DERIVADOS DE TETRAHIDROFURILO SUBSTITUIDOS CON OXI Y AMINO CON ACTIVIDAD ANTITUMORAL
Campo del Invento La presente invención se refiere a compuestos antitumorales. Antecedentes del Invento Los organismos marinos continúan siendo una interesante fuente de moléculas biológicamente activas. Los compuestos tales como ecteinascidina 743, son pruebas clínicas. Algunos compuestos activos importantes han sido aislados de esponjas, notablemente amina de palau.
Otros compuestos de origen marino incluyen espisulosinas tales como espisulosina 285 la cual es de interés por su actividad antitumoral, y se hace referencia al documento WO 9952521 . Sumario del Invento La presente invención está dirigida a compuestos que son análogos de la familia de espisulosina, que tienen la fórmula I que se encuentra a continuación:
en donde los grupos substituyentes definidos por R^ R2, R3 y R4 son seleccionados cada uno en forma independiente de H, C(=O)R', P(=O)R'R", S(=O)R'R", alquilo Ci-C-,8 substituido o no substituido, alquenilo C2-C18 substituido o no substituido, alquinilo C2-C18 substituido o no substituido, arilo substituido o no substituido. En donde cada uno de los grupos R', R" es seleccionado independientemente del grupo que consiste de H, OH, NO2, NH2, SH, CN, halógeno, =O, C(=O)H, C(=O)CH3, CO2H, CO2CH3, alquilo CrC?8 substituido o no substituido, alquenilo C2-C?s substituido o no substituido, alquinilo C2-C18 substituido o no substituido, arilo substituido o no substituido. En donde R1f R2, R3 podrían formar parte de un anillo heterocíclico (saturado: por ejemplo, morfolina, oxazolidina o que contienen enlaces dobles no saturados: por ejemplo, morfolinona, oxazolidinona, que tienen normalmente de 5 a 6 átomos de anillo). R2 puede ser de forma independiente una sal interna. En donde X^ X2 y X3 de la fórmula I son colocados en forma independiente en cualquier lugar en particular de la cadena incluyendo la más cercana al anillo o ya sea carbono con la línea punteada y seleccionada independientemente de H, OH, OR', SH, SR', SOR', SO2R', NO2, NH2, NHR', N(R')2, NHC(O)R\ CN, halógeno, =O, C(=O)H, C(=O)CH3, CO2H, CO2CH3, alquilo CrC18 substituido o no substituido, alquenilo C2-C18 substituido o no substituido, alquinilo C2-C18 substituido o no substituido, arilo substituido o no substituido, heteroaromático substituido o no substituido. En donde los grupos substituyentes definidos por R' son seleccionados cada uno independientemente del grupo que consiste de H, OH, OR', SH, SR*, SOR', SO2R', NO2, NH2, NHR', N(R')2,
NHC(O)R ', CN, halógeno, =O, C(=O)H , C(=O)CH3, CO2H , CO2CH3, alquilo C?-C1 8 substituido o no substituido, alquenilo C2-C18 substituido o no substituido, alquinilo C2-C18 substituido o no substituido, arilo substituido o no substituido, heteroaromático substituido o no substituido. En donde x puede ser entre 6 y 20. En donde la línea punteada es u no o varios enlaces dobles colocados en cualquier lugar particular de la cadena lateral . En donde la estereoquímica de los grupos ORi y N R2R3, puede ser en forma independiente syn o anti. Las actividades antitumorales de estos compuestos incluyen leucemias, cáncer del pulmón, cáncer de colon , cáncer de riñon , cáncer de próstata, cáncer de ovarios, cáncer de ceno, sarcomas y melanomas. Los compuestos son por lo tanto para utilizarse en medicina, en particular en el tratamiento de tumores. La presente invención también se refiere a preparaciones farmacéuticas que comprenden tales compuestos para el tratamiento de tumores, por ejemplo, tumores sólidos, y el uso de los compuestos en la preparación de un med icamento para el tratamiento de tumores. En particular, se proporciona el compuesto que designamos como I K-8-73-4. El compuesto IK-8-73-4 es de la fórmula C18H37NO2 y tiene la estructura:
Los compuestos de la presente invención pueden formar sales, por ejemplo R2 puede ser en forma independiente una sal interna. Las sales internas preferidas se forman utilizando cualquier clase de mineral o ácido orgánico tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido tartárico, ácido succínico, etc. El método, uso y composiciones de la presente invención, se extiende a sales farmacéuticamente aceptables. Modalidades Preferidas En algunos compuestos preferidos, el grupo R4 es hidrógeno. Uno o ambos de R2 y R3 es adecuadamente hidrógeno. Normalmente Ri es hidrógeno. Preferentemente uno, dos o tres de Xi , X2 y X3 son hidrógeno. Adecuadamente, la línea punteada está ausente para dejar un solo enlace. Preferentemente x es de 10 a 18, más preferentemente de 10 a 14, aproximadamente 12. Los substituyentes de halógeno adecuados en los compuestos de la presente invención, incluyen F, Cl, Br, e I . Excepto en donde se indica, los grupos alquilo tienen preferentemente de 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferentemente de 1 hasta aproximadamente 8 átomos de carbono, aún más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono, y lo más preferentemente 1 , 2, 3 ó 4 átomos de carbono. Metilo, etilo y propilo, incluyendo isopropilo, son grupos alquilo particularmente preferidos en los compuestos de la presente invención. Tal como se utiliza en la presente invención, el término alquilo, a menos que se modifique de otra manera, se refiere tanto a grupos cíclicos como no
