KR20220103806A - 암 치료용 항-pd1 및 항-lag3 항체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 신규한 항-PD1 및 항-LAG3 항체 분자에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 항체 분자를 코딩하는 핵산; 그러한 항체 분자를 제조하는 방법; 이러한 항체 분자를 발현하거나 발현할 수 있는 숙주 세포; 그러한 항체 분자를 포함하는 조성물; 및 그러한 항체 분자 또는 조성물의 용도, 특히 암 질환 분야의 치료 목적을 위한 그의 용도에 관한 것이다.

Description

암 치료용 항-PD1 및 항-LAG3 항체{ANTI PD-1 AND ANTI-LAG3 ANTIBODIES FOR CANCER TREATMENT}
본 발명은 신규한 항-PD1 및 항-LAG3 항체 분자에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 항체 분자를 코딩하는 핵산; 그러한 항체 분자를 제조하는 방법; 이러한 항체 분자를 발현하거나 발현할 수 있는 숙주 세포; 그러한 항체 분자를 포함하는 조성물; 및 그러한 항체 분자 또는 조성물의 용도, 특히 암 질환 분야의 치료 목적을 위한 그의 용도에 관한 것이다.
암은 신체 전체로 퍼질 가능성이 있는 비정상의 국소적인 세포 성장을 특징으로 하는 질환이다. 선진국에서는 두 번째로 흔한 사망 원인이다. 남성에서 가장 흔한 암 유형은 폐암, 전립선암, 결장직장암 및 위암이며 여성에서 가장 흔한 유형은 유방암, 결장직장암, 폐암 및 자궁경부암이다. 생존의 기회는 주로 암의 유형과 확인 단계에 달려있지만, 폐암의 경우는 전체 10년 생존율이 5% 정도이다.
과거 종양 암을 치료하는 가장 흔한 수단 (종양학)은 수술, 방사선 치료 또는 화학요법 약물의 사용이었다. 그러나, 최근에 암 면역요법이 종양학의 치료법으로서 많은 가능성을 제시하는 것으로 입증되었다.
암 면역요법은 종양이 직접 절제되거나 치료되는 기존의 일반적인 치료 방법과는 아주 대조적으로 암 치료에 면역계가 사용되는 종양학의 한 분야이다. 이 치료 개념은 이들 세포의 면역 기능을 저해하도록 작용하는 T 세포의 표면에 있는 많은 단백질의 동정에 기초한다. 이 단백질 중에 PD1이 있다.
PD1 (예정된 세포사 (Programmed cell death) 1)은 T 세포에서 발현되는 세포 표면 수용체 단백질이다. 단백질은 "면역 체크포인트 (immun checkpoint)" 억제제로서 기능하며, 즉 면역계에서 세포의 활성을 조절하여 자가면역 질환을 조절 및 제한한다. 최근 많은 암이 "면역 체크포인트" 억제제를 변형시킴으로써 면역계로부터 스스로를 보호하여 검출을 피할 수 있는 것으로 이해되고 있다.
PD1과 관련하여, 이 단백질은 세포 표면 수용체와 상호 작용하는 두개의 리간드 PD-L1 및 PD-L2를 갖는다. 결합시, PD-1은 T-세포 반응을 음성적으로 조절하는 세포 내 신호를 유도한다.
상기에서 상세히 설명한 바와 같이, PD1은 T-세포 활성의 중요한 조절 인자이다. 최근 여러 종류의 상이한 암세포에서 길항적 PD-1 항체 분자인 니볼루맵과 펨브롤리주맵이 면역계를 자극하여 암을 치료할 수 있다는 것이 밝혀졌다.
림프구 활성화 유전자-3 (LAG3; CD223)은 활성화된 T 세포의 세포 표면에서 주로 발현되지만, NK 및 수지상 세포의 서브세트에서도 발견되는 타입 Ⅰ 막관통 단백질이다. LAG3는 T 헬퍼 세포 활성화를 위한 공동 수용체인 CD4와 밀접한 관련이 있다. 두 분자는 4개의 세포 외 Ig-유사 도메인을 가지며 그의 기능적 활성화를 위해 그의 리간드인 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 클래스 II와의 결합을 필요로 한다. MHC-II에 결합할 때, LAG3은 T-세포 반응을 음성적으로 조절하는 세포 내 신호를 유도한다. 최근 연구에 따르면 LAG3와 PD1이 종양 침윤 림프구 (tumor infiltrating lymphocyte, TIL)에서 공동 발현되어 종양 매개성 면역 억제에 기여할 수 있다고 한다. 항원에 만성적으로 노출되면 "고갈"이라는 과정을 통해 T 세포가 점진적인 불활성화에 이를 것으로 생각된다. 고갈된 T 세포는 종종 PD1 및 LAG3과 같은 음성 조절 수용체를 공동 발현한다.
PD1 길항성 모노클로날 항체인 니볼루맵과 펨브롤리주맵의 임상 결과가 고무적이지만, 치료 환자의 70% 이하는 치료에 반응하지 않았다. 동종의 종양 마우스 모델뿐만 아니라 환자 유래 T 세포에서의 전임상 데이터는 종양 유래 T 세포가 PD1 이외에 다른 억제 수용체를 종종 발현한다는 것을 입증하였다. 길항성 모노클로날 항체 분자를 이용한 PD1 및 LAG3의 중화 결합은 시험관 내 및 생체 내 모델에서 PD1 중화 단독에 비해 T 세포의 재활성화를 증가시키고 종양 거부를 향상시켰다. 이러한 결과에 기초하여, LAG3의 중화가 길항적 PD1 mAb의 효능을 향상시킬 것으로 기대된다.
그러나, 기존의 항-PD1 항체 분자는 많은 수의 환자가 치료에 반응하지 않는다는 문제점을 안고 있다. 따라서, 단독으로 또는 다른 치료 분자, 특히 추가의 T-세포 체크포인트 억제제에 대한 추가적인 길항 분자와 조합하여 사용되는 경우, 기존의 선행 항체 약제와 비교할 때, 관리가능한 부작용 프로파일을 갖는 보다 효과적인 PD1 길항성 모노클로날 항체를 동정하는 것이 필요하다.
이러한 배경에서, 본 발명자들은 공지 분자에 비해 개선된 치료 프로파일을 가지는 추가의 항-PD1 및 항-LAG3 항체를 생성하고자 하였다.
발명의 개요
제1 측면에 따라, 항-PD1 항체 분자가 제공된다. 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 본 발명의 항-PD1 항체 분자는 다른 항-PD1 항체에 비해 놀랍고 유리한 성질을 갖는다. 특히, 이들은 기준 항-PD1 항체 분자보다 더 긴 종말 반감기와 개선된 T 세포 활성화를 입증한다. 인식할 수 있는 바와 같이, 이러한 특성은 암을 치료하는데 사용하기 위한 항-PD1 항체 분자에 바람직하다.
항-PD1 항체 분자를 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 제조 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 항-PD1 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물도 제공된다. 본원에 개시된 항-PD-1 항체 분자는 고형 및 연조직 종양을 비롯한 암성 질병을 치료하는데 사용될 수 있다.
보다 구체적으로, 본 발명의 항-PD1 항체 분자는 (a) 서열번호 1 (hcCDR1), 서열번호 2 (hcCDR2) 및 서열번호 3 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 4 (lcCDR1), 서열번호 5 (lcCDR2) 및 서열번호 6 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR; 또는, b) 서열번호 7 (hcCDR1), 서열번호 8 (hcCDR2) 및 서열번호 9 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 10 (lcCDR1), 서열번호 11 (lcCDR2) 및 서열번호 12 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR; 또는 (c) 서열번호 13 (hcCDR1), 서열번호 14 (hcCDR2) 및 서열번호 15 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 16 (lcCDR1), 서열번호 17 (lcCDR2) 및 서열번호 18 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 항-LAG3 항체 분자가 제공된다. 본원에 추가로 기재된 바와 같이, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자는 다른 항-LAG3 항체 분자에 비해 놀랍고 유리한 성질을 갖는다. 특히, 이들은 본 발명의 항-PD1 항체 분자와 함께 사용되는 경우 기준 항-PD1 항체 분자 및 항-LAG3 항체 분자보다 T 세포의 개선된 활성화를 입증한다. 인식할 수 있는 바와 같이, 이러한 특성은 암을 치료하는데 사용하기 위한 항-LAG3 항체 분자에 바람직하다.
항체 분자를 코딩하는 핵산 분자, 발현 벡터, 숙주 세포 및 항-LAG3 항체 분자의 제조 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 항-LAG3 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물도 제공된다. 본원에 개시된 항-LAG3 항체 분자는 고형 및 연조직 종양을 비롯한 암성 질병을 치료하는데 사용될 수 있다.
바람직한 실시양태에 따라, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자는 아미노산 서열 LLRRAGVT (서열번호 111) 및/또는 YRAAVHLRDRA (서열번호 112)를 포함하는 인간 LAG3의 에피토프와 결합한다. 항체가 결합하는 에피토프를 결정하는 방법이 본원에 제공된다.
바람직한 실시양태에 따라, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자는 (a) 서열번호 39 (hcCDR1), 서열번호 40 (hcCDR2) 및 서열번호 41 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 42 (lcCDR1), 서열번호 43 (lcCDR2) 및 서열번호 44 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR; 또는 (b) 서열번호 45 (hcCDR1), 서열번호 46 (hcCDR2) 및 서열번호 47 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 48 (lcCDR1), 서열번호 49 (lcCDR2) 및 서열번호 50 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 본 발명의 항-PD1 항체 분자가 본 발명의 항-LAG3 항체 분자와 조합하여 사용될 수 있는 암의 치료 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 이들 측면의 실시양태는 항-LAG3 항체가 항-PD1 항체 분자와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 것을 포함한다.
본 발명의 이들 측면의 추가의 실시양태는 항-PD1 항체 분자가 항-LAG3 항체 분자와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여되는 것을 포함한다. 본 발명의 이들 측면의 추가의 실시양태는 본 발명의 항체 분자의 상기 사용이 다른 치료제와 조합될 수 있는 것을 포함한다.
본 발명의 항체 분자를 포함하는 추가의 측면, 실시양태, 용도 및 방법은 하기 발명의 상세한 설명 및 첨부된 청구 범위로부터 명백해질 것이다.
본 발명은 폐암, 특히 NSCLC와 같은 몇몇 암 유형의 보다 효과적인 치료를 가능하게 하는 신규 항체 분자를 제공한다.
도면 범례
도 1: 항-PD1 항체 분자의 가변 도메인의 아미노산 서열. 77E11은 뮤린 선조 항체의 명칭이다. PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5는 본원에서 정의된 바와 같은 항-PD1 항체이다. CDR 서열은 밑줄쳐 친다. VK 77E11 (서열번호 113); VK PD1-1 (서열번호 20); VK PD1-2; (서열번호 22); VK PD1-3 (서열번호 24); VK PD1-4, (서열번호 26); VK PD1-5 (서열번호 28); VH 77E11 (서열번호 114); VH PD1-1 (서열번호 19); VH PD1-2; (서열번호 21); VH PD1-3 (서열번호 23); VH PD1-4, (서열번호 25); VH PD1-5 (서열번호 27).
도 2: 항-PD1 항체 분자에 의한 PD1에 대한 인간 PD1-L1/L2 결합의 저해. (A) 본 발명의 항-PD1 항체가 CHO 세포의 표면상에 발현된 인간 PD-1에 대한 PD-L1 결합의 차단을 유도함을 나타낸다. (B) 본 발명의 항-PD1 항체가 CHO 세포의 표면상에 발현된 인간 PD-1에 대한 PD-L2 결합의 차단을 유도함을 나타낸다.
도 3: 항-PD1 항체 분자에 의한 항원-특이적 T 세포 반응의 자극. 4 명의 개별 공여자로부터의 파상풍 특이적 CD4 기억 T 세포의 인터페론-γ (IFN-γ) 생산을 자극하기 위한 본 발명의 항-PD1 항체의 능력을 나타낸다. 이 분석을 위해, 건강한 공여자로부터 유래된 PBMC로부터의 T 세포를 파상풍 톡소이드의 존재하에 확장시키고 파상풍 톡소이드를 로딩한 자가 성숙 수지상 세포 (DC)와 함께 2일 동안 공-배양하였다. 공-배양 단계는 PD1-1 및 PD1-3 존재하에서 유사한 방식으로 두 번 반복되었다. 두 번째 공-배양 단계 끝에 상등액을 ELISA에 의해 IFN-감마 수준에 대해 평가하였다.
도 4: hPD-1 녹-인 마우스 모델에서의 항-PD1 항체 분자의 생체 내 효능. 결장암종 세포주 (MC38)를 지닌 마우스로부터의 개별적인 종양 성장 곡선을 보여준다. 마우스를 (A) PBS q3or4d, (B) 아이소타입 q3or4d, (C) PD1-3q3or4d 또는 (D) PD1-3으로 단일 용량으로 처리하였다. PD1-3 및 아이소타입은 10 mg/kg을 투여하였다.
도 5: 항-PD1 항체 분자의 전임상 약물동력학. 정맥 투여시 PD1 항체의 약물 동력학적 파라미터가 사이노몰거스 원숭이에 투여된 용량에 대해 플롯팅된다. (A) 곡선 아래 면적 (AUC), (B) 최대 혈장 농도 (cmax), (C), 혈장 클리어런스 (CL), (D) 말기에서의 제거 반감기 (t1/2, z).
도 6: 항-LAG3 항체 분자의 가변 도메인의 아미노산 서열. 496G6은 뮤린 선조 항체의 명칭이다. LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4 및 LAG3-5는 본원에서 정의된 바와 같은 항-LAG3 항체이다. VK 496G6 (서열번호 117); VK LAG3-1 (서열번호 52); VK LAG3-2; (서열번호 54); VK LAG3-3 (서열번호 56); VK LAG3-4, (서열번호 58); VK LAG3-5 (서열번호 60); VH 496G6 (서열번호 118); VH LAG3-1 (서열번호 51); VH LAG3-2; (서열번호 53); VH LAG3-3 (서열번호 55); VH LAG3-4, (서열번호 57); VH LAG3-5 (서열번호 59).
도 7: 항-LAG3 항체 분자에 의한 MHCII에 대한 인간 LAG3 결합의 저해. Raji 세포의 표면상에 발현된 MHCII에 대한 재조합 LAG3의 결합을 차단하기 위한 제시된 LAG3 mAb 및 대조군 mAb의 효력을 나타낸다.
도 8: 항-PD1 및 항-LAG3 항체 분자에 의한 항원-특이적 T 세포 반응의 자극. (A) 펨브롤리주맵 (Keytruda (R))의 포화량에 대한 PD1/LAG3 mAb 조합의 배수 증가%를 나타낸다. 고정된 100 nM 농도의 PD1-3 및 니볼루맵 (Opdivo (R))이 증가량의 LAG3 mAb와 조합되었다 (검은선으로 나타낸 LAG3-1, 또는 점선으로 나타낸 BMS-986016과 동일한 아미노산 서열을 갖는 기준 항체 분자, 길항성 LAG3 항체). (B) 펨브롤리주맵 (Keytruda (R)) 활성에 대한 본 발명의 조합물의 PD1/LAG3 mAb 분자의 배수 증가%를 나타낸다. 조합 mAb 활성 수준은 PD1에 대해 100 nM, LAG3 mAb에 대해 200 nM에서 평가되었다. 통계 시험은 Graph Pad Prism을 사용하여 일원 분산 분석 (one-way ANOVA)에 이어 터키 사후 검정 (Tukey post hoc)으로 수행하였다.
도 9: 동계 종양 모델에서 PD1 및 LAG3 항체의 병용 요법의 생체 내 효능. 10 mg/kg의 용량으로 주 2회 도구 항체로 처리된 종양을 가진 마우스의 개별 성장 곡선을 나타낸다. (A) 결장암종 (MC38)을 가진 마우스를 PBS, 항-LAG3, 항-PD1 또는 항-PD1과 항-LAG3의 조합으로 처리하였다. 흑색종 (B16-F10) (B), 폐암종 (LL/2) (C), 결장암종 (Colon-26) (D) 또는 유방암 (4T1) (E) 종양을 가진 마우스를 PD1 아이소타입, 항-PD1 또는 항-PD1과 항-LAG3의 조합으로 처리하였다.
발명의 상세한 설명
정의
본 발명의 상기 및 다른 측면 및 실시양태들이 본원의 추가 설명으로부터 명백해질 것이다.
지시되지 않거나 달리 정의되지 않는 한, 사용된 모든 용어는 당해 기술 분야에서 당업자에게 명백한 통상의 의미를 가질 것이다. 표준 핸드북, 예컨대 [Sambrook et al, "Molecular Cloning: A Laboratory Manual" (2nd Ed.), VoIs. 1-3, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989); Lewin, "Genes IV", Oxford University Press, New York, (1990), 및 Roitt et al., "Immunology" (2nd　Ed.), Gower Medical Publishing, London, New York (1989)], 뿐만 아니라 여기에 인용된 일반적인 배경기술을 참고할 수 있다. 또한, 달리 언급하지 않는 한, 상세하게 구체적으로 기술되지 않은 모든 방법, 단계, 기술 및 조작은 당업자에게 명백한 바와 같이 그 자체로 공지된 방식으로 수행될 수 있고 또한 수행되었다. 예를 들어, 표준 핸드북, 위에서 언급한 일반적인 배경기술 및 그 안에 인용된 다른 참고 문헌을 다시 참조할 수 있다.
본원에서 사용된 "하나 (a 및 an)"라는 용어는 관사의 문법적 대상 중 하나 또는 복수개 (예를 들어, 적어도 하나)를 지칭한다.
본원에서 " 또는"이라는 용어는 문맥상 달리 명시하지 않는 한, " 및/또는"이라는 용어를 의미하도록 사용되고, 상호교환적으로 사용된다.
"약" 및 "대략"은 일반적으로 측정의 성질 또는 정밀도를 고려하여 측정된 양에 대한 허용 오차 정도를 의미한다. 전형적인 오차 정도는 주어진 값 또는 값 범위의 20% (%) 이내, 전형적으로 10% 이내, 보다 전형적으로 5% 이내이다.
"항체 분자" 또는 "항체" (본원에서 동의어로 사용됨)는 척추동물의 혈액 또는 기타 체액에서 발견할 수 있는 감마 글로불린 단백질로서, 박테리아나 바이러스와 같은 이물질을 식별하고 중화시키기 위해 면역계에 의해 사용된다. 이들은 전형적으로 하나의 유닛을 갖는 단량체, 2개의 유닛을 갖는 이량체 또는 5개의 유닛을 갖는 오량체를 형성하기 위해 각각 2개의 큰 중쇄 및 2개의 작은 경쇄를 갖는 기본 구조 단위로 만들어진다. 항체 분자는 비공유 상호작용에 의해 항원으로 알려진 다른 분자 또는 구조에 결합할 수 있다. 이러한 결합은 항체 분자가 높은 친화력으로 특정 구조에만 결합한다는 의미에서 특이하다. 항체 분자에 의해 인식되는 항원의 독특한 부분을 에피토프 또는 항원 결정자라고 한다. 에피토프에 결합하는 항체 분자의 부분은 때로 파라토프 (paratope)라고 불리고 항체의 소위 가변 도메인 또는 가변 영역 (Fv)에 존재한다. 가변 도메인은 프레임워크 영역 (FR's)에 의해 이격된 3개의 소위 상보성 결정 영역 (CDR's)을 포함한다.
본 발명과 관련하여 CDR's에 대한 언급은 Chothia (Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 1987, 196: 901-917)와 Kabat (E.A. Kabat, T.T. Wu, H. Bilofsky, M. Reid-Miller and H. Perry, Sequence of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda (1983))의 정의에 기초한다.
일부 실시양태에서, 항체 분자는 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE의 중쇄 불변 영역; 특히 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 (예를 들어, 인간)의 중쇄 불변 영역으로부터 선택된다. 또 다른 실시양태에서, 항체 분자는 카파 또는 람다 (예를 들어, 인간)의 경쇄 불변 영역으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 갖는다. (예를 들어, Fc 수용체 결합, 항체 당질화, 시스테인 잔기의 수, 이펙터 세포 기능 및/또는 보체 기능의 특성 중 하나 이상을 증가시키거나 감소시키기 위해) 항체의 특성을 변형시키기 위해 불변 영역을 변경, 예를 들어 돌연변이화시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 이펙터 기능을 갖고 보체를 고정시킬 수 있다. 다른 실시양태에서, 항체는 이펙터 세포를 동원하거나 보체를 고정시키지 않는다. 특정 실시양태에서, 항체는 Fc 수용체에 결합하는 능력이 감소되었거나 또는 결합 능력이 없다. 예를 들어, 이는 Fc 수용체에 대한 결합을 지지하지 않는 아이소타입 또는 서브 타입, 단편 또는 다른 돌연변이체일 수 있으며, 예를 들어 이는 돌연변이화되거나 결실된 Fc 수용체 결합 영역을 갖는다.
