CN100439366C - 作为PDE2抑制剂的吡啶并[2,3-d]嘧啶-2,4-二胺 - Google Patents

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Abstract

本发明提供式(I)的化合物，其前药及这些化合物或前药的药物上可接受的盐，其中n、X及Y是如文中所定义；其药物组合物；其组合；及其用途。

Description

作为PDE2抑制剂的吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
技术领域
本发明涉及用作PDE 2抑制剂的某些吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、其药物制剂、其组合及其用途。
背景技术
磷酸二酯酶(PDE)家族的酶通过水解控制来调节第二信使cAMP或cGMP的细胞内含量。磷酸二酯酶II型(PDE 2)具有对cGMP特异的低亲和性催化区及别构区。低亲和性催化部位可以cGMP低于cAMP的表观KM水解cAMP及cGMP两者。然而，当cGMP结合至别构部位时，催化部位经历对cAMP显示高亲和性的构象变化。PDE 2在大脑中显示最高的表达，但也在许多其它组织中发现且因而具有广泛的一系列功能及潜在的治疗效用(J.A.Beavo等人，Rev.Physio.Biochem.Pharm.，135，67(1999))。PDE 2功能及治疗潜力的实例有神经元生长、学习及记忆(W.C.G.van Staveren等人，Brain Res.，888，275(2001)及J.O’Donnell等人，J.Pharm.Exp.Ther.，302，249(2002))；催乳素及醛固酮的分泌(M.O.Velardez等人，Eur.J.Endo.，143，279(2000)及N.Gallo-Payet等人，Endo.，140，3594(1999))；骨细胞分化、生长及骨吸收(C.Allardt-Lamberg等人，Biochem.Pharm.，59，1133(2000)及S.Wakabayashi等人，J.Bone.Miner.Res.，17，249(2002))；免疫反应(M.D.Houslay等人，Cell.Signal.，8，97(1996)；脉管的血管生成(T.Keravis等人，J.Vasc.Res.，37，235(2000)；炎性细胞转化(S.L.Wolda等人，J.Histochem.Cytochem.，47，895(1999)；心脏收缩(R.Fischmeister等人，J.Clin.Invest.，99，2710(1997)、P.Donzeau-Gouge等人，J.Physiol.，533，329(2001)及D.J.Paterson等人，Card.Res.，52，446(2001))；血小板聚集(R.J.Haslam等人，Biochem.J.，323.371(1997)；女性性唤起障碍(FSAD)(C.P.Wayman等人，欧洲专利申请公开第EP 10977707号及第1097706号)及缺氧性肺部血管收缩(J.Haynes等人，J.Pharm.Exp.Ther.，276.752(1996))等方面。已显示一种有效的腺苷脱胺酶抑制剂EHNA(赤-9-(2-羟基-3-壬基)腺嘌呤)选择性地抑制PDE 2，然而由于EHNA抑制PDE 2的低效能及抑制腺苷脱氨酶的高效能而使得其作为基于PDE 2的治疗剂的使用受到限制(R.Fischmeister等人，Mol.Pharm.，48，121(1995))。
现已发现下文式(I)的某些吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺衍生物抑制PDE 2，因而适用于治疗通过cAMP或cGMP细胞信号途径介导的生理失调。
美国专利第5,547,954号及第5,710,157号公开了某些2，4-二氨基-5，6-二取代-及5，6，7-三取代-5-脱氮蝶啶、其组合物及其在防治农作物中的昆虫方面的用途。
发明内容
本发明提供式(I)的化合物，
Figure C20048003767400051
其前药及该化合物或前药的药物上可接受的盐，其中n、X及Y如文中所定义；其药物组合物；其组合；及其用途。
发明详述
本发明提供式(I)的化合物，
Figure C20048003767400052
其前药及该化合物或前药的药物上可接受的盐，其中：
R1及R2为氢或甲氧基，其限制条件为R1及R2不均为氢或不均为甲氧基；
n为1、2、3或4；
X为一条键、O、S、C＝O、-N(R)-(其中R为氢或-(C1-C3)烷基)、-C(OH)-或-SO2；且
Y为苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并呋咱基、苯并呋喃基、苯并噻二唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、吡啶基、靛红基(isatinyl)、羟吲哚基、吲唑基、吲哚基、苯基、噻吩基或呋喃基；其中Y任选地独立地被一至三个卤素、三氟甲基、甲氧基、-C(＝O)CH3、氰基、-C(CH3)2OH、-CH(CH3)OH、-CH(CF3)OH、-C(C＝O)CF3、-SO2NH2、-C(＝O)OCH3、-CH2COOH、
Figure C20048003767400061
、噻唑基或噁二唑基取代。
式(I)化合物的通常优选亚群包括那些化合物，其中X为一条键且Y为苯并呋咱基、噻吩基、吡啶基或苯基，其中苯基任选地独立地被一或两个卤素、三氟甲基、甲氧基、-C(＝O)CH3、氰基、-C(CH3)2OH、-CH(CH3)OH、-CH(CF3)OH、-C(C＝O)CF3、-SO2NH2、-C(＝O)OCH3、-CH2COOH、噻唑基或噁二唑基取代。
式(I)化合物的尤其优选亚群包括那些化合物，其中X为一条键，n为2或3，且Y为噻吩基、吡啶基或苯基，其中苯基任选地独立地被一或两个甲氧基、卤素、-C(CH3)2OH、CH(CF3)OH或-C(C＝O)CF3取代。
环状基团可以多于一种的方式键合至另一基团。若未指明特定键合排列，则涵盖所有可能的排列。例如，术语“吡啶基”包括2-、3-或4-吡啶基，术语“噻吩基”包括2-或3-噻吩基。
本发明的化合物及中间体可根据IUPAC(国际纯化学及应用化学联盟)或CAS(化学文摘服务社(Chemical Abstracts Service)，Columbus，OH)命名法系统来命名。
各种含烃的部分的碳原子含量可通过标明该部分中碳原子最小及最大数目的前缀来表示，即前缀“-(Ca-Cb)烷基”表示包括整数“a”和“b”在内的“a”至“b”个碳原子的烷基部分。
术语“烷基”表示碳原子的直链或支链的单价链。烷基的实例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基及其类似基团。
术语“卤素”代表氯、氟、溴及碘。
术语“前药”是指作为药物前体的化合物，其在给药之后通过化学或生理学过程(例如通过使之达到生理pH或通过酶活性)于活体内释放药物。对于前药的制备及使用的讨论提供于T.Higuchi及W.Stella的“Prodrugs as Novel Delivery Systems”，ACS SymposiumSeries的第14卷和“Bioreversible Carriers in Drug Design”，Edward B.Roche编，American Pharmaceutical Association andPergamon Press(1987)。
术语“哺乳动物”意指包括例如狗、猫、牛、羊、马及人的动物。优选的哺乳动物包括任一性别的人。
术语“盐”是指式(I)化合物或其前药的有机及无机盐。这些盐可在化合物的最终分离及纯化过程中就地制备或通过使式(I)的化合物或其前药与合适的有机或无机酸或碱独立反应且分离由此所形成的盐来制备。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、乙酸盐、草酸盐、苯磺酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、月桂酸盐、硼酸盐、苯甲酸盐、乳酸盐、磷酸盐、甲苯磺酸盐、柠檬酸盐、顺丁烯二酸盐、反丁烯二酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、萘酸盐、甲磺酸盐、葡庚糖酸盐、乳糖酸盐及月桂基磺酸盐及其类似盐。其也可包括基于碱金属及碱土金属(诸如钠、锂、钾、钙、镁及其类似金属)及无毒铵，季铵的阳离子；及胺阳离子，包括，但不限于，铵、四甲基铵、四乙基铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺及其类似物。对于额外实例参见例如Berge等人，J.Pharm.Sci.，66，1-19(1977)。
术语“经取代”意指以不同的原子或分子替代分子上的氢原子。将替代氢原子的原子或分子称为“取代基”。
本文所用的术语”治疗有效量”意指可治疗所述病理症状的化合物的量。
术语“治疗”包括预防性(例如预防)及减轻性(例如康复或治愈)治疗或提供预防性或减轻性治疗的行为。
式(I)的化合物可含有不对称或手性中心，因而其可以不同的立体异构形式存在。预期式(I)化合物和前药及其混合物的所有立体异构形式，包括外消旋混合物，均构成本发明的一部分。另外，本发明包括所有几何及位置异构体。例如，若式(I)化合物或前药有一个(多个)双键，则顺式及反式形式及其混合物均包括在本发明范围内。
非对映异构体混合物可基于其物理化学差异通过本领域普通技术人员熟知的方法(诸如通过色谱法和/或分步结晶法)分离成其个别非对映异构体。可通过以下步骤分离对映异构体：通过使对映异构体混合物与合适的旋光化合物(例如醇)反应而将其转化为非对映异构体混合物，分离非对映异构体且将个别非对映异构体转化(例如水解)成相应的纯对映异构体。
式(I)的化合物及前药可与药物上可接受的溶剂(诸如水、乙醇及其类似物)以未溶剂化及溶剂化形式存在，预期本发明包括溶剂化及未溶剂化形式。
式(I)的化合物及前药也可能以平衡的互变异构体存在，所有这些形式都包括在本发明的范围内。
本发明也包括同位素标记的式(I)化合物，除以下事实外，它们与本文所述者等同，所述的事实是一或多个原子被具有不同于天然界通常发现的原子质量或质量数的原子质量或质量数的原子所替代。可掺入式(I)化合物的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，分别诸如2H、3H、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F及36Cl。含有上述同位素和/或其它原子的其它同位素的式(I)的化合物、其前药及这些化合物及前药的药物上可接受的盐意欲包括在本发明的范围内。
某些同位素标记的式(I)化合物，例如其中掺入诸如3H及14C的放射性同位素的化合物适用于化合物和/或底物的组织分布测定。氚化(即3H)及碳-14(即14C)同位素因其制备相对容易且易于检测而尤其优选。另外，以诸如氘(即2H)的较重的同位素取代可提供由更高代谢稳定性导致的某些治疗优势，例如活体内半衰期增加或所需剂量减少，因此在某些情况下可能是优选的。同位素标记的式(I)化合物通常可通过实施类似于下文所列流程和/或实施例中所述的程序、通过以同位素标记的试剂取代非同位素标记的试剂来制备。
在另一方面中，本发明提供治疗需要此治疗的哺乳动物中由PDE2介导的症状、疾病或病症的方法，该方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的式(I)化合物、其前药或该化合物或前药的药物上可接受的盐；或包含式(I)的化合物、其前药或该化合物或前药的药物上可接受的盐及药物上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。
根据本方法可治疗的优选症状、疾病或病症包括骨质疏松症、肺动脉高血压、女性性唤起障碍、记忆或认知减退、血小板聚集、脉管的血管生成、痴呆、癌症、心律失常、血栓症、骨折和/或骨质缺损、延迟愈合或不愈合的骨折、脊椎融合、骨向内生长、颜面重整或缺氧症。尤其优选症状为骨折和/或缺损。
