MD4047002T2

MD4047002T2 - Compuși antitumorali

Info

Publication number: MD4047002T2
Application number: MDE20220945T
Authority: MD
Inventors: Marchante Maria Del Carmen Cuevas; Solloso Andres Francesch; Barrasa Valentin Martinez
Original assignee: Pharma Mar Sa
Priority date: 2017-04-27
Filing date: 2018-04-27
Publication date: 2023-08-31
Also published as: TWI875118B; IL289963A; DK4101855T3; DK3615544T3; ES2741901T3; MY198004A; NZ758490A; IL295044B1; KR20210126791A; PT3395821T; CO2019011967A2; NZ797531A; CA3061518A1; AU2018260314A1; EP4047002B1; HUE045641T2; ME03466B; HK1255941B; IL295044A; JOP20190254A1

Abstract

Compus cu formula generală IE, оn care X, R1-R4 au diverse semnificaţii, pentru utilizare оn tratamentul cancerului.

Description

DOMENIUL INVENTIEI

Prezenta invenţie se referă la analogi sintetici ai ecteinascidinelor, în special ai ecteinascidinei 736 (ET-736), la compoziţii farmaceutice care оi conţin, la procedee pentru prepararea acestora şi la utilizarea lor ca agenţi antitumorali.

STADIUL TEHNICII

Ecteinascidinele sunt agenţi antitumorali extrem de puternici izolaţi din tunicatul marin Ecteinascidia turbinata. Unul dintre aceşti compuşi, ET-743 cu formula:

este utilizat ca medicament anticancer, sub denumirea comună internaţională trabectedin

(INN), pentru tratamentul pacienţilor cu sarcom de ţesut moale (STS) metastatic şi avansat după eşecul antraciclinelor şi ifosfamidei sau care nu pot primi astfel de agenţi şi pentru tratamentul cancerului ovarian sensibil la platina, recidivat оn combinaţie cu doxorubicină lipozomală pegilată.

Ecteinascidina 736 (ET-736) a fost descoperită pentru prima dată de Rinehart şi este caracterizată printr-o unitate de tetrahidro-β-carbolină în locul unităţii de tetrahidroizochinolină găsită mai uzual în compuşii de ecteinascidină izolaţi din surse naturale; Vezi de exemplu Sakai şi colab., Proc. Natl. Acad. Sci. SUA 1992, vol. 89, 11456-11460.

Brevetul US nr. 5149804 descrie Ecteinascidina 736 (ET-736), izolată din tunicatul de Caraibe ca Ecteinascidia turbinata şi structura acestuia. ET-736 protejează şoarecii in vivo la concentraţii foarte scăzute împotriva limfomului P388, melanomului B16 şi carcinomului pulmonar Lewis.

WO03014127 descrie mai mulţi analogi sintetici ai ET-736 şi activitatea lor citotoxică împotriva celulelor tumorale. În special, WO03014127 descrie compuşii A până la D împreună cu activitatea lor citotoxică împotriva unui grup de linii celulare canceroase.

WO2011/147828 descrie procedee de preparare pentru fabricarea compuşilor de ecteinascidină.

Un alt compus descris în această cerere de brevet, PM01183, se află în prezent în studii clinice pentru tratamentul cancerului. PM01183 are următoarea structură chimică:

PM01183 a demonstrat o activitate foarte puternică in vitro оmpotriva liniilor celulare tumorale solide şi nesolide, precum şi o activitate in vivo semnificativă în diverse linii celulare tumorale umane, xenogrefate la şoareci, precum cele pentru cancerul de sвn, rinichi şi ovarian. PM01183 exercită efectele sale anticancerigene prin modificarea covalentă a guaninelor în canalul minor ADN care, în cele din urmă dau naştere la ruperea dublu-catenară a ADN-ului, oprirea fazei S şi apoptoza оn celulele canceroase.

Deşi s-au obţinut rezultate pozitive оn aplicaţiile clinice оn chimioterapie, cercetarea оn domeniul compuşilor ecteinascidinei este încă deschisă pentru a identifica noi compuşi cu caracteristici optime de activitate, selectivitate faţă de tumoră, cu o toxicitate sistemică redusă şi/sau proprietăţi farmacocinetice îmbunătăţite.

DESCRIEREA PE SCURT A INVENŢIEI

Оntr-un prim aspect al prezentei invenţii este furnizat un compus cu formula IE sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau ester al acestuia:

оn care:

X este -NH- sau -O-;

R1 este -OH sau -CN;

R2 este o grupare -C(=O)Ra;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb;

R4 este ales dintre -CH2NH2 şi -CH2NHProtNH;

Ra este ales dintre hidrogen, alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit şi alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit;

Rb este ales dintre alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit şi alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit; şi ProtNH este o grupare protectoare pentru amino.

Оntr-un alt aspect al prezentei invenţii, este furnizată o compoziţie farmaceutică care cuprinde un compus conform prezentei invenţii şi un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic.

Încă într-un alt aspect al prezentei invenţii, este furnizată o formă de dozare care cuprinde o compoziţie farmaceutică conform prezentei invenţii.

Încă într-un alt aspect al przentei invenţii, este furnizat un compus, o compoziţie farmaceutică sau o formă de dozare conform prezentei invenţii pentru utilizare ca medicament.

Încă într-un alt aspect al prezentei invenţii, este furnizat un compus, o compoziţie farmaceutică sau o formă de dozare conform prezentei invenţii pentru utilizare оn tratamentul cancerului.

Încă într-un alt aspect al prezentei invenţii, este furnizat un kit care cuprinde o cantitate eficace din punct de vedere terapeutic dintr-un compus conform prezentei invenţii şi un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic. Kitul este destinat utilizării în tratamentul cancerului.

Încă într-un alt aspect al prezentei invenţii, este furnizat un procedeu pentru obţinerea compuşilor cu formula IE sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau ester al acestuia; cuprinzând etapa de reacţie a unui compus cu formula II cu un compus cu formula III pentru a da un compus cu formula IV:

în care (în măsura în care este permis de către posibilele grupări substituente):

X este -NH- sau -O-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb;

R4 este -CH2NHProtNH;

Procedeul poate include etapa suplimentară de înlocuire a grupării ciano din compusul cu formula IV cu o grupare hidroxi pentru a da un compus cu formula IE оn care R1 este OH.

SCURTĂ DESCRIERE A FIGURILOR

Figura 1. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C, 4-S şi 12-S.

Figura 2. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C, 4-S şi 12-S.

Figura 3. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoareci trataţi cu placebo, compus C, 4-S şi 12-S.

Figura 4. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H526 la şoareci trataţi cu placebo, compus C, 4-S şi 12-S.

Figura 5. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H82 la şoareci trataţi cu placebo, compus C, 4-S şi 12-S.

Figura 6. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, compus C, 4-S şi 12-S.

Figura 7. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC-27 la şoareci trataţi cu placebo, compus C, 4-S şi 12-S.

Figura 8. Evaluarea diametrului total tumoral al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 4-R.

Figura 9. Evaluarea diametrului total tumoral al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi Compus D.

Figura 10. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 4-R.

Figura 11. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi Compus D.

Figura 12. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 4-R.

Figura 13. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi Compus D.

Figura 14. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 4-R.

Figura 15. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi Compus D.

Figura 16. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC-27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 4-R.

Figura 17. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC-27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi Compus D.

Figura 18. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D şi 12-R.

Figura 19. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D şi 12-R.

Figura 20. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 12-R.

Figura 21. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H526 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 12-R.

Figura 22. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H82 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 12-R.

Figura 23.Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 12-R.

Figura 24. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC-27 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 12-R.

Figura 25. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-S.

Figura 26. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-S.

Figura 27. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-S.

Figura 28. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-S.

Figura 29. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-S.

Figura 30. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-R.

Figura 31. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-R.

Figura 32. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-R.

Figura 33. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-R.

Figura 34. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC-27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 19-R.

Figura 35. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C şi 39-S.

Figura 36. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C şi 39-S.

Figura 37. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoareci trataţi cu placebo, compus C şi 39-S.

Figura 38. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H526 la şoareci trataţi cu placebo, compus C şi 39-S.

Figura 39. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H82 la şoareci trataţi cu placebo, compus C şi 39-S.

Figura 40. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, compus C şi 39-S.

Figura 41. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC27 la şoareci trataţi cu placebo, compus C şi 39-S.

Figura 42. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D şi 47-R.

Figura 43. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D şi 47-R.

Figura 44. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 47-R.

Figura 45. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H526 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 47-R.

Figura 46. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H82 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 47-R.

Figura 47. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 47-R.

Figura 48. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC27 la şoareci trataţi cu placebo, compus D şi 47-R.

Figura 49. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, ET736 şi 32.

Figura 50. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 şi 32.

Figura 51. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, ET736 şi 32.

Figura 52. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H526 la şoarecii trataţi cu placebo, ET736 şi 32.

Figura 53. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H82 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 şi 32.

Figura 54. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, ET736 şi 32.

Figura 55. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, ET736 şi 32.

Figura 56. Evaluarea diametrului total al tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 35.

Figura 57. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 35.

Figura 58. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 35.

Figura 59. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 35.

Figura 60. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 şi 35.

Figura 61. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor PC-3 la şoarecii trataţi cu placebo, 12-S şi 12-R.

Figura 62. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor PC-3 la şoarecii trataţi cu placebo şi 4-S. Figura 63. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor DU-145 la şoarecii trataţi cu placebo şi 4S.

Figura 64. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor 22Rv1 la şoarecii trataţi cu placebo şi 4S.

Figura 65. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor PC-3 la şoarecii trataţi cu placebo şi 39S.

Figura 66. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor DU-145 la şoarecii trataţi cu placebo şi 39-S.

Figura 67. Evaluarea volumului tumoral al tumorilor 22Rv1 la şoarecii trataţi cu placebo şi 39S.

DESCRIEREA DETALIATĂ A EXEMPLELOR DE REALIZARE PREFERATE

Următoarele se aplică la toate aspectele prezentei invenţii:

Оn compuşii prezentei invenţii, grupările alchil pot fi ramificate sau neramificate şi, de preferinţă, au de la 1 până la aproximativ 12 atomi de carbon. O altă clasă mai preferată de grupări alchil are de la 1 până la aproximativ 6 atomi de carbon. Chiar mai preferate sunt grupările alchil având 1, 2, 3 sau 4 atomi de carbon. Metil, etil, n-propil, izopropil şi butil, inclusiv n-butil, izobutil, sec-butil şi tert-butil sunt grupări alchil în special preferate în compuşii prezentei invenţii.

Оn compuşii prezentei invenţii, grupările alchenil pot fi ramificate sau neramificate, au una sau mai multe duble legături şi de la 2 până la aproximativ 12 atomi de carbon. O altă clasă mai preferată de grupări alchenil are de la 2 până la aproximativ 6 atomi de carbon. Chiar mai preferate sunt grupările alchenil având 2, 3 sau 4 atomi de carbon. Etenil, 1propenil, 2-propenil, 1-metiletenil, 1-butenil, 2-butenil şi 3-butenil sunt grupări alchenil în special preferate în compuşii prezentei invenţii.

Оn compuşii prezentei invenţii, grupările alchinil pot fi ramificate sau neramificate, au una sau mai multe legături triple şi de la 2 până la aproximativ 12 atomi de carbon. O altă clasă mai preferată de grupări alchinil are de la 2 până la aproximativ 6 atomi de carbon. Chiar mai preferate sunt grupările alchinil având 2, 3 sau 4 atomi de carbon.

Grupările aril adecvate în compuşii prezentei invenţii includ compuşii cu ciclu simplu şi multiplu, inclusiv compuşi cu cicluri multiple care conţin grupări aril separate şi/sau condensate. Grupările aril tipice conţin de la 1 până la 3 cicluri separate şi/sau condensate şi de la 6 până la aproximativ 18 atomi de carbon. De preferinţă, grupările aril conţin de la 6 până la aproximativ 10 atomi de carbon în ciclu. Grupările aril preferate în mod special au inclus fenil substituit sau nesubstituit, naftil substituit sau nesubstituit, bifenil substituit sau nesubstituit, fenantril substituit sau nesubstituit şi antril substituit sau nesubstituit.

Grupările heterociclice adecvate includ grupări heteroaromatice şi heteroaliciclice conţinând de la 1 până la 3 cicluri separate şi/sau condensate şi de la 5 până la aproximativ 18 atomi în ciclu. De preferinţă, grupările heteroaromatice şi heteroaliciclice conţin de la 5 până la aproximativ 10 atomi în ciclu, cel mai preferabil 5, 6 sau 7 atomi în ciclu. Grupările heteroaromatice adecvate оn compuşii prezentei invenţii conţin unul, doi sau trei heteroatomi aleşi dintre atomi de N, O sau S şi includ, de exemplu, cumarinil incluzвnd 8-cumarinil, chinolil incluzвnd 8-chinolil, izochinolil, piridil, pirazinil, pirazolil, pirimidinil, furil, pirolil, tienil, tiazolil, izotiazolil, triazolil, tetrazolil, izoxazolil, oxazolil, imidazolil, indolil, izoindolil, indazolil, indolizinil, ftalazinil, pteridil, purinil, oxadiazolil, tiadiazolil, furazanil, piridazinil, triazinil, cinolinil, benzimidazolil,benzofuranil, benzofurazanil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoxazolil, chinazolinil, chinoxalinil, naftiridinil şi furopiridil. Grupările heteroaliciclice adecvate în compuşii prezentei invenţii conţin unul, doi sau trei heteroatomi aleşi dintre N, O sau S şi includ, de exemplu, pirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidrotienil, tetrahidrotiopiranil, piperidil, morfolinil, tiomorfolinil, tioxanil, piperazinil, azetidinil, oxtanilil, tietanil, homopiperidil, oxepanil, tiepanil, oxazeoinil, diazepinil, tiazepinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, indolinil, 2H-piranil, 4H-piranil, dioxanil, 1,3-dioxolanil, pirazolinil, ditianil, ditiolanil, dihidropiranil, dihidrotienil, dihidrofuranil, pirazolidinil, imidazolinil, imidazolidinil, 3-azabiciclo[3.1.0]hexil, 3azabiciclo][4.1.0]heptil, 3H-indolil şi chinolizinil.

Grupările menţionate mai sus pot fi substituite la una sau mai multe poziţii disponibile cu una sau mai multe grupări adecvate, cum ar fi OR', =O, SR', SOR', SO2R', NO2, NHR', NR'R', =N-R', NHCOR', N(COR')2, NHSO2R', NR'C(=NR')NR'R', CN, halogen, COR', COOR', OCOR', OCONHR', OCONR'R', CONHR', CONR'R', OH protejat, amino protejat, SH protejat, alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit şi alchinil C2C12 substituit sau nesubstituit, aril substituit sau nesubstituit şi grupare heterociclică substituită sau nesubstituită, în care fiecare dintre grupările R' este aleasă în mod independent din grupul constând din hidrogen, OH, NO2, NH2, SH, CN, halogen, COH, COalchil, CO2H, alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit şi alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit, aril substituit sau nesubstituit şi grupare heterociclică substituită sau nesubstituită. Acolo în care astfel de grupări sunt ele însele substituite, substituenţii pot fi aleşi din lista de mai sus. în plus, acolo în care există mai multe grupări R' pe un substituent, fiecare R' poate fi identic sau diferit.

Оn compuşii din prezenta invenţie, substituenţii halogen includ F, CI, Br şi I.

ermenii "sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic" şi "ester" se referă la oricare sare sau ester acceptabil din punct de vedere farmaceutic care, la administrare la pacient, este capabil să furnizeze (direct sau indirect) un compus aşa cum este descris aici. Totuşi, se va aprecia că sunt dezvăluite şi săruri neacceptabile din punct de vedere farmaceutic, întrucât acestea pot fi utile în prepararea sărurilor acceptabile din punct de vedere farmaceutic. Prepararea sărurilor poate fi realizată prin metode cunoscute în domeniu. \tabDe exemplu, sărurile acceptabile din punct de vedere farmaceutic ale compuşilor furnizaţi aici sunt preparate din compuşii de bază, care conţin un fragment bazic sau acid, prin procedee chimice convenţionale. În general, astfel de săruri sunt preparate, de exemplu, prin reacţia acidului sau bazei libere a acestor compuşi cu o cantitate stoechiometrică de bază sau acid adecvat în apă sau într-un solvent organic sau într-un amestec al ambelor. În general, mediile neapoase cum ar fi eterul, acetatul de etil, etanolul, 2-propanolul sau acetonitrilul sunt preferate. Exemple de săruri de adiţie cu acid includ săruri de adiţie cu acid mineral, cum ar fi, de exemplu, clorhidrat, bromhidrat, iodhidrat, sulfat, azotat, fosfat şi săruri de adiţie cu acid organic, cum ar fi, de exemplu, acetat, trifluoracetat, maleat, fumarat, citrat, oxalat, succinat, tartrat, malat, mandelat, metansulfonat şi p-toluensulfonat. Exemple de săruri de adiţie alcaline includ săruri anorganice, cum ar fi, de exemplu, săruri de sodiu, potasiu, calciu şi amoniu 11743329-1 şi săruri alcaline organice, cum ar fi, de exemplu, etilendiamina, etanolamina, săruri de N,N-dialchilenetanolamină, trietanolamină şi aminoacizi bazici. Compuşii conform invenţiei pot fi sub formă cristalină sau amorfă fie compuşi liberi, fie solvaţi (de exemplu, hidraţi) şi se intenţionează ca toate formele să fie în sfera prezentei invenţii. Metodele de solvatare sunt оn general cunoscute оn domeniu. Este posibilă stereoizomeria cu privire la atomii de carbon asimetrici cu stereochimie nespecificată, prin urmare, în astfel de cazuri, atomii de carbon asimetrici pot avea configuraţie (R) sau (S). Toţi diastereomerii generaţi de o configuraţie specifică a unor astfel de atomi de carbon asimetrici în combinaţie cu alţi atomi de carbon asimetrici prezenţi în moleculă şi amestecurile acestora sunt consideraţi a fi оn sferal prezentei invenţii. Este de asemenea posibilă şi stereoizomeria legată de dubla legătură (izomerie geometrică), prin urmare, în unele cazuri, molecula ar putea exista ca (E)-izomer sau (Z)-izomer. Dacă molecula conţine mai multe legături duble, fiecare legătură dublă va avea propria sa stereoizomerie, care ar putea fi aceeaşi sau diferită de stereoizomeria celorlalte legături duble ale moleculei. Mai mult, compuşii la care se face referire aici pot exista ca atropoizomeri. Stereoizomerii individuali care includ diastereoizomerii, izomerii geometrici şi atropoizomerii compuşilor la care se face referire aici şi amestecurile acestora sunt оn sfera prezentei invenţii. Оn plus, compuşii la care se face referire aici pot exista în forme marcate izotopic. Toate sărurile, esterii şi formele marcate izotopic acceptabile farmaceutic ale compuşilor la care se face referire aici, precum şi amestecurile acestora, sunt considerate оn sfera prezentei invenţii. Formele protejate ale compuşilor dezvăluiţi aici sunt considerate оn sfera prezentei invenţii. Grupările protectoare adecvate sunt bine cunoscute de un specialist în domeniu. O trecere generală în revistă a grupărilor protectoare din chimia organică este oferită de Wuts, PGM şi Greene TW оn Protecting Groups in ORganic Synthesis, Ed. a 4-a, Editura WileyInterscience şi de către Kocienski PJ în Protecting Groups, Ed. a III-a, Georg Thieme Verlag. Aceste referinţe oferă secţiuni despre grupările de protecţie pentru grupările OH, amino şi SH. Оn sfera prezentei invenţii, o grupare protectoare OH este definită a fi fragmentul legat de O care rezultă din protecţia OH prin formarea unei grupări OH protejate adecvate. Exemple de astfel de grupări OH protejate includ eteri, eteri sililici, esteri, sulfonaţi, sulfenaţi şi sulfinaţi, carbonaţi şi carbamaŢi. Оn cazul eterilor, gruparea protectoare pentru OH poate fi aleasă dintre metil, metoximetil, metiltiometil, (fenildimetilsilil)metoximetil, benziloximetil, pmetoxibenziloximetil, [(3,4-dimetoxibenzil)oxi]metil, p-nitrobenziloximetil, o-nitrobenziloximetil,

[(R)-1-(2-nitrofenil)etoxi]metil, (4-metoxifenoxi)metil, guaiacolmetil, [(p-fenilfenil)oxi]metil, tbutoximetil, 4-penteniloximetil, siloximetil, 2-metoxietoximetil, 2-cianoetoximetil, bis(2cloretoxi)metil, 2,2,2-tricloretoximetil, 2-(trimetilsilil)etoximetil, mentoximetil, O-bis(2-acetoxietoxi)metil, tetrahidropiranil, fluor tetrahidropiranil, 3-bromotetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, 1-metoxiciclohexil, 4-metoxitetrahidropiranil, 4-metoxitetrahidrotiopiranil, 4-metoxihidrotiopiranil S,S-dioxid, 1-[(2-clor-4-metil)-fenil]-4-metoxipiperidin-4-il, 1-(2-fluorfenil)-4metoxipiperidin-4-il, 1-(4-clorfenil)-4-metoxipiperidin-4-il, 1,4-dioxan-2-il, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofuranil, 2,3,3a,4,5,6,7,7a-octahidro-7,8,8-trimetil-4,7-metanobenzofuran-2-il, 1etoxietil, 1-(2-cloretoxi)etil, 2-hidroxietil, 2-bromoetil, 1-[2-(trimetilsilil)etoxi]etil, 1-metil-1metoxietil, 1-metil-1-benziloxietil, 1-metil-1-benziloxi-2-fluoretil, 1-metil-1-fenoxietil, 2,2,2tricloretil, 1,1-dianisil-2,2,2-tricloretil, 1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-fenilizopropil, 1-(2-cianoetoxi) etil, 2-trimetilsililetil, 2-(benziltio)etil, 2-(fenilselenil)etil, t-butil, ciclohexil, 1-metil-1'ciclopropilmetil, alil, prenil, cinamil, 2-fenalil, propargil, p-clorofenil, p-metoxifenil, p-nitrofenil, 2,4-dinitrofenil, 2,3,5,6-tetrafluor-4-(trifluormetil)fenil, benzil, p-metoxibenzil, 3,4dimetoxibenzil, 2,6-dimetoxibenzil, o-nitrobenzil, p-nitrobenzil, pentadienilnitro-benzil, pentadienilnitropiperonil, halobenzil, 2,6-diclorbenzil, 2,4-diclorbenzil, 2,6-difluorbenzil, pcianobenzil, benzil fluor, 4-fluoralcoxibenzil, trimetilsililxilil, p-fenilbenzil, 2-fenil-2-propil, pacilaminobenzil, p-azidobenzil, 4-azido-3-clorobenzil, 2-trifluormetilbenzil, 4-trifluormetilbenzil, p-(metilsulfinil)benzil, p-siletanilbenzil, 4-acetoxibenzil, 4-(2-trimetilsilil)etoximetoxibenzil, 2naftilmetil, 2-picolil, 4-picolil, 3-metil-2-picolil N-oxid, 2-chinolinilmetil, 6-metoxi-2-(4-metilfenil)4-chinolinmetil, 1-pirenilmetil, difenilmetil, 4-metoxidifenilmetil, 4-fenildifenilmetil, p,p'dinitrobenzhidril, 5-dibenzosuberil, trifenilmetil, tris(4-t-butilfenil)metil, α-naftildifenilmetil, pmetoxi-fenildifenilmetil, di(p-metoxifenil)fenilmetil, tri(p-metoxifenil)metil, 4-(4'-bromfenaciloxi) fenildifenilmetil, 4,4',4"-tris(4,5-dicloroftalimidofenil)metil, 4,4',4"-tris(levulinoiloxifenil) metil, 4,4 ',4"-tris(benzoiloxifenil)metil, 4,4'-dimetoxi-3"-[N-(imidazolilmetil)]tritil, 4,4'-dimetoxi-3"-[N(imidazoliletil)carbamoil]tritil, bis(4-metoxifenil)-1'-pirenilmetil, 4-(17-tetrabenzo [a,c,g,i] fluorenilmetil)-4,4"-dimetoxitritil, 9-antril, 9-(9-fenil)xantenil, 9-feniltioxantil, 9-(9-fenil-10oxo)antril, 1,3-benzoditiolan-2-il, 4,5-bis(etoxicarbonil)-[1,3]-dioxolan-2-il, benzizotiazolil S,Sdioxid. Оn cazul eterilor sililici, gruparea protectoare pentru OH poate fi aleasă dintre trimetilsilil, trietilsilil, triizopropilsilil, dimetilizopropilsilil, dietilizopropilsilil, dimetilhexilsilil, 2norbornildimetilsilil, t-butildimetilsilil, t-butildifenil-silil, tribenzilsilil, tri-p-xililsilil, trifenilsilil, difenilmetilsilil, di-t-butilmetilsilil, bis(t-butil)-1-pirenilmetoxisilil, tris(trimetilsilil)silil, (2hidroxistiril)dimetilsilil, (2-hidroxistiril)diizo-propilsilil, t-butilmetoxifenilsilil, t-butoxidifenilsilil, 1,1,3,3-tetraizopropil-3-[2-(trifenil-metoxi)etoxi]disiloxan-1-il şi silil fluor. În cazul esterilor, gruparea protectoare pentru OH împreună cu atomul de oxigen al OH neprotejat de care este ataşat formează un ester care poate fi ales dintre formiat, benzoilformiat, acetat, cloracetat, dicloracetat, tricloracetat, tricloracetamidat, trifluoracetat, metoxiacetat, trifenilmetoxiacetat, fenoxiacetat, p-clorofenoxiacetat, fenilacetat, difenilacetat, 3-fenilpropionat, propanoil tip lanţ bisfluor, 4-pentenoat, 4-oxopentanoat, 4,4-(etilenditio)pentanoat, 5[3-bis(4metoxifenil)hidroximetilfenoxi]levulinat, pivaloat, 1-adamantoat, crotonat, 4-metoxicrotonat, benzoat, p-fenilbenzoat, 2,4,6-trimetilbenzoat, 4-bromobenzoat, 2,5-difluorobenzoat, pnitrobenzoat, picolinat, nicotinat, 2-(azidometil)benzoat, 4-azido-butirat, (2-azidometil) fenilacetat, 2-{[(tritiltio)oxi]metil}benzoat, 2-{[(4-metoxitritiltio)oxi ]metil}benzoat, 2{[metil(tritiltio)amino]metil}benzoat, 2-{{[(4-metoxitritil)tio]metil-amino}metil}benzoat, 2-(aliloxi) fenilacetat, 2-(preniloximetil)benzoat, 6-(levuliniloxi-metil)-3-metoxi-2-nitrobenzoat, 6(levuliniloximetil)-3-metoxi-4-nitrobenzoat, 4-benziloxibutirat, 4-trialchilsililoxi-butirat, 4acetoxi-2,2-dimetilbutirat, 2,2-dimetil-4-pentenoat, 2-iodobenzoat, 4-nitro-4-metilpentanoat, o(dibromometil)benzoat, 2-formilbenzensulfonat, 4-(metiltio-metoxi)butirat, 2-

(metiltiometoximetil)benzoat, 2-(cloracetoximetil)benzoat, 2-[(2-cloracetoxi)etil]benzoat, 2-[2-

(benziloxi)etil]benzoat, 2-[2-(4-metoxibenzil-oxi)etil]benzoat, 2,6-diclor-4-metilfenoxiacetat, 2,6-diclor-4-(1,1,3,3-tetrametilbutil)fenoxiacetat, 2,4-bis(1,1-dimetilpropil)fenoxiacetat, clorodifenil-acetat, izobutirat, monosuccinoat, (E)-2-metil-2-butenoat, o-

(metoxicarbonil)benzoat, α-naftoat, azotat, N,N,N',N'-tetrametilfosforodiamidat de alchil şi 2clorobenzoat. Оn cazul sulfonaţilor, sulfenaţilor şi sulfinaţilor gruparea protectoare pentru OH împreună cu atomul de oxigen al OH neprotejat de care este ataşat formează un sulfonat, sulfenat sau sulfinaţi care pot fi aleşi dintre sulfat, alilsulfonat, metansulfonat, benzilsulfonat, tosilat, 2-[(4-nitrofenil)etil]sulfonat, 2-trifluormetilbenzensulfonat, 4-monometoxitritilsulfenat,

2,4-dinitrofenilsulfenat de alchil, 2,2,5,5-tetrametilpirolidin-3-on-1-sulfinat şi dimetilfosfinotioil. Оn cazul carbonaţilor, gruparea protectoare pentru OH împreună cu atomul de oxigen al OH neprotejat de care este ataşat formează un carbonat care poate fi ales dintre carbonat de metil, carbonat de metoximetil, carbonat de 9-fluorenilmetil, carbonat de etil, carbonat de bromoetil, carbonat de 2-(metiltiometoxi)etil, carbonat de 2,2,2-tricloretil, carbonat de 1,1dimetil-2,2,2-tricloretil, carbonat de 2-(trimetilsilil)etil, carbonat de 2-[dimetil(2-naftilmetil)silil] etil, carbonat de 2-(fenilsulfonil)etil, carbonat de 2-(trifenilfosfonio)etil, carbonat de cis-[4[[(metoxitritil)sulfenil]oxi]tetrahidrofuran-3-il]oxi, carbonat de izobutil, carbonat de t-butil, carbonat de vinil, carbonat de alil, carbonat de cinamil, carbonat de propargil, carbonat de pclorofenil, carbonat de p-nitrofenil, carbonat de 4-etoxi-1-naftil, carbonat de 6-bromo-7hidroxicumarin-4-ilmetil, carbonat de benzil, carbonat de o-nitrobenzil, carbonat de pnitrobenzil, carbonat de p-metoxibenzil, carbonat de 3,4-dimetoxibenzil, carbonat de antrachinon-2-ilmetil, carbonat de 2-dansilietil, carbonat de 2-(4-nitrofenil)etil, carbonat de 2(2,4-dinitrofenil)etil, carbonat de 2-(2-nitrofenil)propil, carbonat de 2-(3,4-metilendioxi-6nitrofenil)propil, carbonat de 2-ciano-1-feniletil, carbonat de 2-(2-piridil)amino-1-feniletil, carbonat de 2-[N-metil-N-(2-piridil)]amino-1-feniletil, carbonat de fenacil, carbonat de 3',5'dimetoxibenzoină, ditiocarbonat de metil şi tiocarbonat de S-benzil. Şi оn cazul carbamaţilor, gruparea protectoare pentru OH împreună cu atomul de oxigen al OH neprotejat de care este ataşat formează un carbamat care poate fi ales dintre tiocarbamat de dimetil, carbamat de Nfenil şi carbamat de N-metil-N-(o-nitrofenil).

