JPH09176160A - 生理活性物質ｅｉ−２３４６ - Google Patents
生理活性物質ｅｉ−２３４６Info
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- JPH09176160A JPH09176160A JP34370195A JP34370195A JPH09176160A JP H09176160 A JPH09176160 A JP H09176160A JP 34370195 A JP34370195 A JP 34370195A JP 34370195 A JP34370195 A JP 34370195A JP H09176160 A JPH09176160 A JP H09176160A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 優れたＩＬ−１産生阻害作用および抗菌作用
を有する新規生理活性物質を提供する。 【解決手段】 一般式（Ｉ） 【化５】 で表され、ＩＬ−１産生抑制作用および抗菌作用を有す
る新規化合物ＥＩ−２３４６。
を有する新規生理活性物質を提供する。 【解決手段】 一般式（Ｉ） 【化５】 で表され、ＩＬ−１産生抑制作用および抗菌作用を有す
る新規化合物ＥＩ−２３４６。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は放線菌に属する微生
物により生産され、インターロイキン−１産生阻害作用
を有し、かつ慢性関節リウマチ、痛風、変形性関節症、
骨粗鬆症、結節性動脈周囲炎、潰瘍性大腸炎、慢性腎
炎、活動性慢性肝炎、敗血症、エンドトキシン性ショッ
ク、アテローム硬化症、感染症に関わる発熱等の症状、
もしくは全身性強皮症などの治療剤および抗菌剤として
有用な新規生理活性物質ＥＩ−２３４６に関する。
物により生産され、インターロイキン−１産生阻害作用
を有し、かつ慢性関節リウマチ、痛風、変形性関節症、
骨粗鬆症、結節性動脈周囲炎、潰瘍性大腸炎、慢性腎
炎、活動性慢性肝炎、敗血症、エンドトキシン性ショッ
ク、アテローム硬化症、感染症に関わる発熱等の症状、
もしくは全身性強皮症などの治療剤および抗菌剤として
有用な新規生理活性物質ＥＩ−２３４６に関する。
【０００２】
【従来の技術】インターロイキン−１（以下ＩＬ−１と
称する）は体内の多彩な細胞、例えばマクロファージや
単球をはじめとし、好中球、線維芽細胞、皮膚ケラチノ
サイト、肝臓クッパー細胞、腎糸球体メサンギウム細
胞、脳の星状細胞・グリア細胞、血管内皮細胞などから
産生される分子量17.5kDaの蛋白質で等電点（以下pIと
称する）が５のα型とpIが７のβ型がある。現在のとこ
ろα型とβ型は同じ作用をすることがわかっている。
称する）は体内の多彩な細胞、例えばマクロファージや
単球をはじめとし、好中球、線維芽細胞、皮膚ケラチノ
サイト、肝臓クッパー細胞、腎糸球体メサンギウム細
胞、脳の星状細胞・グリア細胞、血管内皮細胞などから
産生される分子量17.5kDaの蛋白質で等電点（以下pIと
称する）が５のα型とpIが７のβ型がある。現在のとこ
ろα型とβ型は同じ作用をすることがわかっている。
【０００３】ＩＬ−１は多種多様の生物活性を有するこ
とが知られている。すなわち、ＩＬ−１はリンパ球の分
裂増殖に対する反応性の増強因子として働く他、Ｂ細胞
の増殖や抗体産生増強の補助因子として働くとされてい
る。また、ＩＬ−１は視床下部の温度中枢においてアラ
キドン酸カスケードに作用し、プロスタグランジンＥ 2
合成を高めることで発熱に関与していると考えられてい
る。さらに、ＩＬ−１は敗血症、クーロン病などの患者
血清や、関節リウマチ患者の関節腔においてその活性が
有意に上昇していることが示されており、これらの疾病
の発症、進展へのＩＬ−１の関与が示唆されている。こ
うしたＩＬ−１で仲介される症状の軽減にはＩＬ−１産
生の抑制が有効と考えられる。
とが知られている。すなわち、ＩＬ−１はリンパ球の分
裂増殖に対する反応性の増強因子として働く他、Ｂ細胞
の増殖や抗体産生増強の補助因子として働くとされてい
る。また、ＩＬ−１は視床下部の温度中枢においてアラ
キドン酸カスケードに作用し、プロスタグランジンＥ 2
合成を高めることで発熱に関与していると考えられてい
る。さらに、ＩＬ−１は敗血症、クーロン病などの患者
血清や、関節リウマチ患者の関節腔においてその活性が
有意に上昇していることが示されており、これらの疾病
の発症、進展へのＩＬ−１の関与が示唆されている。こ
うしたＩＬ−１で仲介される症状の軽減にはＩＬ−１産
生の抑制が有効と考えられる。
【０００４】ＩＬ−１産生抑制作用を有する物質として
は、従来、ナフタレン誘導体（特開平４−５９７４３号
公報）、３−アリールイソチアゾール誘導体（特開平４
−７４１２１号公報）、ジンゲロール誘導体（特開平４
−２０２１２７号公報）などの合成化合物が知られてい
る。また、一般式（II）