在另一方面中，本发明提供用于抑制需要该抑制的哺乳动物中的PDE 2活性的方法，该方法包括向哺乳动物施用PDE 2抑制量的式(I)化合物、其前药或者该化合物或前药的药物上可接受的盐；或包含式(I)的化合物、其前药或者该化合物或前药的药物上可接受的盐及药物上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物。
式(I)的化合物、其前药及这些化合物及前药的药物上可接受的盐可以每天约0.001mg至约200mg范围内的剂量水平施用于哺乳动物。对于体重约70kg的正常成年人，通常优选剂量在每kg体重约0.01mg至约100mg范围内，然而，此通常剂量范围可视所治疗患者的年龄及体重、预期给药途径、给药的特定化合物及其类似因素而可能需要某些变化性。用于特定哺乳动物受试者的剂量范围及最佳剂量的确定是在得益于本公开的本领域普通技术人员的能力范围内。
在又一方面中，本发明提供包含PDE 2抑制剂、EP2选择性激动剂的组合，及药物上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物；及使用这些组合物治疗骨质疏松症、肺动脉高血压、女性性唤起障碍、记忆或认知减退、血小板聚集、脉管的血管生成、痴呆、癌症、心律失常、血栓症、骨折和/或骨质缺损、延迟愈合或不愈合的骨折、脊椎融合、骨向内生长、颜面重整或骨质缺氧症的方法。尤其优选症状为骨折和/或骨质缺损。
在又一方面中，本发明提供治疗需要该治疗的哺乳动物中的骨折和/或骨质缺损的方法，这些方法包括向哺乳动物施用治疗有效量的PDE 2抑制剂、其前药或者所述抑制剂或前药的药物上可接受的盐。
任何PDE 2抑制剂(包括本文的式(I)化合物)可用于本发明的方法及组合中。已知的PDE2抑制剂实例包括：EHNA、6-(3，4-二甲氧基-苄基)-1-[(1-羟基-乙基)-4-苯基-丁基]-3-甲基-1，5-二氢-吡唑并[3，4-d)嘧啶-4-酮(BAY-60-7550；美国专利第6,174,884号)，及9-(1-乙酰基-4-苯基-丁基)-2-(3，4-二甲氧基-苄基)-1，9-二氢嘌呤-6-酮(美国专利第5,861,396号)。PDE 2抑制剂的额外实例公开于美国专利第5,861,396号、第5,401,774号、第6,458,796号及第6,555,547号及PCT国际申请公开第98/32755号中。
任何EP2选择性受体激动剂可用于本发明的组合方面中，然而，公开于共同转让的美国专利第6,498,172号中的通常优选的EP2选择性受体激动剂种类包括式AA的化合物，
Figure C20048003767400101
式AA
其前药及其药物上可接受的盐，其中G、A、B、K、M、Q及Z如该专利中所定义。
通常优选的式AA化合物为(3-(((吡啶-3-磺酰基)-(4-嘧啶-5-基-苄基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((5-苯基-呋喃-2-基甲基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((吡啶-3-磺酰基)-(4-嘧啶-2-基-苄基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((吡啶-3-磺酰基)-(4-噻唑-2-基-苄基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((4-吡嗪-2-基-苄基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((4-环己基-苄基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸、(3-(((吡啶-3-磺酰基)-(4-吡啶-2-基-苄基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸、(3-(((吡啶-3-磺酰基)-(4-吡啶-3-基-苄基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸、(3-(((吡啶-3-磺酰基)-(4-吡啶-4-基-苄基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸、(3-(((吡啶-3-磺酰基)-(4-噻唑-2-基-苄基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸、5-(3-((吡啶-3-磺酰基)-(4-噻唑-2-基-苄基)-氨基)-丙基)-噻吩-2-羧酸、(3-(((2，3-二氢-苯并[1，4]二氧芑-6-基甲基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸及(3-((苯并呋喃-2-基甲基-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((4-丁基-苄基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-((苯磺酰基-(4-丁基-苄基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((4-丁基-苄基)-(1-甲基-1H-咪唑-4-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸及(3-(((4-二甲基氨基-苄基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((4-二甲基氨基-苄基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸及(3-(((4-叔丁基-苄基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸、反式-(3-(((3-(3，5-二氯-苯基)-烯丙基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯基)-乙酸、(3-(((2-(3，5-二氯-苯氧基)-乙基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸，其前药及这些化合物及前药的药物上可接受的盐。
尤其优选的式AA化合物为(3-(((4-叔丁基-苄基)-(吡啶-3-磺酰基)-氨基)-甲基)-苯氧基)-乙酸，其前药或者该化合物或前药的药物上可接受的盐。尤其优选的盐为钠盐。
另一通常优选的适用于本发明的组合方面的EP2选择性受体激动剂种类包括共同转让的美国专利第6,288,120号中所公开的式BB的化合物、其前药及药物上可接受的盐，
Figure C20048003767400121
式BB
其中A、B、K、M、Q及Z如该专利中所定义。
通常优选的式BB化合物为7-[(2’-羟甲基-联苯-4-基甲基)-甲磺酰基-氨基]-庚酸、7-{[4-(3-羟甲基-噻吩-2-基)-苄基]-甲磺酰基-氨基}-庚酸、7-[(2’-氯-联苯-4-基甲基)-甲磺酰基-氨基]-庚酸、7-{[4-(1-羟己基)-苄基]-甲磺酰基-氨基}-庚酸、7-[(4-丁基-苄基)-甲磺酰基-氨基]-庚酸、7-{[5-(1-羟己基)-噻吩-2-基甲基]-甲磺酰基-氨基}-庚酸、(3-{[(4-丁基-苄基)-甲磺酰基-氨基]-甲基}-苯基)-乙酸、7-{[3-(3-氯-苯基)-丙基]-甲磺酰基-氨基}-庚酸、7-{[3-(3，5-二氯-苯基)-丙基]-甲磺酰基-氨基}-庚酸、5-(3-{[3-(3-氯-苯基)-丙基]-甲磺酰基-氨基}-丙基)-噻吩-2-羧酸、7-{[2-(3，5-二氯-苯氧基)-乙基]-甲磺酰基-氨基}-庚酸、5-(3-{[2-(3，5-二氯-苯氧基)-乙基]-甲磺酰基-氨基}-丙基)-噻吩-2-羧酸、N-[2-(3，5-二氯-苯氧基)-乙基]-N-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-甲磺酰胺、反式-(4-{[3-(3，5-二氯-苯基)-烯丙基]-甲磺酰基-氨基}-丁氧基)-乙酸、反式-N-[3-(3，5-二氯-苯基)-烯丙基]-N-[6-(1H-四唑-5-基)-己基]-甲磺酰胺、反式-5-(3-{[3-(3，5-二氯-苯基)-烯丙基]-甲磺酰基-氨基}-丙基)-噻吩-2-羧酸、反式-[3-({[3-(3，5-二氯-苯基)-烯丙基]-甲磺酰基-氨基}-甲基)-苯基]-乙酸、其前药及这些化合物及前药的药物上可接受的盐。
尤其优选的式BB化合物为7-[(4-丁基-苄基)-甲磺酰基-氨基]-庚酸、其前药或者该化合物或前药的药物上可接受的盐。优选的盐为单钠盐。
适用于本发明的组合方面中的其它EP2选择性受体激动剂包括下列文献中描述的前列腺素受体激动剂：美国专利第6,531,485号、第6,376,533号、第6,124,314号、第5,877,211号、第5,716,835号、第5,698,598号及第5,462,968号；公开的美国专利申请第2002/187961号；N.Duckworth等人，Journal ofEndocrinology，172(2)，263-269(2002)；K.Tani等人，Synlett，2，239-242(2002)；K.Tani等人，Bioorganic&Medicinal Chemistry，10(4)，1107-1114(2002)；K.Tani等人，Bioorganic&MedicinalChemistry，10(4)，1093-1106(2002)；J.Michelet等人，EP 1175891A1；K.Tani等人，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，11(15)，2025-2028(2001)；J.Y.Crider等人，I nternationalJournal of Environmental Studies，58(1)，35-46(2000)；J.Y.Crider等人，Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics，17(1)，35-46(2001)；D.F.Woodward等人，Journal of OcularPharmacology and Therapeutics，11(3)，447-54(1995)；A.T.Nials等人，Cardiovascular Drug Reviews，11(2)，165-79(1993)及D.F.Woodward等人，Prostaglandins，46(4)371-83(1993)。
在本发明的组合方面中，可以每天每kg体重约0.001mg至约100mg的范围内的剂量水平向哺乳动物施用EP2选择性受体激动剂。对于体重约70kg的正常成年人，通常优选剂量在约0.01mg/kg至约50mg/kg体重范围内，然而，视所治疗受试者的年龄及体重、预期给药途径、给药的特定化合物及其类似因素而定，可能需要通常剂量范围的某些变化性。用于特定哺乳动物受试者的组合剂量范围及最佳剂量的确定是在得益于本公开的本领域普通技术人员的能力范围内。
适合非肠道方式注射的药物组合物可包含药物上可接受的无菌含水或非含水溶液、分散液、悬浮液或乳液及临时重构成无菌可注射溶液或分散液的无菌粉剂。合适的含水或非含水载体、赋形剂及稀释剂的实例包括水、乙醇、多元醇(诸如丙二醇、聚乙二醇、甘油及其类似物)、其合适的混合物、植物油(诸如橄榄油)及诸如油酸乙酯的可注射有机酯类。例如，可通过使用诸如卵磷脂的涂层，在分散液情况下通过维持所需粒子大小，及通过使用表面活性剂来维持合适的流动性。
本发明的药物组合物可进一步包含助剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂及分散剂。本发明组合物微生物污染的预防可以用各种抗细菌剂及抗真菌剂来完成，诸如对羟基苯甲酸酯类、氯丁醇、苯酚、山梨酸及其类似物。包括等渗剂，例如糖类、氯化钠及其类似物可能也比较理想。可注射药物组合物的延长吸收可通过使用例如单硬脂酸铝及明胶的能延迟吸收的物质来实现。
