CN100436454C

CN100436454C - 新的三尖杉碱类的酯碱衍生物及其制法和其药物组合物与用途

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Publication number: CN100436454C
Application number: CNB021251606A
Authority: CN
Inventors: 吴克美; 籍秀娟; 叶仙蓉; 黄量; 柴永海; 李行南
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS
Current assignee: Beijing Xiehe No.2 Pharmaceutical Factory
Priority date: 2002-06-28
Filing date: 2002-06-28
Publication date: 2008-11-26
Anticipated expiration: 2022-06-28
Also published as: CN1463975A

Abstract

本发明涉及新的包括以三尖杉碱(粗榧碱Cephalotaxine)，11-羟基三尖杉碱(11-hydroxy Cephalotaxine)，桥氧三尖杉碱(Drupacine)及其相关的衍生物为母核的一系列新酯碱衍生物，其制备方法，含有它们的药物组合物，及其作为抗肿瘤药物的用途。

Description

新的三尖杉碱类的酯碱衍生物及其制法和其药物组合物与用途

技术领域

本发明涉及新的包括以三尖杉碱(Cephalotaxine)，11-羟基三尖杉碱(11-hydroxy Cephalotaxine)，桥氧三尖杉碱(Drupacine)及其相关的衍生物为母核的一系列新酯碱衍生物，其制备方法，含有它们的药物组合物，及其作为抗肿瘤药物的用途。

发明背景

癌症是困扰人类的重大疾病，在我国恶性肿瘤引起的死亡率在所有病因中居第二位，且发病率呈上升趋势。

药物治疗作为癌症治疗的一个重要手段，特别是对晚期肿瘤患者。虽然近年肿瘤化疗取得较大的进步，使部分肿瘤患者获得治愈或缓解，生活质量改善，生存时间有了明显的延长，但对危害人类生命健康最严重的，占恶性肿瘤90％以上的实体瘤的治疗，仍无突破性进展。据Scrip报道美国正在研究开发的抗肿瘤药就有315个；我国在抗肿瘤药的研制和开发方面虽然也投入了大量的人力物力，但目前化学药仍以仿制药为主，具有自主知识产权、结构新颖的创新药极少。

1969年Powell等报道(Tetrahedron letters 1969，4081)自三尖杉属冠柱日本粗榧(Cephalotaxus harringtonia(Forbes)Koch)中分离出具有抗肿瘤活性的四个生物碱：三尖杉酯碱(Harringtonine)(1)、高三尖杉酯碱(Homoharringtonine)(2)、脱氧三尖杉酯碱(Deoxyharringtonine)(3)和异三尖杉酯碱(Isoharringtonine)(4)，均为该属植物中含量较高，本身无抗肿瘤活性三尖杉碱(粗榧碱，Cephalotaxin)(5)的酯。1969-1972年初阐明了这四个酯碱和三尖杉碱的结构和绝对构型。结构如下：

我国从1972年开始对我国特有三尖杉属植物及其酯碱进行了化学、药理和临床的研究(中国医学百科全书，药物学及药理学，1986，297)。三尖杉碱(5)和四个酯碱(1-4)均已人工合成(其中三尖杉酯碱和高三尖酯碱半合成是我所首先完成的)。

药理实验表明四个酯碱对多种小鼠白血病和实体瘤以及对6-MP抗药的小鼠白血病L₆₁₅均有抑制作用。三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的生物活性相近，较其它两者强，有效剂量也低。三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱临床用于治疗急性非淋巴性白血病有较好疗效，而对实体瘤如肝癌尚未见明显治疗作用；该类药物也具有一般抗癌药的骨髓抑制及消化道等副作用。高三尖杉酯碱(2)已载入我国药典。为提高三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱疗效，降低毒副作用，扩大抗瘤谱，国内外学者对酯碱侧链的酰基部分做了大量的结构改造研究(化学学报，1975，33，75；药学学报，1983，15，835；药学学报，1994，29，23；J.Med.Chem.，1975，18，63；J.Med.Chem，1977，20，328等)但至今尚未发现比四个酯碱活性更高的衍生物。

三尖杉属(Cephalataxus)是裸子植物的一个多种属，共有9种，分布于东亚和中南半岛的北部，其中除日本粗榧(C.Karringtonia)产于日本及朝鲜半岛南端外，其余主产于我国共8种和三个变种，主要分布于横断山脉以东，秦岭至大别山以及江苏南部各省区。三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱在海南粗榧(C.Hainanensis)和西双版纳粗榧(C.Mannii Hookt.)中含量最高，大部分存在树皮中，这两种植物仅分布在海南及云南的局部地区，数量有限，使酯碱广泛使用受到一定的限制。另外几种三尖杉属植物如三尖杉(C.Fortunei Hook.f)，中国粗榧(C.Sinenisis Li)等分布极广，数量较多，但酯碱含量极低，而其枝叶中三尖杉碱(5)含量较高，未被利用。此外从果实和枝叶中还可分离出11-羟基三尖杉碱(6)和桥氧三尖杉碱(7)。三尖杉碱(5)，11-羟基三尖杉碱(6)均无抗肿瘤活性而桥氧三尖杉碱(7)有明显的抗肿瘤活性(IC50(μm)：KB 5；Bel 5)。

为了充分利用我国三尖杉属植物资源，扩大三尖杉酯碱和高三尖杉酯碱的抗瘤谱，提高疗效，降低毒付作用，设计并合成以三尖杉碱类(三尖杉碱，桥氧三尖杉碱，11-羟基三尖杉碱及其相应的衍生物)为母核，以紫杉醇侧链及对映体、及其衍生物为酰基的一系列新酯碱，并进行抗肿瘤活性及构效关系研究，为寻找新抗肿瘤药提供线索。

我们选择紫杉醇侧链作为新酯碱的酰基部份的基本结构是考虑到紫杉醇的抗肿瘤作用机理比较特殊，临床作为一新型抗癌药对卵巢癌、乳腺癌等实体瘤有较好的疗效，且三尖杉酯碱与紫杉醇的分子结构组成有一定的相似性，二者均由无效的母核及侧链两部分通过酯键相连组成；侧链酰化位置均在母核的烯丙醇羟基上；酯羰基的α位均有一个羟基，且α位C均为R构型，据此推侧若将紫杉醇侧链(2’R，3’S)-2’-羟基-3’苯甲酰胺基-苯丙酰基)-引入到三尖杉碱的C₃位羟基上，形成的新酯碱可能会有一定抗肿瘤活性。

n＝2：三尖杉酯碱紫杉醇

n＝3：高三尖杉酯碱

于是合成了该化合物及相应的桥氧酯碱并进行了体外抗肿瘤筛选，结果表明该类化合物确实显示了对人癌细胞的明显细胞毒活性。在此基础上进行了本专利发明内容的研究。

发明内容

为了克服已有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种新的三尖杉碱类的新酯碱衍生物；

本发明的另一目的在于提供一种新的三尖杉碱类的新酯碱衍生物的制备方法；

本发明的再一目的在于提供一种新的三尖杉碱类的新酯碱衍生物抗肿瘤在制备药物中的应用。

本发明再一方面涉及药物组合物，其包括作为活性成份的通式(I)、(II)和(III)的化合物及其异构体及制药领域中常用的载体。

本发明的另一目的在于提供一种新的三尖杉碱类的新酯碱衍生物及其组合物作为抗肿瘤药物的用途。

本发明再一方面涉及的是预防和/或治疗抗肿瘤的方法，其包括将通式(I)、(II)和(III)的化合物或含有它的药物组合物给药于需预防和/或治疗的宿主。

具体讲，本发明涉及如通式(I)、(II)和(III)所示的化合物，它们是以紫杉醇的侧链(2R，3S)、其对映体(2S，3R)以及其衍生物为侧链的三尖杉碱类的酯碱衍生物及其前体杂环酯碱，其结构如下：

