KR20200096807A - 프로바이오틱스 조성물 및 그 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은, 피부에 발생하는 장애, 특히 염증성 장애, 특히 아토피 피부염과 같은 자가염증성 피부 장애를 예방 및/또는 치료하는 목적으로 사용될, 프로바이오틱스, 바람직하게는 박테리아, 특히 락토바실러스 속 박테리아를 기반으로 하는 프로바이오틱스를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명의 조성물은 UV 방사선에 의해 유발되는 손상, 특히 피부 노화를 예방 및/또는 완화하기 위해 사용가능하다.

Description

프로바이오틱스 조성물 및 그 용도
본 발명은, 피부에 발생하는 장애, 특히 염증성 장애, 특히 아토피 피부염과 같은 자가염증성 피부 장애를 예방 및/또는 치료하는 목적으로 사용될, 프로바이오틱스, 바람직하게는 박테리아, 특히 락토바실러스 속 박테리아를 기반으로 하는 프로바이오틱스를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명의 조성물은 UV 방사선에 의해 유발되는 손상, 특히 피부 노화를 예방 및/또는 경감하기 위해 사용가능하다.
인간의 피부에는 풍부한 미생물총 (microbiome, microbiota)이 서식하고 있다. 과거에 이러한 측면이 잠재적인 감염원인 것으로 여겨졌지만, 오늘날에는 피부 병원체의 부착 및 진행을 억제하는 능력뿐 아니라 면역계와 소통하여 상호작용하는 능력으로 인해, 일반적으로 인간 미생물총, 즉 피부 미생물총이 숙주에서 중요하고 유용한 기능을 수행하는 것으로 인식되고 있다.
피부에서 미생물총 불균형 (dysbiosis)이 발생하면, 프로바이오틱스가 모듈레이터로서 작용하여, 피부 미생물총의 균형을 회복할 수 있다.
과거 10년간, 새로운 기술의 사용으로, 25개 이상의 문에 속하는 미생물 약 1010개의 종에 달할 수 있는 박테리아 집단을 가진, 피부 미생물총의 분류 분석이 용이해졌으며, 이중 가장 대표적인 것이 액티노박테리아 (Actinobacteria), 퍼미큐티스 (Firmicutes) 및 프로테오박테리아 (Proteobacteria)이다. 다양한 피부 질환들이 피부 미생물총의 변형과 연관되어 있다.
예를 들어, 여드름의 경우, 프로피오니박테리움 아크네스 (P. acnes)가 이와 주로 관련된 박테리아로 간주되는데; 이러한 병태에서, 실제 피지 생산 증가가 이 박테리아가 증식하는데 최적의 환경을 제공해준다.
이러한 문제에 대한 일반적인 접근 방식은 항-박테리아제, 즉 국소 살균제 및 항생제를 사용하는 것이다.
한편, 항생제는 의심의 여지없이 효과적이지만, 유익한 박테리아를 제거하는 것 외에도, 민감화 (sensitization) 및 잠재적인 부작용 위험성을, 특히 광범위 항생제를 장기 사용할 경우에 가지고 있다.
이러한 이유로, 본 출원인은, 피부 미생물총의 균형을 회복하기 위한 새로운 해법으로서, 특히 락토바실러스 속에 속하는 박테리아의 사용에 기반한 프로바이오틱 조성물의 사용을 알게 되었다. 실제, 본 출원인은, 락토바실러스 속에 속하는 프로바이오틱스를 포함하는 조성물이 정확하게는 프로피오니박테리움 아크네스와 같이 피부에 위험한 박테리아의 작용을 예방하거나 또는 임의 경우에 완화할 수 있으며, 따라서
1) 피부에 발생하는 장애를 예방 및/또는 치료하는데 기여할 수 있으며;
2) 정상적인 치유 과정을 촉진할 수 있으며; 및
3) 정상적인 재상피화 및/또는 흉터형성 과정을 촉진 및/또는 개선할 수 있다는 것을 알게 되었다.
본 발명은 아래에서 상세히 설명되며, 첨부된 도면을 참조하여 예를 들어 예시된다.
- 도 1은 하기와 같이 살아있는 생활성 세포의 부착 % 측면에서 프로피오니박테리움 아크네스의 부착성을 그래프로 도시한 것이다:
ㆍ 1a: 각질 형성 세포에 시험 프로바이오틱스의 접촉에 의한 예비-자극;
ㆍ 1b: 각질 형성 세포와 프로피오니박테리움 아크네스 및 시험 프로바이오틱스의 공-배양;
ㆍ 1c: 진핵생물 세포에 병원체 감염 후 시험 프로바이오틱스와 각질 형성 세포의 배양.
프로바이오틱스에 의한 자극이 없는 조건에서 프로피오니박테리움 아크네스의 부착성을 100으로 하였을 때, 양성 대조군 대비 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 감소 %로 검사 균주의 저해능을 나타내었다. 특히, 도 1은 프로피오니박테리움 아크네스의 부착을 비슷한 %로 방지하는 프로바이오틱 균주들의 부착력을 나타낸다 (락토바실러스 카세이 DG® 42%, 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01 35%).
도 1b는 균주 락토바실러스 카세이 DG®의 부착 저해력이 17%인 반면 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 9%임을 도시한 것이다. 이들 균주를 혼합한 경우 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 저해력은 통계학적으로 유의한 수준이었으며, 균주 단독 및 각각의 효과를 합한 경우보다 명백하게 높은 %인 42%가 관찰되었다.
도 1c는 프로피오니박테리움 아크네스의 부착력을 42%까지 감소시킬 수 있음을 보여주는 2종의 프로바이오틱스의 혼합물에서 관찰된 통계학적으로 유의한 상승효과를 도시한 것이다. 이와는 대조적으로, 각각의 프로바이오틱스는 락토바실러스 카세이 DG의 경우 18% 및 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01 11%로, 혼합물의 절반보다 낮은 부착 감소력을 나타내었다.
- 도 2는 ELISA 검사로 수득한 상층액 ml 당 피코그램 (pg)으로 나타낸, 세포의 상층액에서 사이토카인 IL-10, IL-1β, IL-8 및 TSLP에 대한 분석 결과를 도시한 그래프이다.
본 발명의 일 측면은 장애 및/또는 병태, 바람직하게는 피부에 발생하는 염증성 타입의, 바람직하게는 피부학적 타입의 장애 및/또는 병태를 치료 및/또는 예방하는데 사용하기 위한, 프로바이오틱스, 바람직하게는 하나 이상의 프로바이오틱 박테리아를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
피부에 발생하는 장애 및/또는 병태는 잠재적으로 자극 및 찰과상과 연관된 피부염, 여드름, 감염, 피부 염증, 홍반, 궤양, 건선, 아토피성 피부염, 귀 염증, 균열 (rhagades), 누공, 치질, 진행성 염증 과정을 수반한 또는 수반하지 않는 임의의 기타 피부 장애 또는 병변 및/또는 이들의 조합 및/또는 합병증 및/또는 결과로부터 선택된다.
피부에 발생하는 장애 및/또는 병태는 바람직하게는 병원체와 관련있거나 또는 병원체에 의해 유발된다. 즉, 본 조성물은 특히 예방적/예방학적 목적뿐 아니라 치료/치료학적 목적으로 효과적이며, 즉 병원체로 감염된 후에 효과적이다.
본 발명의 바람직한 측면에서, 조성물은 또한 상처 치유 과정 및/또는 재상피화 및/또는 흉터형성 과정에 유익하거나/과정을 용이하게 하거나/과정을 촉진하거나/과정을 가속화할 수 있다.
이러한 병원체는 바람직하게는 박테리아, 진균, 효모, 바이러스 및 이들의 조합으로부터 선택된다.
이러한 병원체는 바람직하게는 박테리아들로부터 선택되며, 박테리아 병원체는 바람직하게는 프로피오니박테리움 (Propionibacterium) 속, 바람직하게는 아크네스 종; 스타필로코커스 (Staphylococcus) 속, 바람직하게는 에피더미디스, 아우레우스, 와르네리 (warneri), 피오게네스, 미티스 종; 코리네박테리움 속 (Corynebacterium ssp.); 슈도모나스 (Pseudomonas) 속, 바람직하게는 에어루지노사 종; 아시네토박터 (Acinetobacter) 속, 바람직하게는 존소니 종; 스트렙토코커스 속, 바람직하게는 피오게네스 종; 마이크로코커스 속 (Micrococcus ssp.) 및 브레비박테리움 속 (Brevibacterium ssp.)으로부터 선택된다.
아울러, 하기에서 상세히 기술된 프로바이오틱스, 바람직하게는 하나 이상의 프로바이오틱 박테리아를 포함하는 조성물은 피부 및/또는 입술 및/또는 결막을 UV 방사선, UV-A 및/또는 UV-B로부터 보호하기 위한 것으로 기술된다. 다시 말해, 조성물은 UV 방사선, UV-A 및/또는 UV-B에의 노출로 인한/노출과 관련된 손상 및/또는 작용을 예방 및/또는 완화하기 위한 것으로 기술된다. 조성물은 바람직하게는 피부 노화를 방지 및/또는 완화하기 위한 것으로 기술된다.