Оn sfera prezentei invenţii, o grupare de protecţie amino este definită a fi fragmentul Nlegat care rezultă din protecţia grupării amino prin formarea unei grupări amino adecvate protejate. Exemple de grupări amino protejate includ carbamaţi, uree, amide, sisteme heterociclice, N-alchilamine, N-alchenilamine, N-alchinilamine, N-arilamine, imine, enamine, derivaţi N-metal, derivaţi N-N, derivaţi N-P, derivaţi N-Si şi derivaţi N-S. Оn cazul carbamaţilor, gruparea protectoare pentru gruparea amino împreună cu gruparea amino la care aceasta este ataşată formează un carbamat care poate fi ales dintre carbamat de metil, carbamat de etil, carbamat de 9-fluorenilmetil, carbamat de 2,6-di-t-butil-9-fluorenilmetil, carbamat de 2,7bis(trimetilsilil)fluorenilmetil, carbamat de 9-(2-sulfo)fluorenilmetil, carbamat de 9-(2,7dibrom)fluorenilmetil, carbamat de 17-tetrabenzo[a,c,g,i]fluorenilmetil, carbamat de 2-clor-3indenilmetil, carbamat de benz[f]inden-3-ilmetil, carbamat 1,1-dioxobenzo[b]-tiofen-2-ilmetil, carbamat de 2-metilsulfonil-3-fenil-1-prop-2-enil, carbamat de 2,7-di-t-butil-[9,(10,10-dioxo10,10,10,10-tetrahidrotioxantil)]metil, carbamat de 2,2,2-tricloretil, carbamat 2-trimetilsililetil, carbamat de (2-fenil-2-trimetilsilil)etil, carbamat de 2-feniletil, carbamat de 2-cloretil, carbamat de 1,1-dimetil-2-haloetil, carbamat de 1,1-dimetil-2,2-dibromoetil, carbamat de 1,1-dimetil2,2,2-tricloretil, carbamat de 2-(2'-piridil)etil, carbamat de 2-(4'-piridil)etil, carbamat de 2,2bis(4'-nitrofenil)etil, carbamat de 2-[(2-nitrofenil)ditio]-1-feniletil, carbamat de 2-(N,Ndiciclohexil-carboxamido)etil, carbamat de t-butil, carbamat de fluor BOC, carbamat de 1adamantil, carbamat de 2-adamantil, carbamat de 1-(1-adamantil)-1-metiletil, carbamat de 1metil-1-(4-bifenilil)etil, carbamat de 1-(3,5-di-t-butilfenil)-1-metiletil, carbamat de triizopropilsililoxi, carbamat de vinil, carbamat de alil, carbamat de prenil, carbamat de 1izopropilalil, carbamat de cinamil, carbamat de 4-nitrocinamil, carbamat de 3-(3'-piridil)prop-2enil, carbamat de hexadienil, carbamat de propargil, biscarbamat de 1,4-but-2-inil, carbamat de 8-chinolil, carbamat de N-hidroxipiperidinil, ditiocarbamat de alchil, carbamat de benzil, carbamat de 3,5-di-t-butilbenzil, carbamat de p-metoxibenzil, carbamat de p-nitrobenzil, carbamat de p-bromobenzil, carbamat de p-clorobenzil, carbamat de 2,4-diclorbenzil, carbamat de 4-metilsulfinilbenzil, carbamat de 4-trifluormetilbenzil, carbamat de fluorobenzil, carbamat de 2-naftilmetil, carbamat de 9-antrilmetil, carbamat de difenilmetil, carbamat de 4-fenilacetoxibenzil, carbamat de 4-azidobenzil, carbamat de 4-azido-metoxibenzil, carbamat de m-clor-p-aciloxibenzil, carbamat de m-cloro-p-aciloxibenzil, carbamat de p-(dihidroxiboril)benzil, carbamat de 5-benzizoxazolilmetil, carbamat de 2-(trifluormetil)-6-cromonilmetil, carbamat de 2-metiltioetil, carbamat de 2-metilsulfoniletil, carbamat de 2-(p-toluensulfonil)etil, carbamat de 2-(4-nitrofenilsulfonil)etil, carbamat de 2-(2,4-dinitrofenilsulfonil)etil, carbamat de 2-(4-trifluormetilfenilsulfonil)etil, carbamat de [2-(1,3-ditianil)]metil, carbamat de 2-fosfonioetil, carbamat de 2-[fenil(metil)sulfonio]etil, carbamat de 1-metil-1-(trifenilfosfonio)etil, de 1,1dimetil-2-cianoetil, carbamat 2-dansilietil, carbamat de 2-(4-nitrofenil)etil, carbamat de 4metiltiofenil, carbamat de 2,4-dimetiltiofenil, carbamat de m-nitrofenil, carbamat de 3,5dimetoxibenzil, carbamat de 1-metil-1-(3,5-dimetoxifenil)etil, carbamat de α-metilnitropiperonil, carbamat de o-nitrobenzil, carbamat de 3,4-dimetoxi-6-nitrobenzil, carbamat de fenil(o-nitrofenil)metil, carbamat de 2-nitrofeniletil, carbamat de 6-nitroveratril, carbamat de 4metoxifenacil, carbamat de 3',5'-dimetoxibenzoin, carbamat de 9-xantenilmetil, carbamat de N-metil-N-(o-nitrofenil), carbamat de t-amil, carbamat de 1-metilciclobutil, carbamat de 1metilciclohexil, carbamat de 1-metil-1-ciclopropilmetil, carbamat de ciclobutil, carbamat de ciclopentil, carbamat de ciclohexil, carbamat de izobutil, carbamat de izobornil, carbamat de ciclopropilmetil, carbamat de p-deciloxibenzil, carbamat de diizopropilmetil, carbamat de 2,2dimetoxi-carbonilvinil, carbamat de o-(N,N-dimetilcarboxamido)benzil, carbamat de 1,1dimetil-3-(N,N-dimetil-carboxamido)propil, carbamat de butinil, carbamat de 1,1dimetilpropinil, carbamat de 2-iodoetil, carbamat de 1-metil-1-(4'-piridil)etil, carbamat de 1metil-1-(p-fenilazofenil)etil, carbamat de p-(p'-metoxifenilazo)benzil, carbamat de p-(fenilazo) benzil, carbamat de 2,4,6-trimetilbenzil, carbamat de izonicotinil, carbamat de 4(trimetilamoniu)benzil, carbamat de p-cianobenzil, carbamat de di(2-piridil)metil, carbamat de 2-furanilmetil, carbamat de fenil, carbamat de 2,4,6-tri-t-butilfenil carbamat, carbamat de 1metil-1-feniletil şi tiocarbamat de S-benzil. În cazul ureelor, grupările protectoare pentru gruparea amino pot fi alese dintre fenotiazinil-(10)-carbonil, N'-p-toluensulfonilaminocarbonil,

N'-fenilaminotiocarbonil, 4-hidroxifenilaminocarbonil, 3-hidroxitriptaminocarbonil şi N'fenilaminotiocarbonil. În cazul amidelor, gruparea protectoare pentru amino împreună cu gruparea amino la care este ataşată formează o amidă care poate fi aleasă dintre formamidă, acetamidă, cloracetamidă, tricloracetamidă, trifluoracetamidă, fenilacetamidă, 3fenilpropanamidă, pent-4-enamidă , picolinamidă, 3-piridilcarboxamidă, N-benzoil-fenilalanil amidă, benzamidă, p-fenilbenzamidă, o-nitrofenilacetamidă, 2,2-dimetil-2-(o-nitrofenil) acetamidă, o-nitrofenoxiacetamidă, 3-(o-nitrofenil)propanamida, 2-metil-2-(o-nitrofenoxi) propanamidă, 3-metil-3-nitrobutanamidă, o-nitrocinamidă, o-nitrobenzamidă, 3-(4-t-butil-2,6dinitrofenil)-2,2-dimetilpropanamidă, o-(benzoiloxi-metil)benzamidă, 2-(acetoximetil) benzamidă, 2-[(t-butildifenilsiloxi)metil]benzamidă, 3-(3',6'-dioxo-2',4',5'-trimetilciclohexa-1',4'-dien)3,3-dimetilpropionamidă, o-hidroxi-trans-cinamidă, 2-metil-2-(o-fenilazofenoxi)propanamidă,

4-clorbutanamidă, aceto-acetamidă, 3-(p-hidroxifenil)propanamidă, (Nʻ-ditiobenziloxicarbonilamino) acetamidă şi N-acetilmetioninamidă. În cazul sistemelor heterociclice, gruparea protectoare pentru gruparea amino împreună cu gruparea amino la care este ataşată formează un sistem heterociclic care poate fi ales dintre 4,5-difenil-3-oxazolin-2-onă, N-ftalimidă, Ndicloroftalimidă, N-tetracloroftalimidă, N-4-nitroftalimidă, N-tiodiglicoloil, N-ditiasuccinimidă, N-

2,3-difenilmaleimidă, N-2,3-dimetilmaleimidă, N-2,5-dimetil-pirol, N-2,5bis(triizopropilsiloxi)pirol, aduct de N-1,1,4,4-tetrametildisililazaciclo-pentan, N-1,1,3,3-tetrametil-1,3-disilaisoindolină, N-difenilsilildietilenă, N-5-substituit-1,3-dimetil-1,3,5-triazaciclohexan-2-onă, N-5-substituit-1,3-benzil-1,3,5-triazaciclo-hexan-2-onă, 3,5-dinitro-4-piridonă 1substituită şi 1,3,5-dioxazină. În cazul în care N-alchil-, N-alchenil-, N-alchinil- sau N-arilamine din care gruparea protectoare pentru gruparea amino poate fi aleasă dintre N-metil, N-t-butil,

N-alil, N-prenil, N-cinamil, N-fenilalil, N-propargil, N-metoximetil, N-[2-(trimetilsilil)etoxi]metil, N-3-acetoxipropil, N-cianometil, N-2-azanorbornen, N-benzil, N-4-metoxibenzil, N-2,4dimetoxibenzil, N-2-hidroxibenzil, N-ferocenilmetil, N-2,4-dinitrofenil, o-metoxifenil, pmetoxifenil, N-9-fenilfluorenil, N-fluorenil, N-2-picolilamină N'-oxid, N-7-metoxicumar-4-ilmetil, N-difenilmetil, N-bis(4-metoxifenil)metil, N-5-dibenzosuberil, N-trifenilmetil, N-(4-metilfenil)difenilmetil şi N-(4-metoxifenil)difenilmetil. În cazul iminelor, gruparea protectoare pentru gruparea amino poate fi aleasă dintre N-1,1-dimetiltiometilen, N-benziliden, N-pmetoxibenziliden, N-difenilmetilen, N-[2-piridil)mesitil]metilen, N-(N',N'-dimetilaminometilen), N-(N',N'-dibenzilaminometilen), N-(N'-t-butilamino-metilen), N,N'-izopropiliden, N-p-nitrobenziliden, N-saliciliden, N-5-clorosaliciliden, N-(5-clor-2-hidroxifenil)fenilmetilen, Nciclohexiliden şi N-t-butiliden. Оn cazul enaminelor, gruparea protectoare pentru gruparea amino poate fi aleasă dintre N-(5,5-dimetil-3-oxo-1-ciclohexenil), N-2,7-diclor-9fluorenilmetilen, N-1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexiliden)etil, N-(1,3-dimetil-2,4,6-(1H,3H,5H)trioxopirimidin-5-iliden)-metil, N-4,4,4-trifluor-3-oxo-1-butenil şi N-(1-izopropil-4-nitro-2-oxo-3pirolin-3-il). Оn cazul derivaţilor N-metal, gruparea protectoare pentru gruparea amino poate fi aleasă dintre N-boran, ester N-difenilborinic, ester N-dietilborinic, N-9-borabiciclononan, ester N-difluoroborinic şi acid 3,5-bis(trifluormetil)fenilboronic; şi, de asemenea, inclusiv Nfenil(pentacarbonilcrom)carbenil, N-fenil(pentacarbonil-tungsten)carbenil, N-metil(pentacarbonilcromiu)carbenil, N-metil(pentacarboniltungsten)carbenil, N-chelat de cupru, N-chelat de zinc şi un derivat 18-coroană-6. În cazul derivaţilor N-N, gruparea protectoare pentru gruparea amino împreună cu gruparea amino la care este ataşată formează un derivat N-N care poate fi ales dintre N-nitroamino, N-nitrozoamino, N-oxid amină, azidă, derivat de triazen şi N-trimetilsililmetil-N-benzilhidrazină. În cazul derivaţilor N-P, gruparea protejată pentru gruparea amino împreună cu gruparea amino la care este ataşată formează un derivat N-P care poate fi ales dintre difenilfosfinamidă, dimetiltiofosfinamidă, difeniltiofosfinamidă, dialchil fosforamidat, dibenzil fosforamidat, difenil fosforamidat şi iminotrifenilfosforan. Оn cazul derivaţilor N-Si gruparea protectoare pentru NH2 poate fi aleasă dintre t-butildifenilsilil şi trifenilsilil. Оn cazul derivaţilor N-S gruparea amino protejată poate fi aleasă dintre derivaţii Nsulfenil sau N-sulfonil. Derivaţii de N-sulfenil pot fi aleşi dintre benzensulfenamidă, 2nitrobenzensulfenamidă, 2,4-dinitrobenzensulfenamidă, penta-clorbenzensulfenamidă, 2nitro-4-metoxibenzensulfenamidă, trifenilmetilsulfen-amidă, 1-(2,2,2-trifluoro-1,1-difenil)etilsulfenamidă şi N-3-nitro-2-piridinsulfenamidă. Derivaţii N-sulfonil pot fi aleşi dintre metansulfonamidă, trifluormetansulfonamidă, t-butilsulfonamidă, benzilsulfonamidă, 2(trimetilsilil)etan sulfonamidă, p-toluensulfon-amidă, benzensulfonamidă, o-anisilsulfonamidă, 2-nitrobenzensulfonamidă, 4-nitrobenzensulfonamidă, 2,4-dinitrobenzensulfonamidă, 2naftalensulfonamidă, 4-(4',8'-dimetoxinaftilmetil)benzensulfonamidă, 2-(4-metilfenil)-6-metoxi4-metilsulfon-amidă, 9-antracensulfonamidă, piridin-2-sulfonamidă, benzotiazol-2sulfonamidă, fenacilsulfonamidă, 2,3,6-trimetil-4-metoxibenzensulfonamidă, 2,4,6trimetoxibenzen-sulfon-amidă, 2,6-dimetil-4-metoxibenzensulfonamidă, pentametilbenzensulfon-amidă, 2,3,5,6-tetrametil-4-metoxibenzensulfonamidă, 4metoxibenzensulfonamidă, 2,4,6-trimetilbenzen-sulfonamidă, 2,6-dimetoxi-4metilbenzensulfonamidă, 3-metoxi-4-t-butilbenzensulfonamidă şi 2,2,5,7,8pentametilcroman-6-sulfonamidă.

Оn sfera prezentei invenţii, o grupare protectoare pentru SH este definită ca fiind fragmentul legat la S care rezultă din protecţia grupării SH prin formarea unei grupări SH protejate adecvate. Exemple de astfel de grupări SH protejate includ tioeteri, disulfuri, tioeteri sililici, tioesteri, tiocarbonaţi şi tiocarbamaţi. În cazul tioeterilor, gruparea protectoare pentru SH poate fi aleasă dintre S-alchil, S-benzil, S-p-metoxibenzil, S-o-hidroxibenzil, S-phidroxibenzil, S-o-acetoxibenzil, S-p-acetoxibenzil, S-p-nitrobenzil, S-o-nitrobenzil, S-2,4,6trimetilbenzil, S-2,4,6,-trimetoxibenzil, S-4-picolil, S-2-picolil-N-oxid, S-2-chinolinilmetil, S-9antrilmetil, S-9-fluorenilmetil, S-xantenil, S-ferocenilmetil, S-difenilmetil, S-bis(4metoxifenil)metil, S-5-dibenzosuberil, S-trifenilmetil, 4-metoxitritil, S-difenil-4-piridilmetil, Sfenil, S-2,4-dinitrofenil, S-2-chinolil, S-t-butil, S-1-adamantil, S-metoximetil, S-izobutoximetil, S-benziloximetil, S-1-etoxietil, S-2-tetrahidropiranil, S-benziltiometil, S-feniltiometil, Sacetamidometil (Acm), S-trimetilacetamidometil, S-benzamidometil, S-aliloxicarbonil-aminometil, S-N-[2,3,5,6-tetrafluor-4-(N'-piperidino)-fenil-N-aliloxicarbonilaminometil, S-ftalimidometil, S-fenilacetamidometil, S-acetilmetil, S-carboximetil, S-cianometil, S-(2-nitro-1-fenil)etil, S-2-(2,4-dinitrofenil)etil, S-2-(4'-piridil)etil, S-2-cianoetil, S-2-(trimetilsilil)etil, S-2,2bis(carboetoxi)etil, S-(1-m-nitrofenil-2-benzoil)etil, S-2-fenilsulfoniletil, S-1-(4-metilfenilsulfonil)-2-metilprop-2-il şi S-p-hidroxifenacil. În cazul disulfurilor, gruparea SH protejată poate fi aleasă dintre disulfura de S-etil, disulfura de S-t-butil, disulfură de S-2-nitrofenil, disulfură de S-2,4-dinitrofenil, disulfură de S-2-fenilazofenil, disulfură de S-2-carboxifenil şi disulfură de S-3-nitro-2-piridil. În cazul tioeterilor sililici, gruparea protectoare pentru SH poate fi aleasă din lista grupărilor de mai sus pentru protecţia OH cu eteri sililici. Оn cazul tioesterilor, gruparea protectoare pentru SH poate fi aleasă dintre S-acetil, S-benzoil, S-2-metoxiizobutiril, Strifluoracetil, S-N-[[p-bifenilil)-izopropiloxi]carbonil]-N-metil-y-aminotiobutirat şi S-N-(t-butoxicarbonil)-N-metil-y-aminotiobutirat. În cazul grupării protectoare tiocarbonat pentru SH poate fi aleasă dintre S-2,2,2-tricloretoxicarbonil, S-t-butoxicarbonil, S-benziloxicarbonil, S-pmetoxibenziloxicarbonil şi S-fluorenilmetilcarbonil. Оn cazul tiocarbamatului, gruparea SH protejată poate fi alesă dintre S-(N-etilcarbamat) şi S-(N-metoximetilcarbamat).

Menţionarea acestor grupări nu trebuie interpretată ca o limitare a sferei invenţiei, deoarece acestea au fost menţionate ca o simplă ilustrare a grupărilor de protecţie pentru grupările OH, amino şi SH, dar alte grupări care au funcţia menţionată pot fi cunoscute de către un specialist în domeniu şi trebuie să se înţeleagă că sunt de asemenea cuprinse în prezenta invenţie.

Pentru a prezenta o descriere mai concisă, unele dintre expresiile cantitative date aici nu sunt calificate cu termenul „aproximativ». Se оnţelege că, indiferent dacă termenul „aproximativ» este utilizat în mod explicit sau nu, fiecare cantitate dată aici este menită să se refere la valoarea dată reală şi, de asemenea, este menită să se refere la aproximarea unei astfel de valori date care s-ar deduce în mod rezonabil, bazat pe cunoştinţele unui specialist оn domeniu, inclusiv echivalente şi aproximări datorate condiţiilor experimentale şi/sau de măsurare pentru o asemenea de valoare dată.

Compusul conform invenţiei este un compus cu formula IE sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau ester al acestuia:

оn care:

X este -NH- sau -O-;

R1 este -OH sau -CN;

R2 este o grupare -C(=O)Ra;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb;

R4 este ales dintre -CH2NH2 şi -CH2NHProtNH;

Compuşii preferaţi dintre compuşii cu formula IE sunt cei cu formula generală IEa sau IEb sau o sare sau ester acceptabile din punct de vedere farmaceutic ai acestora:

Compuşii preferaţi includ compuşiii cu formula generală IE, IEa şi IEb, оn care: X este NH-; şi R1; R2; R3; R4; Ra; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

Compuşii preferaţi includ compuşiii cu formula generală IE, IEa şi IEb, оn care: X este O-; şi R1; R2; R3; R4; Ra; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

Alţi compuşi preferaţi includ compuşiii cu formula generală IE, IEa şi IEb, оn care: R1 este -OH; şi X; R2; R3; R4; Ra; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

Alţi compuşi preferaţi includ compuşiii cu formula generală IE, IEa şi IEb, оn care: R2 este o grupare -C(=O)Ra оn care Ra este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Оn special preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil; şi X; R1; R3; R4; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

Alţi compuşi preferaţi includ compuşiii cu formula generală IE, IEa şi IEb, оn care: R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, Iea şi IEb; оn care Rb este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen şi metoxi, hidrogenul fiind cea mai preferată grupare R3; şi X; R1; R2; R4; Ra; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

Alţi compuşi preferaţi includ compuşii cu formula generală IE, IEa şi IEb, оn care:

R4 poate fi -CH2NH2; şi X; R1; R2; R3; Ra; şi Rb sunt definiţi mai sus.

Alţi compuşi preferaţi includ compuşiii cu formula generală IE, IEa şi IEb, оn care:

X este -NH-; R1 este -OH; şi R2; R3; R4; Ra; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R2 este un -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Ra este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Оn special preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil; şi R1; R3; R4; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferabil R3 este hidrogen şi metoxi, hidrogenul fiind cea mai preferată grupare R3; şi R1; R2; R4; Ra; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R1; R2; R3; Ra; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R1 este -OH;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Ra este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil; şi R3; R4; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R1 este -OH;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit . Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen sau metoxi, hidrogenul fiind cea mai preferată grupare R3; şi R2; R4; Ra; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R1 este -OH;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R2; R3; Ra; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Ra este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen şi metoxi, hidrogenul fiind cea mai preferată grupare R3; şi R1; R4; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R1; R3; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen şi metoxi, R3 cel mai preferat fiind hidrogen; R4 poate fi -CH2NH2; şi R1; R2; şi Ra; sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R1 este -OH;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen şi metoxi, R3 cel mai preferat fiind hidrogen ; şi R4; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R1 este -OH;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R3; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -NH-;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen şi metoxi, hidrogenul fiind cel mai preferat R3;

R4 poate fi -CH2NH2;

şi R1 este aşa cum este definit mai sus.

X este -NH-;

R1 este -OH;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; unde Ra este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen şi metoxi, hidrogenul fiind cel mai preferat R3;

R4 poate fi -CH2NH2.

X este -O-;

R1 este -OH; şi R2; R3; R4; Ra; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Ra este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil; şi R1; R3; R4; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 este hidrogen şi metoxi, R3 fiind cel mai preferat hidrogen; şi R1; R2; R4; Ra; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R1; R2; R3; Ra; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R1 este -OH;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Ra este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit . Deosebit de preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi terţ-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil; şi R3; R4; Rb; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R1 este -OH;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 sunt hidrogen şi metoxi, R3 fiind de preferinţă hidrogen; şi R2; R4; Ra; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R1 este -OH;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R2; R3; Ra; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 sunt hidrogen şi metoxi, hidrogenul fiind cel mai preferat R3; şi R1; R4; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R1; R3; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 sunt hidrogen şi metoxi, cel mai preferat R3 fiind hidrogen;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R1; R2; şi Ra; sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R1 este -OH;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 sunt hidrogen şi metoxi, cel mai preferat R3 fiind hidrogen; şi R4; şi ProtNH sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R1 este -OH;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R3; şi Rb sunt definiţi mai sus.

X este -O-;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 sunt hidrogen şi metoxi, cel mai preferat R3 fiind hidrogen;

R4 poate fi -CH2NH2; şi R1 este aşa cum este definit ca mai sus.

X este -O-;

R1 este -OH;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Ra este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; оn care Rb este un alchil Ci-Ce substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 sunt hidrogen şi metoxi, R3 cel mai preferat fiind hidrogen;

R4 poate fi -CH2NH2.

Următorii substituenţi preferaţi (în care sunt permise posibile grupări de substituenţi) se aplică la compuşii cu formula IE, IEa şi IEb:

Оn compuşii prezentei invenţii, R1 preferat оn mod special este -OH.

Оn compuşii prezentei invenţii, preferat оn mod special R2 este o grupare -C(=O)Ra оn care Ra este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit . Deosebit de preferat Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Cel mai preferat R2 este acetil.

Оn compuşii prezentei invenţii, preferat оn mod special R3 este hidrogen sau o grupare ORb оn care Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi tert-butil substituit sau nesubstituit. Mai preferat R3 sunt hidrogen şi metoxi, R3 fiind cel mai preferat hidrogen.

Оn compuşii cu formula generală IE, IEa şi IEb R4 preferat оn mod special este CH2NH2.

Sunt оn mod special preferaţi compuşii cu formula IEb.

Оn compuşii prezentei invenţii, X preferat оn mod special este -NH-. Alternativ, оn compuşii prezentei invenţii, X este preferat оn mod special -O-. Compuşii preferaţi conform prezentei invenţii includ:

• Compuşi cu formula IEb оn care

R4 este -CH2NH2.

Compuşii preferaţi оn mod special conform prezentei invenţii includ: � Compuşi cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -NH-.

Sunt mai preferaţi compuşii cu formula IEb şi/sau compuşii оn care R4 este - CH2NH2. � Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -O-.

Fiind compuşii mai preferaţi IEb şi/sau compuşii оn care R4 este - CH2NH2.

• Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb;

Ra este ales dintre hidrogen şi alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit; şi Rb este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit.

Fiind compuşii cu formula mai preferaţi IEb şi/sau compuşi оn care R4 este - CH2NH2. Compuşii mai preferaţi conform prezentei invenţii includ • Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -NH-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb;

R3 este hidrogen sau o grup -ORb pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb;

Fiind compuşii cu formula mai preferaţi оn special IEb şi/sau compuşii оn care R4 este -

CH2NH2.

• Compuşi cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -O-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb;

Ra este ales dintre hidrogen şi alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit; şi Rb este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit .

Fiind compuşii cu formula mai preferaţi оn special IEb şi/sau compuşi оn care R4 este

CH2NH2.

• Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb;

Ra este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit; şi Rb este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit.

Fiind compuşii cu formula mai preferaţi оn special IEb şi/sau compuşi оn care R4 este -

CH2NH2.

Compuşii оn special mai preferaţi conform prezentei invenţii includ:

• Compuşi cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -NH-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; R3 este hidrogen sau metoxi pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; şi Ra este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit.

Fiind compuşii cu formula şi mai preferaţi IEb şi/sau compuşi оn care R4 este -CH2NH2.

• Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -O-;

Fiind compuşii cu formula şi mai preferaţi IEb şi/sau compuşii оn care R4 este -CH2NH2.

• Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care

R2 este o grupare -C(=O)Ra pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb;

R3 este hidrogen sau metoxi pentru compuşii cu formula IE, IEa şi IEb; şi

Ra este ales dintre metil, etil, n-propil, izopropil şi butil, inclusiv n-butil, sec-butil, izobutil şi tert-butil.

Fiind chiar mai preferaţi compuşii cu formula IEb şi/sau compuşii оn care R4 este -

CH2NH2.

Compuşii chiar mai preferaţi conform prezentei invenţii includ:

• Compuşi cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -NH-;

R2 este acetil; R3 este hidrogen; şi

R4 este -CH2NH2.

Fiind cei mai preferaţi compuşii cu formula IEb.

• Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care X este -O-;

R2 este acetil; R3 este hidrogen; şi R4 este -CH2NH2.

Fiind cei mai preferaţi compuşii cu formula IEb.

• Compuşii cu formula IE, IEa şi IEb оn care

R2 este acetil; R3 este hidrogen; şi

R4 este -CH2NH2.

Fiind cei mai preferaţi compuşi cu formula IEb.

• Un compus conform prezentei invenţii cu formula: \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab

\tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab

sau o sare acceptabilă farmaceutic sau ester al acestuia.

Fiind preferat оn mod special un compus cu formula:

\tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab

sau o sare acceptabilă farmaceutic sau ester al acestuia.

\tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab sau o sare acceptabilă farmaceutic sau ester al acestuia.

Fiind preferat оn mod special un compus cu formula:

\tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab \tab

sau o sare acceptabilă farmaceutic sau ester al acestuia.

Fiind mai preferat un compus cu formula:

sau o sare acceptabilă farmaceutic sau ester al acestuia.

Оn exemple de realizare preferate suplimentare, preferinţele descrise mai sus pentru diferiţi substituenţi sunt combinate. Prezenta invenţie se referă, de asemenea, la astfel de combinaţii de substituţii preferate (în care sunt permise posibile grupări substituente) în compuşii cu formula IE, IEa şi IEb conform prezentei invenţii.

O caracteristică importantă a compuşilor descrişi mai sus este bioactivitatea lor şi оn special activitatea lor citotoxică. În această privinţă, s-a descoperit în mod surprinzător că compuşii prezentei invenţii prezintă o activitate antitumorală îmbunătăţită, aşa cum este prezentată în exemplele 27 şi 29 până la 40.

Compoziţii care cuprind un compus cu formula IE, IEa şi IEb conform invenţiei şi utilizări ale acestuia

Оntr-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, este furnizată o compoziţie farmaceutică care cuprinde un compus conform prezentei invenţii şi un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic. Exemplele de formă de administrare includ fără limitare orală, topică, parenterală, sublinguală, rectală, vaginală, oculară şi intranazală. Administrarea parenterală include injecţii subcutanate, tehnici de injecţie intravenoasă, intramusculară, intrasternală sau de perfuzie. De preferinţă, compoziţiile sunt administrate parenteral. Compoziţiile farmaceutice ale invenţiei pot fi formulate astfel încât să permită unui compus conform prezentei invenţii să fie biodisponibil la administrarea compoziţiei la un animal, de preferinţă uman. Compoziţiile pot lua forma uneia sau mai multor unităţi de dozare, în care, de exemplu, o tabletă poate fi o singură unitate de dozare şi un recipient al unui compus conform prezentei invenţii poate conţine compusul în formă lichidă sau sub formă de aerosoli şi poate conţine un o singură sau mai multe unităţi de dozare.

Purtătorul sau vehiculul acceptabil din punct de vedere farmaceutic poate fi sub formă de particule, astfel încât compoziţiile sunt, de exemplu, sub formă de tabletă sau pulbere. Purtătorii pot fi lichide, compoziţiile fiind, de exemplu, un sirop oral sau un lichid injectabil. În plus, purtătorii pot fi gazoşi sau lichizi, astfel încât să furnizeze o compoziţie de aerosoli utilă, de exemplu, în administrarea prin inhalare. Pulberile pot fi, de asemenea, utilizate pentru forme de dozare pentru inhalare. Termenul "purtător" se referă la un diluant, adjuvant sau excipient, cu care este administrat compusul conform prezentei invenţii. Astfel de purtători farmaceutici pot fi lichide, cum ar fi apa şi uleiuri, inclusiv cele de origine petrolieră, animală, vegetală sau sintetică, cum ar fi uleiul de arahide, uleiul de soia, uleiul mineral, uleiul de susan şi altele asemenea. Purtătorii pot fi ser fiziologic, gumă de salcâm, gelatină, pastă de amidon, talc, cheratină, silice coloidală, uree, dizaharide şi altele asemenea. Оn plus, se pot utiliza agenţi auxiliari, stabilizatori, de оngroşare, lubrifianţi şi coloranţi. Оntr-un exemplu de realizare, atunci cвnd sunt administrate unui animal, compuşii şi compoziţiile conform prezentei invenţii şi purtătorii acceptabili farmaceutic sunt sterili. Apa este un purtător preferat atunci când compuşii conform prezentei invenţii sunt administraţi intravenos. Soluţiile saline şi soluţiile apoase de dextroză şi glicerol pot fi, de asemenea, folosite ca purtători lichizi, în special pentru soluţiile injectabile. Purtătorii farmaceutici adecvaţi includ, de asemenea, excipienţi cum ar fi amidon, glucoză, lactoză, zaharoză, gelatină, malţ, orez, făină, cretă, silicagel, stearat de sodiu, monostearat de glicerol, talc, clorură de sodiu, lapte degresat anhidru, glicerol, propilenglicol, apă, etanol şi altele asemenea. Compoziţiile prezente, dacă se doreşte, pot conţine, de asemenea, cantităţi minore de agenţi de umectare sau de emulsionare sau agenţi de tamponare a pH-ului.

Atunci când este destinată administrării orale, compoziţia este, de preferinţă, în formă solidă sau lichidă, în care formele semisolide, semilichide, suspensie şi gel sunt incluse оn formele considerate aici fie solide, fie lichide.

Sub formă de compoziţie solidă pentru administrare orală, compoziţia poate fi formulată sub formă de pulbere, granulă, tabletă comprimată, pilulă, capsulă, gumă de mestecat, napolitană sau o formă similară. O astfel de compoziţie solidă conţine de obicei unul sau mai mulţi diluanţi inerţi. Оn plus, pot fi prezenţi unul sau mai mulţi pentru următoarele: lianţi cum ar fi carboximetilceluloza, etilceluloza, celuloza microcristalină sau gelatina; excipienţi cum ar fi amidon, lactoză sau dextrine, agenţi de dezintegrare cum ar fi acid alginic, alginat de sodiu, amidon de porumb şi alţii asemenea; lubrifianţi cum ar fi stearat de magneziu; agenţi de alunecare cum ar fi dioxidul de siliciu coloidal; agent de îndulcire cum ar fi zaharoza sau zaharina; un agent de aromatizare cum ar fi aroma de mentă, salicilat de metil sau portocale; şi un colorant.

Cвnd compoziţia este sub formă de capsulă (de exemplu, o capsulă de gelatină), aceasta poate conţine, оn plus faţă de materialele de tipul de mai sus, un purtător lichid cum ar fi polietilenglicol, ciclodextrine sau un ulei gras.

Compoziţia poate fi sub formă de lichid, de exemplu, un elixir, sirop, soluţie, emulsie sau suspensie. Lichidul poate fi util pentru administrare orală sau pentru administrare prin injectare. Atunci când este destinată administrării orale, o compoziţie poate cuprinde unul sau mai mulţi dintre un agent de оndulcire, conservanţi, colorant/colorant şi amplificator de aromă. Оntr-o compoziţie pentru administrare prin injectare, pot fi de asemenea incluse unul sau mai mulţi dintre un surfactant, conservant, agent de umectare, agent de dispersie, agent de suspendare, tampon, stabilizator şi agent izotonic.

Calea preferată de administrare este administrarea parenterală incluzând, dar fără a se limita la, intradermică, intramusculară, intraperitoneală, intravenoasă, subcutanată, intranazală, epidurală, intracerebrală, intraventriculară, intratecală, intravaginală sau transdermică. Modul preferat de administrare este lăsat la discreţia medicului şi va depinde parţial de locul afecţiunii medicale (cum ar fi situsul cancerului). Оntr-un exemplu de realizare mai preferat, compuşii conform prezentei invenţii sunt administraţi intravenos. Se preferă să se utilizeze timpi de perfuzie de până la 24 de ore, mai preferabil 1 până la 12 ore, cel mai preferat fiind 1 până la 6 ore. Timpii de perfuzie scurţi care permit efectuarea tratamentului fără o şedere peste noapte оntr-un spital sunt de dorit în special. Cu toate acestea, perfuzia poate dura 12 până la 24 de ore sau chiar mai mult dacă este necesar. Perfuzia poate fi efectuată la intervale adecvate de exemplu, de 1 până la 4 săptămâni.

Compoziţiile lichide ale invenţiei, dacă sunt soluţii, suspensii sau alte forme similare, pot include, de asemenea, unul sau mai multe dintre următoarele: diluanţi sterili, cum ar fi apa pentru injecţie, soluţie salină, de preferinţă ser fiziologic, soluţie Ringer, clorură de sodiu izotonică, uleiuri fixe cum ar fi mono sau digliceride sintetice, polietilenglicoli, glicerină sau alţi solvenţi; agenţi antibacterieni cum ar fi alcool benzilic sau metilparaben; şi agenţi pentru ajustarea tonicităţii, cum ar fi clorura de sodiu sau dextroza. O compoziţie parenterală poate fi înclusă într-o fiolă, o seringă de unică folosinţă sau un flacon cu doze multiple din sticlă, plastic sau alt material. Soluţia salină fiziologică este un adjuvant preferat.

Cantitatea de compus conform prezentei invenţii care este eficientă în tratamentul unei anumite tulburări sau afecţiuni va depinde de natura tulburării sau afecţiunii şi poate fi determinată prin tehnici clinice standard. În plus, testele in vitro sau in vivo pot fi utilizate opţional pentru a ajuta la identificarea intervalelor optime de dozare. Doza precisă care trebuie utilizată în compoziţii va depinde, de asemenea, de calea de administrare şi de gravitatea bolii sau tulburării şi ar trebui să fie decisă în funcţie de judecata medicului şi de circumstanţele fiecărui pacient.