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、粉剂及颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与诸如柠檬酸钠或磷酸二钙的至少一种惰性常规药物赋形剂(或载体)混合，或与以下物质混合：(a)填充剂或增量剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、甘露醇及硅酸；(b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖及阿拉伯胶；(c)湿润剂，例如甘油；(d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸的某些复合硅酸盐及碳酸钠；(e)溶液阻滞剂，例如石蜡；(f)吸收促进剂，例如季铵化合物；(g)润湿剂，例如十六烷醇及单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如高岭土及膨润土：和/或(i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠或其混合物。在胶囊剂及片剂的情况下，这些剂型可进一步包含缓冲剂。
类似类型的固体组合物也可作为填充剂用于使用诸如乳糖或奶糖的赋形剂及高分子量的聚乙二醇及其类似物的软质或硬质填充的明胶胶囊剂中。
固体剂型诸如片剂、糖衣药丸、胶囊剂及颗粒剂可以涂层及外壳，诸如肠衣及本领域普通技术人员熟知的其它物质来制备。这些固体剂型也可包含遮光剂且也可为以延时、持续或受控方式释放活性化合物的组合物。可使用的包埋组合物的实例为聚合物质及蜡。若合适，则活性化合物也可为具有一或多种上文提及的赋形剂的微胶囊形式。
用于口服给药的液体剂型包括药物上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆剂及酏剂。除活性化合物外，液体剂型还可含有本领域中通用的惰性稀释剂，诸如水或其它溶剂；增溶剂及乳化剂，例如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油类(尤其为棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油及芝麻籽油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇及失水山梨糖醇脂肪酸酯类，或这些物质的混合物及其类似物。
除这些惰性稀释剂外，药物组合物也可包括助剂，诸如润湿剂、乳化剂及悬浮剂、甜味剂、调味剂及香味剂。
除活性化合物外，悬浮液可进一步包含悬浮剂，例如乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇及山梨糖醇酐酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝，膨润土、琼脂及黄蓍胶，或上文提及物质的混合物及其类似物。
用于直肠或阴道给药的组合物优选包括栓剂，其可通过将活性化合物与合适的非刺激性赋形剂或载体混合来制备，这些赋形剂或载体诸如可可脂、聚乙二醇或栓剂蜡，其在正常室温下为固体，但在体温下为液体，因此融化于直肠或阴道腔中由此释放活性成分。
用于局部给药的剂型可包括软膏、粉剂、喷雾剂及吸入剂。活性剂在无菌条件下与药物上可接受的载体、赋形剂或稀释剂及可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。
用于施用PDE 2抑制剂，包括式(I)化合物，以及包含PDE 2抑制剂及EP2选择性受体激动剂的组合治疗骨折的通常优选的组合物包括可注射的流动性组合物，其通过形成生物可降解固体或凝胶积存物、基质或植入物而在局部注射部位提供持续释放。该给药系统的实例包括缓释性、基于生物可降解聚合物的递送系统。参见例如美国公开专利申请第2003-0104031A1号。
该基于聚合物的递送系统通常包含溶解或分散于流动性、生物可降解的热塑性聚合物于有机溶剂中的溶液或分散液中的治疗有效剂。在注射组合物后，有机溶剂立即自注射部位扩散掉，引起聚合物沉淀或胶凝，从而使药剂截留于缓释性积存物中。随后药剂通过自聚合物基质扩散及聚合物基质的侵蚀而加以释放。该基质通过水解作用缓慢受侵蚀且最终自给药部位消失。聚合物的分子量及浓度可控制药剂的活体内释放及基质的降解速率。
该基于聚合物的递送系统在需要此系统的患者中以最小或降低的爆裂量，持续一段时间提供活性剂的持续释放。大爆裂量的药剂会因局部作用(例如刺激)而导致不良的局部耐受性且将会使可提供功效的药量最小化。该给药方法提供的优点在于其最小化或降低初始爆裂量，但仍在单一局部注射后持久地以有效量来释放药剂。
该聚合物系统是通过使流动性组合物与胶凝介质接触以使组合物凝结或胶凝成固体、微孔状聚合物基质或凝胶聚合物基质来制备。流动性组合物含有与合适的溶剂相组合的热塑性聚合物或共聚物。形成基质体的聚合物或共聚物为基本上不溶(优选为基本上完全不溶)于水及体液。基质体的不溶性使其能够作为用于药剂的受控释放的单一部位起作用。聚合物或共聚物在动物(例如哺乳动物)体内也为生物相容的及生物可降解的和/或生物可侵蚀的。生物降解使患者能够代谢且排泄聚合物基质，从而无需外科手术移除。由于流动性组合物及聚合物系统是生物相容的，因此聚合物系统的体内插入过程及存在不会在植入部位引起实质性组织刺激或坏死。本发明的组合物作为流动性组合物直接施用至身体组织。
用于掺入控释系统的固体基质中的合适热塑性聚合物为通过细胞作用和/或通过体液作用而呈药物相容及生物可降解的固体。适当热塑性聚合物的实例包括二醇及二羧酸或羟基羧酸的聚酯，诸如聚丙交酯、聚乙交酯及其共聚物。更优选聚合物包括在水解时会产生乳酸及乙醇酸的共聚物，聚乳酸共乙醇酸(缩写为PLGH)。该共聚物的释放爆裂量可通过添加聚乙二醇(PEG)以形成PEG封端的PLGH而进一步加以最小化。
优选材料包括聚丙交酯、聚乙交酯及其共聚物。使用这些聚合物可有利于聚合物系统，部分原因是由于其显示极佳的生物相容性。这些聚合物引起(即便有)很少组织刺激、炎症、坏死或毒性。在水的存在下，聚合物分别产生易于代谢的乳酸及乙醇酸。聚丙交酯也可结合乙交酯单体以提高所产生的聚合物降解。这些聚合物因其有效控制药剂自聚合物系统的释放速率，且因其导致药剂在给药部位的局部保留而也是优选的。
热塑性聚合物于组合物的有机溶剂中的溶解性或可混溶性将依据诸如结晶性、亲水性、氢键合能力及聚合物的分子量等因素而变化。因此，调节聚合物的分子量及在溶剂中的浓度以达到对于掺入的药剂所期望的可混溶性及所期望的释放速率。
热塑性聚合物、溶剂及药剂的流动性组合物包含稳定的流动性物质。优选地生成药剂于有机溶剂中的均质溶液。热塑性聚合物基本上可溶于有机溶剂中。将流动性组合物置于体内后，溶剂消散且聚合物固化或胶凝形成在固体或凝胶聚合物基质中具有药剂的聚合物系统。
对于某些优选聚合物，将聚合物或共聚物的分子量调节至约0.2至约0.4的固有粘度(I.V.以分升/克为单位)范围内用于有效持续释放促进骨生长的化合物。掺入的药剂的典型释放速率在约0.2(约8,000至约16,000分子量)或约0.3(约23,000至约45,000分子量)的I.V.下出现，但其可视组合物的特定组分而变化。对于多数系统，优选的是将聚合物分子量调节至约0.2I.V.，以有效持续释放药剂。
对于聚(DL-丙交酯)或丙交酯-共-乙交酯聚合物系统，所期望的分子量范围为约0.2至约0.4I.V.，优选为约0.2的I.V.。聚合物的分子量可通过常规方法调节。
尤其优选的市售热塑性聚合物包括如下：固有粘度为约0.2dl/g乳酸及乙醇酸呈1∶1比例的PLGH共聚物(可以Copolymer 
Figure C20048003767400171
RG502H购自Boehringer Ingelheim)(约12,000分子量)、固有粘度为约0.3dl/g、乳酸及乙醇酸呈1∶1比例的PLGH共聚物(可以Copolymer
Figure C20048003767400172
RG 503H购自Boehringer Ingelheim)(约37,000的分子量)、固有粘度为约0.4dl/g、乳酸及乙醇酸呈1∶1比例的PLGH共聚物(可以Copolymer RG 504H购自BoehringerIngelheim)(约47,000的分子量)及固有粘度为约0.79dl/g、乳酸及乙醇酸呈1∶1比例的经聚乙二醇(PEG)封端的PLGH共聚物(可以PLG-PEG购自Boehringer Ingelheim)(约52,000的分子量)。
热塑性组合物中使用的溶剂优选为药物上可接受的、生物相容的，且将就地消散于体液中，可按照它们在水中的溶解性范围自高可溶性至不可溶性来分类。这些溶剂优选在注射及植入部位引起(若有的话)相对很少的组织刺激或坏死。优选地，溶剂将具有至少最小程度的水溶性。当有机溶剂为水不溶性或最低限度地溶解于水中时，该溶剂将自流动性聚合物组合物缓慢分散。结果将成为在其寿命期中可含有变化量的残余溶剂的植入物。优选地，有机溶剂具有中等至高程度的水溶性以使其将易于自聚合物组合物分散至体液中。最优选地，溶剂自聚合物组合物迅速分散以快速形成固体植入物。伴随着溶剂的分散，热塑性聚合物凝结或胶凝成固体聚合物系统。优选地，当热塑性聚合物凝结时，溶剂分散引起聚合物系统内小孔的形成。因此，含有热塑性聚合物、溶剂及药剂的流动性组合物将形成多孔的固体聚合物系统。同样，当溶剂为微溶于水或不溶于水时，溶剂分散也可导致固体多孔植入物的形成，或者若某溶剂留存于植入物，则结果可形成具有较少孔或无孔的凝胶植入物。
合适的溶剂包括符合前述标准的液体有机化合物。通常优选溶剂包括N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)。
用于热塑性聚合物的流动性组合物的溶剂根据聚合物及溶剂的相容性及合适的溶解性加以选择。较低分子量的热塑性聚合物将通常比高分子量的聚合物更易溶解于溶剂中。因此，溶解于各种溶剂中的热塑性聚合物的浓度视聚合物的类型及其分子量的不同而不同。反之，较高分子量的热塑性聚合物将比极低分子量的热塑性聚合物更快趋于凝结、胶凝或固化。另外，较高分子量的聚合物比低分子量材料趋于产生更高的溶液粘度。因此，为了有利的注射功效，除有利的释放速率外，还要控制聚合物的分子量及在溶剂中的浓度。
自流动性组合物形成聚合物系统后，药剂逐渐掺入聚合物基质中。在插入流动性组合物以形成聚合物系统以后，药剂通过扩散及降解机制自基质释放至相邻组织或流体中。这些机制的操纵也可影响药剂以受控速率至环境中的释放。例如，聚合物基质可以被配制成在有效和/或实质量的药剂自基质中释放以后而降解。因此，药剂自基质中的释放可根据(例如)药剂在水中的溶解性、促进骨生长的化合物在基质内的分布或聚合物基质的尺寸、形状、多孔性、溶解性及生物可降解性及其它因素而变化。药剂自基质中的释放通过改变聚合物分子量而相对于其固有速率加以控制，从而提供所期望的释放持续时间及速率。
例如，药剂的优选剂型包括在给药前将用PLGH于NMP中的溶液来重构的冻干物(lyophile)。由一个注射器(注射器A)中的冻干化合物及第二个注射器(注射器B)中的PLGH于NMP中的溶液组成的该剂型称作A/B重构系统。两个注射器的内容物在部位处或接近部位处给药前立即混合在一起。重构以后，将内容物转移至用于释放的带刻度给药注射器中。所施用剂型将为溶液且将导致具有PLGH的化合物于NMP中以所期望的浓度分散，所期望的浓度例如为5和50mgA/ml(mgA/ml是指药剂的钠盐形式的游离酸当量)。剂型为用于局部给药的非肠道(例如皮下、肌内或髓内)持续释放性注射剂。设计缓释性聚合物基质中的该化合物(长效注射剂)用于在部位处或接近部位处给药，并非旨在用于静脉内给药。为提供剂型的足够储藏期稳定性，优选可以化合物的钠盐形式使用上述双注射器系统(A/B)。单相制剂(优选具有化合物的游离酸形式)是优选的替代制剂。基于药剂及聚合物的稳定性，药剂的无菌过滤及聚合物溶液的辐射优选可用于制造稳定的无菌产品。在一个实施方案中，剂型可以装有注射器的独立铝袋来制造及运输，在一个小袋中是装有冻干物形式的药剂的注射器而在另一个小袋中是装有聚合物溶液的注射器。用于冻干骨生长促进化合物的递送容器、系统及方法在公开的PCT国际专利申请公开第WO 01/73363号中有描述。其它给药方法包括通过注射至特定部位的局部给药或通过导管至某一部位的递送。额外实例可在2001年11月30日申请的美国临时申请第60/335,156号中找到。
在此公开的所有美国专利号中的教导均全文以引用方式并入本文中。
式(I)的化合物、其前药及这些化合物及前药的药物上可接受的盐可按照以下流程及实施例中所公开的示范性合成途径，以及通过相关技术领域的普通技术人员所知的或根据本公开显而易见的其它常规的有机制备方法加以制备。本流程中所公开的方法意在用于例示本发明的目的且不以任何方式理解为对本发明的限制。