항체 불변 영역은 일부 실시양태에서 변경된다. 항체 불변 영역을 변경시키는 방법은 당 업계에 공지되어 있다. 기능이 변경된, 예를 들어 세포상의 FcR 또는 보체의 C1 성분과 같이 이펙터 리간드에 대해 변경된 친화도를 가지는 항체는 항체의 불변 부분의 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 잔기로 대체함으로써 생성될 수 있다 (예를 들어, 그 전체가 본원에 참고로 포함되는 EP 388, 151 A1, 미국 특허 제5,624,821호 및 미국 특허 제5,648,260호 참조). 인간 IgG4에서 S228P (EU 명명법, Kabat 명명법으로 S241P)와 같은 항체 구조를 안정화시키는 아미노산 돌연변이 또한 고려된다. 뮤린이나 다른 종에 적용되는 경우, 면역글로불린이 이들 기능을 감소시키거나 제거하는 유사한 유형의 변경이 기술될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "가변 도메인"은 당 업계에 공지되어 있고 이하 각각 "프레임워크 영역 1" 또는 "FR1"; "프레임워크 영역 2" 또는 "FR2"; "프레임워크 영역 3" 또는 "FR3"; 및 "프레임워크 영역 4" 또는 "FR4"로서 후술되는 4개의 "프레임워크 영역"으로 기본적으로 이루어진 항체 분자의 영역을 의미한다 (여기서, 프레임워크 영역은 당 업계에 공지되어 있고 이하 각각 "상보성 결정 영역 1" 또는 "CDR1", "상보성 결정 영역 2" 또는 "CDR2" 및 "상보성 결정 영역 3" 또는 "CDR3"으로서 후술되는 3개의 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"에 의해 차단된다). 따라서, 면역글로불린 가변 도메인의 일반 구조 또는 순서는 다음과 같이 표시할 수 있다: FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4. 항원-결합 부위를 운반함으로써 항원에 대한 항체에 특이성을 부여하는 것은 면역글로불린 가변 도메인(들)이다.
"가변 중 (또는 VH)" 및 "가변 경 (또는 VL)"이란 항체 분자의 중쇄 또는 경쇄의 가변 도메인을 각각 지칭한다.
업계에서는 항체 분자를 추가로 개발하여 의학 및 기술 분야에서 다목적 도구로 만들었다. 따라서, 본 발명과 관련하여, 용어 "항체 분자" 또는 "항체"는 예를 들어, 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄를 포함하는 자연계에서 발견될 수 있는 항체를 포함할 뿐만 아니라, 항원에 대한 결합 특이성 및 항체 분자의 가변 도메인에 대한 구조적 유사성을 갖는 적어도 하나의 파라토프를 포함하는 모든 분자를 포괄한다.
따라서, 본 발명에 따른 항체 분자는 모노클로날 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 항체의 단편, 특히 Fv, Fab, Fab', 또는 F(ab')2 단편, 단일 사슬 항체, 특히 단일 사슬 가변 단편 (scFv), 소형 모듈 면역 약제 (SMIP), 도메인 항체, 나노바디, 디아바디를 포함한다.
모노클로날 항체 (mAb)는 아미노산 서열이 동일한 단일특이적 항체이다. 이들은 골수종 (B 세포 암) 세포와 특이적 항체-생성 B 세포의 융합 클론을 나타내는 하이브리드 세포주 (하이브리도마라고 칭한다)로부터 하이브리도마 기술에 의해 제조할 수 있다 [Kohler G, Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature 1975; 256:495-7]. 대안으로, 모노클로날 항체는 숙주 세포에서 재조합 발현에 의해 제조될 수 있다 [Norderhaug L, Olafsen T, Michaelsen TE, Sandlie I. (May 1997). "Versatile vectors for transient and stable expression of recombinant antibody molecules in mammalian cells.". J Immunol Methods 204 (1): 77-87].
사람에게 적용하는 경우, 마우스와 같은 다른 종으로부터 최초 유래된 항체의 면역원성을 감소시키는 것이 종종 바람직하다. 이것은 키메라 항체의 작제 또는 "인간화"라고 하는 과정에 의해 달성될 수 있다. 본 문맥에서, "키메라 항체"는 상이한 종 (예를 들면, 사람)으로부터 유도된 서열 부분 (예를 들면, 불변 도메인)에 융합된, 한 종 (예를 들면, 마우스)으로부터 유도된 서열 부분 (예를 들면, 가변 도메인)을 포함하는 항체인 것으로 이해된다. "인간화 항체"는 비인간 종으로부터 최초 유도된 가변 도메인을 포함하고, 여기서, 특정 아미노산들은 가변 도메인의 전체 서열이 인간 가변 도메인의 서열과 보다 가깝게 유사하도록 돌연변이화된 항체이다. 항체를 키메라화 및 인간화하는 방법은 본 분야에 잘 알려져 있다 [Billetta R, Lobuglio AF. "Chimeric antibodies". Int Rev Immunol. 1993;10(2-3):165-76; Riechmann L, Clark M, Waldmann H, Winter G (1988). "Reshaping human antibodies for therapy". Nature: 332:323].
또한, 인간 게놈으로부터 유도된 서열을 기초로 항체를 생성하는 기술이 개발되었고, 예로는 파아지 디스플레이 또는 유전자이식 동물의 사용을 들 수 있다 [WO 90/05144; D. Marks, H.R. Hoogenboom, T.P. Bonnert, J. McCafferty, A.D. Griffiths and G. Winter (1991) "By-passing immunisation. Human antibodies from V-gene libraries displayed on phage." J.Mol.Biol., 222, 581-597; Knappik et al., J. Mol. Biol. 296: 57-86, 2000; S. Carmen and L. Jermutus, "Concepts in antibody phage display". Briefings in Functional Genomics and Proteomics 2002 1(2):189-203; Lonberg N, Huszar D. "Human antibodies from transgenic mice". Int Rev Immunol. 1995;13(1):65-93.; Brueggemann M, Taussig MJ. "Production of human antibody repertoires in transgenic mice". Curr Opin Biotechnol. 1997 Aug;8(4):455-8]. 이러한 항체는 본 발명의 맥락에서 "인간 항체"이다.
본 발명에 따른 항체 분자는 또한 항원 결합 성질을 보유하는 분자의 단편, 예를 들면, Fab, Fab' 또는 F(ab')2 단편을 포함한다. 이와 같은 단편은 항체 분자의 단편화에 의해, 예를 들면, 단백질분해성 소화에 의해, 또는 이러한 단편의 재조합 발현에 의해 수득할 수 있다. 예를 들면, 항체 분자 소화는 통상적인 기술의 수단에 의해, 예를 들면, 파파인 또는 펩신을 사용하여 달성할 수 있다 (WO 94/29348 참조). 항체의 파파인은 전형적으로 각각 단일 항원 결합 부위를 갖는 두 개의 동일한 항원 결합 단편, 소위 Fab 단편과 나머지 Fc 단편을 생성한다. 펩신 처리는 F(ab')2를 생성한다. Fab 분자에서, 가변 도메인은 각각 바람직하게는 인간 기원의 면역글로불린 불변 도메인에 융합된다. 따라서, 중쇄 가변 도메인은 CH1 도메인 (소위 Fd 단편)에 융합될 수 있고, 경쇄 가변 도메인은 CL 도메인에 융합될 수 있다. Fab 분자는 숙주 세포에서 각각의 핵산의 재조합 발현에 의해 생성될 수 있다 (하기 참조).
항체 분자의 가변 도메인 또는 이러한 가변 도메인으로부터 유도된 분자를 상이한 분자 상황에 도입하는 다수의 기술이 개발되었다. 이러한 것들도 또한 본 발명에 따른 "항체"로서 고려되어야 한다. 일반적으로, 이들 항체 분자들은 천연 항체 분자에 비하여 크기가 작으며 단일 아미노산 쇄를 포함하거나 다수의 아미노산 쇄로 구성될 수 있다. 예를 들면, 단일쇄 가변 단편(scFv)은 항체 분자의 중쇄와 경쇄의 가변 영역들이 짧은 링커, 보통 세린(S) 또는 글리신(G)과 함께 연결된 융합체이다 [WO 88/01649; WO 91/17271; Huston et al; International Reviews of Immunology, Volume 10, 1993, 195-217]. "단일 도메인 항체" 또는 "나노바디"는 단일 Ig-유사 도메인에서 항원-결합 부위를 갖는다 [WO 94/04678; WO 03/050531, Ward et al., Nature. 1989 Oct 12;341(6242):544-6; Revets et al., Expert Opin Bioi Ther. 5(1): 111-24, 2005]. 동일하거나 상이한 항원에 대해 결합 특이성을 갖는 하나 이상의 단일 도메인 항체는 함께 연결될 수 있다. 디아바디는 2개의 가변 도메인을 포함한 2개의 아미노산 쇄로 구성된 2가 항체 분자이다 [WO 94/13804, Holliger et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 1993 Jul 15;90(14):6444-8]. 항체-유사 분자의 다른 예는 면역글로불린 상과(superfamily) 항체이다 [IgSF; Srinivasan and Roeske, Current Protein Pept. Sci. 2005, 6(2): 185-96]. 상이한 개념에 의해 소위 소형 모듈 면역약제(SMIP)가 제공되었고, 이것은 단일쇄 힌지(hinge)에 연결된 Fv 도메인, 및 불변 도메인 CH1이 결여된 이펙터 도메인을 포함한다 [WO 02/056910].
항체 분자는 항체 분자의 특성에 목적하는 영향을 갖는 다른 분자 실체(entity)에 (융합 단백질로서) 융합되거나 (공유 또는 비공유 결합에 의해) 결합될 수 있다. 예를 들어, 특히 단일쇄 항체 또는 도메인 항체의 경우에, 예를 들면, 혈액과 같은 체액에서의 항체 분자의 약동학적 성질인 안정성을 향상시키는 것이 필요할 수 있다. 이와 관련하여 다수의 기술이 개발되었고, 특히 순환에서 항체 분자들의 반감기를 연장하는 기술이 개발되었으며, 이러한 기술의 예로는 페길화 [WO 98/25971; WO 98/48837; WO 2004081026], 항체 분자를 알부민과 같은 혈청 단백질에 대해 친화력을 갖는 다른 항체 분자에 융합 또는 공유 부착시키는 것 [WO 2004041865; WO 2004003019] 또는 항체 분자를 알부민 또는 트랜스페린과 같은 혈청 단백질의 전부 또는 일부와의 융합 단백질로서 발현시키는 것 [WO 01/79258]이 포함된다.
교환 가능하게 사용될 수 있는 용어 "에피토프" 및 "항원 결정자"는 본 발명의 항체 분자와 같은 항원-결합 분자, 특히 상기 분자의 항원-결합 부위에 의해 인식되는 폴리펩티드와 같은 거대 분자 부분을 지칭한다. 에피토프는 항체 분자에 대한 최소 결합 부위를 정의하며, 따라서 항체 분자의 특이성 표적을 나타낸다.
특정 에피토프, 항원 또는 단백질에 대해 (또는 그의 적어도 일부분, 단편 또는 에피토프에 대해) "친화력을 가지고" 및/또는 "특이성을 가지며", "그와 결합", "그에 결합", "특이적으로 결합" 또는 "그에 특이적으로 결합"할 수 있는 항체 분자는 상기 에피토프, 항원 또는 단백질에 대해 "대한" 또는 "대향한다"고 언급되거나, 또는 그러한 에피토프, 항원 또는 단백질에 대해 "결합하는" 분자이다.
일반적으로, 용어 "특이성"은 특정 항원 결합 분자 또는 항원 결합 단백질 (예컨대 면역글로불린, 항체, 면역글로불린 단일 가변 도메인)이 결합할 수 있는 상이한 타입의 항원 또는 에피토프의 수를 지칭한다. 항원-결합 단백질의 특이성은 그의 친화력 및/또는 결합력에 기초하여 결정될 수 있다. 항원과 항원 결합 단백질의 해리에 대한 평형 상수 (KD)로 표시되는 친화력은 항원 결합 단백질상의 항원 결합 부위와 에피토프 사이의 결합 강도를 측정하기 위한 척도이다; KD 값이 작을수록 에피토프와 항원-결합 분자 사이의 결합 강도가 강해진다 (대안적으로, 친화력은 또한 1/KD인 친화력 상수 (KA)로서 표시될 수 있다). 당업자에게 명백한 바와 같이 (예를 들어, 본원에서의 추가적인 개시에 기초하여), 친화도는 관심있는 특정 항원에 따라 그 자체로 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 결합도는 항원-결합 분자 (본 발명의 항체와 같은)와 관련 항원 사이의 결합 강도의 척도이다. 결합도는 항원 결합 분자상의 에피토프와 그것의 항원 결합 부위 사이의 친화력 및 항원 결합 분자 상에 존재하는 관련 결합 부위의 수 모두에 관련된다.
전형적으로, 항원-결합 단백질 (본 발명의 항체 분자와 같은)은 10E-5 내지 10E-14 몰/리터 (M) 이하, 바람직하게는 10E-7 내지 10E-14 몰/리터 (M) 이하, 보다 바람직하게는 10E-8 내지 10E-14 몰/리터, 보다 더 바람직하게는 10E-11 내지 10E-13의 해리 상수 (KD) (예를 들어 당 업계에 공지되어 있는 Kinexa 분석에서 측정된 경우), 및/또는 적어도 10E7 ME-1, 바람직하게는 적어도 10E8 ME-1, 보다 바람직하게는 적어도 10E9 ME-1, 예컨대 적어도 10E11 ME-1의 결합 상수 (KA)로 결합할 것이다. 10E-4 M보다 큰 모든 KD 값은 일반적으로 비특이적 결합을 나타내는 것으로 간주된다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 500 nM 미만, 바람직하게는 200 nM 미만, 보다 바람직하게는 10 nM 미만, 예를 들어 500 pM 미만의 KD로 원하는 항원에 결합할 것이다. 항원-결합 단백질의 항원 또는 에피토프에 대한 특이적 결합은 예를 들어 본원에 기술된 분석, 스캐차드 (Scatchard) 분석 및/또는 방사 면역 측정법 (RIA), 효소 면역 분석법 (EIA) 및 샌드위치 경쟁 분석법과 같은 경쟁적 결합 분석, 및 업계에 그 자체로 공지된 그의 다양한 변형을 비롯해, 그 자체로 알려진 임의의 적합한 방법으로 결정될 수 있다.
항체 분자의 결합 친화력은 친화력 성숙으로 알려진 방법 [Marks et al., 1992, Biotechnology 10:779-783; Barbas, et al., 1994, Proc. Nat. Acad. Sci, USA 91:3809-3813; Shier et al., 1995, Gene 169:147-155]에 의해 증가시킬 수 있다. 따라서, 친화력 성숙 항체 또한 본 발명에 포함된다.
"경쟁" 또는 "교차 경쟁"이라는 용어는 항체 분자, 예를 들어, 본 발명의 항-PD1 또는 LAG3 항체 분자의 표적, 예를 들어, 인간 PD1 또는 LAG3에 대한 결합을 방해하는 항체 분자의 능력을 지칭하기 위해 본원에서 상호 교환적으로 사용된다. 결합에 대한 방해는 직접적 또는 간접적일 수 있다 (예를 들어, 항체 분자 또는 표적의 알로스테릭 조절을 통해). 항체 분자가 다른 항체 분자의 표적에 대한 결합을 방해할 수 있는 정도, 따라서 경쟁할 수 있는지의 여부는 경쟁 결합 분석, 예를 들어 FACS 분석, ELISA 또는 BIACORE 분석을 시용하여 결정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 경쟁 결합 분석은 정량적 경쟁 분석이다. 일부 실시양태에서, 제1 항-PD1 또는 LAG3 항체 분자는 제1 항체 분자의 표적에 대한 결합이 경쟁 결합 분석 (예를 들어, 본원에 기재된 경쟁 분석)에서 10% 이상, 예를 들어 20% 이상, 30% 이상, 40% 이상, 50% 이상, 55% 이상, 60% 이상, 65% 이상, 70% 이상, 75% 이상, 80% 이상, 85% 이상, 90% 이상, 95% 이상, 98% 이상, 99% 이상 감소되는 경우 제2 항-PD1 또는 LAG3 항체 분자와 표적에 대한 결합에 대해 경쟁한다고 언급된다.
본원에 개시된 조성물 및 방법은 특정된 서열을 가지거나, 또는 특정된 서열과 실질적으로 동일하거나 유사한 서열, 예를 들어, 특정된 서열과 적어도 85%, 90%, 95% 이상 동일한 서열을 갖는 폴리펩티드 및 핵산을 포함한다. 아미노산 서열과 관련하여, 용어 "실질적으로 동일한"은 제1 및 제2 아미노산 서열이 공통 구조적 도메인 및/또는 공통 기능 활성을 가질 수 있도록 제2 아미노산 서열에 정렬된 아미노산 잔기와 i) 동일하거나 또는 ii) 그에 보존적 치환인 충분하거나 최소 수의 아미노산 잔기를 함유하는 제1 아미노산을 지칭하기 위해 본원에서 사용된다. 예를 들어, 기준 서열, 예를 들어 아미노산 서열은 본원에 제공된 서열과 적어도 약 85%, 90%. 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가지는 공통 구조 도메인을 함유한다. 뉴클레오티드 서열과 관련하여, 용어 "실질적으로 동일한"은 제1 및 제2 뉴클레오티드 서열이 공통 기능 활성을 갖는 폴리펩티드를 코딩하거나 공통 구조적 폴리펩티드 도메인 또는 공통 기능적 폴리펩티드 활성을 코딩하도록 제2 핵산 서열에서 정렬된 뉴클레오티드와 동일한 충분하거나 최소 수의 뉴클레오티드를 함유하는 제1 핵산 서열을 지칭하는데 사용된다. 예를 들어, 뉴클레오티드 서열은 기준 서열에 대해 적어도 약 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 가진다.
2 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열의 문맥에서 "동일" 또는 "퍼센트 동일성"이란 용어는 비교하였을 때 동일하고 최대한 대응되도록 정렬된, 특정된 퍼센트의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 가지거나 동일한 2 이상의 서열 또는 부분 서열들을 지칭한다. 퍼센트 동일성을 결정하기 위해, 서열은 최적의 비교 목적을 위해 정렬된다 (예를 들어, 제2 아미노 또는 핵산 서열과의 최적 정렬을 위해 제1 아미노산의 서열 또는 핵산 서열에 갭이 도입될 수 있다). 이어서, 상응하는 아미노산 위치 또는 뉴클레오티드 위치의 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드를 비교한다. 제1 서열의 위치가 제2 서열의 상응하는 위치와 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드에 의해 점유된 경우, 분자는 그 위치에서 동일하다. 두 서열 간의 퍼센트 동일성은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다 (즉, % 동일성 = 동일한 위치의 수/전체 위치의 수 (예를 들어, 중첩 위치)×100). 일부 실시양태에서, 비교되는 2개의 서열은 적합하다면 갭이 서열 내에 도입된 후 동일한 길이이다 (예를 들어, 비교되는 서열을 넘어서 연장되는 추가 서열을 배제한다). 예를 들어, 가변 영역 서열이 비교될 때, 선도 및/또는 불변 도메인 서열은 고려되지 않는다. 두 서열 간의 서열 비교를 위해, "상응하는" CDR은 양 서열에서 동일한 위치에 있는 CDR을 의미한다 (예를 들어, 각 서열의 CDR-H1).
두 서열 간의 % 동일성 또는 % 유사성의 결정은 수학적 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다. 두 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 바람직한 비제한적인 예는 [Karlin and Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268, modified as in Karlin and Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]이다. 이러한 알고리즘은 [Altschul et al., 1990, J. Mol. Biol. 215:403-410]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합되어 있다. 관심있는 단백질을 코딩하는 핵산에 상동인 뉴클레오티드 서열을 얻기 위해 NBLAST 프로그램, score = 100, wordlength = 12로 BLAST 뉴클레오티드 검색을 수행할 수 있다. 관심있는 단백질과 상동인 아미노산 서열을 얻기 위해 XBLAST 프로그램, score = 50, wordlength = 3으로 BLAST 단백질 검색을 수행할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭 정렬을 얻기 위해, Gapped BLAST를 [Altschul et al., 1997, Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]에 기재된 바와 같이 이용할 수 있다. 대안적으로, PSI-Blast를 사용하여 분자 간의 거리 관계를 검출하는 반복 검색을 수행할 수 있다 (상동). BLAST, Gapped BLAST 및 PSI-Blast 프로그램을 사용하는 경우, 각 프로그램 (예: XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 파라미터가 이용될 수 있다. 서열의 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 또 다른 바람직한 비제한적 예는 Myers and Miller, CABIOS (1989)의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램 (버전 2.0)에 통합된다. 아미노산 서열을 비교하기 위한 ALIGN 프로그램을 이용하는 경우, PAM120 중량 잔기 표, 갭 길이 패널티 12 및 갭 패널티 4가 사용될 수 있다. 서열 분석을 위한 추가적인 알고리즘은 당 업계에 공지되어 있으며 [Torellis and Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5]에 기술된 바와 같은 ADVANCE 및 ADAM; 및 [Pearson and Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:2444-8]에 기술된 바와 같은 FASTA를 포함한다. FASTA 내에서, ktup은 검색의 민감도와 속도를 설정하는 제어 옵션이다. ktup = 2인 경우, 비교되는 두 서열의 유사한 영역은 정렬된 잔기의 쌍을 관찰함으로써 발견된다; ktup = 1이면 단일 정렬된 아미노산을 조사한다. ktup은 단백질 서열의 경우 2 또는 1로, DNA 서열의 경우 1에서 6까지 설정할 수 있다. ktup을 지정하지 않으면 디폴트값은 단백질의 경우 2이고 DNA의 경우 6이다. 대안적으로, 단백질 서열 정렬은 [Higgins et al., 1996, Methods Enzymol. 266:383-402]에 기술된 바와 같은 CLUSTAL W 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다.