Compoziţiile cuprind o cantitate eficientă dintr-un compus al prezentei invenţii astfel оncвt se va obţine o doză adecvată. Doza corectă a compuşilor va varia оn funcţie de formularea particulară, modul de aplicare şi locul său particular, gazda şi boala care este tratată, de exemplu, cancer şi, dacă da, ce tip de tumoare. Alţi factori precum vârsta, greutatea corporală, sexul, dieta, timpul de administrare, rata de excreţie, starea gazdei, combinaţiile de medicamente, sensibilităţile de reacţie şi severitatea bolii trebuie luaţi în considerare. Administrarea poate fi efectuată continuu sau periodic în doza maximă tolerată. \tabОn mod tipic, cantitatea este de cel puţin aproximativ 0,01% dintr-un compus din prezenta invenţie şi poate cuprinde cel puţin 80% din greutatea compoziţiei. Când este destinată administrării orale, această cantitate poate varia de la aproximativ 0,1% până la aproximativ 80% în greutate din compoziţie. Compoziţiile orale preferate pot cuprinde de la aproximativ 4% până la aproximativ 50% din compusul prezentei invenţii оn greutatea compoziţiei. Compoziţiile preferate ale prezentei invenţii sunt preparate astfel încât o unitate de dozare parenterală să conţină de la aproximativ 0,01% până la aproximativ 10% în greutate din compusul prezentei invenţii. Unitatea de dozare parenterală mai preferată conţine aproximativ 0,5 % până la aproximativ 5 % în greutate compus din prezenta invenţie. \tabPentru administrare intravenoasă, compoziţia este adecvată pentru doze de la aproximativ 0,1 mg/kg până la aproximativ 250 mg/kg din greutatea corporală a animalului, de preferinţă de la aproximativ 0,1 mg/kg şi aproximativ 20 mg/kg din greutatea corporală a animalului, şi mai preferabil de la aproximativ 1 mg/kg până la aproximativ 10 mg/kg din greutatea corporală a animalului. Compusul prezentei invenţii poate fi administrat pe orice cale convenabilă, de exemplu prin perfuzie sau injectare în bolus, prin absorbţie prin căptuşeli epiteliale sau mucocutanate. Оn exemple de realizare specifice, poate fi de dorit să se administreze unul sau mai mulţi compuşi ai prezentei invenţii sau compoziţii local, în zona care este necesar tratament. Într-un exemplu de realizare, administrarea poate fi prin injectare directă la locul (sau locul anterior) al unui cancer, tumoră sau ţesut neoplazic sau pre-neoplazic. Administrarea pulmonară poate fi, de asemenea, utilizată, de exemplu, prin utilizarea unui inhalator sau nebulizator şi formulare cu un agent de aerosolizare sau prin perfuzie оntrun surfactant pulmonar fluorocarbon sau sintetic. Оn anumite variante de realizare, compusul prezentei invenţii poate fi formulat ca supozitor, cu lianţi şi purtători tradiţionali, cum ar fi trigliceride. Compoziţiile prezente pot lua forma de soluţii, suspensii, emulsii, tablete, pastile, pelete, capsule, capsule care conţin lichide, pulberi, formulări cu eliberare susţinută, supozitoare, emulsii, aerosoli, spray-uri, suspensii sau orice altă formă adecvată pentru utilizare. Alte exemple de purtători farmaceutici adecvaţi sunt descrise оn "Remington's Pharmaceutical Sciences" de E. W. Martin. Compoziţiile farmaceutice pot fi preparate folosind o metodologie bine cunoscută în domeniul farmaceutic. De exemplu, o compoziţie destinată a fi administrată prin injectare poate fi preparată prin combinarea unui compus din prezenta invenţie cu apă sau alt diluant adecvat fiziologic, cum ar fi soluţie salină tamponată cu fosfat, astfel încât să formeze o soluţie. Se poate adăuga un surfactant pentru a facilita formarea unei soluţii sau suspensii omogene. Compoziţiile preferate conform prezentei invenţii includ: • Compoziţii farmaceutice care cuprind un compus al prezentei invenţii şi o dizaharidă. Dizaharidele preferate în mod special sunt alese dintre lactoză, trehaloză, zaharoză, maltoză, izomaltoză, celobioză, izozaharoză, izotrehaloză, turanoză, melibioză, gentiobioză şi amestecuri ale acestora. • Compoziţii farmaceutice liofilizate care cuprind un compus al prezentei invenţii şi o dizaharidă. Dizaharidele preferate în mod special sunt alese dintre lactoză, trehaloză, zaharoză, maltoză, izomaltoză, celobioză, izozaharoză, izotrehaloză, turanoză, melibioză, gentiobioză şi amestecuri ale acestora. Raportul dintre substanţa activă şi dizaharidă în exemplele de realizare ale prezentei invenţii este determinat оn funcţie de solubilitatea dizaharidei şi, atunci când formularea este liofilizată, de asemenea, în funcţie de liofilitatea dizaharidei. Se are în vedere că acest raport substanţă activă: dizaharidă (greut/greut) poate fi de aproximativ 1:10 în unele exemple de realizare, aproximativ 1:20 în alte exemple de realizare, aproximativ 1:50 în încă alte exemple de realizare. Se are în vedere că alte exemple de realizare au astfel de rapoarte în intervalul de la aproximativ 1:5 până la aproximativ 1:500 şi încă alte exemple de realizare au astfel de rapoarte în intervalul de la aproximativ 1:10 până la aproximativ 1:500. Compoziţia care cuprinde un compus din prezenta invenţie poate fi liofilizată. Compoziţia care cuprinde un compus conform prezentei invenţii este prezentată de obicei într-o fiolă care conţine o cantitate menţionată dintr-un astfel de compus. S-a descoperit că compuşii prezentei invenţii şi compoziţiile prezentei invenţii sunt deosebit de eficace оn tratamentul cancerului. Astfel, aşa cum s-a descris mai devreme, prezenta invenţie furnizează un compus sau o compoziţie pentru utilizare оn tratamentul cancerului şi, mai preferabil, un cancer ales dintre cancerul pulmonar, inclusiv cancerul pulmonar fără celule mici şi cancerul pulmonar cu celule mici, cancerul de colon, cancerul de sân, cancer de pancreas, sarcom, cancer ovarian, cancer de prostată şi cancer gastric. Astfel, compuşii şi compoziţiile conform prezentei invenţii sunt utili pentru inhibarea оnmulţirii sau proliferării unei celule tumorale sau a unei celule canceroase sau pentru tratarea cancerului la un animal. Compuşii şi compoziţiile conform prezentei invenţii prezintă o activitate excelentă în tratamentul cancerelor cum ar fi cancerul pulmonar, inclusiv cancerul pulmonar fără celule mici şi cancerul pulmonar cu celule mici, cancerul de colon, cancerul de sân, cancerul pancreasului, sarcomul, cancerul ovarian, cancerul de prostată. si cancer gastric. Cele mai preferate tipuri de cancer sunt selectate dintre cancerul pulmonar incluzând cancerul pulmonar fără celule mici şi cancerul pulmonar cu celule mici, cancerul de sвn, cancerul de pancreas şi cancerul colorectal. Оn prezenta cerere, prin "cancer" se оnţelege a include tumori, neoplazii şi orice altă boală malignă având drept cauză ţesut sau celule maligne. Termenul „tratare», aşa cum este utilizat aici, dacă nu se indică altfel, înseamnă inversarea, atenuarea, uşurarea sau inhibarea progresului bolii sau stării la care se aplică un astfel de termen sau unul sau mai multe simptome ale unei astfel de tulburări sau stări. Termenul "tratament", aşa cum este utilizat aici, dacă nu se indică altfel, se referă la actul de a trata, deoarece "tratare" este definit imediat mai sus. Compuşii şi compoziţiile conform prezentei invenţii pot fi administrate la un animal care a suferit şi o intervenţie chirurgicală ca tratament pentru cancer. Într-un exemplu de realizare a prezentei invenţii, tratamentul suplimentar este radioterapia. Оntr-un exemplu de realizare specific al prezentei invenţii, compusul sau compoziţia conform prezentei invenţii este administrată concomitent cu radioterapia. Într-un alt exemplu de realizare specific, terapia cu radiaţii este administrată înainte sau după administrarea compusului sau compoziţiei prezentei invenţii, de preferinţă cel puţin o oră, trei ore, cinci ore, 12 ore, o zi, o săptămână, o lună, mai mult de preferinţă câteva luni (de exemplu, până la trei luni) înainte sau după administrarea unui compus sau compoziţie din prezenta invenţie. Orice protocol de radioterapie poate fi utilizat оn funcţie de tipul de cancer care urmează a fi tratat. De exemplu, dar fără limitare, se pot administra radiaţii cu raze X; în special, megavoltaj de înaltă energie (radiaţia de energie mai mare de 1 MeV) poate fi utilizat pentru tumorile profunde, iar fasciculul de electroni şi radiaţia cu raze X cu ortovoltaj pot fi utilizate pentru cancerele de piele. De asemenea, pot fi administraţi radioizotopi care emit raze gamma, cum ar fi izotopi radioactivi de radiu, cobalt şi alte elemente. Оntr-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, este furnizat un kit care cuprinde o cantitate eficace terapeutic dintr-un compus conform prezentei invenţii şi un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic. Оntr-un exemplu de realizare, kitul conform acestui exemplu de realizare este pentru utilizare оn tratamentul cancerului şi, mai preferabil, un cancer ales dintre cancerul pulmonar, inclusiv cancerul pulmonar cu celule mici şi cancerul pulmonar cu celule mici, cancerul de colon, cancerul de sân, cancerul de pancreas , sarcom, cancer ovarian, cancer de prostată şi cancer gastric. Оntr-un alt exemplu de realizare a prezentei invenţii, este furnizat un procedeu pentru obţinerea unui compus cu formula IE, IEa şi IEb sau o sare acceptabilă farmaceutic sau ester al acestuia, care cuprinde etapa de reacţie a unui compus cu formula II cu un compus cu formula III pentru a da un compus cu formula IV:

în care (în care este permis de posibilele grupări substituente):

X este -NH- sau -O-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb;

R4 este -CH2NHProtNH;

Ra este ales dintre hidrogen, alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit, alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit;

Rb este ales dintre alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit, alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit; şi ProtNH este o grupare protectoare pentru amino.

Este оn special de preferat ca procedeul să cuprindă în plus etapa de deprotejare a lui R4 pentru a furniza un compus cu formula IE, IEa şi IEb оn care R4 este -CH2NH2 şi R1 este ciano.

Оntr-un exemplu de realizare mai preferat, procedeul cuprinde оn plus etapa de оnlocuire a grupării ciano în compusul cu formula IV sau оn compusul cu formula IE, IEa şi IEb оn care R4 este -CH2NH2 şi R1 este ciano cu o grupare hidroxi pentru a da un compus cu formula IE, IEa şi IEb оn care R1 este OH:

Procedeele preferate conform prezentei invenţii includ:

• Un procedeu care utilizează un compus cu formula II оn care:

R2 este o grupare -C(=O)Ra оn care Ra este alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit. Deosebit de preferat Ra este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Mai preferat Ra este o grupare alchil substituită sau nesubstituită aleasă dintre metil, etil, n-propil, izopropil şi butil, inclusiv nbutil, sec-butil, izobutil şi tert-butil, metil fiind cea mai preferată grupare Ra.

• Un procedeu оn care compusul cu formula III este ales dintr-un compus cu formula IIIa,

IIIb şi IIIc:

• оn care

X este ales dintre -NH- şi -O-;

R3 este ales dintre hidrogen şi ORb оn care Rb este alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit. Оn special preferat Rb este un alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit. Mai preferat Rb este o grupare alchil substituită sau nesubstituită aleasă dintre metil, etil, npropil, izopropil şi butil, inclusiv n-butil, sec-butil, izobutil şi tert-butil. Mai preferat R3 este hidrogen sau metoxi. Cel mai preferat R3 este hidrogen.

Оn special preferat este compusul cu formula III care este un compus cu formula IIIa sau IIIb.

• Un procedeu care utilizează un compus cu formula III, IIIa sau IIIb оn care R4 este

- CH2NHProtNH.

Fiind preferat un procedeu care utilizează un compus cu formula IIIa sau IIIb оn care R4 este aşa cum este definit mai sus.

Fiind mai preferat un procedeu care utilizează un compus cu formula IIIb оn care R4 este aşa cum este definit mai sus.

EXEMPLE

Compusul 1 a fost preparat aşa cum este descris оn Exemplul 20 din WO 01/87895. \tabCompuşii de referinţă A, B, C, D, E, F, ET-736 şi PM01183 au fost preparaţi aşa cum este descris оn WO 03/014127 (Compuşii 19, 18, 44, 43, 2,1, 26 şi respectiv 27).

Exemplu de referinţă 1.

La o soluţie de 1 (0,5 g, 0,80 mmol) în acid acetic (20 mL, 0,04 M) s-a adăugat Ltriptofanol (2-S) (533 mg, 3,0 mmol, Sigma-Aldrich). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 16 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de NaHCOs şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4, s-au filtrat şi s-au concentrat în vid. Cromatografia rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) a dat compuşii 3-S (616 mg, 97%) şi 3a-S (12 mg, 2%).

3-S

Rf= 0,50 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (300 MHz, CDCI3): δ 7,71 (s, 1 H), 7,36 (dd, J = 7,9, 1,0 Hz, 1 H), 7,27 (dd, J

= 8,2, 0,9 Hz, 1 H), 7,13 (ddd, J = 8,3, 7,0, 1,2 Hz, 1 H), 7,03 (ddd, J = 8,0, 7,0, 1,0 Hz, 1 H),

6,62 (s, 1 H), 6,26 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,04 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,14 (dd, J = 11,7, 1,2 Hz, 1 H), 4,60 (s, 1 H), 4,41 (s, 1 H), 4,36-4,24 (m, 2H), 4,21 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 3,82 (s, 3H), 3,52 (s, 1 H), 3,50-3,47 (m, 1 H), 3,45 (dq, J = 8,4, 2,2 Hz, 1 H), 3,35 (t, J = 10,1

Hz, 1 H), 3,01-2,78 (m, 5H), 2,62 (dd, J= 15,3, 4,7 Hz, 1 H), 2,41 (s, 1 H), 2,38 (s, 3H), 2,372,31 (m, 1 H), 2,28 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 794,2 (M+H)+.

3a-S

Rf= 0,70 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (500 MHz, CDCI3): δ 7,83 (s, 1 H), 7,38 (dt, J = 7,9, 0,9 Hz, 1 H), 7,25 (dt, J = 8,3, 0,9 Hz, 1 H), 7,11 (ddd, J = 8,2, 7,1, 1,2 Hz, 1 H), 7,02 (ddd, J = 8,0, 7,0, 1,0 Hz, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 6,24 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,03 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,79 (s, 1 H), 5,13 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,60 (s, 1 H), 4,39 (s, 1 H), 4,36-4,22 (m, 3H), 4,17-4,09 (m, 1 H), 3,91 (dd, J = 10,5, 8,6 Hz, 1 H), 3,83 (s, 3H), 3,51-3,41 (m, 2H), 3,04-2,92 (m, 3H), 2,72 (dd, J = 15,1, 4,0

Hz, 1H), 2,54-2,41 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,35-2,30 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,21-2,16 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,12 (s, 3H); 2,05 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CDCI3): δ 171,2, 170,7, 168,6, 147,5, 145,8, 143,0, 141,1, 140,4,

135,6, 130,1, 129,5, 126,7, 122,2, 121,2, 120,9, 119,4, 118,4, 118,2, 113,6, 113,5, 110,9,

110,0, 109,1 , 102,1, 91,4, 67,2, 63,4, 61,3, 60,4, 59,7, 59,1, 54,8, 54,6, 47,7, 42,0, 41,6, 31,6, 24,0, 22,6, 24,0, 21,0, 15,9, 14,2, 9,7.

ESI-MS m/z: 836,2 (M+H)+.

(M+H)+.

La o soluţie de 3-S (616 mg, 0,77 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 51 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (3,40 g, 23,3 mmol). După 3 ore la 23 °C, amestecul de reacţie a fost stins cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCO3, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat sub vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a da 4-S (471 mg, 78%).

Rf= 0,50 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CDCI3): δ 7,71 (s, 1 H), 7,36 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1 H), 7,26 (dd, J

= 7,8, 1,1 Hz, 1 H), 7,12 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1 H), 7,03 (ddd, J = 8,0, 7,1, 1,0 Hz, 1 H),

6,64 (s, 1 H), 6,23 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,25 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 4,92 (s, 1 H), 4,52 (br s, 3H), 4,22 (dd, J = 11,4, 2,2 Hz, 1 H), 4,19 (s, 1 H),

3,83 (s, 3H), 3,54 (br s, 2H), 3,35 (t, J = 10,2 Hz, 1 H), 3,26 (s, 1 H), 3,01-2,93 (m, 3H), 2,88 (br s, 3H), 2,63 (dd, J = 15,2, 4,8 Hz, 1 H), 2,38 (s, 3H), 2,36-2,31 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CDCI3): δ 171,9, 168,6, 147,5, 145,4, 142,9, 141,2, 140,7, 135,5,

130,4, 126,8, 122,3, 122,0, 121,3, 119,4, 118,4, 115,2, 112,8, 111,0, 110,0, 109,6, 101,8, 81,9, 76,8, 65,2 , 62,8, 62,5, 60.4, 58,1, 57,9, 55,9, 55,1, 53,4, 51,6, 41,8, 41,3, 39,6, 24,1, 23,8, 20,5, 15,8, 9,7.

ESI-MS m/z: 767.3 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z 767.2788 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H43N4O9S:

767,2745).

La o soluţie de 3a-S (30 mg, 0,035 mmol) оn CH3CN:H2O O (1,39:1, 2,4 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNOs (180 mg, 1,07 mmol). După 3 ore la 23 °C, amestecul de reacţie a fost stins cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, s-a agitat timp de 15 minute, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 4a-S (24 mg, 83%). \tabRf= 0,60 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,81 (s, 1 H), 7,37 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,30-7,21 (m, 1 H), 7,06 (dddt, J = 34,7, 8,0, 7,1, 1,1 Hz, 2H), 6,63 (s, 1 H), 6,22 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 6,02 (dd, J = 12,9, 1,4 Hz, 1 H), 5,74 (s, 1 H), 5,25-5,21 (m, 1 H), 4,89 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 4,55-4,45 (m, 2H), 4,30-4,18 (m, 1 H), 4,14 (dd, J = 10,5, 4,2 Hz, 1 H), 4,00-3,88 (m, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,56-3,44 (m, 2H), 3,23 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 2,95 (d, J = 15,7 Hz, 2H), 2,87-2,78 (m, 2H), 2,71

(dd, J = 15,0, 3,9 Hz, 1 H), 2,48 (dd, J = 15,1, 9,6 Hz, 1 H), 2,37 (s, 3H), 2,35-2,29 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,22-2,16 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 2,12 ( s, 3H), 2,03 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 809,2 (M-H2O+H)+.

Exemplul de referinţă 2 La o soluţie de 1 (0,5 g, 0,80 mmol) în acid acetic (20 mL, 0,04 M) sa adăugat Dtriptofanol (2-R) (533 mg, 3,0 mmol, Sigma-Aldrich). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 16 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de NaHC0s şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. Cromatografia rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) a dat compusul 3-R (479 mg, 75%). \tabRf= 0,44 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,61 (s, 1 H), 7,39 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,29 (d, J = 9,6 Hz, 1 H), 7,12 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 7,03 (t, J = 7,3 Hz, 1 H), 6,60 (s, 1 H), 6,25 (s, 1 H), 6,03 (s,

1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,04 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,62 (s, 1 H), 4,37 (s, 1 H), 4,32-4,25 (m, 1 H),

4,22 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 4,19-4,09 (m, 1 H), 3,82 (s, 3H), 3,77 (s, 1 H), 3,64 (d, J = 9,0 Hz, 1

H), 3,49-3,41 (m, 2H), 3,02-2,90 (m, 2H), 2,60-2,52 (m, 2H), 2,45 (d, J = 14,7 Hz, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,22-2,14 (m, 2H), 2,18 (s, 3H), 2,10 (m, 3H).

ESI-MS m/z: 794.3 (M+H)+.

La o soluţie de 3-R (479 mg, 0,60 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 40 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNOs (3,03 g, 18,1 mmol). După 3 ore la 23 °C, amestecul de reacţie a fost stins cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, s-a agitat timp de 15 minute, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi s-au concentrat sub vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a se obţine 4-R (428 mg, 91%).

Rf= 0,45 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,62 (s, 1 H), 7,39 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,28 (d, J = 8,1

Hz, 1 H), 7,11 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1 H), 7,02 (ddd, J = 7,9, 7,1, 1,0 Hz, 1 H), 6,61 (s, 1

H), 6,22 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,99 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,73 (s, 1 H), 5,17 (dd, J = 11,5, 1,2 Hz, 1 H), 4,86 (s, 1 H), 4,56-4,47 (m, 2H), 4,17 (dd, J = 5,1, 1,6 Hz, 1 H), 4,08 (dd, J = 11,5, 2,1 Hz, 1 H), 3,81 (s, 3H), 3,78 (d, J = 3,8 Hz, 1 H), 3,64 (dd, J = 10,8, 3,8 Hz, 2H), 3,51 (d, J =

5,1 Hz, 1 H), 3,48-3,43 (m, 2H), 3,24 (d, J = 8,6 Hz, 1 H), 3,00-2,80 (m, 2H), 2,57 (s, 1 H), 2,55-2,43 (m, 1 H), 2,40 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,19-2,12 ( m, 1 H), 2,16 (s, 3H), 2,08 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CDCI3): δ 171,8, 168,6, 147,6, 145,4, 143,0, 141,3, 140,7, 136,0,

131,1, 130,0, 129,6, 126,6, 122,1, 121,6, 121,2, 119,4, 118,4, 115,6, 112,9, 111,1, 110,6, 101,8, 81,7, 65,8 , 62,7, 61,8, 60,4, 60,3, 57,9, 57,8, 56,1, 55,0, 52,1, 42,2, 41,3, 41,1, 23,8, 23,4, 20,5, 15,7, 9,8.

ESI-MS m/z: 767,6 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 767,2799 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H43N4O9S:

767,2745).

Exemplul 3. Prepararea Sinteza N-[(R)-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propil)]carbamatului de alil

(9-R)

La o soluţie de D-triptofanol (2-R) (2,0 g, 10,4 mmoli) оn CH3CN (42 mL, 4 mL/mmol) sa adăugat dicarbonat de di-terţ-butil (4,6 g, 20,8 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 3 ore şi s-a concentrat în vid. Cromatografia rapidă (CH2Cl2:CH3OH de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 5-R (2,2 g, 73%).

Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,13 (s, 1 H), 7,67 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1 H), 7,38 (dd, J

= 8,1, 1,3 Hz, 1 H), 7,29-7,10 (m, 2H), 7,06 (s, 1 H), 4,82 (s, 1 H), 4,00 (s, 1 H), 3,71 (dd, J = 11,0, 3,8 Hz, 1 H), 3,62 (dd, J = 11,0, 5,5 Hz, 1 H), 3,01 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 2,14 (s, 1 H), 1,44 (s, 9H).

La o soluţie de 5-R (2.4 g, 8,2 mmol) оn CH2Cl2 (50 mL, 6 mL/mmol) s-au adăugat ftalimidă (2,7 g, 18,2 mmol), trifenilfosfină (4,8 g, 18,2 mmol) şi amestecul a fost răcit la 0°C. O soluţie de azodicarboxilat de dietil оn CH2Cl2 (25 mL, 3 mL/mmol) s-a adăugat timp de 15 min. Reacţia a fost agitată la 23°C timp de 16 ore, s-a concentrat în vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 6-R (3,3 g, 96%).

Rf= 0,7 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1HRMN(400 MHz, CDCI3): δ 8,50 (s, 1 H), 7,81 (dd, J = 5,5, 3,1 Hz, 2H), 7,66 (dd, J =

5,6, 3,2 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,35 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,19-7,04 (m, 3H), 4,81 (s, 1 H), 4,40 (s, 1 H), 3,83 (dd, J = 13,9, 3,7 Hz, 1 H), 3,72 (dd, J = 13,9, 9,9 Hz, 1 H), 3,083,01 (m, 2H), 1,23 (s, 9H).

\tab

La o soluţie de 6-R (3.25 g, 7,74 mmol) în etanol (231 mL, 30 mL/mmol) s-a adăugat hidrazină monohidrat (37 mL, 774 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C оntr-un tub sigilat timp de 2,25 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (EtOAc:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) s-a obţinut 7-R (2,15 g, 96%).

Rf= 0,2 (EtOAc:CH3OH, 6:4).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,60 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,33 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,13-7,04 (m, 2H), 7,05-6,96 (m, 1 H), 4,02-3,94 (m, 1 H), 2,99-2,87 (m, 3H), 2,78 (dd, J = 13,1, 9,7 Hz, 1 H), 1,39 (s, 9H).

ESI-MS m/z: 290,2 (M+H)+.

La o soluţie de 7-R (2,15 g, 7,4 mmol) оn CH3CN (74 mL, 10 mL/mmol) şi DMF (7,4 mL, 1 mL/mmol) s-a adăugat N,N-diizopropiletilamină (1,06 mL, 5,9 mmol) şi cloroformiat de alil (7,9 mL, 74 mmol). Reacţia a fost agitată la 23 °C timp de 16 ore. Amestecul a fost diluat cu EtOAc, s-a adăugat NH4CI şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100) pentru a se obţine 8-R (1,69 g, 61%).

Rf= 0,4 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,25 (s, 1 H), 7,62 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,35 (dd, J = 8,1,

0,9 Hz, 1 H), 7,16 (dddd, J = 27,8, 8,0, 7,0, 1,1 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 5,90 (ddt, J

= 17,3, 10,7, 5,6 Hz, 1 H), 5,34-5,22 (m, 1 H), 5,20 (dt, J = 10,5, 1,4 Hz, 1 H), 5,12 (s, 1 H), 4,82 (s, 1 H), 4,55 (dq, J = 5,4, 1,7 Hz, 2H), 4,02 (s, 1 H), 3,35 (dt, J = 10,0, 4,7 Hz, 1 H), 3,21 (s, 1 H), 2,95 (ddd, J = 21,6, 15,4, 9,1 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).

ESI-MS m/z: 274.3 (M-Boc+H)+.

La o soluţie de 8-R (1.30 g, 3,50 mmol) оn CH2Cl2 (58 mL, 16,6 mL/mmol) s-a adăugat acid trifluoracetic (30 mL, 8,3 mL/mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23 °C timp de 1,5 ore, s-a concentrat оn vid pentru a se obţine 9-R brut care a fost folosit în etapele următoare fără purificare ulterioară. \tabRf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,95 (s, 1 H), 7,53 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,36 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,17 (s, 1 H), 7,09 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,03 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 5,87 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,6 Hz, 1 H), 5,34-5,13 (m, 2H), 4,50 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,62 (bs, 1 H), 3,42 (dd, J = 14,9, 3,9 Hz, 1 H), 3,36-3,20 (m, 1 H), 3,11-3,00 (m, 2H). ESI-MS m/z: 274.3 (M+H)+. Exemplul 4. Prepararea N-[(S)-(2-amino-3-(1H-indol-3-il)propil)]carbamatului de alil (9-S)

La o soluţie de L-triptofanol (2-S) (2,0 g, 10,4 mmoli) оn CH3CN (42 mL, 4 mL/mmol) sa adăugat dicarbonat de di-tert-butil (4,6 g, 20,8 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat timp de 3 ore la 23°C şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) s-a obţinut 5-S (2,24 g, 73%).

Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,10 (s, 1 H), 7,65 (dd, J = 7,8, 1,1 Hz, 1 H), 7,37

(dd, J = 8,1, 1,3 Hz, 1 H), 7,23-7,11 (m, 2H), 7,06 (s, 1 H), 4,81 (s, 1 H), 3,99 (s, 1 H), 3,70 (dd, J = 11,0, 3,8 Hz, 1 H), 3,61 (dd, J = 11,0, 5,5 Hz, 1 H), 3,00 (d, J = 6,7 Hz, 2H), 2,01 (s, 1 H), 1,42 (s, 9H).

La o soluţie de 5-S (1,2 g, 4,13 mmol) оn CH2Cl2 (24,8 mL, 6 mL/mmol) s-a adăugat ftalimidă (1,33 g, 9,1 mmol), trifenilfosfină (2,4 g, 9,1 mmol) şi amestecul a fost răcit la 0°C. O soluţie de azodicarboxilat de dietil (3 mL, 10,32 mmol) оn CH2Cl2 (12,4 mL, 3 mL/mmol) a fost adăugat timp de 15 min. Reacţia a fost agitată la 23°C timp de 16 ore şi s-a concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a se obţine 6-S (2,8 g, >100%).

Rf= 0,7 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,49 (s, 1 H), 7,80 (dd, J = 5,4, 3,1 Hz, 2H), 7,66 (dd, J = 5,6, 3,2 Hz, 2H), 7,60 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,34 (d, J = 8,0 Hz, 1 H), 7,21-7,04 (m,3H), 4,74 (s, 1 H), 4,42 (s, 1 H), 3,83 (dd, J = 13,9, 3,7 Hz, 1 H), 3,72 (dd, J = 13,9, 9,9 Hz, 1 H), 3,10-3,01 (m, 2H), 1,23 (s, 9H).

La o soluţie de 6-S (0,86 g, 2,07 mmol) în etanol (72 mL, 36 mL/mmol) s-a adăugat hidrazină monohidrat (10 mL, 207 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C оntr-un tub sigilat timp de 2,25 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (EtOAc:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) s-a obţinut 7-S (1,0 g, 84%).

Rf= 0,2 (EtOAc:CH3OH, 6:4).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,61 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,35 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,13-6,97 (m, 2H), 7,09 (s, 1 H), 4,06-3,96 (m, 1 H), 3,01-2,76 (m, 4H), 1,38 (s, 9H).

ESI-MS m/z: 290,3 (M+H)+.

La o soluţie de 7-S (0,95 g, 3,3 mmol) оn CH3CN (33 mL, 10 mL/mmol) şi DMF (3,3 mL, 1 mL/mmol) s-au adăugat N,N-diizopropiletilamină (0,5 mL, 2,6 mmol) şi cloroformiat de alil (3,5 mL, 33 mmol). Reacţia a fost agitată la 23 °C timp de 20 ore. Amestecul a fost diluat cu EtOAc, s-a adăugat NH4CI şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100) pentru a se obţine 8-S (0,88 g, 73%).

Rf= 0,5 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,17 (s, 1 H), 7,63 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,20 (dd, J = 8,1,

0,9 Hz, 1 H), 7,13 (dddd, J = 27,8, 8,0, 7,0, 1,1 Hz, 2H), 7,06 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 5,90

(ddt, J = 17,3, 10,7, 5,6 Hz, 1H), 5,31-5,18 (m, 2H), 5,09 (s, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,59-4,52 (m, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,37 (dt, J = 10,0, 4,7 Hz, 1 H), 3,21 (s, 1 H), 3,05-2,87 (m, 2H), 1,42 (s, 9H).

ESI-MS m/z: 274,3 (M-Boc+H)+.

La o soluţie de 8-S (0.875 g, 2,3 mmol) оn CH2Cl2 (38 mL, 16,6 mL/mmol) s-a adăugat acid trifluoracetic (19 mL, 8,3 mL/mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23 °C timp de 2 ore, s-a concentrat оn vid pentru a da 9-S brut care a fost folosit în etapele următoare fără purificare ulterioară.

Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,56 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,37 (d, J = 8,1 Hz, 1 H), 7,21 (s, 1 H), 7,13 (t, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,05 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 5,94 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,6 Hz, 1 H), 5,34-5,16 (m, 2H), 4,56 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,60 (bs, 1H), 3,43 (dd, J = 14,9, 3,9 Hz, 1 H), 3,37-3,31 (m, 1 H), 3,14-2,99 (m, 2H).

ESI-MS m/z: 274,3 (M+H)+.

Exemplul 5

La o soluţie de 1 (1,45 g, 2,33 mmol) în acid acetic (58 mL, 0,08 M) s-au adăugat 9-R (0.95 g, 3,50 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 18 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de NaHC0s şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) s-a obţinut compusul 10-R (1,3 g, 64%).

Rf= 0,5 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,66 (s, 1 H), 7,36 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,27 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,10 (ddd, J = 8,3, 7,0, 1,3 Hz, 1 H), 7,01 (td, J = 7,5, 7,0, 1,0 Hz, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 6,23 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 5,99-5,89 (m, 1H), 5,79 (s, 1H), 5,445,21 (m, 2H), 5,14-4,99 (m, 2H), 4,63 (ddd, J = 7,3, 4,4, 1,5 Hz, 2H), 4,36 (s, 1 H), 4,33-4,24

(m, 1 H), 4,29-4,26 (m, 1 H), 4,21 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 4,19-4,13 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,56 (s, 1 H), 3,48-3,43 (m, 3H), 3,27 (dt, J = 13,2, 4,0 Hz, 1 H), 3,04-2,88 (m, 2H), 2,56 (dd, J = 15,2, 3,8 Hz, 1 H), 2,49-2,35 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 877,3 (M+H)+.

La o soluţie de 10-R (600 mg, 0,68 mmol) оn CH2Cl2 (12 mL, 18 mL/mmol) s-a adăugat diclorură de bis(trifenilfosfin)paladiu(II) (77 mg, 0,1 mmol) şi acid acetic (0,4 mL, 6,8 mmol). S-a adăugat hidrură de tributilstaniu (1,1 mL, 4,08 mmol) la 0°C, amestecul de reacţie a fost agitat la 0°C timp de 0,5 ore şi s-a concentrat оn vid. Produsul brut obţinut a fost diluat cu EtOAc, s-a adăugat soluţie apoasă saturată de NH4CI şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100 şi EtOAc:CH3OH, de la 100:1 la 1:100) s-a obţinut 11-R (440 mg, 82%).

Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,64 (s, 1 H), 7,38 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,29 (d, J = 8,1

Hz, 1 H), 7,11 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1 H), 7,03 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1

H), 6,24 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 6,02 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,02 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 4,63 (s, 1 H), 4,36 (s, 1 H), 4,28 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 4,21 (d, J = 2,2 Hz, 1 H), 4,16 (s, 1 H), 3,80 (s, 3H), 3,51-3,39 (m, 4H), 3,32-3,13 (m, 3H), 2,95 (d, J = 8,9 Hz, 2H), 2,89-2,76 (m, 2H), 2,73-2,57 (m, 1H), 2,42 (d, J = 14,8 Hz, 1 H), 2,36 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,09 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 793,2 (M+H)+.

La o soluţie de 11-R (850 mg, 1,07 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 70 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (3,64 g, 21,4 mmol). După 17 ore la 23 °C, reacţia a fost stinsă cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, s-a agitat timp de 15 minute, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 12-R (553 mg, 66%).

Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CDCI3): δ 7,60 (s, 1 H), 7,38 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,28 (d, J = 7,9

Hz, 1 H), 7,11 (ddt, J = 8,3, 7,1, 1,2 Hz, 1 H), 7,02 (ddt, J = 8,3, 7,1, 1,2 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 6,22 (s, 1 H), 6,00 (s, 1 H), 5,16 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,87 (s, 1 H), 4,54 (s, 1 H), 4,51

(d, J = 3,3 Hz, 1 H), 4,17 (d, J = 5,4 Hz, 1 H), 4,07 (dd, J = 11,3, 2,2 Hz, 1 H), 3,81 (s, 3H), 3,52 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 3,24 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 2,99-2,78 (m, 4H), 2,66 (dd, J = 14,9, 3,5 Hz, 1 H), 2,49-2,39 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,28 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 2,21-2,16 (m, 2H), 2,15 ( s, 3H), 2,08 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CD3OD): δ 171,7, 169,4, 148,7, 145,9, 143,7, 141,4, 140,9, 136,9,

130,8, 130,0, 129,7, 126,0, 121,4, 121,0, 119,7, 119,1, 118,4, 117,5, 114,9, 110,8, 107,5, 106,4, 102,1, 91,3, 63,2, 60,0, 59,0, 58,6, 55,3, 54,6, 52,7, 52,4, 48,4, 45,8, 42,5, 40,2, 24,5, 23,2, 19,2, 15,0, 8,2.

ESI-MS m/z: 766,2 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 766,2972 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H44N5O8S+:

766.2905).

La o soluţie de 10-R (700 mg, 0,8 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 87,5 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (2,66 g, 16 mmol). După 20 ore la 23 °C, amestecul de reacţie a fost stins cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, s-a agitat timp de 15 minute, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2: CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 13-R (438 mg, 63%).

Rf = 0,40 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,64 (s, 1 H), 7,37 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,32-7,20 (m, 1 H), 7,11 (t, J = 7,7 Hz, 1 H), 7,01 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 6,21 (s, 1 H), 6,05-5,90 (m, 1 H), 5,99 (s, 1 H), 5,75 (d, J = 6,0 Hz, 1 H), 5,40-5,07 (m, 4H), 4,88 (d, J = 14,7 Hz, 1 H), 4,68-4,50 (m, 3H), 4,28-4,13 (m, 1 H), 4,08 (dt, J = 11,4, 2,4 Hz, 1 H), 3,83 (s, 3H), 3,68-3,40

(m, 4H), 3,37-3,19 (m, 2H), 2,98-2,79 (m, 2H), 2,59-2,36 (m, 3H) ), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,10-2,16 (m, 1 H), 2,08 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 850,3 (M-H2O+H)+.

Exemplul 6

La o soluţie de 1 (955 mg, 1,5 mmol) în acid acetic (37,5 mL, 0,08 M) s-a adăugat 9S (627 mg, 2,29 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 18 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. A fost adăugată o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) s-a obţinut compusul 10-S (756 mg, 58%).

Rf= 0,4 (Hexan: EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,78 (s, 1 H), 7,36 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,24 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,10 (ddd, J = 8,3, 7,0, 1,3 Hz, 1 H), 7,01 (td, J = 7,5, 7,0, 1,0 Hz, 1 H), 6,68 (s, 1 H), 6,23 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,07-5,93 (m, 1 H), 5,82 (s, 1 H), 5,415,19 (m, 2H), 5,1 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,66 (dt, J = 5,9, 1,3 Hz, 1 H), 4,57 (s, 1 H), 4,37 (s, 1 H), 4,33-4,20 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,46 (d, J = 4,2 Hz, 2H), 3,22-3,13 (m, 1 H), 3,11-2,88 (m,

4H), 2,66 (dd, J = 15,2, 4,2 Hz, 1 H), 2,51 (dd, J = 15,3, 6,0 Hz, 1 H), 2,43-2,32 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,19 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 877,3 (M+H)+.

