CN104098594A

CN104098594A - 生物素-鬼臼毒素酯化衍生物及其药物组合物和其制备方法与应用

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Publication number: CN104098594A
Application number: CN201410338943.5A
Authority: CN
Inventors: 蒋子华; 字成庭; 胡江苗; 周俊; 丁中涛; 刘玉清; 杨柳
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2014-07-16
Filing date: 2014-07-16
Publication date: 2014-10-15
Anticipated expiration: 2034-07-16
Also published as: CN104098594B

Abstract

本发明提供通式(I)所示的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，以该类化合物为活性成分的药物组合物，及其在制备抗肿瘤药物和抑制剂中的应用。活性筛选表明本发明的通式(I)生物素-鬼臼毒素酯化衍生物具有较好的抗肿瘤活性。同时提供该类化合物的制备方法：利用鬼臼毒素为先导化合物，通过对其4位羟基、4'位甲氧基进行结构改造，以及生物素与鬼臼毒素之间不同链的连接合成一系列该类化合物。本发明利用生物素这一细胞生长所必需的物质对鬼臼毒素开展结构修饰，增加修饰物的癌细胞靶向选择性，有选择性的向癌细胞分布，能达到更好的治疗效果。同时，由于生物素易溶于水，引入到鬼臼毒素分子中能解决药物水溶性的问题。

Description

生物素-鬼臼毒素酯化衍生物及其药物组合物和其制备方法与应用

技术领域

本发明属药物化合物领域，具体地说，主要涉及生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，以其为活性成分的药物组合物，它们的制备方法及其在制备抗肿瘤药物和抑制剂中的应用。

背景技术

鬼臼毒素属于木脂素类化合物中的环木脂内酯类化合物，具有显著的抗肿瘤活性，其与秋水仙碱有类似的抗肿瘤作用机制，都是通过阻止细胞有丝分裂中期微管束的形成来抑制肿瘤的生长(Russell-Jones,G等，J.Inorg.Biochem.2004,98,1625–1633.)。由于鬼臼毒素的毒性及不良反应，促使了以鬼臼毒素为先导化合物的结构修饰研究。依托泊苷(VP-16)及替尼泊苷(VM-26)已成为应用于临床的抗癌药物，他们对小细胞肺癌、睾丸癌、急性白血病以及恶性淋巴肿瘤等多种癌症均有良好的疗效(高蓉，田暄等，农药学学报，2002,2,1–6.石建功等，木脂素化学，(刊名)2009,138–140.)。

尽管上述的依托泊苷(VP-16)及替尼泊苷(VM-26)已经在临床上使用多年，仍存在水溶性差，骨髓抑制，容易产生耐药性等问题，从而限制了其应用。

前人对鬼臼毒素的结构与活性关系的研究例子有：1999年Claude Monneret等人提出了鬼臼毒素类化合物的构效关系：间二氧戊环是最佳选择；E环自由旋转和2α、3β构型是活性所必须的；4β构型的抗肿瘤活性高于4α构型；4-OH是有效的修饰位点，见下述结构：

生物素是维生素H，又称辅酶R，是水溶性B族维生素。生物素是乙酰—CoA羧化酶、丙酮酸羧化酶、丙酰—CoA羧化酶和3—甲基巴豆酰—CoA羧化酶4种羧化酶辅酶成分，是糖、脂肪及蛋白质代谢不可或缺的物质，也是维持正常成长、发育及健康必要的营养素，无法经由人体合成，最早于1936年两位德国科学家Kogl和Tonnis从煮熟的鸭蛋黄中分离得到。最新的研究表明，生物素可以选择性地将抗癌药物输送到具生物素受体过量表达的癌细胞而发挥其抗癌活性，比如白血病、卵巢癌、结肠癌、肥大细胞瘤、肺癌、肾癌和乳腺癌等(Chen,S.等，Bioconjug.Chem.2010,21,979–987.)。

迄今为止，现有技术没有生物素-鬼臼毒素酯化衍生物的报道，更没有该类化合物具备抗肿瘤活性的报道。

发明内容

为了克服现有技术存在的上述缺点，寻找高效低毒的鬼臼毒素抗肿瘤新药，本发明的目的是提供一类鬼臼毒素衍生物，主要指生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，意图利用鬼臼毒素为先导化合物，通过结构改造，合成一系列具有抗肿瘤活性的化合物，研发出抗肿瘤活性较高、毒性较低的抗肿瘤药物，以其为活性成分的药物组合物，其制备方法及其在制备抗肿瘤药物和抑制剂中的应用。本发明利用生物素这一细胞生长所必需的物质对鬼臼毒素开展结构修饰，增加修饰物的癌细胞靶向选择性，有选择性的向癌细胞分布，能达到更好的治疗效果。同时，由于生物素易溶于水，引入到鬼臼毒素分子中能解决药物水溶性的问题。本发明对鬼臼毒素进行了一系列的结构改造工作。

本发明的下述技术方案是用于实现上述的发明目的的：

下述通式(I)所示的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，

其中：

R为CH₃或H；

X为O，NH，S，Si；或者结构片段

或者结构片段其中Z为O，NH，S，Si，m为0–6，r为0或1，Y为O，NH或者结构片段

如所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，优选下述结构式所示的化合物3-15：

药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物和药学上可接受的载体。

所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物在制备药物中的应用。

所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物在制备抗肿瘤抑制剂中的应用。

所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

制备所述的通式I的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物的方法，将鬼臼毒素，鬼臼毒素制备而成的4β-OH-鬼臼毒素、4β-OH-4'-O-去甲基鬼臼毒素与D-生物素、6-生物素己酸溶解在DMF中，再加入4-二甲氨基吡啶DMAP和N,N'-二异丙基碳二亚胺DIC，在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿:甲醇洗脱得到生物素-鬼臼毒素衍生物；或者由鬼臼毒素制备而成的4β-氨基-鬼臼毒素、4β-氨基-4'-O-去甲基鬼臼毒素与D-生物素、6-生物素己酸溶解在DMF中，再加入4-二甲氨基吡啶DMAP和N,N'-二异丙基碳二亚胺DIC，在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿:甲醇洗脱得到生物素-鬼臼毒素衍生物；或者由鬼臼毒素制备而成的4'-O-甲基-4-脱氧-4β-叠氮化合物，4'-O-去甲基-4-脱氧-4β-叠氮化合物与端炔醇、端炔氨类化合物溶于四氢呋喃中，加入1:2的叔丁醇-水和醋酸铜，再滴加抗坏血酸水溶液经过Click反应后得到4β-(1,2,3-三唑)鬼臼毒素衍生物，再用4β-(1,2,3-三唑)鬼臼毒素衍生物与D-生物素、6-生物素己酸溶解在DMF中，再加入4-二甲氨基吡啶DMAP和N,N'-二异丙基碳二亚胺DIC，在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿:甲醇洗脱得到生物素-鬼臼毒素衍生物。

