JPH09169756A

JPH09169756A - 生理活性物質ｅｉ−１９４１類

Info

Publication number: JPH09169756A
Application number: JP8041986A
Authority: JP
Inventors: Tatsuho Tanaka; 健穂田中; Fumito Koizumi; 文人小泉; Hiroki Ishiguro; 博樹石黒; Hidemasa Kondo; 英正近藤; Mayumi Koda; 真由美好田; Katsuhiko Ando; 勝彦安藤; Yuzuru Matsuda; 譲松田
Original assignee: Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd
Current assignee: KH Neochem Co Ltd
Priority date: 1995-10-16
Filing date: 1996-02-29
Publication date: 1997-06-30
Also published as: EP0768306A1; US5686485A; CA2187850A1

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】優れたＩＬ−１産生阻害作用を有する新規生
理活性物質を提供する。【解決手段】一般式（Ｉ）〔式中、Ｒ^１およびＲ^２は異なって水素またはヒドロキ
シを表すか、Ｒ^１およびＲ^２が一緒になって酸素を表
し、Ｒ^３はヒドロキシを表し、Ｒ^４は水素を表すか、Ｒ
^３およびＲ^４が一緒になって−Ｏ−を表す。〕で表さ
れ、ＩＬ−１産生抑制作用を有する新規化合物ＥＩ−１
９４１類。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明はファローヴィア属に
属する微生物により生産され、インターロイキン−１産
生阻害作用を有し、かつ慢性関節リウマチ、痛風、変形
性関節症、骨粗鬆症、結節性動脈周囲炎、潰瘍性大腸
炎、慢性腎炎、活動性慢性肝炎、敗血症、エンドトキシ
ン性ショック、アテローム硬化症、感染症に関わる発熱
等の症状、もしくは全身性強皮症などの治療剤として有
用な新規ＩＬ−１β産生抑制物質に関する。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン−１（以下、ＩＬ−１
と称する）は体内の多彩な細胞、例えばマクロファージ
や単球をはじめとし、好中球、線維芽細胞、皮膚ケラチ
ノサイト、肝臓クッパー細胞、腎糸球体メサンギウム細
胞、脳の星状細胞・グリア細胞、血管内皮細胞などから
産生される分子量17.5kDaの蛋白質で等電点（以下pIと
称する）が５のα型とpIが７のβ型がある。現在のとこ
ろα型とβ型は同じ作用をすることがわかっている。

【０００３】ＩＬ−１は多種多様の生物活性を有するこ
とが知られている。すなわち、ＩＬ−１はリンパ球の分
裂増殖に対する反応性の増強因子として働く他、Ｂ細胞
の増殖や抗体産生増強の補助因子として働くとされてい
る。また、ＩＬ−１は視床下部の温度中枢においてアラ
キドン酸カスケードに作用し、プロスタグランジンＥ ₂
合成を高めることで発熱に関与していると考えられてい
る。さらに、ＩＬ−１は敗血症、クーロン病などの患者
血清や、関節リウマチ患者の関節腔においてその活性が
有意に上昇していることが示されており、これらの疾病
の発症、進展へのＩＬ−１の関与が示唆されている。こ
うしたＩＬ−１で仲介される症状の軽減にはＩＬ−１産
生の抑制が有効と考えられる。

【０００４】ＩＬ−１産生抑制作用を有する物質として
は、従来、ナフタレン誘導体（特開平４−５９７４３号
公報）、３−アリールイソチアゾール誘導体（特開平４
−７４１２１号公報）、ジンゲロール誘導体（特開平４
−２０２１２７号公報）などの合成化合物が知られてい
る。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、優れ
たＩＬ−１産生阻害作用を有する新規生理活性物質を提
供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、式
（Ｉ）

【化２】（式中、Ｒ¹およびＲ²は異なって水素またはヒドロキシ
を表すか、Ｒ¹およびＲ²が一緒になって酸素を表し、Ｒ
³はヒドロキシを表し、Ｒ⁴は水素を表すか、Ｒ³および
Ｒ⁴が一緒になって-O- を表す。）で表され、ＩＬ−１
産生阻害作用を有する化合物ＥＩ−１９４１類が提供さ
れる。

