JPH0539283A - 新規物質Ｓ−５９９１７ａ及びその製造方法 - Google Patents
新規物質Ｓ−５９９１７ａ及びその製造方法Info
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- JPH0539283A JPH0539283A JP9832191A JP9832191A JPH0539283A JP H0539283 A JPH0539283 A JP H0539283A JP 9832191 A JP9832191 A JP 9832191A JP 9832191 A JP9832191 A JP 9832191A JP H0539283 A JPH0539283 A JP H0539283A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】微生物が生産し、抗癌剤として適用可能な新規
物質を提供する。 【構成】ストレプトマイセス属に属する微生物が生産す
る既知抗腫瘍性物質レプトマイシンＢと構造上近似する
が、構造式上、その１位の炭素原子がメチロール基を形
成し、１７位にメチル基を有し、そして２１位デメチル
体である点で相違する新規物質Ｓ−５９９１７ａ及びそ
の製造方法を提供する。このＳ−５９９１７ａは、ラッ
ト繊維芽細胞３Ｙ１にたいして、細胞周期をＧ１，Ｇ２
期に特異的かつ可逆的に停止させる活性を有するので新
たなタイプの抗癌剤としての用途が期待できる。
物質を提供する。 【構成】ストレプトマイセス属に属する微生物が生産す
る既知抗腫瘍性物質レプトマイシンＢと構造上近似する
が、構造式上、その１位の炭素原子がメチロール基を形
成し、１７位にメチル基を有し、そして２１位デメチル
体である点で相違する新規物質Ｓ−５９９１７ａ及びそ
の製造方法を提供する。このＳ−５９９１７ａは、ラッ
ト繊維芽細胞３Ｙ１にたいして、細胞周期をＧ１，Ｇ２
期に特異的かつ可逆的に停止させる活性を有するので新
たなタイプの抗癌剤としての用途が期待できる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規物質Ｓ−５９９１
７ａ及びその製造方法に関し、より具体的には、ストレ
プトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する
放線菌が生産し、抗腫瘍作用及び抗真菌作用を有する新
規物質に関する。
７ａ及びその製造方法に関し、より具体的には、ストレ
プトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する
放線菌が生産し、抗腫瘍作用及び抗真菌作用を有する新
規物質に関する。
【０００２】
【従来の技術】詳細には後述する物理化学的性質の本新
規物質Ｓ−５９９１７ａの類縁物質としては、いずれも
ストレプトマイセス属に属する放線菌が生産するレプト
マイシン（Ｌｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）Ｂ〔ザ・ジャーナル
・オブ・アンティビオティックス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、３６巻、６３
９〜６５０ページ、１９８３、及び特開昭６１−１０９
７１７号公報参照〕、レプトマイシンＡ（特開昭６２−
６５６９２号公報参照）、カズサマイシンＢ（特開昭６
２−２７７３７８号公報参照）及び新規物質ＫＲ２８２
７（特開昭６３−２０３６７６号公報参照）が知られて
いる。例えば、レプトマイシンＢについては、次式
規物質Ｓ−５９９１７ａの類縁物質としては、いずれも
ストレプトマイセス属に属する放線菌が生産するレプト
マイシン（Ｌｅｐｔｏｍｙｃｉｎ）Ｂ〔ザ・ジャーナル
・オブ・アンティビオティックス（Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆ Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）、３６巻、６３
９〜６５０ページ、１９８３、及び特開昭６１−１０９
７１７号公報参照〕、レプトマイシンＡ（特開昭６２−
６５６９２号公報参照）、カズサマイシンＢ（特開昭６
２−２７７３７８号公報参照）及び新規物質ＫＲ２８２
７（特開昭６３−２０３６７６号公報参照）が知られて
いる。例えば、レプトマイシンＢについては、次式
【０００３】
【化１】
【０００４】で示される構造式が提案されており、特
に、マウスに移植したＰ３８８細胞、ルイス・ランダ・