其中：构型为2R3S或2S3R，其中，R选自

R₁为：H、COR₃或(CH₂)_nR₄；其中，

R₃是碳原子数为C₁-C₁₈的直链或支链的未取代或一取代或多取代的烷烃或烯烃；或有或没有杂原子的未取代或一取代或多取代的芳香环；

当R₃是直链或支链的未取代的烷烃或烯烃时，其含有的碳原子数是C₁-C₁₈；

当R₃是直链或支链的一取代或多取代的烷烃或烯烃时，取代基选自：卤素、-NO₂、-OH、C₁-C₄的烷氧基，-NH₂，-CN，C₁-C₄的酯基，C₁-C₄的酰基，酰氧基或三卤甲基；

当R₃是未取代或一取代或多取代的芳香环时，取代基选自：C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的酯基、C₁-C₄的酰基、C₁-C₄烷氨基，、二-(C₁-C₄烷基)氨基，、CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂、-CN或次甲二氧基；

R₄的定义如R₃，n为0或1；

R₂是羟基。

优选的R₃是苯环或有杂原子的五元或六元芳香环，其中芳香环可以是未取代或由下述基团一取代或多取代的，取代基可以选自：C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的酯基、C₁-C₄的酰基、C₁-C₄烷基氨基、二-(C₁-C₄烷基)氨基、CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂，-CN，次甲二氧基。

更优选的R₃选自：

其中，芳香环是未取代的或是一取代或多取代的，取代基可以选自：C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的酯基、C₁-C₄的酰基、C₁-C₄烷基氨基、二-(C₁-C₄烷基)氨基、CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂，-CN，次甲二氧基。

最优选的R₁选自

本发明还包括通式(II)所示的化合物：

其中，构型为4R5S或4S5R，其中，R₇选自

R₉是未取代或一取代或多取代的苯环，取代基可以选自：C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的酯基、C₁-C₄的酰基、C₁-C₄烷基氨基、二-(C₁-C₄烷基)氨基、CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂，-CN，次甲二氧基。

本发明还包括如通式(III)所示的化合物：

其中：构型为4R5S或4S5R，R₈选自

R₁₀是取代或非取代的直链或支链烷基或烷氧基，取代基选自CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂，-CN。

在本发明中，术语“卤素″是指氟、氯、溴、碘。

根据本发明，本发明化合物可以异构体的形式存在，而且通常所述的“本发明“化合物”包括该化合物的异构体。

本发明化合物可存在双键的顺反异构体，不对称中心具有S构型或R构型，本发明包括所有可能的立体异构体以及两种或多种异构体的混合物。如果存在顺/反异构体，本发明涉及顺式形式和反式形式以及这些形式的混合物，如果需要单一异物体可根据常规方法分离或通过立体选择合成制备。

具体讲，本发明涉及新的三尖杉碱类的酯碱衍生物的制备方法，包括如下步骤：

步骤一：

(一)：用保护侧链酸与三尖杉碱类等缩合，制备前体-杂环酯碱(II)，再水解制备新酯碱(I)。

或者(二)：用保护侧链酸与三尖杉碱类等的缩合，制备前体-杂环酯碱(III)，再水解制备新酯碱(I)。

步骤二：

(一)：酰化衍生物合成：用相应的酰化试剂与步骤一中(二)步产物的氨基反应制备酰化衍生物。

或者(二)：烷基化衍生物的合成：用相应的醛试剂与步骤一中(二)步产物的氨基反应后再用氢化试剂氢化制备烷基化衍生物。

其中，R，R₄的定义与权利要求1相同。

其中，保护侧链酸与三尖杉碱类等缩合时的缩合试剂选自1，3二环己基碳二亚酰胺(DCC)、二吡啶碳酸酯、1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)、(1-3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐(EDCI)、1，3-二异丙基碳酰亚胺(DIPC)。优选为二环己基碳二亚酰胺(DCC)/4-二甲氨基吡啶(DMAP)。催化剂选自三级胺如4-二甲氨基吡啶DMAP或其他三级胺。在非质子溶剂如二氯甲烷，四氢呋喃(THF)，N，N-二甲基甲酰胺(DMF)中反应制得。反应常在-20-60℃下进行，最适宜温度是室温。

制备中的氢化试剂选自：

NaCNBH₃，LiCNBH₃，CNBH₃，NaBH₄，KBH₄，NaBH(OAC)₃，Zn/HOAC，(二甲基甲硅基)氨基甲酸酯/Ph₃CClO₄，硼氢化苄基三苯基磷(BTPPB)，苄基硅烷/二苯基二氯化锡，四硼化丁基三苯基磷(BTPPTB)，NaBH₄/ACOH，1-苯基-1-氮鎓离子-4-氮杂二环[2，2，2]辛烷四氢化硼(BAAOTB)，硼化镍，癸硼烷，HsiCl₃，，硼氢化锌，硼烷-二甲硫醚混合物，硼烷-吡啶混合物，NaBH₄-Ti(OCHMe₂)₄，NaCNBH₃-TiCl₄，用0.5-1％Ru促进的NiB中任一种。优选为NaCNBH₃。

制备中的酸化开环反应所使用的酸可以是浓的或稀的盐酸、硫酸、甲酸、柠檬酸、Dower50强酸性树脂、甲磺酸、对甲苯磺酸中的任一种；酸化反应的温度控制在-20～+80℃之间。

酰化反应中的酰化试剂是相应的酰氯、酸酐；碱性条件可以是有机胺、碳酸盐或碳酸氢盐；酰化的温度是控制在-20～+100℃之间。

根据本发明，本发明通式(I)、(II)和(III)的化合物在与抗肿瘤有关的药理试验，如抗肿瘤体外细胞筛选试验中显示出优良的抗肿瘤活性。

本发明因此还涉及含有作为活性成份的有效剂量的至少一种通式为(I)、(II)和(III)的化合物和/或其立体异构体以及常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1-90重量％的通式(I)、(II)和(III)化合物和/或其生理上可接受的盐。

药物组合物可根据本领域已知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将通式(I)、(II)和(III)化合物和/或立体异构体与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。给药剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等，可以是普通制剂、缓释制剂、控释制剂及各种微粒给药系统。为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。为了将给药单元制成栓剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高级醇、高级醇的酯、明胶、半合成甘油酯等。为了将给药单元制成胶囊，将有效成分的本发明化合物或其立体异构体与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物或其立体异构体制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。为了将给药单元制成注射用制剂，如溶液剂、乳剂、冻干粉针剂和混悬剂，可以使用本领域常用的所有稀释剂，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。

本发明化合物或其立体异构体的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重及个体反应，所用的具体化合物，给药途径及给药次数等。通常对体重约75公斤患者，所给通式(I)、(II)和(III)化合物的日剂量为0.0001mg/kg体重-100mg/kg体重，优选0.01mg/kg体重-20mg/kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药。

根据本发明，本发明化合物及其异构体在抗肿瘤中显示出优良效果。因而可作为抗肿瘤药用于动物，优选用于哺乳动物，特别是人。

具体实施方式

为制备本发明的化合物利用现有的技术制备关键中间体-保护侧链酸：

参考文献方法以2R，3S及2S，3R-β-苯基缩水甘油酸甲酯为原料(Chinese Chemical letters 1999，Lol 10，No6，441)并根据C₂，C₃构型转位方法的不同采用下面两条路线合成保护侧链酸(8_a，b)及(9)(J.O.C.1993，1289；PCT WO92/09589)

路线1.形成恶唑环使C₂构型转位，合成(4S，5R)及(4R，5S)-2，4-二苯基-5-羧基-1，3氮氧杂环8_a，8_b

路线2.经溴化、叠氮化两次亲核取代反应，使C₃的R构型转变为S构型，合成(4S，5R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2，2-二甲基-4-苯基-5-羧基-1，3-氮氧杂环戊烷(9)