更具体地，本发明提供的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物I可按如下的方法制备：

鬼臼毒素(1eq.)，鬼臼毒素制备而成的4β-OH-鬼臼毒素(1eq.)、4β-OH-4'-O-去甲基鬼臼毒素(1eq.)与D-生物素(3eq.)、6-生物素己酸(1eq.)溶解在DMF(2.5mL)中，再加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(1eq.)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)(6eq.)在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿:甲醇(15:1→9:1)洗脱得到生物素-鬼臼毒素酯化衍生物；或者由鬼臼毒素制备而成的4β-氨基-鬼臼毒素(1eq.)、4β-氨基-4'-O-去甲基鬼臼毒素(1eq.)与D-生物素(3eq.)、6-生物素己酸(3eq.)溶解在DMF(2.5mL)中，再加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(1eq.)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)(6eq.)在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿：甲醇(15:1→9:1)洗脱得到生物素-鬼臼毒素酯化衍生物；或者由鬼臼毒素制备而成的4'-O-甲基-4-脱氧-4β-叠氮化合物(1eq.)，4'-O-去甲基-4-脱氧-4β-叠氮化合物(1eq.)与端炔醇、端炔氨类化合物(1eq.)溶于四氢呋喃中(1mL)，加入叔丁醇-水(1:2)(1.5mL)和醋酸铜(0.1eq.)，再滴加抗坏血酸水溶液(1.0M/L的水溶液,3d)经过Click反应后得到4β-(1,2,3-三唑)鬼臼毒素衍生物，4β-(1,2,3-三唑)鬼臼毒素衍生物(1eq.)与D-生物素(3eq.)、6-生物素己酸(3eq.)溶解在DMF(2.5mL)中，再加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(1eq.)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)(6eq.)在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿：甲醇(15:1→9:1)洗脱得到生物素-鬼臼毒素酯化衍生物。

本发明的其中一个目的是提供生物素-鬼臼毒素酯化衍生物体外抗肿瘤活性筛选的数据。体外筛选发现本发明的生物素-鬼臼毒素衍生物对多种肿瘤细胞株，包括HL-60(leukemia),SMMC-7721(hepatoma),A-549(lung cancer),MCF-7(breast cancer),and SW480(colon cancer).等均有较好的抑制增长作用，显示出较依托泊苷更强的细胞毒活性，其中化合物2,3,4,5,7,8的作用最为突出，对上述细胞株的IC₅₀值在0.13–3.09μM之间。

本发明的技术方案是在总结前人对鬼臼毒素的结构与活性的研究，得出鬼臼毒素的构效关系：间二氧戊环是最佳选择；E环自由旋转和2α、3β构型是活性所必须的；4β构型的抗肿瘤活性高于4α构型；4-OH是有效的修饰位点。生物素可以选择性地将抗癌药物输送到具生物素受体过量表达的癌细胞而发挥其抗癌活性。基于此，本发明认为利用生物素这一细胞生长所必需的物质对鬼臼毒素开展结构修饰，将能增加修饰物的癌细胞靶向选择性，有选择性的向癌细胞分布，达到更好的治疗效果。同时，由于生物素易溶于水，引入到鬼臼毒素分子中能解决药物水溶性的问题。基于此，本发明利用鬼臼毒素为先导化合物，通过结构改造，合成了一系列具有抗肿瘤活性的化合物，即一类生物素-鬼臼毒素衍生物，进而提供了以其为活性成分、抗肿瘤活性较高、毒性较低的抗肿瘤药物组合物，该药物组合物还包括药学上可接受的载体。

本发明所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如：稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、以及和聚乙二醇等。另外还可以在组合物中加入其他辅剂如香味剂、甜味剂等。

本发明化合物可以药物组合物的形式通过注射、口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、粉剂、粒剂、胶囊等，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、酏剂等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油性悬浮剂等。优选的形式是片剂、胶囊和注射剂。

本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使活性成分与一种或多种载体混合，然后将其制成所需的剂型。

本发明的药物组合物优选含有重量比为0.1％～99.5％的活性成分，最优选含有重量比为0.5％～95％的活性成分。

本发明化合物的施用量可根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～10mg/kg体重，优选0.1～5mg/kg体重。可以一次或多次施用。

附图说明：

图1为本发明生物素-鬼臼毒素酯化衍生物的结构通式(I)；

图2为本发明化合物的合成路线流程图；

图3为本发明化合物生物素-鬼臼毒素酯化衍生物3-15结构式。

具体实施方式：

下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但不以任何方式来限制本发明。

实施例1：

本发明的合成通式如图2所示。

实施例2：

化合物4β-氨基-(生物素)-4-脱氧-4′-去甲基鬼臼毒素的制备：(由图2中第四步、第五步、第六步、第十步构成)