は、従来、ナフタレン誘導体（特開平４−５９７４３号
公報）、３−アリールイソチアゾール誘導体（特開平４
−７４１２１号公報）、ジンゲロール誘導体（特開平４
−２０２１２７号公報）などの合成化合物が知られてい
る。また、一般式（II）
【０００５】
【化２】
【０００６】で表されるエキスホリアミシン(exfoliamy
cin)類［ザ・ジャーナル・オブ・アンティバイオティッ
クス(J. Antibiotics),46,346-349(1993)、ザ・ジャー
ナル・オブ・アンティバイオティックス(J.Antibiotic
s),48,431-432(1995)］や、一般式（III ）
cin)類［ザ・ジャーナル・オブ・アンティバイオティッ
クス(J. Antibiotics),46,346-349(1993)、ザ・ジャー
ナル・オブ・アンティバイオティックス(J.Antibiotic
s),48,431-432(1995)］や、一般式（III ）
【０００７】
【化３】
【０００８】で表されるナフトピラノミシン(naphthopy
ranomycin)［ザ・ジャーナル・オブ・アンティバイオテ
ィックス(J. antibiotics),45,584-586(1992)］などの
抗菌活性を有する化合物が知られているが、これらの化
合物におけるＩＬ−１産生抑制作用に関する報告はな
い。
ranomycin)［ザ・ジャーナル・オブ・アンティバイオテ
ィックス(J. antibiotics),45,584-586(1992)］などの
抗菌活性を有する化合物が知られているが、これらの化
合物におけるＩＬ−１産生抑制作用に関する報告はな
い。
【０００９】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は優れた
ＩＬ−１産生阻害作用および抗菌作用を有する新規生理
活性物質を提供することにある。
ＩＬ−１産生阻害作用および抗菌作用を有する新規生理
活性物質を提供することにある。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明者らは微生物中に
ＩＬ−１産生抑制作用を有する物質が生産されることを
見いだし、この物質を単離、精製し、その理化学的性質
を調べた結果、新規物質であることが判明し、一般式
（Ｉ）で表される化合物をＥＩ−２３４６と命名した。
本発明によれば、一般式（Ｉ）
ＩＬ−１産生抑制作用を有する物質が生産されることを
見いだし、この物質を単離、精製し、その理化学的性質
を調べた結果、新規物質であることが判明し、一般式
（Ｉ）で表される化合物をＥＩ−２３４６と命名した。
本発明によれば、一般式（Ｉ）
【００１１】
【化４】
【００１２】で表される生理活性物質ＥＩ−２３４６を
提供することができる。
提供することができる。
【００１３】
【発明の実施の形態】以下に本発明を詳細に説明する。
ＥＩ−２３４６の理化学的性質は以下に示すとおりであ
る。なお、以下のデータは下記の機器より測定した。 質量分析：日本電子 JMS HX/HX110A 質量分析装置 紫外吸収スペクトル：島津製作所 UV-2200 分光光度計 赤外吸収スペクトル：日本電子 JIR-RFX3001 赤外線分
光光度計 核磁気共鳴スペクトル：日本電子 α400 核磁気共鳴装
置 融点：柳本製作所 ミクロ融点測定装置 旋光度：日本分光工業 DIP-370 型デジタル旋光計
ＥＩ−２３４６の理化学的性質は以下に示すとおりであ
る。なお、以下のデータは下記の機器より測定した。 質量分析：日本電子 JMS HX/HX110A 質量分析装置 紫外吸収スペクトル：島津製作所 UV-2200 分光光度計 赤外吸収スペクトル：日本電子 JIR-RFX3001 赤外線分
光光度計 核磁気共鳴スペクトル：日本電子 α400 核磁気共鳴装
置 融点：柳本製作所 ミクロ融点測定装置 旋光度：日本分光工業 DIP-370 型デジタル旋光計
【００１４】ＥＩ−２３４６の理化学的性質 性状：赤橙色粉末 融点：１０６．０−１１０．０℃ 比旋光度：[ α]D 27 = +250゜(c=0.35,CH3OH) FABMS スペクトル：m/z amu 435 (M+H)+ 高分解能FABMS スペクトル：m/z amu 435.1671 (M+H)+,
Δ+1.6 mmu UVスペクトル(CH3OH) ：λmax nm (ε) 220 (32,000)
, 253 (12,000) , 431(3,200) +HCl 225 , 260 , 307 +NaOH 未変化 IRスペクトル(KBr)：υmax nm (cm-1) 3444, 1647, 16
14, 1394, 1288, 1255,1092, 10341 H-NMRスペクトル：δ ppm（積分、多重度、結合定数） 7.33 (1H,s), 7.10 (1H,s), 5.72 (1H,s), 5.11 (1H,
m), 4.19 (1H,dd,J=10.3,4.5 Hz), 3.89 (1H,dd,J=12.
