JPH10287666A - 化合物ｃｒｐ−２５０４−１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 本発明の目的は、抗菌活性を有する新規生理
活性物質を提供することにある。 【解決手段】 式（Ｉ） で表される化合物ＣＲＰ−２５０４−１またはその薬理
学的に許容される塩を提供すること。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ストレプトマイセ
ス（Streptomyces）属に属する微生物により生産され、
抗菌活性を有する新規化合物ＣＲＰ−２５０４−１また
はその薬理学的に許容される塩に関する。

【０００２】

【従来の技術】式（ＩＩ）

【０００３】

【化２】

【０００４】で表されるアクチノピロンＡ、ＢおよびＣ
が、冠動脈拡張剤としてジャーナル・オブ・アンチバイ
オチックス誌（Journal of Antibitics）３９巻、３２
頁（１９８６年）および同誌３９巻、３８頁（１９８６
年）に報告されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗菌
活性を有する新規生理活性物質を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明によれば、式
（Ｉ）

【０００７】

【化３】

【０００８】で表される化合物ＣＲＰ−２５０４−１ま
たはその薬理学的に許容される塩が提供される。

【０００９】

【発明の実施の形態】以下に、本発明を詳細に説明す
る。式（Ｉ）で表される化合物ＣＲＰ−２５０４−１の
うち、式（Ｉａ）

【００１０】

【化４】

【００１１】で表される化合物を化合物ＣＲＰ−２５０
４−１ａ、式（Ｉｂ）

【００１２】

【化５】

【００１３】で表される化合物を化合物ＣＲＰ−２５０
４−１ｂと称する。化合物ＣＲＰ−２５０４−１ａおよ
びＣＲＰ−２５０４−１ｂの理化学的性質は以下に示す
とおりである。なお、理化学的性質は以下の機器により
測定した。 融点：柳本製作所 ミクロ融点測定装置 旋光度：日本分光 DIP-370 デジタル旋光計 紫外部吸収スペクトル：島津製作所 UV-2200 分光計 赤外部吸収スペクトル：日本電子 JIR-RFX3001 分光計 マススペクトル、高分解能マススペクトル：日本電子
JMS-HX110/100A質量分析計¹³ Cおよび¹H NMR スペクトル：Bruker DMX500 核磁気
共鳴装置

【００１４】ＣＲＰ−２５０４−１ａの理化学的データ 性状：黄色固体 融点：65.0-70.0℃ 旋光度：[α]_D ²⁵ = -5.7 (c=0.255, CH₃OH) FABマススペクトル：m/z 417 M-H^- 高分解能FABマススペクトル：m/z （実測値）417.2066
M-H^-, Δ=0.0 mmu （理論値）417.2066（C₂₇H₂₉O₄として） 分子式：C₂₇H₃₀O₄ 紫外部吸収スペクトル：λ_max(CH₃OH)nm(ε) 204 (2460
0), 258 (9200), 326(28000) ；1N HCl添加で変化な
し；1N NaOH添加で変化なし 赤外部吸収スペクトル：ν_max(CHCl₃)cm^-1 3010, 2927,
1653, 1558, 1419, 1232, 997 溶解性：クロロホルム、メタノールに易溶、水に不溶¹ H NMR スペクトル(500MHz, CDCl₃, 10℃) ：δppm
［積分、多重度、結合定数J (Hz)］ 7.33(1H, d, J=1.
7), 7.18(1H, d, J=7.7), 7.11(1H, dd, J=1.7, 7.7),
6.57(1H, d, J=11.1), 6.49(1H, m), 6.40(1H, m), 6.3
7(1H, m), 6.27(1H, m), 6.26(1H, m), 6.02(1H, ddd,
J=5.4, 10.4, 17.1), 5.55(1H, t, J=7.4),5.40(1H, dd
d, J=1.5, 1.5, 5.4), 5.31(1H, ddd, J=1.5, 1.5, 17.
1), 5.18(1H, ddd, J=1.5, 1.5, 10.4), 3.38(2H, d, J
=7.4), 2.38(3H, s), 1.98(3H, s),1.97(3H, s), 1.82
(3H, s)¹³ C NMRスペクトル（125MHz, CDCl₃, 10℃）：δppm
（多重度） 165.6(s), 164.3(s), 156.9(s), 140.2(s),
139.3(d), 137.6(s), 137.3(d), 136.3(s), 135.2(d),
132.5(s), 131.3(d), 130.2(d), 129.0(d), 128.14
(d), 128.07(d), 127.9(d), 126.6(d), 125.8(d), 115.
0(t), 106.5(s), 98.3(s), 72.0(d), 30.6(t), 21.4
(q), 12.6(q), 9.7(q), 8.4(q) 呈色反応：アニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素による各呈
色に陽性、ニンヒドリン反応に陰性