(一).用保护侧链酸8_a，b与三尖杉碱(5)及桥氧三尖杉碱(6)等的缩合制备其前体-杂环酯碱II_1-3，水解反应制备新酯碱I_1-3。见步骤1-2

步骤1

实施例1 3-O-{(4’S，5’R)-2’，4’-二苯基-1’，3’-氮氧杂环戍烷-5’-甲酰基}-桥氧三尖杉碱(II ₁)的制备：

将160mg(0.49mmol)桥氧三尖杉碱1 30mg(0.49mmol)8a，202mg(0.98mmol)DCC及4mg(0.03mmol)PP，在氮气保护下加入无水氯仿溶解，室温下搅拌1天，反应完毕。浓缩得黄色油状物，经硅胶柱层分离，得0.165g本标题化合物，是白色泡状固体。

收率：58.5％，熔点：94-96℃，[α]_D ¹⁷＝-37.2(c 0.41 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.46(s，3H，OCH₃)，3.80(d，1H，J＝9Hz，H₄)，4.32(d，1H，J＝5.4Hz，H_2’)，4.66(d，1H，J＝5.4Hz，H_3’)，4.96(d，1H，J＝9Hz，H₃)，4.96(m，1H，H₁₁)，5.64，5.80(2d，2H，J＝1Hz，OCH₂O)，6.50，6.64(2s，2H，H_14，17)，7.2-8.0(m，10H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：580(M⁺，10)，563(5)，314(100)，284(5)，254(10)，222(12)，173(15)，119(25)，91(45)。

实施例2 3-O-{(4’R，5’S)-2’，4’-二苯基-1’，3’-氮氧杂环戍烷-5’-甲酰基}-桥氧三尖杉碱(II₂)的制备：

同实施例1的方法，不同在于原料(8_a)改为(8_b)，150mg(0.56mmol)8b得195mg本标题化合物，是白色泡状固体。

收率：59.8％，熔点：87-89℃，[α]_D ¹⁷＝+9.75(c 0.4 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.44(s，3H，OCH₃)，3.74(d，1H，J＝9.36Hz H_5’)，4.48(d，1H，J＝6.48Hz，H₄)，4.72(m，1H，H₁₁)，4.97(d，1H，J＝6.48Hz，H₃)，5.04(d，1H，J＝9.36Hz，C-H_4’)，5.68，5.8(dd，2H，J＝2.16Hz，OCH₂O)，6.2，6.45(2s，2H，H_14，17)，7.4-8.04(m，10H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：580(M⁺，4)，563(3)，330(3)，314(100)，282(2)，254(3)，222(10)，173(15)，119(20)，91(50)。

实施例3 3-O-{(4’S，5’R)-2’，4’-二苯基-1’，3’-氮氧杂环戍烷-5’-甲酰基}-三尖杉碱(II₃)的制备：

同实施例1的方法，不同在于原料桥氧三尖杉碱改为三尖杉碱。100mg(0.32mmol)三尖杉碱和170mg(0.64mmol)8a，反应得165mg本标题化合物，是白色泡状固体。

收率：91.0％，熔点80.4-82.6℃，[α]_D ¹⁷＝-1 36.4(c 0.47 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.68(s，3H，OCH₃)，3.80(d，1H，J＝10Hz，H₄)，4.56(d，1H，J＝6Hz，H_5’)，4.66(d，1H，J＝6Hz，H_4’)，5.08(s，1H，H₁)，5.78(dd，2H，J＝1Hz，OCH₂O)，5.98(d，1H，J＝10Hz，H₃)6.48，6.57(2s，2H，H_14，17)，7.22-8.0(m，10H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：564(M⁺，18)，533(4)，314(12)，298(100)，266(25)，222(18)，193(30)，173(16)，150(32)，105(20)，91(50)，71(60)。

步骤2：

实施例4 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-苯甲酰胺-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁)的制备：

115mg(0.198mmol)实施例1化合物为原料及10ml 0.1NHCl，在60-70℃反应2小时，冷至室温，在冰水浴冷却下，滴加饱和NaHCO₃至PH＝8左右，水层用CH₂Cl₂提取，合并有机层，用饱和食盐水洗至中性，无水Na₂SO₄干燥。浓缩，经硅胶柱层分离，得45mg本标题化合物，是白色泡状固体。

收率：37.8％，熔点：131-132℃，[α]_D ¹⁷＝-27.8(c 0.26 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.32(s，3H，OCH₃)，3.68(d，1H，J＝9.4Hz，H₄)，4.20(d，1H，J＝1.8Hz，H_2’)，4.8-4.9(m，1H，H₁₁)，5.08(d，1H，J＝9.4Hz，H₃)，5.12(dd，1H，J＝1.8Hz，J＝9Hz，H_3’)，5.8(dd，2H，J＝4Hz，J＝1Hz，OCH₂O)，6.57，6.64(2s，2H，H_14，，17)，7.02-8.84(m，10H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：598(M⁺，10)，330(10)，314(90)，254(5)，210(25)，193(13)，161(20)，131(8)，105(100)，91(18)。

实施例5 3-O-{(2’S，3’R)-2’-羟基-3’-苯甲酰胺-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₂)的制备：

同实施例4的方法，不同在于原料是实施例2化合物。85mg(0.15mmol)实施例1化合物得65mg本标题化合物，是白色泡状固体。

收率：73.9％，熔点：129-131℃，[α]_D ¹⁷＝-25.6(c 0.31 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.44(s，3H，OCH₃)，3.59(d，1H，J＝9Hz，H₄)，3.78(d，1H，J＝3.6Hz，H_2’)，4.60(m，1H，H₁₁)，4.85(d，1H，J＝9Hz，H₃)，5.44(dd，1H，J＝3.6Hz，10.8Hz，H_3’)，5.79，5.85(dd，2H，J＝1Hz，OCH₂O)，6.20，6.34(2s，2H，H_14，17)，7.2-8.0(m，10H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：598(M⁺，3)，581(2)，330(2)，314(90)，282(4)，240(10)，210(16)，173(10)，131(5)，105(100)，91(12)，77(45)。

实施例6 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-苯甲酰胺-苯丙酰基}-三尖杉碱(I₃)的制备：

原料桥氧三尖杉碱改为三尖杉碱同上法合成(I₃)，65mg(0.28mmol)原料得34mg本标题化合物，是白色固体。

收率：51％，熔点：223.2-225.4℃，[α]_D ¹⁷＝-149.6(c 0.24 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.51(s，3H，OCH₃)，3.78(d，1H，J＝10.8Hz，H₄)，3.86(d，1H，J＝3.6Hz，H_2’)，5.05(s，1H，H₁)，5.44(dd，1H，J＝3.6Hz，H_3’)，5.84(s，2H，OCH₂O)，5.90(d，1H，J＝10.8Hz，H₃)，6.52，6.60(2s，2H，H_14，17)，7.25-7.80(m，10H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：5 82(M⁺，5)，314(4)，298(100)，282(10)，266(20)，210(6)，150(11)，105(38)。

(二).用保护侧链酸9与三尖杉碱(5)及桥氧三尖杉碱(6)等的缩合，水解反应制备新酯碱I_1-7及其前体，杂环酯碱II_4-9：见步骤3-4

步骤3：

实施例7 3-O-{(4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戍烷-5’-酰基}桥氧三尖杉碱(III₁)的制备：

于瓶中加入480mg(1.5mmol)9，495mg(1.5mmol)桥氧三尖杉碱，486mg(2.25mmol)2-DPC及46mg(0.38mmol)DMAP及50ml甲苯，室温下反应，至反应产物不再增加。浓缩，加乙酸乙酯溶解，滤除不溶物，得2.2g黄色油状物，经硅胶柱层分离，得510mg本标题化合物，是白色固体。

收率53.8％，熔点：203-205℃，[α]_D ¹⁷＝-10.7(c 1.07CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：1.16(s，9H，C(CH₃)₃)，1.61，1.72(2s，6H，C(CH₃)₂)，3.28(s，3H，OCH₃)，3.84(d，1H，J＝9Hz，H₄)，3.84(m，1H，H_5’)，4.18(d，1H，J＝5.4Hz，H_4’)，4.81(d，1H，J＝9Hz，H₃)，4.98(m，1H，H₁₁)，5.70，5.84(2d，2H，J＝1.44Hz，OCH₂O)，6.52，6.64(2s，2H，H_14，17)，7.24(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：634(M⁺，30)，617(10)，519(5)，477(3)，314(100)，284(8)，228(10)，176(20)，119(8)，91(19)。