【０００７】

【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
式（Ｉ）で表される化合物の具体例としては、Ｒ¹が水
素、Ｒ²がヒドロキシを表し、Ｒ³およびＲ⁴が一緒にな
って-O- である化合物（以下、ＥＩ−１９４１−１とい
う）、Ｒ¹およびＲ²が一緒になって酸素を表し、Ｒ³お
よびＲ⁴が一緒になって-O- である化合物（以下、ＥＩ
−１９４１−２という）、Ｒ¹およびＲ²が一緒になって
酸素を表し、Ｒ³がヒドロキシ、Ｒ⁴が水素である化合物
（以下、ＥＩ−１９４１−３という）などが例示され
る。また、これらの化合物をＥＩ−１９４１類と総称す
る。

【０００８】ＥＩ−１９４１類の理化学的性質は以下に
示すとおりである。なお、以下のデータは下記の機器よ
り測定した。質量分析：日本電子 JMS HX/HX110A 質量分析装置紫外吸収スペクトル：島津製作所 UV-2200 分光光度計赤外吸収スペクトル：日本電子 JIR-RFX3001 赤外線分光光度計核磁気共鳴スペクトル：日本電子 α400 核磁気共鳴装置 Bruker AM500 核磁気共鳴装置旋光度：日本分光工業 DIP-370 型デジタル旋光計

【０００９】ＥＩ−１９４１−１の理化学的性質性状：褐色油状比旋光度：[ α]_D ²⁶ = -193.7゜(c=0.314,CH₃OH) FABMS スペクトル：m/z amu 241 (M+H)⁺ 高分解能FABMS スペクトル：m/z amu 241.1058 (M+H)⁺,
Δ-1.8 mmu UVスペクトル(CH₃OH) ：λ_max nm (ε) 209 (6,800)
, 241 (5,500)+HCl 未変化+NaOH 218 , 242 , 341 IRスペクトル(KBr)：υ_max nm (cm^-1) 725, 874, 102
6, 1281, 1456, 1682, 2873, 2933, 2960, 3419 CDスペクトル(CH₃OH) ：λ_max nm (Δε) 335 (-3.
0), 246 (-9.2)¹ H-NMRスペクトル：δ ppm（積分、多重度、結合定数）
5.584 (1H,s), 4.647 (1H, m),3.918 (1H, m), 3.757
(1H, dd, J=3.7,1.5 Hz),3.444 (1H, dd, J=3.7,1.2 H
z), 2.111 (1H ,m), 2.004 (1H, m), 1.5 (4H, m), 0.9
47 (3H, t, J=7.2 Hz)¹³ C-NMR スペクトル：δ ppm（多重度）195.6 (s), 14
9.2 (s), 130.2 (s), 88.8 (d), 66.8 (d), 63.3 (d),
58.2 (d),53.7 (d), 38.5 (t), 28.9 (d), 19.5 (t), 1
4.3 (q) 溶解性：メタノール、アセトニトリルに易溶呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性薄層クロマトグラフィー（Ｒｆ値）：０.４３展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝９：１薄層：HPTLC Fertigplatten kieselgel 60 F254（メル
ク社製）展開方法：室温、上昇法、２０〜４０分検出：ヨウ素発色

【００１０】ＥＩ−１９４１−２の理化学的性質性状：赤色油状 FABMS スペクトル：m/z amu 239 (M+H)⁺ 高分解能FABMS スペクトル：m/z amu 239.0928 (M+H)⁺,
Δ0.9 mmu¹ H-NMRスペクトル：δ ppm（積分、多重度、結合定数）
4.946 (1H, m), 4.5 (1H, m), 3.838 (1H, dd, J=3.7,
1.7Hz), 3.553 (1H, dd,J=3.7, 1.0Hz), 2.535 (1H, dd
d, J=18.1, 4.7, 1.3Hz), 2.462 (1H, ddd, J=18.6, 1
0.0, 1.0Hz), 1.6 (2H, m), 1.4 (2H, m), 0.922 (3H,
t, J=7.3Hz)¹³ C-NMR スペクトル：δ ppm（多重度）195.4 (s), 16
5.2 (s), 141.5 (s), 138.7 (d), 78.5 (d), 62.0 (d),
57.3 (d), 53.3 (d), 37.1 (t), 26.8 (t), 18.8 (t),
14.0 (q) 溶解性：メタノール、アセトニトリルに易溶呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性薄層クロマトグラフィー（Ｒｆ値）：０.６８展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝９：１薄層：HPTLC Fertigplatten kieselgel 60 F254（メル
ク社製）展開方法：室温、上昇法、２０〜４０分検出：ヨウ素発色