cíclicos, no obstante que los grupos cíclicos comprenderán al menos tres elementos de anillo de carbono. Los grupos alquenilo y alquinilo preferidos en los compuestos de la presente invención, tienen una o más ligaduras no saturadas y desde 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferentemente desde 2 hasta aproximadamente 8 átomos de carbono, aún más preferentemente desde 2 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono, incluso más preferentemente 1 , 2, 3 ó 4 átomos de carbono. Los términos alquenilo y alquinilo tal como se utilizan en la presente invención, se refieren tanto a grupos cíclicos como no cíclicos, no obstante que generalmente son más preferidos los grupos no cíclicos rectos o ramificados. Los grupos alcoxi preferidos en los compuestos de la presente invención, incluyen grupos que tienen uno o más ligaduras de oxígeno y desde 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 8 átomos de carbono, y aún más preferentemente desde 1 hasta a aproximadamente 6 átomos de carbono, y lo más preferentemente 1 , 2, 3 ó 4 átomos de carbono. Los grupos alquiltio preferidos en los compuestos de la presente invención, tienen uno o más ligaduras de tioéter y desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferentemente desde 1 hasta a aproximadamente 8 átomos de carbono, aún más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono. Los grupos alquiltio que tienen 1 , 2, 3 ó 4 átomos de carbono son particularmente preferidos.
Los grupos alquilsulfinilo preferidos en los compuestos de la presente invención, incluyen aquellos grupos que tienen uno o más grupos sulfóxido (SO) y desde 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferentemente desde 1 hasta a aproximadamente 8 átomos de carbono, y aún más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono. Los grupos alquilsulfinilo que tienen 1 , 2, 3 ó 4 átomos de carbono son particularmente preferidos. Los grupos alquilsulfonilo preferidos en los compuestos de la presente invención, incluyen aquellos grupos que tienen uno o más grupos sulfonilo (SO2) y desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 8 átomos de carbono, y aún más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono. Los grupos alquilsulfonilo que tienen 1 , 2, 3 ó 4 átomos de carbono son particularmente preferidos. Los grupos aminoalquilo preferidos incluyen aquellos grupos que tienen uno o más grupos de amina primaria, secundaria y/o terciaria, y desde 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono, más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 8 átomos de carbono, aún más preferentemente desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono, incluso más preferentemente 1 , 2, 3 ó 4 átomos de carbono. Los grupos de amina secundaria y terciaria son generalmente más preferidos que las porciones de amina primaria. Los grupos heteroaromáticos adecuados en los compuestos de la presente invención, contienen uno, dos o tres heteroátomos
seleccionados de átomos N, O ó S e incluyen por ejemplo, coumarinilo incluyendo 8-coumarinilo, quinolinilo incluyendo 8-quinolinilo, piridilo, pirazinilo, pirimidilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo, imidazolilo, indolilo, benzofuranilo, y benzotiazolilo. Los grupos heteroalicíclicos adecuados en los compuestos de la presente invención, contienen uno, dos o tres heteroátomos seleccionados de átomos N , O ó S e incluyen, por ejemplo, grupos tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, morfolino y pirrolindinilo. Los grupos arilo carbocíclicos adecuados en los compuestos de la presente invención, incluyen compuestos de anillo simple y múltiple, incluyendo compuestos de anillos múltiples que contienen grupos de arilos separados y/o fusionados. Los grupos arilos carbocíclicos típicos contienen de 1 a 3 anillos separados o fusionados y desde 6 hasta aproximadamente 18 átomos de anillos de carbono. Específicamente los grupos arilo carbocíclicos preferidos incluyen fenilo, incluyendo fenilo substituido tal como fenilo substituido-2, fenilo substituido-3, fenilo substituido-2,3, fenilo substituido-2,5, y fenilo substituido-2,3,5 y fenilo substituido-2,4,5 incluyendo en donde uno o más de los substituyentes fenilo es un grupo de extracción de electrones tal como halógeno, ciano, nitro, alcanoilo, sulfinilo, sulfonilo y similares; naftilo incluyendo naftilo-1 y naftilo-2; bifenilo; fenantrilo; y antracilo. Las referencias en la presente invención a grupos R' substituidos en los compuestos de la misma, se refieren a la parte especificada que puede ser substituido en una o más posiciones disponibles por uno o más grupos adecuados, por ejemplo, halógeno tal como fluoro, cloro, bromo, y