【００１５】ＣＲＰ−２５０４−１ｂの理化学的データ 性状：黄色固体 融点：139.0-141.5℃ 旋光度：[α]_D ²⁵ = +37.1 (c=0.06, CH₃OH) FABマススペクトル： m/z 417 M-H^- 高分解能FABマススペクトル： m/z（実測値）417.2061
M-H^-, Δ=-0.5 mmu （理論値）417.2066（C₂₇H₂₉O₄として） 分子式：C₂₇H₃₀O₄ 紫外部吸収スペクトル：λ_max(CH₃OH) nm (ε) 235 (11
100), 335 (49500), 349(56600), 366(36900)；1N HCl
添加で変化なし；1N NaOH添加で変化なし 赤外部吸収スペクトル：ν_max(CHCl₃) cm^-1 3018, 292
5, 1653, 1581, 1227, 995 溶解性：クロロホルム、メタノールに易溶、水に不溶¹ H NMR スペクトル(500MHz, CDCl₃, 10℃) ：δppm
［積分、多重度、結合定数J (Hz)］7.46(1H, d, J=8.
0), 7.26( 1H, d, J=1.7), 7.10(1H, dd, J=1.7, 8.0),
6.90(1H, d, J=15.3), 6.75(1H, dd, J=15.3, 10.1),
6.44(1H, m), 6.44(1H, m), 6.31(1H, m), 6.30(1H,
m), 6.09(1H, ddd, J=5.0, 10.4, 17.2), 5.82(1H, s),
5.58(1H, t, J=7.1), 5.53(1H, ddd, J=1.4, 1.4, 5.
0), 5.36(1H, ddd, J=1.4, 1.4, 17.2), 5.24(1H, ddd,
J=1.4, 1.4, 10.4), 3.41(2H, d, J=7.1), 2.35(3H,
s), 2.00(3H, s), 1.99(3H, s), 1.89(3H,s)¹³ C NMRスペクトル（125MHz, CDCl₃, 10℃）：δppm
（多重度）165.2(s), 163.8(s), 157.1(s), 139.4(d),
138.9(s), 137.7(s), 137.0(d), 136.3(s), 133.7(d),
133.2(d), 132.6(s), 130.6(d), 128.8(d), 128.6(d),
128.1(d), 127.1(d), 125.7(d), 125.6(d), 115.2(t),
106.0(s), 98.2(s), 71.8(d), 30.6(t), 21.3(q), 12.7
(q), 9.7(q), 8.3(q) 呈色反応：アニスアルデヒド、硫酸、ヨウ素による各呈
色に陽性、ニンヒドリン反応に陰性

【００１６】化合物ＣＲＰ−２５０４−１の薬理学的に
許容される塩は、薬理学的に許容される金属塩、アンモ
ニウム塩、有機アミン付加塩等を包含する。金属塩とし
てはリチウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカ
リ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩等のアルカリ
土類金属塩、アルミニウム塩、亜鉛塩等があげられ、有
機アミン付加塩としてはモルホリン、ピペリジン等の付
加塩があげられる。

【００１７】本発明は、化学的に等価な立体異性体が存
在し得るが、それら異性体またはそれら異性体のいかな
る比率の混合物も本発明に包含される。ＣＲＰ−２５０
４−１ａおよびＣＲＰ−２５０４−１ｂのようなピロン
環を有する化合物には、通常、式（Ｉａ）で示されるよ
うなα−ピロン環と式（Ｉａ’）で示されるようなγ−
ピロン環の間の互変異性が存在することが知られている
［テトラヘドロン（Tetrahedron）、４９巻、３２０３
頁〜３２１０頁（１９９３年）］。