아미노산 잔기는 당 업계에 일반적으로 공지되고 합의된 표준 3 문자 또는 1 문자 아미노산 코드에 따라 표시될 것이다. 2개의 아미노산 서열을 비교할 때, 용어 "아미노산 차이"는 제2 서열과 비교하여 기준 서열의 위치에서 지시된 수의 아미노산 잔기의 삽입, 결실 또는 치환을 의미한다. 치환(들)의 경우, 그러한 치환(들)은 바람직하게는 보존적 아미노산 치환(들)일 것이며, 이는 아미노산 잔기가 유사한 화학 구조의 다른 아미노산 잔기로 대체되고 폴리펩티드의 기능, 활성 또는 다른 생물학적 성질에 관해 영향을 거의 또는 실질적으로 갖지 않음을 의미한다. 이러한 보존적 아미노산 치환은 당 분야에, 예를 들어 W01998/49185호로부터 잘 알려져 있으며, 여기서 보존적 아미노산 치환은 바람직하게는 하기 그룹 (i) 내지 (v) 내의 하나의 아미노산이 동일한 그룹 내의 다른 아미노산 잔기에 의해 치환된 치환이다 (i) 작은 지방족, 비극성 또는 약간 극성인 잔기: Ala, Ser, Thr, Pro 및 Gly; (ii) 극성의 음으로 하전된 잔기 및 그들의 (비하전된) 아미드: Asp, Asn, Glu 및 Gin; (iii) 극성의 양으로 하전된 잔기: His, Arg 및 Lys; (iv) 큰 지방족 비극성 잔기: Met, Leu, lie, Val 및 Cys; 및 (v) 방향족 잔기: Phe, Tyr 및 Trp. 특히 바람직한 보존적 아미노산 치환은 다음과 같다: Ala에서 Gly 또는 Ser로; Arg에서 Lys로; Asn에서 Gln 또는 His로; Asp에서 Glu로; Cys에서 Ser로; Gln에서 Asn으로; Glu에서 Asp로; Gly에서 Ala 또는 Pro로; His에서 Asn 또는 Gln으로; Iel에서 Leu 또는 Val로; Leu에서 lle 또는 Val로; Lys에서 Arg, Gln 또는 Glu로; Met에서 Leu, Tyr 또는 lle로; Phe에서 Met, Leu 또는 Tyr로; Ser에서 Thr로; Thr에서 Ser로; Trp에서 Tyr로; Tyr에서 Trp 또는 Phe로; Val에서 Ile 또는 Leu로.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"(단일 사슬인 경우)은 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
용어 "핵산", "핵산 서열", "뉴클레오티드 서열" 또는 "폴리뉴클레오티드 서열" 및 "폴리뉴클레오티드"는 상호 교환적으로 사용된다.
본원에 사용된 용어 "단리된 (isolated)"은 원래 또는 자연 환경 (예를 들어, 자연 발생인 경우 천연 환경)으로부터 제거되는 물질을 지칭한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 존재하는 자연 발생 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리된 것이 아니지만, 인간이 개입하여 자연계에서 공존하는 물질의 일부 또는 전부로부터 분리된 동일한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 단리된 것이다. 그러한 폴리뉴클레오티드는 벡터의 일부일 수 있고/있거나 그러한 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드는 조성물의 일부일 수 있고, 그러한 벡터 또는 조성물은 자연계에서 발견되는 환경의 일부가 아니라는 점에서 여전히 단리된 것일 수 있다.
바람직하게는, 핵산은 이 핵산 분자가 적어도 하나의 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 발현 벡터의 일부일 것이며, 여기서 조절 서열은 프로모터, 인핸서 또는 종결 서열, 가장 바람직하게는 이종 프로모터, 인핸서 또는 종결 서열일 수 있다.
발명의 상세한 설명
항-PD1 항체에 관한 본 발명의 실시양태
상기에서 상세히 설명한 바와 같이, PD1은 T-세포 활성 및 따라서 면역계 활성을 조절하는데 중요한 역할을 한다. 상이한 광범위 암 환경에서 길항성 항-PD1 항체 분자가 T 세포 활성을 증가시켜 면역계를 활성화시킴으로써 종양을 공격하게 되고 이에 따라 암을 치료할 수 있는 것으로 나타났다.
그러나, 기존의 항-PD1 항체 분자는 부작용과 관련된 문제를 겪고 있으며 상당 비율의 환자가 치료에 반응하지 않는다. 따라서, 종래 기술과 비교할 때 개선된 치료 지수를 갖는 다른 항-PD1 항체 분자를 동정할 필요가 있다. 이러한 분자는 단일 요법에서, 그리고 추가적인 치료제, 특히 T-세포 활성의 다른 조절제와 함께 사용될 수 있다.
이러한 배경으로, 본 발명자들은 추가의 항-PD1 항체를 생성하고자 하였다. PD1에 대한 선조 뮤린 항체 (77E11이라 칭함)로부터 시작하여, 본 발명의 대상 항-PD1 항체 분자인 5개의 인간화된 유도체를 제조하였다. 본 발명의 항-PD1 항체 분자는 PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5로 칭해진다.
시험관 내 T-세포 활성화 검정 (실시예 4에서 추가로 기술됨)을 사용하여 본 발명의 대표적인 항-PD1 항체의 기능적 특성을 조사하였다. 실시예 12 및 도 8에서 알 수 있는 바와 같이, 시험된 항체는 항-LAG3 항체와 조합하였을 때 기준 항-PD1/LAG3 항체 조합물과 비교하여 더 높은 수준으로 T-세포 활성화를 유도할 수 있었고, 이는 기준 항-PD1 항체보다 더 바람직한 치료 활성을 가짐을 제시한다.
인식할 수 있는 바와 같이, 선행 기술의 기준 항-PD1 항체보다 T-세포 활성화를 보다 효과적으로 유도하는 본 발명의 항-PD1 항체의 이러한 놀라운 능력은 선행 기술의 기준 항-PD1 항체보다 더 낮은 투여량에서 암을 치료할 수 있고 따라서 원치 않는 부작용을 덜 나타내는 치료적 응용을 가능케 할 수 있음을 시사한다.
본 발명자들은 상기 데이터에 고무되어, 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 다양한 다른 기능적 특성을 추가로 조사하였다. 이 평가에 생체 내 약동학적 성질의 결정이 포함되었다. 실시예 7에 요약되고 도 5에 도시된 바와 같이, 사이노몰거스 원숭이에서 측정되었을 때, 1 mg/kg의 정맥 내 용량에서 본 발명의 항-PD1 항체의 실시예에서 관찰된 종말 제거 반감기는 선행 기술의 항-PD1 항체보다 1.5 내지 2배 더 높았다.
당 업계에 공지된 항-PD1 항체와 대조적으로, 이는 본 발명의 항-PD1 항체가 11일의 혈청 반감기를 갖는다는 것을 제시한다. 이것은 이하 실시예에서 알 수 있는 바와 같이, 전형적으로 0.3-3 mg/kg의 용량 범위에서 4 내지 6일의 반감기를 갖는 공지된 기준 항-PD1 항체 분자와 대조적이다. 청구된 항체 분자의 이러한 놀라운 특징은 환자가 선행 기술의 것으로 처리되는 것보다 덜 빈번하게 본 발명의 항체로 처리되는 것을 허용할 수 있으며, 이것은 감소된 투여 빈도의 형태 또는 사용되는 항체의 감소된 양으로서 공급될 항체 양의 감소를 의미할 수 있다. 항-PD1 항체 분자가 상기에서 논의된 바와 같이 환자에게 원하지 않는 부작용을 유도할 수 있다는 것을 감안하면, 본 발명의 항-PD1 항체는 선행 기술에 비해 유의적이고 놀라운 임상 이점을 가질 수 있다.
따라서, 본 발명의 제1 측면은
(a) 서열번호 1 (hcCDR1), 서열번호 2 (hcCDR2) 및 서열번호 3 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 4 (lcCDR1), 서열번호 5 (lcCDR2) 및 서열번호 6 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR; 또는,
(b) 서열번호 7 (hcCDR1), 서열번호 8 (hcCDR2) 및 서열번호 9 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 10 (lcCDR), 서열번호 11 (lcCDR2) 및 서열번호 12 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR; 또는,
(c) 서열번호 13 (hcCDR1), 서열번호 14 (hcCDR2) 및 서열번호 15 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 16 (lcCDR1), 서열번호 17 (lcCDR2) 및 서열번호 18 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR;
을 포함하는 항-PD1 항체 분자를 제공한다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 항-PD1 항체 분자는 PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5로 칭해진다. 본 발명의 특정 항-PD1 항체 분자에 대한 개별 아미노산 서열의 확인을 용이하게 하는 서열 표가 본원에 제공된다. 이것은 실시예 2의 표 1에 요약되어 있다.
본원에 기재된 바와 같은 CDR 서열에 추가하여, 본 발명의 항체 분자는 면역글로불린 프레임워크 영역 (FR) 서열을 포함한다. 이들 서열은 바람직하게는 인간에서 면역원성이 아니며, 따라서 바람직하게는 인간 또는 인간화된 FR 서열이다. 적합한 인간 또는 인간화된 FR 서열은 당 업계에 공지되어 있다. 특히 바람직한 FR 서열은 완전한 항체 분자 및 이로써 CDR 서열뿐만 아니라 FR 서열을 개시하는, 본원에 나타낸 실시양태로부터 취할 수 있다.
본 발명의 제1 측면의 항체 분자를 제조하는 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며, 당업자는 본 발명의 제1 측면의 특징을 갖는 항체 분자를 용이하게 제조할 수 있다. 그러한 방법의 예가 아래에 제공된다.
IgG1 또는 IgG4 타입의 것과 같은 2개의 완전한 중쇄 및 2개의 완전한 경쇄를 포함하는 항체 생산에 대해 [Norderhaug et al., J Immunol Methods 1997, 204 (1): 77-87; Kipriyanow and Le Gall, Molecular Biotechnology 26: 39-60, 2004; Shukla et al., 2007, J. Chromatography B, 848(1): 28-39]이 참조된다.
기능적 scFv 분자를 산출하기 위해 숙주 세포 (E. coli, Pichia pastoris, 또는 포유동물 세포주, 예를 들면 CHO 또는 NS0)에서 scFv 작제물을 코딩하는 핵산의 재조합 발현에 의해 scFv 항체를 제조하는 방법이 또한 공지되었다 [Rippmann et al., Applied and Environmental Microbiology 1998, 64(12): 4862-4869; Yamawaki et al., J. Biosci. Bioeng. 2007, 104(5): 403-407; Sonoda et al., Protein Expr. Purif. 2010, 70(2): 248-253].
오해를 피하기 위해, 본 발명의 제1 측면에 대해 이하에 열거된 각 특정 실시양태들은 또한 본 발명의 독립적인 측면으로 간주될 수 있다.
본 발명의 제1 측면의 바람직한 실시양태는 상기 항체 분자가 인간화 항체 분자인 것이다.
본 발명의 제1 측면의 추가의 바람직한 측면은 상기 항체 분자가 모노클로날 항체, Fab, F(ab')2, Fv 또는 scFv인 것이다.
용어 "인간화된", "Fab", "F(ab')2", "Fv" 및 "scFv"는 당 업계에 잘 공지되어 있으며 본 명세서의 정의 섹션에서 더 논의된다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 및 IgE 불변 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 갖는다. 바람직하게는 중쇄 불변 영역은 S241P 돌연변이를 갖는 IgG4이다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 카파 또는 람다인 경쇄 불변 영역을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 19, 21, 23, 25 및 27 중 어느 하나와 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다. 바람직하게는 상기 항체 분자는 서열번호 19, 21, 23, 25 및 27 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 20, 22, 24, 26 및 28 중 어느 하나와 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다. 바람직하게는 상기 항체 분자는 빛 서열번호 20, 22, 24, 26 및 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
아미노산 서열 동일성을 계산하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며 본 명세서의 정의 섹션에서 더 논의된다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
상기 모든 실시양태에 있어서, "포함하는"이라는 용어를 사용함으로써, 각각의 도메인 또는 분자가 지시된 바와 같은 아미노산 서열로 "구성되는" 실시양태를 또한 포함하는 것으로 이해해야 할 것이다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 10 nM 미만의 해리 상수 (KD)로 인간 PD1에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 높은 친화력으로 인간 PD1 및 사이 노몰거스 원숭이 PD1에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 높은 친화도는 SPR에 의해 측정되어 10 nM 미만, 예를 들어 9, 8, 7, 6 또는 그 아래의 KD를 지칭한다. SPR을 사용하여 KD를 결정하기 위한 프로토콜은 이하 실시예에서 제공된다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 마우스 PD1에 결합하지 않는다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 인간 PD1과 인간 PD-L1/L2의 결합을 감소시킬 수 있다. 인간 PD1과 인간 PD-L1/L2의 결합을 결정하기 위한 분석은 이하 실시예에서 제공된다.
일부 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 10 nM 미만, 9, 8, 7, 6, 5 또는 4 nM 이하의 IC90으로 PD1에 대한 리간드 PD-L1 및 PD-L2의 결합을 억제할 수 있다. IC90을 결정하기 위한 프로토콜은 이하 실시예에서 제공된다.
바람직한 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 항원 특이적 T 세포 반응을 증강시킬 수 있다. 항원-특이적 T 세포 반응을 결정하기 위한 분석은 실시예 4에서 제공된다.
본 발명의 추가 측면은 본 발명의 제1 측면 중 어느 하나의 항-PD1 항체 분자의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 단리된 핵산 분자를 제공한다.
바람직하게는, 핵산 분자는 서열번호 19, 21, 23, 25 또는 27의 중쇄 가변 도메인을 각각 코딩하는 서열번호 71, 73, 75, 77 또는 79 의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 바람직하게는, 핵산 분자는 서열번호 20, 22, 24, 26 또는 28의 경쇄 가변 도메인을 각각 코딩하는 서열번호 72, 74, 76, 78 또는 80의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 함유하는 발현 벡터를 제공한다. 바람직하게는, 발현 벡터는 서열번호 71 및/또는 서열번호 72의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 73 및/또는 서열번호 74의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 75 및/또는 서열번호 76의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 77 및/또는 서열번호 78의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 79 및/또는 서열번호 80의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 함유한다.
바람직하게는, 발현 벡터는 또한 각각 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 핵산 분자, 바람직하게는 DNA 분자에 연결된 중쇄의 불변 도메인 및/또는 경쇄의 불변 도메인을 코딩하는 핵산 분자, 바람직하게는 DNA 분자를 포함한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 두개의 발현 벡터를 사용할 수 있는데, 그 중 하나는 중쇄의 발현을 위한 것이고 다른 하나는 경쇄의 발현을 위한 것으로서, 두 발현 벡터는 재조합 단백질 발현을 위해 숙주 세포 내로 형질감염될 수 있다.
바람직하게는, 발현 벡터는 적어도 하나의 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 상기 핵산 분자 또는 핵산 분자들을 포함하는 벡터일 것이며, 상기 조절 서열은 프로모터, 인핸서 또는 종결 서열, 가장 바람직하게는 이종 프로모터, 인핸서, 또는 종결 서열일 수 있다.
본 발명의 핵산은 본원에서 주어진 본 발명의 항체에 대한 아미노산 서열에 대한 정보에 기초하여 그 자체로 공지된 방식으로 (예를 들어, 자동화된 DNA 합성 및/또는 재조합 DNA 기술에 의해) 제조되거나 수득될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 중쇄를 코딩하는 발현 벡터 및 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 경쇄를 코딩하는 발현 벡터를 갖는 숙주 세포에 관한 것이다.
특히 바람직한 실시양태에 따라, 상기 숙주 세포는 포유동물 세포와 같은 진핵 세포이다. 또 다른 실시양태에서, 그러한 숙주 세포는 박테리아 세포이다. 다른 유용한 세포는 효모 세포 또는 다른 진균 세포이다.
적합한 포유동물 세포는 예를 들어 CHO 세포, BHK 세포, HeLa 세포, COS 세포 등을 포함한다. 그러나, 양서 세포, 곤충 세포, 식물 세포 및 이종 단백질의 발현을 위해 당 업계에서 사용되는 임의의 다른 세포가 또한 사용될 수 있다.
항-LAG3 항체 분자 및 항-PD1 항체와의 조합에 관한 본 발명의 실시양태
상기에서 설명한 바와 같이, PD1은 T-세포 활성 및 따라서 면역계 활성을 조절하는데 중요한 역할을 한다. 상이한 광범위 암 환경에서 길항성 항-PD1 항체 분자가 T 세포 활성을 증가시켜 면역계를 활성화시킴으로써 종양을 공격하고 이에 따라 암을 치료할 수 있는 것으로 나타났다.
길항성 항-PD1 항체와 추가 면역 세포 체크포인트 억제제를 표적으로 하는 항체 분자의 조합은 길항성 항-PD1 항체의 항암 특성을 강화시킬 수 있다는 것이 또한 밝혀졌다. 그러한 체크포인트 억제제 중 하나가 LAG3으로 불린다.
PD1과 마찬가지로, LAG3는 T 세포 활성을 매개하는데 역할을 하는 것으로 보인다. 또한, PD1 경로 및 LAG3의 이중 차단이 분자 단독을 차단하는 것보다 항-종양 면역에 더 효과적이라는 것이 당 업계에 공지되어 있다.
이러한 배경으로, 본 발명자들은 단독으로 또는 본 발명의 항-PD1 항체 분자와 조합하여 사용될 수 있는 추가의 항-LAG3 항체 분자를 생성하고자 하였다. LAG3에 대한 전구 뮤린 항체 (496G6으로 명명됨)로 시작하여, 본 발명의 대상 항-LAG3 항체 분자인 5개의 인간화된 유도체를 제조하였다. 본 발명의 항-LAG3 항체 분자는 LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4 및 LAG3-5로 지칭된다.
시험관 내 T-세포 활성화 검정 (실시예 12에서 추가로 기술됨)을 사용하여 본 발명의 대표적인 항-LAG3 항체 분자의 기능적 특성을 조사하였다. 실시예 12 및 도 8에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자와 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 조합은 놀랍게도 당 업계에 공지된 기준 항-PD1/LAG3 항체 조합보다 우수하다.
인식할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자와 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 조합의 이러한 우월성은 이들이 선행 기술의 항체 치료제보다 낮은 투여량 수준에서 암을 치료할 수 있고 따라서 원치 않는 부작용을 덜 나타내는 치료적 응용을 가능케 할 수 있음을 시사한다.
항-PD1 및 항-LAG3 항체 분자가 상기 논의한 바와 같이 환자에서 바람직하지 않은 부작용을 유도할 수 있음을 감안한다면, 본 발명의 항-PD1 항체 및 항-LAG3 항체는 낮은 투여량 및/또는 덜 빈번한 투여 체제를 사용함으로써 선행 기술에 비해 유의적이고 놀라운 임상적 이점을 가질 수 있다.
본 발명자들은 상기 데이터에 고무되어, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 다양한 다른 기능적 특성을 추가로 조사하였다. 이 평가에 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 실시예에 의해 결합된 에피토프의 결정이 포함되었다. 실시예 11에서 알 수 있는 바와 같이, 본 발명자들은 본 발명의 항-LAG3 항체 분자가 인간 LAG-3, LLRRAGVT (서열번호 111) 및/또는 YRAAVHLRDRA (서열번호 112)의 두 상이한 영역에 결합할 수 있다고 결정하였다.
발명자들이 아는 한, 공지된 선행 기술의 항-LAG3 항체는 본 발명의 항-LAG3 항체 분자와 동일한 항원 결정자 결합 프로파일을 갖지 않는다. 어떤 특정 이론에 얽매임이 없이, 본 발명자들은 선행 기술 분자와 비교할 때 본 발명의 항-LAG3 항체 분자와 본 발명의 항-PD1 항체의 조합의 놀라운 개선된 효과는 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 에피토프 결합 프로파일에 기인할 수 있다고 추측하고 있다.