カルチノーマ細胞、Ｂ１６メラノーマ細胞及びエーリッ
ヒ・カルチノーマ細胞などに強い抗腫瘍作用を示すこと
が知られている。
に、マウスに移植したＰ３８８細胞、ルイス・ランダ・
カルチノーマ細胞、Ｂ１６メラノーマ細胞及びエーリッ
ヒ・カルチノーマ細胞などに強い抗腫瘍作用を示すこと
が知られている。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】周知のようにガンには
多様性があり、これまで開発されてきた抗癌剤はある種
のガンには有効であるが、別のタイプのガンには無効で
ある場合も多い。また、薬剤自体の物理化学的特性、例
えば親水性又は疎水性、さらに特定の官能基の有無によ
ってその生体内動態、器官親和性には微妙な差違が存在
することも既知である。従って、より有効なガン化学療
法に資するには、さらに多様な抗癌物質を提供すること
が依然と望まれている。そこで、本発明の目的は、上記
レプトマイシンに類縁する化合物であるが、その構造、
特に官能基において特徴を有する新規物質を提供するこ
とにある。
多様性があり、これまで開発されてきた抗癌剤はある種
のガンには有効であるが、別のタイプのガンには無効で
ある場合も多い。また、薬剤自体の物理化学的特性、例
えば親水性又は疎水性、さらに特定の官能基の有無によ
ってその生体内動態、器官親和性には微妙な差違が存在
することも既知である。従って、より有効なガン化学療
法に資するには、さらに多様な抗癌物質を提供すること
が依然と望まれている。そこで、本発明の目的は、上記
レプトマイシンに類縁する化合物であるが、その構造、
特に官能基において特徴を有する新規物質を提供するこ
とにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
に沿い、そして従来の臨床的に使用されている抗癌剤は
ＤＮＡ合成阻害剤或いは該毒に分類されるものがほとん
どであることに鑑みて、新しい抗腫瘍剤を開発すべくＤ
ＮＡ合成阻害或いは該毒の作用を示さない新規な活性物
質を広く土壌分離菌の培養液中から探索した。その結
果、京都府の土壌サンプルから分離した放線菌の一菌株
が、正常細胞を可逆的に細胞周期の制御期と考えられて
いるＧ１，Ｇ２期に特異的に停止させ、さらに従来の文
献に未載である物質を生産することを見い出し本発明を
完成した。
に沿い、そして従来の臨床的に使用されている抗癌剤は
ＤＮＡ合成阻害剤或いは該毒に分類されるものがほとん
どであることに鑑みて、新しい抗腫瘍剤を開発すべくＤ
ＮＡ合成阻害或いは該毒の作用を示さない新規な活性物
質を広く土壌分離菌の培養液中から探索した。その結
果、京都府の土壌サンプルから分離した放線菌の一菌株
が、正常細胞を可逆的に細胞周期の制御期と考えられて
いるＧ１，Ｇ２期に特異的に停止させ、さらに従来の文
献に未載である物質を生産することを見い出し本発明を
完成した。
【０００７】従って、本発明によれば以下に記載の物質
化学的性質を有する新規物質Ｓ−５９９１７ａが提供さ
れる。 Ａ．分子量が４９８（ＳＩマススペクトルでの測定）で
あり、 Ｂ．紫外線吸収スペクトル（メタノール溶液での測定）
がλｍａｘ２４３及び２９６ｎｍを示し（図１参照）、 Ｃ．赤外線吸収スペクトル（フィルムでの測定）が約１
７０７及び１７３２ｃｍ−１並びに３４５０ｃｍ−１に
特徴のある吸収を示し（図２参照）、 Ｄ．１Ｈ−ＮＭＲスペクトルが４．１４ｐｐｍに特徴の
ある吸収を示し（図３参照）、 Ｅ．１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルが５９．２ｐｐｍに特徴
のある吸収を示し（図４参照）、 Ｆ．比旋光度が−１３０度（ｃ＝０．１８、メタノー
ル）であり、 Ｇ．薄層クロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム
／メタノール＝９／１、薄層：メルク社製「ＨＰＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４使用）のＲｆ値が約０．７であ
り、 Ｈ．呈色反応がヨード反応及びバニリン硫酸反応に陽性
で、ニンヒドリン反応に陰性であり、 Ｉ．溶解性がメタノール、エタノール、アセトン、酢酸
エチル及びクロロホルムに可溶性で、水及びヘキサンに
不溶性であり、そして Ｊ．物質の外観が淡黄色油状である。
化学的性質を有する新規物質Ｓ−５９９１７ａが提供さ
れる。 Ａ．分子量が４９８（ＳＩマススペクトルでの測定）で
あり、 Ｂ．紫外線吸収スペクトル（メタノール溶液での測定）
がλｍａｘ２４３及び２９６ｎｍを示し（図１参照）、 Ｃ．赤外線吸収スペクトル（フィルムでの測定）が約１