yodo; ciano; hid roxilo; nitro; azido; alcanoilo tal como un grupo alcanoilo C-,.6 tal como acilo y similares; carboxamido; grupos alquilo incluyendo los grupos que tienen de 1 hasta aproximadamente 1 2 átomos de carbono
0 desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono y más preferentemente de 1 a 3 átomos de carbono; grupos alquenilo y alquinilo que incluyen grupos que tienen una o más ligaduras no satu radas y desde 2 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono o desde 2 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos alcoxi que tienen aquellos que tienen una o más ligaduras de oxígeno y desde 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono o desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono; ariloxi tal como fenoxi; grupos alquiltio que incluyen aquellas partes que tienen una o más ligaduras de tioéter y desde 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono o desde
1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos alquilsulfinilo que incluyen aquellas partes que tienen una o más ligaduras de sulfinilo y desde 1 hasta aproximadamente 1 2 átomos de carbono o desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos alquilsu lfonilo que incluyen aq uellas partes que tienen una o más ligaduras de sulfonilo y desde 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono o desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono; grupos aminoalquilo tales como grupos que tienen uno o más átomos N y desde 1 hasta aproximadamente 12 átomos de carbono o desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono; arilo carbocíclico que tiene 6 o más átomos de carbono, particularmente fenilo (por ejemplo, R que es una parte de bifenilo substituido o no substituido); y aralquilo tal como bencilo.
Aplican consideraciones similares a los grupos substituidos permitidos para Xi , X2 y X3, incluyendo alquilo C?-C 8 substituido, alquenilo C2-C18 substituido, alquinilo C2-C18 substituido, arilo substituido, heteroaromático substituido, así como para estos grupos en donde se mencionaron para R'. Preferentemente estas definiciones son interpretadas para evitar substituciones múltiples no significativas, tal como alquilo substituido por alquilo, en donde permanece un grupo alquilo, así como para evitar estructuras que no son creíbles para el propósito de la presente invención. Preferentemente existen cuando menos de 10 a 50, más preferentemente de 12 a 40, de 14 a 30 o lo más preferentemente de 16 a 20 átomos de carbono en la molécula. Los substituyentes X1 ( X2 y X3 de la fórmula I , se colocan en forma independiente en cualquier lugar particular de la cadena incluyendo el más cercano al anillo en cualquier carbono con la línea punteada y seleccionada de manera independiente. Por ejemplo, puede haber de este modo un substituyente adyacente al anillo, otro además del anillo, y otro lejano del anillo. Las sales internas preferidas se forman utilizando cualquier clase de ácido mineral u orgánico tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido tartárico, y ácido succínico, etc. En una clase preferida de los compuestos de la presente invención,
R4 es una cadena de alquilo con un substituyente -NR2R3 y un substituyente -YR1 ó =YR1 en el siguiente carbono hacia el anillo de furano, en donde Y es seleccionado del grupo que consiste de N, O, P, S y es preferentemente O. De manera adecuada el grupo amino está en el
segundo carbono y el grupo amino en el tercer carbono, tomando en cuenta el carbono terminal como el primero. Puede haber no saturación en el -(CH2)n-, preferentemente una sola no saturación. Los compuestos preferidos de la presente invención, incluyen como cadena lateral, la estructura parcial:
o
En donde la línea punteada es un enlace simple o doble. En donde Xi. X2 y X3 de la fórmula I y de la fórmula II son independientemente seleccionados de H, OH, OR', SH, SR', SOR', SO2R', NO2, NH2, NHR', N(R')2, NHC(O)R\ CN, halógeno, =O, C(=O)H, C(=O)CH3, CO2H, CO2CH3, alquilo C1-C18 substituido o no substituido, alquenilo C2-C18 substituido o no substituido, alquinilo C2-C18 substituido o no substituido, arilo substituido o no substituido, heteroaromático substituido o no substituido. En donde x y y pueden ser entre 0 y 20. Preferentemente x está dentro del rango de 8 a 16, más preferentemente 10, 11, 12, 13 ó 14.