【００１１】ＥＩ−１９４１−３の理化学的性質性状：赤色油状比旋光度：[ α]_D ²³ = -87.5゜(c=0.314,CH₃OH) FABMS スペクトル：m/z amu 241 (M+H)⁺ 高分解能FABMS スペクトル：m/z amu 241.1061 (M+H)⁺,
Δ-1.5 mmu UVスペクトル(CH₃OH) ：λ_max nm (ε) 232 (6,800)+
HCl 未変化+NaOH 214, 235, 383 IRスペクトル(KBr)：υ_max nm (cm^-1) 1024, 1230, 1
410, 1693, 1716, 2873,2933, 2960, 3419¹ H-NMRスペクトル：δ ppm（積分、多重度、結合定数）
4.5 (1H, m), 4.218 (1H, q, J=3.4Hz), 2.924 (1H, d
d, J=16.4, 3.1Hz), 2.758 (1H, ddd, J=18.3, 3.8, 1.
3Hz), 2.506 (1H, dd, J=16.7, 3.8Hz), 2.250 (1H, dd
d, J=19.4, 12.0, 2.3Hz), 1.7 (2H, m), 1.5 (2H, m),
0.941 (3H, t, J=7.3Hz)¹³ C-NMR スペクトル：δ ppm（多重度）197.7 (s), 16
7.0 (s), 143.5 (s), 136.2 (s), 79.0 (d), 70.4 (d),
66.6 (d), 41.6 (t),37.7 (t), 26.3 (t), 18.8 (t),
14.0 (q) 溶解性：メタノール、アセトニトリルに易溶呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性薄層クロマトグラフィー（Ｒｆ値）：０.４１展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝９：１薄層：HPTLC Fertigplatten kieselgel 60 F254（メル
ク社製）展開方法：室温、上昇法、２０〜４０分検出：ヨウ素発色

【００１２】次に化合物ＥＩ−１９４１類の活性につい
て試験例で説明する。試験例ＩＬ−１産生に対する阻害作用本発明の化合物ＥＩ−１９４１類についてヒト単球系由
来株化細胞ＴＨＰ−１細胞(ATCC No.TIB 202)からのＩ
Ｌ−１βの産生阻害作用を調べた。ＩＬ−１β量はＥＬ
ＩＳＡ法により測定した。

【００１３】ＴＨＰ−１細胞を１０％非働化ウシ胎児血
清含有ＲＰＭＩ１６４０培養液（ニッスイ社製）に1 ×
10⁵個/mlの濃度で浮遊懸濁した。これを24穴プレートに
1ml/ウェルの容量で分注し、フォルボール１２−ミリス
タート１３−アセタート（ＰＭＡ；最終濃度：30nM）を
加えて、37℃、5%CO₂インキュベーターで65時間培養
し、細胞をマクロファージ様に分化させた。

【００１４】血清無添加ＲＰＭＩ１６４０で培養プレー
トを緩やかに洗浄して非付着細胞を除去した後、リポポ
リサッカライド（ＬＰＳ；最終濃度：25μg/ml）と被験
試料（最終濃度：0.05〜50μg/ml）を同時に添加した血
清無添加ＲＰＭＩ１６４０培養液（1ml/ウェル）で４時
間培養した。培養後、培養上清中に遊離したＩＬ−１β
量は、ＩＬ−１β測定キット（アマシャム社製）を用い
て測定した。

【００１５】ＩＬ−１産生阻害率は次式により算出し、
ＩＣ₅₀（50％阻害濃度）を求めた。

【００１６】ＩＬ−１産生阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／
（Ａ−Ｃ）×１００Ａ：ＬＰＳのみ添加時のＩＬ−１産生量Ｂ：ＬＰＳ＋被験試料添加時のＩＬ−１産生量Ｃ：ＬＰＳ未添加時のＩＬ−１産生量結果を第１表に示す。