７０７及び１７３２ｃｍ−１並びに３４５０ｃｍ−１に
特徴のある吸収を示し（図２参照）、 Ｄ．１Ｈ−ＮＭＲスペクトルが４．１４ｐｐｍに特徴の
ある吸収を示し（図３参照）、 Ｅ．１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルが５９．２ｐｐｍに特徴
のある吸収を示し（図４参照）、 Ｆ．比旋光度が−１３０度（ｃ＝０．１８、メタノー
ル）であり、 Ｇ．薄層クロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム
／メタノール＝９／１、薄層：メルク社製「ＨＰＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４使用）のＲｆ値が約０．７であ
り、 Ｈ．呈色反応がヨード反応及びバニリン硫酸反応に陽性
で、ニンヒドリン反応に陰性であり、 Ｉ．溶解性がメタノール、エタノール、アセトン、酢酸
エチル及びクロロホルムに可溶性で、水及びヘキサンに
不溶性であり、そして Ｊ．物質の外観が淡黄色油状である。
【０００８】上記の物理化学性質、特に各スペクトルか
ら明らかなように、本発明の新規物質は上記レプトマイ
シンＢに構造上近似するものの、赤外線吸収スペクトル
の約１７０７及び１７３２ｃｍ−１の波形よりカルボン
酸に由来するカルボニル基の吸収の不存在、１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトル及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのそれぞれ
４．１４ｐｐｍ及び５９．２ｐｐｍの吸収にみられるよ
うに水酸基の結合したメチレン（−ＣＨ２−ＯＨ）に由
来するプロトン及び炭素の存在が示唆され、レプトマイ
シンＢを初めとする上記従来文献に記載のレプトマイシ
ンＡ、カズサマイシンＢ及び新規物質ＫＲ２８２７が１
位の炭素原子がカルボキシル基に由来することに比し極
立つ構造上の特徴を有する。すなわち、各スペクトル解
析の結果、本発明の新規物質Ｓ−５９９１７ａは、平面
構造式上レプトマイシンＢの２１位デメチル体で、１７
位のエチル基がメチル基に、そしてかつ末端（１位炭
素）カルボン酸がアルコールに置き代わった下記式で示
される構造を有するものと推定できる。
ら明らかなように、本発明の新規物質は上記レプトマイ
シンＢに構造上近似するものの、赤外線吸収スペクトル
の約１７０７及び１７３２ｃｍ−１の波形よりカルボン
酸に由来するカルボニル基の吸収の不存在、１Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトル及び１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのそれぞれ
４．１４ｐｐｍ及び５９．２ｐｐｍの吸収にみられるよ
うに水酸基の結合したメチレン（−ＣＨ２−ＯＨ）に由
来するプロトン及び炭素の存在が示唆され、レプトマイ
シンＢを初めとする上記従来文献に記載のレプトマイシ
ンＡ、カズサマイシンＢ及び新規物質ＫＲ２８２７が１
位の炭素原子がカルボキシル基に由来することに比し極
立つ構造上の特徴を有する。すなわち、各スペクトル解
析の結果、本発明の新規物質Ｓ−５９９１７ａは、平面
構造式上レプトマイシンＢの２１位デメチル体で、１７
位のエチル基がメチル基に、そしてかつ末端（１位炭
素）カルボン酸がアルコールに置き代わった下記式で示
される構造を有するものと推定できる。
【０００９】
【化２】
【００１０】新規物質Ｓ−５９９１７ａは、ラット繊維
芽細胞３Ｙ１にたいして、細胞周期をＧ１，Ｇ２期に特
異的かつ可逆的に停止させる活性を有し、これまで、臨
床的に用いられている抗腫瘍剤とはまったく活性モード
が異なることを示唆している。また、１ｎｇ／ｍｌとい
う低濃度でも細胞増殖を停止させる強力な活性を有して
いることが判明した。従って、新規物質Ｓ−５９９１７
ａは、新しいタイプの活性を有する抗腫瘍剤となり得る
ことが期待できる。
芽細胞３Ｙ１にたいして、細胞周期をＧ１，Ｇ２期に特
異的かつ可逆的に停止させる活性を有し、これまで、臨
床的に用いられている抗腫瘍剤とはまったく活性モード
が異なることを示唆している。また、１ｎｇ／ｍｌとい
う低濃度でも細胞増殖を停止させる強力な活性を有して
いることが判明した。従って、新規物質Ｓ−５９９１７
ａは、新しいタイプの活性を有する抗腫瘍剤となり得る
ことが期待できる。
【００１１】上記新規物質Ｓ−５９９１７ａは、もう一