第四步：制备4'-O-去甲基鬼臼毒素(V)：

将2.1g鬼臼毒素(5.0mmol)溶解在干燥的二氯甲烷溶液中，碘化钠(2.3g,15.0mmol)加入到上述的溶液中，搅拌5分钟。冰水浴冷却反应液至0℃，1.48甲烷磺酸(15.0mmol)缓慢的滴加到上述的反应液中继续搅拌，然后在升高到室温继续反应5小时。氮气保护，除去在反应过程中产生的HI气体。然后，在减压下除去上述反应中的溶剂，不做任何处理进行下一步的操作。把上面的粗产物溶解在丙酮-水(25mL-25mL)混合溶剂中，加入碳酸钡(2.0g,10.0mmol),在40℃反应条件下反应30分钟，向上述混合溶液中加入100mL二氯甲烷之后，再倒入500ml的10％的硫代硫酸钠的水溶液中，用二氯甲烷萃取出有机相，无水硫酸钠干燥、浓缩得到的粗产物用硅胶色谱纯化(洗脱剂：氯仿：甲醇＝92:8)，得产物VII1.8g，收率：90％，白色固体，¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ7.12(s,1H,C⁸-H),6.94(s,1H,C⁵-H),6.33(s,2H,C^2',C^6'-H),5.93(d,2H,J＝12.7Hz,OCH₂O),4.58(d,1H,J＝5.4Hz,C⁴-H),4.54(d,1H,J＝5.2Hz),4.29(s,1H,C¹¹-CH_β),4.26(d,1H,J＝8.2Hz,C¹¹-CH_α),3.67(s,6H,3',5'-OCH₃),3.31(dd,1H,J＝10.2Hz,17.3Hz,C²-H),2.87(m,1H,C³-H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz):δ175.6(C-12),148.7(C-7),147.9(C-3'),147.9(C-5'),147.7(C-6),135.9(C-1'),134.2(C-9),133.0(C-10),131.5(C-4'),110.5(C-8),100.5(C-5),109.5(C-2'),109.5(C-6'),102.1(C-13),68.3(C-11),66.7(C-4),56.6(3',5'-OCH₃),44.6(C-1),41.1(C-2),39.4(C-3)；MS-ESI m/z(％):400([M+H]⁺,100).

第五步：制备4'-O-去甲基-4-脱氧-4β-叠氮鬼臼毒素(VI)：

将4'-O-去甲基鬼臼毒素(0.84g,2.1mmol)和叠氮钠(0.7g,10.5mmol)溶解在10mL分析纯的氯仿中，缓慢滴加2.0mL三氟乙酸(TFA,26.4mmol)，反应搅拌1小时，为了避免反应中形成凝胶状的混合物，需要滴加额外的4.0mL三氟乙酸(52.8mL)。用TLC跟踪反应的进行。反应完全后，将反应混合液倒入碳酸氢钠饱和溶液中，再用40mL氯仿萃取2次，合并有机相并用无水硫酸钠干燥、浓缩得到粗产物用硅胶色谱纯化(洗脱剂：乙酸乙酯：丙酮＝2:1)，得产物VI716mg，收率：80％，白色固体，¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ7.07(s,1H,C⁵-H),6.60(s,1H,C⁸-H),6.38(s,2H,C^2',C^6'-H),6.05(d,2H,J＝0.6Hz,OCH₂O),4.61(q,2H,J＝3.7Hz,5.3Hz,C⁴-H,C¹-H),4.36(dd,2H,J＝8.5Hz,10.3Hz,C¹¹-CH₂),3.66(s,6H,3',5'-OCH₃),3.11(dd,1H,J＝4.7Hz,14.1Hz,C²-H),2.96(m,1H,C³-H)；¹³C NMR(CDCl₃,100MHz):δ174.3(C-12),148.9(C-3'),148.6(C-5'),148.0(C-7),148.0(C-6),136.0(C-1'),133.9(C-4'),131.2(C-9),129.4(C-10),110.8(C-5),109.2(C-2'),109.2(C-6'),107.5(C-8),102.6(C-13),70.9(C-11),63.9(C-4),56.4(3',5'-OCH₃),45.7(C-1),44.4(C-2),38.6(C-3)；MS-ESI m/z(％):448([M+Na]⁺,100).

第六步：制备4'-O-去甲基-4-脱氧-4β-氨基鬼臼毒素(VII)：

将4'-O-去甲基-4-脱氧-4β-叠氮鬼臼毒素(0.14g,0.33mmol)溶剂在10.0mLTHF-H₂O(9:1)的混合溶液中，充分溶解之后加入三苯基膦(0.3g,1.0mmol)在室温条件下搅拌反应过夜，用TLC跟踪反应的进行。反应完全后，减压除去溶剂得到粗产物用硅胶色谱纯化(洗脱剂：氯仿：甲醇＝15:1)，得产物VII107mg，收率：76％，白色固体，¹H NMR(CDCl₃,400MHz):δ6.73(s,1H,C⁵-H),6.46(s,1H,C⁸-H),6.40(s,2H,C^2',C^6'-H),5.92(m,2H,OCH₂O),4.28(d,1H,J＝13.8Hz,C⁴-H),3.76(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.72–3.70(m,1H,C¹-H),3.64–3.57(m,C¹¹-H_α),3.48–3.44(m,1H,C¹¹-H_β),3.31–3.30(m,1H,C³-H),2.73(dd,1H,J＝6.2Hz,8.8Hz,C²-H),2.15(s,2H,NH₂)；¹³C-NMR(CD₃OD,100MHz)δ181.1(C-12),149.3(C-3',C-5'),148.9(C-7),147.4(C-6),136.7(C-9),136.4(C-1'),135.6(C-4'),130.3(C-10),112.6(C-5),107.7(C-8),107.2(C-2',C-6'),102.5(OCH₂O),62.5(C-11),57.6(C-2),56.7(C^3',C^5'-OCH₃),52.7(C-4),47.3(C-1),46.6(C-3)；MS-ESI m/z(％):422([M+Na]⁺,100).