流程1
Figure C20048003767400201
在流程1步骤1中，2，4-二氯-吡啶并[2，3-d]嘧啶(IV)与经适度取代的苄胺(V)在诸如三乙胺(TEA)或二异丙基乙胺(DIPEA)的三取代胺碱或者诸如吡啶的芳族碱的存在下反应。该反应通常于诸如甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)或异丙醇(IPA)的极性醇溶剂中在约0℃至约100℃范围的温度下进行。优选地，该反应在DIPEA的存在下，于乙醇中，于约室温(RT)下进行。在步骤2中，所得缩合产物(VI)随后与经适度取代的胺(VII)在诸如TEA或DIPEA的三取代胺碱或者诸如吡啶的芳族碱的存在下反应以获得化合物(I)。该反应通常在极性非质子性溶剂诸如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基亚砜(DMSO)、N-甲基吡咯烷酮或环丁砜的存在下，于约60℃至约250℃范围的高温下进行。优选地，该反应在DIPEA的存在下，于DMSO中，于约90℃至约120℃之间进行。
虽然流程1已作为分开的两步骤过程加以描述，其中中间体(VI)被分离且随后与胺(VII)反应，但是也发现可方便地以单一步骤制备(IV)和使其与胺(VII)就地反应。在该过程中，使用非质子性溶剂，优选为DMSO。该反应也在DIPEA的存在下，于DMSO中，于约90℃至约120℃之间的温度下进行。
制备实验
除非另有说明，否则所用的所有试剂均自市面购得。除非另有说明，否则下列实验性缩写具有指定含义：
AcOH-乙酸
dec-分解
DMAP-4-二甲基氨基吡啶
EtOAc-乙酸乙酯
hr-小时
LAH-氢化锂铝
min-分钟
MS-质谱分析
NMR-核磁共振
THF-四氢呋喃
p-TsOH-对甲苯磺酸
制备1
(2-氯-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-(3，5-二甲氧基-苄基)-胺
在室温下向2，4-二氯-吡啶并[2，3-d]嘧啶(1.3g，6.7mmol)及3，5-二甲氧基苄胺(1.1g，6.7mmol)于30mL EtOH中的经搅拌溶液中添加TEA(4mL，28.7mmol)。过滤所形成的沉淀物且用冷EtOH继之用己烷洗涤以产生1.8g的固体状标题化合物(82％)。mp185℃(dec)。1H-NMR(DMSO-d6)δ：9.5(t，1H)、8.9(dd，1H)、8.7(dd，1H)、7.5(m，1H)、6.5(d，2H)、6.4(t，1H)、4.6(d，2H)、3.7(s，6H)。MS(m/z，％)：331(100)。
制备2
(2-氯-吡啶并[2，3-d]嘧啶-4-基)-(3，4-二甲氧基-苄基)-胺
该化合物以类似于制备1中所述的方式使用合适的起始物质制备。1H-NMR(DMSO-d6)δ：9.5(t，1H)、8.9(dd，1H)、8.7(dd，1H)、7.0(s，1H)、6.9(d，2H)、4.6(d，2H)、3.7(s，3H)、3.7(s，3H)。MS(m/z，％)：331(100)。
制备3
2-(4-氨基甲基-苯基)-丙-2-醇
在0℃下向4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苄腈(2.0g，12.4mmol)于30mL THF中的经搅拌溶液中逐滴添加于THF(26mL，26.1mml)中的1.0N LAN。允许混合物温热至室温且接着回流20min。然后将混合物冷却至0℃且以逐滴添加的5mL MeOH猝灭。用300mL氯仿稀释混合物且用水(1×80mL)洗涤、经硫酸镁干燥且浓缩以产生1.9g(95％)固体状的标题化合物。1H-NMR(CDCl3)δ：7.45(d，2H)、7.26(d，2H)、3.83(s，2H)、1.57(s，6H)。GC-MS(m/e，％)：164(M+，15)、150(80)、132(75)、106(100)。
制备4
3-(4-乙酰基-苯基)-丙腈
在75℃下将4-(2-溴乙基)苯乙酮(2.0g，8.8mmol)与KCN(0.6g，8.8mmol)于30mL DMSO中的混合物加热4hr。用水稀释混合物且用EtOAc萃取。用水及盐水相继洗涤有机萃取物、干燥且浓缩以产生油状物。在硅胶上进行色谱，用40％EtOAc/己烷洗脱，产生0.8g的油状物。1H-NMR(CD3OD)δ：7.9(d，2H)、7.4(d，2H)、3.3(t，2H)、2.8(t，2H)、2.6(s，3H)。GC-MS(m/e，％)：173(M+，20)、158(100)。
制备5
3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-丙腈
在-40℃下向3M甲基氯化镁于THF(3.3mL，9.8mmol)中的、进一步用10mL THF稀释的经搅拌溶液中逐滴添加3-(4-乙酰基-苯基)-丙腈(0.7g，3.9mmol)于10mL THF中的溶液。允许反应混合物缓慢温热至室温过夜，冷却至0℃，然后以逐滴添加的含水AcOH猝灭。反应混合物用水洗涤且用EtOAc萃取。用水及盐水相继洗涤有机萃取物、干燥且浓缩以产生0.8g的油状物。1H-NMR(CD3OD)δ：7.4(d，2H)、7.2(d，2H)、2.9(t，2H)、2.7(t，2H)、1.5(s，6H)。GC-MS(m/e，％)：189(M+，5)、174(100)。
制备6
2-[4-(3-氨基-丙基)-苯基]-丙-2-醇
在0℃下向1M LAH于THF中的、进一步用20mL THF稀释的经搅拌溶液中逐滴添加3-[4-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]丙腈(0.8g，4.0mmol)于10mL THF中的溶液。允许反应物缓慢温热至室温，接着回流4hr。反应混合物然后冷却至0℃且用缓慢地逐滴添加的MeOH猝灭。混合物用氯仿稀释且用水洗涤。有机萃取物通过硅藻土过滤，浓缩滤液，然后用乙酸乙酯稀释、干燥且浓缩以产生0.5g的油状物。1H-NMR(CD3OD)δ：7.4(d，2H)、7.1(d，2H)、2.6(m，4H)、1.7(m，2H)、1.5(s，6H)。MS(m/e，％)：194(M++1，100)、176(90)。
制备7
3-[4-(2-甲基-[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙腈
将3-(4-乙酰基-苯基)丙腈(2.2g，13mmol)、乙二醇(2.8mL，51mmol)与催化量的p-TsOH(约200mg)于100mL甲苯中的混合物经Dean-Stark分水器回流18hr。混合物用EtOAc稀释且用5％碳酸氢钠溶液、水及盐水相继洗涤、干燥(MgSO4)且浓缩以产生油状物。在硅胶上进行色谱，用EtOAc/己烷溶液洗脱，产生2.5g的油状物。1H-NMR(CDCl3)δ：7.4(d，2H)、7.2(d，2H)、4.0(m，2H)、3.8(m，2H)、2.9(t，2H)、2.6(t，2H)、1.6(s，3H)。MS(m/e，％)：216(M+-1，1)、202(100)。
制备8
3-[4-(2-甲基[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙胺
向3-[4-(2-甲基-[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙腈(2.4g，11mmol)于30mL THF的经搅拌溶液中逐滴添加1M LAH于THF中的溶液。允许混合物温热至室温，然后回流1hr。将混合物冷却至0℃然后用逐滴添加的MeOH猝灭。混合物用氯仿稀释且用水洗涤。所得悬浮液通过硅藻土过滤且分离滤液层。有机萃取物经MgSO4干燥且浓缩以产生2.4g的油状物，1H-NMR(CDCl3)δ：7.4(m，2H)、7.1(d，2H)、4.0(m，2H)、3.8(m，2H)、2.7(m，2H)、2.6(m，2H)、1.7(m，2H)、1.6(s，3H)。MS(m/e，％)：221(M+，10)、206(60)、189(100)。
制备9
2，2，2-三氟-1-(4-碘-苯基)-乙醇
在室温下向4-碘苯甲醛(2.0g，8.6mmol)于20mL THF的经搅拌溶液中添加三甲基(三氟甲基)硅烷于THF(19mL，9.5mmol)中的0.5M溶液，继之添加四丁基氟化铵(112mg，0.4mmol)。混合物于室温下搅拌过夜，倾入0.1N盐酸中且用EtOAc萃取。有机萃取物依次用水及盐水洗涤、干燥(MgSO4)且浓缩以产生2.6g的油状物。1H-NMR(CDCl3)δ：7.7(d，2H)、7.2(d，2H)、5.0(m，1H)、2.7(d，1H)。MS(m/e，％)：302(M+，100)、233(100)。
制备10
2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮
在室温下向2，2，2-三氟-1-(4-碘-苯基)-乙醇(2.6g，8.5mmol)、N-炔丙基邻苯二甲酰亚胺(1.6g，8.5mmol)、二氯双(三苯基膦)钯(298mg，0.43mmol)及碘化铜(I)(82mg，0.43mmol)于20mL THF的经搅拌悬浮液中添加5ml TEA。混合物于氮气流下短暂除去空气且然后回流6hr。混合物用氯仿稀释、用水洗涤、经MgSO4干燥且浓缩以产生固体。该固体用EtOAc研制以产生2.2g的固体。1H-NMR(CDCl3)δ：7.9(m，2H)、7.7(m，2H)、7.5(d，2H)、7.4(d，2H)、5.0(m，1H)、4.7(s，2H)。MS(m/e，％)：359(M+，100)。
制备11
2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮
在室温下将2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮(2.2g，6.1mmol)及10％Pd/C(220mg)于150mL EtOH及150mL THF中的混合物在50psi氢气条件下于Parr装置中振荡2hr。然后添加额外的220mg的10％Pd/C，在室温、50psi氢气条件下振荡混合物另外的2hr。随后添加额外的220mg的10％Pd/C，在室温、50psi氢气条件下振荡混合物过夜。混合物通过硅藻土过滤且浓缩滤液以产生油状物。在硅胶上进行色谱，用EtOAc/己烷洗脱，产生1.8g的油状物。1H-NMR(CDCl3)δ：7.8(m，2H)、7.7(m，2H)、7.3(d，2H)、7.2(d，2H)、4.9(m，1H)、3.7(t，2H)、2.7(t，2H)、2.0(m，2H)。MS(m/e，％)：363(M+，15)、345(35)、325(50)、161(100)。
制备12
1-[4-(3-氨基-丙基)-苯基]-2，2，2-三氟-乙醇
在室温下向2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮(1.8g，5.0mmol)于50mL MeOH中的经搅拌悬浮液中添加水合肼(0.46ml，15.0mmol)。在室温下搅拌混合物18hr。过滤反应混合物且浓缩滤液以产生油状物。该油状物用氯仿研制、过滤且浓缩滤液以产生1.0g的油状物。1H-NMR(CDCl3)δ：7.3(d，2H)、7.2(d，2H)、5.0(m，1H)、2.6(m，2H)、2.5(m，2H)、1.6(m，2H)。MS(m/e，％)：363(M+，10)、216(100)。
制备13
三氟-甲磺酸苯并[1，2，5]噁二唑-5-基酯
在-78℃下向5-羟基苯并呋咱(1.8g，13.0mmol)、TEA(2.4mL，33.0mmol)及DMAP(79mg，7.0mmol)于40mL二氯甲烷的经搅拌溶液中逐滴添加三氟甲磺酸酐(2.8mL，17.0mmol)于10mL二氯甲烷中的溶液。允许混合物经3hr缓慢温热至室温，用二氯甲烷稀释且用水洗涤。干燥有机萃取物且浓缩以产生油状物。在硅胶上进行色谱，用二氯甲烷洗脱，得到3.1g的油状物。1H-NMR(CDCl3)δ：8.0(dd，1H)、7.8(dd，1H)、7.3(dd，1H)。MS(m/e，％)：268(M+，60)、146(60)、69(100)。