つの本発明である、ストレプトマイセス属に属する新規
物質Ｓ−５９９１７ａ生産菌を栄養培地に培養し、培養
液中に該物質を生成蓄積させ、次いで該培養物から該物
質を採取することを特徴とする新規物質Ｓ−５９９１７
ａの製造方法によって有利に製造することができる。培
養に用いる栄養培地としては、通常、放線菌の培養に用
いられる培地ならばいずれも使用できる。また、液体培
養のみならず、寒天などの固相をもちいた固体培養でも
生産は可能である。
つの本発明である、ストレプトマイセス属に属する新規
物質Ｓ−５９９１７ａ生産菌を栄養培地に培養し、培養
液中に該物質を生成蓄積させ、次いで該培養物から該物
質を採取することを特徴とする新規物質Ｓ−５９９１７
ａの製造方法によって有利に製造することができる。培
養に用いる栄養培地としては、通常、放線菌の培養に用
いられる培地ならばいずれも使用できる。また、液体培
養のみならず、寒天などの固相をもちいた固体培養でも
生産は可能である。
【００１２】培養温度は、２０〜３７Ｃが適当で、特に
２５〜３０Ｃが好ましい。新規物質Ｓ−５９９１７ａ
は、主として菌体内に蓄積するが、培養液中にも生産さ
れるので菌体抽出物、培養ろ液の両画分より精製でき
る。遠心分離或いはけいそう土等の適当なろ過助材を用
いたろ過により分離した菌体を、アセトン、アルコー
ル、酢酸エチル等で抽出し、減圧濃縮して有機溶媒を除
去したのち、以降の精製操作に処する。
２５〜３０Ｃが好ましい。新規物質Ｓ−５９９１７ａ
は、主として菌体内に蓄積するが、培養液中にも生産さ
れるので菌体抽出物、培養ろ液の両画分より精製でき
る。遠心分離或いはけいそう土等の適当なろ過助材を用
いたろ過により分離した菌体を、アセトン、アルコー
ル、酢酸エチル等で抽出し、減圧濃縮して有機溶媒を除
去したのち、以降の精製操作に処する。
【００１３】また、培養ろ液からは、一般に脂溶性物質
を抽出する非親水性有機溶媒、たとえば酢酸エチル、酢
酸ブチル、クロロホルム等で抽出することで目的物質を
有機溶媒層に転溶させ減圧濃縮する方法、或いは、吸着
剤である活性炭、ダイアイオン（商標、三菱化成）ＨＰ
２０を用いて培養液中の目的物質を吸着させた後、前述
の溶媒抽出操作に処することで粗標品を得ることができ
る。
を抽出する非親水性有機溶媒、たとえば酢酸エチル、酢
酸ブチル、クロロホルム等で抽出することで目的物質を
有機溶媒層に転溶させ減圧濃縮する方法、或いは、吸着
剤である活性炭、ダイアイオン（商標、三菱化成）ＨＰ
２０を用いて培養液中の目的物質を吸着させた後、前述
の溶媒抽出操作に処することで粗標品を得ることができ
る。
【００１４】得られた粗標品をさらに精製するには、一
般に用いられる脂溶性物質の精製法をもちいることがで
きる。すなわち、溶解度、二層溶媒にたいする分配率の
差を利用した分離法、さらに、ゲルろ過、分配、吸着等
の種々の分離モードを利用したカラムクロマトグラフィ
ーを適宜組み合わせ用いて精製することが有効である。
例えば、上述のように得られた新規物質Ｓ−５９９１７
ａ粗標品をシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィ
ー、セファデックス（商標、ファルマシア）ＬＨ２０な
どを用いたゲルろ過法、セミ分取用シリカゲル、逆相シ
リカゲル等による高速液体クロマトグラフィーを用いる
ことにより、新規物質Ｓ−５９９１７ａの精製が可能で
ある。
般に用いられる脂溶性物質の精製法をもちいることがで
きる。すなわち、溶解度、二層溶媒にたいする分配率の
差を利用した分離法、さらに、ゲルろ過、分配、吸着等
の種々の分離モードを利用したカラムクロマトグラフィ
ーを適宜組み合わせ用いて精製することが有効である。
例えば、上述のように得られた新規物質Ｓ−５９９１７
ａ粗標品をシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィ
ー、セファデックス（商標、ファルマシア）ＬＨ２０な
どを用いたゲルろ過法、セミ分取用シリカゲル、逆相シ
リカゲル等による高速液体クロマトグラフィーを用いる
ことにより、新規物質Ｓ−５９９１７ａの精製が可能で
ある。
【００１５】本発明の新規物質Ｓ−５９９１７ａの生産
菌は、上述のごとく京都府の畑の土壌より分離した放線
菌であって、本発明者らがＳＡＭ１５９５株と命名する
菌株を特に好ましいものとして挙げることができる。こ
の菌株は、以下に示すような菌学的性質を有する。
菌は、上述のごとく京都府の畑の土壌より分離した放線
菌であって、本発明者らがＳＡＭ１５９５株と命名する
菌株を特に好ましいものとして挙げることができる。こ