2,2.0 Hz), 3.74 (1H,dd,J=12.2,5.1 Hz), 3.64 (2H,
m), 3.57 (1H,dd,J=10.3,10.3 Hz), 2.95 (1H,d,J=16.5
Hz), 2.86 (1H,d,J=16.5 Hz), 1.98 (2H,m), 1.54 (3
H,s), 1.43 (1H,m), 1.27 (1H,m), 0.89 (3H,dd,J=7.4,
7.4 Hz)13 C-NMR スペクトル：δ ppm（多重度） 189.9 (s), 185.9 (s), 159.0 (s), 146.1 (s), 144.3
(s), 136.8 (d), 134.8(s), 131.1 (s), 120.6 (d), 11
4.1 (s), 95.2 (d), 95.1 (s), 84.4 (d), 72.4(t), 7
0.6 (d), 62.4 (t), 62.3 (d), 41.5 (t), 37.1 (t), 2
9.2 (q), 19.1 (t), 14.4 (q) 溶解性：メタノール、アセトニトリルに易溶 呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性 薄層クロマトグラフィー（Ｒｆ値）：０.４９ 展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝９：１ 薄層：HPTLC Fertigplatten kieselgel 60 F254（メル
ク社製） 展開方法：室温、上昇法、２０分 検出：ヨウ素発色 以上のデータよりＥＩ−２３４６は新規化合物であるこ
とが判明した。次に化合物ＥＩ−２３４６の活性につい
て試験例で説明する。
Δ+1.6 mmu UVスペクトル(CH3OH) ：λmax nm (ε) 220 (32,000)
, 253 (12,000) , 431(3,200) +HCl 225 , 260 , 307 +NaOH 未変化 IRスペクトル(KBr)：υmax nm (cm-1) 3444, 1647, 16
14, 1394, 1288, 1255,1092, 10341 H-NMRスペクトル：δ ppm（積分、多重度、結合定数） 7.33 (1H,s), 7.10 (1H,s), 5.72 (1H,s), 5.11 (1H,
m), 4.19 (1H,dd,J=10.3,4.5 Hz), 3.89 (1H,dd,J=12.
2,2.0 Hz), 3.74 (1H,dd,J=12.2,5.1 Hz), 3.64 (2H,
m), 3.57 (1H,dd,J=10.3,10.3 Hz), 2.95 (1H,d,J=16.5
Hz), 2.86 (1H,d,J=16.5 Hz), 1.98 (2H,m), 1.54 (3
H,s), 1.43 (1H,m), 1.27 (1H,m), 0.89 (3H,dd,J=7.4,
7.4 Hz)13 C-NMR スペクトル：δ ppm（多重度） 189.9 (s), 185.9 (s), 159.0 (s), 146.1 (s), 144.3
(s), 136.8 (d), 134.8(s), 131.1 (s), 120.6 (d), 11
4.1 (s), 95.2 (d), 95.1 (s), 84.4 (d), 72.4(t), 7
0.6 (d), 62.4 (t), 62.3 (d), 41.5 (t), 37.1 (t), 2
9.2 (q), 19.1 (t), 14.4 (q) 溶解性：メタノール、アセトニトリルに易溶 呈色反応：ヨウ素、硫酸に陽性 薄層クロマトグラフィー（Ｒｆ値）：０.４９ 展開溶媒：クロロホルム−メタノール＝９：１ 薄層：HPTLC Fertigplatten kieselgel 60 F254（メル
ク社製） 展開方法：室温、上昇法、２０分 検出：ヨウ素発色 以上のデータよりＥＩ−２３４６は新規化合物であるこ
とが判明した。次に化合物ＥＩ−２３４６の活性につい
て試験例で説明する。
【００１５】試験例１ 各種細菌に対する抗菌作用 各種細菌に対する最小生育阻止濃度（ＭＩＣ）につい
て、バクトトリプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）３g/Ｌ、肉エ
キス３g/Ｌ、酵母エキス１g/Ｌ、グルコース１g/Ｌ、寒
天１６g/Ｌの組成からなる培地（ｐＨ７.０）を用いて
寒天希釈法により測定した。その結果を第１表に示す。
て、バクトトリプトン（Ｄｉｆｃｏ社製）３g/Ｌ、肉エ
キス３g/Ｌ、酵母エキス１g/Ｌ、グルコース１g/Ｌ、寒
天１６g/Ｌの組成からなる培地（ｐＨ７.０）を用いて
寒天希釈法により測定した。その結果を第１表に示す。
【００１６】
【表１】
【００１７】試験例２ ＩＬ−１産生に対する阻害作用 本発明の化合物ＥＩ−２３４６についてヒト単球系由来
株化細胞ＴＨＰ−１細胞(ATCC No.TIB 202)からのＩＬ
−１βの産生阻害作用を調べた。ＩＬ−１β量はＥＬＩ
ＳＡ法により測定した。ＴＨＰ−１細胞を１０％非働化
ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培養液（ニッスイ社
製）に1 ×105個/mlの濃度で浮遊懸濁した。これを24穴
プレートに1ml/ウェルの容量で分注し、フォルボール１
２−ミリスタート１３−アセタート（ＰＭＡ；最終濃
度：30nM）を加えて、37℃、5%CO2インキュベーターで6
5時間培養し、細胞をマクロファージ様に分化させた。
株化細胞ＴＨＰ−１細胞(ATCC No.TIB 202)からのＩＬ
−１βの産生阻害作用を調べた。ＩＬ−１β量はＥＬＩ
ＳＡ法により測定した。ＴＨＰ−１細胞を１０％非働化
ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ１６４０培養液（ニッスイ社
製）に1 ×105個/mlの濃度で浮遊懸濁した。これを24穴
プレートに1ml/ウェルの容量で分注し、フォルボール１
２−ミリスタート１３−アセタート（ＰＭＡ；最終濃
度：30nM）を加えて、37℃、5%CO2インキュベーターで6
5時間培養し、細胞をマクロファージ様に分化させた。
