injecties werden de ratten opgeofferd en werden de rechterdijen geoogst en geanalyseerd. Kracht-tot-falen en stijfheid (indices van botsterkte) werden verhoogd met 1.9% en 62% respectievelijk in de. dijen behandeld met N4-.(3,4-dimethoxybenzyl)-N2-(3-fenylpropyl)-pyrido[2,3-d]-10 pyrimidine-2,4-diamine, . vergeleken met. die van de dijen behandeld met placebo.

Ratten periosteaal inj.ectiemodel .15 Ratten werden geanesthetiseerd met isofluraan (2-3 min.) in een geleidingskamer gelokaliseerd in een zuur-kast. De rechterachterpoot van elke rat werd geschoren en; gereinigd. Een 25 gauge naald bevestigd aan een injectiespuit werd vooraf gevuld met een formulering van de test-20 verbinding voor lokale injectie. De formulering werd op het subperiosteum van de dij geïnjecteerd in een volume van 5-15 μΐ gedurende 14 dagen. De ratten werden opgeofferd na dosering, de dijen werdén verzameld en vervolgens geanalyseerd via radiografie en duale energie röntgen ab-25 sorptiometrie (DEXA).

Onderzoeksprotocol en resultaten in het ratten periostea-le injectiemodel 30 De rechterdij van 3 weken oude mannelijke Sprague-

Dawley ratten ontvingen een dagelijkse injectie van vehikel of testverbinding vijfmaal per week gedurende twee weken. Op dag 15 werden alle ratten opgeofferd en werden de rechterdijen verzameld voor analyse. Periosteale bot-35 inductie werd vastgesteld met behulp, van radiografie en DEXA. Radiografie toonde nieuwe botvorming gelokaliseerd ' »· 64 op de injectieplaats van alle dijen behandeld met test-verbinding. Het botmineraalgehalte (BMC) van het geïnjecteerde gebied van de dij- (gebied tussen lagere trochanter en middenschacht van de dij) werd vastgesteld door DEXA, 5 waarbij ratten werden vergeleken behandeld met testver-binding met die behandeld met slechts vehikel. In dit model verhoogden N4-(3,5-dimethoxybénzyl)-N2-(2-pyridin-4-yl-ethyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine, 2-(3-(3-[3,4-dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyrimidin-2-yl-10 amino]-propyl}-fenyl)-propan-2-ol en N4-(3,4-dimethoxy-benzylj -N2- (3-fenylpropyl) -pyrido [2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine BMC met respectievelijk 34%, 49% en 33%. Boven dien verhoogde 9-(l-acetyl-4-fenylbutyl)-2-(3, 4-di-methoxybenzyl)-1,9-dihydropurin-6-on BMC met 20% in het 15 hiervoor genoemde model.

1027787

Claims

1. Verbinding met formule : (I) . 5 ' 0(CrC6)alkyl Hn/VN\ ff—R1 'd2

10. J 1 N^N^NH(CH2)n-X-Y (O ; . ... 15 de prodrugs daarvan en de farmaceutisch aanvaardbare zouten van de verbindingen of prodrugs, waarbij: R1 en R2 waterstof of methoxy zijn, met dien verstande dat R1 en R2 niet beide waterstof of beide methoxy zijn; 20 η 1, 2, 3 of 4 is; X een binding; O; S; C=0; -N (R) -, waarbij R waterstof of - (C1-C3) alkyl is; -C(OH)-; of -SO2 is; en Y benzoxazolyl; benzothiazolyl; benzofurazanyl; benzofuranyl; benzothiadiazolyl; benzisoxazolyl; 25 benzisothiazolyl; benzimidazolyl; pyridyl; isatinyl; oxindolyl; indazolyl; indolyl, fenyl; thienyl; of furanyl is; waarbij Y eventueel onafhankelijk is gesubstitueerd met één tot drie halogeen; trifluorme-thyl; methoxy; -C(=0)CH3,· cyano; -C(CH3)20H;

30 -CH (CH3) OH; -CH(CF3)OH; -C(C=0)CF3; -S02NH2; -C(=0)0CH3; -CH2COOH; - 35 thiazolyl of oxadiazolyl. 1027787 « * k l

2. Verbinding volgens conclusie 1, waarbij X een bin ding is en Y benzofurazanyl; thienyl, pyridyl of fe-nyl is, waarbij fenyl eventueel onafhankelijk is gesubstitueerd met één of twee halogeen; trifluorme- 5 thyl; methoxy; -C(=0)CH3; cyano; -C(.CH3)2OH; -CH(CH3)OH; -CH(CF3)0H; -C(C=0)CF3; -S02NH2; -C(=0)0CH3; -CH2COOH; thiazolyl of oxadiazolyl.