따라서, 본 발명의 또 다른 측면은 아미노산 서열 아미노산 서열 LLRRAGVT (서열번호 111) 및/또는 YRAAVHLRDRA (서열번호 112)를 포함하는 인간 LAG3의 에피토프에 결합하는 단리된 항-LAG3 항체 분자를 제공한다. 이러한 분자는 본원에서 "본 발명의 항-LAG3 항체 분자"로서 칭해진다.
본 발명의 에피토프 결합 특성을 갖는 항-LAG3 항체 분자를 제조하는 방법은 당 업계에 익히 공지되었다.
항체 및 항체 단편을 생성하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 항체는 항체 분자의 생체 내 생산의 유도, 면역글로불린 라이브러리의 스크리닝 (Orlandi et al, 1989. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 86:3833-3837; Winter et al 1991, Nature 349:293-299) 또는 배양물에서 세포주에 의한 모노클로날 항체 분자의 생성을 이용하는 몇몇 방법 중 어느 한 방법으로 생성할 수 있다. 이들은 하이브리도마 기술, 인간 B-세포 하이브리도마 기술, 및 엡스타인-바 바이러스 (EBV)-하이브리도마 기술을 포함하나 이에 한정되지 않는다 (Kohler et al 1975. Nature 256:4950497; Kozbor et al 1985. J. Immunol. Methods 81: 31-42; Cote et al 1983. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:2026-2030; Cole et al 1984. Mol. Cell. Biol. 62:109-120).
이들 방법을 사용하여 당업자가 LAG3에 대해 필요한 특이성을 갖는 결합 부위를 가지는 항체를 제조하는 것은 일상적인 것이다. 이어 후보 항체 분자를 본 발명의 항-LAG3 항체가 요구하는 것과 동일한 에피토프 서열에 결합하는지를 결정하기 위해 에피토프 맵핑을 사용하여 스크리닝할 수 있다. 이러한 에피토프 맵핑 방법은 당 업계에 잘 알려져 있고 당업자에 의해 용이하게 채택될 수 있다. 또한, 이러한 방법론의 예가 본 명세서의 실시예 11에 제공된다.
오해를 피하기 위해, 본 발명의 항-LAG3 항체에 대해 이하에 열거된 각 특정 실시양태들은 또한 본 발명의 독립적인 측면으로 간주될 수 있다.
본 발명의 제1 측면의 바람직한 실시양태는 상기 항체 분자가 인간화 항체 분자인 것이다.
추가의 바람직한 실시양태는 상기 항체 분자가 모노클로날 항체, Fab, F(ab')2, Fv 또는 scFv인 것이다.
용어 "인간화된", "Fab", "F(ab')2", "Fv" 및 "scFv"는 당 업계에 잘 알려져 있으며 본 명세서의 정의 섹션에서 더 논의된다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 및 IgE 불변 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 갖는다. 바람직하게는 중쇄 불변 영역은 S241P 돌연변이를 갖는 IgG4이다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 카파 또는 람다인 경쇄 불변 영역을 갖는다.
추가의 바람직한 실시양태는 상기 항-LAG3 항체 분자가
(a) 서열번호 39 (hcCDR1), 서열번호 40 (hcCDR2) 및 서열번호 41 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 42 (lcCDR1), 서열번호 43 (lcCDR2) 및 서열번호 44 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR; 또는
(b) 서열번호 45 (hcCDR1), 서열번호 46 (hcCDR2) 및 서열번호 47 (hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 48 (lcCDR1), 서열번호 49 (lcCDR2) 및 서열번호 50 (lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR을 포함하는 것이다.
상기한 바와 같이, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자는 LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4 및 LAG3-5로 칭해진다. 본 발명의 특정 항-LAG3 항체 분자에 대한 개별 아미노산 서열의 확인을 용이하게 하는 서열 표가 본원에 제공된다. 이것은 실시예 9의 표 6에 요약되어 있다.
본 발명의 항-LAG3 항체 분자를 제조하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며, 당업자는 항체 분자를 용이하게 제조할 수 있다. 그러한 방법의 예는 본 발명의 제1 측면과 관련하여 상기에 제공되었다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 51, 53, 55, 57 및 59 중 어느 하나와 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다. 바람직하게는 상기 항체 분자는 서열번호 51, 53, 55, 57 및 59 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 52, 54, 56, 58 및 60 중 어느 하나와 적어도 85% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다. 바람직하게는 상기 항체 분자는 서열번호 52, 54, 56, 58 및 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
아미노산 서열 동일성을 계산하는 방법은 당 업계에 잘 알려져 있으며 본 명세서의 정의 섹션에서 더 논의된다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체는 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는다.
상기 모든 실시양태에 있어서, "포함하는"이라는 용어를 사용함으로써, 각각의 분자 또는 도메인이 지시된 바와 같은 아미노산 서열로 구성되는 실시양태를 또한 포함하고자 한다.
바람직한 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 1 nM 미만의 해리 상수 (KD)로 인간 LAG3에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 인간 LAG3 및 사이노몰거스 원숭이 LAG3에 고친화력으로 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 높은 친화도는 0.5 nM 미만, 예를 들어 0.4, 0.3, 0.2, 0.1, 0.09, 0.08, 0.07 또는 그 아래의 KD를 지칭한다. SPR을 사용하여 KD를 결정하기 위한 프로토콜은 이하 실시예에서 제공된다.
추가의 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 마우스 LAG3에 결합하지 않는다.
추가의 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 하기 특성 중 적어도 하나를 가질 수 있다: (i) 사이노몰거스 원숭이 LAG3에 결합; (ii) 뮤린 LAG3에 대한 결합의 결여; (iii) LAG3의 MHC II에 대한 결합 억제; 및 (iv) 면역 반응 자극.
본 발명의 추가의 측면은 의약에 사용하기 위한 본 발명의 항-LAG3 항체 분자를 제공한다.
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인을 코딩하는 단리된 핵산 분자를 제공한다. 바람직하게는, 핵산 분자는 서열번호 51, 53, 55, 57 또는 59의 중쇄 가변 도메인을 각각 코딩하는 서열번호 91, 93, 95, 97 또는 99의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 바람직하게는, 핵산 분자는 서열번호 52, 54, 56, 58 또는 60의 경쇄 가변 도메인을 각각 코딩하는 서열번호 92, 94, 96, 98 또는 100의 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 함유하는 발현 벡터를 제공한다. 바람직하게는 발현 벡터는 서열번호 101 및/또는 서열번호 102의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 103 및/또는 서열번호 104의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 105 및/또는 서열번호 106의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 107 및/또는 서열번호 108의 뉴클레오티드 서열을 포함하거나, 서열번호 109 및/또는 서열번호 110의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 DNA 분자를 함유한다.
특히 바람직한 실시양태에서, 두개의 발현 벡터를 사용할 수 있는데, 그 중 하나는 중쇄의 발현을 위한 것이고 다른 하나는 경쇄의 발현을 위한 것으로서, 두 발현 벡터는 재조합 단백질 발현을 위해 숙주 세포 내로 형질감염될 수 있다.
바람직하게는, 발현 벡터는 적어도 하나의 조절 서열에 작동 가능하게 연결된 상기 핵산 분자를 포함하는 벡터일 것이며, 상기 조절 서열은 프로모터, 인핸서 또는 종결 서열, 가장 바람직하게는 이종 프로모터, 인핸서, 또는 종결 서열일 수 있다.
본 발명의 핵산은 본 발명의 항-PD1 항체와 관련하여 추가로 상술된 바와 같이, 본원에서 주어진 본 발명의 항체에 대한 아미노산 서열에 대한 정보에 기초하여 그 자체로 공지된 방식으로 (예를 들어, 자동화 DNA 합성 및/또는 재조합 DNA 기술에 의해) 제조되거나 수득될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 중쇄를 코딩하는 발현 벡터 및 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 경쇄를 코딩하는 발현 벡터를 갖는 숙주 세포에 관한 것이다.
특히 바람직한 실시양태에 따라, 상기 숙주 세포는 포유동물 세포와 같은 진핵 세포, 예를 들면 항-PD1 항체 실시양태와 관련하여 상기에서 이미 개시된 것들이다. 또 다른 실시양태에서, 그러한 숙주 세포는 박테리아 세포이다. 다른 유용한 세포는 효모 세포 또는 다른 진균 세포이다.
항-PD1 및 항-LAG3 항체를 포함하는 약학적 조성물, 요소들의 키트, 방법 및 용도에 관한 본 발명의 실시양태.
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 항-PD1 항체 분자 및 항-LAG3 항체 분자를 포함하는 요소들의 키트를 제공한다. 바람직하게는, 항-LAG3 항체 분자는 본 발명의 항-LAG3 항체 분자이다.
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 항-LAG3 항체 분자 및 항-PD1 항체 분자를 포함하는 요소들의 키트를 제공한다. 바람직하게는, 항-PD1 항체 분자는 본 발명의 항-PD1 항체 분자이다. 대안적으로, 펨브롤리주맵 또는 니볼루맵과 같은 다른 항-PD1 항체를 이러한 요소들의 키트에 사용할 수 있다.
본 발명의 추가의 측면은 본 발명의 항-PD1 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 일 실시양태는 약학적 조성물이 항-LAG3 항체 분자를 추가로 포함하는 것이다. 바람직하게는, 항-LAG3 항체 분자는 본 발명의 항-LAG3 항체 분자이다.
본 발명의 추가의 측면은 본 발명의 항-LAG3 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 일 실시양태는 약학적 조성물이 항-PD1 항체 분자를 추가로 포함하는 것이다. 바람직하게는, 항-PD1 항체 분자는 본 발명의 항-PD1 항체 분자이다. 대안적으로, 또 다른 항-PD1 항체, 예컨대 펨브롤리주맵 또는 니볼루맵이 이러한 약학적 조성물에 사용될 수 있다.
당업자에게 자명한 바와 같이 상기 내용에 기초하여 상기한 본 발명의 항체 분자를 사용한 질환 (하기에 상세히 기술됨) 치료를 위한 약학적 조성물 및 본 발명의 이러한 약학적 조성물 또는 항체 분자를 사용한 질환 (하기에 상세히 기술됨)의 치료 방법이 개시된다.
오해를 피하기 위해, 본 발명의 요소들의 키트 및 약학적 조성물은 전술한 바와 같은 본 발명의 특정 항-PD1 항체 분자 및/또는 항-LAG3 항체 분자 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
본 발명의 항-PD1 항체 분자 및 본 발명의 항-LAG3 항체 분자가 동일한 투여 경로를 통해 동시에 투여되는 경우, 이들은 상이한 약학 제제 또는 조성물로서, 또는 조합된 약학적 제형 또는 조성물의 일부로서 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 항-PD1 항체 분자 및 본 발명의 항-LAG3 항체 분자를 병용 치료 계획의 일부로서 사용하는 경우, 각 항체는 항체 중 하나가 자체 사용되는 경우와 동일한 계획에 따라 동일한 양으로 투여될 수 있으며, 이러한 병용 사용은 시너지 효과를 일으킬 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다. 그러나, 항체의 병용 사용이 상승 효과를 유발하는 경우에, 여전히 원하는 치료 작용을 달성하면서, 항체 중 하나 또는 둘 모두의 양을 감소시키는 것이 가능할 수 있다. 이는 예를 들어 원하는 약리학적 또는 치료학적 효과를 얻으면서도 항체가 그의 일반적인 양으로 사용될 경우 항체 중 어느 하나 또는 양자의 사용과 관련된 어떤 바람직하지 않은 부작용을 회피, 제한 또는 감소시키는데 유용할 수 있다.
약학적 조성물, 투여 방법, 투여량
본 발명은 또한 본 발명의 적어도 하나의 항체 분자를 포함하는 하기에 상세히 설명되는 질환 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 추가로 본 발명의 적어도 하나의 항체 분자 또는 전술한 바와 같은 약학적 조성물을 사용하여 질환 (하기에 상세히 기술됨)을 치료하는 방법을 포함하고, 추가로 본 발명의 항체 분자(들) 또는 약학적 조성물을 사용하여 이러한 질환을 치료하기 위한 약제의 제조를 포함한다.
본 발명의 항체 분자 및/또는 이를 포함하는 조성물은 사용하고자 하는 특정 약학적 제형 또는 조성물에 따라 임의의 적합한 방식으로 이를 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체 분자 및/또는 이를 포함하는 조성물은 예를 들어, 정맥 내 (iv), 피하 (sc), 근육 내 (im), 복강 내 (ip), 경피 내, 경구로, 설하 (예를 들어, 혀 아래 위치하고 점막을 통해 혀 아래의 모세 혈관망으로 흡수되는 설하용 정제, 스프레이 또는 드롭제의 형태), 비강(내) (비강 분무 형태 및/또는 에어로졸 형태), 국소적으로, 좌제에 의해, 흡입에 의해, 또는 임의의 다른 적절한 방법으로 유효한 양 또는 용량으로 투여될 수 있다.
본 발명의 항체 분자 및/또는 이를 포함하는 조성물은 치료되거나 완화될 질환, 장애 또는 상태를 치료 및/또는 완화시키기에 적합한 치료 계획에 따라 투여된다. 임상의는 일반적으로 치료되거나 완화될 질환, 장애 또는 상태, 질환의 중증도, 그 증상의 중증도, 사용되는 본 발명의 특정 항체 분자, 특정 투여 경로 및 사용되는 약학적 제형 또는 조성물, 환자의 연령, 성별, 체중, 식이, 일반 상태 및 임상의에게 잘 알려진 유사한 인자와 같은 인자에 따라 적합한 치료 계획을 결정할 수 있을 것이다. 일반적으로, 치료 계획은 치료적으로 유효한 양 또는 용량으로 본 발명의 하나 이상의 항체 분자 또는 이를 포함하는 하나 이상의 조성물의 투여를 포함할 것이다.
일반적으로, 본원에서 언급된 질환, 장애 및 상태의 치료 및/또는 완화를 위하고 치료할 특정 질환, 장애 또는 상태, 본 발명의 특정 항체 분자의 효력, 특정 투여 경로 및 사용된 특정 약학적 제형 또는 조성물에 따라, 본 발명의 항체 분자는 일반적으로 체중 1 킬로그램 당 0.005 내지 20.0 mg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 10.0 mg/kg/용량, 보다 바람직하게는 0.5 내지 10 mg/kg/용량의 용량으로 연속적으로 (예를 들어, 주입에 의해) 또는 보다 바람직하게는 단일 용량으로서 (예컨대, 주 2 회, 주간 또는 월간 용량; 하기 참조)로 투여될 수 있지만, 특히 앞에서 언급한 파라미터에 따라서 상당히 달라질 수 있다. 따라서, 일부 경우에는 위에 주어진 최소 용량보다 적게 사용하는 것이 충분할 수도 있지만, 다른 경우에는 상한을 초과해야 할 수도 있다. 많은 양을 투여할 때는 하루 동안 다수의 소 용량으로 나누는 것이 권장된다.
본 발명의 특정 항체 분자 및 이의 특이적 약동학 및 다른 특성에 따라, 매일, 매초, 3, 4, 5 또는 6 일, 주간, 월간 등으로 투여될 수 있다. 투여 요법은 장기간, 주간 치료를 포함할 수 있다. "장기간"이란 적어도 2 주, 바람직하게는 수개월 또는 수 년 동안 지속되는 것을 의미한다.
본 발명의 항체 분자 및 이를 포함하는 조성물의 효능은 관련된 특정 질병에 따라서 임의의 적합한 시험관 내 분석, 세포-기반 분석, 생체 내 분석 및/또는 그 자체로 공지된 동물 모델, 또는 이들의 임의의 조합을 사용하여 시험될 수 있다. 적합한 분석 및 동물 모델은 당업자에게 명백할 것이며, 예를 들어 하기 실시예에서 사용되는 분석 및 동물 모델을 포함한다.
제형
약학적 용도로, 본 발명의 항체 분자는 (i) 본 발명의 적어도 하나의 항체 (즉, 본 발명의 항-PD1 항체 또는 본 발명의 항-LAG3 항체 또는 본 발명의 양 항체를 함께) 및 (ii) 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 부형제, 애쥬번트 및/또는 안정화제, 및 (iii) 임의로 하나 이상의 추가의 약리학적 활성 폴리펩티드 및/또는 화합물을 포함하는 약학적 제제로서 제형화될 수 있다. "약학적으로 허용가능한"이란 각각의 물질이 개체에게 투여될 때 어떠한 생물학적 또는 달리 바람직하지 않은 효과를 나타내지 않으며 함유되어 있는 약학적 조성물의 다른 성분들 (예를 들어 약학적 활성 성분) 중 어느 하나와 유해한 방식으로 상호 작용하지 않는다는 것을 의미한다. 특정 예는 표준 핸드북, 예컨대 Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., Mack Publishing Company, USA (1990)에서 찾을 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 통상적인 항체 및 항체 단편 및 다른 약학적으로 활성인 단백질에 대해 그 자체로 공지된 임의의 방식으로 제형화되고 투여될 수 있다. 따라서, 또 다른 실시양태에 따라, 본 발명은 적어도 하나의 본 발명의 항체 및 적어도 하나의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제, 부형제, 애쥬번트 및/또는 안정화제, 및 임의로 하나 이상의 추가의 약리학적 활성 물질을 함유하는 약학적 조성물 또는 제제에 관한 것이다.
정맥 내, 근육 내, 피하 주사 또는 정맥 내 주입과 같은 비경구 투여용 약학적 제제는 예를 들어, 활성 성분을 포함하며 임의로 추가의 용해 또는 희석 단계 후에 주입 또는 주사에 적합한 멸균 용액, 현탁액, 분산액, 유제 또는 분말일 수 있다. 이러한 제제를 위한 적합한 담체 또는 희석제는 예를 들어 멸균수 및 생리 학적 인산염 완충 염수, 링거액, 덱스트로스 용액 및 행크 용액과 같은 약학적으로 허용가능한 수성 완충액 및 용액; 물 오일; 글리세롤; 에탄올; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜뿐만 아니라 미네랄 오일, 동물성 오일 및 식물성 오일, 예를 들어 땅콩유, 대두유 및 이들의 적합한 혼합물을 제한없이 포함한다.
또한, 본 발명의 항체 분자의 용액은 항균 및 항진균제, 예를 들어, p-하이드록시벤조에이트, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티오메살, 에틸렌디아민 테트라아세트산 (의 알칼리 금속 염) 등과 같은 미생물의 증식을 방지하기 위한 방부제를 함유할 수 있다. 많은 경우에, 당, 완충액 또는 염화나트륨과 같은 등장제를 포함하는 것이 바람직할 것이다. 임의로, 유화제 및/또는 분산제가 사용될 수 있다. 적절한 유동성은 예를 들어, 리포솜의 형성, 분산액의 경우에 필요한 입자 크기의 유지 또는 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 흡수를 지연시키는 다른 제제, 예를 들면, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴이 또한 첨가될 수 있다. 용액은 주사 바이알, 앰풀, 주입 병 등에 채울 수 있다.
모든 경우에 있어서 최종 투여 형태는 제조 및 저장 조건하에서 무균, 유동성 및 안정해야 한다. 멸균 주사 용액은 활성 화합물을 필요에 따라 상기 열거한 여러 가지 다른 성분과 적절한 용매에 도입한 다음 필터 멸균하여 제조한다. 멸균 주사 용액의 제조를 위한 멸균 분말의 경우, 바람직한 제조 방법은 사전 멸균 여과된 용액에 존재하는 활성 성분과 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 생성하는 진공 건조 및 동결 건조 기술이다.
보통, 수용액 또는 현탁액이 바람직할 것이다. 일반적으로, 본 발명의 항체와 같은 치료 단백질에 적합한 제형은 완충된 단백질 용액, 예컨대 적절한 농도 (예를 들어, 0.001 내지 400 mg/ml, 바람직하게는 0.005 내지 200 mg/ml, 보다 많은 바람직하게는 0.01 내지 200 mg/ml, 보다 바람직하게는 1.0 내지 100 mg/ml, 예컨대 1.0 mg/ml (iv 투여) 또는 100 mg/ml (sc 투여)의 단백질을 포함하는 용액 및 다음과 같은 수성 완충액:
- 포스페이트 완충 염수, pH 7.4,
- 다른 인산염 완충액, pH 6.2 내지 8.2,
- 아세트산염 완충액, pH 3.2 내지 7.5, 바람직하게는 pH 4.8 내지 5.5
- 히스티딘 완충액, pH 5.5 내지 7.0,
- 숙신산염 완충액, pH 3.2 내지 6.6,
- 시트르산염 완충액, pH 2.1 내지 6.2,
및 임의로 용액의 등장성을 제공하기 위한 염 (예, NaCl) 및/또는 당 (예컨대, 수크로스 및 트레할로스) 및/또는 다른 폴리알콜 (예: 만니톨 및 글리세롤)을 포함하는 용액이다.