实施例8 3-O-{(4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戍烷-5’-酰基}三尖杉碱(III₂)的制备：

于瓶中加入485mg(1.51mmol)9、480mg(1.51mmol)三尖杉碱、500mg(2.32mmol)DCC、92mg(0.76mmol)DMAP及50ml甲苯，在80℃下反应2小时，TLC检测，反应完毕。浓缩得1.5g黄色油状物。经硅胶柱层分离，得815mg本标题化合物，是白色固体。

收率：85.9％，熔点：77-80℃，[α]_D ¹⁷＝-105(c 1.0 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：1.22(m，9H，C(CH₃)₃)，1.70(m，6H，C(CH₃)₂)，3.68(s，3H，OCH₃)，3.81(d，1H，J＝9Hz，H₄)，4.10(d，1H，J＝3.6Hz，H_5’)，4.60(m，1H，H_4’)，5.08(s，1H，H₁)，5.80(m，2H，OCH₂O)，5.80(d，1H，J＝9Hz，H₃)，6.56，6.60(2s，2H，H_14， ₁₇)，7.23(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：619(M⁺+1，20)，588(3)，298(100)，266(18)，150(16)。

实施例9 3-O-{(4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戊烷-5’-酰基}-11-羟基三尖杉碱(III₃)的制备：

同实施例8的方法，不同在于改用11-羟基三尖杉碱，DCC/PP，制得本标题化合物，为白色泡状固体。

收率：21.4.％，熔点：175-177℃，[α]_D ²⁰＝-150(c 0.31 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.16-1.08(m，(CH₃)₃CCO)，2.05-1.67(m，(CH₃)₂C)；3.29(d，2H，J＝9.3Hz，H₈)；3.60(d，1H，J＝8Hz，H₄)；3.68(s，3H，OCH₃)；3.84(d，2H，J＝12Hz，H₁₀)；4.09(d，1H，J＝2.1Hz，H_5’)；4.87-4.77(m，2H，H₁₁，H_4’)；5.18(s，1H，H₁)；5.82(d，1H，J＝8Hz，H₃)；5.87(d，2H，OCH₂O)；7.01，6.47(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.32-7.21(m，5H，芳氢)；

EI-MS，m/e(％)：634(5，M⁺)；603(10)；314(100)；298(20)；244(5)；206(12)；176(20)；146(15)；120(5)；91(20)。

同时还分离得到11-O-{(4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戊烷-5’-酰基}-11-羟基三尖杉碱(III₃)

收率：18.4％，熔点：70-72℃，[α]_D ²⁰＝-168.3(c 047CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.26-1.13(m，(CH₃)₃CCO)，1.79-1.72(m，(CH₃)₂C)；3.41(d，1H，J＝9Hz，H₄)；3.66(s，3H，OCH₃)；4.46(m，2H，H₃，H_5’)；4.67(s，1H，H_4’)；4.81(d，1H，J＝8Hz，H₁₁)；5.10(s，1H，H₁)；5.90(d，2H，OCH₂O)；6.68，6.61(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.32-7.26(m，5H，芳氢)；

EI-MS，m/e(％)：634(M⁺，放大20倍可见)；603(2)；300(100)。

实施例10 3-O-Troc-11-O-{(4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戊烷-5’-酰基}-11-羟基三尖杉碱(III₄)的制备：

同实施例8的方法，不同在于改用3-O-Troc-11-羟基三尖杉碱，DCC/PP，制得本标题化合物，为白色泡状固体。

收率：73％，熔点：76.6-78.2℃，[α]_D ²⁰＝-112.5(c 0.67 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.25-1.16(m，(CH₃)₃CCO)，1.78-1.53(m，(CH₃)₂C)；3.68(s，3H，OCH₃)；3.56(s，1H，H₄)；4.10(s，1H，H_5’)；4.20(s，1H，H_4’)；4.72，4.37(dd，2H，J＝12Hz，Troc)；4.88(s，1H，H₃)；5.07(s，1H，H₁)；5.80(t，1H，J＝8.4Hz，H₁₁)；5.94(d，2H，OCH₂O)；6.68，6.60(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.36-7.26(m，5H，芳氢)；

FAB-MS，m/e(％)：809(8，M⁺+1)；617(5)；490(12)；474(17)；332(7)；250(30)；55(100)。

实施例11 3-O-((4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戊烷-5’-酰基)-8-羰基-桥氧三尖杉碱(III₅)的制备：

同实施例8的方法，不同在于改用8-羰基桥氧三尖杉碱为原料，制得本标题化合物，为白色固体。

收率：74.9％，熔点：140-142℃，[α]_D ²⁰＝-11.3(c 0.11 CHCl₃)。

¹HNMR(CDCl₃δppm)：1.15-1.6(m，15H，OC(CH₃)₃，C(CH₃)₂)，1.7(brs，2H，H₁)，1.9，2.4(m，4H，H₆，H₇)，3.4(m，1H，H_10a)，3.5(brs，3H，OCH₃)，3.64(m，1H，H₄)，4.4(m，1H，H_10b)，4.76(s，1H，H₅)，5.16(s，1H，H₄)，5.85(d，1H，J_3，4＝7.8Hz，H₃)，5.9(brs，2H，OCH₂O)，6.08(t，1H，J_10-11＝9.9Hz，H₁₁)，6.6，6.62(2s，2H，H₁₄，H₁₇)，7.06-7.36(m，5H，芳氢)

EI-MS，m/e(％)：648(M⁺，2)，630(M⁺-18.5)，548(5)，327(100)，268(20)，250(40)，228(55)，206(65)，57(65)。

IR(KBr，cm^-1)：2978，1735，1701，1651，1500，1492，1377，1360，1236，1170，1074，937，702。

实施例12 2-β-O-{(4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戊烷-5’-酰基}-异三尖杉碱(III₆)的制备：

同实施例8的方法，不同在于改用异三尖杉碱及DCC/PP，同法制得本发明化合物，为白色泡状固体。

收率：71.4.％，熔点：69.5-72.1℃，[α]_D ²⁰＝-10.86(c 0.93 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.25-1.14(m，-C(CH₃)₃)，1.89-1.73(m，(CH₃)₂C)；3.57(s，3H，OCH₃)；4.52(d，1H，J＝6.6Hz，H_4’)；5.94(d，2H，OCH₂O)；6.10(m，1H，H₂)；

6.74，6.59(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.39-7.25(m，5H，芳氢)；

EI-MS，m/e(％)：618(5，M⁺)；298(90)；250(25)；206(40)57(100)。

实施例132-O-{(4’S，5’R)-N-(叔丁氧甲酰基)-2’，2’-二甲基-4’-苯基-1’，3’-氧氮杂环戊烷-5’-酰基}-3，11-环醚三尖杉碱(III₇)的制备：

在瓶中加入3，11-环醚三尖杉碱400mg(1.25mmol)，保护侧链酸(9)380mg(1.25mml)，PP 20mg(0.135mmol)，2-DPC 270mg(1.25mmol)，CHCl₃20ml，室温反应至反应完成，浓缩反应液，经柱层分离，得710mg本标题化合物，是白色泡沫状固体。