【００１８】血清無添加ＲＰＭＩ１６４０で培養プレー
トを緩やかに洗浄して非付着細胞を除去した後、リポポ
リサッカライド（ＬＰＳ；最終濃度：25μg/ml）と被験
試料（最終濃度：0.05〜50μg/ml）を同時に添加した血
清無添加ＲＰＭＩ１６４０培養液（1ml/ウェル）で４時
間培養した。培養後、培養上清中に遊離したＩＬ−１β
量は、ＩＬ−１β測定キット（アマシャム社製）を用い
て測定した。
トを緩やかに洗浄して非付着細胞を除去した後、リポポ
リサッカライド（ＬＰＳ；最終濃度：25μg/ml）と被験
試料（最終濃度：0.05〜50μg/ml）を同時に添加した血
清無添加ＲＰＭＩ１６４０培養液（1ml/ウェル）で４時
間培養した。培養後、培養上清中に遊離したＩＬ−１β
量は、ＩＬ−１β測定キット（アマシャム社製）を用い
て測定した。
【００１９】ＩＬ−１産生阻害率は次式により算出し、
ＩＣ50（50％阻害濃度）を求めた。 ＩＬ−１産生阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）×
１００ Ａ：ＬＰＳのみ添加時のＩＬ−１産生量 Ｂ：ＬＰＳ＋被験試料添加時のＩＬ−１産生量 Ｃ：ＬＰＳ未添加時のＩＬ−１産生量 以上より、ＥＩ−２３４６のＬＰＳ刺激によるＴＨＰ−
１細胞のＩＬ−１産生の50％阻害濃度は４.６μＭであ
った。
ＩＣ50（50％阻害濃度）を求めた。 ＩＬ−１産生阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／（Ａ−Ｃ）×
１００ Ａ：ＬＰＳのみ添加時のＩＬ−１産生量 Ｂ：ＬＰＳ＋被験試料添加時のＩＬ−１産生量 Ｃ：ＬＰＳ未添加時のＩＬ−１産生量 以上より、ＥＩ−２３４６のＬＰＳ刺激によるＴＨＰ−
１細胞のＩＬ−１産生の50％阻害濃度は４.６μＭであ
った。
【００２０】次にＥＩ−２３４６の製造法について説明
する。ＥＩ−２３４６はストレプトマイセス属に属しＥ
Ｉ−２３４６の生産能を有する微生物を培地に培養し、
培養物中にＥＩ−２３４６を生成蓄積させ、該培養物か
らＥＩ−２３４６を採取することによって製造される。
ＥＩ−２３４６の生産能を有する微生物としては、スト
レプトマイセス属に属し、ＥＩ−２３４６生産能を有す
る菌株であればいずれの菌株でも用いることができる。
また、これらの菌株を人工的変異法、たとえば紫外線照
射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理などによって変異させた
変異株あるいは自然的に変異した変異株でもＥＩ−２３
４６の生産能を有するものであれば本発明に用いること
ができる。具体的に好適な例として、ストレプトマイセ
ス・スピーシーズ(StreptomycesSP.)Ｅ−２３４６株が
あげられる。
する。ＥＩ−２３４６はストレプトマイセス属に属しＥ
Ｉ−２３４６の生産能を有する微生物を培地に培養し、
培養物中にＥＩ−２３４６を生成蓄積させ、該培養物か
らＥＩ−２３４６を採取することによって製造される。
ＥＩ−２３４６の生産能を有する微生物としては、スト
レプトマイセス属に属し、ＥＩ−２３４６生産能を有す
る菌株であればいずれの菌株でも用いることができる。
また、これらの菌株を人工的変異法、たとえば紫外線照
射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理などによって変異させた
変異株あるいは自然的に変異した変異株でもＥＩ−２３
４６の生産能を有するものであれば本発明に用いること
ができる。具体的に好適な例として、ストレプトマイセ
ス・スピーシーズ(StreptomycesSP.)Ｅ−２３４６株が
あげられる。
【００２１】以下に、ストレプトマイセス・スピーシー
ズ(Strptomyces sp.)Ｅ−２３４６株の形態、培養性
状、生理学的性質における特徴を記述する。 1.形態的性質 1)菌糸 気菌糸形成；有 気菌糸の分断および運動性；無 基生菌糸の分断および運動性；無 2)胞子 胞子の形成の有無および着生位置；気菌糸に形成 胞子嚢の形成の有無および着生位置；無 胞子柄上で連鎖する胞子の数；10個以上 多数の胞子が連鎖する場合の形状；曲状または螺旋状 胞子の特徴 表面構造；トゲ状 形状および大きさ；桿形、約0.6〜0.8μm × 1.0〜1.2
μm 運動性および鞭毛の存在；無 3)その他 厚膜胞子；無 集束菌糸；無 疑似胞子嚢；無 菌糸の分裂様式；単純分枝
ズ(Strptomyces sp.)Ｅ−２３４６株の形態、培養性
状、生理学的性質における特徴を記述する。 1.形態的性質 1)菌糸 気菌糸形成；有 気菌糸の分断および運動性；無 基生菌糸の分断および運動性；無 2)胞子 胞子の形成の有無および着生位置；気菌糸に形成 胞子嚢の形成の有無および着生位置；無 胞子柄上で連鎖する胞子の数；10個以上 多数の胞子が連鎖する場合の形状；曲状または螺旋状 胞子の特徴 表面構造；トゲ状 形状および大きさ；桿形、約0.6〜0.8μm × 1.0〜1.2
μm 運動性および鞭毛の存在；無 3)その他 厚膜胞子；無 集束菌糸；無 疑似胞子嚢；無 菌糸の分裂様式；単純分枝
【００２２】2.培養的性質 Ｅ−２３４６株は、一般に使用されている合成および天
然培地で普通もしくは旺盛な成育を示し、基生菌糸は薄
黄色から茶色系を示す。培地により茶色系の可溶性色素
が産生されることもある。
然培地で普通もしくは旺盛な成育を示し、基生菌糸は薄
黄色から茶色系を示す。培地により茶色系の可溶性色素
が産生されることもある。
【００２３】各種培地上での28℃、14日間培養した時の
生育および色の特徴を下記に示す。なお、色の表示は C
olor Harmony Manual ［Container Corporation of Ame
rica第４版(1958)］による色の分類に従った。 1)シュクロース・硝酸塩寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；オートミール(2ec) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、シルバーグレー(3