바람직한 완충 단백질 용액은 220 mM 트레할로스를 첨가함으로써 등장성으로 조정된 25 mM 인산염 완충액, pH 6.5에 용해된 본 발명의 항체를 약 0.05 mg/ml로 포함하는 용액이다. 또한, 다른 제제, 예를 들면, 세제, 예를 들어, 0.02% Tween-20 또는 Tween-80이 이러한 용액에 포함될 수 있다. 피하 적용을 위한 제형은 본 발명의 항체를 상당히 더 높은 농도로, 예컨대 최대 100 mg/ml 또는 심지어 100 mg/ml 초과로 포함할 수 있다. 그러나, 상기 주어진 성분 및 그 양은 오로지 하나의 바람직한 옵션을 나타내고자 한다는 것이 당업자에게는 명백할 것이다. 이들의 대안 및 변형은 당업자에게 아주 분명할 것이거나, 또는 상기 개시 내용으로부터 출발하여 용이하게 구상될 수 있다.
본 발명의 또 다른 측면에 따라, 본 발명의 항체 분자는 주사기, 주입기 펜, 마이크로펌프 또는 다른 장치와 같이 항체의 투여에 유용한 장치와 조합하여 사용될 수 있다.
치료적 사용
본 발명의 추가의 측면은 치료적 유효량의 본 발명의 항-PD1 항체 분자를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 상기 환자에게 항-LAG3 항체 분자를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 항-LAG3 항체 분자는 본 발명의 항-LAG3 항체 분자이다.
본 발명의 추가의 측면은 암 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 항-PD1 항체 분자를 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 본 측면은 항-LAG3 항체 분자의 추가적인 사용을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 항-LAG3 항체 분자는 본 발명의 항-LAG3 항체 분자이다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료용 약학적 조성물을 제조하기 위한 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 용도이다. 바람직한 실시양태에서, 본 측면은 항-LAG3 항체 분자의 추가적인 사용을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 항-LAG3 항체 분자는 본 발명의 항-LAG3 항체 분자이다.
일 실시양태에서, 항-PD1 항체 분자는 항-LAG3 항체 분자와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여될 것이다.
본 발명의 추가의 측면은 치료적 유효량의 본 발명의 항-LAG3 항체 분자를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료 방법을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 상기 환자에게 항-PD1 항체 분자를 투여하는 것을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 항-LAG3 항체 분자는 본 발명의 항-PD1 항체 분자이다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료 방법에 사용하기 위한 본 발명의 항-LAG3 항체 분자를 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 본 측면은 항-PD1 항체 분자의 추가적인 사용을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 항-PD1 항체 분자는 본 발명의 항-PD1 항체 분자이다.
본 발명의 또 다른 측면은 암 치료용 약학적 조성물을 제조하기 위한 본 발명의 항-LAG3 항체 분자의 용도이다. 바람직한 실시양태에서, 본 측면은 항-PD1 항체 분자의 추가적인 사용을 추가로 포함한다. 바람직하게는, 항-PD1 항체 분자는 본 발명의 항-PD1 항체 분자이다.
일 실시양태에서, 항-LAG3 항체 분자는 항-PD1 항체 분자와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로 또는 별도로 투여될 것이다.
오해를 피하기 위해, 본 발명의 의학적 용도 측면은 전술한 바와 같은 본 발명의 특정 항-PD1 항체 분자 및/또는 항-LAG3 항체 분자 중 임의의 것을 포함할 수 있다.
그의 생물학적 특성으로 인해, 본 발명의 항체는 암과 같은 과도하거나 비정상적인 세포 증식을 특징으로 하는 질환을 치료하는데 적합하다.
본원에 사용된 용어 "암"은 조직병리학적 유형 또는 침범 단계와 무관하게 모든 유형의 암성 증식 또는 발암 과정, 전이 조직 또는 악성으로 형질전환된 세포, 조직 또는 기관을 포함하는 것을 의미한다. 암성 질환의 예는 고형 종양, 혈액암, 연조직 종양 및 전이성 병변을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 고형 종양의 예로는 악성 종양, 예를 들어 간, 폐, 유방, 림프구, 위장 (예: 결장), 비뇨생식관 (예: 신장, 요로상피세포), 전립선 및 인두에 영향을 미치는 것과 같은 다양한 장기 계통의 육종 및 암종 (선암종 및 편평세포 암종 포함)을 들 수 있으나 이들로만 한정되지 않는다. 선암종에는 대부분의 결장암, 직장암, 신세포 암종, 간암, 비소세포 폐암종, 소장암 및 식도암과 같은 악성 종양이 포함된다. 편평세포 암종에는 예를 들어 폐, 식도, 피부, 두경부, 구강, 항문 및 자궁 경부에서의 악성 종양을 포함한다. 일 실시양태에서, 암은 흑색종, 예를 들어, 진행 단계의 흑색종이다. 상기 언급된 암의 전이성 병변이 또한 본원에 기술된 방법 및 조성물을 사용하여 치료 또는 예방될 수 있다.
본원에 개시된 항체 분자를 사용하여 증식이 저해될 수 있는 예시적인 암은 전형적으로 면역요법에 반응하는 암을 포함한다.
예를 들어, 하기 비제한적인 암, 종양 및 기타 증식성 질환이 본 발명에 따른 항체로 치료될 수 있다: 두경부암; 예를 들어 비소세포 폐암 (NSCLC) 및 소세포 폐암 (SCLC)과 같은 폐암; 예를 들어 신경성 종양 및 중간엽 종양과 같은 종격 신생물; 예를 들어 식도암, 위암 (위장암), 췌장암, 간암 및 담도계암 (예를 들어 간세포 암종 (HCC) 포함) 및 소장 및 대장암 (예: 직장결장암 포함)과 같은 위장 (GI)관 암; 전립선암; 고환암; 부인과 암, 예를 들어 난소암; 예를 들어 유방암종, 호르몬 수용체 양성 유방암, Her2 양성 유방암 및 삼중 음성 유방암과 같은 유방의 암; 내분비계 암; 예를 들어 섬유육종, 횡문근육종, 혈관육종, 카포시육종과 같은 연조직 육종; 예를 들어. 골수종, 골육종, 유잉 종양, 섬유육종, 골연골종, 골아세포종 및 연골모세포종과 같은 뼈의 육종; 중피종; 예를 들어 기저세포 암종, 편평세포 암종, 메르켈 세포 암종 및 흑색종과 같은 피부암; 예를 들어 성상세포종, 교모세포종, 신경교종, 신경아세포종 및 망막아세포종과 같은 중추 신경계 및 뇌의 신생물; 예를 들어 B-세포 비호지킨 림프종 (NHL), T-세포 비호지킨 림프종, 만성 B-세포 림프성 백혈병 (B-CLL), 만성 T-세포 림프성 백혈병 (T-CLL), 호지킨병 (HD), 대형 과립성 림프성 백혈병 (LGL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 급성 골수양/골수성 백혈병 (AML), 급성 림프성/림프아성 백혈병 (ALL), 다발성 골수종 (MM), 형질세포종 및 골수이형성 증후군 (MDS)과 같은 림프종 및 백혈병; 및 원발 부위 불명 암.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, 암은 폐암, 바람직하게는 비-소세포 폐암 (NSCLC)이다.
신체에서의 특정 위치/기원을 특징으로 하는 상기 언급된 모든 암, 종양, 신생물 등은 원발성 종양 및 이로부터 유래된 전이성 종양 모두를 포함하는 의미이다.
환자가 PD-L1의 고 발현을 특징으로 하는 암을 갖고/거나 암이 항종양 면역 세포, 예를 들어 종양 침윤 림프구에 의해 침투된 경우 환자는 본 발명의 항체 분자 (본원에 기술된 바와 같이) 치료에 더 잘 반응할 가능성이 있다. 따라서, 본 발명의 일 실시양태는 치료될 환자가 PD-L1의 고 발현을 특징으로 하는 암을 갖고/거나 암이 항-종양 면역 세포에 의해 침윤된 것이다.
또한, 환자가 고-돌연변이 부담을 특징으로 하는 암을 갖는 경우 환자는 본 발명의 항체 분자 (본원에 기술된 바와 같이) 치료에 더 잘 반응할 가능성이 있다. 돌연변이 부담이 얼마나 높은지를 평가할 수 있는 예는 암이 미세위성 불안정성 또는 좋지 않은 DNA 미스매치 복구 효율을 갖는 것이 특징인지를 결정하는 것을 포함한다. 그러한 암은 면역원성이 더 강하고, 따라서 본 발명의 항체 분자와 같은 면역 조절 요법에 반응할 가능성이 더 높다고 생각된다. 따라서, 본 발명의 일 실시양태는 치료될 환자가 고 돌연변이 부담을 특징으로 하는 암을 가지고 있는 것이다.
본 발명의 항체 분자는 제1 라인, 제2 라인 또는 임의의 추가 라인 치료와 관련하여 치료 계획에 사용될 수 있다.
본 발명의 항체 분자는 상기 언급된 질환의 예방, 단기간 또는 장기간 치료에, 임의로는 또한 방사선요법 및/또는 수술과 병용하여 사용될 수 있다.
물론, 상기한 것은 또한 치료적 유효 용량을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 상기 질환을 치료하는 다양한 방법에서의 본 발명의 항체 분자의 용도, 이러한 질환 치료용 약제의 제조를 위한 이들 항체 분자의 용도, 이러한 본 발명의 항체 분자를 포함하는 약학적 조성물, 및 본 발명의 이러한 항체를 포함하는 약제의 제제 및/또는 제조 등을 포함한다.
다른 활성 물질 또는 처리와의 병용
본 발명의 항체 분자, 또는 본 발명의 항-PD1 항체와 본 발명의 항-LAG3 항체의 조합물은 단독으로 또는 하나 이상의 추가의 치료제, 특히 DNA 손상제 또는 암 세포에서 혈관신생, 신호 전달 경로 또는 유사 분열 체크포인트을 억제하는 치료적 활성 화합물 등의 화학요법제로부터 선택되는 것과 조합하여 사용될 수 있다.
추가의 치료제는 임의로 동일한 약학 제제의 성분으로서, 항체 분자의 투여와 동시에, 또는 그의 투여 전후에 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 제한없이 EGFR, VEGFR, HER2-neu, Her3, 오로라A, 오로라B, PLK 및 PI3 키나제, FGFR, PDGFR, Raf, Ras, KSP, PDK1, PTK2, IGF-R 또는 IR의 억제제의 군으로부터 선택된 하나 이상의 억제제일 수 있다.
추가적인 치료제의 추가 예는 CDK, Akt, src/bcr abl, cKit, cMet/HGF, c-Myc, Flt3, HSP90, 헤지호그 길항제, JAK/STAT의 억제제, Mek, mTor, NFkappaB, 프로테아좀, Rho, wnt 신호 전달 억제제 또는 유비퀴틴화 경로의 억제제 또는 Notch 신호 전달 경로의 또 다른 억제제와 같은 억제제들이다.
오로라 억제제의 예로는 PHA-739358, AZD-1152, AT　9283, CYC-116, R-763, VX-680, VX-667, MLN-8045, PF-3814735가 있다.
PLK 억제제의 예로는 GSK-461364이 있다.
raf 억제제의 예로는 BAY-73-4506 (또한 VEGFR 억제제), PLX 4032, RAF 265 (또한 VEGFR 억제제), 소라페닙 (또한 VEGFR 억제제) 및 XL 281이 있다.
KSP 억제제의 예로는 이스피네십, ARRY-520, AZD-4877, CK-1122697, GSK　246053A, GSK-923295, MK-0731, 및 SB-743921이 있다.
src 및/또는 bcr-abl 억제제의 예로는 다사티닙, AZD-0530, 보수티닙, XL　228 (또한 IGF-1R 억제제), 닐로티닙 (또한 PDGFR 및 cKit 억제제), 이마티닙 (또한 cKit 억제제), 및 NS-187이 있다.
PDK1 억제제의 예로는 BX-517이 있다.
Rho 억제제의 예로는 BA-210이 있다.
PI3 키나제 억제제의 예로는 PX-866, BEZ-235 (또한 mTor 억제제), XL 418 (또한 Akt 억제제), XL-147 및 XL 765 (또한 mTor 억제제)가 있다.
cMet 또는 HGF의 억제제의 예로는 XL-184 (또한 VEGFR, cKit, Flt3의 억제제), PF-2341066, MK-2461, XL-880 (또한 VEGFR의 억제제), MGCD-265 (또한 VEGFR, Ron, Tie2의 억제제), SU-11274, PHA-665752, AMG-102, 및 AV-299이 있다.
c-Myc 억제제의 예로는 CX-3543이 있다.
Flt3 억제제의 예로는 AC-220 (또한 cKit 및 PDGFR의 억제제), KW 2449, 레스타우르티닙 (또한 VEGFR, PDGFR, PKC의 억제제), TG-101348 (또한 JAK2의 억제제), XL-999 (또한 cKit. FGFR, PDGFR 및 VEGFR의 억제제), 수니티닙 (또한 PDGFR, VEGFR 및 cKit의 억제제) 및 탄두티닙 (또한 PDGFR 및 cKit의 억제제)이 있다.
HSP90 억제제의 예로는 타네스피마이신, 알베스피마이신, IPI-504 및 CNF 2024가 있다.
JAK/STAT 억제제의 예로는 CYT-997 (또한 튜불린과 상호작용 함), TG 101348 (또한 Flt3의 억제제) 및 XL-019이 있다.
Mek 억제제의 예로는 ARRY-142886, PD-325901, AZD-8330, 및 XL　518이 있다.
mTor 억제제의 예로는 템시롤리무스, AP-23573 (VEGF 억제제로도 작용함), 에베롤리무스 (또한 VEGF 억제제), XL-765 (또한 PI3 키나제 억제제) 및 BEZ-235 (또한 PI3 키나제 억제제)가 있다.
Akt 억제제의 예로는 페리포신, GSK-690693, RX-0201 및 트리시리빈이 있다.
cKit 억제제의 예로는 AB-1010, OSI-930 (VEGFR 억제제로도 작용함), AC-220 (또한 Flt3 및 PDGFR의 억제제), 탄두티닙 (또한 Flt3 및 PDGFR 억제제), 악시티닙 (또한 VEGFR 및 PDGFR의 억제제), XL-999 (또한 Flt3, PDGFR, VEGFR, FGFR의 억제제), 수니티닙 (또한 Flt3, PDGFR, VEGFR의 억제제) 및 XL-820 (VEGFR 및 PDGFR 억제제로서 작용함), 이마티닙 (또한 bcr-abl 억제제), 닐로티닙 (또한 bcr-abl 및 PDGFR의 억제제)이 있다.
헤지호그 길항제의 예로는 IPI-609 및 CUR-61414이 있다.
CDK 억제제의 예로는 셀리시클립, AT-7519, P-276, ZK-CDK (또한 VEGFR2 및 PDGFR을 억제함), PD-332991, R-547, SNS-032, PHA-690509, 및 AG 024322가 있다.
프로테아좀 저해제의 예로는 보르테조밉, 카필조밉 및 NPI-0052 (NF카파B의 억제제)가 있다.
NFkappaB 경로 억제제의 예로는 NPI-0052이 있다.
유비퀴틴화 경로 억제제의 예로는 HBX-41108이 있다.
바람직한 실시양태에서, 추가의 치료제는 항-혈관신생제이다.
항-혈관신생제의 예로는 FGFR, PDGFR 및 VEGFR의 억제제 또는 각각의 리간드의 억제제 (예를 들어, 페가타닙 또는 항-VEGF 항체 베바시주맵과 같은 VEGF 억제제) 및 탈리도미드 (이러한 제제는 닌테다닙, 베바시주맵, 모테사닙, CDP-791, SU-14813, 텔라티닙, KRN-951, ZK-CDK (또한 CDK의 억제제), ABT-869, BMS-690514, RAF-265, IMC-KDR, IMC-18F1, IMiDs (면역조절약), 탈리도미드 유도체 CC-4047, 레날리도미드, ENMD　0995, IMC-D11, Ki 23057, 브리바닙, 세디라닙, XL-999 (또한 cKit 및 Flt3의 억제제), 1B3, CP 868596, IMC 3G3, R-1530 (또한 Flt3의 억제제), 수니티닙 (또한 cKit 및 Flt3의 억제제), 악시티닙 (또한 cKit의 억제제), 레스타우르티닙 (또한 Flt3 및 PKC의 억제제), 바탈라닙, 탄두티닙 (또한 Flt3 및 cKit의 억제제), 파조파닙, GW 786034, PF-337210, IMC-1121B, AVE-0005, AG-13736, E-7080, CHIR 258, 소라페닙 토실레이트 (또한 Raf의 억제제), RAF-265 (또한 Raf의 억제제), 반데타닙, CP-547632, OSI-930, AEE-788 (또한 EGFR 및 Her2의 억제제), BAY-57-9352 (또한 Raf의 억제제), BAY-73-4506 (또한 Raf의 억제제), XL 880 (또한 cMet의 억제제), XL-647 (또한 EGFR 및 EphB4의 억제제), XL 820 (또한 cKit의 억제제), 및 닐로티닙 (또한 cKit 및 brc-abl의 억제제)이 있다.
추가적인 치료제는 또한 EGFR 억제제로부터 선택될 수 있으며, 이는 소분자 EGFR 억제제 또는 항-EGFL 항체일 수 있다. 항-EGFL 항체의 예에는 제한없이 세툭시맵, 파니투무맵, 마투주맵이 있고; 소분자 EGFR 억제제의 예에는 제한없이 게피티닙, 아파티닙, 오시메르티닙 및 올무티닙이 있다. EGFR 조절제에 대한 또 다른 예는 EGF 융합 독소이다.
본 발명의 항체 분자와의 조합에 유용한 EGFR 및 Her2 억제제 중에는 라파티닙, 게피티닙, 에를로티닙, 세툭시맵, 트라스투주맵, 니모투주맵, 잘루투주맵, 반데타닙 (또한 VEGFR의 억제제), 페르투주맵, XL-647, HKI-272, BMS-599626 ARRY-334543, AV 412, mAB-806, BMS-690514, JNJ-26483327, AEE-788 (또한 VEGFR의 억제제), ARRY-333786, IMC-11F8, 제맵이 있다.
본 발명의 항체 분자와의 치료에서 유리하게 병용될 수 있는 다른 약제는 토시투무맵 및 이브리투모맵 티욱세탄 (2개의 방사성 표지된 항-CD20 항체), 알레투주맵 (항-CD52 항체), 데노수맵 (파골세포 분화 인자 리간드 억제제), 갈릭시맵 (CD80 길항제), 오파투무맵 (CD20 억제제), 자놀리무맵 (CD4 길항제), SGN40 (CD40 리간드 수용체 조절제), 리툭시맵 (CD20 억제제) 또는 마파투무맵 (TRAIL-1 수용체 작용제) 등이 있다.
본 발명의 항체 분자와 조합하여 사용될 수 있는 다른 화학요법 약물은 호르몬, 호르몬 유사체 및 항호르몬제 (예를 들어, 타목시펜, 토레미펜, 랄록시펜, 풀베스트란트, 메게스트롤 아세테이트, 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 사이프로테론 아세테이트, 피나스테리드, 부세렐린 아세테이트, 플루드코르티손, 플루옥시메스테론, 메드록시프로게스테론, 옥트레오티드, 아르족시펜, 파시레오티드, 바프레오티드), 아로마타제 억제제 (예를 들어, 아나스트로졸, 레트로졸, 리아로졸, 엑세메스탄, 아타메스탄, 포르메스탄), LHRH 작용제 및 길항제 (예를 들어, 고세렐린 아세테이트, 류프롤리드, 아바렐릭스, 세트로렐릭스, 데슬로렐린, 히스트렐린, 트립토렐린), 항대사제 (예를 들어, 메토트렉세이트, 페메트렉시드 등의 항엽산제, 5 플루오로우라실, 카페시타빈, 데시타빈, 넬라라빈 및 겜시타빈 등의 피리미딘 유사체, 머캅토퓨린 티오구아닌, 클라드리빈 및 펜토스타틴, 시타라빈, 플루다라빈과 같은 퓨린 및 아데노신 유사체); 항종양 항생제 (예를 들어, 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신 및 이다루비신과 같은 안트라사이클린, 미토마이신-C, 블레오마이신, 닥티노마이신, 플리카마이신, 미톡산트론, 픽산트론, 스트렙토조신); 백금 유도체 (예를 들어, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 카보플라틴, 로바플라틴, 사트라플라틴); 알킬화제 (예를 들어, 에스트라무스틴, 메클로레타민, 멜팔란, 클로람부실, 부설판, 다카바진, 사이클로포스파미드, 이포스파미드, 하이드록시우레아, 테모졸로미드, 니트로소우레아, 예컨대 카르무스틴 및 로무스틴, 티오테파); 항분열제 (예를 들어, 빈블라스틴, 빈덴신, 비노렐빈, 빈플루닌 및 빈크리스틴 등의 빈카 알칼로이드류; 및 시모탁셀, 및 파클리탁셀, 도세탁셀 및 이들의 제제, 라로탁셀 등의 탁산류; 익사베필론, 파투필론, ZK EPO 등의 에포틸론류); 토포이소머라제 억제제 (예를 들어, 에피도필로톡신류, 예컨대 에토포시드 및 에토포포스, 테니포시드, 암사크린, 토포테칸, 이리노테칸); 및 아미포스틴, 아나그렐리드, 인터페론 알파, 프로카바진, 미토탄, 및 포르피머, 벡사로텐, 셀레콕시브와 같은 기타 화학요법제 중에서 제한없이 선택된다.