【表１】

【００１７】次にＥＩ−１９４１類の製造法について説
明する。ＥＩ−１９４１類はファローヴィア属に属しＥ
Ｉ−１９４１類の生産能を有する微生物を培地に培養
し、培養物中にＥＩ−１９４１類を生成蓄積させ、該培
養物からＥＩ−１９４１類を採取することによって製造
される。ＥＩ−１９４１類の生産能を有する微生物とし
ては、ファローヴィア属に属し、ＥＩ−１９４１類生産
能を有する菌株であればいずれの菌株でも用いることが
できる。また、これらの菌株を人工的変異法、たとえば
紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理などによって変
異させた変異株あるいは自然的に変異した変異株でもＥ
Ｉ−１９４１類の生産能を有するものであれば本発明に
用いることができる。具体的に好適な例として、ファロ
ーヴィア・スピーシーズ(Farrowia sp.)Ｅ−１９４１株
があげられる。

【００１８】ファローヴィア・スピーシーズ(Farrowia
sp.)Ｅ−１９４１株の菌学的性質は次の通りである。 1.肉眼的観察麦芽エキス寒天培地を用いて、２５℃で培養したとき、
集落の直径は培養７日目で４３〜４６ｍｍに達する。培
養１４日目の集落はマスタードブラウン色で、周囲はベ
ージュ色を呈し、その裏面は、オートミール色を呈し、
中央部はスレートタン色を呈する。

【００１９】バレイショ・ブドウ糖寒天培地を用いて、
２５℃で培養したとき、集落の直径は培養７日目で５０
〜５６ｍｍに達する。培養１４日目の集落はカバードブ
ラウン色で周囲はカバートタン色を呈し、その裏面はラ
イトマスタードタン色を呈し、中央部はディープブラウ
ン色を呈する。本菌株の至適生育温度は１２〜３４.５
℃であり、２６℃前後で最も良好に生育する。生育しう
るｐＨは２〜１１で至適生育ｐＨは、８付近である。

【００２０】2.バレイショ・ブドウ糖寒天培地上で培養
したときの本菌株の光学顕微鏡的観察菌糸は隔壁を有し、よく分岐する。培地上には多数の子
嚢殻を形成する。子嚢殻は小さいびん形を呈し、褐色か
ら暗褐色、長さ１２６〜２７４μｍ、幅５３〜１１６μ
ｍで、先端に短い円錐形の孔口を形成する。子嚢殻は、
頂毛及び側毛の剛毛を少数形成するが、両者は区別しに
くい。剛毛は、淡褐色から褐色を呈し、直生、分岐はせ
ず直線型、隔壁を有し、長さ８５〜２０５μｍ、幅は基
部で４〜５.５μｍで、先端に向かうに従って細くな
る。子嚢は、子嚢殻内に形成し、無色、平滑で、棍棒形
を呈し、その単膜は消失性、８個の子嚢胞子を有する。
子嚢胞子は、オリーブ褐色で、平滑、単細胞性、不明瞭
な発芽孔を有し、幅広い楕円形からレモン形を呈し両端
はやや尖る。子嚢胞子は、長さ８〜１０μｍ、幅６〜
９.５μｍで、子嚢殻先端の孔口から放出される。

【００２１】以上の菌学的性質から、本菌株は、ファロ
ーヴィア属に属することを認めた。なお、ファローヴィ
ア属菌に関しては、ペルズーニア（Persoonia）第８巻
２号、１６７頁（１９７５年）に掲載されているホーク
スワース（D. L.Hawksworth）著「ファローヴィア、ア
・ニュー・ジーナス・イン・ザ・ケトミアシー（Farrow
ia, a new genus in the Chaetomiaceae）」に詳しく記
載されている。

【００２２】本菌株は、ファローヴィア・スピーシーズ
（Farrowia sp.）Ｅ−１９４１と命名し、工業技術院生
命工学工業技術研究所にFERM BP-5258として平成７年１
０月６日付けで寄託した。本発明のＥＩ−１９４１類生
産菌の培養に際しては糸状菌の培養に用いられる通常の
培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化しう
る炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培地で
あれば天然培地、合成培地いずれでも用い得る。

【００２３】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、シュークロース、スタビロース、澱粉、デキストリ
ン、マンノース、マルトース、糖蜜等の炭水化物、クエ
ン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタ
ノール、エタノール等のアルコール、メタン、エタン、
プロパン、ｎ-パラフィンなどの炭化水素、グルタミン
酸等のアミノ酸あるいはグリセロール等が用いられる。

【００２４】窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等
のアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シス
チン、アラニン等のアミノ酸、尿素、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカ
ー、大豆粉、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファ
ーマメディア等が用いられる。