制备14
2-(苯并[1，2，5]噁二唑-5-基-丙-2-炔基)-异吲哚-1，3-二酮
该化合物以类似于制备10的方式使用合适的起始物质加以制备。1H-NMR(CDCl3)δ：8.2(s，1H)、8.0(dd，1H)、7.9(m，2H)、7.8(m，2H)、7.5(dd，2H)、4.7(s，2H)。MS(m/e，％)：303(M+，100)。
制备15
2-(3-苯并[1，2，5]噁二唑-5-基-丙基)-异吲哚-1，3二酮
该化合物以类似于制备11的方式使用合适的起始物质制备。1H-NMR(CDCl3)δ：7.8(m，2H)、7.7(m，3H)、7.6(s，1H)、7.2(m，1H)、3.8(t，3H)、2.8(t，2H)、2.1(m，2H)。MS(m/e，％)：307(M+，40)、290(30)、272(20)、160(100)。
制备16
3-苯并[1，2，5]噁二唑-5-基-丙胺
该化合物以类似于制备12的方式使用合适的起始物质制备。1H-NMR(DMSO-d6)：δ7.9(m，2H)、7.7(m，1H)、7.5(m，1H)、2.7(m，2H)、2.5(m，2H)、1.7(m，2H)。MS(m/e，％)：177(M+，40)、160(100)。
制备17
三氟-甲磺酸苯并噻唑-6-基酯
该化合物以类似于制备13的方式使用合适的起始物质制备。1H-NMR(CDCl3)δ：9.1(s，1H)、8.2(d，1H)、7.9(d，1H)、7.4(dd，1H)。MS(m/e，％)：283(M+，80)、150(100)。
制备18
2-(3-苯并噻唑-6-基-丙-2-炔基)-异吲哚-1，3-二酮
该化合物以类似于制备10的方式用三氟-甲磺酸苯并噻唑-6-基酯(制备17)代替2，2，2-三氟-1-(4-碘-苯基)-乙醇来制备。1H-NMR(d6-DMSO)δ：9.4(s，1H)、8.3(d，1H)、8.0(d，2H)、7.9(m，1H)、7.8(m，2H)、7.5(dd，1H)、4.6(s，2H)。MS(m/e，％)：318(M+，100)。
制备19
2-(3-苯并噻唑-6-基-丙基)-异吲哚-1，3-二酮
该化合物以类似于制备11的方式用2-(3-苯并噻唑-6-基-丙-2-炔基)-异吲哚-1，3-二酮(制备18)代替2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮(制备10)来制备。1H-NMR(CDCl3)δ：8.9(s，1H)、8.0(d，1H)、7.8(m，2H)、7.7(m，2H)、7.3(dd，1H)、3.8(t，2H)、2.8(t，2H)、2.1(m，2H)。MS(m/e，％)：322(M+，80)、174(40)、162(100)。
制备20
3-苯并噻唑-6-基-丙胺
该化合物以类似于制备12的方式用2-(3-苯并噻唑-6-基-丙基)-异吲哚-1，3-二酮(制备19)替代2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮(制备11)来制备。MS(m/e，％)：192(M+，20)、175(100)。
制备21
2-(3-碘-苯基)-2-甲基-[1，3]二氧戊环
将3-碘苯乙酮(3.0g，12mmol)、乙二醇(2.7mL，48mmol)及对甲苯磺酸(30mg)于50mL甲苯中的混合物在Dean-Stark分水器内回流18hr。混合物用EtOAc稀释且用5％碳酸氢钠溶液、水及盐水相继洗涤、经MgSO4干燥且浓缩以产生油状物。在硅胶上进行色谱，用EtOAc/己烷洗脱，产生3.1g的油状物。1H-NMR(CDCl3)δ：7.8(m，1H)、7.6(dd，1H)、7.4(dd，1H)、7.0(m，1H)、4.0(m，2H)、3.7(m，2H)、1.6(s，3H)。MS(m/e，％)：290(M+，20)、275(100)。
制备22
2-{3-[3-(2-甲基-[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮
该化合物以类似于制备10的方式用2-(3-碘-苯基)-2-甲基-[1，3]二氧戊环(制备21)代替2，2，2-三氟-1-(4-碘-苯基)-乙醇来制备。1H-NMR(CDCl3)δ：7.9(m，2H)、7.7(m，2H)、7.5(s，1H)、7.4(m，1H)、7.3(m，1H)，7.2(m，1H)、4.7(s，2H)、4.0(m，2H)、3.7(m，2H)、1.6(s，6H)。MS(m/e，％)：347(M+，15)、332(100)。
制备23
2-{3-[3-(2-甲基-[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮
该化合物以类似于制备11的方式用2-{3-[3-(2-甲基-[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮(制备22)代替2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮(制备10)来制备。1H-NMR(CDCl3)δ：7.8(m，2H)、7.7(m，2H)、7.2(m，4H)、7.1(d，1H)、4.0(m，2H)、3.7(m，4H)、2.6(t，2H)、2.0(m，2H)、1.6(s，3H)。MS(m/e，％)：351(M+，5)、336(100)。
制备24
3-[3-(2-甲基-[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙胺
该化合物以类似于制备12的方式用2-{3-[3-(2-甲基-[1，3]二氧戊环-2-基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮(制备23)代替2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮来制备。1H-NMR(CDCl3)δ：7.3(m，3H)、7.1(dd，1H)、4.0(m，2H)、3.8(m，2H)、2.7(t，2H)、2.6(t，2H)、1.8(m，2H)、1.6(s，3H)。MS(m/e，％)：221(M+，20)、206(60)、189(100)。
制备25
2-(3-碘-苯基)-丙-2-醇
在0℃下向甲基氯化镁(65mmol)于100mL THF的经搅拌溶液中逐滴添加3-碘苯乙酮(4.0g，16.3mmol)。允许反应混合物温热至室温，然后冷却至0℃，添加额外的等量甲基氯化镁。允许混合物温热至室温且搅拌5hr。反应混合物用MeOH猝灭、用水稀释、用冰AcOH酸化且用二氯甲烷萃取。用5％碳酸氢钠溶液洗涤有机萃取物，然后浓缩。在硅胶上进行色谱，用二氯甲烷洗脱，产生油状物，其经静置而凝固。MS(m/e，％)：262(M+，80)、247(100)。
制备26
2-{3-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮
该化合物以类似于制备10的方式用2-(3-碘-苯基)-丙-2-醇(制备25)代替2，2，2-三氟-1-(4-碘-苯基)-乙醇来制备。MS(m/e，％)：319(M+，90)、301(80)、160(100)。
制备27
2-{3-[3-(1-羟基-甲基-乙基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮
该化合物以类似于制备11的方式用2-{3-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮(制备26)代替2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮(制备10)来制备。MS(m/e，％)：305(M+-H2O，80)、145(100)。
制备28
2-[3-(3-氨基-丙基)-苯基]-丙-2-醇
该化合物以类似于制备12的方式用2-{3-[3-(1-羟基-1-甲基-乙基)-苯基)-丙基}-异吲哚-1，3-二酮(制备27)代替2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮来制备。MS(m/e，％)：193(M+，30)、162(60)、145(100)。
制备29
4-[3-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-丙-1-炔基]-苄腈
该化合物以类似于制备10的方式使用合适的起始物质来制备。1H-NMR(CDCl3)δ：7.8(m，6H)、7.6(d，2H)、4.6(s，2H)。MS(m/e，％)：286(M+，100)。
制备30
4-[3-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-丙基]-苄腈
该化合物以类似于制备11的方式用4-[3-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-丙-1-炔基]-苄腈(制备29)代替2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙-2-炔基}-异吲哚-1，3-二酮(制备10)来制备。1H-NMR(CDCl3)δ：7.8(dd，2H)、7.7(dd，2H)、7.5(d，2H)、7.3(d，2H)、3.7(t，2H)、2.7(t，2H)、2.0(m，2H)。MS(m/e，％)：290(M+，60)、161(100)。
制备31
4-(3-氨基-丙基)-苄腈
该化合物以类似于制备12的方式用4-[3-(1，3-二氧代-1，3-二氢-异吲哚-2-基)-丙基]-苄腈(制备30)代替2-{3-[4-(2，2，2-三氟-1-羟基-乙基)-苯基]-丙基}-异吲哚-1，3-二酮来制备。1H-NMR(CDCl3)δ：7.5(d，2H)，7.3(d，2H)，2.7(m，4H)，1.8(m，2H)。MS(m/e，％)：160(M+，20)、143(100)。
制备32
2-氯-3，4-二甲氧基-苯甲醛肟
将2-氯-3，4-二甲氧基苯甲醛(1.5g，7.5mmol)、盐酸羟胺(650mg，9.4mmol)及乙酸钠(1.5g，18.8mmol)于30ml MeOH及15ml水中的混合物在65℃下加热18hr。该混合物用水稀释且用EtOAc萃取。有机萃取物用水及盐水相继洗涤，经MgSO4干燥且浓缩以产生1.7g的固体。1H-NMR(CDCl3)δ：8.5(s，1H)、7.6(d，1H)、6.8(d，1H)、3.9(s，3H)、3.8(s，3H)。MS(m/e，％)：215(M+，40)、199(100)。
制备33
2-氯-3，4-二甲氧基-苄胺
在0℃下向制备32的产物(1.7g，7.8mmol)于40mL THF中的经搅拌溶液中缓慢地逐滴添加LAH于THF中的1M溶液(17mL，17mmol)。允许混合物缓慢温热至室温，然后回流2hr。将混合物冷却至0℃且用缓慢地逐滴添加的MeOH来猝灭反应。混合物用水稀释且用氯仿萃取。所得乳液通过硅藻土过滤且分离滤液层。有机萃取物用水洗涤、干燥(MgSO4)且浓缩以产生1.1g的油状物。MS(m/e，％)：202(M+，100)。
制备34
3-乙氧基-4-甲氧基-苯甲醛肟
该化合物以类似于制备32的方式使用合适的起始物质制备。1H-NMR(CDCl3)δ：8.1(s，1H)、7.2(d，1H)、7.0(m，1H)、6.8(d，1H)、4.1(q，2H)、3.9(s，3H)、1.5(t，3H)。MS(m/e，％)：195(M+，100)。
制备35
3-乙氧基-4-甲氧基-苄胺
该化合物以类似于制备33的方式使用合适的起始物质制备。1H-NMR(CDCl3)δ：6.9(s，1H)、6.8(s，2H)、4.1(q，2H)、3.8(s，2H)、1.5(t，3H)。MS(m/e，％)：181(M+，100)。
制备36
2-(3-吡啶-4-基-丙基)-异吲哚-1，3-二酮
在0℃下向4-吡啶丙醇(2.0g，14.5mmol)、邻苯二甲酰亚胺(2.1g，14.5mmol)及三苯基膦(4.9g，15.2mmol)于50mL THF中的经搅拌溶液中逐滴添加偶氮二羧酸二乙酯(2.5mL，16.0mmol)。允许混合物缓慢温热至室温，然后搅拌过夜。混合物用0.1N的盐酸稀释且用乙醚洗涤。含水萃取物以6N氢氧化钠来碱化且用EtOAc萃取。有机萃取物用1N氢氧化钠及水洗涤、经MgSO4干燥且浓缩以产生1.8g固体。1H-NMR(CDCl3)δ：8.5(s，2H)、7.8(m，2H)、7.7(m，2H)、7.2(m，2H)、3.7(t，2H)、2.7(t，2H)、2.0(m，2H)。