第十步：制备4β-氨基-(生物素)-4-脱氧-4′-去甲基鬼臼毒素：

将4'-O-去甲基-4-脱氧-4β-氨基鬼臼毒素VII(36.0mg,0.09mmol)和D-生物素(66.0mg,0.27mmol)溶解在DMF(2.5mL)，充分溶解之后加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(11.0mg,0.09mmol)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)(83.7μL,0.54mmol)在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿：甲醇(15:1→9:1)洗脱得到生物素-鬼臼毒素酯化衍生物(7.0mg)，收率：11％，白色固体，¹H-NMR(CDCl₃,600MHz):δ6.92(d,1H,J＝6.0Hz,NH),6.76(s,1H,C⁵-H),6.45(s,1H,C⁸-H),6.38(s,2H,C^2',C^6'-H),5.91–5.87(m,2H,OCH₂O),5.06(t,1H,J＝12.0Hz,C¹-H),4.52(d,1H,J＝6.0Hz,C⁴-H),4.41–4.39(m,1H,CHNH),4.34(t,1H,J＝6.0Hz,C¹¹-CH_α),4.22–4.20(m,1H,CHNH),4.10(t,1H,J＝12.0Hz,C¹¹-CH_β),3.70(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.07–3.04(m,1H,CHS),2.83–2.79(m,2H,CH₂S),2.69–2.64(m,1H,C³-H),2.57(t,2H,J＝6.0Hz),2.23–2.19(m,1H,C²-H),1.66–1.59(m,2H),1.37–1.32(m,2H),1.21–1.19(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,150MHz)δ175.0(C-12),174.2(C＝O),164.5(C＝O),147.7(C-7),147.7(C-6),146.6(C-3',C-5'),134.7(C-1'),132.0(C-4'),131.6(C-9),130.7(C-10),110.4(C-5),109.2(C-2',C-6'),106.6(C-8),101.7(OCH₂O),71.8(C-11),69.7(C-4),61.9(CHNH),60.4(CHNH),57.1(C^3',C^5'-OCH₃),56.1(CHS),53.9(CH₂S),52.1(C-2),46.3(C-1),43.9(C-3),40.8,36.0,28.5,23.7；ESIMS:m/z660[M+Cl]^-,HRESIMS:calcd for C₃₁H₃₅N₃O₉SH[M+H]⁺626.2167,found626.2145.

实施例3–15：

化合物3–15的制备(合成通式如图2所示)：

依照实施例2的方法，将鬼臼毒素(0.1–0.2mmol)，或者鬼臼毒素制备而成的4β-OH-鬼臼毒素(0.1–0.2mmol)，或者4β-OH-4'-O-去甲基鬼臼毒素(0.1–0.2mmol)，或者4β-氨基-鬼臼毒素(0.05–0.2mmol)，或者4β-氨基-4'-O-去甲基鬼臼毒素(0.05–0.2mmol)，4β-(1,2,3-三唑)鬼臼毒素衍生物(0.05–0.2mmol)与D-生物素(0.1–0.2mmol)，或者6-生物素己酸(0.1–0.2mmol)溶解在DMF(2.5mL)中，再加入4-二甲氨基吡啶(DMAP)(1eq.)和N,N'-二异丙基碳二亚胺(DIC)(6eq.)在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿：甲醇(15:1→9:1)洗脱得到生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，收率为：11–88％。

生物素-鬼臼毒素衍生物(实施例3-15化合物)的结构数据：

分子式：C₃₂H₃₆N₂O₁₀S

分子量：640

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CD₃OD,500MHz)δ6.83(s,1H,C⁵-H),6.60(s,1H,C⁸-H),6.52(s,2H,C^2',C^6'-H),5.98(s,2H,OCH₂O),5.67(d,1H,J＝5.0Hz,C⁴-H),4.46–4.42(m,1H,C¹-H),4.30–4.29(m,2H,2×CHNH),4.27–4.23(m,1H,C¹¹-CH_α),4.10–4.09(m,1H,C¹¹-CH_β),3.70(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.62(s,3H,C^4'-OCH₃),3.05–3.01(m,1H,CHS),2.79(dd,1H,J＝5.0Hz,15.0Hz,C²-H),2.57–2.42(m,3H,CH₂S,C³-H),2.16(t,2H,J＝10.0Hz),1.58–1.52(m,2H),1.42–4.41(m,2H),1.26–1.21(m,2H)；¹³C-NMR(CD₃OD,100MHz)δ177.5(C-12),172.6(C＝O),162.8(C＝O),152.7(C-3',C-5'),147.5(C-7),146.3(C-6),138.4(C-1'),136.0(C-4'),132.4(C-9),126.8(C-10),109.2(C-5),108.2(C-8),105.6(C-2',C-6'),101.3(OCH₂O),79.2(C-4),72.1(C-11),61.0(CHNH),60.0(CHNH),59.2(C^4'-OCH₃),55.9(C^3',C^5'-OCH₃),55.3(CHS),43.6(C-2),43.5(C-1),39.7(C-3),33.4(CH₂S),28.0,27.9,24.5,24.3；ESIMS:m/z641[M+H]⁺,HRESIMS:calcd for C₃₂H₃₆N₂O₁₀SH[M+H]⁺641.2138,found641.2163.

分子式：C₃₈H₄₇N₃O₁₁S

分子量：753

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ6.72(s,1H,C⁵-H),6.50(s,1H,C⁸-H),6.35(s,2H,C^2',C^6'-H),5.96(d,2H,J＝4.0Hz,OCH₂O),5.86(d,1H,J＝9.1Hz,C⁴-H),4.57(d,1H,J＝4.3Hz,C¹-H),4.50–4.48(m,1H,C¹¹-CH_α),4.35–4.27(m,2H,2×CHNH),4.17(t,1H,J＝8.0Hz,C¹¹-CH_β),3.77(s,3H,C^4'-OCH₃),3.73(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.20–3.17(m,2H,CHS,C³-H),3.13–3.10(m,1H,CH_aS),2.92(dd,1H,J＝4.0Hz,16.0Hz,C²-H),2.79–2.69(m,2H),2.42(t,2H,J＝8.0Hz),2.18(t,2H,J＝8.0Hz),1.68–1.64(m,4H),1.52–1.49(m,2H),1.40–1.35(m,2H),1.31–1.29(m,2H),1.18–1.17(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ174.1(C-12),173.8(C＝O),173.5(C＝O),164.1(C＝O),152.5(C-3',C-5'),148.1(C-7),147.5(C-6),136.9(C-1'),134.9(C-4'),132.2(C-9),128.3(C-10),109.7(C-5),108.0(C-2',C-6'),106.9(C-8),101.6(OCH₂O),73.4(C-4),71.3(C-11),61.8(CHNH),60.7(CHNH),60.3(C^4'-OCH₃),56.1(C^3',C^5'-OCH₃),55.7(CHS),45.4(C-2),43.6(C-1),40.5(C-3),39.2,38.7(CH₂S),35.8,34.1,29.2,28.2,28.0,26.4,25.3,24.5；ESIMS:m/z789[M+Cl]^-,HRESIMS:calcd for C₃₈H₄₇N₃O₁₁SCl[M+Cl]^-789.2625,found789.2625.确认所得化合物与文献报道一致(T.Saitoh,等，Bioorganic&Medicinal Chemistry,2008,16,5815–5825.)