특정 실시양태에서, 추가의 치료제는 TIM3, PD-L1 (예를 들어, 아테졸리주맵, 아벨루맵 또는 듀발루맵), PD-L2, CTLA-4, VISTA, BTLA, TIGIT, CD160, LAIR1, 2B4, CEACAM의 체크포인트 억제제의 조절제와 같은 추가 면역요법제일 수 있다.
다른 실시양태에서, 면역요법제는 암 백신일 수 있다.
두 가지 이상의 물질 또는 원리가 병용 치료 계획의 일부로 사용되는 경우, 이들은 동일한 투여 경로 또는 상이한 투여 경로를 통해, 실질적으로 동시에 (즉, 동시에, 동반하여) 또는 상이한 시점에 (예를 들어, 순차적으로, 연속적으로, 교대로, 연달아서 또는 다른 종류의 교대 요법에 따라) 투여될 수 있다.
물질 또는 원리가 동일한 투여 경로를 통해 동시에 투여되는 경우, 이들은 상이한 약학 제형 또는 조성물로서, 또는 조합된 약학 제형 또는 조성물의 일부로서 투여될 수 있다. 또한, 두 가지 이상의 활성 물질 또는 원리가 병합 치료 계획의 일부로 사용되는 경우, 각 물질 또는 원칙은 화합물 또는 원리가 자체로 사용되는 것과 동일한 양과 동일한 계획에 따라 투여될 수 있으며, 그러한 병용 사용은 시너지 효과를 이끌어 낼 수도 있고 그렇지 않을 수도 있다. 그러나, 두 가지 이상의 활성 물질 또는 원리의 병용 사용이 시너지 효과를 이끌어 내는 경우는, 원하는 치료 작용을 유지한 채로 투여될 물질 또는 원리의 하나 또는 그 이상 또는 그 전부의 양을 감소시키는 것이 가능할 수 있다. 이는 예를 들어 원하는 약리학적 또는 치료학적 효과를 얻으면서, 하나 이상의 물질 또는 원칙을 그의 통상적인 양으로 사용하는 것과 관련하여 원치 않는 부작용을 회피, 제한 또는 감소시키는데 유용할 수 있다.
물론, 상기에는 상기 병용 파트너와 함께 사용하기 위한 본 발명의 항체의 제제 및 제조 방법이 포함된다. 또한, 본 발명의 항체와 함께 사용하기 위한 상기 언급된 조합 파트너의 제제 및 제조 방법도 포함된다.
본 발명의 항체 분자는 그 자체로 또는 다른 치료 계획, 예를 들어 수술 및/또는 방사선 요법과 조합하여 사용될 수 있다.
키트 및 제조 및 정제 방법
본 발명은 또한 적어도 하나의 본 발명의 항체 및 전술한 바와 같은 질환 및 장애의 치료에 사용되는 다른 약물로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 다른 성분을 포함하는 키트를 포함한다.
일 실시양태에서, 키트는 유효량의 본 발명의 항-PD1 항체 분자를 단위 투약 형태로 함유하는 조성물을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 키트는 본 발명의 유효량의 항-LAG3 항체 분자를 단위 투약 형태로 함유하는 조성물을 포함한다. 추가의 실시양태에서 키트는 유효량의 본 발명의 항-PD1 항체 분자를 단위 투약 형태로 함유하는 조성물 및 본 발명의 유효량의 항-LAG3 항체 분자를 단위 투약 형태로 함유하는 조성물을 모두 포함한다.
일부 실시양태에서, 키트는 이러한 조성물을 함유하는 멸균된 용기를 포함하고; 그러한 용기는 상자, 앰플, 병, 바이알, 튜브, 백, 파우치, 블리스터-팩 또는 당 업계에 공지된 다른 적합한 용기 형태일 수 있다. 이러한 용기는 플라스틱, 유리, 라미네이트지 (laminated paper), 금속 호일, 또는 약제를 보유하기에 적합한 다른 재료로 제조될 수 있다.
필요에 따라, 본 발명의 항체 분자 또는 본 발명의 항체 양 유형의 조합이 암을 갖는 대상에게 항체/항체들을 투여하기 위한 설명서와 함께 제공된다. 설명서에는 일반적으로 암의 치료 또는 예방을 위한 조성물의 사용에 대한 정보가 포함된다. 다른 실시양태에서, 설명서는 다음 중 적어도 하나를 포함한다: 치료제의 설명; 암 또는 그의 증상의 치료 또는 예방을 위한 투여 스케쥴 및 투여; 예방 조치; 경고; 증상; 금지 사항; 과량투여 정보; 이상 반응; 동물 약리학; 임상 연구; 및/또는 참고 문헌. 설명서는 용기 (있는 경우)에 직접 인쇄되거나 용기에 붙인 라벨 또는 용기 안에 또는 그와 함께 제공되는 별도의 시트, 팜플렛, 카드 또는 폴더로서 인쇄될 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 분자를 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 일반적으로 하기 단계를 포함한다:
- 본 발명의 항체의 형성을 허용하는 조건하에 본 발명의 항체 분자를 코딩하는 핵산을 포함하는 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 배양하는 단계;
- 배양물로부터 숙주 세포에 의해 발현된 항체 분자를 회수하는 단계; 및
- 임의로 추가로 본 발명의 항체 분자를 정제 및/또는 변형 및/또는 제형화하는 단계.
본 발명의 핵산은 예를 들어, 코딩 서열 및 조절 서열 및 임의로 천연 또는 인공 인트론을 포함하는 DNA 분자일 수 있거나, cDNA 분자일 수 있다. 이것은 원래의 코돈을 가질 수 있거나, 또는 의도된 숙주 세포 또는 숙주 생물에서 발현되도록 특이적으로 적응된 최적화된 코돈 사용을 가질 수도 있다. 본 발명의 일 실시양태에 따라, 본 발명의 핵산은 상기 정의한 바와 같이 본질적으로 단리된 형태이다.
본 발명의 핵산은 전형적으로 발현 벡터, 즉 적합한 숙주 세포 또는 다른 발현 시스템으로 형질감염될 때 폴리펩티드의 발현을 제공할 수 있는 벡터에 혼입될 것이다.
본 발명의 항체를 제조하기 위해, 당업자는 예를 들어 [Kipriyanow and Le Gall, 2004]에 의해 검토된 것과 같이, 당 업계에 익히 공지된 다양한 발현 시스템으로부터 선택할 수 있다.
발현 벡터는 플라스미드, 레트로바이러스, 코스미드, EBV 유래 에피솜 등을 포함한다. 발현 벡터 및 발현 조절 서열은 숙주 세포와 양립할 수 있도록 선택된다. 항체 경쇄 유전자 및 항체 중쇄 유전자는 별개의 벡터에 삽입될 수 있다. 특정 실시양태에서, 두 DNA 서열은 동일한 발현 벡터에 삽입된다.
편리한 벡터는 상술한 바와 같이 임의의 VH (가변 중) 또는 VL (가변 경) 서열이 용이하게 삽입되고 발현될 수 있도록 조작된 적절한 제한 부위를 갖는, 기능적으로 완전한 인간 CH (불변 중) 또는 CL (불변 경) 면역글로불린 서열을 코딩하는 것이다. 항체 중쇄의 경우, 이는 임의의 IgG 아이소타입 (IgG1, IgG2, IgG3, IgG4) 또는 대립유전자 변이체를 포함하는 다른 면역글로불린일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
재조합 발현 벡터는 또한 숙주 세포로부터 항체 사슬의 분비를 촉진시키는 신호 펩티드를 코딩할 수 있다. 항체 사슬을 코딩하는 DNA는 신호 펩티드가 성숙한 항체 사슬 DNA의 아미노 말단에 인-프레임 (in-frame)으로 연결되도록 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 신호 펩티드는 면역글로불린 신호 펩티드 또는 비-면역글로불린 단백질 유래의 이종 펩티드일 수 있다. 대안으로, 항체 사슬을 코딩하는 DNA 서열은 이미 신호 펩티드 서열을 함유하고 있을 수 있다.
항체 사슬 DNA 서열 이외에, 재조합 발현 벡터는 전형적으로 프로모터, 인핸서, 종결 및 폴리아데닐화 신호 및 숙주 세포에서 항체 사슬의 발현을 조절하는 다른 발현 조절 요소를 포함하는 조절 서열, 임의로 이종 조절 서열을 가진다. (포유동물 세포에서의 발현을 위해 예시된) 프로모터 서열의 예로는 CMV 유래의 프로모터 및/또는 인핸서 (예컨대, CMV 유인원 바이러스 40 (SV40) 프로모터/인핸서), 아데노바이러스 (예를 들어, 아데노바이러스 주요 후기 프로모터 (AdMLP)), 폴리오마 및 천연 면역글로불린 및 액틴 프로모터와 같은 강한 포유동물 프로모터이다. 폴리아데닐화 신호의 예로서 BGH polyA, SV40 후기 또는 초기 polyA; 또는, 면역글로불린 유전자의 3'UTR 등이 사용될 수 있다.
재조합 발현 벡터는 또한 숙주 세포에서 벡터의 복제 (예를 들어, 복제 기원) 및 선별 마커 유전자를 조절하는 서열을 보유할 수 있다. 본 발명의 항체의 중쇄 또는 그의 항원-결합 부분 및/또는 경쇄 또는 그의 항원-결합 부분을 코딩하는 핵산 분자, 및 이들 DNA 분자를 포함하는 벡터는 리포좀-매개 형질감염, 폴리양이온-매개 형질감염, 원형질체 융합, 마이크로주입, 인산칼슘 침전법, 전기천공 또는 바이러스 벡터에 의한 전달을 비롯한 당 업계에 공지된 형질감염 방법에 따라 숙주 세포, 예를 들어 박테리아 세포 또는 고등 진핵 세포, 예를 들면, 포유동물 세포 내로 도입될 수 있다.
바람직하게는, 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 DNA 분자는 숙주 세포, 바람직하게는 포유동물 세포 내로 동시-형질감염된 2개의 발현 벡터 상에 존재한다.
발현을 위한 숙주로서 이용가능한 포유동물 세포주는 당 업계에 잘 알려져 있으며, 특히 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, NS0, SP2/0 세포, HeLa 세포, 베이비 햄스터 신장 (BHK) 세포, 원숭이 신장 세포 COS), 인간 암종 세포 (예: Hep G2 및 A-549 세포), 3T3 세포 또는 임의의 그러한 세포주의 유도체/자손을 포함한다. 인간, 마우스, 래트, 원숭이 및 설치류 세포주를 예로 들 수 있으나 이에 한정되지 않는 다른 포유동물 세포, 또는 효모, 곤충 및 식물 세포를 예로 들 수 있으나 이에 한정되지 않는 다른 진핵 세포 또는 박테리아와 같은 원핵 세포가 사용될 수 있다.
본 발명의 항체 분자는 숙주 세포를 숙주 세포에서 항체 분자의 발현을 허용하기에 충분한 시간 동안 배양함으로써 생산된다. 항체 분자는 바람직하게는 분비된 폴리펩티드로서 배양 배지로부터 회수되거나, 예를 들어 분비 신호없이 발현되는 경우 숙주 세포 용해물로부터 회수될 수 있다. 실질적으로 균질한 항체 제제가 얻어지는 방식으로 재조합 단백질 및 숙주 세포 단백질에 사용되는 표준 단백질 정제 방법을 사용하여 항체 분자를 정제하는 것이 필요하다. 예로서, 본 발명의 항체 분자를 수득하는데 유용한 최첨단 정제 방법은 제1 단계로서 배양 배지 또는 용해물로부터 세포 및/또는 미립자 세포 파편을 제거하는 단계를 포함한다. 이어서 항체는 예를 들어 면역친화성 또는 이온-교환 컬럼, 에탄올 침전, 역상 HPLC, Sephadex 크로마토그래피, 실리카상의 크로마토그래피 또는 양이온 교환 수지상의 분획화에 의해 오염된 가용 단백질, 폴리펩티드 및 핵산으로부터 정제된다. 항체 분자 제제를 얻는 공정의 최종 단계로서, 정제된 항체 분자를 치료적 적용을 위해 하기 기술된 바와 같이, 예를 들면, 건조, 예를 들면 동결 건조시킬 수 있다.
실시예
실시예 1: PD1에 결합하는 마우스 항체의 생성 및 PD1에 대한 PDL-1의 결합 차단.
인간 PD1 단백질 (GenBank 수탁 번호 AAO63583.1의 아미노산 21-170)의 세포 외 도메인 (ECD)을 합성하고 면역원으로서 제제화하였다. 이어서, 마우스를 면역화시킨 후 표준 실험실 면역화 기술에 따라 인간 PD1 ECD 단백질로 부스팅시켰다.
혈장을 면역화된 마우스로부터 수확하고, 항-PD1 면역글로불린의 충분한 역가를 가진 개체를 동정하기 위해 스크리닝하였다. 표준 실험 방법에 따라, 선택된 마우스로부터의 림프구를 수확하고 마우스 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마를 생성시켰다. 이어서, 이들 하이브리도마를 이하 본원에 기술된 분석법을 사용하여 낮은 nM 친화력 범위에서 인간 PD1 (ECD)에 대한 결합을 나타내는 항체 분자를 생산하는 하이브리도마주를 동정하기 위해 스크리닝하고, PDD1에 대한 인간 PD-L1의 결합을 차단하였다.
인간 PD1에 결합하고 인간 PD-L1에 대한 결합을 차단하는 항체를 생산하는 몇몇 하이브리도마를 선택하고, 항체 가변 도메인을 단리하고 표준 PCR 프라이머 세트를 사용하여 클로닝하였다.
이 연구로부터, 인간 PD1 (ECD)에 대해 낮은 nM의 결합 친화력을 나타내고 또한 PD-L1과 PD1의 결합을 차단하는 모노클로날 항체를 생성하는 77E11로 명명된 뮤린 하이브리도마주가 동정되었다.
77E11에 의해 생산된 모노클로날 항체의 가변 도메인의 아미노산 서열을 도 1에 나타내었다.
실시예 2: 인간화 항-PD1 항체의 생성
뮤린 77E11 하이브리도마 세포주의 V-유전자를 당 업계에 공지된 PCR 및 시퀀싱 프로토콜에 따라 동정하였다. 그런 다음 V 유전자를 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 가장 가까이 일치하는 인간 생식세포계 유전자에 융합시켰다. 77E11의 경우, 이로서 마우스 Vk 및 Vh 아미노산 잔기가 인간 Ck 및 Ch1 아미노산 잔기에 융합된 키메라 뮤린/인간 항체 분자가 생성되었다.
제조되면, 키메라 뮤린/인간 항체를 "인간화" 프로토콜에 적용하였다. 이때, 키메라 77E11 Fab 클론의 돌연변이화 아미노산 라이브러리를 제조하였다. 서열 장애 (즉, 면역원성이거나 잠재적인 제조 문제를 일으키는 것으로 알려진 아미노산 잔기)를 제거하도록 추가의 라이브러리 위치를 또한 제조하였다. 이들 돌연변이화 라이브러리는 보통 V-영역 당 5-10 바이너리 (마우스 대 인간) 위치를 가진다. 좀 더 복잡한 V-영역의 특정 장애를 해결하기 위해 몇몇 소규모 라이브러리를 구축할 수 있다. 이러한 라이브러리는 당 업계의 표준 방법을 사용하여 제조되며 당업자가 용이하게 이용할 수 있다.
이 단계가 완료되고 나면, 원래의 뮤린 77E11 Fab 서열로부터 유래된 다수의 상이한 "인간화된" Fab를 제조하였다. 이들 인간화된 Fab에 대해 인간 PD1에 결합시키는 능력 및 PD-L1과 PD1의 상호 작용을 차단하는 능력을 시험하였다. 이어서, 상응하는 키메라 Fab와 동등하거나 더 우수한 성능을 갖는 유전자 조작된 Fab를 선택하였다. 그들의 아미노산 서열을 인간 서열 비율, 예상되는 면역원성 및 제거된 서열 장애에 대해 분석하였다.
가장 바람직한 인간화된 Fab의 선택 후, 이들을 인간 IgG4 (Pro) 또는 IgG1KO 면역글로불린 포맷에 두었다. IgG4 (Pro)는 세린 241이 프롤린으로 변경됨으로써 표준 인간 IgG4 서열과 다르며, 이러한 변경은 IgG4 분자 사이의 동적 Fab 암 교환을 최소화하는 것으로 입증되었다. IgG1KO는 항체 분자의 이펙터 기능을 최소화하는 것으로 알려진 2개의 아미노산 치환 (L234A, L235A)에 의해 표준 인간 IgG1 서열과 상이하다.
이 연구를 완료하고 원래의 키메라 뮤린/인간 77E11 Fab의 5 가지 상이한 인간화 버전이 제조되었다. 이들은 PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5로 칭하였다.
PD1-1, PD1-2, PD1-3, PD1-4 및 PD1-5에 대한 CDR의 아미노산 서열, VH 및 VL 서열 및 완전 HC 및 LC 서열은 본 출원 명세서 마지막 표에 제시되어 있다. 오해를 피하기 위해, 항체와 그들의 서열번호 사이의 상호 관계를 또한 하기 표에 제시하였다:
본 발명의 항-PD1 항체에 대한 서열번호
항-PD1 항체 CDR 서열 VH 서열 VL 서열 HC 서열 LC 서열
PD1-1 1-6 19 20 29 30
PD1-2 7-12 21 22 31 32
PD1-3 13-18 23 24 33 34
PD1-4 13-18 25 26 35 36
PD1-5 13-18 27 28 37 38
실시예 3 : 인간 PD1에 결합하는 항체 및 PD1 리간드 상호 작용의 차단
뮤린 77E11 하이브리도마로부터 유래된 대표적인 인간화 항-PD1 항체 (실시예 2에 기재됨)의 인간 PD1에 대한 결합을 측정하였다.
재조합 단량체 인간 PD1에 대한 결합 친화력을 ProteOn XPR36 장비를 사용하여 SPR로 측정하였다. PD1-1, PD1-2 및 PD1-3 항체는 표면에 아민 결합된 단백질 A/G 표면에 포획되었다. 인간 PD1 ECD를 포획된 항체에 600초 동안 30 ul/분의 유속 및 1200sec 동안의 해리로 주입하였다. 인간 PD1 ECD의 농도는 0 nM, 6.25 nM, 12.5 nM, 25 nM, 50 nM 및 100 nM이었다. 원 데이터에서 백그라운드를 뺀 다음 센서그램을 1:1 랭뮤어 (Langmuir) 결합에 전체적으로 맞춰 친화력 (KD) 값을 제공하였다.
상기 프로토콜을 사용하여, 항체 PD1-1, PD1-2 및 PD1-3이 하기 표에 제시된 바와 같이 인간 PD1에 결합하는 것으로 결정되었다.
재조합 인간 PD1에 대한 결합 (KD, nM)
항체 KD, nM
PD1-1 16.6
PD1-2 61.8
PD1-3 6.0
이어서, 본 발명의 PD1 항체를 표면 CHO 세포에서 발현된 인간 PD1에 대한 인간 PD-L1/2의 결합을 차단하는 능력에 대해 시험하였다. PD1 발현 CHO 세포를 본 발명의 항-PD1 항체 (PD1 내지 PD1-5)의 존재하에 고정 농도의 재조합 비오틴으로 표지된 PD-L1 또는 PD-L2와 인큐베이션하였다. 혼합물을 37 ℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 유로퓸으로 표지된 스트렙타비딘으로 세포 결합된 PD-L1/L2를 검출하고 Perkin Elmer Victor X4 플레이트 판독기를 사용하여 형광을 측정하였다. 데이터는 억제 백분율로 표시된다. 0% 억제는 항체가 없는 리간드와 함께 인큐베이션된 세포의 형광값으로 정의되며, 100% 억제는 표지된 리간드 및 항체가 없는 세포로 얻어진 신호로서 정의된다. 백분율 억제값을 엑셀로 계산하고 GraphPad Prism으로 곡선 피팅을 수행하였다. 곡선의 데이터 포인트는 3회 측정의 평균값이다.
리간드 차단의 90% 억제 (IC90)를 달성하는데 필요한 억제 곡선 및 mab 농도를 도 2 및 표 3에 나타내었다.
PD1 mAb의 활성 차단 리간드
항체 PD-L1 IC90 (nM) PD-L2 IC90 (nM)
PD1-1 2.12 2.09
PD1-2 2.97 3.64
PD1-3 1.68 1.95
PD1-4 2.04 2.71
PD1-5 2.09 3.31
이 분석으로부터, 본 발명의 인간화 PD1 항체가 PD1에 대해 강력한 결합 특성을 나타내고, 또한 PD-1과 PD-L1 및 PD-L2의 상호 작용을 효과적으로 억제한다는 것이 명백하다.