【００１８】

【化６】

【００１９】各種展開溶媒による化合物ＣＲＰ−２５０
４−１の薄層クロマトグラフィーのＲｆ値を第１表に示
す。検出はヨウ素反応もしくは２５３．７nmの紫外線照
射法により行った。

【００２０】

【表１】

【００２１】実験１ 展開溶媒：クロロホルム：メタノール＝９：１ 薄層：キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄(メルク社製、Art.5628) 展開方法：室温、上昇法、15〜30分 実験２ 展開溶媒：７０％メタノール水 薄層：ＲＰ−１８ＷＦ₂₅₄s (メルク社製、Art.13124) 展開方法：室温、上昇法、１５〜６０分 化合物ＣＲＰ−２５０４−１ａおよび化合物ＣＲＰ−２
５０４−１ｂの生物活性について、以下の試験例で説明
する。

【００２２】試験例 各種細菌に対する抗菌活性 化合物ＣＲＰ−２５０４−１ａおよびＣＲＰ−２５０４
−１ｂの各種細菌に対する抗菌活性を測定した。抗菌活
性はバクトトリプトン（Difco社製）３g/L 、肉エキス
３g/L 、酵母エキス１g/L 、グルコース１g/L 、寒天１
６g/L の組成からなる培地（pH7.0)を用いて寒天希釈法
により測定した。各種細菌に対する最少生育阻害濃度
（ＭＩＣ）で示した。

【００２３】結果を第２表に示す。

【００２４】

【表２】

【００２５】次に化合物ＣＲＰ−２５０４−１の製造法
について説明する。化合物ＣＲＰ−２５０４−１は、ス
トレプトマイセス（Streptomyces）属に属し、ＣＲＰ−
２５０４−１の生産能を有する微生物を培地に培養し、
培養物中にＣＲＰ−２５０４−１を生成蓄積させ、該培
養物からＣＲＰ−２５０４−１を採取することによって
製造される。

【００２６】ＣＲＰ−２５０４−１生産能を有する微生
物としては、ストレプトマイセス属に属し、ＣＲＰ−２
５０４−１生産能を有する菌株であればいずれの菌株で
も用いることができる。また、これらの菌株を人工的変
異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘発剤処
理などによって変異させた変異株あるいは自然的に変異
した変異株などでもＣＲＰ−２５０４−１生産能を有す
るものであれば本発明に用いることができる。

【００２７】具体的に好適な例としては、ストレプトマ
イセス・エスピー（Streptomyces sp.）ＣＲＰ−２５０
４株があげられる。ＣＲＰ−２５０４株の形態、培養性
状および生理学的性質における特徴を記述する。本発明
者らは兵庫県の土壌より新たに分離したストレプトマイ
セス属に属する放線菌ＣＲＰ−２５０４株が新規抗菌化
合物ＣＲＰ−２５０４−１を生産することを見いだし
た。

【００２８】上記の放線菌ＣＲＰ−２５０４株の形態、
培養性状および生理的性質における特徴を記述する。 1.形態的性質 1)菌糸 気菌糸形成；有 気菌糸の分断および運動性；無 基生菌糸の分断および運動性；無 2)胞子 胞子の形成の有無および着生位置；気菌糸に形成 胞子嚢の形成の有無および着生位置；無 胞子柄上で連鎖する胞子の数；10個以上 多数の胞子が連鎖する場合の形状；直状 胞子の特徴 表面構造；平滑 形状および大きさ；短桿形、約0.7〜0.8μm × 0.7〜0.
9μm 運動性および鞭毛の存在；無 3)その他 厚膜胞子；無 集束菌糸；無 疑似胞子嚢；無 菌糸の分裂様式；単純分岐 2.培養的性質 ＣＲＰ−２５０４株は、一般に使用されている合成およ
び天然培地で普通もしくは旺盛な生育を示し、基生菌糸
は薄黄色から茶色系を示す。培地により茶色系の可溶性
色素が産生されることもある。