fe) 可溶性色素；無 2)グルコース・アスパラギン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトアイボリー(2ca)〜ライトブラ
ウン(3lg) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜シ
ルバーグレー(3fe) 可溶性色素；無 3)グリセリン・アスパラギン寒天培地 生育状態；貧弱 基生菌糸の色調；ベージュ(3ge)〜ダークブラウン(3pn) 気菌糸の着生状態とその色調；貧弱、シェルピンク(4c
a) 可溶性色素；無 4)スターチ・無機塩寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；シルバーグレー(3fe)〜ベージュグレ
ー(3ih) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜シ
ルバーグレー(3fe) 可溶性色素；無
生育および色の特徴を下記に示す。なお、色の表示は C
olor Harmony Manual ［Container Corporation of Ame
rica第４版(1958)］による色の分類に従った。 1)シュクロース・硝酸塩寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；オートミール(2ec) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、シルバーグレー(3
fe) 可溶性色素；無 2)グルコース・アスパラギン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトアイボリー(2ca)〜ライトブラ
ウン(3lg) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜シ
ルバーグレー(3fe) 可溶性色素；無 3)グリセリン・アスパラギン寒天培地 生育状態；貧弱 基生菌糸の色調；ベージュ(3ge)〜ダークブラウン(3pn) 気菌糸の着生状態とその色調；貧弱、シェルピンク(4c
a) 可溶性色素；無 4)スターチ・無機塩寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；シルバーグレー(3fe)〜ベージュグレ
ー(3ih) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜シ
ルバーグレー(3fe) 可溶性色素；無
【００２４】5)チロシン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ベージュ(3ge)〜ダークブラウン(3pn) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ホワイト(a)〜ア
シェス(5fe) 可溶性色素；わずかに産生（茶色） 6)栄養寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie)〜マスタ
ードタン(2lg) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；無 7)イースト・麦芽寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；カバートタン(2ge)〜カバートブラウ
ン(2li) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；無 8)オートミール寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie)〜マスタ
ードブラウン(2pl) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；無
シェス(5fe) 可溶性色素；わずかに産生（茶色） 6)栄養寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie)〜マスタ
ードタン(2lg) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；無 7)イースト・麦芽寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；カバートタン(2ge)〜カバートブラウ
ン(2li) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；無 8)オートミール寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie)〜マスタ
ードブラウン(2pl) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；無
【００２５】3.生理学的性質 Ｅ−２３４６株の生理学的諸性質を以下に示す。１）に
ついては14日間培養後、２）〜６）は28oC、2〜3週間培
養後の結果を記述する。
ついては14日間培養後、２）〜６）は28oC、2〜3週間培
養後の結果を記述する。
【００２６】1)生育温度範囲；10.0℃〜45.0℃ 2)ゼラチンの液化；有 3)スターチの加水分解；有 4)脱脂粉乳の凝固およびペプトン化；無 5)メラニン様色素の生成 (1) ペプトン・イースト・鉄寒天培地；わずかに生成 (2) チロシン寒天培地；わずかに生成 6)炭素源の利用性 基礎培地はプリードハム・ゴトリーブ寒天培地を使用し
た。以下、＋は利用することを、−は利用しないことを
示す。
た。以下、＋は利用することを、−は利用しないことを
示す。
【００２７】 L-アラビノース ；＋ D-キシロース ；＋ D-グルコース ；＋ シュクロース ；＋ ラフィノース ；− D-フルクトース ；＋ ラムノース ；＋ イノシトール ；＋ D-マンニトール ；＋
【００２８】4.化学分類的性質 1)菌体中のジアミノピメリン酸の光学異性体；LL型 2)菌体脂質の主要キノン；MK-9(H8),MK-9(H6) 以上、形態的には気中菌糸に胞子鎖が形成されること、