の菌株は、以下に示すような菌学的性質を有する。
【００１６】１．形態 １／１０酵母エキス・スターチ寒天培地で２８℃、３〜
５日間培養し、光学顕微鏡及び走査型電子顕微鏡で観察
を行った。基生菌糸は分裂を伴って曲線状ないし直線状
に伸長する。基生菌糸に断裂は認められない。基生菌糸
より生じた気菌糸の先端に１０〜２０個の胞子の連鎖が
形成される。胞子連鎖は螺旋状である。胞子は楕円形、
長さ１．２〜１．６μｍ、幅０．６〜０．９μｍ、胞子
表面は毛状（ｈａｉｒｙ）である。胞子のう、運動性胞
子、輪生岐（ｗｈｏｒｌ）、菌核は認められない。
５日間培養し、光学顕微鏡及び走査型電子顕微鏡で観察
を行った。基生菌糸は分裂を伴って曲線状ないし直線状
に伸長する。基生菌糸に断裂は認められない。基生菌糸
より生じた気菌糸の先端に１０〜２０個の胞子の連鎖が
形成される。胞子連鎖は螺旋状である。胞子は楕円形、
長さ１．２〜１．６μｍ、幅０．６〜０．９μｍ、胞子
表面は毛状（ｈａｉｒｙ）である。胞子のう、運動性胞
子、輪生岐（ｗｈｏｒｌ）、菌核は認められない。
【００１７】２．培養性状 各種培地で２８℃、２１日間培養後観察を行った。観察
結果を表１に示す。
結果を表１に示す。
【表１】
【００１８】３・生理的性質 生育温度範囲：１８℃〜３５℃、生育至適温度は２６℃
〜３５℃ ゼラチンの液化； グルコース・ペプトンゼラチン培地 陽性 単純ゼラチン培地 陽性 スターチの分解： 陽性 脱脂牛乳の凝固： 陰性 脱脂牛乳のペプトン化： 陰性 メラニン様色素の生成： チロシン寒天培地 陰性 ペプトン・イースト鉄寒天培地 陰性 硝酸塩の還元： 陰性
〜３５℃ ゼラチンの液化； グルコース・ペプトンゼラチン培地 陽性 単純ゼラチン培地 陽性 スターチの分解： 陽性 脱脂牛乳の凝固： 陰性 脱脂牛乳のペプトン化： 陰性 メラニン様色素の生成： チロシン寒天培地 陰性 ペプトン・イースト鉄寒天培地 陰性 硝酸塩の還元： 陰性
【００１９】炭素源の同化性：
【００２０】４．化学分類学的性質 細胞壁組成：全菌体中にＬＬ−ジアミノピメリン酸を含
む。 キノン組成：ＭＫ−９（Ｈ４）とＭＫ−９（Ｈ６）を主
成分として持つ。 なお、各種試験は「放線菌の同定実験法」（清野 昭雄
編、日本放線菌研究会、東京、１９８５年）に準拠して
行った。
む。 キノン組成：ＭＫ−９（Ｈ４）とＭＫ−９（Ｈ６）を主
成分として持つ。 なお、各種試験は「放線菌の同定実験法」（清野 昭雄
編、日本放線菌研究会、東京、１９８５年）に準拠して
行った。
【００２１】以上のようにＳＡＭ １５９５株は基生菌
糸より、連鎖胞子を形成する気菌糸を形成し、胞子の
う、運動性胞子、輪生岐（ｗｈｏｒｌ）、菌核を形成せ
ず、またジアミノピメリン酸がＬＬ型であること等の特
徴を有することから、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する放線菌であると考えられ
る。そこで、ＳＡＭ １５９５株をＳｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓｓｐ．と同定した。なお、ＳＡＭ １５９５株は
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＳＡＭ１５９５と命名
され工業技術院微生物工業技術研究所に平成３年１月１
８日に微工研条寄第３２２７号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２
２７）として寄託されている。
糸より、連鎖胞子を形成する気菌糸を形成し、胞子の
う、運動性胞子、輪生岐（ｗｈｏｒｌ）、菌核を形成せ
ず、またジアミノピメリン酸がＬＬ型であること等の特
徴を有することから、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する放線菌であると考えられ
る。そこで、ＳＡＭ １５９５株をＳｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓｓｐ．と同定した。なお、ＳＡＭ １５９５株は
Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ．ＳＡＭ１５９５と命名
され工業技術院微生物工業技術研究所に平成３年１月１
８日に微工研条寄第３２２７号（ＦＥＲＭ ＢＰ−３２
２７）として寄託されている。
【００２２】
【実施例】以下の実施例により本発明をより具体的に説
明する。実施例１ ＳＡＭ １５９５株の培養 １００ｍｌのＹＮ培地を５００ｍｌ坂口フラスコに分注