이러한 관점에서, 하기에서 상세히 기술된 프로바이오틱스, 바람직하게는 하나 이상의 프로바이오틱 박테리아를 포함하는 조성물은 미용학적 (cosmetic) 목적을 가진다. 조성물의 용도는, 바람직하게는, 조성물에 함유된 프로바이오틱스, 바람직하게는 후술한 바와 같이 정의 및 기술된 프로바이오틱스의 면역조절 작용과 관련있거나/이로 인한 것이다. 면역조절은 조절 (modulation), 바람직하게는 조혈 사이토카인, 바람직하게는 조혈 성장인자 및/또는 CSF; 일차 염증성 사이토카인, 바람직하게는 IL-1 및/또는 TNF; 항-염증성 및/또는 면역억제 사이토카인, 바람직하게는 IL-10 및/또는 TGF-β; 2차 염증성 사이토카인 (케모카인); 특이적인 면역 반응을 조절하는 사이토카인, 바람직하게는 IL-2, 및 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 사이토카인의 발현 저하를 포함한다. 면역조절은, 바람직하게는 조절, 바람직하게는 IL-1β, IL-10, IL-8, TSLP 및 이들의 조합으로부터 선택되는 한 이상의 사이토카인의 발현 저하를 포함한다.
이와 관련하여, 사이토카인이 면역계의 세포들 간의, 그리고 이와 다양한 장기 및 조직들 간의 교류 신호로서 작용하는 비-항원-특이적인 폴리펩타이드 매개인자임에 유념하여야 한다. 이는 다양한 타입의 세포들에 의해 생산되며, 체내에 자유롭게 방출되면, 인접 세포 (파라크린 효과)에, 매우 멀리 떨어진 곳 (엔도크린 효과)에 또는 생성된 곳 (오토크린 효과)에서 특이적인 반응을 유발한다. 특히, 인터루킨 및 케모카인과 같이 면역계 세포에 의해 생산된 사이토카인은 방어 기전의 규제 및 활성화와 염증 과정에서 기본적인 역할을 수행한다. 복잡한 사이토카인 네트워크는 전-염증 효과와 항-염증 효과 간에 균형을 유지한다. 전-염증성 사이토카인과 항-염증성 사이토카인 간의 불균형뿐 아니라 사이토카인들의 통제되지 않은 생산은 염증성 타입의 질환, 알레르기 또는 자가면역성 병태를 야기할 수 있다. TSLP (흉선 기질상 림포포이에틴)는 사이토카인 패밀리에 속하는 단백질로서, 항원 제시 세포의 활성화를 통해 T 세포 집단의 성숙화에 중요한 역할을 담당한다. TSLP는 섬유모세포, 상피 세포 및 다양한 타입의 기질 세포와 같은 비-조혈계 세포에 의해 주로 생산되는데, 이의 발현은 천식, 염증성 관절염, 아토피성 피부염, 습진, 호산성 식도염 및 기타 알레르기성 병태 등의 수많은 병리학적 상태와 연관되어 있다.
특히, 본 출원인은, 각질 형성 세포가 프로바이오틱스에 노출되면, 세포 상층액에 대한 사이토카인 분석 조사를 통해 입증된 바와 같이, 프로바이오틱스가 면역조절 효과를 발휘할 수 있다는 것을, 알게 되었다. 특히, IL1β, IL10 및 IL8의 발현이 프로바이오틱 균주들 각각에 의해, 특히 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01에 의해 감소되는 것으로 관찰되었다. 사이토카인 발현의 억제 효과는 각질 형성 세포를 LPS로 챌린지한 후 더욱 명확하게 드러났다.
TSLP와 관련하여, 프로바이오틱스와의 접촉시 (프로바이오틱에 의해 자극되지 않은 각질 형성 세포의) 베이스라인 발현과 비교해 이러한 지표 (indicator)가 감소되었다. 각질 형성 세포를 LPS로 미리 자극하면, LPS의 Toll-유사 수용체에 대해 다른 분자들이 더 자극성인 것으로 알려져 있어, 예상되는 현상인 TLSP 농도 증가는 발생하지 않았다. 각각의 프로바이오틱 균주 및 혼합 형태의 프로바이오틱 균주들은, 이들 지표의 발현을 컨디셔닝화 (conditioning)하는데 효과적인 것으로 입증되었다. 지표는 아토피성 피부염과 같은 일부 피부 병태에서 과발현된다는 점에서, 매우 주목된다. 또한, 이 사이토카인은 각질 형성 세포와 수지상 세포 간의 기능적인 인터페이스에 주 매개인자로 간주된다.
본 발명의 바람직한 측면에서, 본 조성물은 손상된 피부 및/또는 장애가 발생한 피부의 상처 치유 및/또는 재상피화 및/또는 흉터형성 과정에 유용하다.
따라서, 본 데이터에 따르면, 프로바이오틱스, 특히 검사 균주가 각질 형성 세포, 즉 피부에 대해 항-염증성 효과 및/또는 면역조절 효과를 발휘할 수 있는 것으로 명확하게 확인된다.
일반적으로, 전술한 효과를 고려하여, 본원에 기술된 프로바이오틱스를 기반으로 하는 조성물은 피부 미생물총의 균형을 회복하기 위한 목적으로 사용가능하다.
본 발명의 맥락에서, "피부"는 외부 환경으로부터 보호하는 제1선의 방어로서; 특히 이러한 방어는, 경계 신호를 피부의 심층에 전달하기 위해 사이토카인 및 케모카인의 분비를 유도하여 염증성 반응을 일으킬 수 있는, 피부 최외층 (표피)에 분포된 각질 형성 세포의 작용을 통해 이루어진다. 이의 진행 경로에서, 각질 형성 세포는 기저 세포에 대해 보호 작용을 담당하는 케라틴을 점진적으로 축적하면서 심층부에서 표피층으로 이동한다.
본 발명의 맥락에서, "피부 노화"는 모든 개체들에서 발생하는 전적으로 자연적이며 불가피한 생리학적 과정을 의미한다. 시간이 흐름에 따라, 피부는 여러가지 기원의 일련의 인자들에 의해 구조적인 변화를 겪게 되어, 피부의 수분 감소, 미세 주름 형성, 탄력 저하, 과각화 및 "검버섯"으로 지칭되는 색소의 과다 침착이 발생한다.
노화는 바람직하게는 실질적으로 유전적 (또는 선천적인) 인자에 좌우되는 내인성 - 또는 시간순으로 발생하는 - 노화이다. 대안적으로, 피부 노화는 외인성 - 환경 요인으로 인한 것 - 이며, 즉, 외부 요인 (또는 외인성 인자)에 의해 유발된다.
일반적으로, 내인성 노화는 통상적으로 25세 이후에 시작된다. 일반적으로 피부 구조의 얇아짐 및/또는 붕괴로 이어지는 일련의 변화를 수반한다.
외인성 노화는 바람직하게는 외부 물질 및/또는 환경 요인, 바람직하게는 UV 방사선 (광노화의 원인), 흡연, 알코올 남용, 오염, 자극성 물질과의 지속적인 접촉 및 이들의 조합으로부터 선택되는 환경 요인의 공격으로 인해 유발된다.
UV 방사선 노출이 원인인/와 관련있는 손상 및/또는 작용은 바람직하게는 홍반, 색소침착, 각화증, 과각화증, 피부 붉어짐, 일광화상, 화상, 광선 광노화 (actinic photoaging) 또는 일광 탄력섬유증, 피질 백내장, 익상편, 구강 헤르페스의 재활성화, 임의 특성의 피부 손상, 바람직하게는 입술 및/또는 결막 손상, 피부 흑색종, 피부의 편평세포암, 기저 세포 암종, 각막 또는 결막의 편평세포암 및/또는 이들의 조합 및/또는 합병증 및/또는 결과로부터 선택된다.
본 발명의 맥락에서, "피부 미생물총의 균형 회복"은 피부에 존재하는 전체 미생물 세트로서 이해되는 피부 미생물총의 생리학적 조성의 정성-정량적인 회복, 즉 생리학적 피부 미생물총 생태학의 회복을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, "챌린지"는 여러가지 종의 미생물의 오염을 수반하는 모든 실험 검사 또는 챌린지 또는 시험과, 일반적으로, 일정한 시간 간격으로 살아있는 미생물의 개수를 플레이트 카운팅하는 수단에 의한, 후속적인 미생물총 부하 변동 평가를 의미한다.
본 발명의 맥락에서, "프로바이오틱"은, FAO 및 WHO의 정의에 따르면, "적량으로 섭취하였을 때 숙주에 건강상의 이점을 부여하는 살아있는 미생물"을 의미한다. 다시 말해, 프로바이오틱스는 적량 복용시 신체에 유익한 기능을 발휘할 수 있는 것으로 입증된 미생물들이다.
이러한 미생물들은 박테리아, 진균, 효모 및 이들의 조합으로부터 선택된다.