【００２９】各種培地上での２８℃、１４日間培養した
時の生育および色の特徴を下記に示す。なお、色の表示
は Color Harmony Manual (Container Corporation of
America)による色の分類に従った。 1)シュクロース・硝酸塩寒天培地 生育状態；普通 基生菌糸の色調；ナチュラル(3dc) 気菌糸の着生状態とその色調；普通、シルバーグレー(3
fe) 可溶性色素；無 2)グルコース・アスパラギン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ダスティーイエロー(1 1/2gc)〜ライ
トゴールド(2ic) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ペールイエロー(1
ca)〜ナチュラル(3dc) 可溶性色素；無 3)グリセリン・アスパラギン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；バンブー(2gc)〜ブライトゴールド(2n
c) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ライトアイボリー
(2ca)〜シルバーグレー(3fe) 可溶性色素；わずかに産生（黄色） 4)スターチ・無機塩寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、シルバーグレー(3
fe) 可溶性色素；産生（黄土色） 5)チロシン寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトゴールド(2ic) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、ライトアイボリー
(2ca)〜シルバーグレー(3fe) 可溶性色素；無 6)栄養寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；マスタードタン(2lg)〜マスタード(2l
e) 気菌糸の着生状態とその色調；ホワイト(a)〜アシェス
(5fe) 可溶性色素；無 7)イースト・麦芽寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie)〜ダーク
ブラウン(2pn) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；無 8)オートミール寒天培地 生育状態；旺盛 基生菌糸の色調；ライトマスタードタン(2ie)〜マスタ
ードブラウン(2ni) 気菌糸の着生状態とその色調；旺盛、アシェス(5fe) 可溶性色素；わずかに産生（黄土色） 3.生理学的性質 ＣＲＰ−２５０４株の生理的諸性質を以下に示す。生育
温度範囲は１４日間培養後、その他は２８℃、２〜３週
間培養後の結果を記述する。

【００３０】1)生育温度範囲；１１℃〜３８℃ 2)ゼラチンの液化；有 3)スターチの加水分解；有 4)脱脂粉乳の凝固およびペプトン化；無 5)メラニン様色素の生成 (1) ペプトン・イースト・鉄寒天培地；無 (2) チロシン寒天培地；無 6)炭素源の利用性 基礎培地はプリードハム・ゴトリーブ寒天培地を使用し
た。以下、＋は利用することを、−は利用しないことを
示す。

【００３１】 L-アラビノース；＋ D-キシロース ；＋ D-グルコース ；＋ シュクロース ；− ラフィノース ；− D-フルクトース；− ラムノース ；＋ イノシトール ；− D-マンニトール；− 4.化学分類的性質 1)菌体中のジアミノピメリン酸の光学異性体；ＬＬ型 2)菌体脂質の主要キノン；MK-9(H6),MK-9(H8) 以上、形態的には気中菌糸に胞子鎖が形成されること、
化学分類的には細胞壁がＩ型（ＬＬ−ジアミノピメリン
酸）であること、および、主要キノンがメナキノン９の
3飽和型(MK-9(H6))及び4飽和型(MK-9(H8))であることか
ら、本菌株は放線菌の中でストレプトマイセス属に分類
される。

【００３２】従って、本菌株をストレプトマイセス・エ
スピーＣＲＰ−２５０４ (Streptomyces sp. CRP-2504)
と命名し、通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究
所（日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号）に受託番
号ＦＥＲＭ ＢＰ−５８２４として平成９年２月１９日
付けで寄託した。本発明の化合物ＣＲＰ−２５０４−１
生産菌の培養に際しては、放線菌の培養に用いられる通
常の培養方法が適用される。培地としては、菌の資化し
得る炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培地
であれば天然培地、合成培地いずれでも使用可能であ
る。

【００３３】炭素源としては、グルコース、澱粉、デキ
ストリン、マンノース、マルトースなどの炭水化物、ク
エン酸、リンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メ
タノール、エタノールなどのアルコール、メタン、エタ
ン、プロパン、ｎ−パラフィンなどの炭化水素、グルタ
ミン酸などのアミノ酸あるいはグリセロールなどが用い
られる。

【００３４】窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
などのアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、
シスチン、アラニンなどのアミノ酸、尿素、ペプトン、
肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・
リカー、ソルブル・ベジタブル・プロテイン、ソイ・ビ
ーン・ミール、トリプトン、綿実粕、大豆カゼイン、カ
ザミノ酸、ファーマメディア、バクトトリプトンなどが
用いられる。