化学分類的には細胞壁が I型（LL−ジアミノピメリン
酸、グリシン）であること、および、主要キノンがメナ
キノン９の４飽和型(MK-9(H8))、３飽和型(MK-9(H6))で
あることから、本菌株は放線菌の中でストレプトマイセ
ス属に分類される。
化学分類的には細胞壁が I型（LL−ジアミノピメリン
酸、グリシン）であること、および、主要キノンがメナ
キノン９の４飽和型(MK-9(H8))、３飽和型(MK-9(H6))で
あることから、本菌株は放線菌の中でストレプトマイセ
ス属に分類される。
【００２９】従って、本菌株をストレプトマイセス・エ
スピーＥ−２３４６ (Streptomycessp. Ｅ−２３４６)
と命名し、工業技術院生命工学工業技術研究所にFERM B
P-5348として平成７年１２月２１日付けで寄託した。本
発明のＥＩ−２３４６生産菌の培養に際しては放線菌の
培養に用いられる通常の培養方法が適用される。培地と
しては、菌の資化しうる炭素源、窒素源、無機物などを
程よく含有する培地であれば天然培地、合成培地いずれ
でも使用可能である。
スピーＥ−２３４６ (Streptomycessp. Ｅ−２３４６)
と命名し、工業技術院生命工学工業技術研究所にFERM B
P-5348として平成７年１２月２１日付けで寄託した。本
発明のＥＩ−２３４６生産菌の培養に際しては放線菌の
培養に用いられる通常の培養方法が適用される。培地と
しては、菌の資化しうる炭素源、窒素源、無機物などを
程よく含有する培地であれば天然培地、合成培地いずれ
でも使用可能である。
【００３０】炭素源としては、グルコース、フラクトー
ス、シュークロース、スタビロース、澱粉、デキストリ
ン、マンノース、マルトース、糖蜜等の炭水化物、クエ
ン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタ
ノール、エタノール等のアルコール、メタン、エタン、
プロパン、ｎ-パラフィンなどの炭化水素、グルタミン
酸等のアミノ酸あるいはグリセロール等が用いられる。
ス、シュークロース、スタビロース、澱粉、デキストリ
ン、マンノース、マルトース、糖蜜等の炭水化物、クエ
ン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタ
ノール、エタノール等のアルコール、メタン、エタン、
プロパン、ｎ-パラフィンなどの炭化水素、グルタミン
酸等のアミノ酸あるいはグリセロール等が用いられる。
【００３１】窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸ア
ンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等
のアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シス
チン、アラニン等のアミノ酸、尿素、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカ
ー、大豆粉、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファ
ーマメディア等が用いられる。
ンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム等
のアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シス
チン、アラニン等のアミノ酸、尿素、ペプトン、肉エキ
ス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカ
ー、大豆粉、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファ
ーマメディア等が用いられる。
【００３２】無機物としてはリン酸一水素カリウム、リ
ン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸マ
グネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、硫酸
コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム、モリブ
デン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸
バリウム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩等が用
いられる。
ン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸マ
グネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、硫酸
コバルト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム、モリブ
デン酸アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸
バリウム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩等が用
いられる。
【００３３】その他必要に応じて培地にビタミン、たと
えばサイアミン等菌体の増殖およびＥＩ−２３４６の生
産を促進する物質を加える。また、用いる微生物が特定
の物質を要求する場合は、該物質を加える。培養は振盪
培養法、通気撹拌培養法などにより、２０〜４０℃の温
度で中性付近のｐＨで行われる。通常３〜７日の培養に
よってＥＩ−２３４６の蓄積が最大に達し、培養は完了
する。
えばサイアミン等菌体の増殖およびＥＩ−２３４６の生
産を促進する物質を加える。また、用いる微生物が特定
の物質を要求する場合は、該物質を加える。培養は振盪
培養法、通気撹拌培養法などにより、２０〜４０℃の温
度で中性付近のｐＨで行われる。通常３〜７日の培養に
よってＥＩ−２３４６の蓄積が最大に達し、培養は完了
する。