分子式：C₃₂H₃₆N₂O₁₀S

分子量：640

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ6.86(s,1H,C⁵-H),6.54(s,1H,C⁸-H),6.26(s,2H,C^2',C^6'-H),6.14(d,1H,J＝4.0Hz,C⁴-H),5.98(d,1H,J＝4.0Hz,OCH₂O),4.66(d,1H,J＝4.0Hz,C¹-H),4.52–4.49(m,1H,C¹¹-CH_α),4.36–4.28(m,2H,2×CHNH),3.89(dd,1H,J＝9.0Hz,10.7Hz,C¹¹-CH_β),3.79(s,3H,C^4'-OCH₃),3.73(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.24(dd,1H,J＝4.0Hz,12.0Hz,C²-H),3.15–3.10(m,1H,C³-H),3.01–2.95(m,1H,CHS),2.90(dd,1H,J＝8.0Hz,16.0Hz,CH_aS),2.75–2.71(m,1H,CH_bS),2.38(t,2H,J＝8.0Hz),1.73–1.64(m,4H),1.45–1.43(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ174.2(C-12),173.3(C＝O),163.7(C＝O),152.6(C-3',C-5'),148.8(C-7),147.4(C-6),137.2(C-1'),134.6C-4'),132.9(C-9),127.8(C-10),110.2(C-5),109.5(C-8),108.0(C-2',C-6'),101.7(OCH₂O),68.0(C-4),67.5(C-11),62.1(CHNH),60.7(C^4'-OCH₃),60.3(CHNH),56.2(C^3',C^5'-OCH₃),55.4(CHS),43.8(C-2),41.5(C-1),40.4(C-3),36.7(CH₂S),34.0,28.4,28.1,24.7；ESIMS:m/z663[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd for C₃₂H₃₆N₂O₁₀SNa[M+Na]⁺663.1983,found663.1980.

分子式：C₃₈H₄₇N₃O₁₁S

分子量：753

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ6.84(s,1H,C⁵-H),3.54(s,1H,C⁸-H),6.26(s,2H,C^2',C^6'-H),6.14(d,2H,J＝4.0Hz,C⁴-H),5.99(d,2H,J＝4.0Hz,OCH₂O),4.66(d,1H,J＝4.0Hz,C¹-H),4.52(brs,1H,C¹¹-CH_α),4.37–4.33(m,2H,2×CHNH),3.88(t,1H,J＝12.0Hz,C¹¹-CH_β),3.79(s,3H,C^4'-OCH₃),3.73(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.25–3.20(m,2H,CHS,C³-H),3.15–3.14(m,1H,CH_aS),2.89(dd,1H,J＝4.0Hz,12.0Hz,C²-H),2.77–2.73(m,1H,CH_bS),2.36(t,2H,J＝8.0Hz),2.24(t,2H,J＝4.0Hz),1.68–1.63(m,4H),1.53–1.50(m,2H),1.44–1.41(m,2H),1.35–1.33(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ174.3(C-12),173.7(C＝O),173.3(C＝O),163.9(C＝O),152.6(C-3',C-5'),148.9(C-7),147.4(C-6),137.2(C-1'),134.6(C-4'),132.8(C-9),127.8(C-10),110.2(C-5),109.5(C-8),108.0(C-2',C-6'),101.7(OCH₂O),67.9(C-4),67.5(C-11),61.9(CHNH),60.7(C^4'-OCH₃),60.4(CHNH),56.2(C^3',C^5'-OCH₃),55.6(CHS),43.7(C-2),41.5(C-1),40.5(C-3),39.3(CH₂S),36.7,35.7,34.1,29.1,28.0,27.9,26.4,25.7,24.5；ESIMS:m/z788[M+Cl]^-,HRESIMS:calcd for C₃₈H₄₇N₃O₁₁SCl[M+Cl]^-788.2625,found788.2627.

分子式：C₃₁H₃₄N₂O₁₀S

分子量：626

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(C₅D₅N,500MHz)δ7.64(s,1H,C⁵-H),7.26(s,1H,C⁸-H),7.24(s,2H,C^2',C^6'-H),6.02(d,2H,J＝11.3Hz,OCH₂O),4.89(d,1H,J＝5.3Hz,C⁴-H),4.69(t,1H,J＝2.3Hz,C¹-H),4.54(t,1H,J＝2.1Hz,C¹¹-CH_α),4.40–4.37(m,2H,2×CHNH),3.85–3.84(m,1H,C¹¹-CH_β),3.71(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.22–3.19(m,2H,C³-H,CHS),3.92(dd,1H,J＝4.8Hz,9.6Hz,C²-H),2.89–2.86(m,2H,CH₂S),2.63(t,2H,J＝7.3Hz),1.77–1.74(m,2H),1.61–1.57(m,2H),1.28–1.26(m,2H)；¹³C-NMR(C₅D₅N,125MHz)δ175.7(C-12),171.3(C＝O),164.3(C＝O),152.3(C-3',C-5'),148.4(C-7),147.7(C-7),139.5(C-1'),136.1(C-4'),134.4(C-9),132.0(C-10),110.6(C-5),110.4(C-8),108.5(C-2',C-6'),101.9(OCH₂O),68.4(C-11),66.3(C-4),62.5(CHNH),60.6(CHNH),56.3(C^3',C^5'-OCH₃),56.2(CHS),44.7(C-2),41.1(C-1),41.0(CH₂S),39.7(C-3),33.9,29.1,28.8,25.4；ESIMS:m/z661[M+Cl]^-,HRESIMS:calcd for C₃₁H₃₄N₂O₁₀SH[M+H]⁺627.2007,found627.1978.