Preferentemente y es 0, 1 ó 2. Normalmente lo más preferido es que x sea 1 1 , 1 2 ó 1 3, y y sea 0 ó 1 . Los compuestos I K-8-73-4 pueden ser aislados de la esponja Pachastrissa sp, Desmospongiae, Astroforida, Caltropellidae. Por consiguiente, la presente invención también se refiere al compuesto I K-8-73-4 obten ible de Pachastrissa sp, y a un método para aislar I K-8-73- , caracterizado porque el material de partida para el aislamiento es Pachastrissa sp. El compuesto aislado de la esponja existe en la siguiente estereoqu ímica:
La actividad biológica del compuesto se ilustra a través de los siguientes datos IC50, µg/ml: P388 A459 HT29 MEL28 Leucemia pulmón humano colon humano melanoma
0.01 0.01 0.01 0.01 Otra modalidad especialmente preferida de la presente invención , son composiciones farmacéuticas útiles como agentes antitumorales las cuales contienen como ingrediente activo un compuesto o compuestos de la presente invención, así como el proceso para su preparación .
Los ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen cualquier sólido (tabletas, pildoras, cápsulas, granulos, etc.) o líquidos (soluciones, suspensiones o emulsiones) con una composición adecuada o administración oral, tópica o parenteral. La administración de los compuestos o composiciones de la presente invención, puede ser cualquier método adecuado, tal como infusión intravenosa, preparación oral, preparación intraperitoneal e intravenosa. Los compuestos de la presente invención también pueden ser elaborados mediante síntesis. En forma ilustrativa, los compuestos pueden ser elaborados con respecto al procedimiento del Esquema 6 de Liebigs Ann. Chem., 1990, 1069-1078. En el Esquema 6, (2R, 3S, 4S)-4-benzoilamido-3-hidroxi-2-dodeciltetrahidrofurano, compuesto 43, se prepara a partir de (4S, JS, 2'R- ?5-dihidro-4-(J,2'-dihidroxitetradeci)-2-fenil-1l3-oxazole, compuesto 35. Posteriormente, el (2R, 3S, S)- -benzoilamido-3-hidroxi-2-dodecíltetrahidrofurano se convierte a través de (2R, 3S, S)-4-bencilamido-3-hidroxi-2-dodeciltetrahidrofurano y (2R, 3S, 4S)-4-amino-3-hidroxi-2-dodeciltetrahidrofurano para producir (2R, 3S, 4S)-4-acetamido-3-acetoxi-2-dodeciltetrahidrofurano, compuesto 45. Los 4-bencilamido-3-hidroxi-2-dodeciltetrahidrofurano y (2R, 3S, S)-4-amino-3-hidroxi-2-dodeciltetrahidrofurano son intermedios y no son purificados. Este procedimiento se puede utilizar para preparar compuestos adicionales de la presente invención, modificando según sea necesario el material de partida 35 ó 43 en el Esquema 6, y aislando el compuesto desbencilado obtenido al final del segundo paso en la transición del
compuesto 43 al compuesto 45, seguido de la derivatización, según sea necesario. Además, están disponibles otros procedimientos para la síntesis de tetrahidrofuranos, y pueden ajustarse según sea adecuado para producir compuestos de la presente invención. Los compuestos sintéticos de la presente invención, son proporcionados preferentemente en una forma substancialmente pura, esto es libre de impurezas incluyendo material de partida y reactivos. En particular, se proporciona el compuesto de bencilo o desbencilado obtenido al final del primero y segundo pasos en la transición del compuesto 43 al compuesto 45 del procedimiento en Liebigs Ann. Chem. , 1990, 1069-1078. La presente invención se extiende a composiciones y uso de compuestos de benzoilo y acetilo, compuestos 3 y 5. Los ejemplos de composiciones farmacéuticas de la presente invención, incluyen cualquier sólido (por ejemplo, tabletas, pildoras, cápsulas, granulos) o líquidos (soluciones, suspensiones o emulsiones) con composición adecuada o administración oral, tópica, o parenteral, y pueden contener el compuesto puro en combinación con cualquier vehículo u otros compuestos farmacológicamente activos. Estas composiciones pueden necesitar ser estériles cuando se administran en forma parenteral. En forma adecuada, el compuesto puede ser conjugado con una proteína transportadora u otro agente adecuado para el suministro en el cuerpo animal o humano. La conjugación puede ocurrir directamente entre un transportador y el compuesto, o indirectamente a través de un ligador adecuado.