본 발명의 바람직한 측면에서, 미생물은 락토바실러스 (Lactobacillus), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 바실러스 (Bacillus), 프로피오니박테리움 (Propionibacterium), 스트렙토코커스 (Streptococcus), 락토코커스 (Lactococcus), 에어로코커스 (Aerococcus) 및 엔테로코커스 (Enterococcus)로부터 선택되는 하나 이상의 속에 속한다. 더 바람직하게는, 박테리아는 락토바실러스 속에 속한다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 락토바실러스 속의 박테리아는 락토바실러스 파라카세이 (Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 액시도필러스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 아밀로리티쿠스 (Lactobacillus amylolyticus), 락토바실러스 아밀로보러스 (Lactobacillus amylovorus), 락토바실러스 알리멘타리우스 (Lactobacillus alimentarius), 락토바실러스 아비아리스 (Lactobacillus aviaries), 락토바실러스 브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스 부크네리 (Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 카세이 (Lactobacillus casei), 락토바실러스 셀로비오수스 (Lactobacillus cellobiosus), 락토바실러스 코리니포르미스 (Lactobacillus coryniformis), 락토바실러스 크리스파투스 (Lactobacillus crispatus), 락토바실러스 쿠르바투스 (Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델브루키이 (Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 파르시미니스 (Lactobacillus farciminis), 락토바실러스 퍼멘툼 (Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 갈리나룸 (Lactobacillus gallinarum), 락토바실러스 가세리 (Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 헬베티쿠스 (Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 힐가르디이 (Lactobacillus hilgardii), 락토바실러스 존소니 (Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 케피라노팍시엔스 (Lactobacillus kefiranofaciens), 락토바실러스 케피리 (Lactobacillus kefiri), 락토바실러스 무코사 (Lactobacillus mucosae), 락토바실러스 파니스 (Lactobacillus panis), 락토바실러스 콜리노이데스 (Lactobacillus collinoides), 락토바실러스 파라플란타룸 (Lactobacillus paraplantarum), 락토바실러스 펜토수스 (Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 폰티스 (Lactobacillus pontis), 락토바실러스 루테리 (Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노수스 (Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei), 락토바실러스 살리바리우스 (Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 산프란시센시스 (Lactobacillus sanfranciscensis) 및 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속한다.
더 바람직하게는, 락토바실리는 락토바실러스 파라카세이 종, 바람직하게는 균주 락토바실러스 파라카세이 DG® CNCM 1-1572 및/또는 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01이다.
이들 2종의 균주는 SOFAR S.p.A.에 의해 분리 및 기탁되었으며, 특히 박테리아 균주 락토바실러스 파라카세이 DG는 1995년 5월 5일에 파리 파스테르 연구소의 CNCM (National Collection of Cultures of Microorganisms)에 기탁번호 CNCM 1-1572로 기탁되었다. 이 균주는 처음에는 락토바실러스 카세이 DG sub. casei로 지칭되었다.
박테리아 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 DSMZ에 기탁번호 DSM26760으로 기탁되었다.
이들 균주는 연합하여 및/또는 조합하여 사용하였을 때 본원에 기술된 용도로 특히 효과적이며, 실제 상가적인 및/또는 심지어 상승적인 효과를 나타낸다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 비피도박테리움 속에 속하는 박테리아는 비피도박테리움 애니말리스 (B. animalis), 비피도박테리움 비피둠 (B. bifidum), 비피도박테리움 브레베 (B. breve), 비피도박테리움 인판티스 (B. infantis), 비피도박테리움 롱검 (B. longum), 비피도박테리움 아돌레센티스 (B. adolescentis), 비피도박테리움 카테눌라툼 (B. catenulatum), 비피도박테리움 안굴라툼 (B. angulatum), 비피도박테리움 에스테로이데스 (B. asteroides), 비피도박테리움 보우른 (B. bourn), 비피도박테리움 코에리눔 (B. choerinum), 비피도박테리움 코리네포름 (B. coryneforme), 비피도박테리움 쿠니쿨리 (B. cuniculi), 비피도박테리움 덴티콜렌스 (B. denticolens), 비피도박테리움 덴티움 (B. dentium), 비피도박테리움 갈리쿰 (B. gallicum), 비피도박테리움 갈리나룸 (B. gallinarum), 비피도박테리움 인디쿰 (B. indicum), 비피도박테리움 이노피나툼 (B. inopinatum), 비피도박테리움 락티스 (B. lactis), 비피도박테리움 마그넘 (B. magnum), 비피도박테리움 메리시쿰 (B. merycicum), 비피도박테리움 미니멈 (B. minimum), 비피도박테리움 슈도카테눌라툼 (B. pseudocatenulatum), 비피도박테리움 슈도롱검 (B. pseudolongum), 비피도박테리움 풀로럼 (B. pullorum), 비피도박테리움 루미난티움 (B. ruminantium), 비피도박테리움 세쿨라레 (B. saeculare), 비피도박테리움 섭틸리 (B. subtile), 비피도박테리움 서막시도필럼 (B. thermacidophilum), 비피도박테리움 서모필럼 (B. thermophilum) 및 비피도박테리움 츠루미엔스 (B. tsurumiense)로부터 선택되는; 더 바람직하게는, 바실러스 클라우시이 (Bacillus clausii), 바실러스 섭틸리스 (Bacillus subtilis), 바실러스 코아굴란스 (Bacillus coagulans), 바실러스 메가테리움 (Bacillus megaterium), 바실러스 할로두란스 (Bacillus halodurans), 바실러스 투링기엔시스 (Bacillus thuringiensis), 바실러스 인솔리투스 (Bacillus insolitus) 및 바실러스 마리누스 (Bacillus marinus)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속한다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 프로피오니박테리움 속에 속하는 박테리아는 프로피오니박테리움 세르마니이 (P. shermanii), 프로피오니박테리움 아크네스 (P. acnes), 프로피오니박테리움 아우스트랄리엔스 (P. australiense), 프로피오니박테리움 아비둠 (P. avidum), 프로피오니박테리움 사이클로헥사니쿰 (P. cyclohexanicum), 프로피오니박테리움 프레우덴라이치이 (P. freudenreichii), 프로피오니박테리움 그라눌로섬 (P. granulosum), 프로피오니박테리움 얀세니이 (P. jensenii), 프로피오니박테리움 마이크로에어로필럼 (P. microaerophilum), 프로피오니박테리움 프로피오니쿰 (P. propionicum) 및 프로피오니박테리움 토에니이 (P. thoenii)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속한다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 스트렙토코커스 속에 속하는 박테리아는 스트렙토코커스 서모필러스 (Streptococcus thermophilus), 스트렙토코커스 살리바리우스 (Streptococcus salivarius), 스트렙토코커스 아갈락티아 (Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 안기노수스 (Streptococcus anginosus), 스트렙토코커스 보비스 (Streptococcus bovis), 스트렙토코커스 카니스 (Streptococcus canis), 스트렙토코커스 콘스텔라투스 (Streptococcus constellatus), 스트렙토코커스 다우네이 (Streptococcus downei), 스트렙토코커스 디스갈락티아 (Streptococcus dysgalactiae), 스트렙토코커스 에퀴누스 (Streptococcus equinus), 스트렙토코커스 페른스 (Streptococcus ferns), 스트렙토코커스 인판타리우스 (Streptococcus infantarius), 스트렙토코커스 이니아 (Streptococcus iniae), 스트렙토코커스 인터메디우스 (Streptococcus intermedius), 스트렙토코커스 밀레리 (Streptococcus milleri), 스트렙토코커스 미티스 (Streptococcus mitis), 스트렙토코커스 무탄스 (Streptococcus mutans), 스트렙토코커스 오랄리스 (Streptococcus oralis), 스트렙토코커스 오리스라티 (Streptococcus orisratti), 스트렙토코커스 파라상귀니스 (Streptococcus parasanguinis), 스트렙토코커스 페로리스 (Streptococcus peroris), 스트렙토코커스 뉴모니아 (Streptococcus pneumoniae), 스트렙토코커스 슈도뉴모니아 (Streptococcus pseudopneumoniae), 스트렙토코커스 피오게네스 (Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 라티 (Streptococcus ratti), 스트렙토코커스 티구리누스 (Streptococcus tigurinus), 스트렙토코커스 상귀니스 (Streptococcus sanguinis), 스트렙토코커스 소브리누스 (Streptococcus sobrinus), 스트렙토코커스 수이스 (Streptococcus suis), 스트렙토코커스 우베리스 (Streptococcus uberis), 스트렙토코커스 베스티불라리스 (Streptococcus vestibularis), 스트렙토코커스 비리단스 (Streptococcus viridans) 및 스트렙토코커스 주에피데미쿠스 (Streptococcus zooepidemicus)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속한다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 락토코커스 속에 속하는 박테리아는 락토코커스 중앙엔시스 (L. chungangensis), 락토코커스 포르모센시스 (L. formosensis), 락토코커스 푸지엔시스 (L. fujiensis), 락토코커스 가르비에 (L. garvieae), 락토코커스 락티스 (L. lactis), 락토코커스 피슘 (L. piscium), 락토코커스 플란타룸 (L. plantarum), 락토코커스 라피노락티스 (L. raffinolactis) 및 락토코커스 타이완엔시스 (L. taiwanensise)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속한다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 에어로코커스 속의 박테리아는 에어로코커스 유리네 (A. urinae), 에이로코커스 상귀니콜라 (A. sanguinicola), 에이로코커스 크리스텐세니이 (A. christensenii), 에이로코커스 수이스 (A. suis), 에이로코커스 유리네에퀴 (A. urinaeequi) 및 에이로코커스 유리네호미니스 (A. urinaehominis)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속한다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 엔테로코커스 속에 속하는 박테리아는 엔테로코커스 아비움 (Enterococcus avium), 엔테로코커스 두란스 (Enterococcus durans), 엔테로코커스 패칼리스 (Enterococcus faecalis), 엔테로코커스 패슘 (Enterococcus faecium), 엔테로코커스 갈리나룸 (Enterococcus gallinarum), 엔테로코커스 헤모페록시두스 (Enterococcus haemoperoxidus), 엔테로코커스 히레 (Enterococcus hirae), 엔테로코커스 말로도라투스 (Enterococcus malodoratus), 엔테로코커스 모라비엔시스 (Enterococcus moraviensis), 엔테로코커스 문드티이 (Enterococcus mundtii), 엔테로코커스 슈도아비움 (Enterococcus pseudoavium), 엔테로코커스 라피노수스 (Enterococcus raffinosus) 및 엔테로코커스 솔리타리우스 (Enterococcus solitarius)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속한다.