收率：94％，熔点：98.7-99.8℃，[α]_D ¹⁹＝+7.1(c 1.1 CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃δppm)：1.13(s，9H，C(CH₃)₃，1.41(brs，2H，H_8a，H_6b)，1.724，1.792(2s，6H，C(CH₃)₂)，1.956(m，2H，H_7a，b)，2.264(brs，1H，H_8a)，2.63-2.9(m，3H，2H_10a，b，H_8b)，3.12(d，1H，J_3-4＝3.0Hz，H₄)，4.17(s，1H，H₃)，4.55(d，1H，J＝5.2Hz，H₂)，4.9(d，1H，J_4’-5’＝3.9Hz，H_5’)，5.09-5.13(m，2H，H_4’，H₁₁)，5.95，5.96(2s，2H OCH₂O)，6.68，6.7(2s，2H，H₁₄ H₁₇)，7.2-7.4(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：604(M⁺，60)300(30)，284(100)，228(90)，188(80)，57(50)。

IR(KBr，cm^-1)：2994，2974，2937，2749，1757，1701，1500，1485，1377，1360，1250，1234，856，702。

步骤4：

实施例143-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₄)的制备：

将530mg(0.84mmol)实施例7化合物及35ml 0.1NHCl置于并中，室温搅拌，反应完成后，以CH₂Cl₂ 50ml稀释，碱中和，有机溶剂提取，无水硫酸钠干燥，浓缩所得之粗品，经柱层分离得310mg本标题化合物，是白色泡状固体。

收率：48.7％，熔点：89-91℃，[α]_D ¹⁷＝-56.6(c 1.07 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.40(s，3H，OCH₃)，3.62(m，1H，H_2’)，3.68(d，1H，J＝10Hz，H₄)，3.92(m，1H，H_3’)，4.92(m，1H，H₁₁)，4.98(d，1H，J＝10Hz，H₃)，5.72，5.80(2s，2H，OCH₂O)，6.56，6.74(2s，2H，H_14，17)，7.18(s，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：494(M⁺，14)，477(8)，390(25)，389(38)，332(25)，314(95)，282(15)，228(11)，190(17)，161(20)，141(10)，106(100)，91(30)。

实施例15 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-氨基-苯丙酰基}-三尖杉碱(I₅)的制备：

同实施例14的方法，不同在于是原料改成实施例8化合物600mg(0.97mmol)，制备本标题化合物得440mg，是白色固体。

收率：94.8％，熔点：111-113℃，[α]_D ¹⁷＝-136.6(c 1.0 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：3.72(s，3H，OCH₃)，3.87(d，1H，J＝9.555Hz，H₄)，4.08(s，1H，H_2’)，5.09(s，1H，H₁)，5.32(s，1H，H_3’)，5.85(s，2H，OCH₂O)，6.0(d，1H，J＝9.55Hz，H₃)，6.70(s，2H，H_14，17)，7.27(s，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：478(M⁺，12)，444(8)，314(20)，298(100)，282(20)，266(30)，206(10)，150(25)

实施例16 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-氨基-苯丙酰基}-11-羟基三尖杉碱(I₆)的制备：

同实施例14的方法，不同在于是原料改成实施例9化合物，制备本标题化合物，是白色泡状固体。

收率：37％，熔点：100-102℃，[α]_D ²⁰＝-51.2(c 0.18 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：

3.19-3.00(m，4H，H₁₀，H_2’，OH可被D₂O交换)，3.46(s，3H，OCH₃)；

3.75(d，1H，J＝9Hz，H₄)；4.13(s，1H，H_3’)；4.95(m，1H，H₁₁)；5.06(d，1H，J＝9Hz，H₃)；5.30(s，H₁)；5.82(d，2H，OCH₂O)；6.76，6.62(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.26-7.20(m，5H，芳氢)；

EI-MS，m/e(％)：494(2，M⁺)；389(15)；332(10)；314(100)；298(5)；176(15)；146(12)；106(22)；91(6)。

实施例17 3-O-Troc，11-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-氨基-苯丙酰基}-11-羟基三尖杉碱(I₇)的制备：

同实施例14的方法，不同在于是原料改成实施例10化合物，制备本发明化合物，是白色泡状固体。

收率：73％，熔点：85-87℃，[α]_D ²⁰＝-110.5(c 0.37 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.58(d，1H，J＝8.4Hz，H₄)，3.72(s，3H，OCH₃)，4.22(d，1H，J＝3Hz，H_2’)；4.35-4.42(m，2H，Troc2，H_3’)；4.70(d，1H，J＝3Hz，H₁₁)；4.76(d，1H，J＝12Hz，Trocl)；5.02(brs，1H，H₁)；5.86(d，1H，J＝8.4Hz，H₃)；5.92(d，2H，OCH₂O)；6.68，6.56(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.61-7.28(m，5H，芳氢)；

FAB-MS，m/e(％)：670(15，M⁺+2)；615(2)；506(8)；474(60)；342(4)；296(25)；252(20)；214(60)；106(52)；77(100)。

实施例182-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-氨基-苯丙酰基}-异三尖杉碱(I₈)的制备：

同实施例14的方法，不同在于是原料改成实施例12化合物，制备本标题化合物，乙醚重结晶，得白色针晶。

收率：60％，熔点：152.7-154.5℃，[α]_D ²⁰＝+11.8(c，0.22，CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.59(s，3H.OCH₃)，4.25(d，1H，J＝4.5Hz，H_2’)；4.34(d，1H，J＝4.5Hz，H_3’)；5.94(d，2H，OCH₂O)；6.03(d，J＝5.7Hz，1H，H₂)；6.80，6.60(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.74-7.24(m，5H，芳氢)；

EI-MS，m/e(％)：478(12，M⁺)；314(9)；297(60)；282(42)；254(22)；106(100)；

79(38)。

实施例19 2-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-氨基-苯丙酰基}-3，11-环醚三尖杉碱(I₉)的制备：

在反应瓶中加入实施例13化合物100mg(0.165mmol)，甲酸2ml，室温搅拌至反应完毕，反应液以CH₂Cl₂ 7ml稀释，冰水浴冷却下，用NaHCO₃中和，分出有有机层，饱和食盐水洗到中性，无水Na₂SO4干燥，滤液減压浓缩，残存物柱层分离，得白色泡状固体(IV_g)70mg，收率：91.4.％，熔点：90-92℃，[α]_D ²⁰＝+17(c，1.2，CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃δ ppm)：2.36-2.45(m，4H，NH₂，OH，H₈，3个H可被D₂O交换)；3.11(d，1H，J_3-4＝3.6Hz，H₄)；4.19(t，1H，J_3-4＝3.6Hz，H₃)；4.48(2s，2H，H₂，H₁₁)；4.87(d，1H，J_2’-3’＝3.9Hz，H_2’)；5.12(m，1H，H_3’).5.94(q，2H OCH₂O)；6.65，6.68(2S 2H，H₁₄，H₁ ₇)；7.26-7.46(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：464(M⁺，35)，447(10)，359(20)，302(25)，284(55)，228(100)，188(65)，175(55)，106(65)。

IR(KBr，cm^-1)：3367，2931，2794，1740，1483，1234，1038，928，702。

(三).酰化衍生物I_10-19及烷基化衍生物I_19-24的合成.见步骤5-6

步骤5：

实施例203-O-{(2’R，3’S)-2’-乙酰氧基-3’-乙酰氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₀)的制备：

于瓶中加入实施例14化合物70mg(0.14mmol)，用AC₂O为酰化试剂30mg(0.29mmol)，固体Na₂CO₃40mg(0.48mmol)，3ml CH₂Cl₂，回流至反应完毕，过滤固体，滤液以10ml CH₂Cl₂稀释，饱和NaHCO₃及饱和食盐水洗至中性，无水Na₂SO₄干燥，过滤，滤液浓缩，残留物经柱层分离，得本标题化合物70mg，是白色泡沫状固体。

收率85％，熔点：96.3-97.9℃，[α]_D ²⁰＝-31.4(c 1.12 CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.656-2.146(br，7H，2×H₆，2×H₇，2×H₈，2H_1a)；1.887，2.037(2S，6H，2×COCH₃)；2.68(d，1H，J_1a-1b＝14.1Hz，H_1b)；3.12(brs 2H，2H₁₀)；3.439(S，3H，OCH₃)；3.705(brs，1H，H_2’)；4.92(S，1H，C_3’-H)；5.06(d，1H，J＝10Hz，H₄)；5.10(d，1H，J＝2.1Hz，H₁₁)；5.23(d，1H，J_3，4＝9.0Hz，H₃)；5.90-5.92(2s，2H，OCH₂O)；6.235(br，1H，NHCO)；6.608(S，2H，H₁₄，H₁₇)；7.10-7.29(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：578(M⁺，20)，561(8)，314(100)，106(45)，43(35)。