し、滅菌後、ＳＡＭ１５９５株をスラントより接種し、
２８℃、５日間振とう培養したもの９本をシードとし、
５０Ｌ容ジャーファーメンターを用い２５Ｌ滅菌ＹＮ培
地で３００ｒｐｍ，０．８ｖｖｍで２８℃，６０時間通
気攪はん培養し、さらにこれをシードとし、５００Ｌ容
ジョーファーメンターを用い２７０Ｌ滅菌ＹＮ培地で１
５０ｒｐｍ，０．５ｖｖｍ，２８℃で９６時間、通気攪
はん培養した。消泡剤にはアデカノールを使用した。
明する。実施例１ ＳＡＭ １５９５株の培養 １００ｍｌのＹＮ培地を５００ｍｌ坂口フラスコに分注
し、滅菌後、ＳＡＭ１５９５株をスラントより接種し、
２８℃、５日間振とう培養したもの９本をシードとし、
５０Ｌ容ジャーファーメンターを用い２５Ｌ滅菌ＹＮ培
地で３００ｒｐｍ，０．８ｖｖｍで２８℃，６０時間通
気攪はん培養し、さらにこれをシードとし、５００Ｌ容
ジョーファーメンターを用い２７０Ｌ滅菌ＹＮ培地で１
５０ｒｐｍ，０．５ｖｖｍ，２８℃で９６時間、通気攪
はん培養した。消泡剤にはアデカノールを使用した。
【００２３】ＹＮ培地 （１Ｌ中の培地組成、ｐＨ７．０） 可溶性澱粉 ２０ｇ グリセロール １０ｇ ポリペプトン ５ｇ 麦芽エキス ２ｇ 乾燥酵母エキス ５ｇ 塩化ナトリウム ２ｇ Ｋ２ＨＰＯ４ ０．５ｇ ＨｇＳＯ４．７Ｈ２Ｏ ０．５ｇ
【００２４】実施例２ 培養物からのＳ−５９９１７ａ
の抽出 上記の条件で培養後、培養液約３００Ｌをろ過助剤を用
いてろ過集菌し、集めた菌体をメタノール３０Ｌ中で攪
拌し、さらに酢酸エチル３６Ｌを加え活性成分を抽出し
た。抽出液を２Ｌに減圧濃縮し溶媒を完全に除いたの
ち、へキサン２Ｌで洗浄後、酢酸エチル２Ｌで３回抽出
後、抽出物を減圧濃縮し、Ｓ−５９９１７ａを含む茶褐
色の油状物約１５０ｇを得た。
の抽出 上記の条件で培養後、培養液約３００Ｌをろ過助剤を用
いてろ過集菌し、集めた菌体をメタノール３０Ｌ中で攪
拌し、さらに酢酸エチル３６Ｌを加え活性成分を抽出し
た。抽出液を２Ｌに減圧濃縮し溶媒を完全に除いたの
ち、へキサン２Ｌで洗浄後、酢酸エチル２Ｌで３回抽出
後、抽出物を減圧濃縮し、Ｓ−５９９１７ａを含む茶褐
色の油状物約１５０ｇを得た。
【００２５】実施例３ Ｓ−５９９１７ａの精製 得られた抽出物を少量のクロロホルムに溶かし、数回に
分けてクロロホルムで充填されたシリカゲルカラムでク
ロロホルム、メタノールによるグラジェント溶出クロマ
トグラフィーを行った。得られた活性画分を濃縮乾固
後、セミ分取高速液体クロマトグラフィー（センシュー
科学、アクアシルカラム、２０×２５０ｍｍ）に付し、
クロロホルム／メタノール（９８：２）、さらにヘキサ
ン／酢酸エチル（１：３）で繰り返し分取することでＳ
−５９９１７ａの純品２８０ｍｇを得た。
分けてクロロホルムで充填されたシリカゲルカラムでク
ロロホルム、メタノールによるグラジェント溶出クロマ
トグラフィーを行った。得られた活性画分を濃縮乾固
後、セミ分取高速液体クロマトグラフィー（センシュー
科学、アクアシルカラム、２０×２５０ｍｍ）に付し、
クロロホルム／メタノール（９８：２）、さらにヘキサ
ン／酢酸エチル（１：３）で繰り返し分取することでＳ
−５９９１７ａの純品２８０ｍｇを得た。
【００２６】実施例４ Ｓ−５９９１７ａのラット繊維
芽細胞３Ｙ１に対する活性 ラット正常繊維芽細胞３Ｙ１を、径３５ｍｍのシャーレ
に５×１０４細胞接種した。培地は、１２％血清を含む
ＭＥＭ培地２ｍｌを用いた。各シャーレに、各種濃度の
Ｓ−５９９１７ａを添加し、２４時間後の細胞増殖に対
する影響を、フローサイトメトリーを用いて以下に示す
方法で解析した。すなわち、常法に従がい、薬剤処理後
の細胞をトリプシン処理により集め、界面活性剤Ｎｏｎ
ｉｄｅｎｔ（商標、シグマケミカル）Ｐ４０処理によ
り、裸核を得、これを、プロピジウムイオダイドで核染
色したものをサンプルとし、Ｅｐｉｃｓ（商標、コール
ター社）Ｃを用いて、４８８ｎｍ励起光で、核一つあた
りのＤＮＡ含量を測定することにより、細胞増殖の解析
を行なった。その結果、Ｓ−５９９１７ａは１ｎｇ／ｍ
ｌ濃度で上記細胞周期をＧ１，Ｇ２期に停止させた。
芽細胞３Ｙ１に対する活性 ラット正常繊維芽細胞３Ｙ１を、径３５ｍｍのシャーレ
に５×１０４細胞接種した。培地は、１２％血清を含む
ＭＥＭ培地２ｍｌを用いた。各シャーレに、各種濃度の
Ｓ−５９９１７ａを添加し、２４時間後の細胞増殖に対
する影響を、フローサイトメトリーを用いて以下に示す
方法で解析した。すなわち、常法に従がい、薬剤処理後
の細胞をトリプシン処理により集め、界面活性剤Ｎｏｎ
ｉｄｅｎｔ（商標、シグマケミカル）Ｐ４０処理によ