본 발명의 추가적인 바람직한 측면에서, 효모는 사카로마이세스 속, 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae) 및/또는 사카로마이세스 보울라르디이 (Saccharomyces boulardii)의 종에 속한다.
미생물, 바람직하게는 박테리아 균주 락토바실러스 카세이 DG® 및/또는 박테리아 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 바람직하게는 살아있는 상태로 사용되며, 즉 프로바이오틱스로서 사용된다.
대안적으로, 미생물, 바람직하게는 박테리아 균주 락토바실러스 카세이 DG® 및/또는 박테리아 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 사균이거나 또는 틴달 처리된 (tyndallized) 것이다.
추가적인 구현예에서, 미생물, 바람직하게는 박테리아 균주 락토바실러스 카세이 DG® 및/또는 박테리아 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 세포용해물 (lysate) 및/또는 추출물 형태로 사용되며, 즉 파라프로바이오틱 (paraprobiotic)으로서 사용된다. 대안적으로, 미생물, 바람직하게는 박테리아 균주 락토바실러스 카세이 DG® 및/또는 박테리아 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 박테리아 생산물 형태, 상층액 형태, 파생물 형태, 바람직하게는 박테리아 파생물 형태, 바람직하게는 대사산물, 대사 부산물, 포스트-바이오틱스 (post-biotics), 세포벽 및 이의 구성성분, 엑소폴리사카라이드 (exopolysaccharide), 또는 면역원성 성분, 바람직하게는 리보솜 및 당단백질로부터 선택되는 면역원성 성분을 함유한 화합물, 글루칸 및 기타 다당류와 같은 면역자극성 파생물 (immunostimulant derivatives), 리포사카라이드 및 상층액의 임의의 구성성분 형태로 사용된다.
일반적으로, 미생물은 EFSA의 QPS 리스트에 언급된 임의 미생물 종의 개별 미생물 또는 미생물들의 조합 또는 혼합물 (consortia)이다.
임의 경우에, 본 발명의 조성물은 프로바이오틱 효과/작용/기능을 가진, 임의 타입의 미생물, 특히 박테리아 및/또는 전술한 바와 같은 미생물, 바람직하게는 피부, 장 및/또는 신체의 다른 부위에서 안정적으로 상주하여 병원성 미생물/박테리아로부터 공간을 빼앗거나 및/또는 이와 직접 싸울 수 있는 박테리아를 포함할 수 있다. 전술한 바와 같은 미용학적 조성물 및/또는 의료용 조성물은 바람직하게는 전술한 균주와, 바람직하게는 박테리아, 진균, 효모 및 이들의 조합으로부터 선택되는 전술한 기타 미생물의 조합을 포함한다.
미생물, 바람직하게는 박테리아는 신체의 피부, 장 및/또는 기타 부위에서 일시적으로 상주할 수 있을 정도로 충분한 최소량으로 존재한다. 이러한 양은 바람직하게는 미생물 106 내지 1011 단위, 더 바람직하게 108 내지 109 단위로 다양하며, 함량은 바람직하게는 1일 투여 당 (매일) 용량이다.
조성물은 부형제 및/또는 추가적인 약제학적으로 허용가능한 물질 및/또는 담체를 더 포함한다.
본 발명의 조성물은 바람직하게는 혈장, PRP, 흉터형성 물질, 재상피화 물질, 습윤제 (wetting agent), 수화제 (hydrating agent), 연화제 (emollient agent), 흡수제, 진통제, 치질약, 항-염증제, 근육 이완제, 펩타이드성 및/또는 단백질성 물질 및/또는 단백질, 예를 들어 콜라겐, 결합 조직에 속하는 물질, 예를 들어 글리코스아미노글리칸, 바람직하게는 콘드로이틴 설페이트 및/또는 이들의 조합물로부터 선택되는 물질을 더 포함한다.
본 발명의 일 구현예에서, 조성물은 도포 (application)용으로, 바람직하게는 크림, 겔, 오일, 유제, 스프레이, 거즈 (gauzes), 패치, 붕대, 로션, 무스, 연고, 페이스트 (pastes) 또는 피부에 도포하기 전에 바람직하게는 즉석에서 화합물을 첨가하는 액체 제형의 형태의, 바람직하게는 국소 타입으로 제형화된다.
본 발명의 일 구현예에서, 조성물은 피부 미생물총을 이식 (transplant)하는데 사용된다. 본 발명의 맥락에서, 피부 미생물총의 이식은, 올바른 균형을 재확립하여, 존재할 수 있는 임의의 불균형을 치료하기 위해, 피부 장애가 없는 건강한 개체의 피부 미생물총 및/또는 이의 일부의 투여, 바람직하게는 국소 투여를 의미한다. 이러한 목적으로, 본 발명의 조성물은 바람직하게는 박테리아, 바람직하게는 박테리아 균주 락토바실러스 카세이 DG® 및/또는 박테리아 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01, 및 선택적으로 또한 진균, 바이러스, 펩타이드, 단백질성 및/또는 펩타이드성 물질, 탄수화물, 비타민, 미량 원소 또는 피부 및/또는 신체의 다른 부위의 미생물총의 특징이 되는 임의의 기타 물질을 포함한다. 이러한 목적으로, 조성물은 바람직하게는 아미노산, 보충제, 비타민, 아연 및 셀레늄과 같은 미량 원소, 마크로 및 마이크로 영양소, 효소 및/또는 프리바이오틱 물질, 예를 들어, 프럭토올리고당 (FOS), 갈락토올리고당 (GOS), 이눌린, 구아르 검 및/또는 이들의 조합과 조합하여 사용된다. 본 발명의 일 구현예에서, 조성물은 경구 투여용으로, 바람직하게는 고체 제형으로서, 바람직하게는 환제, 캡슐제, 정제, 과립 분말, 경질 캡슐제, 구강 용해 과립제, 사셰제 또는 로젠지 (lozenges)로서 제형화된다.
대안적으로, 조성물은 액체로서, 바람직하게는 즉석 제제로서 제형화된다.
대안적으로, 조성물은 예를 들어 관장제, 크림, 스프레이, 겔, 패치, 로션, 무스, 연고, 페이스트 또는 조성물을 피부에 도포하기 전에 바람직하게는 즉석으로 첨가하거나 및/또는 조제하는 액체 제형으로서 국소 작용을 발휘할 수 있는 형태이다.
본 발명의 바람직한 구현예에서, 본 발명의 조성물은 아미노산, 보충제, 비타민, 아연 및 셀레늄과 같은 미량 원소, 마크로 및 마이크로 영양소, 효소 및/또는 프럭토올리고당 (FOS), 갈락토올리고당 (GOS), 이눌린, 구아르 검 또는 이들의 조합과 같은 프리바이오틱 물질과 조합하여 사용된다.
실시예
박테리아 균주 및 세포
예를 들어, 본 발명은 하기 박테리아 균주를 사용해 입증하였다:
- 락토바실러스 카세이 DG® (락토바실러스 파라카세이 CNCM 1-1572);
- 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01;
- 락토바실러스 카세이 DG® + 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01 1:1 혼합물.
박테리아 균주를 MRS (de Man Rogosa Sharpe)로 구성된 선택 배지에서 16시간 동안 37℃에서 배양하였다. 증식이 정체기에 도달하면, 박테리아 샘플을 검사에 사용하기 위해 수집하였다. 이를 PBS (포스페이트 완충화된 염수)로 수회 헹구고, 원심분리하여 사용된 배양 배지를 제거하였다. 정체기보다는 이 상태에서 박테리아가 더 약한 면역 반응 반응을 유도하므로, 정체기에 있는 살아있는 세포를 사용하였다.
후술한 모든 검사는 3세트로 수행하였다.
적절한 보충제를 첨가하여 배양물로 유지된 정상적인 인간 각질 형성 세포를 실험에 사용하였다.
프로피오니박테리움 아크네스 (P. acnes) CCUG 50865 (CCUG (Culture Collection, University of Goteborg))는 공급사의 지침에 따라 준비한 Cooked Meat Medium (액체 및 고체 둘다)에서 16시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이후, O.D. 600 nm에서 판독하는 분광광도측정으로 박테리아 농도를 결정하였으며, 이를 부착 검사에 사용하였다.
부착 검사 및 세포주의 병원체 챌린지
각질 형성 세포를 세포 배양 플레이트의 웰에 37℃ 및 5% CO2 조건에서 접종하고, 컨플루언스 (즉, 전체 세포 약 105)에 도달할 때까지 배양하였다. 접종 비율은 2.5x105 세포/0.32 cm2 (즉, 세포 밀도 7.8x105 세포/cm2)이다. 실험시, 배지를 제거하고, 세포를 항생제-무첨가 배지로 헹군 다음 박테리아를 검사에 첨가하였으며, 검사는 후술한 여러가지 프로토콜에 따라 수행하였다.
1) 각질 형성 세포에 균주의 부착.
웰 당 각질 형성 세포의 수를 결정한 후, 락토바실러스 파라카세이 균주를 MOI 1:10 (웰 당 박테리아 세포 105 및 106 CFU)으로 첨가하였다. 균주들은 각각 및 조합시 1:1의 비율로 검사하였다.
박테리아를 세포와 접촉시켜, 60분간 약하게 교반하면서 37℃에서 두었다. 배양 종료시, 배지를 제거하고, 세포를 멸균 배지로 세척하여 세포 단일층에 부착되지 않은 박테리아를 제거하였다.