La administración del compuesto o composiciones de la presente invención, puede ser mediante cualquier método adecuado, tal como infusión intravenosa, preparaciones orales, administración intraperitoneal e intravenosa. Se prefiere que se utilicen tiempos de infusión de hasta 24 horas, o más preferentemente de 2 a 12 horas, siendo más preferidas de 2 a 6 horas. Los tiempos de infusión corta que permite que el tratamiento se lleve acabo sin una permanencia durante la noche en el hospital, son especialmente deseables. Sin embargo, la infusión puede ser de 12 a 24 horas o incluso mayor si se requiere. La infusión se puede llevar acabo a intervalos adecuados es decir de 2 a 4 semanas. Las composiciones farmacéuticas que contienen el compuesto de la presente invención, pueden ser suministradas mediante liposomas o encapsulación de nanoesferas, en formulaciones de liberación sostenida o mediante otros medios de administración estándar. La dosificación correcta del compuesto, variará de acuerdo con la formulación en particular, el modo de aplicación , y el situs en particular, huésped y cáncer o tumor que está siendo tratado. Se deberán tomar en cuenta otros factores como edad, peso corporal, sexo, dieta, tiempo de administración, rango de excreción, condición del huésped, combinaciones de fármacos, sensibilidades a reacciones y severidad de la enfermedad. La administración se debe llevar acabo, en forma continúa o periódica dentro de la dosis máxima tolerada. El compuesto de la presente invención, se puede utilizar con otros fármacos para proporcionar una terapia de combinación . Los otros fármacos pueden formar parte de esta misma composición, o pueden ser
proporcionados como una composición por separado para la administración al mismo tiempo o en diferentes tiempos. La identidad de los otros fármacos no se limita en forma particular, y los candidatos adecuados incluyen : a) fármacos con efectos antimitóticos, especialmente aquellos con elementos citoesqueléticos objetivo, incluyendo moduladores de microtubulos tal como fármacos de taxano (tal como taxol, paclitaxel, taxotere, docetaxel) , podofilotoxinas o alcaloides vinca (vincristina, vinblastina); b) fármacos antimetabolitos tal como fluorouracil-5, citarabina, gemcitabina, análogos de purina tales como pentostatina, metotrexato) ; c) agentes de alquilación , tal como mostazas de nitrógeno (tal como ciclofosfamida o ifosfamida) ; d) fármacos con un ADN objetivo tal como adriamicina, doxorubicina, farmorubicina o epirubicina de fármacos de antraciclina; e) fármacos con objetivo tal como etoposida; f) hormonas y agonistas o antagonistas de hormonas tales como estrógenos, antiestrógenos (tamoxifen y compuestos relacionados) y andrógenos, flutamide, leuprorelina, goserelina, ciprotrona, u octreotida; g) fármacos con transducción de señal objetivo en células de tumor que incluyen derivados de anticuerpos tal como herceptina; h) fármacos de alquilación tal como fármacos de platino (cis-platin , carbonplatin , oxaliplatin , paraplatin) o nitrosoureas; i) fármacos que afectan de manera potencial la metástasis de tumores, tales como inhibidores de metaloproteinasa de matriz;