【００２５】無機物としてはリン酸一水素カリウム、リ
ン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸マ
グネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、硫酸
コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム、モリブ
デン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸
バリウム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩等が用
いられる。

【００２６】その他必要に応じて培地にビタミン、たと
えばサイアミン等菌体の増殖あるいはＥＩ−１９４１類
の生産を促進する物質を加える。また、用いる微生物が
特定の物質を要求する場合は、該物質を加える。培養は
振盪培養法、通気撹拌培養法などにより、２０〜４０℃
の温度で中性付近のｐＨで行われる。通常３〜７日の培
養によってＥＩ−１９４１類の蓄積が最大に達し、培養
は完了する。

【００２７】培養物中に蓄積したＥＩ−１９４１類を培
養物から単離精製するに際しては、通常の微生物代謝産
物を培養物から精製する方法に従って行われる。すなわ
ち、アセトン、メタノールなどの溶剤による菌体成分の
抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除去、吸着樹脂、
シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、逆相シリカゲ
ル、アルミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケイ酸マグ
ネシウム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂等を用いるカラ
ムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィー
による活性物質の吸脱着処理、適当な溶媒系による分配
等によってＥＩ−１９４１類は単離される。

【００２８】上記精製工程中のＥＩ−１９４１類の検出
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素
発色することにより、または、２５３.６ｎｍの紫外線
照射法により行うことができる。以下に本発明の実施例
を示す。

【００２９】

【実施例】

実施例１種菌として、ファローヴィア・スピーシーズＥ−１９４
１株を用い、第一種培地としてグルコース１００ｇ/リ
ットル、マッシュポテト（雪印乳業社製）３０ｇ/リッ
トル、粉末酵母エキスＳ（日本製薬社製）５ｇ/リット
ル、ｐＨ６.５の培地を用いた。種菌１白金耳を、５０
ｍｌ太型試験管に入れた第一種培地１０ｍｌに植菌し、
試験管３本（合計培地量３０ｍｌ）を２５℃で４日間振
盪培養した。

【００３０】この第一種培養液３０ｍｌを３００ｍｌ容
エルレンマイヤーフラスコに入った５０ｍｌの第二種培
地に５ｍｌずつ（合計フラスコ６本、３００ｍｌ）植菌
した。第二種培地の組成は第一種培地の組成と同じであ
る。第二種培養は２５℃で２日間振盪培養を行った。得
られた第二種培養液３００ｍｌを２リットル容エルレン
マイヤーフラスコに入った第三種培地５００ｍｌに５０
ｍｌずつ（合計フラスコ６本、３リットル）植菌した。
第三種培地の組成は第二種培地の組成と同じである。第
三種培養は２８℃で２日間振盪培養を行った。

【００３１】得られた第三種培養液３リットルを３０リ
ットル容ステンレス製ジャーファーメンター中の主発酵
培地１６.５リットルに１.５リットルずつ（合計ジャー
ファーメンター２基、３６リットル）植菌した。主発酵
培地としてはグルコース２０ｇ/リットル、マッシュポ
テト２０ｇ/リットル、ペプトン（極東製薬社製）５ｇ/
リットル、リン酸二水素カリウム５ｇ/リットル、リン
酸マグネシウム・８水和物０.５ｇ/リットル、ｐＨ６.
０の培地を用いた。この主発酵培養は２５℃で５日間通
気撹拌培養（回転数：２５０ｒｐｍ、通気量：１８リッ
トル/分）を行った。

【００３２】得られた主発酵培養液３６リットルを有孔
壁型遠心分離機（Ｈ−１３０Ｅ型、コクサン社製）で上
清を分離し、得られた上清を２リットルのダイヤイオン
ＨＰ−２０カラム（三菱化成社製）に通塔し、水８リッ
トル、２０％メタノール８リットル、および４０％メタ
ノール８リットルで洗浄した後、メタノール：アセトン
＝７：３の溶媒８リットルで溶出した。ＥＩ−１９４１
類を含む画分を集め、ラヂオライト＃６００（昭和化学
工業社製）１００ｇを添加した後、減圧下で濃縮乾固
し、２リットルのシリカゲルカラム（Art.7734、メルク
社製）に重層し、クロロホルム８リットル、クロロホル
ム：メタノール＝９９：１の溶媒８リットル、ついで、
クロロホルム：メタノール＝９７：３の溶媒８リットル
で溶出した。ＥＩ−１９４１−１を含む画分、ＥＩ−１
９４１−２を含む画分をそれぞれ集め、減圧乾固後、Ｅ
Ｉ−１９４１−１を含む画分はメタノール５０ｍｌに、
ＥＩ−１９４１−２を含む画分はメタノール８５ｍｌに
それぞれ溶解し、ＥＩ−１９４１−１粗精製物溶液、Ｅ
Ｉ−１９４１−２粗精製溶液とした。