【００３４】培養物中に蓄積したＥＩ−２３４６を培養
物から単離精製するに際しては、通常の微生物代謝産物
を培養物から精製する方法に従って行われる。すなわ
ち、アセトン、メタノールなどの溶剤による菌体成分の
抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除去、吸着樹脂、
シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、逆相シリカゲ
ル、アルミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケイ酸マグ
ネシウム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂等を用いるカラ
ムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィー
による活性物質の吸脱着処理、適当な溶媒系による分配
等によってＥＩ−２３４６は単離される。
物から単離精製するに際しては、通常の微生物代謝産物
を培養物から精製する方法に従って行われる。すなわ
ち、アセトン、メタノールなどの溶剤による菌体成分の
抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除去、吸着樹脂、
シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、逆相シリカゲ
ル、アルミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケイ酸マグ
ネシウム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂等を用いるカラ
ムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグラフィー
による活性物質の吸脱着処理、適当な溶媒系による分配
等によってＥＩ−２３４６は単離される。
【００３５】上記精製工程中のＥＩ−２３４６の検出
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素
発色することにより、または、２５３.６ｎｍの紫外線
照射法により行うことができる。以下に本発明の実施例
を示す。
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素
発色することにより、または、２５３.６ｎｍの紫外線
照射法により行うことができる。以下に本発明の実施例
を示す。
【００３６】
実施例１ 種菌として、ストレプトマイセス・スピーシーズＥ−２
３４６株を用い、第一種培地としてグルコース１０g/
Ｌ、可溶性デンプン１０g/Ｌ、ビーフエキストラクト
（極東製薬工業社製）３g/Ｌ、粉末酵母エキスＳ（日本
製薬社製）５g/Ｌ、バクトトリプトン５g/Ｌ、リン酸マ
グネシウム８水和物０.５g/Ｌを組成とする培地(ｐＨ
７.２)を用いた。
３４６株を用い、第一種培地としてグルコース１０g/
Ｌ、可溶性デンプン１０g/Ｌ、ビーフエキストラクト
（極東製薬工業社製）３g/Ｌ、粉末酵母エキスＳ（日本
製薬社製）５g/Ｌ、バクトトリプトン５g/Ｌ、リン酸マ
グネシウム８水和物０.５g/Ｌを組成とする培地(ｐＨ
７.２)を用いた。
【００３７】種菌１白金耳を、５０ｍｌ太型試験管に入
れた第一種培地１０ｍｌに植菌し、試験管２本（合計培
地量２０ｍｌ）を２８℃で２日間振盪培養した。この第
一種培養液２０ｍｌを３００ｍｌ容エルレンマイヤーフ
ラスコに入った５０ｍｌの第二種培地に５ｍｌずつ（合
計フラスコ４本、２００ｍｌ）植菌した。第二種培地の
組成は第一種培地の組成と同じである。第二種培養は２
８℃で２日間振盪培養を行った。
れた第一種培地１０ｍｌに植菌し、試験管２本（合計培
地量２０ｍｌ）を２８℃で２日間振盪培養した。この第
一種培養液２０ｍｌを３００ｍｌ容エルレンマイヤーフ
ラスコに入った５０ｍｌの第二種培地に５ｍｌずつ（合
計フラスコ４本、２００ｍｌ）植菌した。第二種培地の
組成は第一種培地の組成と同じである。第二種培養は２
８℃で２日間振盪培養を行った。
【００３８】得られた第二種培養液２００ｍｌを３００
ｍｌ容エルレンマイヤーフラスコ中の主発酵培地５０ｍ
ｌに５ｍｌずつ（合計フラスコ４０本、２Ｌ）植菌し
た。主発酵培地としては、ダイヤイオンＨＰ−２０（三
菱化成社製）１０(V/V)％、可溶性デンプン４０g/Ｌ、
大豆粉１０g/Ｌ、コーン・スチープ・リカー５g/Ｌ、乾
燥酵母５g/Ｌ、リン酸二水素カリウム０.５g/Ｌ、リン
酸マグネシウム・８水和物０.５g/Ｌ、硫酸亜鉛７水和
物１０mg/Ｌ、塩化コバルト６水和物１mg/Ｌ、硫酸ニッ
ケル１mg/Ｌを組成とする培地(ｐＨ７.０)を用いた。こ
の主発酵培養は２８℃で６日間撹拌培養（回転数：２２
０ｒｐｍ）を行った。
ｍｌ容エルレンマイヤーフラスコ中の主発酵培地５０ｍ
ｌに５ｍｌずつ（合計フラスコ４０本、２Ｌ）植菌し
た。主発酵培地としては、ダイヤイオンＨＰ−２０（三
菱化成社製）１０(V/V)％、可溶性デンプン４０g/Ｌ、
大豆粉１０g/Ｌ、コーン・スチープ・リカー５g/Ｌ、乾
燥酵母５g/Ｌ、リン酸二水素カリウム０.５g/Ｌ、リン
酸マグネシウム・８水和物０.５g/Ｌ、硫酸亜鉛７水和
物１０mg/Ｌ、塩化コバルト６水和物１mg/Ｌ、硫酸ニッ
ケル１mg/Ｌを組成とする培地(ｐＨ７.０)を用いた。こ
の主発酵培養は２８℃で６日間撹拌培養（回転数：２２
０ｒｐｍ）を行った。
【００３９】得られた主発酵培養液２Ｌを濾過により上
清を分離し、得られた上清を４００mlのダイヤイオンＨ
Ｐ−２０カラム（三菱化成社製）に通塔し、２０％メタ
ノール１０Ｌ、および５０％メタノール１.６Ｌで洗浄
した後、１００％メタノール１.６Ｌで溶出した。ＥＩ
−２３４６を含む画分を集め、ラヂオライト＃６００
（昭和化学工業社製）２０ｇを添加した後、減圧下で濃
縮乾固し、２００mlのシリカゲルカラム（ＳＩＬ−６０
−２３０／７０Ｗ、ＹＭＣ社製）に重層し、クロロホル
ム２００ml、クロロホルム：メタノール＝９９.５：０.