La o soluţie de 10-S (650 mg, 0,72 mmol) оn CH2Cl2 (13,3 mL, 18 mL/mmol) s-a adăugat diclorură de bis(trifenilfosfin)paladiu(II) (83 mg, 0,11 mmol) şi acid acetic (0,42 mL, 7,4 mmol). S-a adăugat hidrură de tributilstaniu (1,2 mL, 4,4 mmol) la 0°C, amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 0,5 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100 şi EtOAc:CH3OH, de la 100:1 la 1:100) s-a obţinut 11-S (445 mg, 78%).

Rf= 0,5 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,74 (s, 1 H), 7,36 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,26 (d, J = 8,1

Hz, 1 H), 7,12 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1 H), 7,02 (ddt, J = 8,3, 7,0, 1,4 Hz, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 6,26 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 6,04 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 4,59 (s, 1 H),

4,42 (s, 1 H), 4,36-4,17 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,51-3,39 (m, 3H), 2,98-2,75 ( m, 4H), 2,69-2,60 (m, 2H), 2,47 (d, J = 16,1 Hz, 1 H), 2,38 (s, 3H), 2,35-2,17 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 793,3 (M+H)+.

La o soluţie de 11-S (435 mg, 0,55 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 38,5 ml, 0,015 M) sa adăugat AgNO3 (1,84 g, 11 mmol). După 24 de ore la 23 °C, reacţia a fost stinsă cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, s-a agitat timp de 15 minute, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 12-S (152 mg, 35%).

Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CD3OD): δ 7,34 (dd, J = 7,7, 1,5 Hz, 1 H), 7,28 (dd, J = 7,7, 1,5

Hz, 1 H), 7,04 (ddt, J = 8,2, 7,0, 1,1 Hz, 1 H), 6,95 (ddt, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1 H), 6,55 (s, 1

H), 6,31-6,25 (m, 1 H), 6,15-6,05 (m, 1 H), 5,31 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 4,91 (s, 1 H), 4,64 (s, 1

H), 4,40-4,19 (m, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,64 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 3,44 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 3,03-

2,85 (m, 4H), 2,85-2,65 (m, 2H), 2,59 (d, J = 15,6 Hz, 1 H), 2,52-2,39 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,00 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CD3OD): δ 171,4, 169,3, 148,6, 145,8, 143,5, 141,2, 140,8, 136,5,

131,2, 130,3, 129,5, 126,3, 121,6, 121,2, 119,8, 119,4, 118,6, 117,5, 114,9, 111,0, 107,5, 107,4, 102,2, 91,1, 63,5, 60,5, 59,2, 58,5, 55,3, 54,7, 53,4, 52,7, 48,6, 44,7, 42,7, 39,9, 24,3, 23,4, 19,2, 15,1, 8,2.

ESI-MS m/z: 766,2 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 766,2958 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H44N5O8S:

766,2905).

La o soluţie de 10-S (5 mg, 0,006 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 0,5 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (29 mg, 0,17 mmol). După 20 de ore la 23 °C, amestecul de reacţie a fost stins cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, s-a agitat timp de 15 minute, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi s-au concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 13-S (5 mg, 100%). \tabRf= 0,40 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,75 (s, 1 H), 7,37 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,32-7,20 (m, 1 H), 7,12 (t, J = 7,7 Hz, 1 H), 7,02 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,84 (s, 1 H), 6,24 (s, 1 H), 6,08-5,97 (m,

1 H), 6,01 (s, 1 H), 5,87 (s, 1 H), 5,42-5,19 (m, 1 H), 4H), 4,88 (s, 1H), 4,69-4,65 (m, 2H), 4,58 (s, 1H), 4,28-4,13 (m, 2H), 3,84 (s, 3H), 3,68-3,40 (m, 2H) , 3,24-3,15 (m, 2H), 3,08-2,90 (m,

2H), 2,73-2,57 (m, 2H), 2,53-2,37 (m, 3H), 2,34 (s, 3H), 2,25 (s, 3H) , 2,14 (s, 3H), 2,10-2,16 (m, 1 H), 2,03 (s, 3H). ESI-MS m/z: 850.3 (M-H2O+H)+.

Exemplul de referinţă 7. Prepararea compuşilor de referinţă 14-S şi 15-S

La o soluţie de 1 (50 mg, 0,08 mmol) în acid acetic (1 mL, 0,08 M) s-a adăugat Ltriptofan (50 mg, 0,24 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 17 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. A fost adăugată o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 80:20) s-a obţinut compusul 14-S (58 mg, 90%).

Rf= 0,20 (CH2Cl2:CH3OH, 10:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,77 (s, 1 H), 7,39 (d, J = 7,9 Hz, 1 H), 7,25 (d, J = 7,9

Hz, 1H), 7,13 (ddd, J = 8,2, 7,0, 1,2 Hz, 1 H), 7,04 (td, J = 7,5, 7,1, 1,0 Hz, 1 H), 6,56 (s, 1 H),

6,24 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 6,03 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,15 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,62 (s, 1 H),

4,43 (s, 1 H), 4,35 (dd, J = 11,7, 2,1 Hz, 1 H), 4,28 (dd, J = 5,2, 1,6 Hz, 1 H), 4,20 (s, 1 H), 3,78 (s, 3H), 3,52-3,41 (m, 4H), 3,07-2,88 (m, 2H), 2,91-2,80 (m, 2H), 2,42-2,21 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 808,6 (M+H)+.

La o soluţie de 14-S (52 mg, 0,066 mmol) оn CH3CN:H2O (2:1, 4,5 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (164 mg, 1,45 mmol). După 20 de ore la 23 °C, un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCl şi NaHCO3 s-a adăugat, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 30 de minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 70:30) obţinвndu-se 15-S (18 mg, 35%).

Rf= 0,15 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,76 (s, 1 H), 7,40 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,25 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 7,14 (t, J= 7.4 Hz, 1 H), 7,04 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 6,23 (d, J = 1,3 Hz, 1

H), 6,01 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,28 (d, J = 12,7 Hz, 1 H), 4,95 (s, 1 H), 4,53 (s, 1 H), 4,28

(dd, J = 11,4, 2,0 Hz, 1 H), 4,21 (s, 1 H), 3,80 (s, 3 H), 3,58 (s, 1 H), 3,52-3,47 (m, 2 H), 3,28 (s, 1 H), 3,03 (dd, J = 15,8, 5,2 Hz, 1 H), 2,91-2,82 (m, 3H), 2,44 (d, J = 15,4 Hz, 1 H), 2,36 (s, 3H), 2,35-2,31 (m, 1 H), 2,28 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,03 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CDCI3): δ 173,7, 171,2, 168,7, 147,5, 145,7, 142,8, 141,2, 140,8,

135,6, 129,8, 126,3, 122,8, 121,5, 121,2, 119,9, 118,6, 117,7, 115,0, 111,1, 101,9, 81,5, 66,8, 62,9, 60,4, 57,9, 55,8, 55,1, 52,3, 42,3, 41,3, 38,3, 31,9, 29,4, 28,9, 24,5, 24,0, 23,8, 22,7, 20,5, 16,0, 9,7.

ESI-MS m/z: 781,6 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 781.2610 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H41N4O10S:

781,2538).

Exemplul 8.

A) Prepararea (S)-5-metoxi-triptofanolului (17-S)

La o soluţie de LiAlH4 (23,4 mL, 1,0 M în THF, 23,4 mmol) la -40 °C a fost adăugat cu grijă H2SO4 (0,31 mL, 5,57 mmol) şi o suspensie de 5-metoxi-L-triptofan (16-S) (1,0 g, 4,26 mmol, Chem-Impex) оn THF (13,4 mL, 0,3 M). Amestecul de reacţie a fost lăsat să evolueze la 23 °C, s-a încălzit timp de 3 ore la 80 °C şi 18 ore la 23 °C. După răcire la -21 °C amestecul de reacţie a fost stins cu grijă cu NaOH 2N până la pH bazic. S-a adăugat EtOAc şi amestecul s-a filtrat prin Celită® şi s-a spălat cu CH3OH. Produsul brut a fost concentrat оn vid pentru a da 17-S brut care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară.

Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,19 (dt, J = 8,8, 0,7 Hz, 1 H), 7,06-7,00 (m, 2H), 6,72 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 3,77 (s, 3H), 3,63-3,48 (m, 1 H), 3,42-3,33 (m, 1 H), 3,17-3,06 (m, 1 H), 2,86 (ddt, J = 14,3, 6,1, 0,8 Hz, 1 H), 2,66 (dd, J = 14,3, 7,5 Hz, 1 H).

ESI-MS m/z: 221,4 (M+H)+.

B) Prepararea (R)-5-metoxi-triptofanolului (17-R)

La o soluţie de LiAlH4 (11,7 mL, 1,0 M în THF, 11,7 mmol) la -40 °C a fost adăugat cu grijă H2SO4 (0,31 mL, 5,75 mmol) şi o suspensie de 5-metoxi-D-triptofan (16-R) (0,5 g, 2,13 mmol, Aldrich) оn THF (6,7 mL, 0,3 M). Amestecul de reacţie a fost lăsat să evolueze la 23 °C, s-a încălzit timp de 3,5 ore la 80 °C şi 18 ore la 23 °C. S-a răcit la -21 °C, amestecul de reacţie a fost stins cu grijă cu NaOH 2N până la pH bazic. S-a adăugat EtOAc şi amestecul sa filtrat prin Celită® şi s-a spălat cu CH3OH. Produsul brut a fost concentrat оn vid pentru a da 17-R ca produs brut, care a fost utilizat în etapa următoare fără purificare suplimentară.

Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,20 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,06-6,96 (m, 2H), 6,71 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1 H), 3,75 (s, 3H), 3,62-3,52 (m, 1 H), 3,37 (dd, J = 10,8, 7,0 Hz, 1 H), 3,09 (br s, 1 H), 2,82 (dd, J = 14,3, 5,9 Hz, 1 H), 2,62 (dd, J = 14,4, 7,6 Hz, 1 H).

ESI-MS m/z: 221,6 (M+H)+.

Exemplul de referinţă 9

La o soluţie de 1 (530 mg, 0,85 mmol) оn acid acetic (10,6 mL, 0,08 M) s-a adăugat 17-S (469 mg, 2,13 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 18 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) s-a obţinut compusul 18-S (420 mg, 60%). \tabRf= 0,3 (Hexan:EtOAc, 1:1). 1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,13 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,80 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,66 (dd, J= 8,8, 2,5 Hz, 1 H), 6,51 (s, 1 H), 6,27 (s, 1 H), 6,11 (s, 1 H), 5,21 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,67 (s, 1 H), 4,49-4,29 (m, 4H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,47 (t, J = 5,8 Hz, 3H), 3,37 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 3,01-2,81 (m, 2H), 2,75 (d, J = 7,4 Hz, 1 H), 2,66 (dd, J = 15,1, 4,1 Hz, 1 H), 2,55-2,35 (m, 4H), 2,34 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,11 (s, 3H), 1,99 (s, 3H). ESI-MS m/z: 824,3 (M+H)+.

La o soluţie de 18-S (420 mg, 0,519 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 36 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (2.60 g, 15,3 mmol). După 3 ore la 23 °C, amestecul de reacţie a fost stins cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCO3, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a obţine 19-S (250 mg, 60%).

Rf= 0,45 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CD3OD): δ 7,15 (dd, J = 8,9, 0,6 Hz, 1 H), 6,82 (dd, J = 2,4, 0,6

Hz, 1 H), 6,68 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1 H), 6,54 (s, 1 H), 6,27 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 6,08 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,30 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,62 (s, 1 H), 4,34 (dd, J = 11,4, 2,0 Hz, 1H), 4,314,27 (m, 2H), 3,76 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,66-3,58 (m, 1H), 3,55-3,45 (m, 2H), 3,42 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 2,93-2,73 (m, 3H), 2,68 (dd, J = 15,1, 4,2 Hz, 1 H), 2,54 (d, J = 15,4 Hz, 1 H), 2,42 (dd, J = 15,1, 10,1 Hz, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,00 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CD3OD): δ 172,7, 170,8, 155,1, 149,9, 147,2, 145,0, 142,6, 142,2,

133,1, 132,4, 132,1, 131,3, 128,1, 122,5, 121,6, 120,3, 116,4, 113,0, 112,9, 111,4, 109,0, 103,6, 100,8, 92,5, 66,6, 65,0, 61,7, 60,4, 59,9, 56,7, 56,1, 54,8, 54,1, 51,7, 44,1, 41,3, 30,7, 25,4, 24.7, 20,6, 16,3, 9,5.

ESI-MS m/z: 798,1 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 797,2899 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C42H45N4O10S 797,2851).

Exemplul de referinţă 10

La o soluţie de 1 (311 mg, 0,50 mmol) în acid acetic (6,25 mL, 0,08 M) s-a adăugat 17R (220 mg, 1,0 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 18 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) s-a obţinut compusul 18R (280 mg, 68%).

Rf= 0,3 (Hexan: EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,53 (s, 1 H), 7,18 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,82 (d, J = 2,4

Hz, 1 H), 6,78 (dd, J = 8,6, 2,3 Hz, 1 H), 6,60 (s, 1 H), 6,23 (s, 1 H), 6,02 (s, 1 H), 5,76 (s, 1

H), 5,04 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,62 (s, 1 H), 4,36 (s, 1 H), 4,28 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,24-4,09

(m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,64 (s, 1 H), 3,47-3,40 (m, 3H), 3,01-2,90 ( m, 2H), 2,53 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 2,45-2,41 (m, 1H), 2,40 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,22-2,14 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 3H). ESI-MS m/z: 824,3 (M+H)+.

La o soluţie de 18-R (330 mg, 0,40 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 28 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (2,04 g, 12,0 mmol). După 3 ore la 23 °C, reacţia a fost stinsă cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCO3, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi s-au concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a se obţine 19R (224 mg, 69%).

Rf= 0,44 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CD3OD): δ 7,14 (dd, J = 8,8, 0,5 Hz, 1 H), 6,83 (d, J = 2,5 Hz, 1 H), 6,68 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1 H), 6,59 (s, 1 H), 6,26 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,07 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,21 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,68-4,55 (m, 1 H), 4,32-4,25 (m, 2H), 4,12 (dd, J = 11,5, 2,1 Hz, 1 H), 3,75 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,60 (d, J = 5,2 Hz, 1 H), 3,57-3,45 (m, 3H), 3,41 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 2,97-2,83 (m, 3H), 2,73 (dd, J = 15,0, 3,4 Hz, 1 H), 2,69 (d, J = 14,9 Hz, 1 H), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,20 (dd, J = 15,1, 10,4 Hz, 1 H), 2,12 (s, 3H), 2,11-2,08 (m, 1 H), 2,05 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CD3OD): δ 173,0, 170,8, 155,0, 149,8, 147,3, 145,0, 142,8, 142,3,

133,5, 133,1, 132,2, 132,1, 130,5, 127,8, 122,5, 121,7, 120,0, 116,4, 113,5, 112,9, 111,4, 110,2, 103,5, 100,9, 92,6, 66,8, 64,5, 61,3, 60,4, 60,0, 56,8, 56,1, 55,9, 54,1, 44,1, 41,3, 25,6, 24,5, 20,6, 16,2, 9,6.

ESI-MS m/z: 797,4 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 797,2896 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C42H45N4O10S 797,2851).

Exemplul 11. Prepararea N-[(S)-2-amino-3-(5-metoxi-1H-indol-3-il)propil)] carbamatului de alil (24-S)

La o soluţie de 17-S (6.9 g, 31,4 mmol) оn CH3CN (126 mL, 4 mL/mmol) s-a adăugat dicarbonat de di-tert-butil (13,7 g, 62,8 mmoli). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 5,5 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) s-a obţinut 20-S (4,5 g, 45%).

Rf= 0,6 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,04 (s, 1 H), 7,25 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 7,10 (d, J = 2,4

Hz, 1 H), 7,03 (s, 1 H), 6,87 (dd, J = 8,8, 2,5 Hz, 1 H), 4,83 (s, 1 H), 3,98 (s, 1 H), 3,87 (s, 3H), 3,73-3,58 (m, 2H), 2,96 (d, J = 6,6 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).

La o soluţie de 20-S (4,5 g, 14 mmol) оn CH2Cl2 (84 mL, 6 mL/mmol) s-a adăugat ftalimidă (4,5 g, 30,9 mmol), trifenilfosfină (8,1 g, 30,9 mmol) şi amestecul s-a răcit la 0°C. S-a adăugat o soluţie de 40% azodicarboxilat de dietil оn CH2Cl2 (10,4 mL, 35 mmol) timp de 15 min. Reacţia a fost agitată la 23°C timp de 18 ore şi s-a concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 99:1 la 85:15) pentru a se obţine 21-S (5,8 g, 92%). Rf= 0,55 (Hexan:EtOAc, 1:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,48 (s, 1 H), 7,78 (dd, J = 5,5, 3,1 Hz, 2H), 7,69-7,61 (m, 2H), 7,21 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,06 (dd, J = 18,5, 2,4 Hz, 2H), 6,81 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 4,87 (s, 1 H); 4,39 (s, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,83-3,66 (m, 2H), 2,98 (d, J = 6,1 Hz, 2H), 1,20 (s, 9H).

La o soluţie de 21-S (6,29 g, 14 mmol) în etanol (420 mL, 30 mL/mmol) s-a adăugat hidrazină monohidrat (61,1 mL, 1260 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C оntrun tub sigilat timp de 2 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) s-a obţinut 22-S (4,2 g, 95%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).

H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,22 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,12 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 7,06 (s, 1 H), 6,76 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 4,06-3,97 (m, 1 H), 3,82 (s, 3H), 3,06-2,82 (m, 4H), 1,37 (s, 9H).

La o soluţie de 22-S (4.0 g, 12,52 mmol) оn CH3CN (125 mL, 10 mL/mmol) şi DMF (12 mL, 1 mL/mmol) s-au adăugat N,N-diizopropiletilamină (1,8 mL, 10 mmol) şi cloroformiat de alil (13,3 mL, 125 mmol). Reacţia a fost agitată la 23 °C timp de 5 ore. Amestecul a fost diluat cu EtOAc şi NH4CI s-a adăugat şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100) pentru a obţine 23-S (2.65 g, 52%). \tabRf= 0,5 (Hexan:EtOAc, 1:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,11 (s, 1 H), 7,28-7,20 (m, 1 H), 7,04 (d, J = 13,1 Hz, 2H), 6,85 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1 H), 5,97-5,82 (m, 1 H), 5,33-5,24 (m, 1 H), 5,19 (dt, J = 10,4,

1,3 Hz, 1 H), 5,11 (s, 1 H), 4,82 (s, 1 H), 4,55 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,01 (s, 1 H), 3,86 (s, 3H), 3,37 (d, J = 13,7 Hz, 1 H), 3,21 (s, 1 H), 2,89 (dd, J = 14,5, 7,0 Hz, 1 H), 1,41 (s, 9H).

La o soluţie de 23-S (2,60 g, 6,44 mmol) оn CH2Cl2 (106 mL, 16,6 mL/mmol) s-a adăugat acid trifluoracetic (54 mL, 8,3 mL/mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23 °C timp de 1,5 ore şi s-a concentrat оn vid pentru a da 24-S (3,9 g, 100%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 8,27 (s, 1 H), 7,25 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1 H), 7,10 (s, 1 H), 6,96 (d, J = 2,3 Hz, 1 H), 6,87 (dd, J = 9,0, 2,4 Hz, 1 H), 5,81 (ddt, J = 16,3, 10,9, 5,7 Hz,

1 H), 5,23 (dd, J = 19,3, 13,6 Hz, 2H), 4,49 (d, J = 5,9 Hz, 2H), 3,82 (s, 3H), 3,81-3,55 (m, 1 H), 3,62-3,39 (m, 2H), 3,08 (qd, J = 15,1, 7,3 Hz, 2H).

Exemplul 12

La o soluţie de 1 (120 mg, 0,19 mmol) în acid acetic (6 mL, 0,08 M) s-a adăugat 24S (117 mg, 0,35 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 18 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. A fost adăugată o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) se obţine compusul 25-S (95 mg, 54%).

Rf= 0,4 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,64 (s, 1 H), 7,14 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,80 (s, 1 H),

6,77 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,68 (s, 1 H), 6,24 (s, 1 H), 6,03 (s, 1 H), 6,02-5,93 (m, 1 H), 5,76 (s,

1 H), 5,38 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 5,26 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,66

(d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,57 (s, 1H), 4,37 (s, 1H), 4,33-4,19 (m, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,46 (s, 2H) , 3,17 (s, 1 H), 3,10-2,90 (m, 3H), 2,68-2,45 (m, 2H), 2,38-2,33 (m, 1 H), 2,32 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,04 (s, 2H).

ESI-MS m/z: 907,1 (M+H)+.

La o soluţie de 25-S (90 mg, 0,1 mmol) оn CH2Cl2 (2 mL, 18 mL/mmol) s-au adăugat diclorură de bis(trifenilfosfin)paladiu(II) (12 mg, 0,1 mmol) şi acid acetic (0,056 mL, 0,99 mmol). S-a adăugat hidrură de tributilstaniu (0,16 mL, 0,60 mmol) la 0 °C, amestecul de reacţie a fost agitat la 0 °C timp de 0,5 ore şi s-a concentrat în vid. După Cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100 şi EtOAc:CH3OH, de la 100:1 la 1:100) s-a obţinut 26-S (75 mg, 92%).

Rf= 0,25 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,62 (s, 1 H), 7,15 (d, J = 9,3 Hz, 1 H), 6,81-6,76 (m, 2H), 6,72 (s, 1 H), 6,25 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 6,03 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 5,12 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,57 (s, 1 H), 4,41 (s, 1 H), 4,36-4,24 (m, 2H), 4,20 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 3,82 (s, 3H), 3,79

(s, 3H), 3,44 (dd, J = 22,0, 7,1 Hz, 2H), 3,08-2,78 (m, 4H), 2,73-2,64 (m, 2H), 2,41-2,22 (m, 3H), 2,28 (s, 3H), 2,25-2,15 (m, 1H) ), 2,14 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 823,3 (M+H)+.

La o soluţie de 26-S (70 mg, 0,085 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39: 1, 6 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (335 mg, 1,7 mmol). După 18 ore la 23 °C, reacţia a fost stinsă cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCO3, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 27-S (23 mg, 33%).

Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,62 (s, 1 H), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 6,78 (s, 1 H), 6,75 (d, J = 7,8 Hz, 1 H), 6,21 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,78 (s, 1 H),

5,22 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,90 (s, 1 H), 4,58-4,42 (m, 3H), 4,29-4,10 (m, 2H), 3,84-3,80 (m, 1

H), 3,83 (s, 3H), 3,79 ( s, 3H), 3,53-3,48 (m, 2H), 3,22 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 3,12 (s, 1 H), 3,02

(d, J = 12,8 Hz, 1 H), 2,89-2,64 (m, 3H), 2,46 (s, 3H), 2,42-2,34 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,12 (s,

3H), 2,03 (s, 3H). 13C RMN (126 MHz, CDCI3): δ 172,1, 168,7, 154,0, 147,6, 145,6, 143,0,

141,2, 140,8, 131,6, 130,6, 129,6, 127,1, 121,8, 120,9, 118,4, 115,2, 112,5, 111,8, 101,8, 100,2, 81,5, 62,6, 60,6, 58,0 , 57,8, 56,0, 55,8, 55,0, 42,3, 41,4, 31,9, 29,7, 27,8, 26,9, 25,6, 24, 0, 22,7, 20,5, 16,0, 14,1, 13,6, 9,7.

ESI-MS m/z: 796,3 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 796,3062 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C42H46N5O9S 796,3011).

Exemplul 13. Prepararea N-[(R)-2-amino-3-(5-metoxi-1H-indol-3-il)propil)] carbamatului de alil (24-R)

La o soluţie de 17-R (2.35 g, 10,7 mmol) оn CH3CN (43 mL, 4 mL/mmol) s-a adăugat dicarbonat de di-tert-butil (4,67 g, 21,4 mmoli). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 2,5 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) s-a obţinut 20-R (1,7 g, 50%).

Rf= 0,6 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,05 (s, 1 H), 7,25 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 7,09 (d, J = 2,4

Hz, 1 H), 7,02 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,86 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 4,83 (s, 1 H), 3,98 (s, 1 H), 3,87 (s, 3H), 3,69 (td, J = 9,2, 7,5, 5,3 Hz, 1 H), 3,61 (dd, J = 10,9, 5,6 Hz, 1 H), 2,95 (d, J = 6,8 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).

La o soluţie de 20-R (1.7 g, 5,3 mmol) оn CH2Cl2 (32 mL, 6 mL/mmol) s-au adăugat ftalimidă (1,72 g, 11,7 mmol), trifenilfosfină (3,06 g, 11,7 mmol) şi amestecul s-a răcit la 0°C. O soluţie de 40% azodicarboxilat de dietil оn CH2Cl2 (4,0 mL, 13,2 mmol) a fost adăugată timp de 15 min. Reacţia a fost agitată la 23°C timp de 16 ore şi s-a concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 99:1 la 85:15) pentru a se obţine 21-R (2,0 g, 84%). \tabRf= 0,45 (Hexan:EtOAc, 1:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,31 (s, 1 H), 7,80 (dd, J = 5,4, 3,0 Hz, 2H), 7,67 (dd, J = 5,4, 3,0 Hz, 2H), 7,30-7,12 (m, 2H), 7,08 (dd, J = 15,2, 2,4 Hz, 1 H), 6,84 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz,

1 H), 4,85 (d, J = 9,2 Hz, 1 H), 4,43 (q, J = 5,3 Hz, 1 H), 3,86 (s, 3H), 3,83-3,68 (m, 2H), 3,01 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 1,22 (s, 9H).

La o soluţie de 21-R (2,0 g, 4,45 mmol) în etanol (133 mL, 30 mL/mmol) s-a adăugat hidrazină monohidrat (21,6 mL, 445 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C оntr-un tub sigilat timp de 2 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) s-a obţinut 22-R (1,15 g, 81%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,21 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,12 (s, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 6,75 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 3,95 (ddd, J = 10,7, 8,7, 5,4 Hz, 1 H), 3,82 (s, 3H), 2,98-2,79 (m, 3H), 2,75 (dd, J = 13,1, 9,4 Hz, 1 H), 1,37 (s, 9H).

La o soluţie de 22-R (1.1 g, 3,4 mmol) оn CH3CN (3,4 mL, 1 mL/mmol) şi DMF (3,4 mL,

10 mL/mmol) s-au adăugat N,N-diizopropiletilamină (0,5 mL, 2,7 mmol) şi cloroformiat de alil

(3,7 mL, 34 mmol). Reacţia a fost agitată la 23 °C timp de 19 ore. Amestecul a fost diluat cu EtOAc şi s-a adăugat NH4CI şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100) pentru a se obţine 23-R (0,95 g, 69%). Rf= 0,5 (Hexan:EtOAc, 1:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 8,55 (s, 1 H), 7,20 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 7,05 (s, 1 H), 6,98-6,87 (m, 1 H), 6,82 (dt, J = 8,8, 1,8 Hz, 1H), 5,96-5,81 (m, 1H), 5,37-5,22 (m, 2H), 5,225,14 (m, 1H), 5,02-4,97 (m, 1H), 4,60-4,47 (m , 2H), 4,00 (s, 1 H), 3,84 (s, 3H), 3,31 (s, 1 H), 3,19 (s, 1 H), 2,88 (td, J = 14,5, 13,3, 5,9 Hz, 2H), 1,40 (s, 9H).

La o soluţie de 23-R (0.94 g, 2,3 mmol) оn CH2Cl2 (39 mL, 16,6 mL/mmol) s-a adăugat acid trifluoracetic (19 mL, 8,3 mL/mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23 °C timp de 1,5 ore şi s-a concentrat оn vid pentru a da 24-R (0,72 g, 100%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,27 (d, J = 8,8, 1 H), 7,18 (s, 1 H), 7,04 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,80 (ddd, J = 8,8, 2,4, 0,9 Hz, 1 H), 5,95 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,5 Hz, 1 H), 5,32 (d, J = 17,1 Hz, 1 H), 5,20 (d, J = 10,5 Hz, 1 H), 4,60-4,53 (m, 2H), 3,83 (s, 3H), 3,59 (dt, J = 11,4, 5,5 Hz, 1 H), 3,47-3,30 (m, 2H), 3,13-2,94 (m, 2H).

Exemplul 14

La o soluţie de 1 (0.71 g, 1,14 mmol) оn acid acetic (45 mL, 0,08 M) s-a adăugat 24-R (0,54 mg, 1,8 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 7 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. A fost adăugată o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) s-a obţinut compusul 25-R (670 mg, 65%). \tabRf= 0,4 (Hexan: EtOAc, 1:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,52 (s, 1 H), 7,17 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,83-6,73 (m,

2H), 6,61 (s, 1 H), 6,23 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 6,02 (d, J = 1,0 Hz, 1 H), 6,05-5,89 (m, 1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,44-5,30 (m, 1 H), 5,25 (d, J = 10,4 Hz, 1 H), 5,13-4,99 (m, 2H), 4,71-4,59 (m, 2H), 4,36 (s, 1 H), 4,30-4,07 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,79 ( s, 3H), 3,61-3,53 (m, 1 H); 3,48-3,41 (m, 3H), 3,26 (dt, J = 13,3, 3,8 Hz, 1 H), 3,04-2,88 (m, 2H), 2,52 (dd, J = 14,9, 3,7 Hz, 1 H), 2,462,35 (m, 2H), 2,31 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,12-2,02 (m, 1H), 2,09 ( s, 3H).

ESI-MS m/z: 907,3 (M+H)+.

La o soluţie de 25-R (745 mg, 0,82 mmol) оn CH2Cl2 (15 mL, 18 mL/mmol) s-a adăugat diclorură de bis(trifenilfosfin)paladiu(II) (92 mg, 0,1 mmol) şi acid acetic (0,47 mL, 8,2 mmol). S-a adăugat hidrură de tributilstaniu (1,33 mL, 4,9 mmol) la 0 °C, amestecul de reacţie a fost agitat la 0 °C timp de 0,75 h şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100 şi EtOAc:CH3OH, de la 100:1 la 1:100) s-a obţinut 26-R (680 mg, >100%).

Rf= 0,25 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,57 (s, 1 H), 7,16 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,85-6,72 (m,

2H), 6,57 (s, 1 H), 6,21 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,00 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,05-4,97 (m, 1 H), 4,63

(s, 1 H), 4,35 (s, 1 H), 4,31-4,09 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 3,78 (s, 1 H), 3H), 3,50-3,40 (m, 3H),

3,24 (dq, J = 9,9, 5,3 Hz, 1 H), 2,95 (s, 1 H), 2,91-2,75 (m, 2H), 2,62 (dd, J = 14,8, 3,6 Hz, 1 H), 2,43-2,28 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,22-2,14 (m, 1H), 2,15 (s, 3H), 2,08 ( s, 3H).

ESI-MS m/z: 823,3 (M+H)+.

La o soluţie de 26-R (660 mg, 0,80 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 56 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (2,70 g, 16,0 mmol). După 16,5 ore la 23 °C, reacţia a fost stinsă cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, s-a agitat timp de 15 minute, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru,s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) obţinвndu-se 27-R (271 mg, 42%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,46 (s, 1 H), 7,16 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,83 (s, 1 H),

6,72 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,58 (s, 1 H), 6,20 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 5,99 (d, J = 1,8 Hz, 1 H), 5,76 (s, 1 H), 5,15 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 4,86 (s, 1 H), 4,52 (m, 2H), 4,17 (d, J = 5,3 Hz, 1 H),

4,07 (d, J = 11,4 Hz, 1 H), 3,80 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,55-3,43 (m, 2H), 3,32-3,20 (m, 2H), 3,01-2,82 (m, 4H), 2,68- 2,59 (m, 1 H), 2,44-2,31 (m, 1 H), 2,38 (s, 3H), 2,30-2,19 (m, 1 H), 2,26 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CD3OD): δ 171,7, 171,3, 153,8, 153,3, 148,0, 147,6, 145,4, 145,4,

143,1, 141,3, 140,7, 131,6, 131,4, 131,2, 129,3, 126,8, 121,6, 120,9, 118,3, 115,6, 112,2, 111,8, 101,8, 100,2, 81,7, 63,5, 63,1, 61,7, 58,0, 57,8, 56,1, 55,8, 55,0, 42,2, 42,1, 41,4, 41,0, 25,1, 23,8, 20,5, 16,0, 9,7.

ESI-MS m/z: 796.3 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 796.3045 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C42H46N5O9S 796,3011).

Exemplul de referinţă 15. Prepararea compuşilor de referinţă 28-S şi 29-S.

La o soluţie de 1 (450 mg, 0,72 mmol) în acid acetic (9 mL, 0,08 M) s-a adăugat 16-S (675 mg, 2,88 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 52°C timp de 3 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. O soluţie apoasă saturată de NaHCO3 a fost adăugată şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi s-au concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 80:20) s-a obţinut compusul 28-S (400 mg, 66%).

Rf= 0,35 (CH2Cl2:CH3OH, 10:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3):δ 7,65 (s, 1 H), 7,15 (d, J = 8,7 Hz, 1 H), 6,85-6,76 (m, 2H), 6,57 (s, 1 H), 6,25 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,04 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,16 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,62 (s, 1 H), 4,44 (s, 1 H), 4,35 (dd, J = 11,7, 2,0 Hz, 1 H), 4,29 (dd, J = 5,2, 1,6 Hz, 1 H),

4,22 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 3,80 (s, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,52-3,43 (m, 3H), 3,02-2,81 (m, 4H), 2,41-2,31 (m, 2H), 2,36 ( s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 838,6 (M+H)+.

La o soluţie de 28-S (400 mg, 0,48 mmol) оn CH3CN:H2O (2:1, 33 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (1,20 g, 7,16 mmol). După 16 ore la 23 °C, s-a adăugat un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCl şi NaHCO3, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, sa agitat timp de 30 de minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 70:30) obţinвndu-se 29-S (179 mg, 45%).

Rf= 0,25 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CD3OD): δ 7,17 (d, J = 8,9 Hz, 1 H), 6,83 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,70 (dd, J = 8,9, 2,4 Hz, 1 H), 6,66 (s, 1 H), 6,29 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 6,10 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,32 (d, J = 11,6 Hz, 1 H), 4,65 (s, 1 H), 4,57 (s, 1 H), 4,48 (s, 1 H), 4,38 (dd, J = 11,7, 2,1 Hz, 1 H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,41-3,35 (m, 1 H), 3,16-2,91 (m, 5H), 2,71 (dd, J = 15,3, 11,4 Hz, 2H), 2,54 (s, 1H), 2,42-2,36 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,37 (s, 3H), 2,28 (s, 3H), 1,99 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CDCI3): δ 171,3, 170,6, 155,2, 149,8, 147,5, 145,4, 142,8, 142,4,

133,0, 131,8, 130,0, 128,0, 122,2, 121,8, 115,5, 113,9, 113,3, 113,2, 111,4, 109,1, 103,8, 100,9, 91,6, 65,4, 61,9, 60,3, 59,4, 57,1, 56,4, 56,2, 55,2, 53,4, 43,7, 40,8, 38,3, 30,7, 26,4, 24,7, 20,4, 16,5, 9,6.