【００３３】ＥＩ−１９４１−１粗精製物溶液２ｍｌを
ＨＰＬＣカラム（D-ODS-5-B S-5 120A、ＹＭＣ社製）に
通塔後、流速２０ｍｌ／分の条件で、２５％アセトニト
リルの溶媒で溶出し、ＥＩ−１９４１−１を含む画分を
集めた。このＨＰＬＣを用いた精製を繰り返し行い、Ｅ
Ｉ−１９４１−１を含む画分を集めて減圧乾固すること
により、ＥＩ−１９４１−１を２００ｍｇ得た。

【００３４】ＥＩ−１９４１−２粗精製溶液２ｍｌをＨ
ＰＬＣカラム（D-ODS-5-B S-5 120A、ＹＭＣ社製）に通
塔後、流速２０ｍｌ／分の条件で、３０％アセトニトリ
ルの溶媒で溶出し、ＥＩ−１９４１−２を含む画分を得
た。このＨＰＬＣを用いた精製を繰り返し行い、、ＥＩ
−１９４１−２を含む画分を集め減圧乾固することによ
り、ＥＩ−１９４１−２を１００ｍｇ得た。ＥＩ−１９
４１−３はＥＩ−１９４１−２を乾固状態で室温保存す
ることにより得られる。保存しておいた８０ｍｇのＥＩ
−１９４１−２をメタノール４ｍｌに溶解した後、２ｍ
ｌをＨＰＬＣカラム（D-ODS-5-B S-5 120A、ＹＭＣ社
製）に通塔後、流速２０ｍｌ／分の条件で、３０％アセ
トニトリルの溶媒で溶出し、ＥＩ−１９４１−２を含む
画分およびＥＩ−１９４１−３を含む画分を分離した。
このＨＰＬＣを用いた精製を繰り返し行い、ＥＩ−１９
４１−３を含む画分を集め、減圧乾固することにより、
ＥＩ−１９４１−３を１３ｍｇ得た。

【００３５】なお上記行程中のＥＩ−１９４１類の検出
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素
発色することにより、または、２５３.６ｎｍの紫外線
照射法により行った。

【００３６】

【発明の効果】本発明によれば、ＩＬ−１産生阻害作用
を有する生理活性物質ＥＩ−１９４１類を提供すること
ができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ａ６１Ｋ 31/35 ＡＣＪＡ６１Ｋ 31/35 ＡＣＪＡＣＳＡＣＳＡＣＶＡＣＶＡＥＤＡＥＤ 31/365 ＡＤＺ 31/365 ＡＤＺＣ０７Ｄ 493/04 １０６Ｃ０７Ｄ 493/04 １０６Ｚ // Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｐ 17/06 (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者安藤勝彦東京都町田市旭町１−17−８ (72)発明者松田譲東京都小金井市貫井南町１−22−７

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（Ｉ）【化１】（式中、Ｒ¹およびＲ²は異なって水素またはヒドロキシ
を表すか、Ｒ¹およびＲ²が一緒になって酸素を表し、Ｒ
³はヒドロキシを表し、Ｒ⁴は水素を表すか、Ｒ³および
Ｒ⁴が一緒になって-O- を表す。）で表される生理活性
物質ＥＩ−１９４１類。
【請求項２】Ｒ¹が水素、Ｒ²がヒドロキシを表し、Ｒ
³およびＲ⁴が一緒になって-O- で表される請求項１記載
の化合物。
【請求項３】Ｒ¹およびＲ²が一緒になって酸素を表
し、Ｒ³およびＲ⁴が一緒になって-O- で表される請求項
１記載の化合物。
【請求項４】Ｒ¹およびＲ²が一緒になって酸素を表
し、Ｒ³がヒドロキシ、Ｒ⁴が水素で表される請求項１記
載の化合物。