CN112826788A - 一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物、制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物、制备方法及应用。本发明的组合物由天然非离子乳化剂、角鲨烷、菊粉、酵母菌绿藻发酵液、益生菌红茶发酵液、β‑葡聚糖和多元醇复合而成，属于天然来源，乳化粒径小，易于渗透，温和无刺激，具有促进角质细胞增殖，降低皮脂腺细胞内脂质含量，改善熬夜后皮肤部分菌属的丰度的功效。将该组合物用于化妆品中，日常使用能够改善皮肤的水分含量、经皮水分流失量、皮脂分泌量等生理参数，使熬夜后皮肤微生态和皮肤状态得到明显改善。

Description

一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物、制备方法及应用

技术领域

本发明涉及一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物、制备方法及应用，属于护肤品技术领域。

背景技术

对于皮肤微生物组的研究，是护肤行业内的研究热点，研究人员通过研究皮肤微生物组的菌群结构，揭示基于皮肤微生态平衡的护肤机理。皮肤微生态的发现，说明了其是人体生态系统的重要组成部分。皮肤微生物组作为一个生态系统，对于皮肤的健康至关重要。在皮肤表面每平方厘米有近100万个微生物，总共有1000亿个微生物存在于皮肤上，近1000种不同的微生物种群。皮肤微生态是一个均衡的系统，主要由丙酸杆菌、葡萄球菌和棒状杆菌组成，另外还有酵母菌等真菌和噬菌体构成。微生物组可以帮助调节影响我们的免疫和炎症系统，与我们的皮肤细胞进行交互；其次它们具有保护皮肤的功能，它们可以释放抗微生物肽，形成一个抗菌的防线，同时得益于它们的防粘粘属性，能够阻止某些病原体附着在我们皮肤的表面。除此之外，它还能作为皮肤屏障，对于皮肤的细胞更新，皮肤粘合力以及伤口愈合产生一系列积极影响。所以，我们可以认为皮肤的微生态它具有多种功能，并且通过各种方式与皮肤进行交互，是我们皮肤健康的重要影响因素。

基因、年龄以及生活方式三个因素会影响我们皮肤表面的微生物数量以及微生物部落内部的多样性。特别是生活方式对皮肤微生态的影响较为明显，有研究证明，皮肤微生态的改变与皮肤过早老化有直接关联，生活在污染地区的人，皮肤会过早的老化，一个非常显著性的标志是色素失调的情况有所增加，包括皱纹、斑点等。熬夜后面部皮肤的生理特征相关的研究已有相关报道，关于皮肤微生态的研究在近些年来逐渐增多并成为当前关于皮肤前沿研究的热点之一。

根据不同微生物在皮肤表面定植的时间长短，可将其分为常驻菌群与暂驻菌群。暂驻菌群在皮肤表面停留时间较短，对人体影响也较小，一般为皮肤与日常接触物接触时传递到皮肤表面的细菌，通常是造成皮肤感染的主要原因，常见的因微生物感染所导致的皮肤病有粉刺痤疮、过敏性皮炎、牛皮藓、蛇皮藓、口腔毛状白斑、细菌性血管瘤、蜂窝性组织炎等。常驻菌群是指长期定植于皮肤，已完全适应皮肤环境并产生依赖性，这类菌群可视为皮肤的核心菌群。皮脂腺和毛囊是这些常驻菌群的主要寄居地，形成了皮肤的第一道生物屏障，在皮肤微生态环境中具有维持平衡和自净的作用。不同个体的皮肤微生物菌群结构也是不同的。研究表明，皮肤常驻菌群能够：通过占位作用形成生物屏障，使致病菌及外籍菌无法立足于皮表并产生抑制病原菌的化合物；分解皮脂甘油三酯为脂肪酸，形成乳化皮脂膜，既对自身及表皮角质形成细胞具有营养作用，又可防止皮表水分蒸发；促进免疫器官发育，增强机体免疫。同时，皮肤的常驻菌群不仅定植于皮肤表层，还向真皮层内扩展。这表明微生物与机体间具有十分紧密的相互关系。

皮肤的常驻细菌主要有葡萄球菌、微球菌、丙酸杆菌、棒状杆菌、不动杆菌，常驻真菌有念珠菌、球拟酵母菌、表皮癣菌、小孢子菌、毛癣菌等。皮肤常驻菌与皮肤健康密切相关，正常菌群的第一功能就是参与皮肤组织代谢，形成一层乳化脂质膜，可以中和皮肤表面的碱性物质，维持皮肤表面的酸碱度从而抑制真菌等病原微生物的生长；皮肤常驻菌可以分解角质细屑或脂质从而使皮肤细胞吸收并且促进细胞生长，起到提供营养的作用；皮肤常驻菌群联合皮肤固有的免疫系统，构成了人体抵御致病微生物的屏障。

许多常见的皮肤疾病，被认为与皮肤表面的微生物有关，使用抗菌治疗后在临床上观察皮肤疾病得到改善。特定生物体相关的皮肤病分三种形式：第一，与相关微生物的皮肤疾病；第二，不明微生物成分引起的皮肤病；第三，一个皮肤共生微生物群体可以入侵造成感染。皮肤微生物群在维持皮肤免疫稳态中发挥着重要作用，当皮肤微环境的稳态遭到破坏时，就会引发一系列皮肤疾病，例如痤疮、黄褐斑、特应性皮炎等。现研究已经表明，金黄色葡萄球菌定植和感染常与特异性皮炎(AD)发病相关。在AD的发作期，金黄色葡萄球菌的检出率明显高于健康皮肤或AD患者治疗后的检出率，并且发现检出率与疾病的严重度密切相关。特应性皮炎患者的炎症皮损区的链球菌属、棒状杆菌属和丙酸杆菌属丰度下降，而金黄色葡萄球菌丰度增加，治疗后链球菌属、棒状杆菌属、丙酸菌属丰度增加。