ESI-MS m/z: 811.3 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 811,2682 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C42H43N4O11S 811,2644).

Exemplul de referinţă 16. Prepararea compuşilor de referinţă 28-R şi 29-R

La o soluţie de 1 (50 mg, 0,08 mmol) în acid acetic (1 mL, 0,08 M) s-a adăugat 16-R (66 mg, 0,3 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 6 ore şi apoi acidul acetic a fost evaporat. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 80:20) s-a obţinut compusul 28-R (50 mg, 75%).

Rf= 0,20 (CH2Cl2:CH3OH, 10:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): 7,63 (s, 1 H), 7,16 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,81 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,77 (dd, J = 8,8, 2,3 Hz, 1 H), 6,56 (s, 1 H), 6,21 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 6,00 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 5,77 (s, 1 H), 5,00 (d, J = 11,8 Hz, 1 H), 4,63 (s, 1 H), 4,35 (s, 1 H), 4,27 (d, J = 5,0 Hz, 1 H), 4,22 - 4,04 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,48 - 3,40 (m, 2H), 3,00 (dd, J = 15,3, 4,8 Hz, 1 H), 2,92 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 2,71 (dd, J = 15,3, 10,1 Hz, 1 H), 2,46 (d, J = 14,9 Hz, 1 H), 2,34 (s, 3H), 2,26 (s, 3H), 2,21 (d, J = 15,0 Hz, 1 H), 2,15 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 838.8 (M+H)+.

La o soluţie de 28-R (50 mg, 0,06 mmol) оn CH3CN:H2O (2:1, 4,2 mL, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (304 mg, 1,80 mmol). După 3 ore la 23 °C, s-a adăugat un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCl şi NaHCO3 s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 30 de minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH de la 99:1 la 70:30) obţinвndu-se 29-R (30 mg, 60%).

Rf= 0,15 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): 7,68 (s, 1 H), 7,14 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 6,80 (d, J = 2,4 Hz, 1 H), 6,76 (dd, J = 8,8, 2,4 Hz, 1 H), 6,57 (s, 1 H), 6,17 (d, J = 1,3 Hz, 1 H), 5,95 (d, J = 1,3

Hz, 1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,12 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,85 (s, 1 H), 4,56 - 4,46 (m, 2H), 4,17 (s, 1 H), 4,10 (dd, J = 9,9, 4,9 Hz, 1 H), 4,05 (dd, J = 11,4, 2,0 Hz, 1 H), 3,78 (s, 3H), 3,76 (s, 3H), 3,51 (s, 1H), 3,48 - 3,42 (m, 2H), 3,23 (s, 1H), 3,00 (dd, J = 15,3, 4,9 Hz, 1 H), 2,90 - 2,77 (m, 2H), 2,71 (dd, J = 15,2, 9,9 Hz, 1 H), 2,48 (d, J = 14,6 Hz, 1 H), 2,34 (s, 3H), 2,25 (s, 3H), 2,20 (d, J = 14,6 Hz, 1 H), 2,14 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CDCI3): 175,6, 171,0, 168,7, 154,1, 147,3, 145,6, 143,1, 141,3, 140,8, 131,1, 130,4, 126,5, 121,9, 121,5, 121,3, 115,5, 112,9, 112,7, 112,0, 109,1, 101,9, 100,2, 81,5, 62,8, 61,7, 60,4, 57,9, 57,8, 56,0, 55,8, 54,8, 53,4, 42,5, 41,2, 40,3, 29,7, 24,6, 23,8, 20,5, 15,9, 9,8.

ESI-MS m/z: 811,6 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 811,2687 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C42H43N4O11S 811,2644).

Exemplul de referinţă 17.

La o soluţie de compus 1 (2,0 g, 3,21 mmoli) în acetonitril (200 ml, 0,01 M) s-a adăugat clorhidrat de 2-benzofuran-3-il-etilamină (30) (1,90 g, 9,65 mmol, Sigma Aldrich) şi clorură cianurică (TCT) (200 mg, 10%). Amestecul de reacţie a fost agitat la 85 °C timp de 24 de ore şi apoi s-a adăugat soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 9:1 la 1:9) s-a obţinut compusul 31 (1,95 g, 79%). \tabRf= 0,5 (Hexan:EtOAc, 1:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,38-7,36 (m, 2H), 7,19-7,10 (m, 2H), 6,64 (s, 1 H), 6,20

(d, J = 1,5 Hz, 1 H), 6,05 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,76 (s, 1 H), 5,05 (d, J = 11,7 Hz, 1 H), 4,54 (s,

1 H), 4,33-4,24 (m, 2H), 4,23-4,16 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 3,49-3,38 (m, 2H), 3,28- 3,21 (m, 1H), 3,06-2,78 (m, 5H), 2,57-2,50 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21 (m, 3H), 2,08 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 765,3 (M+H)+.

La o soluţie de compus 31 (380 mg, 0,49 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 25 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (1,30 g, 7,45 mmol). După 5 ore la 23 °C, s-a adăugat un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCl şi NaHCO3, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a se obţine compusul 32 (175 mg, 47%).

Rf= 0,40 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,35 (ddd, J = 10,7, 7,6, 1,1 Hz, 2H), 7,14 (dtd, J = 19,7, 7,3, 1,3 Hz, 2H), 6,65 (s, 1 H), 6,16 (d, J= 1.5 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,15 (dd, J = 11,5, 1,2 Hz, 1 H), 4,80 (s, 1 H), 4,48 (d, J = 3,2 Hz, 1 H), 4,44 (s, 1 H), 4,204,06 (m, 2H), 3,81 (s, 1 H), 3,50 (d, J = 18,8 Hz, 1H), 3,30 (ddd, J = 12,6, 7,9, 5,1 Hz, 1 H), 3,22 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 2,99 (d, J = 17,9 Hz, 1 H), 2,84 (dd, J = 19,2, 12,0 Hz, 3H), 2,592,49 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,21-2,14 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,06 ( s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CDCI3): δ 171,2, 168,7, 154,4, 150,0, 147,9, 145,5, 142,9, 140,9,

140,8, 131,3, 129,0, 127,7, 123,7, 122,2, 121,2, 120,8, 118,9, 118,3, 115,5, 113,5, 111,7, 101,7, 82,1, 62,7, 61,7, 60,3, 57,8, 57,4, 55,9, 55,0, 42,2, 41,3, 39,7, 38,2, 29,7, 23,7, 21,3, 20,6, 15,9, 9,7. ESI-MS m/z: 738,6 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 756,2654 [M+H]+ (Calculat pentru C40H42N3O10S 756,2585).

Exemplul de referinţă 18.

La o soluţie de 1 (500 mg, 0,80 mmol) în acid acetic (10 mL, 0,08 M) s-a adăugat clorhidrat de 2-(5-metoxibenzofuran-3-il)-etilamină (33) (Diverchim, ref: DW04590) (444 mg, 1,60 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 50°C timp de 6 zile şi apoi acidul acetic a fost evaporat. S-a adăugat o soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, 1:1) se obţinut 34 (270 mg, 43%).

Rf= 0,3 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,25 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 6,80-6,73 (m, 2H), 6,63 (s, 1

H), 6,18 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,03 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,78 (s, 1 H), 5,03 (dd, J = 11,5, 1,3 Hz, 1 H), 4,52 (s, 1 H), 4,29 (s, 1 H), 4,26 (dd, J = 4,7, 1,5 Hz, 1H), 4,23-4,16 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,46-3,43 (m, 1H), 3,43-3,37 (m, 1H), 3,24 (s, 1 H), 3,03 (d, J = 18,0 Hz, 1

H), 2,91 (dd, J = 17,9, 9,2 Hz, 1 H), 2,87-2,72 (m, 2H), 2,53-2,47 (m, 2H), 2,36 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,06 ( s, 3H).

ESI-MS m/z: 795,8 (M+H)+.

La o soluţie de 34 (345 mg, 0,43 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39: 1, 30 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (2,20 g, 13,0 mmol). După 3 ore la 23 °C, s-a adăugat un amestec 1: 1 de soluţii apoase saturate de NaCl şi NaHCO3, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, sa agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi s-au concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a se obţine 35 (175 mg, 51%).

Rf= 0,35 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CD3OD): δ 7,27 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 6,90 (d, J = 2,6 Hz, 1 H), 6,80 (dd, J = 9,0, 2,6 Hz, 1 H), 6,57 (s, 1 H), 6,23 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 6,05 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 5,23 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,27-4,08 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,63 (d, J = 14,1 Hz, 2H), 3,40-3,34 (m, 2H), 2,93-2,87 (m, 5H), 2,80 (d, J = 15,5 Hz, 1 H), 2,57-2,54 (m, 2H), 2,34 (s, 3H), 2,30 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,05 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CD3OD): δ 171,9, 170,6, 157,5, 147,0, 145,0, 142,3, 141,0, 132,2, 131,1, 129,1, 122,2, 120,9, 120,2, 116,3, 115,1, 114,0, 112,7, 111,4, 103,5, 102,7, 92,9, 62,0,

60,3, 59,8, 59,4, 56,5, 56,2, 56,0, 54,0, 43,8, 41,2, 40,7, 30,8, 30,3, 28,7, 24,5, 21,6, 20,6, 16,2, 9,6. ESI-MS m/z: 768,6 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 768,2630 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H42N3O10S 768,2585).

Exemplul 19

La o soluţie de LiAlH4 (148 mL, 1,0 M în THF, 148 mmol) la -40 °C a fost adăugat cu grijă H2SO4 (7,14 mL, 72,9 mmol) şi o suspensie de acid (S)-2-amino-3-(benzofuran-3il)propanoic (36-S) (preparat aşa cum este descris оn Tetrahedron Asymmetry 2008, 19, 500511) (5,54 g, 26,9 mmol) оn THF (85 mL, 0,003 M). Amestecul de reacţie a fost lăsat să evolueze la 23 °C, încălzit la 80 °C timp de 3 ore şi 18 ore la 23 °C. După ce s-a răcit la -21 °C amestecul de reacţie a fost stins cu grijă cu NaOH 2N până la pH bazic. S-a adăugat EtOAc şi amestecul s-a filtrat prin Celită® şi s-a spălat cu CH3OH. Produsul brut a fost concentrat оn vid pentru a da compusul 37-S (3,93 g, >100%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,67 - 7,62 (m, 1 H), 7,61 (s, 1 H), 7,51 - 7,41 (m, 1 H),

7,34 - 7,18 (m, 2H), 3,69 - 3,48 (m, 1 H), 3,44 (dd) , J = 10,8, 6,6 Hz, 1 H), 3,18 (dtd, J = 7,4, 6,4, 4,6 Hz, 1 H), 2,88 (ddd, J = 14,4, 6,1, 1,0 Hz, 1 H), 2,68 (ddd, J = 14,4, 7,5, 0,9 Hz, 1 H).

Exemplul 20

La o soluţie de LiAlH4 (118 mL, 1,0 M în THF, 118 mmol) la -40 °C a fost adăugat cu grijă H2SO4 (3,1 mL, 57,8 mmol) şi o suspensie de acid (R)-2-amino-3-(benzofuran-3-il) propanoic (36-R) (preparat aşa cum este descris оn Tetrahedron Asymmetry 2008, 19, 500511) (4,4 g, 21,4 mmol) оn THF (67,4 mL, 0,003 M). Amestecul de reacţie a fost lăsat să evolueze la 23 °C, s-a încălzit la 80 °C timp de 3 ore şi 18 ore la 23 °C. Răcit la -21 °C amestecul de reacţie a fost stins cu grijă cu NaOH 2N până la pH bazic. S-a adăugat EtOAc şi amestecul s-a filtrat prin Celită® şi s-a spălat cu CH3OH. Produsul brut a fost concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15, Silice amină) s-a produs compusul 37-R (2,77 g, 68%). Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 4:1).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,63 - 7,52 (m, 1 H), 7,56 (s, 1 H), 7,46 - 7,33 (m, 1 H), 7,21 (dtd, J = 19,9, 7,3, 1,3 Hz, 2H), 3,57 (dd, J = 10,7, 4,6 Hz, 1 H), 3,42 (dd, J = 10,8, 6,6 Hz, 1 H), 3,15 (dtd, J = 7,6, 6,3, 4,6 Hz, 1 H), 2,84 (ddd, J = 14,4, 6,0, 1,0 Hz, 1 H), 2,64 (ddd, J = 14,4, 7,5, 0,9 Hz, 1 H).

Exemplul de referinţă 21

La o soluţie de compus 1 (850 mg, 1,36 mmol) оn CH3CN (136 mL, 0,01 M) s-au adăugat (S)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propan-1-ol (37-S) (1,30 g, 6,83 mmol şi clorură de cianură (TCT) (170 mg, 20%). Amestecul de reacţie a fost agitat la 85 °C timp de 24 de ore şi apoi a fost adăugată soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 9:1 la 1:9) se obţine compusul 38-S (750 mg, 69%).

Rf= 0,25 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,39 - 7,33 (m, 1 H), 7,33 - 7,29 (m, 1 H), 7,20 (ddd, J =

8,3, 7,2, 1,4 Hz, 1 H), 7,14 (td, J = 7,4, 1,0 Hz, 1 H), 6,61 (s, 1 H), 6,21 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,06 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,74 (s, 1 H), 5,08 (d, J = 11,2 Hz, 1 H), 4,58 (s, 1 H), 4,37 (s, 1 H),

4,32 - 4,23 (m, 2H), 4,19 (d, J = 2,7 Hz, 1 H), 3,81 (s, 3H), 3,52 - 3,41 (m, 3H), 3,36 - 3,29 (m,

1 H), 3,13 (d, J = 9,8 Hz, 1 H), 3,00 - 2,81 (m, 3H), 2,57 (dd, J = 15,7, 4,9 Hz, 1 H), 2,50 (d, J = 15,2 Hz, 1 H), 2,37 (s, 3H), 2,31 - 2,25 (m, 1 H), 2,29 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,10 (d, J = 7,2 Hz, 1 H), 2,05 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 795.2 (M)+.

La o soluţie de compus 38-S (890 mg, 1,12 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 75 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (4,70 g, 28,0 mmol). După 18 ore la 23 °C, un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCl şi NaHCO3 s-a adăugat, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a da compusul 39-S (500 mg, 57%).

Rf= 0,30 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,38 - 7,33 (m, 1 H), 7,33 - 7,28 (m, 1 H), 7,23 - 7,16 (m,

1 H), 7,16 - 7,09 (m, 1 H), 6,62 (s, 1 H), 6,18 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,03 (d, J = 1,4 Hz, 1 H),

5,71 (s, 1 H), 5,19 (d, J = 11,2 Hz, 1 H), 4,85 (s, 1 H), 4,49 (s, 2H), 4,24 - 4,10 (m, 3H), 3,81 (s, 3H), 3,54 (d, J = 4,9 Hz, 1 H), 3,49 (d, J = 2,3 Hz, 3H), 3,33 (t, J = 10,1 Hz, 2H), 3,22 (s, 1

H), 2,98 (s, 1 H), 2,84 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 2,62 - 2,53 (m, 2H), 2,37 (s, 3H), 2,30 - 2,24 (m, 1H), 2,28 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CDCI3): δ 172,0, 170,7, 156,1, 150,6, 149,9, 147,1, 145,0, 142,4,

142,2, 132,0, 131,4, 128,7, 125,5, 123,8, 122,6, 121,6, 120,1, 116,5, 114,4, 112,3, 103,5, 92,6, 66,0, 65,1 , 62,2, 60,4, 59,7, 56,6, 56,1, 54,8, 54,1, 51,6, 44,0, 41,3, 38,3, 30,8, 24,8, 20,6, 16,3, 9,6.

ESI-MS m/z: 768.2 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 768,2652 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H42N3O10S 768,2585)

Exemplul de referinţă 22.

La o soluţie de compus 1 (100 mg, 0,16 mmol) оn CH3CN (16 mL, 0,01 M) s-a adăugat (R)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propan-1-ol (37-R) (307 mg, 1,6 mmol) şi clorură cianurică (TCT) (40 mg, 40%). Amestecul de reacţie a fost agitat la 85 °C timp de 44 de ore şi apoi s-a adăugat soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 9:1 la 1:9) s-a obţinut compusul 38-R (95 mg, 75%).

Rf= 0,3 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,42 - 7,27 (m, 2H), 7,28 -7,09 (m, 2H), 6,58 (s, 1 H),

6,20 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,05 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,79 (s, 1 H), 5,00 (d, J = 11,4 Hz, 1 H),

4,59 (s, 1 H), 4,34 (s, 1 H), 4,31 - 4,16 (m, 4H), 3,80 (s, 3H), 3,79 - 3,76 (m, 1 H), 3,63 (s, 1 H), 3,54 - 3,40 (m, 4H), 2,99 - 2,87 (m, 2H), 2,68 (d, J = 15,0 Hz, 1 H), 2,56 - 2,47 (m, 1 H), 2,38 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,17 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 795,2 (M+H)+.

La o soluţie de compus 38-R (95 mg, 0,11 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 11 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (601 mg, 3,58 mmol). După 18 ore la 23 °C, un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCl şi NaHCO3 s-a adăugat, s-a agitat timp de 15 min, s-a diluat cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a da compusul 39-R (66 mg, 70%).

Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,39 - 7,31 (m, 2H), 7,23 - 7,07 (m, 2H), 6,59 (s, 1 H),

6,17 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,75 (s, 1 H), 5,12 (dd, J = 11,3, 1,2 Hz, 1

H), 4,84 (s, 1 H), 4,56 - 4,43 (m, 2H), 4,19 - 4,07 (m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,83 - 3,74 (m, 1H), 3,66 - 3,51 (m, 3H), 3,24 (s, 1H), 2,99 - 2,79 (m, 2H), 2,75 - 2,64 (m, 1H), 2,59 - 2,43 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,16 (s, 3H), 2,07 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CD3OD): δ 170,5, 169,1, 154,9, 148,9, 148,5, 145,7, 143,6, 141,1,

140,8, 130,6, 129,9, 127,1, 124,5, 122,4, 122,4, 121,2, 120,3, 118,7, 118,2, 115,1, 113,6, 110,9, 102,1, 91,1, 65,0, 63,3, 60,2, 59,0, 58,4, 55,4, 54,5, 52,7, 52,3, 42,5, 38,7, 29,4, 23,5, 23,2, 19,1, 14.8, 8.3.

ESI-MS m/z: 768,2 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 767,2628 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H42N3O10S 768,2585).

Exemplul 23. Prepararea N-[(S)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propil]carbamatului de alil (44-S).

La o soluţie de compus 37-S (1.0 g, 5,22 mmol) оn CH3CN (21 mL, 4 mL/mmol) s-a adăugat di-tert-dicarbonat de butil (2,28 g, 10,4 mmoli). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 2 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) s-a obţinut compusul 40-S (0,5 g, 33%).

Rf= 0,7 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,64 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,49 (s, 1 H), 7,46 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,36 - 7,19 (m, 2H), 4,94 (s, 1 H), 3,98 (s, 1 H), 3,71 - 3,56 (m, 2H), 2,93 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).

La o soluţie de compus 40-S (0.5 g, 1,71 mmol) оn CH2Cl2 (11 mL, 6 mL/mmol) s-a adăugat ftalimidă (0,55 g, 3,77 mmol), trifenilfosfină (0,99 g, 3,77 mmol) şi amestecul s-a răcit la 0°C. O soluţie de 40% azodicarboxilat de dietil оn CH2Cl2 (1.26 mL, 4,29 mmol) a fost adăugată timp de 15 min. Reacţia a fost agitată la 23°C timp de 18 ore, concentrată în vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 99:1 la 40:60) pentru a da compusul 41-S (0.68 g, 94%).

Rf= 0,8 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,89 - 7,79 (m, 2H), 7,83 - 7,62 (m, 2H), 7,65 - 7,55 (m, 2H), 7,49 - 7,42 (m, 1H), 7,33 - 7,20 (m, 2H), 483. d, J = 9,0 Hz, 1 H), 4,39 (ddt, J = 12,1, 6,3, 2,9 Hz, 1 H), 3,88 - 3,70 (m, 2H), 2,96 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,24 (s, 9H).

La o soluţie de compus 41-S (345 mg, 0,82 mmol) în etanol (25 mL, 30 mL/mmol) s-a adăugat hidrazină monohidrat (3,6 mL, 73,8 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C оntr-un tub sigilat timp de 2 ore şi s-a concentrat оn vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) s-a obţinut compusul 42-S (233 mg, 98%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,62 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,49 - 7,42 (m, 2H), 7,33 - 7,18 (m, 2H), 4,85 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 3,91 (s, 1 H), 2,91 - 2,76 (m, 3H), 2,67 (dd, J = 13,1, 6,8 Hz, 1 H), 1,25 (s, 9H).

La o soluţie de compus 42-S (280 mg, 0,96 mmol) оn CH3CN (10 mL, 10 mL/mmol) şi DMF (16 mL, 1 mL/mmol) s-a adăugat N,N-diizopropiletilamină (0,14 mL, 0,77 mmol) şi cloroformiat de alil (1,02 mL, 9,64 mmol). Reacţia a fost agitată la 23 °C timp de 2 ore. Amestecul a fost diluat cu EtOAc şi s-a adăugat NH4CI şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100) pentru a da compusul 43-S (445 mg, >100%).

Rf= 0,5 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,60 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,52 - 7,43 (m, 2H), 7,34 - 7,20

(m, 2H), 5,90 (ddt, J = 16,4, 10,8, 5,6 Hz, 1 H), 5,32 - 5,17 (m, 2H), 4,93 - 4,86 (m, 1 H), 4,56 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,08 - 3,98 (m, 1 H), 3,40 - 3,21 (m, 2H), 2,88 (m, 2H), 1,25 (s, 9H).

La o soluţie de compus 43-S (160 mg, 0,43 mmol) оn CH2Cl2 (8 mL, 16,6 mL/mmol) s-a adăugat acid trifluoracetic (4 mL, 8,3 mL/mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 1,5 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) s-a obţinut compusul 44-S (175 mg, >100%).

Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CD3OD): δ 7,72 (s, 1 H), 7,64 (dt, J = 8,4, 0,9 Hz, 1 H), 7,49 (dt, J = 8,4, 0,9 Hz, 1 H), 7,37 - 7,22 (m, 2H), 5,94 (ddt, J = 16,3, 10,7, 5,5 Hz, 1 H), 5,32 (dq, J = 17,3, 1,7 Hz, 1 H), 5,19 (dq, J = 10,6, 1,5 Hz, 1 H), 4,56 (dt, J = 5,7, 1,5 Hz, 2H), 3,56 (qd, J = 7,0, 4,4 Hz, 1 H), 3,46 - 3,32 (m, 1 H), 3,32 - 3,24 (m, 1 H), 3,03 (dd, J = 14,8, 6,9 Hz, 1 H), 2,91 (ddd, J = 14,8, 7,1, 0,9 Hz, 1 H).

Exemplul 24. Prepararea N-[(R)-2-amino-3-(benzofuran-3-il)propil]carbamatului de alil (44R).

\tab \tab

La o soluţie de compus 37-R (2.75 g, 14,4 mmol) оn CH3CN (58 mL, 4 mL/mmol) s-a adăugat di-tert-dicarbonat de butil (6,27 g, 28,76 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 2,5 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a da compusul 40-R (3,7 g, 88%).

Rf= 0,6 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,64 (d, J = 7,6 Hz, 1 H), 7,52 - 7,43 (m, 2H), 7,35 - 7,20

(m, 2H), 4,85 (d, J = 8,2 Hz, 1 H), 4,00 (bs, 1 H), 3,69 (dd, J = 11,0, 4,0 Hz, 1 H), 3,62 (dd, J = 10,9, 5,1 Hz, 1 H), 2,94 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 1,42 (s, 9H).

La o soluţie de compus 40-R (3.7 g, 12,7 mmol) оn CH2Cl2 (76 mL, 6 mL/mmol) s-au adăugat ftalimidă (4,1 g, 28 mmol), trifenilfosfină (7,3 g, 28 mmol) şi amestecul s-a răcit la 0°C. O soluţie de 40% azodicarboxilat de dietil оn CH2Cl2 (9,4 mL, 31,7 mmol) a fost adăugată timp de 15 min. Reacţia a fost agitată la 23°C timp de 16 ore, s-a concentrat în vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a da compusul 41-R (4.05 g, 76%). \tabRf= 0,8 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1). 1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,67 - 7,68 (m, 4H), 7,61 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,58 (s, 1 H), 7,46 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,27 (dtd, J = 17,2, 7,3, 1,4 Hz, 2H), 4,84 (d, J = 9,0 Hz, 1 H), 4,46 - 4,30 (m, 1 H), 3,89 - 3,66 (m, 2H), 2,97 (d, J = 6,4 Hz, 2H), 1,24 (s, 9H).

La o soluţie de compus 41-R (4,0 g, 9,5 mmol) în etanol (285 mL, 30 mL/mmol) s-a adăugat hidrazină monohidrat (41,5 mL, 856 mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 80 °C оntr-un tub sigilat timp de 2 ore şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) pentru a da compusul 42-R (2,2 g, 80%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 8:2).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,60 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,45 (s, 1 H), 7,44 (d, J = 7,1

Hz, 1 H), 7,25 (dtd, J = 18,8, 7,3, 1,3 Hz, 2H), 4,94 (d, J = 8,8 Hz, 1 H), 3,98 - 3,78 (m, 1 H), 2,90 - 2,77 (m, 2H), 2,65 (dd, J = 13,1, 7,0 Hz, 1 H), 1,40 (s, 9H).

La o soluţie de compus 42-R (2.2 g, 7,6 mmol) оn CH3CN (76 mL, 10 mL/mmol) şi DMF (7,6 mL, 1 mL/mmol) s-au adăugat N,N-diizopropiletilamină (1,1 mL, 6,08 mmol) şi cloroformiat de alil (8,05 mL, 76 mmol). Reacţia a fost agitată la 23 °C timp de 7 ore. Amestecul a fost diluat cu EtOAc şi s-a adăugat NH4CI şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100) pentru a da compusul 43-R (2.3 g, 81%).

Rf= 0,7 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,60 (d, J = 7,5 Hz, 1 H), 7,52 - 7,43 (m, 2H), 7,34 - 7,20

(m, 2H), 5,90 (ddt, J = 17,3, 10,8, 5,6 Hz, 1 H), 5,29 (d, J = 17,2, 1 H), 5,20 (d, J = 10,4, 1 H), 5,10 (t, J = 6,2 Hz, 1 H), 4,86 (d, J = 8,4 Hz, 1 H), 4,56 (d, J = 5,4, 2H), 4,08 - 3,97 (m, 1 H), 3,36 (dt, J = 10,7, 4,7 Hz, 1 H), 3,30 - 3,23 (m, 1 H), 2,87 (td, J = 14,8, 6,5 Hz, 2H), 1,41 (s, 9H).

La o soluţie de compus 43-R (1,32 g, 3,52 mmol) оn CH2Cl2 (60 mL, 16,6 mL/mmol) sa adăugat acid trifluoracetic (30 mL, 8,3 mL/mmol). Amestecul de reacţie a fost agitat la 23°C timp de 1,5 ore şi s-a concentrat în vid. După cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 100:1 la 50:50) pentru a da compusul 44-R (0,90 g, 94%).

Rf= 0,2 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,75 (s, 1 H), 7,69 - 7,61 (m, 1 H), 7,54 - 7,46 (m, 1 H),

7,39 - 7,24 (m, 2H), 5,95 (ddt, J = 16,3, 10,8, 5,5 Hz, 1 H), 5,32 (dd, J = 17,3, 1,8 Hz, 1 H), 5,24 - 5,16 (m, 1 H), 4,57 (dt, J = 5,7, 1,5 Hz, 2H), 3,68 (qd, J = 7.1, 4.2 Hz, 1 H), 3,48 (dd, J = 14,8, 4,2 Hz, 1 H), 3,42 - 3,30 (m, 1 H), 3,14 - 2,95 (m, 2H).

Exemplul 25 \tab \tab \tab \tab

La o soluţie de compus 1 (750 mg, 1,2 mmol) оn CH3CN (120 mL, 0,01 M) s-au adăugat compusul 44-S (1370 mg, 6 mmol) şi clorură cianurică (TCT) (184 mg, 20%). Amestecul de reacţie a fost agitat la 85 °C timp de 23 de ore şi apoi s-a adăugat soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 9:1 la 1:9) s-a obţinut compusul 45-S (755 mg, 72%).

Rf= 0,36 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,38 - 7,28 (m, 2H), 7,23 - 7,08 (m, 2H), 6,67 (s, 1 H), 6,19 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,09 - 5,95 (m, 1 H), 6,04 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 5,92 (s, 1 H), 5,80 (s, 1 H), 5,44 - 5,34 (m, 1 H), 5,26 (dq, J = 10,4, 1,3 Hz, 1 H), 5,08 (dd, J = 11,4, 1,1 Hz, 1 H),

4,70 - 4,63 (m, 2H), 4,56 (s, 1 H), 4,34 (s, 1 H), 4,31 - 4,18 (m, 3H), 3,80 (s, 3H), 3,50 - 3,39

(m, 2H), 3,24 - 3,15 (m, 1 H), 3,00 (dt, J = 12,2, 6,0 Hz, 2H), 2,95 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 2,60

(dd, J = 15,4, 4,5 Hz, 2H), 2,44 (dd, J = 15,6, 5,2 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,27 (s, 3H), 2,25 2,20 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,12 (s, 1H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 878,2 (M+H)+.

La o soluţie de compus 45-S (750 mg, 0,85 mmol) оn CH2Cl2 (15.3 mL, 18 mL/mmol) sa adăugat diclorură de bis(trifenilfosfină)paladiu(II) (96 mg, 0,14 mmol) şi acid acetic (0,5 mL, 8,5 mmol). S-a adăugat hidrură de tributii staniu (1,4 mL, 5,1 mmol) la 0 °C, iar amestecul de reacţie a fost agitat la 0 °C timp de 30 minute şi a fost concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100 şi CH2Cl2:CH3OH, de la 100:1 la 1:100) pentru a da compusul 46-S (430 mg, 64%).

Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,37 - 7,29 (m, 2H), 7,22 - 7,11 (m, 2H), 6,57 (s, 1 H),

6,21 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 6,06 (d, J = 1,5 Hz, 1 H), 5,07 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,57 (s, 1 H), 4,37 (s, 1 H), 4,29 - 4,23 (m, 2H), 4,14 (s, 1 H), 3,79 (s, 3H), 3,50 - 3,47 (m, 2H), 3,38 (d, J =

8,7 Hz, 1H), 2,95 -2,71 (m, 4H), 2,68 - 2,52 (m, 2H), 2,51 - 2,38 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,33 2,26 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,17 - 2,08 (m, 1 H), 2,10 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 794,3 (M+H)+.

La o soluţie de compus 46-S (550 mg, 0,7 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 49 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (2.4 g, 14 mmol). După 16 ore la 23 °C, reacţia a fost stinsă cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, agitată timp de 15 minute, diluată cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi s-au concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a da compusul 47-S (53 mg, 10%). \tabRf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1). 1H RMN (500 MHz, CDCI3): δ 7,36 (d, 7,9 Hz, 1 H), 7,33 (d, 7,4 Hz, 1 H), 7,23 (t, J =

7,4 Hz, 1 H), 7,16 (t, J = 7,4 Hz, 1 H), 6,77 (s, 1 H), 6,20 (s, 1 H), 6,04 (s, 1 H), 5,92 (s, 1 H),

5,20 (d, J = 11,1 Hz, 1 H), 4,90 (s, 1 H), 4,50 (s, 1 H), 4,46 - 4,39 (m, 1 H), 4,25 (d, J = 11,1

Hz, 1 H), 420 (s, 1 H), 3,84 (s, 3H), 3,81 (d, J = 4,2 Hz, 1 H), 3,58 (s, 1 H), 3,40 - 3,14 (m, 3H), 2,90 (t, J = 13,0 Hz, 1 H), 2,76 (m, 3H), 2,50 (s, 3H), 2,46 - 2,37 (m, 1 H), 2,32 - 2,26 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,15 (s, 3H), 2,04 (s, 3H).

13C RMN (126 MHz, CD3OD): δ 170,5, 169,2, 154,6, 149,1, 148,7, 145,7, 143,5, 141,0,

140,9, 131,2, 129,6, 126,9, 124,4, 122,5, 121,4, 119,7, 118,7, 115,9, 112,7, 111,0, 110,7, 102,1, 91,2, 63,5, 61,2, 59,2, 58,5, 55.3, 54.7, 53,4, 52,7, 43,3, 42,5, 39,9, 36,9, 29,3, 24,1, 23,6, 19,1, 15,0, 8.2.

ESI-MS m/z: 767,2 (M-H2O+H)+.

(+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 767,2794 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H43N4O9S 767,2745).

Exemplul 26.

La o soluţie de compus 1 (621 mg, 1 mmol) оn CH3CN (100 mL, 0,01 M) s-au adăugat compusul 44-R (825 mg, 3 mmol) şi clorură de cianură (TCT) (248 mg, 40%). Amestecul de reacţie a fost agitat la 85 °C timp de 66 de ore şi apoi s-a adăugat soluţie apoasă saturată de NaHCO3 şi amestecul a fost extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-a filtrat şi s-a concentrat оn vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 9:1 la 1:9) se obţine compusul 45-R (530 mg, 58%).

Rf= 0,4 (Hexan:EtOAc, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,42 - 7,28 (m, 2H), 7,23 - 7,08 (m, 2H), 6,60 (s, 1 H),

6,20 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,04 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,01 - 5,92 (m, 1 H), 5,77 (s, 1 H), 5,44 -

5,20 (m, 2 H), 5,09 (s, 1 H), 5,04 - 4,96 (m, 1 H), 4,71 - 4,55 (m, 2H), 4,34 (s, 1 H), 4,30 - 4,18

(m, 3H), 3,79 (s, 3H), 3,53 (dd, J = 10,2, 4,4 Hz, 1 H), 3,46 (m, 2H), 3,50 - 3,40 (m, 1 H), 3,03 - 2,87 (m, 2H), 2,67 (d, J = 15,0 Hz, 1 H), 2,47 (dd, J = 15,6, 3,7 Hz, 1 H), 2,40 - 2,32 (m, 2H), 2,30 (s, 3H), 2,29 (s, 3H), 2,19 - 2,12 (m, 2H), 2,16 (s, 3H), 2,09 ( s, 3H).

ESI-MS m/z: 878,3 (M+H)+.

La o soluţie de compus 45-R (552 mg, 0,63 mmol) оn CH2Cl2 (11,3 mL, 18 mL/mmol) sa adăugat diclorură de bis(trifenilfosfin)paladiu(II) (70,7 mg, 0,1 mmol) şi acid acetic (0,36 mL, 6,3 mmol). S-a adăugat hidrură de tributilstaniu (1,02 mL, 3,8 mmol) la 0 °C şi amestecul de reacţie a fost agitat la 0 °C timp de 0,5 ore şi concentrat оn vid. Produsul brut obţinut a fost diluat cu EtOAc, s-a adăugat soluţie apoasă saturată de NH4CI şi amestecul a fost extras cu EtOAc. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat în vid. După cromatografie rapidă (Hexan:EtOAc, de la 100:1 la 1:100 şi EtOAc:CH3OH, de la 100:1 la 1:100) s-a obţinut compusul 46-R (423 mg, 85%).