制备37
3-吡啶-4-基-丙胺
该化合物以类似于制备12的方式使用制备36的标题化合物制备。1H-NMR(CDCl3)δ：8.4(m，2H)、7.1(m，2H)、2.7(t，2H)、2.6(t，2H)、1.8(m，2H)。MS(m/e，％)：136(M+，30)、119(35)、107(100)。
式(I)的化合物如下列实施例中所述来制备。
实施例1
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(2-吡啶-2-基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
在90℃下将制备1的标题化合物(174mg，0.5mmol)、2-(2-氨基乙基)-吡啶(386mg，3.2mmol)及DIPEA(0.2mL，1.1mmol)于1mL的DMSO中的混合物加热18hr。将混合物倾入水中且用二氯甲烷萃取。有机萃取物用盐水洗涤、经MgSO4干燥且浓缩。所得残余物用EtOAc研制以产生83mg(40％)的标题化合物。m.p.157-8℃。1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.6(dd，1H)、8.5(d，1H)、8.4(dd，1H)、7.7(m，1H)、7.2(m，1H)、7.0(m，2H)、6.5(m，2H)、6.3(m，1H)、4.6(m，2H)、3.7(s，6H)、3.6(m，2H)、3.0(m，2H)。MS(m/z，％)：417(100)。C23H24N6O2分析的计算值：C，66.3；H，5.8；N，20.2。实测值：C，65.3；H，6.3；N，18.3。
实施例2至5的化合物以类似于实施例1中所述的方式使用合适的起始物质制备。
实施例2
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(2-吡啶-3-基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.185-6℃。C23H24N6O2分析的计算值：C，66.3；H，5.8：N，20.2。实测值：C，64.5；H，5.6；N，19.6。
实施例3
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(2-吡啶-4-基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.234-5℃。C23H24N6O2分析的计算值：C，66.3；H，5.8；N，20.2。实测值：C，66.0；H，5.6；N，20.0。
实施例4
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-2-吡啶-3-基甲基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.222-3℃。C22H22N6O2分析的计算值：C，65.7；H，5.5；N，20.9。实测值：C，65.5；H，5.5；N，20.8。
实施例5
N2-N4-双-(3，5-二甲氧基-苄基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.159-160℃。C25H27N5O4分析的计算值：C，65.1；H，5.9；N，15.2。实测值：C，65.3；H，5.9；N，15.1。
实施例6
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-[2-(4-甲氧基-苯基)-乙基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
在90℃下将制备1的标题化合物(100mg，0.5mmol)、对甲氧基苯乙胺(89μL，0.61mmol)及DIPEA(105μL，0.61mmol)于0.8mL的DMSO中的混合物加热18hr。通过直接注射于反相制备性HPLC(Shimadzu Corp.；Kyoto，Japan)上、使用含0.1％氢氧化铵的乙腈/水的阶式梯度作为洗脱液自粗反应混合物中分离及纯化该化合物。将含所期望产物的级分合并、浓缩且自IPA中再结晶残余物，产生80mg(60％)的标题化合物。m.p.88-9℃。C25H27N5O3分析的计算值：C，67.4；H，6.1；N，15.7。实测值：C，67.0；H，6.3；N，15.2。
实施例7至31的化合物以类似于实施例6中所述的方式使用合适的起始物质制备。注意所用的反应和/或纯化条件的具体例外情况。
实施例7
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(3-苯基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
1H-NMR(DMSO-d6)：8.6(dd，1H)、8.4(d，1H)、7.2(m，br，3H)、7.1(m，br，2H)、7.0(m，br，1H)、6.5(s，br，2H)、6.3(s，br，1H)、4.6(m，br，2H)、3.7(s，br，6H)、2.6(m，br，2H)、1.8(m，br，2H)、1.7(m，br，2H)。MS(m/z，％)：417(100)。MS(m/z，％)：430(100)。
实施例8
N2-[2-(4-氯-苯基)-乙基]-N4-(3，5-二甲氧基-苄基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.85-90℃。C24H24N5O2Cl分析的计算值：C，64.1；H，5.4；N，15.6。实测值：C，63.6；H，5.7：N，15.3。
实施例9
N2-苄基-N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2.4-二胺
m.p.84-85℃。C23H23N5O2分析的计算值：C，68.8；H，5.8；N，17.4。实测值C，68.5；H，6.0：N，17.4。
实施例10
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(2-噻吩-2-基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.120-1℃。C22H23N5O2S分析的计算值：C，62.7；H，5.5；N，16.6。实测值C，62.2；H，6.0：N，15.6。
实施例11
2-(4-{[4-(3，5-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-甲基}-苯基)-丙-2-醇
m.p.105-9℃。C26H29N5O3分析的计算值：C，68.0；H，6.4；N，15.2。实测值：C，67.7：H，6.6：N，14.4。
实施例12
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-2-苯乙基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.112-4℃。C24H25N5O2分析的计算值：C，69.4，H，6.1；N，16.9。实测值：C，68.5；H，6.9；N，15.3。
实施例13
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-[2-(3，5-二甲氧基-苯基)-乙基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.95-100℃。C26H29N5O4分析的计算值：C，65.7；H，6.2；N，14.7。实测值：C，65.5；H，6.6；N，14.5。
实施例14
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-[2-(3-氟-苯基)-乙基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.227-8℃。C24H24N5O2F分析的计算值：C，66.5；H，5.6；N，16.2。实测值：C，66.6；H，5.6；N，16.2。
实施例15
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-[2-(2-氟-苯基)-乙基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.220-2℃。C24H24N5O2F分析的计算值：C，66.5；H，5.6；N，16.2。实测值：C，66.4；H，5.5；N，16.1。
实施例16
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.225-6℃。C24H24N5O2F分析的计算值：C，66.5；H，5.6；N，16.2。实测值：C，66.4；H，5.6；N，16.2。
实施例17
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-苯乙基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.217-8℃。C24H25N5O2分析的计算值：C，69.4；H，6.1；N，16.9。实测值：C，69.4；H，6.0；N，16.8。
实施例18
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(4-苯基-丁基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.194-5℃。C26H29N5O2分析的计算值：C，70.4；H，6.6；N，15.8。实测值：C，70.5；H，6.6；N，15.9。
实施例19
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(2-苯氧基-乙基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.227-8℃。C24H25N5O3分析的计算值：C，66.8；H，5.8；N，16.2。实测值：C，66.7；H，5.7；N，16.2。
实施例20
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(2-三氟甲基-苄基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
m.p.227-8℃。C24H22N5O2F3分析的计算值：C，61.4；H，4.7；N，14.9。实测值：C，60.6；H，4.9；N，14.8。
实施例21
2-(4-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-丙-2-醇
浓缩含所期望粗产物的反相制备性HPLC级份且自EtOAc中再结晶残余物。m.p.198-9℃。C28H33N5O3分析的计算值：C，69.0；H，6.8；N，14.4。实测值：C，68.7；H，6.9；N，14.3。
实施例22
2-(4-{3-[4-(3，5-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-丙-2-醇
(非晶形固体)m.p.70-5℃。1H-NMR(DMSO-d6)：8.6(dd，1H)、8.4(d，1H)、7.3(m，br，2H)、7.1(m，br，2H)、7.0(m，br，2H)、6.5(s，br，2H)、6.3(s，br，1H)、4.6(m，br，2H)、3.7(s，br，6H)、2.6(m，br，2H)、1.8(m，br，2H)、1.7(m，br，2H)、1.4(s，6H)。MS(m/z，％)：430(100)。MS(m/z，％)：488(M++1，100)、470(50)。C28H33N5O3分析的计算值：C，69.0；H，6.8；N，14.4。实测值：C，67.1；H，7.0；N，12.1。