부착된 박테리아의 수를 계산하기 위해, 세포를 탈착시켜 세포용해 처리한 다음 MRS 아가 배지에 접종한 후 초생체 (supravital) 염색에 의해 계수하였다.
2) 부착 배제 검사 (adhesion exclusion test).
각 웰에서 각질 형성 세포의 수를 확인한 후, 락토바실러스 파라카세이 균주를 각각 및 조합시 1:1의 비율로 세포에 첨가하였다.
박테리아를 세포와 접촉시켜, 60분간 약하게 교반하면서 37℃에서 두었다. 배양 종료시, 배지를 제거하고, 세포를 멸균 배지로 세척하여 세포 단일층에 부착되지 않은 박테리아를 제거하였다.
그런 후, 세포에 프로피오니박테리움 아크네스 (1:10 MOI)를 접촉되게 첨가하여, 60분간 37℃에서 배양하였다. 배양이 끝나면, 배양 배지를 제거하고, 멸균 배지로 세척하여 비-부착 박테리아를 제거하였다.
각질 형성 세포에 부착하는 프로피오니박테리움 아크네스의 수를 계산하기 위해, 세포를 탈착시켜 세포용해 처리한 다음 5% 양 혈액 아가에 혐기 조건하에 접종하여 37℃에서 48-72시간 인큐베이션한 후 초생체 염색으로 계수하였다. 락토바실러스 파라카세이 균주와 예비 배양하지 않고 프로피오니박테리움 아크네스만 접종한, 각질 형성 세포가 든 웰을 프로피오니박테리움 아크네스 부착의 양성 대조군 (프로피오니박테리움 아크네스 부착 대조군)으로 사용하였으며, 어떠한 박테리아와도 함께 배양하지 않은 세포가 든 웰은 음성 대조군 (무균 대조군)으로 사용하였다.
3) 부착 경쟁 검사
웰 당 각질 형성 세포의 수를 확인한 후, 락토바실러스 파라카세이 균주를 (개별 경우 및 조합한 경우 둘다, 1:1 비율로) 프로피오니박테리움 아크네스와 동시에 첨가하였다. 박테리아는 전체 MOI 1:10으로, 프로바이오틱 : 병원체 1:1의 비율로 첨가하였다.
박테리아를 60분간 약하게 교반하면서 37℃에서 세포와 접촉하게 두었다. 배양 종료시, 배지를 제거하고, 세포를 멸균 배지로 세척하여 세포 단일층에 부착되지 않은 박테리아를 제거하였다.
각질 형성 세포에 부착하는 프로피오니박테리움 아크네스의 수를 계산하기 위해, 세포를 탈착시켜 세포용해 처리한 다음 5% 양 혈액 아가에 혐기 조건하에 접종하여 37℃에서 48-72시간 인큐베이션한 후 초생체 염색으로 계수하였다. 프로피오니박테리움 아크네스만 접종된 각질 형성 세포가 든 웰을 양성 대조군 (프로피오니박테리움 아크네스 부착 대조군)으로 사용하였으며, 어떠한 박테리아와도 함께 배양하지 않은 세포가 든 웰은 음성 대조군 (무균 대조군)으로 사용하였다.
4) 부착 병원체의 제거 검사
웰 당 각질 형성 세포의 수를 확인한 후, 프로피오니박테리움 아크네스를 (MOI 1:10로) 첨가하였다.
박테리아를 60분간 약하게 교반하면서 37℃에서 세포와 접촉되게 두었다. 배양 종료시, 배지를 제거하고, 세포를 멸균 배지로 반복적으로 세척하여 세포 단일층에 부착되지 않은 박테리아를 제거하였다.
그런 후, 락토바실러스 파라카세이 균주 (단독 균주 및 조합 균주 둘다 비율 1:1)를 세포에 접촉되게 첨가하여, 60분간 약하게 교반하면서 37℃에서 유지하였다. 배양 종료시, 배지를 제거하고, 세포를 멸균 배지로 세척하여 세포 단일층에 부착되지 않은 박테리아를 제거하였다.
각질 형성 세포에 부착하는 프로피오니박테리움 아크네스의 수를 계산하기 위해, 세포를 탈착시켜 세포용해 처리한 다음 5% 양 혈액 아가에 혐기 조건하에 접종하여 37℃에서 48-72시간 인큐베이션한 후 초생체 염색으로 계수하였다.
프로피오니박테리움 아크네스가 처리된 각질 형성 세포를 양성 대조군 (프로피오니박테리움 아크네스 부착 대조군)으로 사용하였으며, 어떠한 박테리아도 처리하지 않은 각질 형성 세포를 음성 대조군 (무균 대조군)으로 사용하였다.
순수한 형태의 단독 균주 및 1:1 혼합물 둘다에 대한 검사를 2번 반복하였다.
1) 각질 형성 세포에 균주 부착 - 결과
본 검사 결과는 단독 및 조합 균주가 각질 형성 세포에 부착하는 능력을 입증해주었다. 특히, 균주 락토바실러스 카세이 DG ® 는 락토바실러스 파라카세이 LPC -S01보다 우수한 각질 형성 세포 부착력을 나타내었다. 조합 균주에서 관찰된 부착력은 균주 락토바실러스 카세이 DG®에 의한 기여가 아마도 원인일 수 있다.
부착 (박테리아의 N0 - CFU/웰)
락토바실러스 카세이 DG 139 x 102 - 141 x 102
락토바실러스 파라카세이 S01 18.2 x 102 - 21.8 x 102
1:1 혼합 98 x 102 - 122 x 102
프로피오니박테리움 아크네스 700 x 102 - 2000 x 102
- 부착 배제 검사 (진핵생물 세포에 프로바이오틱스를 전처리한 후 병원체와 인큐베이션함) - 결과
전술한 바와 같이, 각질 형성 세포의 단일층을 먼저 프로바이오틱스와 접촉되게 노출한 다음, 비-부착 박테리아를 제거한 후 프로피오니박테리움 아크네스와 접촉시키고, 이를 세척에 의해 제거한 다음; 프로피오니박테리움 아크네스의 잔류 생존성을 정량하였다.
음성 대조군은 박테리아와의 접촉 자극하지 않는 진핵생물 세포이고, 양성 대조군은 프로바이오틱스로 어떠한 전처리도 하지 않은 각질 형성 세포에 프로피오니박테리움 아크네스가 부착하는 능력으로 표시된다. 도 1A는 여러가지 검사 프로바이오틱스와 접촉시켜 각질 형성 세포를 미리 자극한 다음 부착하는 살아있는 생활성 세포의 %로 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 결과를 도시한 것이다. 프로바이오틱스의 자극이 없는 조건에서의 프로피오니박테리움 아크네스의 부착성을 100으로 하였을 때, 양성 대조군 대비 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 저해 %로 시험 균주의 저해력을 나타내었다.
프로바이오틱 균주 2종은 비슷한 %로 프로피오니박테리움 아크네스의 부착을 방지하는 능력을 나타내었다 ( 락토바실러스 카세이 DG ® 42% 및 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01 35%).
- 부착 경쟁 검사 (진핵생물 세포와 프로바이오틱스 및 병원체의 공-배양) - 결과
프로피오니박테리움 아크네스와의 공-배양시 프로바이오틱스에 의해 발휘되는 잠재적인 경쟁적인 저해 효과를 조사하기 위해, 검사시, 만약 존재한다면 각질 형성 세포에 프로피오니박테리움 아크네스의 부착성 감소를 세포주에 프로바이오틱스 및 병원체를 동시 처리한 후 평가하였다.
프로피오니박테리움 아크네스로 처리된 각질 형성 세포는 양성 대조군으로, 박테리아를 처리하지 않은 각질 형성 세포는 음성 대조군 (무균 대조군)으로 사용하였다.
도 1B는 각질 형성 세포를 프로피오니박테리움 아크네스 및 다양한 검사 프로바이오틱스와 공-배양한 후, 부착하는 살아있는 생활성 세포의 %로 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 관련 결과들을 그래프로 도시한 것이다. 전술한 바와 같이, 프로바이오틱에 의한 자극 처리되지 않은 프로피오니박테리움 아크네스의 부착성을 100으로 하여, 양성 대조군 대비 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 감소 %로 시험 균주의 저해력을 나타내었다.
프로바이오틱스와 병원체 간의 이러한 상호작용 모델에서, 균주 락토바실러 스 카세이 DG ® 는 17%의 부착 저해력을 나타낸 반면 , 균주 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 9%이었다. 균주들의 조합은 프로피오니박테리움 아크네스의 부착을 통계학적으로 유의한 수준으로 감소시켜 42%였으며, 이는 균주 각각에서 관찰되는 결과 보다 명백하게 높았으며, 각 균주의 결과들의 합보다도 명확하게 높은 %였다.
- 부착성 병원체의 제거 검사 (진핵생물 세포에 병원체 전처리 후 프로바이오틱스와 함께 배양) - 결과
이들 검사에서, 세포주에 병원체를 전처리한 다음 비-부착된 병원체를 제거한 후 프로바이오틱스와 함께 인큐베이션하여, 각질 형성 세포에 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 감소를 평가하였다.
프로피오니박테리움 아크네스로 처리된 각질 형성 세포는 양성 대조군으로 사용하였고, 박테리아로 처리되지 않은 각질 형성 세포는 음성 대조군 (무균 대조군)으로 사용하였다.