Rf= 0,3 (CH2Cl2:CH3OH, 1:1).

1H RMN (400 MHz, CDCI3): δ 7,45 - 7,28 (m, 2H), 7,23 - 7,08 (m, 2H), 6,56 (s, 1 H), 6,19 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 6,05 (d, J = 1,4 Hz, 1 H), 4,98 (d, J = 11,5 Hz, 1 H), 4,59 (s, 1 H), 4,34 (s, 1 H), 4,27 (dd, J = 5,1, 1,7 Hz, 1 H), 4,22 - 4,16 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,49 - 3,39 (m, 2H), 3,31 (dq, J = 9,8, 5,5, 4,5 Hz, 2H), 2,95 (s, 1 H), 2,83 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 2,74 - 2,51 (m, 3H), 2,35 (s, 3H), 2,32 - 2,21 (m, 2H), 2,26 (s, 3H); 2,16 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).

ESI-MS m/z: 794,3 (M+H)+.

La o soluţie de compus 46-R (412 mg, 0,52 mmol) оn CH3CN:H2O (1,39:1, 36 ml, 0,015 M) s-a adăugat AgNO3 (1,76 g, 10,4 mmol). După 22 de ore la 23 °C, reacţia a fost stinsă cu un amestec 1:1 de soluţii apoase saturate de NaCI şi NaHCOs, agitată timp de 15 minute, diluată cu CH2Cl2, s-a agitat timp de 5 minute şi s-a extras cu CH2Cl2. Straturile organice combinate au fost uscate pe Na2SO4 anhidru, s-au filtrat şi concentrat оn vid. Reziduul obţinut a fost purificat prin cromatografie rapidă (CH2Cl2:CH3OH, de la 99:1 la 85:15) pentru a da compusul 47-R (175 mg, 43%).

Rf= 0,1 (CH2Cl2:CH3OH, 9:1).

1H RMN (500 MHz, CDCI3): δ 7,34 (dd, J = 11,1, 7,9 Hz, 2H), 7,22 - 7,07 (m, 2H), 6,57

(s, 1 H), 6,17 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 6,01 (d, J = 1,2 Hz, 1 H), 5,11 (d, J = 11,2 Hz, 1 H), 4,84 (s, 1 H), 4,53 - 4,47 (m, 2H), 4,21 - 4,07 (m, 2H), 3,80 (s, 3H), 3,56 (d, J = 5,1 Hz, 1 H), 3,43 (s, 1

H), 3,24 (d, J = 9,1 Hz, 1 H), 2,98 - 2,78 (m, 4H), 2,72 - 2,58 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,35 - 2,27 (m, 2H), 2,28 (s, 3H), 2,14 ( s, 3H), 2,08 (s, 3H).

13C RMN (101 MHz, CD3OD): δ 170,6, 169,1, 155,0, 148,8, 145,6, 143,7, 141,1, 140,8,

130,9, 129,7, 126,9, 124,2, 122,1, 119,6, 118,9, 115,0, 113,2, 112,5, 111,0, 102,1, 91,3, 63,3, 60,4, 59,0, 58,4, 55,3, 54,6, 52,6, 51,1, 44,9, 42,4, 39,8, 38,7, 29,4, 24,0, 23,2, 191, 15,0, 8,3. ESI-MS m/z: 767,2 (M-H2O+H)+. (+)-HR-ESI-TOF-MS m/z: 767,2806 [M-H2O+H]+ (Calculat pentru C41H43N4O9S 767,2745).

Exemplul 27. Bioteste in vitro pentru detectarea activităţii antitumorale

Scopul acestui test este de a evalua in vitro activitatea citostatică (capacitatea de a întârzia sau opri creşterea celulelor tumorale) sau citotoxică (capacitatea de a ucide celulele tumorale) a probelor testate. LINII CELULARE

Denumire Nr. ATCC Speci e Ţesut Caracteristici A549 CCL-185 uman plămâni carcinom pulmonar (NSCLC) HT29 HTB-38 uman colon adenocarcinom colorectal MDA-MB-231 HTB-26 uman sвn adenocarcinom mamar PSN1 CRM-CRL-3211 uman pancreas adenocarcinomul pancreasului PC-3 CRL-1435 uman prostata adenocarcinom de prostată 22Rv1 CRL-2505 uman prostata carcinom de prostată

EVALUAREA ACTIVITĂŢII CITOTOXICE UTILIZВND TESTE COLORIMETRICE SBR ŞI MTT

Un test colorimetric, folosind reacţia sulforhodaminei B (SRB) a fost adaptat pentru a oferi o măsurare cantitativă a creşterii şi viabilităţii celulelor (urmând tehnica descrisă de Skehan şi colab. J. Natl. Cancer Inst. 1990, 82, 1107-1112). Un alt test colorimetric bazat pe reducerea bromurii de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazoliu (MTT) la un formazan violet a fost, de asemenea, utilizat pentru a evalua activitatea antiproliferativă (urmând tehnica descrisă de Mosmann şi colab. J. Immunol. Meth. 1983, 65, 55-63).

Aceste forme de teste folosesc microplăci de cultură celulară cu 96 de godeuri, conform standardelor Institutului Naţional American de Standarde şi ale Societăţii pentru

Automatizare şi Screening de Laboratoare (ANSI SLAS 1-2004 (R2012) 10/12/2011. Toate liniile celulare utilizate оn acest studiu au fost obţinute din Colecţia Americană de Cultură de Tip (ATCC) şi derivă din diferite tipuri de cancer uman.

Celulele A549, HT29, MDA-MB-231 şi PSN1 au fost menţinute оn Mediul Eagle Modificat Dulbecco (DMEM), оn timp ce celulele PC-3 şi 22Rv1 au fost menţinute оn Mediul Roswell Park Memorial Institute (RPMI). Toate liniile celulare au fost suplimentate cu 10% ser fetal bovin (FBS), 2 mM L-glutamină, 100 U/ml penicilină şi 100 U/ml streptomicină la 37 °C, 5% CO2 şi 98% umiditate. Pentru experimente, celulele au fost recoltate din culturi subconfluente folosind tripsinizare şi resuspendate în mediu proaspăt înainte de numărare şi placare.

Celulele A549, HT29, MDA-MB-231 şi PSN1 au fost însămânţate pe plăci de microtitrare cu 96 de godeuri, la 5000 de celule pe godeu în alicote de 150 μL şi lăsate să se ataşeze la suprafaţa plăcii timp de 18 ore (peste noapte) în mediu fără medicament. După aceea, o placă martor (netratată) a fiecărei linii celulare a fost fixată (aşa cum este descris mai jos) şi utilizată pentru valoarea de referinţă de timp zero. Plăcile de cultură au fost apoi tratate cu compuşi de testare (alicote de 50 µL de soluţii stoc 4X în mediu de cultură complet plus 4% DMSO) folosind zece diluţii оn serie 2/5 (concentraţii variind de la 10 la 0,003 µg/mL) şi culturi triplicate (concentraţia 1% finală în DMSO). După 72 de ore de tratament, efectul antitumoral a fost măsurat utilizând metodologia SRB: pe scurt, celulele au fost spălate de două ori cu PBS, fixate timp de 15 minute în soluţie de glutaraldehidă 1% la temperatura camerei, clătite de două ori în PBS şi colorate оn soluţie de SRB 0,4% timp de 30 min la temperatura camerei. Celulele au fost apoi clătite de mai multe ori cu soluţie de acid acetic 1% şi uscate la aer la temperatura camerei. SRB a fost apoi extras оn soluţie de bază trizma

10 mM şi absorbanţa a fost măsurată într-un cititor de plăci spectrofotometric automat la 490 nm.

Un număr adecvat de celule PC-3 şi 22Rv1, pentru a atinge o densitate celulară finală în test, variind de la 5.000 la 15.000 de celule per godeu, în funcţie de linia celulară, au fost însămânţate în plăci cu 96 de godeuri şi lăsate să stea în mediu de cultură timp de 24 de ore la 37°C sub 5% CO2 şi 98% umiditate. Apoi, s-au adăugat compuşi sau DMSO în mediu de cultură pentru a atinge un volum final de 200 μL şi concentraţia dorită a compusului într-un interval care acoperă zece diluţii seriale 2/5 оncepвnd de la 0,1 μg/mL оn 1% (vol/vol) DMSO. În acest moment, un set de „plăci de control timp zero» tratate cu 1% (vol/vol) DMSO au fost prelucrate cu MTT, aşa cum este descris mai jos. Restul plăcilor au fost incubate timp de 72 de ore în condiţiile de mediu menţionate mai sus. Ulterior, 50 μL dintr-o soluţie MTT de 1 mg/mL în mediu de cultură au fost adăugate în godeuri şi incubate timp de 6-8 ore la 37°C pentru a permite generarea de cristale de formazan. Mediul de cultură a fost apoi îndepărtat şi 100 μL de DMSO pur s-au adăugat în fiecare godeu pentru a dizolva produsul formazan оntr-o soluţie colorată a cărei absorbanţă la 540 nm a fost în cele din urmă măsurată într-un cititor de etichete multiplăci PolarStar Omega (BMG Labtech, Ortenberg, Germania).

Efectele asupra creşterii şi supravieţuirii celulelor au fost estimate prin aplicarea algoritmului NCI (Boyd MR şi Paull KD. Drug Dev. Res. 1995, 34, 91-104). Valorile obţinute în culturi în trei exemplare au fost ajustate prin regresie neliniară la o curbă logistică cu patru parametri prin analiză de regresie neliniară. Au fost calculaţi trei parametri de referinţă (conform algoritmului NCI menţionat anterior) prin interpolarea automată a curbelor obţinute printr-o astfel de potrivire: GI50= concentraţia de compus care produce 50% inhibare a creşterii celulare, оn comparaţie cu culturile martor; TGI = inhibarea totală a creşterii celulare (efect citostatic), оn comparaţie cu culturile martor şi LC50 = concentraţia compusului care produce 50% efect citotoxic net de distrugere a celulelor).

Tabelele 1-7 ilustrează datele despre activitatea biologică a compuşilor prezentei invenţii împreună cu activitatea biologică a compuşilor de referinţă. Tabelele 8-9 furnizează date despre activitatea biologică a mai multor compuşi ai invenţiei оn comparaţie cu analogii lor cu o grupare de acid carboxilic. Compuşi 10-S, 10-R, 11-S, 11-R, 12-S, 12-R, 13-S, 13-R, 25-S, 25-R, 26-S, 26-R, 27- S, 27-R, 45-S, 45-R, 46-S, 46-R, 47-S, 47-R sunt compuşi conform prezentei invenţii din tabelele 1-9; alţi compuşi precum A, B, E, F, ET-736, PM01183, 14-S, 15-S, 28-S, 28-R, 29-S, şi 29-R, nu fac parte din prezenta invenţie.

Tabel 1. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă

Compus Compus de referinţă 3-S R1 = CN, R4 = -CH2OH 3a-S R1 = CN, R4 = -CH2OAc 10-S R1 = CN, R4 = -CH2NHAlloc 11-S R1 = CN, R4 = -CH2NH2 A R1 = CN 4-S R1 = OH, R4 = -CH2OH C R1 = OH 4a-S R1 = OH, R4 = -CH2OAc 12-S R1 = OH, R4 = -CH2NH2 13-S R1 = OH, R4 = -CH2NHAlloc A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 PC-3 22Rv1 A549 HT29 MDA- MB-231 PSN1 GI50 3-S 4.03E- 10 2.77E- 10 4.91E- 10 9.95E- 10 A 8.36E- 09 7.71E- 09 7.07E- 09 1.29E- 08 TGI 6.17E- 10 >1.26E- 07 5.29E- 10 1.64E- 09 8.87E- 09 8.36E- 09 9.38E- 09 1.54E- 08 LC50 >1.26E- 07 >1.26E- 07 6.17E- 10 >1.26E- 07 >1.29E- 07 >1.29E- 07 1.41E- 08 1.93E- 08 GI50 3a- S 3.11E- 09 2.99E- 09 2.87E- 09 2.15E- 09 TGI 3.23E- 09 3.23E- 09 3.59E- 09 3.59E- 09

Compus Compus de referinţă LC50 >1.20E- 07 >1.20E- 07 4.90E- 09 1.20E- 08 GI50 10- S 2.05E- 08 1.14E- 08 4.79E- 09 7.64E- 09 TGI 3.08E- 08 1.25E- 08 8.44E- 09 1.25·E- 08 LC50 7.53E- 08 >1.14E- 06 1.60E- 08 2.39E- 08 GI50 11- S 8.45E- 09 3.41E- 09 2.27E- 09 3.28E- 09 TGI 2.65E- 08 >1.26E- 07 3.41E- 09 4.54E- 09 LC50 >1.26E- 07 >1.26E- 07 6.43E- 09 8.07E- 09 GI50 4-S 1.27E- 09 1.27E- 09 1.22E- 09 1.78E- 09 8.08E- 10 3.58E- 10 C 2.73E- 08 2.08E- 08 2.60E- 08 3.64E- 08 TGI 1.40E- 09 1.40E- 09 2.55E- 09 2.29E- 09 6.63E- 08 2.34E- 08 5.46E- 08 4.42E- 08 LC50 >1.27E- 07 >1.27E- 07 6.50E- 09 3.44E- 09 >1.30E- 07 >1.30E- 07 >1.30E- 07 6.50E- 08 GI50 4a- S 3.99E- 09 3.14E- 09 3.39E- 09 3.02E- 09 TGI 6.17E- 09 3.39E- 09 5.44E- 09 3.27E- 09 LC50 >1.21E- 07 >1.21E- 07 1.00E- 08 3.51E- 09 Compus Compus de referinţă GI50 12- S 2.04E- 08 4.85E- 09 5.23E- 09 3.44E- 09 TGI 5.61E- 08 8.42E- 09 8.42E- 09 5.49E- 09 LC50 >1.28E- 07 >1.28E- 07 1.53E- 08 1.21E- 08 GI50 13- S 1.15E- 08 1.15E- 08 1.15E- 08 1.96E- 08 TGI 1.61E- 08 1.27E- 08 1.27E- 08 2.88E- 08 LC50 2.42E- 08 >1.15E- 06 1.38E- 08 4.61E- 08

Tabel 2. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 3-R R1 = CN, R4 = -CH2OH 10-R R1 = CN, R4 = -CH2NHAlloc 11-R R1 = CN, R4 = -CH2NH2 B R1 = CN 4-R R1 = OH, R4 = -CH2OH D R1 = OH

Compus Compus de referinţă 12-R R1 = OH, R4 = -CH2NH2 13-R R1 = OH, R4 = -CH2NHAlloc A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 GI50 3- R 4.03E- 10 2.77E- 10 2.77E- 10 3.90E- 10 B 2.06E- 08 8.48E- 09 9.00E- 09 1.93E- 08 TGI 5.79E- 10 >1.26E- 07 5.04E- 10 6.05E- 10 2.19E- 08 9.13E- 09 1.67E- 08 2.06E- 08 LC50 >1.26E- 07 >1.26E- 07 1.25E- 09 >1.26E- 07 >1.29E- 07 >1.29E- 07 3.47E- 08 2.31E- 08 GI50 10- R 3.76E- 09 3.08E- 09 2.85E- 09 2.62E- 09 TGI 5.93E- 09 >1.14E- 07 4.33E- 09 3.88E- 09 LC50 >1.14E- 07 >1.14E- 07 7.18E- 09 6.61E- 09 GI50 11- R 1.77E- 09 1.39E- 09 1.01E- 09 1.39E- 09 TGI 4.54E- 09 >1.26E- 07 1.51E- 09 1.89E- 09 LC50 >1.26E- 07 >1.26E- 07 2.65E- 09 >1.26E- 07 GI50 4- R 1.27E- 09 1.26E- 09 1.27E- 09 4.59E- 10 D 1.25E- 08 1.03E- 08 9.88E- 09 2.08E- 08 TGI 1.40E- 1.40E- 1.40E- 8.54E- 2.86E- 2.34E- 1.95E- 2.21E- Compus Compus de referinţă 09 09 09 10 08 08 08 08 LC50 > 1.27E07 >1.27E- 07 1.53E- 09 2.55E- 09 >1.30E- 07 >1.30E- 07 5.33E- 08 2.47E- 08 GI50 12- R 1.40E- 09 5.74E- 10 3.19E- 10 4.98E- 10 TGI 2.93E- 09 1.10E- 09 6.76E- 10 1.22E- 09 LC50 1.22E- 08 2.93E- 09 1.40E- 09 >1.28E- 07 GI50 13- R 7.26E- 09 6.91E- 09 4.95E- 09 2.88E- 09 TGI 7.72E- 09 7.60E- 09 7.95E- 09 3.11E- 09 LC50 >1.15E- 07 >1.15E- 07 1.38E- 08 3.46E- 09

Tabel 3. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 38-S R1 = CN, R4 = -CH2OH

Compus Compus de referinţă 45-S R1 = CN, R4 = -CH2NHAlloc 46-S R1 = CN, R4 = -CH2NH2 A R1 = CN 39-S R1 = OH, R4 = -CH2OH C R1 = OH 47-S R1 = OH, R4 = -CH2NH2 A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 PC-3 22Rv1 A549 HT29 MDA-MB- 231 PSN1 GI50 38- S 8.05E- 09 4.53E- 09 2.52E- 09 5.03E- 09 A 8.36E- 09 7.71E- 09 7.07E-09 1.29E- 08 TGI 8.55E- 09 7.05E- 09 4.28E- 09 8.18E- 09 8.87E- 09 8.36E- 09 9.38E-09 1.54E- 08 LC50 9.44E- 09 >1.26E- 07 7.80E- 09 1.51E- 08 >1.29E- 07 >1.29E- 07 1.41E-08 1.93E- 08 GI50 45- S 1.82E- 08 1.82E- 08 1.71E- 08 1.94E- 08 TGI 1.94E- 08 1.94E- 08 2.16E- 08 2.62E- 08 LC50 2.16E- 08 >1.14E- 07 2.96E- 08 3.64E- 08 GI50 46- S 8.19E- 09 2.77E- 09 3.65E- 09 3.15E- 09 TGI 2.14E- 08 6.17E- 09 6.80E- 09 4.79E- 09 LC50 >1.26E- >1.26E- 1.26E- 9.20E- Compus Compus de referinţă 07 07 08 09 GI50 39- S 4.84E- 09 3.94E- 09 3.44E- 09 8.02E- 09 2.78E- 09 4.81E- 10 C 2.73E- 08 2.08E- 08 2.60E-08 3.64E- 08 TGI 8.27E- 09 6.74E- 09 7.13E- 09 1.02E- 08 6.63E- 08 2.34E- 08 5.46E-08 4.42E- 08 LC50 1.65E- 08 >1.27E- 07 1.78E- 08 1.27E- 08 >1.30E- 07 >1.30E- 07 >1.30E-07 6.50E- 08 GI50 47- S 1.40E- 08 4.33E- 09 6.24E- 09 5.99E- 09 TGI 2.80E- 08 6.75E- 09 9.68E- 09 8.54E- 09 LC50 >1.27E- 07 >1.27E- 07 1.66E- 08 1.27E- 08

Tabel 4. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 38-R R1 = CN, R4 = -CH2OH 45-R R1 = CN, R4 = -CH2NHAlloc 46-R R1 = CN, R4 = -CH2NH2 B R1 = CN

Compus Compus de referinţă 39-R R1 = OH, R4 = -CH2OH D R1 = OH 47-R R1 = OH, R4 = -CH2NH2 A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 GI50 38- R 6.54E- 10 5.41E- 10 4.53E- 10 6.54E- 10 B 2.06E- 08 8.48E- 09 9.00E- 09 1.93E- 08 TGI 1.04E- 09 5.91E- 10 8.43E- 10 9.94E- 10 2.19E- 08 9.13E- 09 1.67E- 08 2.06E- 08 LC50 >1.26E- 07 >1.26E- 07 2.01E- 09 1.76E- 09 >1.29E- 07 >1.29E- 07 3.47E- 08 2.31E- 08 GI50 45- R 1.82E- 08 1.25E- 08 9.57E- 09 1.06E- 08 TGI 1.94E- 08 2.28E- 08 1.94E- 08 1.94E- 08 LC50 2.39E- 08 >1.14E- 07 4.33E- 08 3.76E- 08 GI50 46- R 1.51E- 09 1.21E- 09 1.23E- 09 9.95E- 10 TGI 2.77E- 09 1.39E- 09 1.39E- 09 1.51E- 09 LC50 >1.26E- 07 >1.26E- 07 1.51E- 09 2.65E- 09 GI50 39- R 2.67E- 10 2.93E- 10 2.04E- 10 3.65E- 10 D 1.25E- 08 1.03E- 08 9.88E- 09 2.08E- 08 TGI 4.33E- 6.24E- 5.98E- 5.73E- 2.86E- 2.34E- 1.95E- 2.21E- Compus Compus de referinţă 10 10 10 10 08 08 08 08 LC50 >1.27E- 07 >1.27E- 07 2.80E- 09 1.06E- 09 >1.30E- 07 >1.30E- 07 5.33E- 08 2.47E- 08 GI50 47- R 2.04E- 09 8.03E- 10 5.99E- 10 1.40E- 09 TGI 3.82E- 09 1.40E- 09 1.17E- 09 2.04E- 09 LC50 1.40E- 08 >1.27E- 07 2.55E- 09 3.31E- 09

Tabel 5. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 18-S R1 = CN, R4 = -CH2OH 25-S R1 = CN, R4 = -CH2NHAlloc E R1 = CN 26-S R1 = CN, R4 = -CH2NH2 PM01183 R1 = OH 19-S R1 = OH, R4 = -CH2OH 27-S R1 = OH, R4 = -CH2NH2 A549 HT29 MDA- PSN1 A549 HT29 MDA- PSN1

Compus Compus de referinţă MB- 231 MB- 231 GI50 18- S 1.70E- 09 1.21E- 09 1.21E- 09 9.59E- 10 E 3.28E- 09 3.15E- 09 2.27E- 09 2.77E- 09 TGI 3.03E- 09 1.34E- 09 1.34E- 09 1.34E- 09 3.40E- 09 3.40E- 09 3.78E- 09 4.53E- 09 LC50 >1.21E- 07 >1.21E- 07 1.58E- 09 >1.21E- 07 4.41E- 09 >1.26E- 07 7.43E- 09 8.94E- 09 GI50 25- S 7.17E- 09 7.17E- 09 5.84E- 09 6.84E- 09 TGI 7.61E- 09 7.72E- 09 9.04E- 09 9.26E- 09 LC50 >1.10E- 07 >1.10E- 07 1.54E- 08 1.43E- 08 GI50 26- S 1.12E- 08 2.79E- 09 1.34E- 09 3.04E- 09 TGI 2.19E- 08 3.16E- 09 1.94E- 09 3.28E- 09 LC50 >1.22E- 07 >1.22E- 07 3.89E- 09 3.52E- 09 GI50 19- S 3.07E- 09 1.35E- 09 1.96E- 09 2.95E- 09 PM 01183 3.31E- 09 1.91E- 09 2.29E- 09 3.19E- 09 TGI 3.31E- 09 1.60E- 09 3.31E- 09 3.19E- 09 3.57E- 09 4.46E- 09 3.95E- 09 3.95E- 09 LC50 >1.23E- 07 >1.23E- 07 1.10E- 08 >1.23E- 07 >1.27E- 07 >1.27E- 07 1.02E- 08 5.73E- 09 Compus Compus de referinţă GI50 27- S 6.02E- 09 1.23E- 09 1.19E- 09 1.97E- 09 TGI 1.12E- 08 1.35E- 09 1.23E- 09 2.83E- 09 LC50 >1.23E- 07 >1.23E- 07 1.35E- 09 4.55E- 09

Tabel 6. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 18-R R1 = CN, R4 = -CH2OH 25-R R1 = CN, R4 = -CH2NHAlloc E R1 = CN 26-R R1 = CN, R4 = -CH2NH2 PM01183 R1 = OH 19-R R1 = OH, R4 = -CH2OH 27-R R1 = OH, R4 = -CH2NH2 A549 HT29 MDA- MB-231 PSN1 A549 HT29 MDA-MB- 231 PSN1 GI50 18- R 1.21E- 09 1.21E- 09 1.21E- 09 5.70E- 10 E 3.28E- 09 3.15E- 09 2.27E-09 2.77E- 09 TGI 1.34E- 1.34E- 1.34E- 1.06E- 3.40E- 3.40E- 3.78E-09 4.53E-

Compus Compus de referinţă 09 09 09 09 09 09 09 LC50 >1.21E- 07 >1.21E- 07 1.46E- 09 >1.21E- 07 4.41E- 09 >1.26E- 07 7.43E-09 8.94E- 09 GI50 25- R 1.32E- 09 1.54E- 09 1.21E- 09 1.21E- 09 TGI 2.43E- 09 2.76E- 09 2.54E- 09 2.32E- 09 LC50 9.92E- 09 >1.10E- 07 8.38E- 09 6.73E- 09 GI50 26- R 1.94E- 09 7.29E- 10 1.17E- 09 9.72E- 10 TGI 3.40E- 09 1.58E- 09 1.22E- 09 1.70E- 09 LC50 >1.22E- 07 >1.22E- 07 1.46E- 09 3.52E- 09 GI50 19- R 1.47E- 09 1.72E- 09 1.23E- 09 1.23E- 09 PM0 1183 3.31E- 09 1.91E- 09 2.29E-09 3.19E- 09 TGI 3.56E- 09 1.72E- 09 1.35E- 09 1.35E- 09 3.57E- 09 4.46E- 09 3.95E-09 3.95E- 09 LC50 >1.23E- 07 >1.23E- 07 >1.23E- 07 1.47E- 09 >1.27E- 07 >1.27E- 07 1.02E-08 5.73E- 09 GI50 27- R 2.09E- 09 5.04E- 10 3.07E- 10 6.39E- 10 TGI 3.93E- 09 5.53E- 10 5.41E- 10 1.17E- 09 LC50 1.01E- >1.23E- 8.60E- 2.46E- Compus Compus de referinţă 08 07 10 09

Tabel 7. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 31 R1 = CN, R3 = H F R1 = CN, R3 = H 32 R1 = OH, R3 = H ET-736 R1 = OH, R3 = H 34 R1 = CN, R3 = OMe E R1 = CN, R3 = OMe 35 R1 = OH, R3 = OMe PM01183 R1 = OH, R3 = OMe A549 HT29 MDA-MB- 231 PSN1 A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 GI50 31 1.96E- 08 1.05E- 08 8.89E-09 6.80E- 09 F 3.80E- 08 2.09E- 08 1.96E- 08 3.27E- 08 TGI 2.09E- 08 1.57E- 08 1.70E-08 1.57E- 08 7.20E- 08 2.36E- 08 3.40E- 08 6.02E- 08 LC50 2.35E- 08 > 1.31E07 3.53E-08 4.31E- 08 > 1.31E07 > 1.31E07 7.33E- 08 1.07E- 07 Compus Compus de referinţă GI50 32 6.88E- 09 6.88E- 09 4.76E-09 6.09E- 09 ET-736 2.25E- 08 2.12E- 08 2.12E- 08 3.97E- 08 TGI >1.32E- 08 >1.32E- 08 1.05E-08 8.34E- 09 4.77E- 08 2.25E- 08 2.52E- 08 5.96E- 08 LC50 >1.32E- 08 >1.32E- 08 >1.32E-08 1.20E- 08 >1.32E- 07 >1.32E- 07 4.77E- 08 1.02E- 07 GI50 34 5.91E- 08 5.41E- 08 4.53E-08 5.41E- 08 E 3.28E- 09 3.15E- 09 2.27E- 09 2.77E- 09 TGI 8.05E- 08 8.55E- 08 7.67E-08 5.91E- 08 3.40E- 09 3.40E- 09 3.78E- 09 4.53E- 09 LC50 >1.26E- 07 1.25E- 07 1.12E-07 >1.26E- 07 4.41E- 09 >1.26E- 07 7.43E- 09 8.94E- 09 GI50 35 8.14E- 09 7.89E- 09 4.58E-09 6.24E- 09 PM01183 3.31E- 09 1.91E- 09 2.29E- 09 3.19E- 09 TGI 8.78E- 09 8.65E- 09 8.27E-09 9.03E- 09 3.57E- 09 4.46E- 09 3.95E- 09 3.95E- 09 LC50 >1.27E- 07 >1.27E- 07 1.65E-08 1.40E- 08 >1.27E- 07 >1.27E- 07 1.02E- 08 5.73E- 09

Tabel 8. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 3-S R1 = CN, R3 = H 14-S R1 = CN, R3 = H 4-S R1 = OH, R3 = H 15-S R1 = OH, R3 = H 18-S R1 = CN, R3 = OMe 28-S R1 = CN, R3 = OMe 19-S R1 = OH, R3 = OMe 29-S R1 = OH, R3 = OMe A549 HT29 MDA- MB- 231 PSN1 A549 HT29 MDA- MB-231 PSN1 GI50 3-S 4.03E- 10 2.77E- 10 4.91E- 10 9.95E- 10 14- S >1.24E- 07 1.21E- 07 5.45E- 08 >1.24E- 07 TGI 6.17E- 10 >1.26E- 07 5.29E- 10 1.64E- 09 >1.24E- 07 >1.24E- 07 1.13E- 07 >1.24E- 07 LC50 >1.26E- 07 >1.26E- 07 6.17E- 10 >1.26E- 07 >1.24E- 07 >1.24E- 07 >1.24E- 07 >1.24E- 07 GI50 4-S 1.27E- 09 1.27E- 09 1.22E- 09 1.78E- 09 15- S >1.25E- 06 3.00E- 07 1.63E- 07 2.38E- 07 TGI 1.40E- 09 1.40E- 09 2.55E- 09 2.29E- 09 >1.25E- 06 5.13E- 07 2.13E- 07 4.63E- 07 LC50 >1.27E- >1.27E- 6.50E- 3.44E- >1.25E- 9.14E- 2.75E- 8.39E- Compus Compus de referinţă 07 07 09 09 06 07 07 07 GI50 18- S 1.70E- 09 1.21E- 09 1.21E- 09 9.59E- 10 28- S 4.89E- 07 2.51E- 07 1.67E- 07 2.51E- 07 TGI 3.03E- 09 1.34E- 09 1.34E- 09 1.34E- 09 >1.19E- 06 3.46E- 07 2.51E- 07 3.94E- 07 LC50 >1.21E- 07 >1.21E- 07 1.58E- 09 >1.21E- 07 >1.19E- 06 6.33E- 07 3.94E- 07 6.92E- 07 GI50 19- S 3.07E- 09 1.35E- 09 1.96E- 09 2.95E- 09 29- S 6.15E- 07 3.62E- 07 2.17E- 07 3.86E- 07 TGI 3.31E- 09 1.60E- 09 3.31E- 09 3.19E- 09 >1.21E- 06 5.31E- 07 3.74E- 07 5.07E- 07 LC50 >1.23E- 07 >1.23E- 07 1.10E- 08 >1.23E- 07 >1.21E- 06 8.32E- 07 6.88E- 07 6.88E- 07

Tabel 9. Activitate biologică (Molar)

Compus Compus de referinţă 18-R R1 = CN 28-R R1 = CN 19-R R1 = OH 29-R R1 = OH A549 HT29 MDA- PSN1 A549 HT29 MDA- PSN1 Compus Compus de referinţă MB-231 MB- 231 GI50 18- R 1.21E- 09 1.21E- 09 1.21E- 09 5.71E- 10 28- R 1.67E- 07 3.10E- 08 1.91E- 08 2.15E- 08 TGI 1.34E- 09 1.34E- 09 1.34E- 09 1.06E- 09 3.58E- 07 3.34E- 08 3.22E- 08 3.58E- 08 LC50 >1.21E- 07 >1.21E- 07 1.46E- 09 >1.21E- 07 >1.19E- 06 >1.19E- 06 9.19E- 08 6.68E- 08 GI50 19- R 1.47E- 09 1.72E- 09 1.23E- 09 1.23E- 09 29- R 9.05E- 08 3.02E- 08 1.69E- 08 3.02E- 08 TGI 3.56E- 09 1.72E- 09 1.35E- 09 1.35E- 09 1.93E- 07 3.26E- 08 2.77E- 08 3.14E- 08 LC50 >1.23E- 07 >1.23E- 07 >1.23E- 07 1.47E- 09 >1.21E- 06 >1.21E- 06 1.57E- 07 3.50E- 08

Compuşii prezentei invenţii s-au dovedit a avea potenţă mărită in vitro, оn comparaţie cu compuşii de referinţă. Aceasta demonstrează că compuşii conform prezentei invenţii prezintă o citoxiticitate mărită faţă de celulele canceroase şi sunt utili оn tratamentul cancerului.

Exemplul 28. Determinarea MTD şi MTMD

Pentru toate experimentele au fost utilizaţi şoareci femele CD-1 sau Athymic NudeFox1 nu/nu (Envigo). Animalele (N=10/cuşcă) au fost introduse în cuşti ventilate individual

(Sealsafe Plus®, Techniplast S.P.A.), pe parcursul unui ciclu lumină-întuneric de 12 ore la 2123 °C şi 40-60% umiditate. Şoarecilor li s-a permis accesul liber la dieta standard iradiată pentru rozătoare (Tecklad 2914C) şi apă sterilizată. Animalele au fost aclimatizate timp de cinci zile înainte de a fi identificate individual prin tatuaj. Protocoalele pentru animale au fost revizuite şi aprobate conform comitetelor regionale de оngrijire şi utilizare a animalelor instituţionale.