实施例23
1-(4-{[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-甲基}-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇
浓缩含所期望粗产物的反相制备性HPLC级分且自乙腈/水中再结晶残余物。m.p.121-2℃。C25H24N5O3F3分析的计算值：C，60.1：H，4.8；N，14.0。实测值：C，58.0；H，5.0；N，13.4。
实施例24
1-(4-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶2-基氨基]-丙基}-苯基)-乙酮
将含粗产物的反应混合物倾入水中且过滤所得沉淀物。将残余物溶解于30mL的MeOH中且添加10mL的1N盐酸。在室温下将混合物搅拌4hr、浓缩、用5％的碳酸氢钠溶液中和且用二氯甲烷萃取。合并有机萃取物且用盐水洗涤，经MgSO4干燥且浓缩。粗产物通过如实施例6中所述的反相HPLC纯化。将含所期望产物的级分合并、浓缩且自乙腈/水中再结晶残余物以产生固体，m.p.184-5℃。C27H29N5O3分析的计算值：C，68.8；H，6.2；N，14.9。实测值：C，8.7；H，6.0；N，14.6。
实施例25
1-(4-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-2，2，2-三氟-乙醇
m.p.222-4℃。1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.6(dd，1H)、8.4(dd，1H)、7.4(m，br，2H)、7.3(m，1H)、7.0(m，br，2H)、6.8(s，br，2H)、6.7(d，1H)、5.0(m，br，1H)、4.6(s，br，2H)、3.7(m，6H)、3.3(m，2H)、2.6(m，br，2H)、1.8(m，br，2H)。MS(m/z，％)：528(M+，100)。
实施例26
N2-3-(苯并[1，2，5]噁二唑-5-基-丙基)-N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
该产物经硅胶色谱法通过用于2N氨水/二氯甲烷中的2.5％MeOH洗脱分离以产生粗固体。用Et OAc研制产生固体。m.p.191-3℃。1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.6(dd，1H)、8.4(dd，1H)、7.9(m，br，1H)、7.7(m，1H)、7.5(m，br，1H)、7.0(m，br，2H)、6.8(m，2H)、4.6(m，br，2H)、3.7(m，6H)、3.4(m，2H)、2.7(m，br，2H)、1.9(m，br，2H)。MS(m/z，％)：472(M+，100)。
实施例27
N2-3-(苯并噻唑-6-基-丙基)-N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
该产物经硅胶色谱法通过用于2N氨水/二氯甲烷中的2.5％MeOH洗脱分离以产生固体。mp 191-3℃。MS(m/z，％)：487(M+，100)。C26H26N6O2S分析的计算值：C，64.2；H，5.4；N，17.3。实测值：C，64.5；H，5.5；N，16.8。
实施例28
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-{3-[3-(2-甲基-[1，3]-二氧戊环-2-基)-苯基]-丙基}-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.6(d，1H)、8.3(d，1H)、7.2(m，br，3H)、7.0(m，br，3H)、6.9(m，br，2H)、4.6(m，br，2H)、4.1(m，2H)、3.9(m，2H)、3.7(m，br，8H)、2.6(m，br，2H)、1.8(m，br，2H)、1.5(s，3H)。MS(m/z，％)：516(M++1，100)。
实施例29
2-(3-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-丙-2-醇
m.p.204-5℃。1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.6(d，1H)、8.3(d，1H)、7.3(m，br，1H)、7.2(m，br，1H)、7.1(m，br，1H)、7.0(m，br，3H)、6.8(s，br，2H)、4.6(s，br，2H)、3.7(m，br，6H)、3.3(m，br，2H)、2.6(m，br，2H)、1.8(m，br，2H)、1.4(s，6H)。MS(m/z，％)：488(M++1，100)。
实施例30
4-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苄腈
m.p.220-2℃。1H-NMR(DMSO-d6)：δ8.6(d，1H)、8.3(d，1H)、7.7(m，br，2H)、7.4(m，br，2H)、7.0(m，br，2H)、6.8(s，br，2H)、4.6(s，br，2H)、3.7(m，br，6H)、3.3(m，br，2H)、2.7(m，br，2H)、1.8(m，br，2H)。MS(m/z，％)：455(M++1，100)。
实施例31
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(3-吡啶-4-基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
1H-NMR(CD2Cl2)：δ9.1(d，1H)、8.9(m，br，1H)、8.4(m，br，3H)、7.2(m，br，2H)、7.1(m，br，1H)、7.0(s，br，1H)、6.9(d，1H)、6.6(d，1H)、4.8(d，2H)、3.7(s，3H)、3.7(s，3H)、3.6(m，2H)、2.7(m，2H)、2.0(m，2H)。MS(m/z，％)：432(M++1，20)、256(15)、237(30)、216(100)。
实施例32-35的化合物按照下列概述的程序制备。注意所用的反应和/或纯化条件的具体例外情况。
在室温下向2，4-二氯-吡啶并[2，3-d]嘧啶(0.75mmol)及DIPEA(1.5mmol)于3mL DMSO中的经搅拌溶液中添加0.75mmol对应于流程1步骤1中式(V)的胺。将混合物在室温下搅拌1hr，然后添加2.25mmol对应于流程1步骤2中式(VII)的胺及额外的DIPEA(2.25mmol)，且在90℃下加热混合物两小时。
实施例32
N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(3-苯基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
通过直接注射于反相制备性HPLC上使用含0.1％氢氧化铵的乙腈/水的阶式梯度作为洗脱液自粗反应混合物中分离及纯化该化合物。将含该化合物的级分合并且浓缩以产生固体，m.p.190-2℃。1H-NMR(d6-DMSO)：δ8.6(dd，1H)、8.4(dd，1H)、7.2(m，br，3H)、7.1(m，br，2H)、7.0(m，br，2H)、6.8(m，br，2H)、4.6(m，br，2H)、3.7(d，br，6H)、3.3(m，br，2H)、2.6(m，br，2H)、1.8(m，2H)。MS(m/e，％)：431(M++1，50)、430(M+，100)。
实施例33
N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(3-苯氧基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
通过直接注射于反相制备性HPLC上使用含0.1％氢氧化铵的乙腈/水的阶式梯度作为洗脱液自粗反应混合物中分离及纯化该化合物。将含该化合物的级分合并、浓缩且自IPA/水中再结晶残余物。m.p.165-7℃。1H-NMR(d6-DMSO)：8.6(dd，1H)、8.4(d，1H)、7.2(m，br，3H)、7.1(m，br，2H)、7.0(m，1H)、6.9(m，br，2H)、6.8(m，br，1H)、6.5(d，2H)、6.4(s，1H)、4.6(m，br，2H)、4.0(m，br，2H)、3.7(m，br，8H)。MS(m/e，％)：433(M++1，50)、432(M+，100)。
实施例34
N4-(3-乙氧基-4-甲氧基-苄基)-N2-(3-苯基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺
通过直接注射于反相制备性HPLC上使用含0.1％氢氧化铵的乙腈/水的阶式梯度作为洗脱液自粗反应混合物中分离及纯化该化合物。将含该化合物的级分合并、浓缩且自乙腈/水中再结晶。m.p.181-2℃。C26H29N5O2分析的计算值：C，70.4；H，6.6；N，15.8。实测值：C，70.7；H，6.9；N，15.9。
实施例35
2-(4-{3-[4-(3-乙氧基-4-甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}苯基)-丙-2-醇
通过直接注射于反相制备性HPLC上使用含0.1％氢氧化铵的乙腈/水的阶式梯度作为洗脱液自粗反应混合物中分离及纯化该化合物。将含所期望化合物的级分合并、浓缩且自乙腈/水中再结晶。m.p.150-2℃。C29H35N5O3分析的计算值：C，69.4；H，7.0；N，13.7。实测值：C，69.1；H，6.9；N，13.7。
实施例36
1-(4-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-2，2，2-三氟-乙酮
在室温下向实施例25的标题化合物(150mg，0.28mmol)于15mL二氯甲烷中的经搅拌溶液中添加1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氢-1，2-苯并碘氧杂环戊(benziodoxol)-3(1H)-酮(180mg，0.43mmol)。将混合物在室温下搅拌六小时，然后添加额外份数的1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氢-1，2-苯并碘氧杂环戊-3-(1H)-酮(180mg，0.43mmol)且在室温下搅拌混合物过夜。混合物用氯仿稀释、用水洗涤，经MgSO4干燥且浓缩以产生油状物。于硅胶上色谱，用5％MeOH 2N于氨水/二氯甲烷中的溶液洗脱得到油状物。用EtOAc研制产生45mg的固体。m.p.198-200℃。1H-NMR(d6-DMSO)：δ8.6(dd，1H)、8.4(dd，1H)、7.9(m，br，2H)、7.5(m，br，2H)、7.0(m，br，2H)、6.8(m，br，2H)、4.6(m，2H)、3.7(m，6H)、3.3(m，2H)、2.7(m，br，2H)、1.9(m，br，2H)。MS(m/e，％)：526(M+，100)。
实施例37
1-(3-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-乙酮
在室温下将制备27的标题化合物(419mg，0.81mmol)于含10ml6N盐酸的8mL THF中的混合物搅拌6hr。反应混合物用EtOAc萃取，有机萃取物用5％碳酸氢钠溶液洗涤且然后浓缩以产生固体。m.p.152-5℃。1H-NMR(d6-DMSO)：8.8(d，1H)、8.7(d，1H)、7.7(m，2H)、7.4(m，3H)、7.0(s，1H)、6.8(m，2H)、4.6(d，2H)、3.7(s，3H)、3.6(s，3H)、3.5(m，2H)、2.7(m，2H)、2.5(s，3H)、1.9(m，2H)。MS(m/e，％)：471(M+，30)、470(100)。
生物学方法
PDE 2酶的分离