分子式：C₃₇H₄₅N₃O₁₁S

分子量：739

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ6.88(s,1H,C⁵-H),6.50(s,1H,C⁸-H),6.29(s,2H,C^2',C^6'-H),5.96–5.93(m,2H,OCH₂O),4.80(d,1H,J＝4.0Hz,C⁴-H),4.61(d,1H,J＝4.0Hz,C¹-H),4.48(m,1H,C¹¹-CH_α),4.36–4.32(m,2H,2×CHNH),4.30–4.27(m,1H,C¹¹-CH_β),3.65(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.31(dd,1H,J＝4.0Hz,12.0Hz,CH_aS),3.22–3.19(m,2H),3.14–3.10(m,1H,C³-H),2.86(dd,1H,J＝4.0Hz,12.0Hz,C²-H),2.79–2.76(m,1H,CH_bS),2.56(t,2H,J＝8.0Hz),2.35–2.31(m,4H),2.17–2.12(m,2H),1.76–1.68(m,2H),1.66–1.58(m,2H),1.56–1.48(m,2H),1.43–1.36(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,150MHz)δ175.8(C-12),173.8(C＝O),171.9(C＝O),163.9(C＝O),151.5(C-3',C-5'),148.4(C-7),147.5(C-6),138.2(C-1'),132.3(C-4'),131.5(C-9),127.7(C-10),110.4(C-5),109.6(C-8),107.7(C-2',C-6'),101.7(OCH₂O),68.1(C-4),66.3(C-11),62.1(CHNH),60.5(CHNH),56.3(C^3',C^5'-OCH₃),55.6(CHS),44.1(C-2),40.7(C-1),40.5(C-3),39.4(CH₂S),38.6,35.8,33.7,29.0,28.3,28.1,26.2,25.6,24.6；ESIMS:m/z738[M-H]^-,HRESIMS:calcd forC₃₇H₄₅N₃O₁₁SH[M+H]⁺740.2848,found740.2809.

分子式：C₃₂H₃₇N₃O₉S

分子量：639

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(C₅D₅N,500MHz)δ7.41(s,1H,NH),6.90(s,1H,C⁵-H),6.70(s,2H,C^2',C^6'-H),6.67(s,1H,C⁸-H),5.96(d,2H,J＝15.0Hz,OCH₂O),4.84(s,1H,C⁴-H),4.58(d,1H,J＝2.3Hz,C¹-H),4.56–4.52(m,2H,2×CHNH),4.37–4.34(m,1H,C¹¹-CH_α),4.32–4.28(m,1H,C¹¹-CH_β),3.90(s,3H,C^4'-OCH₃),3.69(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.38(t,1H,J＝5.0Hz,CHS),3.17–3.12(m,1H,C³-H),3.02(s,2H,CH₂S),2.94–2.89(m,1H,C²-H),2.18–2.13(m,2H),1.79–1.72(m,2H),1.46–1.42(m,2H),1.40–1.37(m,2H)；¹³C-NMR(C₅D₅N,125MHz)δ178.1(C-12),173.2(C＝O),164.2(C＝O),154.2(C-3',C-5'),148.0(C-7),146.5(C-6),141.3(C-1'),136.4(C-4'),129.5(C-9),124.1(C-10),112.2(C-5),107.2(C-5,C-2',C-6'),101.7(OCH₂O),64.2(C-4),62.5(C-11),60.7(CHNH),60.6(CHNH),56.8(C^4'-OCH₃),56.4(C^3',C^5'-OCH₃),56.3(CHS),51.7(C-2),47.2(C-1),42.9(C-3),41.1(CH₂S),34.1,29.0(2),25.3；ESIMS:m/z662[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd forC₃₂H₃₇N₃O₉SNa[M+Na]⁺662.2143,found662.2145.

分子式：C₃₈H₄₈N₄O₁₀S

分子量：752

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.48(s,1H,NH),6.66(s,1H,C⁵-H),6.46(s,1H,C⁸-H),6.29(s,2H,C^2',C^6'-H),5.94-5.90(m,2H,OCH₂O),4.50(s,1H,C⁴-H),4.34-4.32(m,2H,C¹-H,C¹¹-CH_α),4.19-4.17(m,2H,2×CHNH),4.07(dd,1H,J＝8.0Hz,12.0Hz,C¹¹-CH_β),3.81(s,3H,C^4'-OCH₃),3.76(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.19–3.13(m,3H,CHS,C³-H,CH_aS),2.89–2.85(m,3H,CH_bS,CH₂NH),2.75–2.72(m,1H,C²-H),2.30–2.23(m,4H),1.69–1.64(m,4H),1.51–1.47(m,4H),1.45–1.42(m,2H),1.27–1.24(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ178.2(C-12),173.8(C＝O),173.4(C＝O),164.1(C＝O),153.2(C-3',C-5'),147.6(C-7),146.0(C-6),140.0(C-1'),136.7(C-4'),134.2(C-9),128.4(C-10),111.8(C-5),106.7(C-8),105.8(C-2',C-6'),101.2(OCH₂O),63.4(C-4),61.9(C-11),60.8(C^4'-OCH₃),60.4(CHNH),56.6(CHNH),56.2(C^3',C^5'-OCH₃),55.6(CHS),50.9(C-2),46.2(C-1),42.1(C-3),40.5(CH₂S),39.3,35.6,33.8,28.9,28.1,27.9,26.2,25.7,24.4；ESIMS:m/z775[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd for C₃₈H₄₈N₄O₁₀SNa[M+Na]⁺753.3164,found753.3154.

分子式：C₃₇H₄₆N₄O₁₀S

分子量：738

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CD₃OD,500MHz)δ8.28(s,1H,NH),7.78(t,1H,J＝5.5Hz,NH),6.83(s,1H,C⁵-H),6.45(s,1H,C⁸-H),6.38(s,2H,C^2',C^6'-H),5.97–5.92(m,2H,OCH₂O),4.29–4.26(m,1H,C¹¹-CH_α),4.24(s,1H,C⁴-H),4.16(s,1H,C¹-H),3.64(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.30–3.27(m,1H,CHS),3.09–3.05(m,1H,C³-H),3.02–2.99(m,2H,CH₂S),2.79(dd,1H,J＝5.0Hz,10.0Hz,C²-H),2.54–2.51(m,2H),2.02(t,2H,J＝5.0Hz),1.62–1.56(m,4H),1.50–1.44(m,2H),1.42–1.38(m,2H),1.35–1.30(m,2H),1.29–1.21(m,2H)；¹³C-NMR(CD₃OD,125MHz)δ177.2(C-12),171.9(C＝O),170.8(C＝O),162.7(C＝O),151.4(C-3',C-5'),146.6(C-7),145.2(C-6),143.4(C-1'),136.1(C-4'),128.4(C-9),126.7(C-10),111.1(C-5),106.9(C-8),105.4(C-2',C-6'),100.9(OCH₂O),61.1(C-4),60.6(C-11),59.2(CHNH),55.9(C^3',C^5'-OCH₃),55.4(CHNH),54.9(CHS),50.1(C-2),45.6(C-1),44.8(C-3),38.2(CH₂S),35.2,33.0,28.8,28.2,28.0,25.6,25.3,24.3；ESIMS:m/z761[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd forC₃₇H₄₆N₄O₁₀SH[M+Na]⁺761.2827,found761.2829.