５の溶媒２００ml、クロロホルム：メタノール＝９９：
１の溶媒２００mlで洗浄後、クロロホルム：メタノール
＝９８：２の溶媒２００mlで溶出した。ＥＩ−２３４６
を含む画分を集め、減圧乾固後、メタノール１ｍｌに溶
解した。この内、０.２ｍｌをＨＰＬＣカラム（ＳＨ−
３４３ ５ＡＱ、ＹＭＣ社製）に通塔後、流速８ｍｌ／
ｍｉｎの条件で、７０％メタノールの溶媒で溶出し、Ｅ
Ｉ−２３４６を含む画分を集めた。このＨＰＬＣを用い
た精製を繰り返し行い、ＥＩ−２３４６を含む画分を集
めて減圧乾固することにより、ＥＩ−２３４６を８.０
ｍｇ得た。
清を分離し、得られた上清を４００mlのダイヤイオンＨ
Ｐ−２０カラム（三菱化成社製）に通塔し、２０％メタ
ノール１０Ｌ、および５０％メタノール１.６Ｌで洗浄
した後、１００％メタノール１.６Ｌで溶出した。ＥＩ
−２３４６を含む画分を集め、ラヂオライト＃６００
（昭和化学工業社製）２０ｇを添加した後、減圧下で濃
縮乾固し、２００mlのシリカゲルカラム（ＳＩＬ−６０
−２３０／７０Ｗ、ＹＭＣ社製）に重層し、クロロホル
ム２００ml、クロロホルム：メタノール＝９９.５：０.
５の溶媒２００ml、クロロホルム：メタノール＝９９：
１の溶媒２００mlで洗浄後、クロロホルム：メタノール
＝９８：２の溶媒２００mlで溶出した。ＥＩ−２３４６
を含む画分を集め、減圧乾固後、メタノール１ｍｌに溶
解した。この内、０.２ｍｌをＨＰＬＣカラム（ＳＨ−
３４３ ５ＡＱ、ＹＭＣ社製）に通塔後、流速８ｍｌ／
ｍｉｎの条件で、７０％メタノールの溶媒で溶出し、Ｅ
Ｉ−２３４６を含む画分を集めた。このＨＰＬＣを用い
た精製を繰り返し行い、ＥＩ−２３４６を含む画分を集
めて減圧乾固することにより、ＥＩ−２３４６を８.０
ｍｇ得た。
【００４０】なお上記行程中のＥＩ−２３４６の検出
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素
発色することにより、または、２５３.６ｎｍの紫外線
照射法により行った。
は、シリカゲル薄層クロマトグラフィー、ついでヨウ素
発色することにより、または、２５３.６ｎｍの紫外線
照射法により行った。
【００４１】
【発明の効果】本発明によれば、ＩＬ−１産生阻害作用
を有する生理活性物質ＥＩ−２３４６を提供することが
できる。
を有する生理活性物質ＥＩ−２３４６を提供することが
できる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 31/35 ＡＣＬ Ａ６１Ｋ 31/35 ＡＣＬ ＡＣＳ ＡＣＳ ＡＣＶ ＡＣＶ ＡＤＤ ＡＤＤ ＡＤＭ ＡＤＭ ＡＤＺ ＡＤＺ ＡＥＤ ＡＥＤ Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｐ 17/16 //(Ｃ１２Ｐ 17/16 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 長谷川 淳博 東京都町田市旭町３−６−６ (72)発明者 斎藤 裕 東京都町田市中町３−９−13 (72)発明者 松田 譲 東京都小金井市貫井南町１−22−７
Claims (1)
- 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 で表される生理活性物質ＥＩ−２３４６。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34370195A JPH09176160A (ja) | 1995-12-28 | 1995-12-28 | 生理活性物質ｅｉ−２３４６ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP34370195A JPH09176160A (ja) | 1995-12-28 | 1995-12-28 | 生理活性物質ｅｉ−２３４６ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09176160A true JPH09176160A (ja) | 1997-07-08 |
Family
ID=18363588
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP34370195A Withdrawn JPH09176160A (ja) | 1995-12-28 | 1995-12-28 | 生理活性物質ｅｉ−２３４６ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH09176160A (ja) |
-
1995
- 1995-12-28 JP JP34370195A patent/JPH09176160A/ja not_active Withdrawn
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Withdrawal of application because of no request for examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20030304 |