用来自多个捐赠者的用于制造血小板小球的约1.4L血液，从人类血小板中分离PDE 2酶。将血小板再悬浮于约75mL的裂解缓冲液[20mM Tris pH 7.2、5mM MgCl2、250mM蔗糖、1mM DTT、1μL/2mLSigma蛋白酶抑制剂#8340；Sigma-Aldrich；St.Louis，MO]中且在4℃下通过超声处理来裂解，进行3轮1分钟裂解，然后以100,000xg于4℃下旋转过夜。将澄清裂解液以25mL的平均加样体积装载至以一连串三次色谱分离的AKTA Explorer FPLC(Amersham Biosciences；Piscataway，NJ)中。使用5mL HiTrap Q阴离子交换柱(AmershamBiosciences)。将A缓冲液[20mM Tris pH7.2、5mM MgCl2、1μl/2mLSigma蛋白酶抑制剂#8340]与经20柱体积而自0％的初始B缓冲液浓度至100％的最终浓度梯度的B缓冲液[20mM Tris pH 7.2、500mM NaCl、5mM MgCl2、1μl/2mL Sigma蛋白酶抑制剂#8340]混合。cGMP-水解峰以在低盐-125mM NaCl(PDE 5)及高盐-325mM NaCl(PDE 2)下的平均分辨率记录。分离且单独合并两个主要的cGMP活性级分(PDE 5及PDE2)。合并有PDE 2的级分总量大约为40mL，将其以200μl/小瓶分配于耐冻小瓶(cryovial)中且置于-80℃下储存。
PDE 2酶结合测定
式(I)化合物对重组或分离的PDE 2及其它PDE的抑制活性是使用购自Amersham International(Little Chalfont，England)的[3H]cAMP闪烁亲近测定法(SPA)试剂盒来测定的。SPA测定使用96孔平板进行。与环状核苷酸cGMP相比，PDE SPA硅酸钇珠粒(AmershamBiosciences)优先结合至线性核苷酸GMP。添加3H-cGMP至该反应中，且当产物3H-cGMP紧密接近珠粒时，激发珠粒内的闪烁体，该闪烁体使用Packard闪烁计数器(Perkin-Elmer Life Sciences；Boston，MA)来检测。所用的酶浓度是在线性范围内，测定酶的Km(15μM)。最终底物浓度为＜1/3Km(1μM)以使得IC50值接近Ki值。在测试化合物之前该测定使用文献化合物作为对照物验证。随后，比较在测试化合物的存在下获得的及在缺乏测试化合物下获得的PDE催化活性测量值且测定IC50值。
使用RACK-BETA 1219液体闪烁计数器(LKB Wallac；Freiburg，FRG)定量测定这些放射性底物及PDE反应产物。以1μM cAMP或cGMP使用峰级分来测定IC50值(50％抑制的浓度)。借助于S形对数函数以四个参数拟合该数据。
使用先前所述自人类血小板中分离的PDE 2酶及用于测定测试化合物对酶的抑制的方法，测得EHNA的IC50为1.7μM。另外，也使用上文提及的方法测得9-(1-乙酰基-4-苯基-丁基)-2-(3，4-二甲氧基-苄基)-1，9-二氢嘌呤-6-酮的IC50为3nM。
式(I)的化合物通常展现抑制活性，以针对PDE 2的IC50来表示，其为＜1,000nM。实施例1-37中式(I)化合物的PDE 2抑制活性范围在表1中给出。
表1
  实施例   PDE 2抑制   实施例   PDE 2抑制
  1   ++   22   ++
  2   ++   23   +
  3   +   24   +
  4   +   25   ++
  5   +++   26   +
  6   +   27   +
  7   ++   28   +
  8   +   29   +
  9   +   30   +
  10   +++   31   +
  11   +   32   +
  12   ++   33   ++
  13   ++   34   +
  14   ++   35   +
  15   ++   36   +
  16   +++   37   +
  17   +++
  18   ++
  19   ++
  20   +
  21   +
PDE 2抑制：+++(IC50＜50nM)，++(IC5050-250nM)，+(IC50250-1,000nM)
包括式(I)化合物的PDE 2抑制剂治疗骨折和/或缺损或促进骨向内生长的能力可依据下列方案加以证实。
大鼠股骨横向折断模型
使用3至4月大的雄性Sprague-Dawley大鼠。这些动物用开他敏及甲苯噻嗪各以100及10mg/kg的剂量麻醉。剃刮且清洁各大鼠的右后肢。正好在膝盖骨的侧面形成1cm的切口且暴露股骨髁。将Kirschner钢丝(直径0.045”)通过髁间部分引入髓内管以作为内部稳定器。肌肉切口用vicry1(一种可吸收的缝合材料)闭合且皮肤切口用不锈钢闭合夹闭合。经钉住的股骨的中间骨干借助于由落重驱动的三点弯曲装置来折断。在麻醉清醒后允许大鼠完全负重且自由活动。手术后通过经皮注射至折断部位上于不同天数给予测试化合物。处理后处死动物且收集股骨用于分析。折断愈合通过使用放射线照相术、组织学及生物机械学测试来评估(F.Bonnarens等人，Journal ofOrthopaedic Research，2，97-101(1984))。
大鼠股骨横向折断模型中的研究方案及结果
在通常麻醉下使三个月大的雄性大鼠经受其右股骨横向折断。单剂量(5mg)的N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(3-苯基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺于折断形成完全时经皮注射至折断部位。注射三周后，处死大鼠且收集右股骨并分析。与用安慰剂处理的股骨相比较，用N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(3-苯基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺处理的股骨中，折断力(force-to-failure)及劲度(骨强度指数)分别增加了19％及62％。
大鼠骨膜注射模型
在安置于通风橱中的传导室中以异氟烷麻醉大鼠(2-3min)。剃刮且清洁各大鼠的右后肢。附于注射器上的25号针头预填充用于局部注射的测试化合物的制剂。该制剂以5-15μL的体积注射于股骨的骨膜下达14天。定量给药后处死大鼠，收集股骨，然后通过放射线照相术及双能量X射线吸收分析法(DEXA)来分析。
大鼠骨膜注射模型中的研究方案及结果
三周大的雄性Sprague-Dawley大鼠的右股骨接受每日注射赋形剂或测试化合物，每周五次，持续两周。在第15天，处死所有大鼠且收集右股骨用于分析。使用放射线照相术及DEXA评估骨膜的骨诱导。放射线照相术显示定位于用测试化合物处理的所有股骨的注射部位上的新骨形成。股骨注射区(股骨的小转子与中间骨干之间的区域)的骨矿物质含量(BMC)通过DEXA分析将用测试化合物处理的大鼠与仅用赋形剂处理者相比较来进行评估。在该模型中，N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(2-吡啶-4-基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、2-(3-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-丙-2-醇及N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(3-苯基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺分别增加了BMC 34％、49％及33％。另外，9-(1-乙酰基-4-苯基-丁基)-2-(3，4-二甲氧基-苄基)-1，9-二氢嘌呤-6-酮在上述模型中增加了BMC 20％。

Claims (8)

1.一种式(I)的化合物，
Figure C2004800376740002C1
所述化合物的药物上可接受的盐，其中：
R1及R2为氢或甲氧基，其限制条件为R1及R2不均为氢或不均为甲氧基；
n为1、2、3或4；
X为一条键、O、S、C＝O、-N(R)-，其中R为氢或-C1-C3烷基、-C(OH)-或-SO2；且
Y为苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并呋咱基、苯并呋喃基、苯并噻二唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、吡啶基、靛红基、羟吲哚基、吲唑基、吲哚基、苯基、噻吩基或呋喃基；其中Y任选地独立地被一至三个下列基团取代：卤素、三氟甲基、甲氧基、-C(＝O)CH3、氰基、-C(CH3)2OH、-CH(CH3)OH、-CH(CF3)OH、-C(C＝O)CF3、-SO2NH2、-C(＝O)OCH3、-CH2COOH、
Figure C2004800376740002C2
噻唑基或噁二唑基。
2.权利要求1的化合物，其中X为一条键且Y为苯并呋咱基、噻吩基、吡啶基或苯基，其中苯基任选地独立地被一或两个下列基团取代：卤素、三氟甲基、甲氧基、-C(＝O)CH3、氰基、-C(CH3)2OH、-CH(CH3)OH、-CH(CF3)OH、-C(C＝O)CF3、-SO2NH2、-C(＝O)OCH3、-CH2COOH、噻唑基或噁二唑基。
3.权利要求1或2的化合物，其中X为一条键，n为2或3，且Y为噻吩基、吡啶基或苯基，其中苯基任选地独立地被一或两个甲氧基、卤素、-C(CH3)2OH、CH(CF3)OH或-C(C＝O)CF3取代。
4.化合物N2，N4-双-(3，5-二甲氧基-苄基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-(2-吡啶-4-基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N 2-(2-噻吩-2-基-乙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-2-苯乙基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、N4-(3，5-二甲氧基-苄基)-N2-[2-(3，5-二甲氧基-苯基)-乙基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、2-(3-{3-[4-(3，4-二甲氧基-苄基氨基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2-基氨基]-丙基}-苯基)-丙-2-醇、N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-[2-(4-氟-苯基)-乙基]-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺、N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-苯乙基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺或N4-(3，4-二甲氧基-苄基)-N2-(3-苯基-丙基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-2，4-二胺或所述化合物的药物上可接受的盐。
5.一种药物组合物，其包含权利要求1-4中任一项的式(I)化合物或所述化合物的药物上可接受的盐，及药物上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
6.权利要求1-4中任一项的式(I)化合物或者所述化合物的药物上可接受的盐；或包含所述式(I)化合物或者所述化合物的药物上可接受的盐及药物上可接受的赋形剂、载体或稀释剂的药物组合物在制备用于治疗哺乳动物中由PDE 2介导的症状、疾病或病症的药物的用途。
7.权利要求6的用途，其中所述症状、疾病或病症为骨质疏松症、肺动脉高血压、女性性唤起障碍、记忆或认知减退、血小板聚集、脉管的血管生成、痴呆、癌症、心律失常、血栓症、骨折和/或骨质缺损、延迟愈合或不愈合的骨折、脊椎融合、骨向内生长、颜面重整或缺氧症。
8.权利要求6的用途，其中所述症状为骨折和/或骨质缺损。
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