Şoarecii au fost alocaţi aleatoriu оn grupuri experimentale şi administraţi intravenos, o dată pentru determinarea MTD (Doza maximă tolerată) sau o administrare pe săptămână timp de trei săptămâni consecutive, pentru studiul de determinare MTMD (Doza maximă tolerată). Animalelor li s-au administrat formulare albă sau compus dizolvat în formula experimentală la diferite concentraţii. Volumul administrat a fost întotdeauna de 10 ml/kg. Odată administrate, animalele au fost monitorizate pentru semne clinice de toxicitate sistemică, modificări ale greutăţii corporale şi mortalitate până la 14 zile după administrare. \tabRezultatele MTD sunt оnsumate оn Tabelul 10

Tabel 10

Compus Traseu Program / Doze (mg/Kg) MTD (mg/kg) 4-S (referinţă) iv / SD 0,00, 0,25, 0,50, 1,00, 1,50, 2,00, 2,50, 5,00 1,0 4-R (referinţă) 0,25 19-S (referinţă) 0,5 19-R (referinţă) 0,00, 0,10, 0,15, 0,25, 0,50, 1,00, 1,50, 2,00, 2,50, 5,00 0,15 Compus C (referinţă) 0,00, 0,25, 0,50, 1,00, 1,50, 2,00, 2,50, 3,00, 4,00, 5,00 3,0 Compus D (referinţă) 0,00, 0,25, 0,50, 1,00, 2,00, 4,00, 6,00, 8,00 0,5 32 (referinţă) 0,00, 0,25, 0,50, 1,00, 1,50, 2,00, 2,50, 5,00 0,5

Rezultatele MTMD sunt rezumate оn Tabelul 11

Tabel 11

Compus Traseu / Program Doze (mg/Kg) MTMD (mg/kg) 4-S (referinţă) iv / Q7dx3 0,00, 0,50, 0,75, 1,00, 1,25 1,25 4-R (referinţă) 0,00, 0,15, 0,20, 0,25, 0,30 0,30 12-S 0,00, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75, 1,00, 1,25, 1,50, 2,00, 2,50, 5,00 0,25 12-R 0,00, 0,010, 0,025, 0,050, 0,075, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75, 1,00, 1,25, 1,50, 2,00, 2,50, 5,00 0,05 19-S (referinţă) 0,00, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75 0,75 19-R (referinţă) 0,00, 0,025, 0,075, 0,10, 0,15 0,15 Compus C (referinţă) 0,0, 1,0, 1,5, 2,0, 3,0, 4,0 3,0 Compus D (referinţă) 0,00, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75 0,5 32 (referinţă) 0,00, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75 0,5 35 (referinţă) 0,00, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75 0,25 39-S (referinţă) 0,00, 0,01, 0,025, 0,05, 0,075, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75, 1,00, 1,25, 1,50, 2,00, 2,50, 5,00 1,25 47-R 0,00, 0,01, 0,025, 0,05, 0,075, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75, 1,00, 1,25, 1,50, 2,00, 2,50, 5,00 0,1 ET-736 (referinţă) 0,00, 0,10, 0,25, 0,50, 0,75 0,5 PM01183 (referinţă) 0,00, 0,14, 0,18 0,18 iv, intravenos Q7dx3, trei doze cumulate administrate săptămânal.

Exemple 29-40. Xenogrefe in vivo Au fost utilizaţi şoareci nu/nu femele atimici (Harlan Laboratories Models, S.L. Barcelona, Spania sau Envigo, Spania) pentru toate experimentele. Animalele au fost introduse оn cuşti ventilate individual Sealsafe® Plus, Techniplast S.P.A.), până la zece pe cuşcă pe un ciclu de 12 ore lumină-întuneric la 21-23 °C şi 40-60 % umiditate. Şoarecii au avut acces liber la dieta standard iradiată pentru rozătoare (Tecklad 2914C) şi apă sterilizată. Animalele au fost aclimatizate timp de cel puţin 5 zile оnainte de implantarea tumorii cu o suspensie de celule tumorale. LINII CELULARE

Denumire Nr. ATCC Nr ECCC* Specie Ţesut Caracteristici HT1080 CCL-121 - uman conjunctiv Fibrosarcom MDA-MB-231 HTB-26 - uman sanului Adenocarcinom mamar H460 HTB-177 - uman plămân, revărsat pleural NSCLC A2780 - 93112519 uman ovarian Carcinom ovarian HGC27 - 94042256 uman gastric Carcinom gastric H526 CRL-5811 - uman plămâni SCLC H82 HTB-175 - uman plămâni SCLC PC3 CLR-1435 - uman prostată; derivat din situs metastatic: os Adenocarcinom prostată de DU145 HTB-81 uman prostată; derivat din situs metastatic: Carcinom de prostată Denumire Nr. ATCC Nr ECCC* Specie Ţesut Caracteristici creier 22Rv1 CRL-2505 uman prostată Carcinom de prostată * Colecţia europeană de culturi celulare

Celulele HT1080 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5% CO2 оn Minimum Essential Medium Eagle (MEME) (Sigma-Aldrich, Co). Fiecare animal a fost implantat ortotopic оn muşchiul gastroecnemian printr-o injecţie intramusculară folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc la vârsta de 4-6 săptămâni, cu 10×106 Celule HT1080, suspendate în mediu fără ser, fără antibiotice.

Celulele MDA-MB-231 au fost menţinute in vitro la 37°C cu 5% CO2 în Dulbecco's Modified Eagle's Medium (Sigma-Aldrich, Co). Celulele de cultură au fost trecute la fiecare 3 până la 5 zile la atingerea confluenţei. Fiecare animal a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 7,5×106 celule MDA-MB-231 suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice.

Celulele H460 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5% CO2 în mediu Dulbecco's Modified Eagle's (Sigma-Aldrich, Co). Celulele de cultură au fost trecute la fiecare 3 până la 5 zile după atingerea confluenţei. Fiecare animal a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 5×106 celule H460 suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice.

Celulele A2780 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5% CO2 în RPMI-1640 (SigmaAldrich, Co). Celulele de cultură au fost trecute la fiecare 3 până la 5 zile după atingerea confluenţei. Fiecare animal a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 10×106 celule A2780 suspendate оn 0,05 ml de soluţie constвnd din 50% Matrigel® (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice.

Celulele HGC27 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5% CO2 în mediu Dulbecco modificat Iscove (Sigma Aldrich, Co). Celulele de cultură au fost trecute la fiecare 3 până la 5 zile la atingerea confluenţei. Fiecare animal a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 5×106 celule HGC-27 suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® (Corning Incorporated Life Sciences), 50% mediu fără ser sau antibiotice.

Celulele H526 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5% CO2 în mediu RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, Co). Celulele H526 au fost crescute sub formă de suspensie şi menţinute prin adăugarea de mediu proaspăt, pe măsură ce densitatea celulară creşte, la fiecare 2 până la 3 zile. În fiecare săptămână, cultura a fost restabilită prin centrifugarea suspensiei cu resuspensie ulterioară în mediu proaspăt la o concentraţie de 1 x 105 celule/ml. Fiecare animal a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 5×106 celule H526 suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice.

Celulele H82 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5% CO2 în mediu RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, Co). Celulele H82 au fost crescute sub formă de suspensie şi menţinute prin adăugarea de mediu proaspăt, pe măsură ce densitatea celulară creşte, la fiecare 2 până la 3 zile. În fiecare săptămână, cultura a fost restabilită prin centrifugarea suspensiei cu resuspensie ulterioară în mediu proaspăt, la o concentraţie de 1 x 105 celule/ml. Animalele au fost implantate subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 5Ч106 celule H82, suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice.

Celulele PC3 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5 % CO2 оn mediu RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, Co). Celulele de cultură au fost trecute la fiecare 3 până la 5 zile la atingerea confluenţei. Fiecare şoarece femelă atimic a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 3×106 celule PC3 suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® Matrix (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice. În acest model, în loc de masculi, au fost folosite animale femele, deoarece creşterea PC-3 nu este dependentă de hormoni.

Celulele DU-145 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5 % CO2 în mediu RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, Co). Celulele de cultură au fost trecute la fiecare 3 până la 5 zile la atingerea confluenţei. Fiecare şoarece mascul atimic a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 5×106 Celule DU-145 suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® Matrix (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice.

Celulele 22Rv1 au fost menţinute in vitro la 37 °C cu 5 % CO2 în mediu RPMI-1640 (Sigma-Aldrich, Co). Celulele de cultură au fost trecute la fiecare 3 până la 5 zile la atingerea confluenţei. Fiecare şoarece mascul atimic a fost implantat subcutanat (pe flancul drept folosind un ac 26G şi o seringă de 1 cc) la vârsta de 4-6 săptămâni cu 5×106 celule 22Rv1 suspendate оn 0,05 ml dintr-o soluţie constвnd din 50% Matrigel® Matrix (Corning Incorporated Life Sciences) şi mediu 50% fără ser sau antibiotice.

Tolerabilitatea tratamentului a fost evaluată prin monitorizarea evoluţiei greutăţii corporale, a semnelor clinice de toxicitate sistemică, precum şi a dovezilor de afectare locală la locul injectării.

În studiile de xenogrefă cu linie celulară HT1080:

• Măsurătorile diametrului total (tumoră + picior) au fost determinate folosind un şubler digital (Fowler Sylvac, S235PAT). Acest diametru total şi greutăţile corporale ale animalelor au fost măsurate de 2-3 ori pe săptămână începând din prima zi de tratament (ziua 0). • Atunci cвnd diametrul total a atins o lungime de aproximativ 7,0-8,0 mm, şoarecii au fost alocaţi aleatoriu оn grupurile de tratament şi cele martor (N = 8-10/grup) оn funcţie de greutatea corporală şi măsurătorile tumorii, folosind software NewLab Oncology (versiunea 2.25.06.00). • Pentru evaluarea eficacităţii antitumorale a fost utilizată comparaţia dintre diametrul total median (tumoră + picior) în grupurile de tratament cu diametrul total median (tumoră + picior) în grupul de control. • Animalele au fost eutanasiate cвnd diametrul total al picioarelor a ajuns la circa 18 mm. În studiile de xenogrefă cu alte linii celulare: • Volumul tumorii a fost calculat folosind ecuaţia (a·b2)/2, оn care a: lungimea (diametrul cel mai lung) şi b: lăţimea (diametrul cel mai scurt) au fost măsurate în mm utilizând şublerul digital (Fowler Sylvac, S235PAT). Dimensiunile tumorii şi greutăţile corporale au fost înregistrate de 2-3 ori pe săptămână începând din prima zi de tratament. • Cвnd tumorile au ajuns la circa 150-250 mm3, animalele purtătoare de tumori (N = 810/grup) au fost alocate aleatoriu în grupurile de tratament, pe baza greutăţii corporale şi a măsurătorilor tumorii utilizând NewLab Oncology Software (versiunea 2.25.06.00). • Pentru evaluarea eficacităţii antitumorale a fost utilizată comparaţia dintre volumul tumoral median al grupurilor tratate şi al grupului de control. • Animalele au fost eutanasiate cвnd tumorile lor au ajuns la circa 2000 mm3 şi/sau a fost observată necroză severă. Tratamentele care produc >20% letalitate şi/sau 20% pierdere netă în greutate corporală au fost considerate toxice. Tabelele şi figurile însumează datele obţinute din grupuri experimentale complete, adică acele grupuri care păstrează numărul iniţial de animale, n = 8-10. Totuşi, odată ce primul animal este sacrificat din cauza unei lungimi a tumorii > 18 mm sau a unei dimensiuni a tumorii > 2000 mm3, grupul experimental va fi considerat incomplet. Prin urmare, datele generate ulterior zilei de sacrificiu şi ulterior nu vor fi prezentate (adică nici în tabele, nici în figuri).

Exemplul 29. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-S (referinţă) şi 12-S în mai multe modele de xenogrefă

4-S (de referinţă), 12-S şi compusul C (de referinţă) au fost furnizate sub formă de flacoane liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Dozele administrate de 4-S (de referinţă), 12-S şi compus C (de referinţă) au fost 1,25 mg/kg, 0,25 mg/kg şi, respectiv, 3,0 mg/kg.

A fost furnizat placebo sub formă de turtă liofilizată cu conţinut de 100 mg zaharoză + fosfat diacid de potasiu 6,8 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5 care a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie.

Оn aceste experimente, 4-S (de referinţă), 12-S şi Compus C (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos o dată pe săptămână timp de 3 săptămâni consecutive, în Zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil.

Exemplul 29a. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-S (de referinţă) şi 12-S оn xenogrefe de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a lui 4-S (de referinţă) şi 12-S cu activitate antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost linia celulară HT1080,

Tabelul 12 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă), 4-S (de referinţă) şi 12-S. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 1.

Tabel 12

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor Compus C 4-S 12-S 0,0 7,5 7,5 7,5 7,5 2,0 9,4 8,8 7,7 8,2 5,0 11,4 9,0 8,3 8,6 7,0 12,1 9,6 8,8 9,5 9,0 13,2 10,2 8,4 100 12,0 14,5 10,2 8,4 11,2 14,0 15,2 11,2 9,6 11,7 16,0 15,9 12,4 10,0 12,7 19,0 18,0 13,3 10,4 13,5 21,0 15,2 12,1 14,4 23,0 18,0 12,7 16,5 27,0 13,5 15,2 30,0 15,6 16,4 33,0 18,0

Exemplul 29b. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-S (de referinţă) şi 12-S оn xenogrefele de sвn uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a lui 4-S (de referinţă) şi 12-S cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 13 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoareci trataţi cu placebo, compus C (de referinţă), 4-S (de referinţă) şi 12-S. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 2.

Tabel 13

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 0,0 149,4 149,4 150,6 150,2 2,0 240,0 217,1 197,3 229,9 5,0 325,1 281,3 250,9 290,5 7,0 407,8 338,6 265,0 398,2 9,0 514,8 385,1 272,5 508,9 12,0 648,1 400,4 270,6 602,5 14,0 799,0 436,9 281,3 751,0 16,0 1002,5 585,7 293,6 977,7 19,0 1233,9 774,7 322,1 1252,6 21,0 1539,1 965,9 324,4 1560,7 23,0 2006,5 1215,2 326,6 2005,9 26,0 2027,7 1503,2 398,8 2066,2 28,0 1785,3 501,8 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 30,0 2037,1 654,8 33,0 856,7 35,0 1147,1 37,0 1635,9

Exemplul 29c. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-S (de referinţă) şi 12-S оn xenogrefele tumorale pulmonare umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 4-S (de referinţă) şi 12-S cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea a trei modele diferite de xenogrefă de cancer pulmonar uman. Aceste modele corespund cancerului pulmonar fără celule mici (linia celulară H-460) şi cancerului pulmonar cu celule mici (liniile celulare H526 şi H82).

Tabelul 14 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă), 4-S (de referinţă) şi 12-S. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 3.

Tabel 14

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 0,0 187,4 186,1 185,9 186,0 2,0 577,5 395,4 310,9 460,5 5,0 1352,0 665,9 634,6 922,4 7,0 1642,9 929,5 959,1 1252,1 9,0 2025,0 1063,7 1064,9 1409,4 12,0 1436,5 1421,0 1531,7 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 14,0 2025,0 1845,5 2025,0 16,0 2025,0 2025,0

Tabelul 15 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H526 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă), 4-S (de referinţă) şi 12-S. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 4.

Tabel 15

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 0,0 217,2 217,9 211,8 212,7 2,0 410,7 262,4 279,0 412,7 4,0 778,5 108,3 98,8 637,9 7,0 1083,2 129,8 56,7 968,5 9,0 1371,0 85,9 62,5 1250,3 11,0 1782,0 52,3 32,0 1568,0 14,0 2025,0 54,1 18,0 2025,0 16,0 47,3 32,0 21,0 4,0 4,0 28,0 4,0 4,0 35,0 4,0 4,0 42,0 62,5 4,0 49,0 53,5 4,0

Tabelul 16 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H82 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă), 4-S (de referinţă) şi 12-S. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 5.

Tabel 16

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 0,0 171,6 170,5 168,3 174,0 2,0 439,4 265,3 215,2 360,1 5,0 1024,7 488,7 253,6 899,7 7,0 1422,0 760,0 341,4 1398,6 9,0 1923,8 899,5 349,4 1847,6 12,0 2025,0 1038,5 436,4 2089,7 14,0 1213,4 516,0 16,0 1256,4 521,8 19,0 1741,5 560,9 21,0 1878,8 627,7 23,0 2057,0 690,9 26,0 953,4 28,0 847,1 30,0 1067,5 33,0 1200,6 35,0 1257,7 37,0 1497,7 41,0 2014,2

Exemplul 29d. Studii in vivo pentru a determina efectul compuşilor 4-S(de referinţă) şi 12-S оn xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 4-S (de referinţă) şi 12-S cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 17 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, compus C (de referinţă), 4-S (de referinţă) şi 12-S. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 6.

Tabel 17

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 0,0 169,5 169,6 168,3 168,5 2,0 317,5 206,3 150,6 262,1 5,0 758,9 372,7 175,9 628,6 7,0 1351,9 607,6 317,7 976,3 9,0 1675,8 696,2 281,9 1387,5 12,0 2025,0 855,6 372,1 1666,0 14,0 1293,9 709,2 2025,0 16,0 1683,5 870,9 19,0 2137,5 1235,4 21,0 1453,3 23,0 1666,0 26,0 2025,0

Exemplul 29e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 4-S (de referinţă) şi 12-S оn xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 4-S (de referinţă) şi 12-S cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 18 raportează creşterea volumului tumorii la tumorile HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă), 4-S (de referinţă) şi 12-S. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 7.

Tabel 18

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus C 4-S 12-S 0,0 200,7 195,0 194,8 196,6 2,0 429,0 391,0 358,6 411,9 5,0 835,5 578,6 515,3 834,1 7,0 1256,5 708,2 589,2 1176,6 9,0 1602,2 937,7 779,4 1531,6 12,0 2040,7 1169,5 980,8 2030,2 14,0 1496,8 1153,3 16,0 1690,6 1346,2 19,0 2004,0 1643,4 21,0 2004,7

Exemplul de referinţă 30. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-R (de referinţă) în mai multe modele de xenogrefă

Compusul 4-R (de referinţă) a fost furnizat în flacoane liofilizate. Turta de 4-R (de referinţă) a fost reconstituită cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,5 mg/mL. Soluţia stoc de 4-R (de referinţă) a fost diluată în continuare în soluţie de dextroză 5% pentru injectare până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de 4-R (de referinţă) a fost de 0,30 mg/kg.

Compusul D (de referinţă) a fost furnizat în formă de flacoane cu substanţă medicamentoasă. Fiecare flacon a fost reconstituit întâi prin dizolvare totală în DMSO şi apoi cu adăugare de Kolliphor ELP (BASF)/etanol absolut (1:1, vol/vol) la o concentraţie de 0,8 mg/mL. S-au făcut diluţii suplimentare cu o soluţie tampon de lactat (pH = 4,0) până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de compus D (de referinţă) a fost de 0,5 mg/kg.

PM01183 (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,2 mg/ml. S-au făcut diluţii ulterioare cu soluţie injectabilă de glucoză 5% sau clorură de sodiu 0,9% la concentraţiile formulării de dozare. Doza administrată a fost de 0,18 mg/kg.

Placebo a fost furnizat sub formă de turtă liofilizată conţinând 100 mg zaharoză + fosfat diacid de potasiu 6,8 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5 care a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie.

Оn aceste experimente, 4-R (de referinţă), Compusul D (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos o dată pe săptămână timp de 3 săptămâni consecutive, în Zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil.

Exemplul de referinţă 30a. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-R (de referinţă) în xenogrefele de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 4-R (de referinţă) şi a Compusului D (de referinţă) cu activitate antitumorală a PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman. \tabModelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost linia celulară HT1080. Tabelul 19 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 4-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 8.

Tabel 19

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 4-R 0 8,1 8,1 8,1 2 11,2 9,7 8,6 Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 4-R 7 13,6 11,2 8,7 9 15,2 12,3 9,0 14 16,9 14,6 9,3 18 18,1 15,6 10,3 21 15,1 11,5 23 16,3 13,3 25 18,0 15,8 28 18,0

Tabelul 20 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi Compus D (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 9.

Tabel 20

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 Compus D 0 7,8 7,7 7,7 2 11,0 9,2 9,5 5 14,0 9,8 8,8 7 15,0 12,2 8,7 9 18,0 12,6 9,4 12 13,1 9,4 14 14,6 10,1 Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 Compus D 16 14,5 10,9 19 15,0 11,2 21 18,0 12,1 23 13,0 26 15,0 28 18,0

Exemplul de referinţă 30b. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-R (de referinţă) în xenogrefele de sân uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 4-R (de referinţă) şi Compusului D (de referinţă) cu activitatea antitumorală a PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman. \tabModelul de tumoră utilizat în acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231. Tabelul 21 raportează evaluarea volumului de tumoră mediu al tumorilor MDA-MB231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 4-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 10.

Tabel 21

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 4-R 0 130,6 129,3 129,3 7 230,7 189,0 151,9 14 422,2 230,1 164,1 21 687,7 305,9 136,8 28 1114,9 535,8 195,9 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 4-R 35 1555,3 819,7 294,2 42 2138,5 962,7 494,4 49 1301,3 843,8 52 2199,4 1042,5

Tabelul 22 raportează evaluarea volumului tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi Compus D (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 11.

Tabel 22

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 Compus D 0 129,2 129,6 129,5 7 284,0 185,9 147,9 14 564,3 290,8 186,4 21 686,0 337,9 136,5 28 1068,6 507,4 290,7 35 1359,4 796,1 431,7 42 1533,7 1062,5 770,1 49 1653,1 1416,3 970,0 56 2029,3 1673,3 1461,9 63 2060,8 1811,9 1526,4

Exemplul de referinţă 30c. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 4-R (de referinţă) în xenogrefele tumorale pulmonare umane.

Scopul acestui studiu a constat în a compara activitatea antitumorală a compusului 4R (de referinţă) şi Compusului D (de referinţă) cu activitatea antitumorală a PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer pulmonar uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară H-460.

Tabelul 23 raportează evaluarea volumului tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 4-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 12.

Tabel 23

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 4-R 0 156,2 156,7 155,5 2 290,9 227,3 223,3 7 1323,8 940,4 737,8 9 1816,9 1210,3 861,0 11 2120,9 1433,8 1102,9 14 1529,5 1638,0 16 2028,6

Tabelul 24 raportează evaluarea volumului tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi Compusul D (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 13.

Tabel 24

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 Compus D 0 205,2 204,5 203,4 2 508,0 418,1 367,3 7 1355,8 1004,0 792,0 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 Compus D 9 1682,1 1211,3 854,6 12 1938,6 1515,4 1026,7 14 2275,9 1633,3 1175,8 16 1723,9 1322,1 19 2112,3 1581,1 21 2409,4 1789,3 23 1966,5 26 2080,7

Exemplul de referinţă 30d. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 4-R (de referinţă) în xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 4-R

(de referinţă) şi Compusului D (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 25 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 4-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 14.

Tabel 25

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 4-R 0 172,8 175,5 175,2 5 896,6 671,2 611,4 7 1415,3 1048,9 1036,5 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 4-R 12 2205,3 2020,3 1992,0 14 2165,3

Tabelul 26 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi Compusul D (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 15.

Tabel 26

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 Compus D 0 189,4 191,2 190,1 3 588,5 454,5 319,6 5 1086,0 772,1 514,4 7 1428,6 1161,5 897,4 10 2077,1 1615,6 1239,8 12 2163,1 1703,0 1656,2 14 2029,3 1951,7 17 2121,7 19 2068,6

Exemplul de referinţă 30e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 4-R (de referinţă) în xenogrefele tumorale gastrice umane.

(de referinţă) şi Compusului D (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 27 raportează creşterea volumului tumorii a tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 4-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 16.

Tabel 27

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 4-R 0 174,6 171,6 173,0 2 319,1 317,5 266,8 5 632,5 404,0 370,7 7 1046,0 485,7 418,5 9 1359,1 604,6 627,8 12 1863,8 760,8 713,5 14 2115,0 789,6 837,0 16 719,5 867,1 19 895,9 1040,2 21 1051,3 1229,8 26 1901,2 1784,5 28 2028,9 2073,6

Tabelul 28 raportează creşterea volumului tumorii a tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi Compus D (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 17.

Tabel 28

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 Compus D 0 142,3 169,5 157,4 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 Compus D 2 286,5 372,4 327,6 5 527,7 474,1 439,6 7 821,4 571,8 418,7 9 1130,9 787,9 567,9 12 1547,8 951,1 537,0 14 1868,5 1064,4 654,6 16 1887,0 1346,1 672,4 19 2162,3 1691,8 843,0 21 1920,0 842,7 23 2011,4 963,7 26 2102,2 1203,3 28 1589,7 30 1777,6 33 2146,2

Exemplul 31. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 12-R în mai multe modele de xenogrefă.

Compusul 12-R a fost furnizat sub formă de fiole de liofilizare. Compus turtă de 12-R a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,5 mg/mL. Soluţia stoc 12-R a fost diluată în continuare în soluţie de dextroză 5% pentru injectare până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de 12-R a fost de 0,05 mg/kg.

Compusul D (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane cu substanţă medicamentoasă. Fiecare flacon a fost reconstituit mai întâi prin dizolvare totală în DMSO şi apoi cu adăugare de Kolliphor ELP (BASF)/etanol absolut (1:1, vol/vol) la o concentraţie de 0,8 mg/mL. S-au făcut diluţii suplimentare cu o soluţie tampon de lactat (pH = 4,0) până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de compus D (de referinţă) a fost de 0,5 mg/kg.

Placebo a fost furnizat sub formă de turtă liofilizată care conţine 100 mg zaharoză + fosfat diacid de potasiu 6,8 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5 care a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie.

Оn aceste experimente, 12-R, Compus D (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos o dată pe săptămână, timp de 3 săptămâni consecutive, în Zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil.

Exemplul 31a. Studii in vivo pentru a determina efectul lui 12-R оn xenogrefe de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 12-R cu activitatea antitumorală a Compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost linia celulară HT1080.

Tabelul 29 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 12-R. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 18.

Tabel 29

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor Compus D 12-R 0,0 7,5 7,5 7,5 2,0 9,4 8,2 8,9 5,0 11,4 7,5 8,8 7,0 12,1 7,4 9,5 9,0 13,2 8,1 9,5 12,0 14,5 7,9 11,0 14,0 15,2 7,7 11,7 16,0 15,9 8,8 12,9 Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor Compus D 12-R 19,0 18,0 10,2 13,5 21,0 11,2 15,5 23,0 12,2 18,0 27,0 13,2 30,0 14,6 33,0 16,3 35,0 18,0

Exemplul 31b. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 12-R оn xenogrefele de sвn uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 12-R cu activitatea antitumorală a Compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 30 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (referinţă) şi 12-R. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 19.

Tabel 30

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 0,0 149,4 149,6 149,8 2,0 240,0 217,2 223,0 5,0 325,1 284,5 296,1 7,0 407,8 310,0 378,3 9,0 514,8 325,5 472,7 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 12,0 648,1 268,4 609,9 14,0 799,0 237,7 782,5 16,0 1002,5 261,2 972,4 19,0 1233,9 251,3 1211,0 21,0 1539,1 219,9 1463,4 23,0 2006,5 221,8 1756,5 26,0 2027,7 245,5 2028,6 28,0 320,3 30,0 401,6 33,0 545,8 35,0 629,2 37,0 670,7 40,0 669,9 42,0 696,3 44,0 798,1 47,0 857,7

Exemplul 31c. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 12-R оn xenogrefele tumorale pulmonare umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 12-R cu activitatea antitumorală a Compusului D (de referinţă) prin utilizarea a trei modele diferite de xenogrefă de cancer pulmonar uman. Aceste modele corespund cancerului pulmonar fără celule mici (linia celulară H460 şi cancerului pulmonar cu celule mici (liniile celulare H526 şi H82).

Tabelul 31 raportează evaluarea volumului tumorilor H460 la şoareci trataţi cu placebo, Compus D (de referinţă) şi 12-R. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 20.

Tabel 31

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 0,0 187,4 187,2 187,0 2,0 577,5 329,7 410,7 5,0 1352,0 559,4 796,7 7,0 1642,9 756,5 1167,9 9,0 2025,0 971,9 1360,3 12,0 1370,9 1666,0 14,0 1626,8 2025,0 16,0 2025,0

Tabelul 32 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H526 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 12-R. Rezultatele sunt prezentate de asemenea оn Figura 21. Tabel 32

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 0,0 217,20 216,1 214,20 2,0 410,70 240,9 404,50 4,0 778,50 99,3 680,50 7,0 1083,20 56,7 995,20 9,0 1371,00 62,5 1290,50 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 11,0 1782,00 62,5 1568,00 14,0 2025,00 32,0 2025,00 16,0 4,0 21,0 4,0 28,0 4,0 35,0 4,0 42,0 4,0 49,0 4,0

Tabelul 33 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H82 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 12-R. Rezultatele sunt prezentate de asemenea оn Figura 22. Tabel 33

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 0,0 171,60 169,4 170,50 2,0 439,40 340,6 381,40 5,0 1024,70 443,3 793,20 7,0 1422,00 496,2 1187,20 9,0 1923,80 614,1 1699,30 12,0 2025,00 665,5 2125,60 14,0 1041,6 16,0 1151,2 19,0 1516,7 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 21,0 1748,0

Exemplul 31d. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 12-R оn xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 12-R cu activitatea antitumorală a Compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 34 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, Compus D (de referinţă) şi 12-R. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 23.

Tabel 34

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 0,0 169,5 168,8 169,6 2,0 317,5 225,7 302,8 5,0 758,9 256,6 786,5 7,0 1351,9 473,8 1113,3 9,0 1675,8 633,6 1490,6 12,0 2025,0 822,8 2025,00 14,0 1129,3 2025,00 16,0 1198,6 19,0 1649,6 21,0 2025,0

Exemplul 31e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 12-R оn xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 12-R cu activitatea antitumorală a Compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 35 raportează creşterea volumului tumorii la tumorile HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, Compus D (de referinţă) şi 12-R. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 24.

Tabel 35

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor Compus D 12-R 0,0 200,7 194,0 193,3 2,0 429,0 324,2 413,3 5,0 835,5 561,6 809,1 7,0 1256,5 504,2 1261,5 9,0 1602,2 584,2 1589,5 12,0 2040,7 767,7 2017,9 14,0 1056,8 2034,9 16,0 1440,2 19,0 1717,9 21,0 2043,4

Exemplul de referinţă 32. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-S (de referinţă) în mai multe modele de xenogrefă

Compusul 19-S (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane liofilizate. Turta de compus 19-S (de referinţă) a fost reconstituită cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,5 mg/mL. Soluţia stoc de 19-S (de referinţă) a fost diluată în continuare în soluţie de dextroză 5 % pentru injectare până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de 19-S (de referinţă) a fost de 0,75 mg/kg.

Compusul PM01183 (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,2 mg/ml. Soluţia stoc de PM01183 (de referinţă) a fost diluată în continuare în soluţie de glucoză 5% pentru injectare la concentraţiile formulării de dozare. Doza administrată a fost de 0,18 mg/kg.

Оn aceste experimente, compusul 19-S (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos o dată pe săptămână timp de 3 săptămâni consecutive, în Zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil.

Exemplul de referinţă 32a.Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-S (de referinţă) în xenogrefele de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 19-S (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară HT1080.

Оn Tabelul 36 se raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 25.

Tabel 36

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 19-S 0 8,4 8,4 8,2 2 10,9 9,8 8,4 5 14,8 9,7 7,8 Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 19-S 7 15,9 11,4 9,5 9 18,0 12,7 9,9 12 13,7 10,7 14 14,6 11,3 16 15,5 11,9 19 15,6 13,4 21 18,0 14,4 23 18,0

Exemplul de referinţă 32b. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-S (de referinţă) în xenogrefe de adenocarcinom mamar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 19-S (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 37 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 26.

Tabel 37

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-S 0 132,6 134,3 133,6 4 194,1 177,2 157,2 7 248,2 186,3 142,6 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-S 11 377,6 250,7 133,9 14 461,3 266,1 117,3 18 679,2 327,7 79,3 21 753,2 391,0 89,2 25 909,2 493,1 120,6 28 1090,7 627,3 144,4 32 1433,4 789,0 246,1 36 1887,5 1022,0 419,3 39 1785,2 1294,2 593,7 42 2081,5 1643,3 945,9 46 2137,5 1658,9 985,3 49 1938,0 1211,5 53 1324,3 56 1703,9 60 1793,3 63 1603,0 70 2324,2

Exemplul de referinţă 32c. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-S (de referinţă) în xenogrefele de cancer pulmonar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 19-S (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer pulmonar uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară H-460.

Tabelul 38 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H-460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 27.

Tabel 38

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-S 0 197,0 196,3 196,9 2 529,5 457,0 364,0 4 1057,4 861,5 624,9 7 1582,5 1280,2 966,5 9 2094,8 1424,9 1078,2 11 1969,9 1449,0 14 1761,5

Exemplul de referinţă 32d. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-S (de referinţă) în xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 19-S (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 39 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 28.

Tabel 39

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-S 0 163,4 163,6 164,4 2 287,1 235,5 187,9 4 568,7 463,2 205,4 7 1211,3 986,3 513,6 9 1633,7 1451,4 650,6 11 2047,8 2062 659,8 14 1236,2 18 1575,9 23 1895,7 25 2177,0

Exemplul de referinţă 32e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-S (de referinţă) în xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 19-S (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 40 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 29.

Tabel 40

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-S 0 178,3 177,6 181,5 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-S 2 409 395,6 404,6 5 907,4 572,4 600,3 7 1283,6 766,6 660,3 9 1664 950,7 787,5 14 2102,8 1199,4 864,4 16 1353,1 882,4 19 1294,3 925,2 21 1335,1 893,6 23 1320,3 874,4 26 1364,5 932,1 30 1671,9 1547,8 33 2009,2 2020,4

Exemplul de referinţă 33. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-R (de referinţă) în mai multe modele de xenogrefă

Compusul 19-R (de referinţă) a fost furnizat în formă de flacoane liofilizate. Turta de 19-R (de referinţă) a fost reconstituită cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,5 mg/mL. Soluţia stoc de 19-R (de referinţă) a fost diluată în continuare în soluţie de dextroză 5 % pentru injectare până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de 19-R (de referinţă) a fost de 0,15 mg/kg.

Compusul PM01183 (de referinţă) a fost furnizat în formă de flacoane de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,2 mg/ml. Soluţia stoc de PM01183 (de referinţă) a fost diluată în continuare în soluţie de glucoză 5% pentru injectare la concentraţiile formulării de dozare. Doza administrată a fost de 0,18 mg/kg.

Compusul placebo a fost furnizat în formă de turtă liofilizată care conţine 100 mg zaharoză + fosfat diacid de potasiu 6,8 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5 care a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie.

Оn aceste experimente, compusul 19-R (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos o dată pe săptămână, timp de 3 săptămâni consecutive, în Zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil.

Exemplul de referinţă 33a. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-R (de referinţă) în xenogrefele de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 19-R (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară HT1080.

Tabelul 41 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 30.

Tabel 41

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 19-R 0 8,4 8,4 8,3 2 10,9 9,8 9,4 5 14,8 9,7 8,0 7 15,9 11,4 7,2 9 18,0 12,7 7,8 12 13,7 7,8 14 14,6 8,4 16 15,5 8,2 19 15,6 11,3 Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 19-R 21 18,0 12,2 23 13,3 26 15,2 28 18,0

Exemplul de referinţă 33b. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-R (de referinţă) în xenogrefe de adenocarcinom mamar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 19-R (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 42 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 31.

Tabel 42

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-R 0 132,6 134,3 132,5 4 194,1 177,2 189,3 7 248,2 186,3 151,9 11 377,6 250,7 167,5 14 461,3 266,1 152,6 18 679,2 327,7 162,2 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-R 21 753,2 391,0 201,2 25 909,2 493,1 208,5 28 1090,7 627,3 274,8 32 1433,4 789,0 355,8 36 1887,5 1022,0 513,8 39 1785,2 1294,2 793,7 42 2081,5 1643,3 1012,2 46 2137,5 1658,9 1188,5 49 1938,0 1380,7 53 1568,0 56 1862,6 60 2129,4

Exemplul de referinţă 33c. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-R (de referinţă) în xenogrefele tumorale pulmonare umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 19-R (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer pulmonar uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară H-460.

Tabelul 43 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 32.