j) terapia genética y agentes antisentido; k) terapéuticos de anticuerpo; y I) otros compuestos bioactivos de origen marino, notablemente las ecteinascidinas tales como ecteinascidinas 43 y las didemninas tal como aplidina. EJEMPLO Se recolectó una esponja no identificada (OP-98-18) en la isla de Iriomota, Okinawa en Mayo de 1998. La esponja (0.10 kg, húmeda), se extrajo con acetona (0.50 L, 3 veces), y se concentró la solución de acetona. La suspensión acuosa resultante fue dividida con EtOAc para producir 470 mg de material lipofílico (IC50 0.25 µg/mL). La mayoría de este (310 mg) fue sometido a separación cromatográfica primero sobre gel de sílice (fracción activa, 63.0 mg, eluido con EtOAc-MeOH , 1 -1 ) posteriormente TLC de preparación (sílice, EtOAc-MeOH, 3-1 ), y finalmente columna de intercambio de cationes (eluida con MeOH , y MeOH+0.05%TFA). Se obtuvieron de manera total 10.1 mg (3.2% de extracto) del compuesto 1 . También encontramos el mismo compuesto a partir de otro espécimen de esponja. Inicialmente hicimos el juicio de que las esponjas eran diferentes, sin embargo, los extractos mostraron espectros RMN -, H idénticos de las mismas especies. La esponja original fue identificada como Pachastrissa sp. (Demospongiae, Astroforida, Caltropellidae). La esponja se depositó tanto en nuestro laboratorio (voucher no. OP-98— 18 y OP-98-21 ) como en Queensland Museum (QM G317007). La recolección
se realizó el 9 de Mayo de 1998 en Sakiyama Bay, Iriomote Island, Okinawa. Se recolectó un espécimen de la esponja Pachastrissa sp. (OP-98-21). La esponja se llevó nuevamente al laboratorio y se mantuvo congelada hasta la extracción. La muestra (0.20 kg, húmeda) se extractó con acetona (0.5 L, 3 veces), y se concentró el extracto de acetona filtrado. Se dividió la suspensión acuosa resultante EtOAc. La capa orgánica (1.40 g) mostró IC50 de 0.1 µg/mL. La capa de agua fue concentrada, y el material sólido resultante se lavó con MeOH. Después de la filtración, se tomó el material soluble MeOH. Este extracto MeOH (1.62 g) mostró un IC50 de 0.02 µg/mL. La mayor parte del extracto del MeOH (1.4 g) se sometió a separación, primero sobre Sefadex LH20 (CH2 CL2-MeOH, 1-1), posteriormente sobre HPLC (RP18, no eluido con MeOH-H2O (19-1) aunque si con EtOAc-MeOH (1-1)), y finalmente sobre columna de intercambio de cationes (MeOH, MeOH-0.1%TFA) para producir 11.5 mg (0.8% del extracto) del compuesto -,. Se trató de separar los componentes primero con MeOH-H2O. Sin embargo, después de la separación se observó que no se recuperó todo el material, por lo que se lavó la columna con menos solvente polar, EtOAc-MeOH. Y el compuesto se recuperó en esta fracción (revisado por RMN y también medíante resultados de citotoxicidad). Compuesto < (forma libre, IK-8- 3-4): con un sólido amorfo; [a]D21 + 180 (c 0.1, EtOH);
IR (película) v max 3342, 2920, 2850, 2355, 1556, 1469, 1215, 1039, 758, 667 cm-1; RMN 1H (500 MHz, CD3OD) d 0.90 (3H, m, H-18), 1.29 (24H, brs, H-6 a 17), 1.62 (2H, m, H-5), 3.43 dH, dd, J = 7.9, 8.9 Hz, H.-,), 3.51 dH, dt, J = 4.3, 8.9 Hz, H.2), 3.81 dH, dt, J = 2.8, 6.7 Hz, H.4), 3.86 dH, dd, J = 2.8, 4.3 Hz, H.3), 3.90 dH, dd, J = 7.6, 7.9 Hz, H.-,); RMN 13C (125 MHz, CD3OD) d 843 d (C-4), 73.3 d (C-3), 72.1 t (C.-,), 56.0 d (C-2), 33.1 t, 30.9 t (C-5), 30.8 t, 30.7 t, 30.5 t, 30.5 t, 27.1 t, y 23.7 t, (C-6 a C-17), 14.4q (C-18); ESIMS m/z 300 ([M + H]+). Compuesto ^ (forma de sal, IK-8-61-4): con un sólido amorfo: RMN 1H (500 MHz, CD3OD) d 0.87 (3H, m, H-18), 1.29 (24H, brs, H-6 a 17), 1.65 (2H, m, H-5), 3.71 dH, dt, J = 3.5, 6.6 Hz, H.4), 3.79 dH, dd, J = 5.0, 8.5 Hz, H.-,), 3.88 dH, m, H-2), 3.91 dH, dd, J = 7.3, 8.5 Hz, H.-,), 4.25 dH, dd, J = 3.5, 5.2 Hz, H.3); RMN 3C (125 MHz, CD3OD) d 843 d (C-4), 70.9 d (C-3), 68.9 t (C.-,), 54.3 d (C-2), 33.0 t, 30.8 t, 30.7 t, 30.7 t, 30.4 t, 29.7 t (C-5), 27.2 t, y 23.7 t (C-6 a C-?7), 14.4q (C-18); EIMS m/z 299 (M+).