り、裸核を得、これを、プロピジウムイオダイドで核染
色したものをサンプルとし、Ｅｐｉｃｓ（商標、コール
ター社）Ｃを用いて、４８８ｎｍ励起光で、核一つあた
りのＤＮＡ含量を測定することにより、細胞増殖の解析
を行なった。その結果、Ｓ−５９９１７ａは１ｎｇ／ｍ
ｌ濃度で上記細胞周期をＧ１，Ｇ２期に停止させた。
【００２７】
【発明の効果】本発明によれば、抗腫瘍作用及び抗真菌
作用を有する新規物質Ｓ−５９９１７ａが提供される。
かかる物質は、特異な抗腫瘍活性を示すレプトマイシン
Ｂと、特に１位の炭素原子がカルボキシル基に代わりメ
チロール基を有し、１７位のエチル基に代わりメチル基
を有し、そして２１位デメチル体である点で構造式上相
違するので、生体内に投与した場合レプトマイシンＢと
異なる薬物動態を示すことが期待できる。
作用を有する新規物質Ｓ−５９９１７ａが提供される。
かかる物質は、特異な抗腫瘍活性を示すレプトマイシン
Ｂと、特に１位の炭素原子がカルボキシル基に代わりメ
チロール基を有し、１７位のエチル基に代わりメチル基
を有し、そして２１位デメチル体である点で構造式上相
違するので、生体内に投与した場合レプトマイシンＢと
異なる薬物動態を示すことが期待できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】メタノール中で測定しＳ−５９９１７ａの紫外
線吸収スペクトルを示す図である。
線吸収スペクトルを示す図である。
【図２】Ｓ−５９９１７ａをフィルム上にしてＫＢｒセ
ルを用いて測定した赤外線吸収スペクトルを示す図であ
る。
ルを用いて測定した赤外線吸収スペクトルを示す図であ
る。
【図３】Ｓ−５９９１７ａの重クロロホルム中２７０Ｍ
Ｈｚで測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
Ｈｚで測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図であ
る。
【図４】Ｓ−５９９１７ａの重クロロホルム中６７．８
０ＭＨｚで測定した１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
０ＭＨｚで測定した１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.5 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） 7804−4Ｂ (72)発明者 吉栖 肇 東京都墨田区緑四丁目19−６−607 (72)発明者 吉田 稔 埼玉県和光市白子３−18−１ リバーサイ ド積田502 (72)発明者 別府 輝彦 東京都杉並区堀之内１−５−21
Claims (2)
- 【請求項１】 以下に記載の物理化学的性質を有する新
規物質Ｓ−５９９１７ａ： Ａ．分子量が４９８（ＳＩマススペクトルでの測定）で
あり、 Ｂ．紫外線吸収スペクトル（メタノール溶液での測定）
がλｍａｘ２４３及び２９６ｎｍを示し、 Ｃ．赤外線吸収スペクトル（フィルムでの測定）が約１
７０７及び１７３２ｃｍ−１並びに３４５０ｃｍ−１に
特徴のある吸収を示し、 Ｄ．１Ｈ−ＮＭＲスペクトルが４．１４ｐｐｍに特徴の
ある吸収を示し、 Ｅ．１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルが５９．２ｐｐｍに特徴
のある吸収を示し、 Ｆ．比旋光度が−１３０度（ｃ＝０．１８、メタノー
ル）であり、 Ｇ．薄層クロマトグラフィー（展開溶媒：クロロホルム
／メタノール＝９／１、薄層：メルク社製「ＨＰＴＬＣ
シリカゲル６０Ｆ２５４使用）のＲｆ値が約０．７であ
り、 Ｈ．呈色反応がヨード反応及びバニリン硫酸反応に陽性
で、ニンヒドリン反応に陰性であり、 Ｉ．溶解性がメタノール、エタノール、アセトン、酢酸
エチル及びクロロホルムに可溶性で、水及びヘキサンに
不溶性であり、そして Ｊ．物質の外観が淡黄色油状である。 - 【請求項２】 ストレプトマイセス属に属する請求項１
記載の抗癌物質Ｓ−５９９１７ａ生産菌を栄養培地に培
養し、培養液中に該物質を生成蓄積させ、該培養物から
該物質を採取することを特徴とする新規物質Ｓ−５９９
１７ａの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9832191A JPH0539283A (ja) | 1991-01-31 | 1991-01-31 | 新規物質Ｓ−５９９１７ａ及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9832191A JPH0539283A (ja) | 1991-01-31 | 1991-01-31 | 新規物質Ｓ−５９９１７ａ及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0539283A true JPH0539283A (ja) | 1993-02-19 |