실시예 4: 항-PD1 항체에 의한 항원-특이적 T 세포 반응의 자극
이어서 전술한 방법에 따라 제조된 인간화 항-PD1 항체를 파상풍 특이적 CD4 기억 T 세포의 사이토카인 생성을 자극하는 능력에 대해 시험하였다.
이 분석을 위해, 건강한 공여자로부터 유래된 PBMC로부터의 T 세포를 파상풍 톡소이드의 존재하에 확장시키고 파상풍 톡소이드를 로딩한 자가 성숙 수지상 세포 (DC)와 함께 2일 동안 공-배양하였다. 공-배양 단계를 본 발명의 대표적인 항-PD1 항체의 존재하에 유사한 방식으로 2회 반복하였다. 두 번째 공-배양 단계 끝에, 상등액을 ELISA에 의해 IFN-γ에 대해 분석하고 그 결과를 도 3에 나타내었다.
시험된 본 발명의 모든 PD1 항체는 IFN-감마 방출에 의해 측정된 바와 같이 매우 강력한 T 세포 활성화를 명백한 용량 의존 방식으로 나타낸다. 본 발명의 PD1 항체가 항-LAG3 항체와 결합되는 경우, 기준이 되는 선행 기술의 항-PD1 항체 조합과 비교할 때 우수한 활성을 관찰할 수 있었다 (실시예 12 및 도 8 참조).
실시예 5: 인간화된 항-PD1 모노클로날 항체의 에피토프 맵핑.
본 발명의 대표적인 항-PD1 항체 및 니볼루맵과 동일한 아미노산 서열을 갖는 기준 선행 기술 항체 분자의 에피토프를 항체 에피토프들의 개별 아미노산 수준에서 에피토프 차이를 나타내는 수소-중수소 교환 (HDX) 실험으로 분석하였다.
HDX 분석은 본 발명의 항-PD1 항체 및 기준 선행 기술 항체 분자가 인간 PD1의 유사 및 중첩 영역에 결합한다는 것을 보여 주었다. 그러나, 본 발명의 대표적인 PD1 항체는 표 4에 기재된 바와 같이 추가적인 서열 요소에 결합하므로, 에피토프는 동일하지 않다.
수소-중수소 교환 질량 분광법에 의한 항-PD1 항체 분자의 에피토프 맵핑
항체 PD-1 결합 영역
(aa *)		 에피토프
니볼루맵에 대한
기준 항체		 125-138 A125ISLAPKA Q I KES L **(서열번호 115)
PD1-3 80-95, 125-138 AAFPEDRSQPGQDCRF (서열번호 116)
A125ISLAPKA Q I KES L ** (서열번호 115)
* 넘버링에 사용된 PD1: GenBank AAO63583.1
** 결합에 관여하는 아미노산은 굵은 글씨체로 표시되어 있으며, 차이는 밑줄로 표시되었다.
실시예 6: hPD-1 녹인 마우스 모델에서 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 생체 내 효능
본 연구의 목적은 마우스 PD1의 세포 외 도메인을 인간 PD1의 상응하는 영역으로 대체한 유전적 변형을 포함하는 완전 면역성 마우스를 사용하여 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 효능을 측정하는 것이다. 이 실험에 사용된 마우스 C57BL/6NTac-PDCD1 tm(PDCD1)Arte 는 영국 옥스포드의 ISIS INNOVATION LIMITED에서 공급받았으며 이하 "hPD1 녹인 마우스"라고 한다.
MC-38 세포를 hPD1 녹인 (knock-in) 마우스의 옆구리에 피하 주사하고 세포 주사 후 6일째에 처리를 시작하였다. 마우스는 PBS, 아이소타입 대조군 또는 본 발명의 항-PD1 항체 분자를 주 2회 (q3or4d) 10 mg/kg의 용량으로 투여받았거나, PD1-3을 한 번만 투여받았다.
도 4는 MC38이 이식된 각각의 hPD1 녹인 마우스에 대한 시간 경과에 따른 종양 체적을 나타내고, 표 5는 세포 주사 후 23일째의 종양 성장 억제 (TGI) 및 연구 종료시 관찰된 완전한 반응을 요약한다.
완전 반응 (CR)은 (i) 종양 크기가 최초 측정과 같거나 더 작고, (ii) 잔류 담체 물질 (matrigel)의 육안 검사로 종양 조직을 나타내지 않는 경우로 정의된다. PD1-3의 단일 투약 계획은 주 2회 투약 계획과 비교하여 동등하고 강력한 항종양 효과 (TGI = 90%, 2마리의 마우스가 CR을 나타냄)를 나타냄을 입증할 수 있었다. 이 연구는 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 단일 용량으로도 효능을 달성하기에 충분하며, 이는 보다 긴 반감기의 결과일 수 있음을 보여준다.
PD1에 대한 TGI
TGI [%]
 CR [n/10]
PBS - 0
PD-1 아이소타입 12 0
PD1-3 (q3or4d) 83 3
PD1-3 (한 번) 90 2
실시예 7: 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 전임상 약물동력학.
본 발명의 항-PD1 항체 분자의 약물동력학 (PK) 특성을 사이노몰거스 원숭이에서 단일 용량 i.v. PK 연구로 결정하였다.
1 mg/kg i.v.의 용량으로 투여된 본 발명의 항-PD1 항체 분자는 0.28 ml/h/kg의 평균 혈장 클리어런스 (CL)를 나타내었다. PD1-3에 대한 평균 분포 용적 (Vss)은 58 ml/kg이었다. PD1-3의 평균 종말 반감기는 11일이었다.
사이노몰거스 원숭이에서 1 mg/kg에서 PD1-3의 AUC 및 cmax는 IgG4Pro PD-1 항체인 니볼루맵 (BMS-936558, Wang, C. et al., Cancer Immunol. Res. 2:846-856, 2014에서 공개됨) 및 펨브롤리주맵 (MK-3475, FDA BLA document 125514Orig1s000 Pharmacology Review, 2014에서 공개됨)의 대응 파라미터와 비교할만한 용량 범위에서 거의 동일하였다.
놀랍고도 예기치 않게도, PD1-3에 대해 관찰된 종말 반감기는 도 5에 나타낸 바와 같이 니볼루맵에 비해 1.5-2 배 더 높았다. 이는 본 발명의 항-PD1 항체가 11일의 혈청 반감기를 가짐을 제시한다. 이것은 전형적으로 0.3-3 mg/kg의 용량 범위에서 4 내지 6일의 반감기를 갖는 공지된 기준 항-PD1 항체 분자와 대조적이다. 본 발명의 항체 분자의 이러한 놀라운 특징은 환자를 본 발명의 항체 분자로 당해 기술 분야의 것보다 덜 빈번하게 투여하는 것이 가능하고, 이는 감소된 투여 빈도 또는 사용되는 항체의 감소된 양 중 어느 하나의 형태로 공급될 항체의 양을 감소시키는 것을 의미할 수 있다. 항-PD1 항체 분자가 상기에서 논의된 바와 같이 환자에게 원하지 않는 부작용을 유도할 수 있다는 것을 감안하면, 본 발명의 항-PD1 항체는 당해 기술에 비해 유의하고 놀라운 임상 이점을 가질 수 있다.
실시예 8: LAG3에 결합하는 마우스 항체의 동정
인간 LAG3 단백질의 세포 외 도메인 (ECD) (GenBank 수여 번호 NP_002277의 아미노산 23-450)을 합성하고 면역원으로서 제조하였다. 이어서 마우스를 면역화시킨 후 표준 실험실 면역화 기술에 따라 인간 LAG3 ECD 단백질로 부스팅시켰다.
이어서, 면역화된 마우스로부터 혈장을 수확하고, 충분한 역가의 항-LAG3 면역글로불린을 가진 개체를 스크리닝하였다. 표준 실험 방법에 따라, 선택된 마우스의 림프구를 수확하고 마우스 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마를 생성시켰다.
인간 LAG3에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하는 몇 개의 하이브리도마를 선택하고, 항체 가변 도메인을 단리하고 표준 PCR 프라이머 세트를 사용하여 클로닝하였다.
이 연구로부터, 인간 LAG3 (ECD)에 대해 낮은 nM의 결합 친화력을 나타내는 모노클로날 항체를 생산하는 496G6이라 명명된 뮤린 하이브리도마주를 동정하고 추가 연구를 위해 선택하였다.
496G6에 의해 생산된 모노클로날 항체의 가변 도메인의 아미노산 서열을 도 6에 나타내었다.
실시예 9: 인간화 항-LAG3 항체의 생성
이 실시예에서는, 실시예 8에 기술된 뮤린 하이브리도마주 496G6에 의해 생성된 모노클로날 항체의 인간화 유도체의 개발 방법 및 결과를 제공한다.
뮤린 496G6 하이브리도마의 V-유전자를 당 업계에 널리 공지된 PCR 및 시퀀싱 프로토콜에 따라 동정하였다. 그런 다음 V-유전자를 표준 분자 생물학 기숭을 사용하여 가장 가까이 일치하는 인간 생식계 유전자에 융합시켰다. 496G6의 경우, 이에 따라 마우스 Vk 및 Vh 아미노산 잔기가 인간 Ck 및 Ch1 아미노산 잔기에 융합된 키메라 뮤린/인간 항체가 생성되었다.
제조되었으면, 키메라 뮤린/인간 항체를 당 업계에 널리 공지된 표준 "인간화" 프로토콜에 적용하였다.이 방법에서는, 키메라 496G6 Fab 클론의 돌연변이화 아미노산 라이브러리를 제조하였다. 서열 장애 (즉, 면역원성이거나 잠재적인 제조 문제를 일으키는 것으로 알려진 아미노산 잔기)를 제거하도록 추가의 라이브러리 위치를 또한 제조하였다. 이 돌연변이화 라이브러리는 보통 V-영역 당 5-10 바이너리 (마우스 대 인간) 위치를 가진다. 좀 더 복잡한 V-영역의 특정 장애를 해결하기 위해 몇몇 소규모 라이브러리를 구축할 수 있다. 이러한 라이브러리는 당 업계의 표준 방법을 사용하여 제조되며 당업자가 용이하게 이용할 수 있다.
이 단계가 완료되고 나면, 원래의 뮤린 496G6 Fab 서열로부터 유래된 다수의 상이한 "인간화된" Fab를 제조하였다. 이들 인간화된 Fab에 대해 인간 LAG3에 결합하는 능력 및 MHCII와 LAG3의 상호 작용을 차단하는 능력을 시험하였다. 이어서, 상응하는 키메라 Fab와 동등하거나 더 우수한 성능을 수행하는 유전자 조작된 Fab를 선택하였다. 그들의 아미노산 서열을 인간 서열의 비율, 예상되는 면역원성 및 제거된 서열 장애에 대해 분석하였다.
가장 바람직한 인간화 Fab의 선택 후, 이들을 인간 IgG4 (Pro) 면역글로불린 포맷에 두었다. IgG4 (Pro)는 세린 241이 프롤린으로 변경됨으로써 표준 인간 IgG4 서열과 다르며, 이러한 변경은 IgG4 분자 사이의 동적 Fab 암 교환을 최소화하는 것으로 입증되었다.
이 연구를 완료하고 원래의 키메라 뮤린/인간 496G6 Fab의 5 가지 상이한 인간화 버전이 제조되었다. 이들은 LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4 및 LAG3-5로 칭하였다.
LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4, LAG3-5에 대한 CDR의 아미노산 서열, VH 및 VL 서열 및 전체 HC 및 LC 서열은 본 출원 명세서 마지막 표에 제시되어 있다. 오해를 피하기 위해, 항체와 그들의 서열번호 간 상호 관계를 또한 하기 표에 제시하였다:
본 발명의 항-LAG3 항체에 대한 서열번호
항-LAG3
항체		 CDR 서열 VH 서열 VL 서열 HC 서열 LC 서열
LAG3-1 39-44 51 52 61 62
LAG3-2 39-44 53 54 63 64
LAG3-3 39-44 55 56 65 66
LAG3-4 39-44 57 58 67 68
LAG3-5 45-50 59 60 69 70
실시예 10: 인간 LAG3에 결합하는 항체 및 LAG3 리간드 상호 작용의 차단
재조합 단량체 인간 LAG3에 대한 결합 친화력을 SPR을 사용하여 측정하였다.
LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4 및 LAG3-5 항체를 단백질 A/G 표면에 포획하였다. 인간 LAG3 ECD-Fc를 포획된 항체에 300초 동안 30 ul/분의 유속 및 1800sec 동안의 해리로 주입하였다. 인간 LAG3 ECD의 농도는 0 nM, 0.625 nM, 1.25 nM, 2.5 nM 및 5 nM이었다. 원 데이터에서 백그라운드를 뺀 다음 센서그램을 1:1 랭뮤어 (Langmuir) 결합에 전체적으로 맞춰 친화력 (KD) 값을 제공하였다.
상기 프로토콜을 사용하여 항체 LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4 및 LAG-3-5이 하기 표에 제시된 바와 같이 높은 친화력으로 인간 LAG-3에 결합하는 것으로 결정되었다.
재조합 인간 LAG3에 대한 결합 (Kd, nM)
항체 KD, nM
LAG3-1 0.125
LAG3-2 0.09
LAG3-3 0.12
LAG3-4 0.1
LAG3-5 0.07
본 발명의 LAG3 항체를, 그의 리간드 MHC II를 발현하는 Raji 세포에 대한 재조합 인간 LAG3 단백질의 결합을 차단하는 것에 대해 FACS를 사용하여 시험하였다. 인간 Fc에 융합된 재조합 인간 LAG3 세포 외 도메인 (hLAG3-hIgFc)을 실온 (RT)에서 LAG3 항체 LAG3-1, LAG3-2, LAG3-3, LAG3-4 및 LAG3-5와 함께 15분 동안 인큐베이션한 후, Raji 세포에 첨가하고, 4 ℃에서 30분 동안 추가 인큐베이션하였다. 세포를 3회 세척하였다. Raji 세포에 대한 HLAG3-mIgFc 결합을 PE 표지된 항-인간 IgG를 사용하여 검출하였다. HLAG3-mIgFc 결합 분석을 FACS Canto I (BD Bioscience)로 수행하였다. 그 결과는 도 7에 요약되어 있으며, 본 발명의 모든 LAG3 항체는 LAG3의 MHC II에 대한 결합을 선택적이면서 효과적으로 억제하는 것으로 입증되었다.
실시예 11: 인간화 항-LAG3 모노클로날 항체의 에피토프 맵핑.
본 발명의 대표적인 항-LAG3 항체 및 BMS-986016 (선행 기술의 기준 항-LAG3 항체 분자)과 동일한 아미노산 서열을 갖는 기준 항체 분자의 에피토프를 "경쟁 결합" 분석을 사용하여 분석하였다. 그 결과 LAG3에 대한 결합에 경쟁을 나타내지 않았고, 이는 본 발명의 항-LAG3 항체가 선행 기술의 기준 항-LAG3 항체 분자와 상이한 에피토프에 결합함을 나타낸다.
본 발명의 대표적인 항-LAG3 항체의 에피토프를 항체 에피토프들의 개별 아미노산 수준에서 에피토프 차이를 나타내는 수소-중수소 교환 (HDX) 실험으로 추가 정련하였다.
HDX 분석은 본 발명의 대표적인 항-LAG3 항체가 표 8에 기재된 바와 같이 인간 LAG3의 두 상이한 영역에 결합한다는 것을 보여 주었다.
수소-중수소 교환 질량 분광법에 의한 항-LAG3 mAb의 에피토프 맵핑
항체 LAG3 결합 영역 (aa*) 에피토프
LAG3-1 33-40 and 125-135 LLRRAGVT (서열번호 111) 및
YRAAVHLRDRA (서열번호 112)
* 넘버링에 사용된 LAG-3: GenBank NP_002277
실시예 12: 항-PD1 항체 및 항-LAG3 항체로 항원 특이적 T 세포 반응의 자극.
본 발명의 개별 항-PD1 및 항-LAG3 항체 및 이들 항체의 조합을 ELISA에 의해 파상풍 특이적 CD4 기억 T 세포의 사이토카인 생성을 자극하는 능력에 대해 시험하고, 선행 기술의 항-PD1 및 항-LAG3 항체와 비교하였다.
이 분석을 위해, 건강한 공여자 PBMC로부터의 T 세포를 파상풍 톡소이드의 존재하에 확장시키고 파상풍 톡소이드를 로딩한 자가 성숙 수지상 세포 (DC)와 함께 2일 동안 공-배양하였다. 공-배양 단계를 항-PD1, 항-LAG3 및 항-PD1과 항-LAG3 항체 분자의 조합물의 존재하에서 항-PD1 mAb (200 nM)의 양을 고정시키고 항-LAG3 항체의 양을 증가시켜 유사한 방식으로 2회 반복하였다. 두 번째 공-배양 단계를 마치고, 상등액을 IFN-γ 분비에 대해 분석하였다.
이 분석을 사용하여, 본 발명의 항-PD1 및 항-LAG3 항체의 조합을, 니볼루맵 (Opdivo (R)) (PD1 mAb) + 4명의 다른 공여자에서의 BMS-986016와 동일한 아미노산 서열을 갖는 항체 (LAG3 mAb)와 비교하였다. 증가하는 양의 항-LAG3 항체를 고정된 용량의 항-PD1 mAb와 조합 사용하였다. 제시된 데이터를 100%로 표시된 포화 농도에서 사용된 항-PD1 항체로 표준화하고, 그 결과를 도 8에 나타내었다.
이 데이터는 본 발명의 항-PD1 항체 및 항-LAG3 항체의 조합이 항-PD1 mAb 단독에 비해 IFN-감마 생산의 1.5-2배 증가를 유도한다는 것을 입증한다. 놀랍게도, 본 발명의 항-PD1 및 항-LAG3 항체의 조합은 선행 기술의 항-PD1 및 항-LAG3 항체의 것보다 우수하다.
또한, 매우 낮은 항-LAG3 mAB 수준에서 IFN-감마 분비 수준이 매우 높은 것으로 알 수 있는 바와 같이, 데이터는 4명의 공여자 중 3명에게서 항-PD1-3 (본 발명의 대표적인 PD1 항체)이 니볼루맵 (Opdivo (R) 보다 우수하다고 나타내었다 (도 8).
인식할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 항-LAG3 항체 분자와 본 발명의 항-PD1 항체 분자의 조합의 이러한 우월성은 이들이 선행 기술의 항체 치료제보다 낮은 용량 수준에서 암을 치료할 수 있고 따라서 원치 않는 부작용을 덜 나타내는 치료적 응용을 가능케 할 수 있음을 시사한다.
항-PD1 및 항-LAG3 항체 분자가 상기 논의한 바와 같이 환자에서 바람직하지 않은 부작용을 유도할 수 있음을 감안한다면, 본 발명의 항-PD1 항체 및 항-LAG3 항체는 낮은 투여량 및/또는 덜 빈번한 투여 체제를 사용함으로써 선행 기술에 비해 유의적이고 놀라운 임상적 이점을 가질 수 있다.
실시예 13: 동계 종양 모델에서 항-PD1 및 항-LAG3 항체의 조합 치료의 생체 내 효능
본 발명의 항-PD1 항체 및 항-LAG3 항체의 조합 치료가 생체 내에서 우수한 효능으로 이어지는지를 시험하기 위해, 여러 전임상 종양 모델을 항-PD1 및 항-LAG3 항체로 처리하였다. 모든 마우스 종양 세포주 (MC38, Colon-26 결장암, B16F10 흑색종, LL/2 (LLC1) Lewis 폐암 및 4T1 유방암)를 마우스 종양 세포주의 기원에 따라 C57BL/6 또는 BALB/c에 피하 주사하였다. 세포 주사 후 3일째에, 마우스를 매주 2회 투여로 복강 내 (ip) 처리하였다. 모든 항체는 10 mg/kg로 투여되었고, 본 발명의 항-LAG3 및 항-PD1 항체의 조합은 각각 10 mg/kg으로 투여되었다. 본 연구에 사용된 항체는 모두 미국 뉴햄프셔주 웨스트 레바논 소재의 BioXCell에서 입수한 것이다. 대조군은 래트 IgG2a 항체 (클론 2A3)로 처리하였고, 사용된 항-PD1 항체는 래트 IgG2a Fc 부분 (클론 RMP1-14)을 가지며 연구에 사용된 항-LAG3는 래트 IgG1 Fc 부분 (클론 C9B7W)을 가졌다. 종양 크기를 2차원 (길이×폭)으로 주당 적어도 3회 측정하고, 종양 체적을 계산하였다. 종양 용적이 1500 mm3에 도달하거나 종양이 궤양을 일으키면 동물을 안락사시켰다.