实施例21 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-乙酰氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₁)的制备：

在瓶中加入化合物70mg(0.12mmol)，以5ml四氢呋喃溶解，再加30mg NaHCO₃，30％H₂O₂1ml，室温反应至产物不再增加，而付产物开始增多时，停止反应并加入10ml CH₂Cl₂稀释，有机层分别以饱和硫代硫酸钠及饱和食盐水洗滌，无水Na₂SO₄干燥，过滤，滤液浓缩，得浅黄色固体50mg，PTLC分离，回收原料(IV_a)25mg。得产物V_b.10mg，为白色固体。收率25％(扣除回收原料)，熔点：160-162℃，[α]_D ²⁰＝-24.45(c，0.09，CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.98(s，3H，NCOCH₃)；3.42(s，3H，OCH₃)；4.16(d，1H，J＝3.6Hz，H_3’)；4.88(d，1H，J＝9Hz，H₃)；4.99(m，1H，H₁₁)；5.28(brs，1H，NHCO)；5.90(2s，2H，OCH₂O)；6.67(m，2H，Ar-H)；7.32-7.13(m，5H，芳氢)

FAB-MS，m/e(％)：536(M⁺，20)；505(1)；330(2)；314(100)；228(10)；106(25)

实施例22 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-正己酰氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₂)的制备：

用实施例20的方法，酰化试剂改为正己酸酐，制得本标题化合物。

收率81.4％，熔点：84-86.2℃，[α]_D ²⁰＝-22.9(c 1.0 CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：0.8-2.29(m 18H，CH₃(CH₂)₄CO，2×H₆，2×H₈，2×H₇，1H_1a)；2.66(d，1H，J_1a-1b＝16.2Hz，H_1b)；3.09(brs，2H，2×H₁₀)；3.39(s，3H OCH₃)；3.71(brs，1H H_2’)；4.905(s，1H，H_3’)，5.03-5.09(m，2H，H₁₁，H₄)，5.19(d，1H，J_3-4＝8.1Hz，H₃)，5.89，5.91(2s，2H，OCH₂O)，6.59(s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.09-7.26(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：592(M⁺，10)，575(5)，314(100)，228(8)，172(10)，106(35)

IR(KBr，cm^-1)：3400，2933，1747，1656，1500，1487，1234，1058，931，702。

实施例23 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-(2，3-二甲基丙烯酰氨基)-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₃)的制备：

用实施例20的方法，酰化试剂改为改为2，3-二甲基丙烯酸酐，制得本标题化合物。

收率：94％，熔点：94.4-96.9℃，[α]_D ¹⁷＝-21.2(c 1.13 CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.54(d，1H，J_1a-1b＝14.1Hz，H_1a)；1.74(d，3H，J_＝CH-CH3＝6.9Hz，＝CH-CH₃)；1.84(s，3H，＝C(CH₃)CO)；2.66(d，1H，H1b，J_1a-1b＝14.1Hz；3.376(s，3H，OCH₃)；3.68(d，1H，J_3-4＝9.3Hz，H₄)；4.150(d，1H，J_2’-3’＝1.8Hz，H_2’)；4.88(d，1H，J＝4.5Hz，H₁₁)；4.96(d，1H，J＝8.7Hz，H_3’)；5.12(d，1H，J_3-4＝9.3Hz，H₃)；5.804，5.864(2s，2H，OCH₂ O)；6.42(q，1H，J_＝CH-CH3＝6.9Hz，＝CH)；6.5(d，1H，J_H3’-NH＝8.7HZ，NHCO)；6.658，6.725(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.149-7.297(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：576(M⁺，20)，559(8)，314(100)，218(15)，172(15)，83(45)

IR(KBr，cm^-1)：3435，2939，1747，1668，1635，1487，1234，1058，1058，1037，931，702。

实施例24 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-(3，3-二甲基丙烯酰氨基)-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₄)的制备：

用实施例20的方法，酰化试剂改为改为3，3-二甲基丙烯酸酐，制得本发明化合物.

收率92％，熔点：102-104℃，[α]_D ¹⁷＝-20.3(c 1.2 CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.829，2.098(2s，6H，＝C(CH₃)₂)，2.70(d，1H，J_1a-1b＝14.4Hz，H_1a)，3.4(s，3H，OCH₃)，3.73(d，1H，J_3-4＝9.3Hz，H₄)，4.16(q，1H，H_2’)，4.767(brs，1H， H₁₁)，4.96(d，1H，J_H3’-NH＝8.7Hz，H_3’)，5.14(d，1H，J_3，4＝9.3Hz，H₃)；5.6(s，1H，＝C-H)，5.83，5.89(2s，2H，OCH₂O)；6.07(d，1H，J_H3’-NH＝8.7Hz，NH)，6.6，6.75(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.14-7.3(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：576(M⁺，20)，559(5)，389(4)，314(100)，228(15)，172(10)，83(25)。

IR(KBr，cm^-1)：3408，2939，2835，1745，1670，1645，1500，1487，1234，1058，931，702。

实施例25 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-呋喃酰氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₅)的制备：

用实施例20的方法，酰化试剂改为改为呋喃酸酐，制得本标题化合物。

收率74％，熔点：139.5-140.6℃，[α]_D ²⁰＝-39.9(c，1.0，CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.367(s，3H，OCH₃)，3.74(brs，1H，H₄)，4.24(m，1H，H_2’)；4.94(brs，1H，H₁₁)；5.02(d，1H，J_3-4＝8.4Hz，H₃)；5.2(d，1H，J＝7.8Hz，H_3’)；5.8，5.89(2s，2H，OCH₂O)；6.49(q，1H，呋喃杂环4位氢)；6.68，6.82(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.1(q，1H，呋喃杂环3位氢)；7.2-7.3(m，5H，芳氢)，7.45(q，1H，呋喃杂环5位氢)。

EI-MS，m/e(％)：588(M⁺，15)，571(4)，476(1)，331(8)，314(100)，200(25)，95(55)

IR(KBr，cm^-1)：3419，2939，1755，1674，1650，1600，1500，1487，1238，1120，1037，935，763，702。

实施例26 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-异烟酰氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₆)的制备：

用实施例20的方法，酰化试剂改为改为异烟酸酐，制得本发明化合物。

收率79％，熔点：105.2-106.9℃，[α]_D ²⁰＝-41(c 1.1 CHCl₃)。

¹HNMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：1.48(d，1H，J_1a-1b＝13.8Hz，H₁ _a)，2.65(d，1H，J_1a-1b＝13.8Hz，H_1b)；3.276(s，3H，OCH₃)；3.66(d，1H，J_3-4＝9.3Hz，H₄)；4.246(brs，1H，H_2’)；4.845(d，1H，H_3’)；5.06(d，1H，J_3-4＝9.3Hz，H₃)；5.15(d，1H，H₁₁)；5.80，5.83(2s，2H，OCH₂O)；6.6，6.65(2s，2H，H₁₄，H₁₇)；7.2-7.46(m，6H，异烟酰杂环5位氢)；8.1(m，1H，异烟酰杂环4位氢)；8.65(m，1H异烟酰杂环6位氢)；9.07(s，1H，异烟酰杂环2位氢)。

EI-MS，m/e(％)：599(M⁺，20)，582(5)，389(2)，331(2)，314(100)，241(10)，211(25)，106(30)。

IR(KBr，cm^-1)：3419，2937，1743，1666，1406，1407，1234，1058，931，704。

实施例27 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-叔丁氧甲酰氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₇)的制备：