【００３５】無機物としては、リン酸一水素カリウム、
リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン
酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸
マンガン、硫酸銅、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテ
ン酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アル
ミニウムカリウム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩
化コバルト、硫酸ニッケル、食塩などが用いられる。

【００３６】その他必要に応じて、培地にビタミン、た
とえばサイアミンなど菌体の増殖あるいは化合物ＣＲＰ
−２５０４−１の生産を促進する物質を加える。また、
用いる微生物が特定の物質を要求する場合は、該物質を
加える。培養は振盪培養法、通気撹拌培養法などによ
り、１５〜３５℃で、中性付近のｐＨで行われる。通常
３〜１５日の培養によって、化合物ＣＲＰ−２５０４−
１の蓄積は最大に達し、培養は完了する。

【００３７】培養液中に蓄積した化合物ＣＲＰ−２５０
４−１を培養液から単離採取するに際しては、培養液か
ら微生物代謝産物を採取する通常の方法が適用される。
すなわち、アセトン、メタノールなどの有機溶媒による
菌体成分の抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除去、
吸着樹脂、シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、逆相
シリカゲル、アルミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケ
イ酸マグネシウム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂などを
用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマト
グラフィーによる活性物質の吸脱着処理、適当な溶媒系
による分配などによって化合物ＣＲＰ−２５０４−１は
単離される。

【００３８】上記精製工程中の化合物ＣＲＰ−２５０４
−１の検出は、蛍光剤入りシリカゲル（キーゲルゼルＦ
₂₅₄ 、メルク社製）を用いた薄層クロマトグラフィー、
ついでヨウ素反応または２５３．７nmの紫外線照射法に
より行うことができる。以下に本発明の実施例を示す。

【００３９】

【実施例】

実施例 ストレプトマイセス・エスピー（Streptomyces
sp.）ＣＲＰ−２５０４株による化合物ＣＲＰ−２５０
４−１ａおよびＣＲＰ−２５０４−１ｂの製造 種菌として、ストレプトマイセス・エスピー（Streptom
yces sp.）ＣＲＰ−２５０４株を用い、第一種培地とし
てグルコース１０g/L 、可溶性デンプン１０g/L 、バク
トトリプトン５g/L 、酵母エキス５g/L 、肉エキス５g/
L 、リン酸二水素カリウム５g/L 、硫酸マグネシウム・
７水和物０．５g/L 、リン酸マグネシウム・８水和物
０．５g/L （ｐＨ７．０）の組成からなる培地を用い
た。種菌１白金耳を太型試験管に入れた第一種培地１０
mlに植菌し、２８℃で５日間振盪培養した（第一種培
養）。

【００４０】この第一種培養液５mlを３００ml容三角フ
ラスコに入った５０mlの第二種培地に植菌した。第二種
培地の組成は第一種培地の組成と同じである。第二種培
養は２８℃で２日間行った。得られた第二種培養液５０
mlを２L 容三角フラスコに入った５００mlの第三種培地
に植菌した。第三種培地の組成は第一種培地の組成と同
じである。第三種培養は２８℃で３日間行った。

【００４１】得られた第三種培養液５００mlを３０L 容
培養タンクに入った１５L の主発酵培地に植菌した。主
発酵培地としては、可溶性デンプン４０g/L 、ソイ・ビ
ーン・ミール１０g/L 、コーン・スチープ・リカー５g/
L 、乾燥酵母５g/L 、リン酸二水素カリウム０．５g/L
、硫酸亜鉛・７水和物１０mg/L、塩化コバルト・６水
和物１mg/L、硫酸ニッケル１mg/L、ダイアイオンＨＰ−
２０（三菱化成社製）１０％容、リン酸マグネシウム・
８水和物０．５g/L を組成とする培地（ｐＨ７．０）を
用いた。この主発酵培養は２８℃、通気量１vvm 、撹拌
回転数２００rpmで４日間通気撹拌培養することにより
行った。