도 1C는 각질 형성 세포를 프로피오니박테리움 아크네스를 다양한 검사 프로바이오틱스와 함께 인큐베이션한 다음 진핵 세포를 병원체로 챌린지 후, 부착하는 살아있는 생활성 세포의 %로 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 관련 결과들을 그래프로 나타낸 것이다. 전술한 바와 같이, 프로바이오틱스 부재 조건에서의 프로피오니박테리움 아크네스의 부착성을 100으로 하여, 양성 대조군 대비 프로피오니박테리움 아크네스의 부착 감소 %로 시험 균주의 저해력을 나타내었다.
이들 검사에서 역시 공-배양 프로토콜에서와 마찬가지로, 프로바이오틱스 2종의 조합에서 흥미로운 통계학적으로 유의한 상승효과가 관찰되었으며, 프로피오 니박테리움 아크네스의 부착을 42%까지 줄일 수 있는 것으로 입증되었다. 이와는 대조적으로, 개별 프로바이오틱스는 혼합물의 절반 수준 미만으로 부착을 감소시키는 능력을 나타내어, 락토바실러스 카세이 DG ® 의 경우 18%, 락토바실러스 파라카세 이 LPC - S01의 경우 11%였다.
면역조절 검사
프로바이오틱 균주가 박테리아 리포폴리사카라이드 (LPS)의 네거티브 자극에 노출된 인간 각질 형성 세포에 의한 사이토카인 분비를 조절하는 능력을 가지는 지를 검증하기 위한 목적으로, 면역조절 검사를 수행하였다.
정상적인 인간 각질 형성 세포를 전술한 바와 같이 세포 배양 플레이트에 접종하였으며, 컨플루언스에 도달하였을 때 이를 실험에 사용하였다. 특히, 세포 단일층을 세척하고, 항생제를 첨가하지 않은 신선한 배지에서 인큐베이션하였다. 그런 후, 락토바실러스 파라카세이 균주를 MOI 1:10으로 각각, 그리고 1:1 조합 비율로 첨가하였다.
박테리아를 각질 형성 세포와 접촉시켜 37℃에서 약하게 교반하면서 120분간 두었다. 일부 경우에, 세포를 최종 농도 100 ng/ml의 LPS로 미리 자극하였다 (약 24시간 챌린지).
인큐베이션 종료 후, 배지를 제거하고, 세포를 멸균 배지로 세척하여 세포에 부착되지 않은 박테리아를 제거한 다음 37℃에서 24시간 동안 배양 배지에서 유지시켰다.
인큐베이션 종료 후, 배양 배지를 수집하여 ELISA 분석을 이용해 생산된 사이토카인 (IL-10, IL-1β, IL-8, 흉선 기질 림포포이에틴 [TSLP])을 정량하였으며, (LPS 또는 IL-1β)에 의해 유도된 사이클로옥시게나제-2 (COX-2) 및 활성화된 NF-kB의 농도는 세포용해된 각질 형성 세포로부터 추출한 전체 단백질에 대한 웨스턴 블롯에 의해 결정하였다.
이들 마커는 급성 염증 (phlogosis) 및 알레르기성 피부염 둘다에 관여하여, 이를 선택하였다. 특히, IL-10은 항-염증성으로 간주되며, 이의 생산은 일반적으로 IL-1β와 같은 강력한 전-염증성 사이토카인과 나란히 증가한다. TSLP는 림프구의 작용을 조절하며, 만성 각막염의 진행에 관여하는 사이토카인이다.
결과
시험 균주의 각질 형성 세포의 면역 반응을 자극하는 능력을 전술한 프로토콜에 따라 평가하였다. 검사에서 사이토카인 (IL-8, IL-1β 및 IL-10)을 측정하고, 마커 2종, 즉 COX-2 및 NF-kB의 활성화를 조사하는데 집중하였다.
COX-2 (사이클로옥시게나제-2)는 특이적인 염증 자극에 반응하여 제한된 수의 세포 타입들에 의해 생산되는 유도성 마커이다. 이는 피부 신생물 등의 수종의 신생물에서 과발현된다. NF-kB (활성화된 B 세포의 핵 인자 k-경쇄-인핸서)는 염증 특성 등의 다양한 자극에 반응하여 모든 세포 타입들에 의해 생산되는, 전사 인자 기능을 가진 단백질 복합체이다.
배양한 각질 형성 세포를 프로바이오틱스 락토바실러스 파라카세이, 락토바실러스 카세이 DG® 및 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01, 및 1:1 비율의 균주 2종의 조합물에 전술한 절차에 따라 노출시켰다. 그런 후, 세포 상층액을 분석하여 사이토카인을 파악하였으며, 프로바이오틱 균주와 접촉 배치된 각질 형성 세포에서 분석할 수 있는 항-염증성 타입의 사이토카인을 특히 참조하였다. 분석 결과는 도 2에 요약 개시하며, 이는 ELISA 검사를 이용해 수득한, 상층액 1 ml 당 pg으로 표시되는, 세포 상층액 내 IL-10, IL-1β 및 IL-8 분석 결과를 그래프로 도시한다. 수득한 결과들에 대한 상세한 분석을 통해 하기와 같은 결론을 내릴 수 있었다:
- IL1β: 각질 형성 세포의 상층액 1 ml 당 수 ng의 발현 수준. 프로바이오 틱스와의 접촉시, 이 사이토카인은 베이스라인 발현과 비교해 (비교. 프로바이오틱 으로 자극하지 않은 각질 형성 세포), 통계학적으로 유의하게 감소되지 않았다. 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 락토바실러스 카세이 DG®와 비교해 적당한 수준의 긍정적인 영향을 나타내었으며, 조합물과 비슷한 수준이었다. 또한, 면역 반응을 최대화하기 위해 각질 형성 세포를 LPS로 미리 자극하는 경우에도 유사한 고려 사항이 적용된다.
- IL-10: 각질 형성 세포의 상층액 1 ml 당 수십 pg의 발현 수준. 프로바이 오틱스와 접촉시켰을 때, 이 사이토카인은 베이스라인 발현과 비교해 감소하였다 (비교. 프로바이오틱으로 자극하지 않은 각질 형성 세포). 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 락토바실러스 카세이 DG®와 비교해 적당한 수준의 긍정적인 효과를 나타내었으며, 조합물과 비슷한 수준이었다. 또한, 면역 반응을 최대화하기 위해 각질 형성 세포를 LPS로 미리 자극하는 경우에도 유사한 고려 사항이 적용된다.
- IL-8: 각질 형성 세포의 상층액 1 ml 당 수 ng의 발현 수준. 프로바이오틱 스와 접촉시켰을 때, 이 사이토카인은 베이스라인 발현과 비교해 감소하였다 (비교. 프로바이오틱으로 자극하지 않은 각질 형성 세포). 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01은 락토바실러스 카세이 DG®와 비교해 긍정적인 효과를 나타내었으며, 조합물과 비슷한 수준이었다. 면역 반응을 최대화하기 위해 각질 형성 세포를 LPS로 미리 자극하는 경우, 프로바이오틱스 2종은 사이토카인을 조절하는데 긍정적으로 작용하는 영향을 나타내었으며, 각각의 프로바이오틱스 및 혼합물에서도 유사한 가능성이 나타났다.
- TSLP: 각질 형성 세포의 상층액 1 ml 당 수 ng의 발현 수준. 프로바이오틱 스와 접촉시켰을 때, 이 마커는 베이스라인 발현과 비교해 감소하였다 (비교. 프로바이오틱으로 자극하지 않은 각질 형성 세포). 프로바이오틱 균주들 각각 및 균주 조합은 이 마커의 발현을 컨디셔닝화하는데 효과적인 것으로 입증되었다. 이 마커는 아토피성 피부염과 같은 일부 피부 병태에서 과발현되므로, 상당히 주목된다. 또한, 이 사이토카인은 각질 형성 세포 및 수지상 세포 사이의 기능적인 계면에 있는 주 매개인자로 간주된다.
COX-2의 발현 수준을 평가한 바, 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01과의 접촉으로 인한 중간 수준의 방지 작용을 제외하고는, 이 마커는 각질형성세포와 프로바이오틱스의 접촉 후 베이스라인 대비 특별한 변화를 겪지 않는다는 것을 입증할 수 있었다. LPS 처리시 진핵생물 세포에 의한 COX-2 발현 수준이 증가하였으며, 이러한 증가는 프로바이오틱스의 작용에 의해 효과적으로 억제 및 제한되었다. 락토바실러스 파라카세이 LPC-S01이 락토바실러스 카세이 DG®보다 마커의 발현을 더 강하게 저해하는 반면, 프로바이오틱 균주 2종의 조합은 어떠한 작용도 나타내지 않는 것으로 보였다.
IL8 및 COX-2의 발현이 전사 인자 NF-kB에 의해 조절되므로, 프로바이오틱스에 노출된 각질 형성 세포에 의한 NF-kB 방출을 정량적으로 평가하였다. 그 결과, LPS에 의해 제공된 염증 자극이 없을 경우, 마커의 발현은 검출가능하지 않은 것으로, 보인다. 그러나, 이는 박테리아 리포폴리사카라이드에 의해 P65의 인산화를 경유하여 활성화된다. 프로바이오틱 균주 2종, 특히 락토바실러스 파라카세이 LPC -S01은 NF - kB의 발현을 억제하는 능력을 나타내었으며, 단일 균주 및 DG와의 혼합물로서 제시시 LPS -유도성 NF - kB 발현을 억제하는데 특히 효과적인 것으로 입증되었다.