Tabel 43

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-R 0 197,0 196,3 196,8 2 529,5 457,0 418,7 4 1057,4 861,5 697,2 7 1582,5 1280,2 911,7 9 2094,8 1424,9 1111,5 11 1969,9 1281,3 14 1478,7 16 1594,0

Exemplul de referinţă 33d. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 19-R (de referinţă) în xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 19-R (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 44 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 33.

Tabel 44

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-R 0 163,4 163,6 162,8 2 287,1 236,5 212,9 4 568,7 463,2 368,5 7 1211,3 986,3 841,3 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-R 9 1633,7 1451,4 1138,9 11 2047,8 2062,0 1519,9 14 2056,0

Exemplul de referinţă 33e. Studii in vivo pentru a determina efectul 19-R (de referinţă) în xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 19-R (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 45 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor HGC-27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 19-R (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 34.

Tabel 45

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-R 0 178,3 177,6 182,0 2 409,0 395,6 414,9 5 907,4 572,4 735,0 7 1283,6 766,6 901,2 9 1664,0 950,7 1048,1 14 2102,8 1199,4 1293,9 16 1353,1 1488,8 19 1294,3 1668,3 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 19-R 21 1335,1 1845,0 23 1320,3 2025,0 26 1364,5 30 1671,9 33 2009,2

Exemplul de referinţă 34. Studii in vivo pentru a determina efectul 39-S (de referinţă) în mai multe modele de xenogrefă.

Compusul 39-S (de referinţă) şi C (de referinţă) au fost furnizaţi sub formă de flacoane liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Dozele administrate de 39-S (de referinţă) şi C (de referinţă) au fost 1,25 şi, respectiv, 3 mg/Kg.

A fost furnizat placebo sub formă de flacoane cu produs liofilizat. Fiecare flacon (zaharoză 200 mg + fosfat diacid de potasiu 13,6 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5) a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile (2 ml). S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5%.

Оn aceste experimente,compusul 39-S (de referinţă) şi compusul C (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos într-un program săptămânal la un volum de 10 ml/Kg.

Exemplul de referinţă 34a. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 39-S (de referinţă) în xenogrefele de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a evalua activitatea antitumorală a compusului 39-S (de referinţă) prin comparaţie cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară HT1080.

Tabelul 46 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă) şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 35.

Tabel 46

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor 39-S Compus C 0 7,5 7,5 7,5 2 9,4 7,9 8,8 5 11,4 6,4 9,0 7 12,1 6,8 9,6 9 13,2 6,9 10,2 12 14,5 6,6 10,2 14 15,2 6,4 11,2 16 15,9 6,8 12,4 19 18,0 7,0 13,3 21 7,0 15,2 23 8,5 18,0 27 10,8 30 12,5 33 14,3 35 15,3 37 18,0

Exemplul de referinţă 34b. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 39-S (de referinţă) în xenogrefe de adenocarcinom mamar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 39-S (de referinţă) şi compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 47 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoareci trataţi cu placebo, compus C (de referinţă) şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 36.

Tabel 47.

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 0 149,4 151,0 149,4 2 240,0 209,3 217,1 5 325,1 290,9 281,3 7 407,8 301,8 338,6 9 514,8 300,8 385,1 12 648,1 278,7 400,4 14 799,0 249,7 436,9 16 1002,5 243,6 585,7 19 1233,9 248,3 774,7 21 1539,1 250,0 965,9 23 2006,5 260,3 1215,2 26 2027,7 304,9 1503,2 28 337,1 1785,3 30 451,3 2037,1 33 584,1 35 683,4 37 784,7 40 937,4 42 1060,5 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 44 1170,5 47 1112,9 49 1138,6 51 1283,2 54 1415,1 56 1518,7 58 1728,5 61 2017,9

Exemplul de referinţă 34c. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 39-S (de referinţă) în xenogrefele de cancer pulmonar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 39-S (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea a trei modele diferite de xenogrefă de cancer pulmonar uman. Aceste modele corespund cancerului pulmonar fără celule mici (linia celulară H-460) şi cancerului pulmonar cu celule mici (liniile celulare H526 şi H82).

Tabelul 48 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă) şi compus 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 37.

Tabel 48

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 0 187,4 187,8 186,1 2 577,5 314,4 395,4 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 5 1352,0 584,1 665,9 7 1642,9 831,2 929,5 9 2025,0 841,0 1063,7 12 1008,0 1436,5 14 1309,8 2025,0 16 1470,0 2025,0 19 2025,0

Tabelul 49 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H526 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă) şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 38.

Tabel 49

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 0 217,2 214,5 217,9 2 410,7 260,3 262,4 4 778,5 80,0 108,3 7 1083,2 46,2 129,8 9 1371,0 32,0 85,9 11 1782,0 32,0 52,3 14 2025,0 4,0 54,1 16 4,0 47,3 21 4,0 4,0 28 4,0 4,0 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 35 4,0 4,0 42 4,0 62,5 49 4,0 53,5 56 4,0 70,0 63 4,0 132,3 70 4,0 368,5 77 4,0 465,8 84 4,0 107,4 91 4,0 130,0 98 4,0 4,0 105 4,0 4,0 112 4,0 4,0 119 4,0 4,0 126 4,0 4,0 133 4,0 4,0 140 4,0 4,0 147 4,0 4,0 165 4,0 4,0 175 4,0 4,0 191 4,0 4,0 205 4,0 4,0

Tabelul 50 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H82 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă) şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 39.

Tabel 50.

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 0 171,6 170,3 170,5 2 439,4 325,2 265,3 5 1024,7 430,8 488,7 7 1422,0 466,2 760,0 9 1923,8 544,3 899,5 12 2025,0 640,3 1038,5 14 711,2 1213,4 16 802,7 1256,4 19 916,0 1741,5 21 1047,2 1878,8 23 1189,1 2057,0 26 1497,2 28 1741,8 30 1731,7 33 2029,4

Exemplul de referinţă 34d. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 39-S (de referinţă) în xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 39-S (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 51 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, compus C (de referinţă) şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 40.

Tabel 51

Zi Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 0 169,5 170,5 169,6 2 317,5 206,5 206,3 5 758,9 163,4 372,7 7 1351,9 298,6 607,6 9 1675,8 317,4 696,2 12 2025,0 378,2 855,6 14 668,5 1293,9 16 853,5 1683,5 19 1415,5 2137,5 21 1519,2 23 1666,0 30 2025,0

Exemplul de referinţă 34e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 39-S (de referinţă) în xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 39-S (de referinţă) cu activitatea antitumorală a compusului C (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 52 raportează creşterea volumului tumorii a tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, compus C (de referinţă) şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 41.

Tabel 52

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 39-S Compus C 0 200,7 195,6 195,0 2 429,0 356,3 391,0 5 835,5 469,7 578,6 7 1256,5 467,8 708,2 9 1602,2 575,2 937,7 12 2040,7 611,1 1169,5 14 637,3 1496,8 16 690,4 1690,6 19 701,8 2004,0 21 697,4 1741,4 23 715,5 2056,4 26 898,1 28 1163,4 30 1409,3 33 1450,5 35 1708,5 37 1804,4 40 2075,2

Exemplul 35. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 47-R în mai multe modele de xenogrefă.

Compusul 47-R a fost furnizat sub formă de fiole liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de 47-R a fost de 0,1 mg/Kg.

Compusul D (de referinţă) a fost furnizat sub formă de substanţă medicamentoasă sub formă de pulbere. Fiecare flacon a fost reconstituit mai întâi prin dizolvare totală în DMSO (Fisher) şi apoi adăugare de Kolliphor ELP (Basf)/etanol absolut (Merk) (1:1, vol/vol) la o concentraţie de 0,8 mg/mL. S-au făcut diluţii suplimentare cu o soluţie tampon de lactat (pH = 4,0) până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de Compus D (de referinţă) a fost de 0,5 mg/Kg.

Placebo a fost furnizat sub formă de flacoane cu produs liofilizat. Fiecare flacon (zaharoză 200 mg + fosfat diacid de potasiu 13,6 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5) a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile (2 ml). S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5%.

Оn aceste experimente, compusul 47-R şi compusul D (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos pe un program săptămânal la un volum de 10 ml/Kg.

Exemplul 35a. Studii in vivo pentru a determina efectul 47-R оn xenogrefe de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a evalua activitatea antitumorală a compusului 47-R prin comparaţie cu activitatea antitumorală a compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară HT1080.

Tabelul 53 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (referinţă) şi 47-R. Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 42. Tabel 53

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor 47-R Compus D 0 7,5 7,5 7,5 2 9,4 8,9 8,2 Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor 47-R Compus D 5 11,4 10,1 7,5 7 12,1 10,5 7,4 9 13,2 11,5 8,1 12 14,5 13,5 7,9 14 15,2 13,9 7,7 16 15,9 14,6 8,8 19 18,0 18,0 10,2 21 11,2 23 12,2 27 13,2 30 14,6 33 16,3 35 18,0

Exemplul 35b. Studii in viv pentru a determina efectul compusului 47-R оn xenogrefe de adenocarcinom mamar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 47R şi compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sвn uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 54 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoareci trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 47-R. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 43.

Tabel 54

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 0 149,4 150,5 149,6 2 240,0 225,3 217,2 5 325,1 323,2 284,5 7 407,8 405,0 310,0 9 514,8 495,9 325,5 12 648,1 594,1 268,4 14 799,0 769,5 237,7 16 1002,5 1009,5 261,2 19 1233,9 1298,0 251,3 21 1539,1 1580,7 219,9 23 2006,5 2006,5 221,8 26 2027,7 2032,1 245,5 28 320,3 30 401,6 33 545,8 35 629,2 37 670,7 40 669,9 42 696,3 44 798,1 47 857,7 49 870,7 51 925,8 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 54 1005,4 56 1064,2 58 1235,6 61 1367,8 63 1553,7 65 2017,9

Exemplul 35c. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 47-R оn xenogrefe de cancer pulmonar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 47-R cu activitatea antitumorală a compusului D (de referinţă) prin utilizarea a trei modele diferite de xenogrefă de cancer pulmonar uman. Aceste modele corespund cancerului pulmonar fără celule mici (linia celulară H-460) şi cancerului pulmonar cu celule mici (liniile celulare H526 şi H82).

Tabelul 55 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 47-R. Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 44.

Tabel 55

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 0 187,4 185,8 187,2 2 577,5 508,1 329,7 5 1352,0 979,3 559,4 7 1642,9 1280,0 756,5 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 9 2025,0 1543,1 971,9 12 1764,0 1370,9 14 1845,5 1626,8 16 2025,0

Tabelul 56 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H526 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 47-R. Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 45.

Tabel 56

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 0 217,2 211,5 216,1 2 410,7 367,9 240,9 4 778,5 583,7 99,3 7 1083,2 941,7 56,7 9 1371,0 1305,2 62,5 11 1782,0 1484,7 62,5 14 2025,0 2025,0 32,0 16 4,0 21 4,0 28 4,0 35 4,0 42 4,0 49 4,0 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 56 4,0 63 4,0 70 4,0 77 4,0 84 4,0 91 4,0 98 4,0 105 4,0 112 4,0 119 4,0 126 4,0 133 4,0 140 4,0 147 4,0 165 4,0 175 4,0 191 4,0 205 4,0

Tabelul 57 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H82 la şoareci trataţi cu placebo, compus D (referinţă) şi compus 47-R. Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 46.

Tabel 57.

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 0 171,6 169,0 169,4 2 439,4 371,6 340,6 5 1024,7 888,8 443,3 7 1422,0 1314,2 496,2 9 1923,8 1811,0 614,1 12 2025,0 2055,4 665,5 14 1041,6 16 1151,2 19 1516,7 21 1748,0

Exemplul 35d. Studii in vivo pentru a determina efectul 47-R оn xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 47-R cu activitatea antitumorală a compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 58 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoareci trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 47-R. Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 47.

Tabel 58

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 0 169,5 170,6 168,8 2 317,5 280,6 225,7 5 758,9 653,9 256,6 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 7 1351,9 848,7 473,8 9 1675,8 1569,1 633,6 12 2025,0 1764,0 822,8 14 1666,0 1129,3 16 2025,0 1198,6 19 1649,6 21 2025,0

Exemplul 35e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 47-R оn xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 47-R cu activitatea antitumorală a compusului D (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 59 raportează creşterea volumului tumorii a tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, compus D (de referinţă) şi 47-R. Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 48.

Tabel 59

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 0 200,7 194,0 194,0 2 429,0 359,4 324,2 5 835,5 774,8 561,6 7 1256,5 1155,4 504,2 9 1602,2 1474,7 584,2 12 2040,7 1870,2 767,7 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 47-R Compus D 14 2031,3 1056,8 16 2075,2 1440,2 19 1717,9 21 2043,4

Exemplul de referinţă 36. Studii in vivo pentru a determina efectul 32 (de referinţă) în mai multe modele de xenogrefă.

Au fost furnizaţi compuşii 32 (de de referinţă) şi ET-736 (de de referinţă) în formă de flacoane liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de compus 32 (de referinţă) şi ET-736 (de de referinţă) a fost de 0,5 mg/Kg.

A fost furnizat Placebo sub formă de produs liofilizat. Fiecare flacon (zaharoză 200 mg + fosfat diacid de potasiu 13,6 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5) a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile (2 ml). S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5%.

Оn aceste experimente, compusul 32 (de referinţă) şi ET-736 (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos la un program săptămânal la un volum de 10 ml/Kg.

Exemplul de referinţă 36a. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 32 (de de referinţă) în xenogrefele de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a evalua activitatea antitumorală a compusului 32 (de referinţă) prin comparaţie cu activitatea antitumorală a compusului ET-736 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară HT-1080,

Tabelul 60 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 (de referinţă) şi 32 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 49.

Tabel 60

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor 32 ET-736 0 7,5 7,5 7,4 2 9,4 8,9 8,3 5 11,4 8,2 7,1 7 12,1 8,8 7,6 9 13,2 10,0 7,4 12 14,5 8,8 7,0 14 15,2 10,8 7,1 16 15,9 11,8 7,4 19 18,0 12,0 8,4 21 14,0 8,6 23 13,8 10,0 27 13,6 10,9 30 15,5 13,2 33 18,0 14,3 35 15,2 37 15,8 40 16,6 42 18,0

Exemplul de de referinţă 36b. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 32 (de referinţă) în xenogrefe de adenocarcinom mamar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 32

(de de referinţă) şi ET-736 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 61 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 (de referinţă) şi 32 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 50.

Tabel 61

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 0 149,4 150,2 150,0 2 240,0 233,6 237,7 5 325,1 310,6 302,1 7 407,8 386,1 364,9 9 514,8 437,5 404,6 12 648,1 493,4 395,4 14 799,0 560,3 398,3 16 1002,5 649,5 447,2 19 1233,9 853,0 485,0 21 1539,1 1017,5 536,3 23 2006,5 1263,2 669,8 26 2027,7 1487,7 778,9 28 1726,6 1046,1 30 1892,6 1315,9 33 2082,8 1664,9 35 2007,7

Exemplul de de referinţă 36c. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 32 (de de referinţă) în xenogrefele de cancer pulmonar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 32 (de referinţă) şi ET-736 (de de referinţă) prin utilizarea a trei modele diferite de xenogrefă de cancer pulmonar uman. Aceste modele corespund cancerului pulmonar fără celule mici (linia celulară H-460) şi cancerului pulmonar cu celule mici (liniile celulare H526 şi H82).

Tabelul 62 prezintă evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 (de referinţă) şi 32 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 51.

Tabel 62

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 0 187,4 183,9 185,8 2 577,5 455,2 457,8 5 1352,0 784,8 732,8 7 1642,9 837,4 930,1 9 2025,0 1044,3 1207,2 12 2025,0 1452,4 1568,0 14 1845,5 1845,5 16 2025,0 2025,0

Tabelul 63 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H526 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 (de referinţă) şi 32 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 52.

Tabel 63

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 0 217,2 212,1 213,5 2 410,7 277,3 240,5 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 4 778,5 127,0 97,2 7 1083,2 95,0 48,8 9 1371,0 63,1 62,5 11 1782,0 62,5 62,5 14 2025,0 62,5 47,3 16 62,5 32,0 21 4,0 4,0 28 4,0 4,0 35 55,3 4,0 42 85,3 4,0 49 185,6 4,0 56 169,1 4,0 63 62,5 4,0 70 88,9 4,0 77 280,6 4,0 84 694,2 199,8 91 1150,9 786,5

Tabelul 64 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H82 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 (de referinţă) şi 32 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 53.

Tabel 64

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 0 171,6 171,6 170,0 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 2 439,4 309,4 334,4 5 1024,7 485,0 539,4 7 1422,0 708,4 836,4 9 1923,8 972,6 1013,1 12 2025,0 1101,6 1290,9 14 1339,6 1648,0 16 1430,3 19 1885,7

Exemplul de de referinţă 36d. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 32 (de referinţă) în xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 32 (de referinţă) şi ET-736 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 65 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, compusul ET-736 (de referinţă) şi 32 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 54.

Tabel 65

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 0 169,5 168,6 168,8 2 317,5 262,9 251,2 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 5 758,9 572,7 382,6 7 1351,9 997,5 676,1 9 1675,8 1359,9 959,4 12 2025,0 1715,0 1241,5 14 2025,0 1582,7 16 2025,0 1646,4 19 1845,5 21 2025,0

Exemplul de de referinţă 36e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 32 (de referinţă) în xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 32 (de referinţă) şi ET-736 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 66 raportează creşterea volumului tumorii la tumorile HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, ET-736 (de referinţă) şi 32 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 55.

Tabel 66

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 0 200,7 194,8 195,9 2 429,0 386,3 359,2 5 835,5 551,3 537,6 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 32 ET-736 7 1256,5 579,2 553,5 9 1602,2 665,8 604,7 12 2040,7 701,1 627,4 14 814,5 648,0 16 959,9 687,6 19 1312,4 760,0 21 1626,8 792,4 23 1737,3 818,9 26 1026,1 28 1354,9

Exemplul de referinţă 37. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 35 (de referinţă) în mai multe modele de xenogrefă.

Compusul 35 (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de compus 35 (de referinţă) a fost 0,25 mg/Kg.

PM01183 (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii ulterioare cu soluţie injectabilă de glucoză 5% sau clorură de sodiu 0,9% până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de PM01183 (de referinţă) a fost 0,18 mg/Kg.

Placebo a fost furnizat sub formă de flacoane cu produs liofilizat, fiecare flacon

(zaharoză 200 mg + fosfat diacid de potasiu 13,6 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5) a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile (2 mL). S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5%.

Оn acest experiment, compusul 35 (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă), precum şi placebo au fost administrate intravenos pe un program săptămânal la un volum de 10 ml/Kg.

Exemplul de de referinţă 37a. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 35 (de referinţă) în xenogrefele de fibrosarcom uman.

Scopul acestui studiu a fost de a evalua activităţile antitumorale ale compusului 35 (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de sarcom uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară HT-1080.

Tabelul 67 raportează evaluarea diametrului total (tumoră + picior) a tumorilor HT1080 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 35 (referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 56.

Tabel 67

Zile Diametru total (tumoare + picior) (mm) Martor PM01183 35 0 8,4 8,4 8,3 2 10,9 9,8 9,4 5 14,8 9,7 8,7 7 15,9 11,4 8,0 9 18,0 12,7 9,9 12 13,7 11,4 14 14,6 12,5 16 15,5 13,2 19 15,6 14,6 21 18,0 15,7 23 18,0

Exemplul de referinţă 37b. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 35 (de referinţă) în xenogrefe de adenocarcinom mamar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 35 (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de sân uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară MDA-MB-231.

Tabelul 68 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor MDA-MB-231 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 35 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 57.

Tabel 68

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 35 PM01183 0 132,6 132,7 134,3 4 194,1 193,6 177,2 7 248,2 179,1 186,3 11 377,6 276,7 250,7 14 461,3 286,0 266,1 18 679,2 384,5 327,7 21 753,2 436,8 391,0 25 909,2 554,3 493,1 28 1090,7 647,0 627,3 32 1433,4 817,5 789,0 36 1887,5 1156,7 1022,0 39 1785,2 1387,6 1294,2 42 2081,5 1595,3 1643,3 Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 35 PM01183 46 2137,5 1689,9 1658,9 49 2044,2 1938,0

Exemplul de referinţă 37c. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 35 (de referinţă) în xenogrefele de cancer pulmonar uman.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 35 (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer pulmonar uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară H460.

Tabelul 69 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor H460 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 35 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea оn Figura 58.

Tabel 69

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 35 0 197,0 196,3 197,2 2 529,5 457,0 415,3 4 1057,4 861,5 750,8 7 1582,5 1280,2 1242,3 9 2094,8 1424,9 1536,3 11 1969,9 1728,7 14 2080,9

Exemplul de referinţă 37d. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 35 (de referinţă) în xenogrefele tumorale ovariene umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 35 (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer ovarian uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost A2780.

Tabelul 70 raportează evaluarea volumului tumorilor A2780 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 35 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 59.

Tabel 70

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor PM01183 35 0 163,4 163,6 163,6 2 287,1 236,5 189,9 4 568,7 463,2 284,3 7 1211,3 986,3 606,4 9 1633,7 1451,4 946,9 11 2047,8 2062,0 1394,2 14 2067,7

Exemplul de referinţă 37e. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 35 (de referinţă) în xenogrefele tumorale gastrice umane.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activităţile antitumorale ale compusului 35 (de referinţă) şi PM01183 (de referinţă) prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer gastric uman.

Modelul tumoral utilizat оn acest studiu a fost HGC27.

Tabelul 71 raportează creşterea оn volum a tumorilor HGC27 la şoarecii trataţi cu placebo, PM01183 (de referinţă) şi 35 (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate de asemenea în Figura 60.

Tabel 71

Zile Volumul median al tumorii (mm3) Martor 35 PM01183 0 178,3 182,3 177,6 2 409,0 382,2 395,6 5 907,4 610,8 572,4 7 1283,6 775,5 766,6 9 1664,0 988,0 950,7 12 1692,4 1005,6 972,0 14 2102,8 1531,7 1199,4 16 1866,3 1353,1

Exemplul 38. studii in vivo pentru a determina efectul compuşilor 12-S şi 12-R în xenogrefele de prostată umană.

Compuşii 12-S şi 12-R au fost furnizaţi sub formă de fiole liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Dozele administrate de compuşi 12-S şi 12-R au fost 0,25 mg/kg şi, respectiv, 0,05 mg/kg.

A fost furnizat placebo sub formă de turtă liofilizată care conţine 100 mg zaharoză + fosfat diacid de potasiu 6,8 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5 care a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie.

Оn aceste experimente, compuşii 12-S şi 12-R, precum şi placebo, au fost administraţi intravenos o dată pe săptămână timp de 3 săptămâni consecutive, în zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compuşilor 12-S şi 12-R prin utilizarea unui model de xenogrefă de cancer de prostată uman.

Modelul tumoral utilizat în acest studiu a fost linia celulară PC-3.

Tabelul 72 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor PC-3 la şoarecii trataţi cu placebo, 12-S şi 12-R. Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 61.

Tabel 72

Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 12-R 12-S 0 128,0 129,0 128,0 2 149,6 136,2 141,5 4 197,0 144,2 143,7 7 250,9 172,2 183,9 11 291,6 183,6 208,1 14 326,5 205,2 270,7 16 361,9 256,0 286,3 18 397,0 325,7 336,1 21 476,9 322,2 357,1 23 506,1 407,8 400,8 25 526,7 419,9 443,6 29 593,6 459,1 523,4 32 769,5 512,1 652,6 35 875,3 579,2 689,7 37 900,0 613,8 692,2 39 977,8 764,1 726,9 42 1061,5 785,0 823,7 44 1463,4 845,5 864,2 46 1612,8 748,0 1182,8 49 1809,2 808,7 1219,2 51 2030,9 855,8 1331,9 56 1125,2 1335,2

Exemplul de referinţă 39. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 4-S (de referinţă) în xenogrefele de prostată umană.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 4-S (de referinţă) prin utilizarea a trei modele diferite de xenogrefă de cancer de prostată uman. Aceste modele corespund liniilor celulare PC-3, DU-145 şi 22Rv1.

Compusul 4-S (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de 4-S (de referinţă) a variat în funcţie de studiu, fiind de 1,25 mg/Kg cвnd modelul tumoral era PC-3, 1,00 mg/Kg cвnd modelul tumoral era DU-145 şi 0,75 mg/Kg cвnd tumora era modelul era 22Rv1, respectiv. \tabPlacebo a fost furnizat sub formă de turtă liofilizată care conţine 100 mg zaharoză + fosfat diacid de potasiu 6,8 mg + acid fosforic q.s. pH 3,8-4,5 care a fost reconstituit cu apă pentru perfuzie. Оn aceste experimente, 4-S (de referinţă), precum şi placebo au fost administrate intravenos o dată pe săptămână timp de 3 săptămâni consecutive, în Zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil. Tabelul 73 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor PC-3 la şoarecii trataţi cu placebo şi 4-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 62.

Tabel 73

Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 4-S 0 140,5 141,3 2 178,6 130,7 4 233,1 147,6 7 284,6 157,7 9 331,7 200,9 Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 4-S 11 433,7 192,8 14 500,4 210,8 16 570,8 255,5 18 680,3 261,1 21 850,1 282,4 23 928,5 382,2 25 915,7 451,6 28 1187,5 611,1 30 1270,1 762,3 32 1327,1 821,6 35 1373,6 1045,6

Tabelul 74 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor DU-145 la şoarecii trataţi cu placebo şi 4-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Fig. 63.

Tabel 74

Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 4-S 0 127,4 126,2 3 180,9 102,4 5 248,8 119,5 7 320,4 149,5 10 384,6 216,8 12 441,0 181,4 Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 4-S 14 519,6 237,7 17 601,0 204,4 19 660,8 210,9 24 740,7 300,0 26 798,6 378,4 28 587,0 31 650,3

Tabelul 75 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor 22Rv1 la şoarecii trataţi cu placebo şi 4-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 64.

Tabel 75

Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 4-S 0 174,6 173,6 3 307,2 70,3 5 511,5 63,1 7 739,1 76,7 10 955,2 49,1 12 1286,1 59,8 14 1385,8 74,9 17 1791,1 55,1 19 2025,0 64,9 24 138,4 Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 4-S 26 186,9 28 242,0 31 392,5 33 561,8 35 799,3 38 1107,0 40 1426,4 42 1685,5 45 2025,0

Exemplul de referinţă 40. Studii in vivo pentru a determina efectul compusului 39-S (de referinţă) în xenogrefele de prostată umană.

Scopul acestui studiu a fost de a compara activitatea antitumorală a compusului 39-S (de referinţă) prin utilizarea a trei modele diferite de xenogrefă de cancer de prostată uman. Aceste modele corespund liniilor celulare PC-3, DU-145 şi 22Rv1.

Compusul 39-S (de referinţă) a fost furnizat sub formă de flacoane liofilizate de produs liofilizat. Fiecare flacon a fost reconstituit cu apă sterilă pentru preparate injectabile la o concentraţie de 0,5 mg/ml. S-au făcut diluţii suplimentare cu soluţie injectabilă de dextroză 5% până la concentraţia formulării de dozare. Doza administrată de 39-S (de referinţă) a variat în funcţie de studiu, fiind de 1,25 mg/Kg cвnd modelul tumoral a fost PC-3, 1,00 mg/Kg cвnd modelul tumoral a fost DU-145 şi respectiv 0,75 mg/Kg cвnd modelul tumoral a fost 22Rv1,

Оn aceste experimente, compusul 39-S (de referinţă), precum şi placebo, au fost administrate intravenos o dată pe săptămână timp de 3 săptămâni consecutive, în Zilele 0, 7 şi 14, ori de cвte ori a fost posibil.

Tabelul 76 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor PC-3 la şoarecii trataţi cu placebo şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 65.

Tabel 76

Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 39-S 0 181,9 182,3 2 254,8 222,6 4 308,7 244,0 7 344,5 269,3 9 396,8 295,8 11 439,2 315,0 14 542,7 356,9 16 619,0 388,0 18 721,3 400,1 21 908,1 503,3 23 1039,1 556,0 25 1117,0 579,6 28 1232,3 694,9 30 1778,6 811,1 32 2018,1 1027,1 35 1194,3 37 1495,0 39 1710,7 42 2066,2

Tabelul 77 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor DU-145 la şoarecii trataţi cu placebo şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 66.

Tabel 77

Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 39-S 0 156,8 179,9 2 198,3 199,9 4 253,9 222,2 7 325,8 340,5 9 385,1 354,1 11 462,2 349,7 14 483,8 429,1 16 599,0 454,8 18 664,0 449,7 21 816,9 517,5 23 861,3 568,5 25 977,9 629,4 28 973,6 775,7

Tabelul 78 raportează evaluarea volumului tumoral mediu al tumorilor 22Rv1 la şoarecii trataţi cu placebo şi 39-S (de referinţă). Aceste rezultate sunt prezentate şi оn Figura 67.

Tabel 78

Volumul median al tumorii (mm3) Zile Martor 39-S 0 174,6 173,5 3 307,2 93,0 5 511,5 96,8 7 739,1 115,2 10 955,2 108,2 12 1286,1 128,4 14 1385,8 155,6 17 1791,1 173,4 19 2025,0 210,2 24 358,8 26 456,5 28 645,2 31 1049,5 33 1439,4 35 2025,0

Claims

1. Compus cu formula IE sau o sare sau ester ale acestuia acceptabile din punct de vedere farmaceutic:

оn care:

X este -NH- sau -O-;

R1 este -OH sau -CN;

R2 este o grupare -C(=O)Ra;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb;

R4 este ales dintre -CH2NH2 şi -CH2NHProtNH;

Rb este ales dintre alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit şi alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit; şi

ProtNH este o grupare protectoare pentru amino.

2. Compus conform revendicării 1 ales cu formula IEa sau Ieb sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau ester al acestuia:

оn care:

X este -NH- sau -O-;

R1 este -OH sau -CN;

R2 este o grupare -C(=O)Ra ;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb;

R4 este ales dintre -CH2NH2 şi -CH2NHProtNH;

Ra este ales dintre hidrogen, alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit şi alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit ;

ProtNH este o grupare protectoare pentru amino.

3. Compus conform oricăreia dintre revendicările 1 sau 2 în care X este -NH-.

4. Compus conform oricăreia dintre revendicările 1 sau 2 în care X este -O-.

5. Compus conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 4, în care R4 este

-CH2NH2.

6. Compus conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 5, în care R1 este -OH.

7. Compus conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 6, în care R2 este o grupare -C(=O)Ra оn care Ra este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit; de preferinţă în care Ra este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi terţ-butil substituit sau nesubstituit.

8. Compus conform revendicării 7 în care R2 este acetil.

9. Compus conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 8, în care R3 este hidrogen sau -ORb оn care Rb este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit; de preferinţă în care Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi terţ-butil substituit sau nesubstituit.

10. Compus conform revendicării 9 în care R3 este hidrogen.

11. Compus conform revendicării 9 în care R3 este -ORb оn care Rb este alchil C1-C6 substituit sau nesubstituit; de preferinţă în care Rb este ales dintre metil substituit sau nesubstituit, etil substituit sau nesubstituit, n-propil substituit sau nesubstituit, izopropil substituit sau nesubstituit, n-butil substituit sau nesubstituit, izobutil substituit sau nesubstituit, sec-butil substituit sau nesubstituit şi terţ-butil substituit sau nesubstituit.

12. Compus conform revendicării 11 în care R3 este metoxi.

13. Compus conform revendicării 1 cu formula:

sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau ester al acestuia.

14. Compus conform revendicării 1 cu formula:

sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau ester al acestuia.

15. Compus conform revendicării 1 cu formula:

sau o sare acceptabilă din punct de vedere farmaceutic sau ester al acestuia.

16. Compus conform revendicării 1 cu formula:

sau o sare sau ester din punct de vedere acceptabil din punct de vedere farmaceutic al acestuia.

17. Compus conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 16, în care sarea este aleasă dintre clorhidrat, bromhidrat, iodură, sulfat, azotat, fosfat, acetat, trifluoracetat, maleat, fumarat, citrat, oxalat, succinat, tartrat, malat, mandelat, metansulfonat, p-toluensulfonat, sodiu, potasiu, calciu, amoniu, etilendiamină, etanolamină, N,N-dialchilenetanolamină, trietanolamină şi aminoacizi bazici.

18. Compoziţie farmaceutică care cuprinde un compus conform oricăreia dintre revendicările de la 1 la 17 sau o sare sau ester acceptabil din punct de vedere farmaceutic al acestuia şi un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic.

19. Formă de dozare care cuprinde o compoziţie farmaceutică conform revendicării 18.

20. Compus conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 17 sau o sare sau ester acceptabil din punct de vedere farmaceutic al acestuia sau o compoziţie conform revendicării 18 sau o formă de dozare conform revendicării 19 pentru utilizare ca medicament.

21. Compus conform oricăreia dintre revendicările 1 până la 17 sau o sare sau ester acceptabil din punct de vedere farmaceutic al acestuia sau o compoziţie conform revendicării 18 sau o formă de dozare conform revendicării 19, pentru utilizare în tratamentul cancerului.

22. Compus, compoziţie sau formă de dozare pentru utilizare conform revendicării 21, în care cancerul este ales dintre cancerul pulmonar, inclusiv cancerul pulmonar fără celule mici şi cancerul pulmonar cu celule mici, cancerul de colon, cancerul colorectal, cancerul de sân, cancerul de pancreas, sarcomul, cancerul ovarian, cancerul de prostată şi cancerul gastric; de preferinţă, în care cancerul este ales dintre cancerul pulmonar incluzând cancerul pulmonar fără celule mici şi cancerul pulmonar cu celule mici, cancerul de sвn, cancerul de pancreas şi cancerul colorectal.

23. Procedeu pentru obţinerea unui compus definit în oricare dintre revendicările de la 1 la 17 sau a unei sări sau ester acceptabil din punct de vedere farmaceutic al acestuia:

care cuprinde etapa de reacţie a unui compus cu formula II cu un compus cu formula III pentru a da un compus cu formula IV:

în care (unde este permis de către posibilele grupări substituente):

X este -NH- sau -O-;

R2 este o grupare -C(=O)Ra ;

R3 este hidrogen sau o grupare -ORb;

R4 este -CH2NHProtNH;

Rb este ales dintre alchil C1-C12 substituit sau nesubstituit, alchenil C2-C12 substituit sau nesubstituit, alchinil C2-C12 substituit sau nesubstituit ; şi

ProtNH este o grupare protectoare pentru amino;

şi opţional cuprinzând etapa ulterioară de înlocuire a grupării ciano din compusul cu formula IV cu o grupare hidroxi pentru a da un compus cu formula IE, оn care R1 este OH.

24. Kit care cuprinde o cantitate eficace terapeutic dintr-un compus conform oricăreia dintre revendicările 1 la 17 sau o sare sau ester acceptabil din punct de vedere farmaceutic al acestuia şi un purtător acceptabil din punct de vedere farmaceutic; kitul cuprinzând, în mod opţional, instrucţiuni de utilizare a compusului оn tratamentul cancerului şi, mai preferabil, a unui cancer ales dintre cancerul pulmonar, inclusiv cancerul pulmonar cu celule mici şi cancerul pulmonar fără celule mici, cancerul de colon, cancerul de sân, cancerul de pancreas, sarcomul, cancerul ovarian, cancerul de prostată, cancerul colorectal şi cancerul gastric.