分子式：C₃₅H₃₉N₅O₁₀S

分子量：721

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.39(s,1H,CH-N),6.65(s,1H,C⁵-H),6.62(s,1H,C⁸-H),6.03–6.02(m,2H,OCH₂O),5.23–5.15(m,3H,C⁴-H,CH₂O),4.76(d,1H,J＝4.2Hz,C¹-H),4.59–4.53(m,1H,C¹¹-CH_α),4.43–4.35(m,2H,2×CHNH),4.21(t,1H,J＝4.0Hz,C¹¹-CH_β),3.81(s,3H,C^4'-OCH₃),3.77(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),2.25–2.23(m,1H,CHS),3.16–3.09(m,2H,CH₂S),2.95–2.90(m,1H,C³-H),2.79–2.75(m,1H,C²-H),2.38–2.35(m,2H),1.86–1.83(m,2H),1.65–1.63(m,2H),1.42–1.40(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ173.6(C-12),173.6(C＝O),164.0(C＝O),152.7(C-3',C-5'),149.4(C-7),148.0(C-6),142.9(C-N＝N),137.4(C-1'),134.3(C-4'),133.2(C-9),124.5(C-10),124.3(CH-N),110.5(C-5),108.8(C-8),108.1(C-2',C-6'),102.0(OCH₂O),67.4(C-11),62.0(C-4),60.7(C^4'-OCH₃),60.3(CHNH),58.7(CHNH),57.3(CH₂O),56.3(C^3',C^5'-OCH₃),55.4(CHS),43.6(C-2),41.5(C-1),40.4(CH₂S),37.1(C-3),33.6,28.1,25.6,24.6；ESIMS:m/z744[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd for C₃₅H₃₉N₅O₁₀SNa[M+Na]⁺744.2310,found744.2356.

分子式：C₄₁H₅₀N₆O₁₁S

分子量：834

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.40(s,1H,CH-N),6.75(s,1H,C⁵-H),6.69(s,1H,C⁸-H),6.30(s,2H,C^2',C^6'-H),6.11(d,2H,J＝3.3Hz,OCH₂O),6.00(d,1H,J＝4.8Hz,C⁴-H),5.15(s,2H,CH₂O),4.75(d,1H,J＝4.7Hz,C¹-H),4.52–4.49(m,1H,C¹¹-CH_α),4.38(s,2H,2×CHNH),4.32-4.30(m,1H,C¹¹-CH_β),3.79(s,3H,C^4'-OCH₃),3.75(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.20–3.13(m,3H,CHS,CH₂S),2.88(dd,1H,J＝4.0Hz,16.0Hz,C²-H),2.74–2.71(m,1H,C³-H),2.32(t,2H,J＝8.0Hz),2.22(t,2H,J＝8.0Hz),1.66–1.58(m,6H),1.49–1.46(m,2H),1.42–1.39(m,2H),1.30–1.28(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ173.7(C-12),173.5(C＝O),173.3(C＝O),164.0(C＝O),152.7(C-3',C-5'),149.4(C-7),148.0(C-6),142.9(C-N＝N),137.4(C-1'),134.3(C-1'),133.2(C-9),124.4(C-10),124.3(CH-N),110.5(C-5),108.8(C-8),108.1(C-2',C-6'),102.0(C-8),67.4(C-11),61.8(C-4),60.7(C^4'-OCH₃),60.3(CHNH),58.7(CHNH),57.2(CH₂O),56.3(C^3',C^5'-OCH₃),55.6(CHS),43.6(C-2),41.5(C-1),40.5(CH₂S),39.2(C-3),37.1,35.7,33.8,28.9,28.1,27.9,26.1,25.7,24.3；ESIMS:m/z857[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd for C₄₁H₅₀N₆O₁₁SH[M+H]⁺835.3331,found835.3338.

分子式：C₃₄H₃₇N₅O₁₀S

分子量：707

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.73(s,1H,CH-N),6.56(s,1H,C⁵-H),6.45(s,2H,C^2',C^6'-H),6.19(s,1H,C⁸-H),5.93(d,2H,J＝4.0Hz,OCH₂O),5.86(d,1H,J＝8.0Hz,C⁴-H),5.23–5.155(m,2H,CH₂O),4.65(d,1H,J＝4.0Hz,C¹-H),4.46–4.43(m,1H,C¹¹-CH_α),4.22–4.16(m,2H,2×CHNH),4.10(t,1H,J＝8.0Hz,C¹¹-CH_β),3.78(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.30–3.24(m,1H,C³-H),3.03–2.99(m,3H,CHS,CH₂S),2.79(dd,1H,J＝8.0Hz,16.0Hz,C²-H),2.32(t,2H,J＝8.0Hz),1.65–1.55(m,4H),1.37–1.31(m,2H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ173.6(C-12),173.5(C＝O),164.0(C＝O),148.5(C-7),147.9(C-7),146.8(C-3',C-5'),143.4(C-N＝N),134.1(C-1'),132.5(C-4'),129.9(C-9),126.6(C-10),123.1(CH-N),110.2(C-5),107.5(C-2',C-6'),106.2(C-8),101.8(OCH₂O),70.1(C-11),63.1(C-4),62.1(CHNH),60.2(CHNH),57.3(CH₂O),56.3(C^3',C^5'-OCH₃),55.4(CHS),45.8(C-2),43.6(C-1),40.2(CH₂S),38.7(C-3),33.5,28.2,28.1,24.5；ESIMS:m/z730[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd forC₃₄H₃₇N₅O₁₀SH[M+H]⁺708.2334,found708.2302.