UV에 의해 유발되는 손상의 저하 평가
프로바이오틱 균주 LPC-S01이 UV 방사선에 의한 손상을 감소시키는 능력을, 진피와 표피 구획을 재현하여, 진피의 세포외 기질의 변형과 생활성 피부 층들의 분화를 연구할 수 있는, 완벽한 3D 시험관내 재구축 피부 모델에서 조사하였다 (전장 두께 피부 모델 (Full Thickness Skin Model)). 이 실험은 UV 조사에 반응하여 인플라마좀 (inflammasome)의 활성화에 대한 균주 LPC-S01의 효과를 평가하는 것이다. 균주 LPC-S01을 3D 피부 모델의 표면에 직접 적용하여 밤새 인큐베이션한 다음 식염수로 세척하여 과도한 생산물을 제거하였다. 조직을 약하게 긁어, UV 1 MED (최소 홍반형성 선량 (minimal erythematogenic dose))에 노출시켜 정상적인 태양 노출을 모방하였다. 염증의 활성화는 UV 방사선 노출 후 4시간 및 24시간 경과시 검사하였다. 염수 처리하여 UV 방사선에 노출시킨 조직을 양성 대조군으로 사용하였다. 식염수는 음성 대조군으로 사용하였다.
헤마톡실린/에오신 염색을 이용한 조직형태학적 분석
처리 종료 후, 조직을 식염수로 세척하고, 10% 포르말린으로 고정하였다. 각 샘플에 대해 동일한 파라핀 블록에 생물학적 레플리케이트 (n=3)를 포함시켰으며, 비-연속적인 5 ㎛ 단편을 절단하여 수집하였다. 이 조직 단편을 헤마톡실린과 에오신으로 염색하였다. 조직 샘플을 광현미경으로 분석하고 (배율 20x 및 40x), 조직의 형태학적 변화와 세포독성 효과를 평가하였다.
NF - kB의 면역염색
NF-kB 마킹으로 세포질에서 핵으로의 전위를 조사할 수 있으며; 이의 전위는 실제 염증 과정을 활성화할 수 있다. NF-kB를 당해 기술 분야에 공지된 면역염색 기법을 사용해 표지하였다. 구체적으로, 1차 항-NF-kB (Abeam) 항체와 형광단 Alexa 555로 염색된 2차 항체 및 세포핵을 강조하기 위한 DAPI를 이용한 대조 염색을 이용하였다. 이미지는 형광 현미경을 사용해 40X 배율로 입수하였다.
ELISA에 의한 인터루킨 1β 정량
항체를 ELISA에 흡착시킨 다음 샘플을 인큐베이션하였다. 2차 항체를 첨가하여 "샌드위치"를 형성시켰다. 표준 곡선을 이용해 정량화를 수행하였다. 분광광도측정법으로 데이터를 입수하였다.
UV에 의한 손상 저하 결과
UV 방사선에 노출한 후 4시간 경과시, 무처리 조직 (양성 대조군)은 형태 변형이 없었지만, 표피 하부에는 UV 방사선에 의해 손상된 세포가 존재하였다. 4시간 후, 균주 LPC-S01이 처리된 조직에서는 조직의 형태 또는 전반적인 구조 또는 하부 표피에서의 화상 손상에 실질적인 변화가 확인되지 않았다. UV 방사선 노출 후 24시간 경과시, 조직들에서 화상으로 인한 전형적인 표피 변형이 나타났으며, 염증성 핵, 표피 및 진피 변형이 확인되었다. 균주 LPC-S01의 투여가, UV 방사선에 의해 유발된 조직의 형태학적 변화 방지를 개선하진 않았다.
표 2는 UV 방사선 노출 후 4시간 경과시 정량적인 NF-kB 전위 결과를 요약 개시한다.
표 2
음성 대조군 양성 대조군 LPC-S01
전위 수 25.7 47.2 22.4
방사선 처리 후 4시간 경과시, 양성 대조군은 특히 표피의 기저상층에서 높은 NF-kB 전위 개수를 나타내었다.
프로바이오틱 LPC-S01 처리는 NF-kB 의 핵 전위를 양성 대조군과 비교해 현저한 수준으로 저해할 수 있었다. 또한, 균주 LPC-S01은 세포질 내 NF-kB 농도를 낮출 수 있는 것으로 입증되었다.
마지막으로, IL-1β는 UV 방사선에 의한 손상 후 4, 8 및 12시간 경과시 방출이 증가하는 것으로 나타났다. 프로바이오틱 LPC-S01의 투여로, 손상 후 4, 8 및 24시간 경과시 IL-1β의 방출을 회복시킬 수 있었다. 특히, 손상 후 8 및 24시간 경과시 유의하게 감소하였다.
표 3. IL- 1β 방출
NC 4h PC 4h S01 4h NC 8h PC 8h S01 8h NC 24h PC 24h S01 24h
IL-1β (pg/ml) 2.12 2.74 2.10 2.49 3.18 1.92 3.13 4.78 3.44
즉, 프로바이오틱 LPC-S01은 UV 방사선에 의해 손상된 세포의 핵으로 NF-kB의 전위를 저해함으로써 염증의 활성화를 방지하는 능력을 나타내었다. 또한, 균주 S01은 전-염증성 인터루킨 1β의 농도를 방사선 처리 후 4, 8 및 24시간 경과시 감소시킴으로써 염증 정도를 낮추는 직접적인 효과를 나타내었다.
DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures DSM26760 20130111 National Collection of Cultures of Microorganisms (CNCM) I-1572 19950505

Claims (9)

  1. 프로바이오틱스를 포함하는 조성물로서,
    피부에 발생하는 장애 및/또는 병태, 바람직하게는 염증성 타입의 장애 및/또는 병태의 예방 및/또는 치료에, 상기 장애/병태와 관련된 증상 및/또는 작용의 경감 및/또는 치료에, 및/또는 상처 치유 과정 및/또는 재-상피화 및/또는 흉터형성 과정을 촉진하기 위해 사용하기 위한 것이며;
    상기 프로바이오틱스가 균주 락토바실러스 파라카세이 (Lactobacillus paracasei) DG® CNCM 1-1572의 박테리아 및/또는 균주 락토바실러스 파라카세이 (Lactobacillus paracasei) LPC-S01 DSM26760의 박테리아인, 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 피부에 발생하는 장애 및/또는 병태가 잠재적으로 자극 및 찰과상과 연관된 피부염, 여드름, 감염, 피부 염증, 홍반, 궤양, 건선, 아토피성 피부염, 귀 염증, 균열 (rhagades), 누공, 치질, 염증 과정이 진행 중인 임의의 기타 피부 장애 또는 병변 및/또는 이들의 조합 및/또는 합병증 및/또는 결과로부터 선택되는, 조성물.
  3. 피부, 바람직하게는 입술 및/또는 결막을 UV 방사선, UV-A 및/또는 UV-B로부터 보호하기 위한, 바람직하게는 UV 방사선, UV-A 및/또는 UV-B에의 노출로 인한/노출과 관련된 손상 및/또는 작용을 예방 및/또는 완화하기 위한, 더 바람직하게는 피부 노화를 예방 및/또는 완화하기 위한, 프로바이오틱스를 포함하는 조성물의 용도.
  4. 제1항 또는 제2항 또는 제3항에 있어서,
    상기 조성물이 박테리아, 진균, 효모 및 이들의 조합으로부터 선택되는 미생물을 더 포함하고;
    상기 박테리아가 바람직하게는 락토바실러스 (Lactobacillus), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 바실러스 (Bacillus), 프로피오니박테리움 (Propionibacterium), 스트렙토코커스 (Streptococcus), 락토코커스 (Lactococcus), 에어로코커스 (Aerococcus) 및 엔테로코커스 (Enterococcus)로부터 선택되는 하나 이상의 속에 속하는 박테리아이고;
    상기 박테리아가 바람직하게는 락토바실러스 속에 속하는 박테리아인, 조성물 또는 용도.
  5. 제4항에 있어서,
    락토바실러스 속의 박테리아가 락토바실러스 파라카세이 (Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 액시도필러스 (Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 아밀로리티쿠스 (Lactobacillus amylolyticus), 락토바실러스 아밀로보러스 (Lactobacillus amylovorus), 락토바실러스 알리멘타리우스 (Lactobacillus alimentarius), 락토바실러스 아비아리스 (Lactobacillus aviaries), 락토바실러스 브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스 부크네리 (Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 카세이 (Lactobacillus casei), 락토바실러스 셀로비오수스 (Lactobacillus cellobiosus), 락토바실러스 코리니포르미스 (Lactobacillus coryniformis), 락토바실러스 크리스파투스 (Lactobacillus crispatus), 락토바실러스 쿠르바투스 (Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델브루키이 (Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 파르시미니스 (Lactobacillus farciminis), 락토바실러스 퍼멘툼 (Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 갈리나룸 (Lactobacillus gallinarum), 락토바실러스 가세리 (Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 헬베티쿠스 (Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 힐가르디이 (Lactobacillus hilgardii), 락토바실러스 존소니 (Lactobacillus johnsonii), 락토바실러스 케피라노팍시엔스 (Lactobacillus kefiranofaciens), 락토바실러스 케피리 (Lactobacillus kefiri), 락토바실러스 무코사 (Lactobacillus mucosae), 락토바실러스 파니스 (Lactobacillus panis), 락토바실러스 콜리노이데스 (Lactobacillus collinoides), 락토바실러스 파라플란타룸 (Lactobacillus paraplantarum), 락토바실러스 펜토수스 (Lactobacillus pentosus), 락토바실러스 플란타룸 (Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 폰티스 (Lactobacillus pontis), 락토바실러스 루테리 (Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노수스 (Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei), 락토바실러스 살리바리우스 (Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 산프란시센시스 (Lactobacillus sanfranciscensis) 및 이들의 조합으로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속하는, 조성물 또는 용도.