3. Verbinding volgens conclusie 1 of 2, waarbij X een 10 binding is, n 2 of 3 is en Y thienyl; pyridyl of fe nyl is, waarbij fenyl eventueel onafhankelijk is gesubstitueerd met één of twee methoxy; halogeen; -C (CH3) 20H; -CH (CF3) OH of -C(C=0)CF3. 15 4. N2,N4-bis-(3,5-dimethoxybenzyl)-pyrido[2,3-d]pyrimi-dine-2,4-diamine; N4-(3,5-dimethoxyb.enzyl)-N2-(2-pyridin-4-yl-ethyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine; N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-(2-thiofen-4-yl-ethyl)-20 pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine;. N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-2-fenethyl-pyrido[2,3-d]- pyrimidine-2,4-diamine; N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-[2-(3,5-dimethoxy-fenyl)-ethyl]-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine; 25 2-(3-{3-[4-(3,4-dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]- pyrimidin-2-ylamino]-propyl}-fenyl)-propan-2-ol; N4-(3,4-dimethoxybenzyl)-N2-[2-(4-fluor-fenyl)ethyl]-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine; N4-(3,4-dimethoxybenzyl)-N2-fenethyl-pyrido[2,3-d]-30 pyrimidine-2,4-diamine; of N4-(3,4-dimethoxybenzyl)-N2-(3-fenyl-propyl]-pyrido-[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine; een prodrug daarvan, of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde 35 verbinding of prodrug. a *

5. Farmaceutisch preparaat, omvattende een verbinding met formule (I) volgens één der conclusies 1-4, een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde verbinding of prodrug en een far- 5 maceutisch aanvaardbaar vehikel, drager of verdun- ningsmiddel.

6. Gebruik van een verbinding met formule (I) volgens één der conclusies 1-4, een prodrug daarvan of een 10 farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde verbin ding of prodrug, of een farmaceutisch preparaat omvattende genoemde verbinding met formule (I), genoemd prodrug of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde verbinding of prodrug, en een farmaceu- 15 tisch aanvaardbaar vehikel, drager of verdunnings- middel, voor het bereiden van een geneesmiddel voor het behandelen van een PDE 2 gemedieerde aandoening, ziekte of symptoom bij een zoogdier dat een dergelijke behandeling nodig heeft. 20

7. Gebruik volgens conclusie 6, waarbij genoemde aandoening, ziekte of symptoom osteoporose, pulmonale hoge bloeddruk, vrouwelijke seksuele opwindingsaan- doening, verminderd geheugen of cognitie, bloed- 25 plaatjesaggregatie, vasculaire angiogenese, dementie, kanker, aritmie, trombose, botbreuk en/of -defect, vertraagde of non-union fractuur, spinale fusie, botingroei, craniale gezichtsreconstructie of hypoxie is. 30

8. Gebruik volgens conclusie 6, waarbij genoemde aan doening botbreuk en/of -defect is. 1 Farmaceutisch preparaat, omvattende een PDE 2 rem- 35 mer, een EP2 selectieve receptoragonist en een far- maceutisch aanvaardbaar vehikel, drager of verdun-ningsmiddel.

10. Preparaat volgens conclusie 9, waarbij genoemde PDE 5. remmer N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-(2-pyridin-4-yl- ethyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine; 2—(3—{3— [4-(3,4-dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyrimi-din-2-ylamino]-propyl}-fenyl)-propan-2-ol; N4—(3,4— dimethoxybenzyl)-N2-(3-fenylpropyl)-pyrido[2,3-d]py-10 rimidine-2,4-diamine; een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde verbinding of prodrug is.

11. Preparaat volgens conclusie 9 of 10, waarbij genoem- 15 de EP2 selectieve receptoragonist (3-(((4-tert- butyl-benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur, een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde verbinding of prodrug is. 20

12. Gebruik volgens één der conclusies 6-8, waarbij aan genoemd zoogdier verder een therapeutisch effectieve hoeveelheid van een EP2 selectieve receptoragonist wordt toegediend; of waarbij aan genoemd zoogdier 25 een farmaceutisch preparaat omvattende een combina tie van genoemde verbinding met formule (I) volgens conclusie 1 en genoemde EP2 selectieve receptoragonist wordt toegediend.

13. Gebruik volgens conclusie 12, waarbij genoemde PDE 2 remmer N4-(3,5-dimethoxybenzyl)-N2-(2-pyridin-4-yl-ethyl)-pyrido[2,3-d]pyrimidine-2,4-diamine; 2-(3-(3-[4-(3,4-dimethoxybenzylamino)-pyrido[2,3-d]pyrimi-din-2-ylamino]-propyl}-fenyl)-propan-2-ol; N4- (3,4-35 dimethoxybenzyl)-N2-(3-fenylpropyl)-pyrido[2,3-d]py rimidine-2, 4-diamine; een prodrug daarvan of een 4 r farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde verbinding of prodrug is.

14. Gebruik volgens conclusie 12 of 13, waarbij genoemde

5 EP2 selectieve receptoragonist (3-(( (4-tert-butyl- benzyl)-(pyridine-3-sulfonyl)-amino)-methyl)-fenoxy)-azijnzuur, een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde verbinding of prodrug is. 10

15. Gebruik van een PDE 2 remmer, een prodrug daarvan of een farmaceutisch aanvaardbaar zout van genoemde remmer of prodrug voor het bereiden van een geneesmiddel voor het behandelen van botbreuk en/of 15 -defect bij een zoogdier dat een dergelijke behande ling nodig heeft. 1027787