分子式：C₄₀H₄₈N₆O₁₁S

分子量：820

性状：白色无定型粉末

波谱数据：

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz)δ7.33(s,1H,CH-N),6.57(s,1H,C⁵-H),6.55(s,1H,C⁵-H),6.29(s,2H,C^2',C^6'-H),6.05(s,1H,C⁴-H),5.96–5.92(m,2H,OCH₂O),4.72(s,1H,C¹-H),4.65(m,2H,CH₂O),4.45–4.42(m,1H,C¹¹-CH_α),4.33(s,2H,2×CHNH),4.27–4.24(m,1H,C¹¹-CH_β),3.64(s,6H,C^3',C^5'-OCH₃),3.16(s,3H,CHS,CH₂S),3.10–3.07(m,1H,C³-H),2.82(dd,1H,J＝4.0Hz,12.0Hz,C²-H),2.69–2.66(m,2H),2.53(t,2H,J＝8.0Hz),2.15–2.12(m,2H),1.70–1.65(m,2H),1.63–1.52(m,4H),1.50–1.45(m,2H),1.41–1.32(m,4H)；¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz)δ174.0(C-12),173.6(C＝O),171.7(C＝O),164.0(C＝O),151.6(C-3',C-5'),149.4(C-7),148.1(C-7),148.0(C-N＝N),137.2(C-1'),132.8(C-4'),128.0(C-9),124.7(C-10),122.9(CH-N),110.5(C-5),108.9(C-8),107.6(C-2',C-6'),102.0(OCH₂O),67.5(C-11),62.1(C-4),60.4(CHNH),58.7(CHNH),56.1(C^3',C^5'-OCH₃),55.6(CH₂O),55.4(CHS),43.6(C-2),41.4(C-1),40.1(CH₂S),39.3(C-3),37.0,35.4,33.5,28.7,28.1,27.8,26.0,25.5,24.4；ESIMS:m/z843[M+Na]⁺,HRESIMS:calcd forC₄₀H₄₈N₆O₁₁SH[M+H]⁺821.3175,found821.3195.

实施例16：

生物素-鬼臼毒素酯化衍生物对不同肿瘤细胞的体外抑制作用：

1.实验材料

细胞株：人白血病细胞株HL-60，人肝癌细胞株SMMC-7721，人肺癌细胞株A-549，人乳腺癌细胞株MCF-7，人结肠癌细胞株SW480。

检测原理：MTT法检测细胞活性

2.试验方法

1).接种细胞：用含10％胎牛血清的培养液(DMEM或者RMPI1640)配成单个细胞悬液，以每孔5000–10000个细胞接种到96孔板，每孔体积100μl，贴壁细胞提前12小时接种培养。

2).加入待测化合物溶液(固定浓度40μM初筛，在该浓度对肿瘤细胞生长抑制在50％附近的化合物设5个浓度进入梯度复筛)，每孔终体积200μl，每种处理均设3个复孔。

3).显色：37摄氏度培养48小时后，每孔加MTT溶液20μl。继续孵育4小时，终止培养，吸弃孔内培养上清液，每孔加200μl的SDS溶液(10％)，过夜孵育(温度37℃)，使结晶物充分融解。

4).比色：选择595nm波长，酶联免疫检测仪(Bio-Rad680)读取各孔光吸收值，记录结果，以浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法(Reed and Muench法)计算化合物的IC₅₀值。

3.实验结果

表1.本发明合成的14个生物素-鬼臼毒素酯化衍生物对不同肿瘤细胞的

IC₅₀(μM)值

结果表明：化合物2,3,4,5,7,8对五种受试肿瘤细胞株均有较依托泊苷更强的细胞毒活性，对上述细胞株的IC₅₀值在0.13–3.09μM之间。

实施例17：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，用少量的DMSO溶解后，按常规加注射用水，精滤，封装制成注射液。

实施例18：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，用少量的DMSO溶解后，将其溶于无菌注射用水，再无菌精滤，低温冷冻干燥后无菌封装得粉针剂。

实施例19：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，按其与赋形剂重量比为9:1的比例加入赋形剂制成粉剂。

实施例20：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂制成粒压片。

实施例21：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，按常规口服液制法制成口服液。

实施例22：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂制成胶囊。

实施例31：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，其与赋形剂重量比为3:1的比例加入赋形剂制成胶囊。

实施例33：

按实施例2–15制备的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，按其与赋形剂重量比为5:1的比例加入赋形剂制成颗粒剂。

Claims

1.下述通式(I)所示的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，

其中：

R为CH₃或H；

X为O，NH，S，Si；或者结构片段

2.如权利要求1所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物，其特征在于为下述结构式所示的化合物3-15：

3.药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1或2所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物和药学上可接受的载体。

4.权利要求1或2所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物在制备药物中的应用。

5.权利要求1或2所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物在制备抗肿瘤抑制剂中的应用。

6.权利要求1或2所述的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。

7.制备权利要求1所述的通式I的生物素-鬼臼毒素酯化衍生物的方法，其特征在于将鬼臼毒素、鬼臼毒素制备而成的4β-OH-鬼臼毒素、4β-OH-4'-O-去甲基鬼臼毒素与D-生物素、6-生物素己酸溶解在DMF中，再加入4-二甲氨基吡啶DMAP和N,N'-二异丙基碳二亚胺DIC，在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿:甲醇洗脱得到生物素-鬼臼毒素衍生物；或者用由鬼臼毒素制备而成的4β-氨基-鬼臼毒素、4β-氨基-4'-O-去甲基鬼臼毒素与D-生物素、6-生物素己酸溶解在DMF中，再加入4-二甲氨基吡啶DMAP和N,N'-二异丙基碳二亚胺DIC，在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿:甲醇洗脱得到生物素-鬼臼毒素衍生物；或者由鬼臼毒素制备而成的4'-O-甲基-4-脱氧-4β-叠氮化合物、4'-O-去甲基-4-脱氧-4β-叠氮化合物与端炔醇、端炔氨类化合物溶于四氢呋喃中，加入1:2的叔丁醇-水和醋酸铜，再滴加抗坏血酸水溶液经过Click反应后得到4β-(1,2,3-三唑)鬼臼毒素衍生物，再用4β-(1,2,3-三唑)鬼臼毒素衍生物与D-生物素、6-生物素己酸溶解在DMF中，再加入4-二甲氨基吡啶DMAP和N,N'-二异丙基碳二亚胺DIC，在室温下搅拌反应，反应完后减压除去溶剂，得到的粗产物经硅胶柱层析，用氯仿:甲醇洗脱得到生物素-鬼臼毒素衍生物。