  6. 제4항에 있어서,
    상기 비피도박테리움 속에 속하는 박테리아가 비피도박테리움 애니말리스 (B. animalis), 비피도박테리움 비피둠 (B. bifidum), 비피도박테리움 브레베 (B. breve), 비피도박테리움 인판티스 (B. infantis), 비피도박테리움 롱검 (B. longum), 비피도박테리움 아돌레센티스 (B. adolescentis), 비피도박테리움 카테눌라툼 (B. catenulatum), 비피도박테리움 안굴라툼 (B. angulatum), 비피도박테리움 에스테로이데스 (B. asteroides), 비피도박테리움 보우른 (B. bourn), 비피도박테리움 코에리눔 (B. choerinum), 비피도박테리움 코리네포름 (B. coryneforme), 비피도박테리움 쿠니쿨리 (B. cuniculi), 비피도박테리움 덴티콜렌스 (B. denticolens), 비피도박테리움 덴티움 (B. dentium), 비피도박테리움 갈리쿰 (B. gallicum), 비피도박테리움 갈리나룸 (B. gallinarum), 비피도박테리움 인디쿰 (B. indicum), 비피도박테리움 이노피나툼 (B. inopinatum), 비피도박테리움 락티스 (B. lactis), 비피도박테리움 마그넘 (B. magnum), 비피도박테리움 메리시쿰 (B. merycicum), 비피도박테리움 미니멈 (B. minimum), 비피도박테리움 슈도카테눌라툼 (B. pseudocatenulatum), 비피도박테리움 슈도롱검 (B. pseudolongum), 비피도박테리움 풀로럼 (B. pullorum), 비피도박테리움 루미난티움 (B. ruminantium), 비피도박테리움 세쿨라레 (B. saeculare), 비피도박테리움 섭틸리 (B. subtile), 비피도박테리움 서막시도필럼 (B. thermacidophilum), 비피도박테리움 서모필럼 (B. thermophilum) 및 비피도박테리움 츠루미엔스 (B. tsurumiense)로부터 선택되는; 더 바람직하게는, 바실러스 클라우시이 (Bacillus clausii), 바실러스 섭틸리스 (Bacillus subtilis), 바실러스 코아굴란스 (Bacillus coagulans), 바실러스 메가테리움 (Bacillus megaterium), 바실러스 할로두란스 (Bacillus halodurans), 바실러스 투링기엔시스 (Bacillus thuringiensis), 바실러스 인솔리투스 (Bacillus insolitus) 및 바실러스 마리누스 (Bacillus marinus)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속하거나; 및/또는
    프로피오니박테리움 속에 속하는 박테리아가 프로피오니박테리움 세르마니이 (P. shermanii), 프로피오니박테리움 아크네스 (P. acnes), 프로피오니박테리움 아우스트랄리엔스 (P. australiense), 프로피오니박테리움 아비둠 (P. avidum), 프로피오니박테리움 사이클로헥사니쿰 (P. cyclohexanicum), 프로피오니박테리움 프레우덴라이치이 (P. freudenreichii), 프로피오니박테리움 그라눌로섬 (P. granulosum), 프로피오니박테리움 얀세니이 (P. jensenii), 프로피오니박테리움 마이크로에어로필럼 (P. microaerophilum), 프로피오니박테리움 프로피오니쿰 (P. propionicum) 및 프로피오니박테리움 토에니이 (P. thoenii)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속하거나; 및/또는
    스트렙토코커스 속에 속하는 박테리아가 스트렙토코커스 서모필러스 (Streptococcus thermophilus), 스트렙토코커스 살리바리우스 (Streptococcus salivarius), 스트렙토코커스 아갈락티아 (Streptococcus agalactiae), 스트렙토코커스 안기노수스 (Streptococcus anginosus), 스트렙토코커스 보비스 (Streptococcus bovis), 스트렙토코커스 카니스 (Streptococcus canis), 스트렙토코커스 콘스텔라투스 (Streptococcus constellatus), 스트렙토코커스 다우네이 (Streptococcus downei), 스트렙토코커스 디스갈락티아 (Streptococcus dysgalactiae), 스트렙토코커스 에퀴누스 (Streptococcus equinus), 스트렙토코커스 페른스 (Streptococcus ferns), 스트렙토코커스 인판타리우스 (Streptococcus infantarius), 스트렙토코커스 이니아 (Streptococcus iniae), 스트렙토코커스 인터메디우스 (Streptococcus intermedius), 스트렙토코커스 밀레리 (Streptococcus milleri), 스트렙토코커스 미티스 (Streptococcus mitis), 스트렙토코커스 무탄스 (Streptococcus mutans), 스트렙토코커스 오랄리스 (Streptococcus oralis), 스트렙토코커스 오리스라티 (Streptococcus orisratti), 스트렙토코커스 파라상귀니스 (Streptococcus parasanguinis), 스트렙토코커스 페로리스 (Streptococcus peroris), 스트렙토코커스 뉴모니아 (Streptococcus pneumoniae), 스트렙토코커스 슈도뉴모니아 (Streptococcus pseudopneumoniae), 스트렙토코커스 피오게네스 (Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 라티 (Streptococcus ratti), 스트렙토코커스 티구리누스 (Streptococcus tigurinus), 스트렙토코커스 상귀니스 (Streptococcus sanguinis), 스트렙토코커스 소브리누스 (Streptococcus sobrinus), 스트렙토코커스 수이스 (Streptococcus suis), 스트렙토코커스 우베리스 (Streptococcus uberis), 스트렙토코커스 베스티불라리스 (Streptococcus vestibularis), 스트렙토코커스 비리단스 (Streptococcus viridans) 및 스트렙토코커스 주에피데미쿠스 (Streptococcus zooepidemicus)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속하거나; 및/또는
    락토코커스 속에 속하는 박테리아가 락토코커스 중앙엔시스 (L. chungangensis), 락토코커스 포르모센시스 (L. formosensis), 락토코커스 푸지엔시스 (L. fujiensis), 락토코커스 가르비에 (L. garvieae), 락토코커스 락티스 (L. lactis), 락토코커스 피슘 (L. piscium), 락토코커스 플란타룸 (L. plantarum), 락토코커스 라피노락티스 (L. raffinolactis) 및 락토코커스 타이완엔시스 (L. taiwanensise)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속하거나; 및/또는
    에어로코커스 속의 박테리아가 에어로코커스 유리네 (A. urinae), 에이로코커스 상귀니콜라 (A. sanguinicola), 에이로코커스 크리스텐세니이 (A. christensenii), 에이로코커스 수이스 (A. suis), 에이로코커스 유리네에퀴 (A. urinaeequi) 및 에이로코커스 유리네호미니스 (A. urinaehominis)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속하거나; 및/또는
    엔테로코커스 속에 속하는 박테리아가 엔테로코커스 아비움 (Enterococcus avium), 엔테로코커스 두란스 (Enterococcus durans), 엔테로코커스 패칼리스 (Enterococcus faecalis), 엔테로코커스 패슘 (Enterococcus faecium), 엔테로코커스 갈리나룸 (Enterococcus gallinarum), 엔테로코커스 헤모페록시두스 (Enterococcus haemoperoxidus), 엔테로코커스 히레 (Enterococcus hirae), 엔테로코커스 말로도라투스 (Enterococcus malodoratus), 엔테로코커스 모라비엔시스 (Enterococcus moraviensis), 엔테로코커스 문드티이 (Enterococcus mundtii), 엔테로코커스 슈도아비움 (Enterococcus pseudoavium), 엔테로코커스 라피노수스 (Enterococcus raffinosus) 및 엔테로코커스 솔리타리우스 (Enterococcus solitarius)로부터 선택되는 하나 이상의 종에 속하거나; 및/또는
    효모가 사카로마이세스 속, 더 바람직하게는 사카로마이세스 세레비지애 (Saccharomyces cerevisiae) 및/또는 사카로마이세스 보울라르디이 (Saccharomyces boulardii)의 종에 속하는, 조성물 또는 용도.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 미생물이 생균이거나, 사균이거나 또는 틴달 처리되거나 (tyndallized), 또는 세포용해물 (lysate) 및/또는 추출물 형태이거나, 또는 박테리아 생산물 형태이거나, 또는 상층액 형태이거나, 또는 파생물 형태 (derivative form), 바람직하게는 대사산물, 대사 부산물, 포스트-바이오틱스 (post-biotics), 세포벽 및 이의 구성성분, 엑소폴리사카라이드 (exopolysaccharide), 및 화합물로서 면역원성 성분, 바람직하게는 리보솜 및 당단백질로부터 선택되는 면역원성 성분을 함유한 화합물, 글루칸 및 기타 다당류와 같은 면역자극성 파생물 (immunostimulant derivatives), 리포사카라이드 및 상층액의 임의의 구성성분으로부터 선택되는 파생물 형태인, 조성물 또는 용도.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 미생물, 바람직하게는 박테리아가 미생물의 106 내지 1011 단위, 바람직하게는 108 내지 109 단위의 함량으로 존재하고, 상기 함량이 바람직하게는 1일 당 (매일) 용량인, 조성물 또는 용도.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
    국소 사용 (topical use), 바람직하게는, 크림, 겔, 오일, 유제, 스프레이, 거즈 (gauzes), 패치, 붕대, 로션, 무스, 연고, 페이스트 (pastes) 또는 즉석 조제 (extemporaneous preparation)용 액체 제형 형태의 국소 사용하기 위한 것인, 조성물 또는 용도.
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