于三口并中加185mg(0.37mmol)实施例14化合物，50mg(0.6mmol)NaHCO₃及5ml无水THF，130mg(0.6mmol)(BOCO)₂O，室温反应，待反应完成后，向反应液中加入10ml水和15ml乙酸乙酯，分出水层，用乙酸乙酯提取，合併有机层用饱和食盐水洗到中性，无水Na₂SO₄干燥，浓缩，粗品用柱层分离，得170mg本标题化合物，是白色固体。

收率：76.6％，熔点：115-117℃，[α]_D ¹⁷＝-29.4(c 0.99 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：1.41(s，9H，C(CH₃)₃)，3.43(s，3H，OCH₃)，3.70(d，1H，J＝9.56Hz，H₄)，4.09(s，1H，NH)，4.70(d，1H，J＝10Hz，H_2’)，4.93(m，1H，H₁₁)，5.15(d，1H，J＝9.56Hz，H₃)，5.25(d，1H，J＝10Hz，H_3’)，5.84，5.89(2s，2H，OCH₂O)，6.69(2s，2H，H_14，17)，7.18-7.27(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：594(M⁺，23)，577(6)，520(10)，389(12)，332(10)，314(100)，282(10)，253(11)，211(12)，173(20)，131(12)，91(35)。

实施例28 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-叔丁氧甲酰氨基-苯丙酰基}-三尖杉碱(I₁₈)的制备：

用实施例27的方法，不同在于原料为实施例15化合物165mg(0.35mmol)，制备本标题化合物150mg，是白色固体。

收率：77％，熔点：181-183℃，[α]_D ¹⁷＝-80.1(c 1.13 CHCl₃)。

¹H-NMR，90MHz(CDCl₃ δppm)：1.42(s，9H，C(CH₃)₃)，3.69(s，3H，OCH₃)，3.81(d，1H，J＝9.55Hz，H₄)，4.13(m，1H，NH)，4.50(m，1H，H_2’)，5.0(m，1H，H_3’)，5.07(s，1H，H₁)，5.91(s，2H，OCH₂O)，6.01(d，1H，J＝9.55Hz，H₃)，6.67，6.73(2s，2H，H_14，17)，6.92-7.27(m，5H，芳氢)。

EI-MS，m/e(％)：578(M⁺，10)，314(10)，298(100)，266(25)，150(30)

步骤6：

实施例29 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-苄氨基-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₁₉)的制备：

于瓶中加入化合物实施例14化合物100mg(0.20mmol)，苯甲醛50mg(0.48mmol)，18mg，以5ml CH₂Cl₂溶解，再加入10mg氰基硼氢化钠，及8mg无水樟脑磺酸，室温反应完成后，加入5ml CH₂Cl₂稀释，有机层分别以饱和碳酸氢钠及饱和食盐水洗涤，无水Na₂SO₄干燥，过滤，滤液浓缩，得白色固体130mg，柱层分离，得本标题化合物90mg，白色泡沫状固体。

收率：77％，熔点：105.6-106.7℃，[α]_D ²⁰＝-40.71(c 0.64 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.36(d，1H，J＝2.1Hz，H_2’)；3.42(s，3H，OCH₃)；3.57，3.48(dd，2H，J＝12.6Hz，ArCH₂N)；3.53(d，1H，J＝10Hz，H₄)；4.03(d，1H，J＝2.1Hz，H_3’)；4.91(d，1H，J＝3.9Hz，H₁₁)；5.22(d，1H，J＝10Hz，H₃)；5.85(d，2H，OCH₂O)；6.7 1，6.29(2s，2H，C₁₄，C₁₇)；7.30-7.16(m，5H，芳氢)；

FAB-MS，m/e(％)：585(28，M⁺+1)；389(8)；330(5)；314(25)；227(12)；196(82)；173(5)；136(5)；106(8)；91(100)；71(20)。

实施例30 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-(3，4，5-三甲氧苄氨基)-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₂₀)的制备：

用实施例29的方法，不同在于醛为3，4，5-三甲氧基苯甲醛，制备本标题化合物，为白色泡沫状固体。

收率：81％，熔点：87.8-89.8℃，[α]_D ²⁰＝-26.2(c，0.71，CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.38(d，1H，J＝1.8Hz，H_2’)3.40(d，1H，J＝9.6Hz，H₄)；3.42(s，3H，OCH₃)；3.50，3.40(dd，2H，J＝13.5Hz，ArCH₂N)；3.84(s，3H，4’OCH₃)；3.87(s，6H，3″，5’OCH₃)；4.04(d，1H，J＝1.8Hz，H_3’)；4.90(d，1H，J＝4.8Hz，H₁₁)；5.21(d，1H，J＝9.6Hz，H₃)；5.85(d，2H，OCH₂O)；6.04(s，1H，Ar’-H)；6.69，6.56(2s，2H，C₁₄，C₁₇)，7.14-7.34(m，5H，芳氢)；

EI-MS，m/e(％)：674(1，M⁺)；644(1)；566(1)；389(30)；332(3)；314(40)；286(45)；228(3)；181(100)；131(3)。

实施例31 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-(3，4，-二甲氧苄氨基)-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₂₁)的制备：

用实施例29的方法，不同在于醛为3，4，-二甲氧基苯甲醛，制备本标题化合物，是白色泡沫状固体.

收率：51％，熔点：82.7-84.7℃，[α]_D ²⁰＝-30.15(c 0.67 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.36(s，1H，H_2’)；3.41(d，1H，J＝10Hz，H₄)；3.42(s，3H，OCH₃)；3.48，3.58(dd，2H，J＝11.7Hz，ArCH₂N)；3.89，3.87(2s，6H，OCH₃’)；4.02(s，1H，H_3’)；4.90(d，1H，J＝3.9Hz，H₁₁)；5.19(d，1H，J＝10Hz，H₃)；5.85(d，2H，OCH₂O)；6.70，6.19(2s，2H，C₁₄，C₁₇)；7.34-6.82(m，5H，芳氢)；

FAB-MS，m/e(％)：645(15，M⁺+1)；625(2)；389(3)；330(3)；314(20)；256(16)；214(8)；151(100)；115(12)；89(12)；77(35)。

实施例32 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-(3，4，-次甲二氧苄氨基)-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₂₂)的制备：

用实施例29的方法，不同在于醛为3，4，-次甲二氧基苯甲醛，制备本标题化合物，为白色泡沫状固体。

收率：83％，熔点：86.1-87.7℃，[α]_D ²⁰＝-37.65(c 0.68 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.57(d，1H，J＝9Hz，H₄)；3.36(d，1H，J＝1.8Hz，H_2’)；3.42(s，3H，OCH₃)；3.49，3.41(dd，2H，J＝7.8Hz，ArCH₂N)；4.02(d，1H，J＝1.8Hz，H_3’)；4.92(d，1H，J＝3.9Hz，H₁₁)；5.22(d，1H，J＝9Hz，H₃)；5.86(d，2H，OCH₂O)；5.94(d，2H，OCH₂O取代)；6.69，6.32(2s，2H，C₁₄，C₁₇)；7.34-6.72(m，5H，芳氢)；

FAB-MS，m/e(％)：629(58，M⁺+1)；627(18，M⁺-1)；389(10)；332(18)；314(55)；240(38)；228(18)；214(15)；135(100)。

实施例33 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-(4-氯-苄氨基)-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₂₃)的制备：

用实施例29的方法，不同在于醛为4-氯-苯甲醛，制备本标题化合物，为白色泡沫状固体。

收率：65％，熔点：86.3-88.1℃，[α]_D ²⁰＝-38.2(c 0.5 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.35(d，1H，J＝2Hz，H_2’)；3.43(s，3H，OCH₃)；3.53，3.43(dd，2H，J＝13.5Hz，ArCH₂N)；3.57(d，1H，J＝9.9Hz，H₄)；4.02(d，1H，J＝2Hz，H_3’)；4.91(d，1H，J＝4.8Hz，H₁₁)；5.22(d，1H，J＝9.9Hz，H₃)；5.85(d，2H，OCH₂O)；6.71，6.27(2s，2H，C₁₄，C₁₇)；7.34-7.14(m，5H，芳氢)；