【００４２】得られた主発酵培養液１５L に濾過助剤
（ラヂオライト＃６００、昭和化学社製）を添加後、遠
心分離器（回転数：１，８００rpm ）を用いて分別し
た。分別した菌体に１５L のメタノールを加え撹拌後ろ
過した。ろ液に６．４L の脱イオン水および２１４mlの
酢酸を添加し、１％酢酸を含む７０％メタノール水を用
いて充填した２L のダイヤイオンＨＰ−２０カラム（三
菱化成社製）に通筒した。カラムを６L の８０％メタノ
ール水溶液で洗浄後、６L のメタノールで溶出した。溶
出液を減圧下で濃縮乾固し、さらに少量のメタノールに
溶解し、ラヂオライト＃６００を少量添加した後、減圧
下で乾固した。得られた粉末をクロロホルム−メタノー
ル混液（１００：１）で充填した１L のシリカゲルカラ
ム（メルク社製、Ａｒｔ．７７３８）の上端にのせ、３
L のクロロホルム−メタノール混液（１００：１）およ
び６L のクロロホルム−メタノール混液（１００：２）
で順次溶出した。溶出液を４００mlずつ分取すると、Ｃ
ＲＰ−２５０４−１ａおよびＣＲＰ−２５０４−１ｂは
フラクション番号１１から２２に溶出された。これらの
画分を集め、濃縮乾固すると黄色粉末が１．２ｇ得られ
た。得られた粉末を１００mg/ml の濃度となるようにメ
タノールに溶解し、０．５mlを逆相ＨＰＬＣカラム（Ｙ
ＭＣ ＳＨ−３４３−５ＡＱ、ＹＭＣ社製）に導入した
後、室温で０．１％の酢酸を含む６５％アセトニトリル
水溶液で毎分１０mlずつ溶出すると、ＣＲＰ−２５０４
−１ａおよびＣＲＰ−２５０４−１ｂは２０分から２３
分の間に溶出された。溶出液に等量の脱イオン水を添加
し、脱イオン水を用いて充填した２０mlのダイヤイオン
ＨＰ−２０（三菱化成社製）カラムに通筒後、６０mlの
脱イオン水で洗浄し、メタノールで溶出した。以上の操
作を黄色粉末全量に対して行った。溶出液を減圧下で濃
縮、乾固し、４００mgのＣＲＰ−２５０４−１ａおよび
ＣＲＰ−２５０４−１ｂの混合物の黄色粉末を得た。得
られたＣＲＰ−２５０４−１ａおよびＣＲＰ−２５０４
−１ｂの混合物の黄色粉末を６０mgとり、３mlのメタノ
ールに溶解後、０．５mlを逆相ＨＰＬＣカラム（Ｃａｐ
ｃｅｌｌ ｐａｋ Ｃ18 ＵＧ１２０Å、２０mm×２５
０mm、資生堂社製）に導入した後、室温で０．１％の酢
酸を含む７５％メタノール水溶液で毎分１０mlずつ溶出
すると、ＣＲＰ−２５０４−１ａは４０分から４３分の
間に溶出され、ＣＲＰ−２５０４−１ｂは４３分から４
６分の間に溶出された。この操作を、得られたＣＲＰ−
２５０４−１ａおよびＣＲＰ−２５０４−１ｂの混合物
の黄色粉末６０mgについて行った。ＣＲＰ−２５０４−
１ａおよびＣＲＰ−２５０４−１ｂのそれぞれの溶出液
を集め、等量の脱イオン水を添加し、メタノールであら
かじめ洗浄したＳｅｐ−Ｐａｋ Ｐｌｕｓ（登録商標）
Ｃ１８カートリッジ（ウォーターズ社製）に通筒後、３
mlの脱イオン水で洗浄し、３mlのメタノールで溶出し
た。溶出液をそれぞれ減圧下で濃縮乾固し、ＣＲＰ−２
５０４−１ａの黄色粉末を２５．２mg、ＣＲＰ−２５０
４−１ｂの黄色粉末を５．６mg得た。

【００４３】

【発明の効果】本発明によれば、抗菌活性を有する化合
物ＣＲＰ−２５０４−１またはその薬理学的に許容され
る塩を提供することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 中西 聡 東京都町田市中町３−９−11 (72)発明者 松田 譲 東京都小金井市貫井南町１−22−７

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 で表される化合物ＣＲＰ−２５０４−１またはその薬理
   学的に許容される塩。