표 9 및 도 9에 요약된 TGI 및 CR의 결과는 개별 마우스에 대한 시간 경과에 따른 종양 용적을 나타낸다. 결론적으로, 본 연구는 항-PD1 처리 단독이 MC 38에서 효능을 나타내었지만 시험된 다른 모델에서는 그렇지 않음을 보여준다. 그러나, LL/2 모델을 제외하고, 본 발명의 항-PD1 항체 및 항-LAG3 항체의 조합 치료는 항-PD1 단독 요법의 효능을 실질적으로 개선시켰으며, 몇몇 마우스는 MC-38, Colon-26 및 4T1 모델에서 연구 종료 시점에 종양이 없었다. 특히, PD1 내성 4T1 모델에서 이 조합은 5 마리 마우스 중 3 마리가 종양이 완전히 없는 것으로 나타남으로써 종양 증식에 우수한 효과를 나타낸 것으로 관찰되었다.
시험한 모든 동계 모델의 종양 증식 억제에 대한 요약
세포주 MC38 B16-F10 LL/2 (LLC1) Colon-26 4T1
마우스 종 C57BL/6 C57BL/6 C57BL/6 BALB/c BALB/c
TGI 계산일 19 22 22 24 31
PD1에 대한 TGI [%] 81 38 0 42 5
LAG3에 대한 TGI [%] 47 시험되지 않음 시험되지 않음 시험되지 않음 시험되지 않음
PD1 + LAG3에 대한 TGI [%] 99 58 29 99 99
PD1에 대한 CR 1 (10) 0 (10) 0 (10) 1 (10) 0 (10)
LAG3에 대한 CR 0 (10) 시험되지 않음 시험되지 않음 시험되지 않음 시험되지 않음
PD-1 + LAG3에 대한 CR 4 (10) 0 (10) 0 (10) 3 (5) 3 (5)
실시예 14: s.c. 투여를 위한 약학적 제형
본 발명의 상기 임의의 항체 분자를 다음과 같은 조성을 갖는 피하 적용을 위한 약학적 제형의 제조용으로 선택할 수 있다:
약 물질: 100 mg/ml (1 내지 3 nmol/ml)
아세트산염 완충액 : 25 mM
트레할로스: 220 mM
Tween-20: 0.02%
약 물질을 상기 조성을 가지는 용액으로 제형화하고 멸균처리하여 2 내지 8 ℃에서 저장하였다.
실시예 15: i.v. 투여를 위한 약학적 제형
본 발명의 상기 임의의 항체 분자를 i.v. 적용을 위한 약학적 제형의 제조용으로 선택할 수 있다. 본 발명의 항체에 적합한 약학적 제형의 일례는 다음과 같다.
21.5 mM 아세트산나트륨, 3.5 mM 아세트산, 240 mM 트레할로스, 0.67 mM L-메티오닌, 0.04% w/v 폴리소르베이트 및 주사용수 (WFI)로 이루어진 완충액 중에 본 발명의 항-PD1 항체가 20 mg/mL로 20 mL 바이알에 함유되어 있다.
25 mM 아세테이트, 240 mM 트레할로스, 0.67 mM 메티오닌, 0.04% (w/v) 폴리소르베이트 20, pH 5.5 및 주사용수 (WFI)로 이루어진 완충액 중에 본 발명의 항-LAG3 항체가 20 mg/mL로 20 mL 바이알에 함유되어 있다.
실시예 16: 사람에서의 약학적 사용
상기 실시예 15에 기술된 용액이 이를 필요로 하는 환자, 예컨대 암을 앓고 있는 사람에게 2 내지 4주마다 정맥 내 주입 (100 내지 200 mg의 용량)으로 적용된다.
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Figure pat00028
SEQUENCE LISTING <110> Boehringer Ingelheim International GmbH <120> Antibodies <130> P12-0402 <160> 118 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Ala Ser Ala Met Ser 1 5 10 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 2 Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Ser Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 3 His Ser Asn Val Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 4 Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Thr Ser Gly Ile Ser Phe Met Asn 1 5 10 15 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 5 Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR sequence <400> 6 Gln Gln Ser Lys Glu Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> 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tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccacc 255 <210> 97 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 97 caggtgaccc tggtggagag cggcggcggc gtcgtgcagc caggccgcag cctgcgcctg 60 agctgcgctt tcagcggctt cagcctcagc accagcgaca tgggcgtggg ctggatccgc 120 caagccccag gcaagggcct ggagtgggtg gcccacatct ggtgggacga cgtgaagcgc 180 tacaacccag ccctgaagag ccgctttacc atcagccgcg acaacagcaa gaacaccctg 240 tacctgcaaa tgaac 255 <210> 98 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 98 gacatccaga tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgagc 60 atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccacc 255 <210> 99 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 99 caggtcaccc tgaaggagag cggcccaacc ctggtgaagc caacccagac cctgaccctg 60 acctgcagct tcagcggctt ctccctgagc accagcgaca tgggcgtggg ctggattcgc 120 caaccaccag gcaaggccct ggagtggctg gcccacatct ggtgggacga cgtgaagcgc 180 tacaacccag ccctgaagag ccgcctgacc atcaccaagg acaccagcaa gaaccaggtg 240 gtgctgacca tgacc 255 <210> 100 <211> 255 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 100 gacatccaga tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgagc 60 atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccgtg 255 <210> 101 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 101 caggtcaccc tgaaggagag cggcccaacc ctggtgaagc caacccagac cctgaccctg 60 acctgcagct tcagcggctt ctccctgagc accagcgaca tgggcgtggg ctggattcgc 120 caaccaccag gcaaggccct ggagtggctg gcccacatct ggtgggacga cgtgaagcgc 180 tacaacccag ccctgaagag ccgcctgacc atcaccaagg acaccagcaa gaaccaggtg 240 gtgctgacca tgaccaacat ggacccagtg gacaccgcca cctacttctg cgcccgcatc 300 gaggactacg gcgtgagcta ctacttcgac tactggggcc agggcaccac cgtgaccgtg 360 agcagcgcct ccacaaaggg cccttccgtg ttccccctgg ccccttgctc ccggtccacc 420 tccgagtcta ccgccgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcccgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc cctgacctcc ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 540 tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgaccgtgc cctcctctag cctgggcacc 600 aagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660 gaatctaagt acggccctcc ctgccccccc tgccctgccc ctgaatttct gggcggaccc 720 tccgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 780 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccag gaagatcccg aggtccagtt taattggtac 840 gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccca gagaggaaca gttcaactcc 900 acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 960 tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg ccctccagca tcgaaaagac catctccaag 1020 gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc ctccaagcca ggaagagatg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtcaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1140 gtggaatggg agtccaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctgtactct cggctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1260 gaaggcaacg tcttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320 aagtccctgt ccctgagcct gggc 1344 <210> 102 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 102 gacatccaga tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacc 60 ttcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacagca tcccactgac ctttggccag 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc aattgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 103 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 103 caggtgaccc tggtggagag cggcggcggc gtcgtgcagc caggccgcag cctgagcctg 60 agctgcgctt tcagcggctt cagcctcagc accagcgaca tgggcgtggg ctgggtccgc 120 caaccaccag gcaagggcct ggagtgggtg gcccacatct ggtgggacga cgtgaagcgc 180 tacaacccag ccctgaagag ccgctttacc atcagccgcg acaacagcaa gaacaccctg 240 tacctgcaaa tgaacagcct gcgcgccgag gacaccgcca cctactactg cgcccgcatc 300 gaggactacg gcgtgagcta ctacttcgac tactggggcc agggcaccac cgtgaccgtg 360 agcagcgcct ccacaaaggg cccttccgtg ttccccctgg ccccttgctc ccggtccacc 420 tccgagtcta ccgccgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcccgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc cctgacctcc ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 540 tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgaccgtgc cctcctctag cctgggcacc 600 aagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660 gaatctaagt acggccctcc ctgccccccc tgccctgccc ctgaatttct gggcggaccc 720 tccgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 780 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccag gaagatcccg aggtccagtt taattggtac 840 gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccca gagaggaaca gttcaactcc 900 acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 960 tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg ccctccagca tcgaaaagac catctccaag 1020 gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc ctccaagcca ggaagagatg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtcaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1140 gtggaatggg agtccaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctgtactct cggctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1260 gaaggcaacg tcttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320 aagtccctgt ccctgagcct gggc 1344 <210> 104 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 104 gacatccaga tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacg 60 atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacagca tcccactgac ctttggcgcc 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc aattgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 105 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 105 caggtgaccc tggtggagag cggcggcggc gtcgtgcagc caggccgcag cctgcgcctg 60 agctgcgctt tcagcggctt cagcctcagc accagcgaca tgggcgtggg ctggatccgc 120 caagccccag gcaagggcct ggagtgggtg gcccacatct ggtgggacga cgtgaagcgc 180 tacaacccag ccctgaagag ccgctttacc atcagccgcg acaacagcaa gaacaccctg 240 tacctgcaaa tgaacagcct gcgcgccgag gacaccgcca cctacttctg cgcccgcatc 300 gaggactacg gcgtgagcta ctacttcgac tactggggcc agggcaccac cgtgaccgtg 360 agcagcgcct ccacaaaggg cccttccgtg ttccccctgg ccccttgctc ccggtccacc 420 tccgagtcta ccgccgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcccgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc cctgacctcc ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 540 tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgaccgtgc cctcctctag cctgggcacc 600 aagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660 gaatctaagt acggccctcc ctgccccccc tgccctgccc ctgaatttct gggcggaccc 720 tccgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 780 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccag gaagatcccg aggtccagtt taattggtac 840 gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccca gagaggaaca gttcaactcc 900 acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 960 tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg ccctccagca tcgaaaagac catctccaag 1020 gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc ctccaagcca ggaagagatg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtcaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1140 gtggaatggg agtccaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctgtactct cggctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1260 gaaggcaacg tcttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320 aagtccctgt ccctgagcct gggc 1344 <210> 106 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 106 gacatcgtga tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgacc 60 atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacagca tcccactgac ctttggccag 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc aattgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 107 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 107 caggtgaccc tggtggagag cggcggcggc gtcgtgcagc caggccgcag cctgcgcctg 60 agctgcgctt tcagcggctt cagcctcagc accagcgaca tgggcgtggg ctggatccgc 120 caagccccag gcaagggcct ggagtgggtg gcccacatct ggtgggacga cgtgaagcgc 180 tacaacccag ccctgaagag ccgctttacc atcagccgcg acaacagcaa gaacaccctg 240 tacctgcaaa tgaacagcct gcgcgccgag gacaccgccg tgtacttctg cgcccgcatc 300 gaggactacg gcgtgagcta ctacttcgac tactggggcc agggcaccac cgtgaccgtg 360 agcagcgcct ccacaaaggg cccttccgtg ttccccctgg ccccttgctc ccggtccacc 420 tccgagtcta ccgccgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcccgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc cctgacctcc ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 540 tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgaccgtgc cctcctctag cctgggcacc 600 aagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660 gaatctaagt acggccctcc ctgccccccc tgccctgccc ctgaatttct gggcggaccc 720 tccgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 780 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccag gaagatcccg aggtccagtt taattggtac 840 gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccca gagaggaaca gttcaactcc 900 acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 960 tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg ccctccagca tcgaaaagac catctccaag 1020 gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc ctccaagcca ggaagagatg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtcaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1140 gtggaatggg agtccaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctgtactct cggctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1260 gaaggcaacg tcttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320 aagtccctgt ccctgagcct gggc 1344 <210> 108 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 108 gacatccaga tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgagc 60 atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacagca tcccactgac ctttggccag 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc aattgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 109 <211> 1344 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 109 caggtcaccc tgaaggagag cggcccaacc ctggtgaagc caacccagac cctgaccctg 60 acctgcagct tcagcggctt ctccctgagc accagcgaca tgggcgtggg ctggattcgc 120 caaccaccag gcaaggccct ggagtggctg gcccacatct ggtgggacga cgtgaagcgc 180 tacaacccag ccctgaagag ccgcctgacc atcaccaagg acaccagcaa gaaccaggtg 240 gtgctgacca tgaccaacat ggacccagtg gacaccgcca cctacttctg cgcccgcatc 300 gtggactacg gcgtgagcta ctacttcgac tactggggcc agggcaccac cgtgaccgtg 360 agcagcgcct ccacaaaggg cccttccgtg ttccccctgg ccccttgctc ccggtccacc 420 tccgagtcta ccgccgctct gggctgcctg gtcaaggact acttccccga gcccgtgacc 480 gtgtcctgga actctggcgc cctgacctcc ggcgtgcaca ccttccctgc tgtgctgcag 540 tcctccggcc tgtactccct gtcctccgtc gtgaccgtgc cctcctctag cctgggcacc 600 aagacctaca cctgtaacgt ggaccacaag ccctccaaca ccaaggtgga caagcgggtg 660 gaatctaagt acggccctcc ctgccccccc tgccctgccc ctgaatttct gggcggaccc 720 tccgtgttcc tgttcccccc aaagcccaag gacaccctga tgatctcccg gacccccgaa 780 gtgacctgcg tggtggtgga cgtgtcccag gaagatcccg aggtccagtt taattggtac 840 gtggacggcg tggaagtgca caacgccaag accaagccca gagaggaaca gttcaactcc 900 acctaccggg tggtgtccgt gctgaccgtg ctgcaccagg actggctgaa cggcaaagag 960 tacaagtgca aggtgtccaa caagggcctg ccctccagca tcgaaaagac catctccaag 1020 gccaagggcc agccccgcga gccccaggtg tacaccctgc ctccaagcca ggaagagatg 1080 accaagaacc aggtgtccct gacctgtctg gtcaagggct tctacccctc cgatatcgcc 1140 gtggaatggg agtccaacgg ccagcccgag aacaactaca agaccacccc ccctgtgctg 1200 gactccgacg gctccttctt cctgtactct cggctgaccg tggacaagtc ccggtggcag 1260 gaaggcaacg tcttctcctg ctccgtgatg cacgaggccc tgcacaacca ctacacccag 1320 aagtccctgt ccctgagcct gggc 1344 <210> 110 <211> 642 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Antibody chain <400> 110 gacatccaga tgacccagag ccctagcttc ctgagcgcca gcgtcggcga ccgcgtgagc 60 atcacctgca aggccagcca ggacgtgagc accgccgtcg cctggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc caaagctgct gatctacagc gccagctacc gctacaccgg cgtgccagac 180 cgcttcagcg gcagcggcag cggcaccgac ttcaccctga ccatcagcag cctgcaacca 240 gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagcag cactacagca tcccactgac ctttggccag 300 ggcaccaagc tggagatcaa gcgtactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 360 tctgatgagc aattgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420 cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480 gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540 ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600 ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642 <210> 111 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope sequence <400> 111 Leu Leu Arg Arg Ala Gly Val Thr 1 5 <210> 112 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope sequence <400> 112 Tyr Arg Ala Ala Val His Leu Arg Asp Arg Ala 1 5 10 <210> 113 <211> 111 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 113 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Gln Arg Ala Thr Met Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asn Ile Asp Asn Ser 20 25 30 Gly Ile Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Lys Leu Leu Ile Tyr Val Ala Ser Asn Gln Gly Ser Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Arg Leu Thr Ile His 65 70 75 80 Pro Leu Glu Glu Asp Asp Thr Ala Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys 85 90 95 Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 114 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 114 Glu Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ser 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Arg Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Gly Asp Thr Tyr Tyr Ser Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asp Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu His Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu His Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg His Ser Asn Ser Asn Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 115 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope sequence <400> 115 Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu 1 5 10 <210> 116 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Epitope sequence <400> 116 Ala Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe 1 5 10 15 <210> 117 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 117 Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Ser Phe Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala 65 70 75 80 Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Ile Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 118 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Immunoglobulin domain <400> 118 Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser Gln 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30 Asp Met Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45 Trp Leu Ala His Ile Trp Trp Asp Asp Val Lys Arg Tyr Asn Pro Ala 50 55 60 Leu Lys Ser Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Ser Ser Gln Val 65 70 75 80 Phe Leu Met Ile Ala Ser Val Asp Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Phe 85 90 95 Cys Ala Arg Ile Glu Asp Tyr Gly Val Ser Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser 115 120

Claims (30)

  1. 아미노산 서열 LLRRAGVT(서열번호 111) 및 아미노산 서열 YRAAVHLRDRA(서열번호 112)로부터 선택되는 적어도 하나를 포함하는 인간 LAG3의 에피토프에 결합하는 항-LAG3 항체 분자.
  2. 제1항에 있어서,
    (a) 서열번호 39(hcCDR1), 서열번호 40(hcCDR2) 및 서열번호 41(hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 42(lcCDR1), 서열번호 43(lcCDR2) 및 서열번호 44(lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR; 또는
    (b) 서열번호 45(hcCDR1), 서열번호 46(hcCDR2) 및 서열번호 47(hcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 CDR 및 서열번호 48(lcCDR1), 서열번호 49(lcCDR2) 및 서열번호 50(lcCDR3)의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 CDR;을 포함하는,
    항-LAG3 항체 분자.
  3. 제1항에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA 및 IgE 불변 영역으로 구성된 군으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항-LAG3 항체 분자.
  4. 제3항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 IgG4인, 항-LAG3 항체 분자.
  5. 제3항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 S241P 돌연변이를 갖는 IgG4인, 항-LAG3 항체 분자.
  6. 제1항에 있어서,
    - 서열번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 또는
    - 서열번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 또는
    - 서열번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 또는
    - 서열번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인, 또는
    - 서열번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 서열번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 가지는,
    항-LAG3 항체 분자.
  7. 제1항에 있어서,
    - 서열번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 또는
    - 서열번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 또는
    - 서열번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 또는
    - 서열번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄, 또는
    - 서열번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 가지는,
    항-LAG3 항체 분자.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 분자의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인으로부터 선택되는 적어도 하나를 코딩하는, 단리된 핵산 분자.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 분자의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인으로부터 선택되는 적어도 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 함유하는, 발현 벡터.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 분자의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인으로부터 선택되는 적어도 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 함유하는 발현 벡터로 형질감염된, 숙주 세포.
  11. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 분자의 형성을 허용하는 조건하에서, 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 분자의 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인으로부터 선택되는 적어도 하나를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자를 함유하는 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포를 배양하는 단계, 및
    - 상기 항체 분자를 회수하는 단계;를 포함하는,
    제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항체 분자의 제조 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 항체 분자를 정제하는 단계 및 선택적으로 상기 항체 분자를 약학적 조성물로 제형화하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  13. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-LAG3 항체 분자를 포함하는 암 치료용 약제.
  14. 제13항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암(NSCLC), 소세포 폐암(SCLC), 육종, 암종, 및 조혈계 암으로 구성된 군으로부터 선택되는, 약제.
  15. 제13항에 있어서, 항-PD1 항체 분자 또는 항-PDL1 항체 분자와 병용하여 투여되는 약제.
  16. 제15항에 있어서, 상기 항-PD1 항체 분자가 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 약제:
    - 펨브롤리주맵,
    - 니볼루맵,
    - 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자, 및
    서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자.
  17. 제15항에 있어서, 상기 항-PDL1 항체 분자가 아테졸리주맵, 아벨루맵 및 듀발루맵으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 약제.
  18. 제15항에 있어서, 상기 항-PD1 항체 분자 또는 상기 항-PDL1 항체 분자와 동시에, 동반하여, 순차적으로, 연속적으로, 교대로, 또는 별도로 투여되는, 약제.
  19. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-LAG3 항체 분자 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 암 치료용 약학적 조성물.
  20. 제19항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암(NSCLC), 소세포 폐암(SCLC), 육종, 암종, 및 조혈계 암으로 구성된 군으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  21. 제19항에 있어서, 항-PD1 항체 분자 또는 항-PDL1 항체 분자와 병용하여 투여되는 약학적 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 상기 항-PD1 항체 분자가 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 약학적 조성물:
    - 펨브롤리주맵,
    - 니볼루맵,
    - 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자, 및
    서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자.
  23. 제21항에 있어서, 상기 항-PDL1 항체 분자가 아테졸리주맵, 아벨루맵 및 듀발루맵으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  24. 제19항에 있어서, 항-PD1 항체 분자 또는 항-PDL1 항체 분자를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
  25. 제24항에 있어서, 상기 항-PD1 항체 분자가 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 약학적 조성물:
    - 펨브롤리주맵,
    - 니볼루맵,
    - 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자, 및
    서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자.
  26. 제24항에 있어서, 상기 항-PDL1 항체 분자가 아테졸리주맵, 아벨루맵 및 듀발루맵으로 구성된 그룹으로부터 선택되는, 약학적 조성물.
  27. 제19항에 있어서, 하나 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
  28. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 항-LAG3 항체 분자 및 하기로 구성된 그룹으로부터 선택되는 항체 분자를 포함하는, 암 치료용 부품 키트(kit of parts):
    - 펨브롤리주맵,
    - 니볼루맵,
    - 아테졸리주맵,
    - 아벨루맵,
    - 듀발루맵,
    - 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자,
    - 서열번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자, 및
    서열번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 갖는 항체 분자.
  29. 제28항에 있어서, 상기 암이 비소세포 폐암(NSCLC), 소세포 폐암(SCLC), 육종, 암종, 및 조혈계 암으로 구성된 군으로부터 선택되는, 부품 키트.
  30. 제28항에 있어서, 하나 이상의 추가의 치료제를 추가로 포함하는 부품 키트.
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