Family
ID=14216644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9832191A Pending JPH0539283A (ja) | 1991-01-31 | 1991-01-31 | 新規物質Ｓ−５９９１７ａ及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0539283A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004045602A1 (ja) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Japan Science And Technology Agency | マトリックスメタロプロテアーゼ−9の産生を阻害するための薬剤 |
| US7795457B2 (en) | 2007-02-26 | 2010-09-14 | Kosan Biosciences Incorporated | Carbamate compounds |
| JP2011506575A (ja) * | 2007-12-20 | 2011-03-03 | ファルマ・マール・ソシエダード・アノニマ | 抗腫瘍化合物 |
| US10538535B2 (en) | 2017-04-27 | 2020-01-21 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
-
1991
- 1991-01-31 JP JP9832191A patent/JPH0539283A/ja active Pending
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2004045602A1 (ja) * | 2002-11-20 | 2004-06-03 | Japan Science And Technology Agency | マトリックスメタロプロテアーゼ−9の産生を阻害するための薬剤 |
| US7795457B2 (en) | 2007-02-26 | 2010-09-14 | Kosan Biosciences Incorporated | Carbamate compounds |
| JP2011506575A (ja) * | 2007-12-20 | 2011-03-03 | ファルマ・マール・ソシエダード・アノニマ | 抗腫瘍化合物 |
| US9187445B2 (en) | 2007-12-20 | 2015-11-17 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
| US9750759B2 (en) | 2007-12-20 | 2017-09-05 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
| US9827257B2 (en) | 2007-12-20 | 2017-11-28 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
| US10538535B2 (en) | 2017-04-27 | 2020-01-21 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
| US11332480B2 (en) | 2017-04-27 | 2022-05-17 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
| US11339180B2 (en) | 2017-04-27 | 2022-05-24 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
| US11713325B2 (en) | 2017-04-27 | 2023-08-01 | Pharma Mar, S.A. | Antitumoral compounds |
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