CI-MS，m/e(％)：621(30，M⁺+1+2)；620(25，M⁺+2)；619(70，M⁺+1)；617(10，M⁺-1)；478(10)，462(15)；389(62)；332(20)；314(100)；282(16)；254(13)；230(92)；125(53)。

实施例34 3-O-{(2’R，3’S)-2’-羟基-3’-(4-溴-苄氨基)-苯丙酰基}-桥氧三尖杉碱(I₂₄)的制备：

用实施例29的方法，不同在于醛为4-溴-苯甲醛，制备本标题化合物，为白色泡沫状固体。

收率：75％，熔点：76.5-78.8℃，[α]_D ²⁰＝-37.97(c 0.64 CHCl₃)。

¹H-NMR，300MHz(CDCl₃ δppm)：3.32(d，1H，J＝1.8Hz，H_2’)；3.43(s，3H，OCH₃)；3.58，3.43(dd，2H，ArCH₂N)；3.52(d，1H，J＝10Hz，H₄)；4.03(d，1H，J＝1.8Hz，H_3’)；4.91(d，1H，J＝3.9Hz，H₁₁)；5.29(d，1H，J＝10Hz，H₃)；5.85(d，2H，OCH₂O)；6.71，6.14(2s，2H，C₁₄，C₁₇)；7.13-7.50(m，5H，芳氢)；

FAB-MS，m/e(％)：665(20，M⁺+1+2)；663(27，M⁺+1)；389(12)；332(16)；314(100)；276(32)；227(35)；214(25)；173(17)；168(32)；129(12)。

药理实验

实验例上述实施例制得的24个新酯碱和10个杂环酯碱进行抗肿瘤体外筛选。

二.体外细胞毒活性的筛选：

1.细胞株：

KI细胞：人口腔上皮鳞癌 Iel7402：人肝癌

HCT-8：人结肠癌 H2780：人卵巢癌

2.MTT(四氮唑)法：将各种对数生长期的人癌细胞接种于96孔板，每孔800-1500个细胞，培养24小时后加药，每个样品至少5个浓度，每个浓度设3个平行孔.在RPMH，1640(GHICO产品)(含10％小牛血清)培养基、37℃、2％CO₂条件下培养4天加(FlukH产品)，用Ko-Red 450酶标仪，在450和570nm双波长检测，计算细胞生长抑制率，并求HC₅₀(半数抑制浓度)。

3.结果判断：

一般单体纯品化合物，其HC₅₀＜10μM者认为有细胞毒活性为阳性结果。判断活性强弱时，如HC₅₀＜5μM者认为活性强；5-10μM为较强；＞10μM则认为无明显活性。按此标准，筛选结果見表1。

表1本发明化合物的抗肿瘤活性

ND＝没有试验

*用主产物试验

Claims

1、如通式(I)所示的化合物：

其特征在于：构型为2R3S或2S3R，其中，R选自

R₁为：H、COR₃或(CH₂)_nR₄；其中，

当R₃是未取代或一取代或多取代的芳香环时，取代基选自：C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的酯基、C₁-C₄的酰基、C₁-C₄烷氨基，、二-(C₁-C₄烷基)氨基，、CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂，-CN或次甲二氧基；

R₄的定义如R₃，n为0或1；

R₂是氢。

2、根据权利要求1的化合物，其特征在于，R₃是苯环或有杂原子的五元或六元芳香环，其中芳香环是未取代的或一取代或多取代的，取代基选自：C₁-C₄的烷基，C₁-C₄的烷氧基，C₁-C₄的酯基，C₁-C₄的酰基，C₁-C₄烷氨基，二-(C₁-C₄烷基)氨基，CF₃，卤素、-NO₂、-OH、-NH₂，-CN或次甲二氧基。

3、根据权利要求1的化合物，其特征在于R₃选自：

其中，芳香环是未取代的或是一取代或多取代的，取代基选自：C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的酯基、C₁-C₄的酰基、C₁-C₄烷氨基、二-(C₁-C₄烷基)氨基、CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂、-CN或次甲二氧基。

4、根据权利要求1的化合物，其特征在于R₁选自

H，PhCO-，

CH₃CO-，CH₃(CH₂)₃CH₂CO-CH₃CH＝C(CH₃)CO-，(CH₃)₂C＝CHCO-，

5、如通式(II)所示的化合物：

其特征在于，构型为4R5S或4S5R，其中，R₇选自

R₉是未取代或一取代或多取代的苯环，取代基选自：C₁-C₄的烷基、C₁-C₄的烷氧基、C₁-C₄的酯基、C₁-C₄的酰基、C₁-C₄烷氨基、二-(C₁-C₄烷基)氨基、CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂、-CN或次甲二氧基。

6、如通式(III)所示的化合物：

其中：构型为4R5S或4S5R，R₈选自

R₁₀是取代或非取代的直链或支链烷基或烷氧基，取代基选自CF₃、卤素、-NO₂、-OH、-NH₂或-CN。

7、制备如权利要求1、5、6的化合物的方法，其特征在于：任意选自如下步骤：

步骤一：

(一)：用保护性侧链酸与三尖杉碱类缩合制备前体-杂环酯碱，再水解制备新酯碱(I)

或者(二)：用保护性侧链酸与三尖杉碱类缩合，制备前体-杂环酯碱，再水解制备新酯碱(I)

步骤二：

(一)：酰化衍生物合成：用相应的酰化试剂与步骤一中(二)步产物的氨基反应制备酰化衍生物

其中，R，R₃的定义与权利要求1相同，

或者(二)：烷基化衍生物的合成：用相应的醛试剂与步骤一中(二)步产物的氨基反应后再用氢化试剂氢化制备烷基化衍生物，

其中，R，R₄的定义与权利要求1相同。

8、根据权利要求7的制备方法，其特征在于，保护性侧链酸与三尖杉碱类缩合时的缩合试剂选自1，3二环己基碳二亚酰胺、二吡啶碳酸酯、1-(3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐、(1-3-二甲胺丙基)-3-乙基碳酰亚胺盐酸盐或1，3-二异丙基碳酰亚胺中的任意一种；催化剂为三级胺。

9、根据权利要求8所述的制备方法，其中所述的三级胺选自4-二甲氨基吡啶或4-吡咯烷基吡啶。

10、根据权利要求7的制备方法，其特征在于，氢化试剂选自硼化物、硼氢化物、或硼化物和催化剂联用或硼氢化物和催化剂联用。

11、根据权利要求7的制备方法，其特征在于，氢化试剂选自NaCNBH₃、LiCNBH₃、KCNBH₃、NaBH₄、KBH₄、NaBH(OAC)₃、Zn/HOAC、(二甲基甲硅基)氨基甲酸酯/Ph₃CClO₄、硼氢化苄基三苯基磷、苄基硅烷/二苯基二氯化锡、四硼化丁基三苯基磷、NaBH₄/ACOH、1-苯基-1-氮鎓离子-4-氮杂二环[2，2，2]辛烷四氢化硼、硼化镍、癸硼烷、HSiCl₃、硼氢化锌、硼烷-二甲硫醚混合物、硼烷-吡啶混合物、NaBH₄-Ti(OCHMe₂)₄、NaCNBH₃-TiCl₄或用0.5-1％Ru促进的NiB中任一种。

12、根据权利要求7的制备方法，其特征在于，酸化开环反应所使用的酸选自有机酸或无机酸。

13、根据权利要求11的制备方法，其特征在于，酸化开环反应所使用的酸选自盐酸、硫酸、甲酸、柠檬酸、Dower50强酸性树脂、甲磺酸或对甲苯磺酸中的任意一种。

14、一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1-6任一化合物作为活性成分，以及药效学上可接受的载体。

15、根据权利要求14的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物是片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或微粒剂型。

16、根据权利要求1-6任一化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。