目前，对于益生菌和益生元的研究主要集中在肠道等消化方面。益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥对肠道有益作用的活性有益微生物的总称。益生元是能够通过选择性的刺激一种或少数种菌落中的细菌的生长与活性而对寄主产生有益的影响从而改善寄主健康的不可被消化的成分。目前益生菌和益生元对于皮肤微生态方面的研究较少。

发明内容

本发明的目的是提供一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物、制备方法及应用。本发明的组合物由天然非离子乳化剂、角鲨烷、菊粉、酵母菌绿藻发酵液、益生菌红茶发酵液、β-葡聚糖和多元醇复合而成，属于天然来源，乳化粒径小，易于渗透，温和无刺激，具有促进角质细胞增殖，降低皮脂腺细胞内脂质含量，改善熬夜后皮肤部分菌属的丰度的功效。将该组合物用于化妆品中，日常使用能够改善皮肤的水分含量、经皮水分流失量、皮脂分泌量等生理参数，使熬夜后皮肤微生态和皮肤状态得到明显改善。

本发明的技术方案是：一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其组分及重量份为：天然非离子乳化剂0.2-2.0份，角鲨烷0.5-10.0份，菊粉0.5-3.0份，酵母菌绿藻发酵液1.0-5.0份，益生菌红茶发酵液0.5-10.0份，β-葡聚糖0.5-8.0份，多元醇0.5-8.0份，纯化水补足100份。

优选的，其组分及重量份为：天然非离子乳化剂1.0-2.0份，角鲨烷3.0-5.0份，菊粉1.0-2.5份，酵母菌绿藻发酵液1.0-3.0份，益生菌红茶发酵液1.0-5.0份，β-葡聚糖2.0-3.0份，多元醇1.0-3.0份，纯化水补足100份。

优选的，所述的天然非离子乳化剂为卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种。

优选的，所述的多元醇为辛甘醇、戊二醇、丁二醇、丙二醇、双丙甘醇和己二醇中的一种或两种。

菊粉是一种天然的多糖，属于膳食纤维，在医药和食品工业中具有较多的应用，特别是在保健食品领域具有较高的应用价值。有研究表明，菊粉能够调节肠道菌群，有选择性的刺激肠道有益菌特别是双歧杆菌和乳酸菌的生长和代谢活动。菊粉对宿主健康调节具有十分关键的作用，能够增强人体免疫功能，提高抗感染和延缓衰老的作用。

所述的酵母菌绿藻发酵液，其特征是，由下述方法制备而成：

(1)将绿藻清洗、粉碎后干燥成粉，并采用辐照灭菌处理；

(2)将酵母菌采用麦芽汁液体培养基培养，使培养液中酵母菌的活菌含量≥10⁶cfu/ml；

(3)酵母菌培养液中按照质量比2-10％添加量接入辐照后的绿藻粉，发酵48-72h，得到发酵液；将发酵液离心，取上清液；上清液再次离心，取上清液得到最终绿藻发酵液。

其中的绿藻为干燥或新采绿藻，优选干燥绿藻；所述的辐照灭菌为钴60辐照，等离子束辐照灭菌，优选的为等离子束辐照灭菌方式；辐照强度5000-8000kGy，优选7000kGy。所述的发酵时间优选为60h。所述的离心中，转速为6000-12000r/min，优选的为10000r/min。

所述的益生菌红茶发酵液，其特征是，由下述方法制备而成：

(1)取红茶加入其质量10-15倍的纯化水，进行高温加热；

(2)滤除茶叶，获得红茶滤液；

(3)将乳酸杆菌采用MRS培养基厌氧培养；然后向乳酸杆菌培养液中按体积比5-12％添加红茶滤液厌氧发酵24-48h，获得发酵液；

(4)将上述发酵液进行固液离心分离，上清液即为益生菌红茶发酵液。

上述步骤(3)中，乳酸杆菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌中的任一种，优选的是鼠李糖乳杆菌。乳酸杆菌有较强的代谢碳水化合物产酸能力，可以合成葡聚糖和杂多糖，能使糖类发酵产生乳酸或其他酸类物质。

其中的高温加热为：煮沸20-40min；乳酸杆菌厌氧培养为：37℃厌氧培养24-48h，优选48h；发酵液进行固液离心分离，优选10000-12000r/min离心30min。

所述β-葡聚糖可以市场购买，优选由下述方法制备而成：黑麦皮经过纯化水浸提(温度30～80℃)，离心后取上清液循环超滤浓缩后，用乙醇进行沉淀，分离沉淀，用热水溶解后离心，上清液蒸干后，即为β-葡聚糖。β-葡聚糖能够活化巨噬细胞与嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体含量，全面刺激机体免疫系统。

本发明还公开了上述组合物的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

S1:根据上述重量份称取各组分；将天然非离子乳化剂加入到多元醇中，形成液体一；

S2:将纯化水、液体一和β-葡聚糖加热溶解，形成液体二；

S3:将角鲨烷加入到液体二中，高压均质，形成液体三；

S4:将菊粉、酵母菌绿藻发酵液和益生菌红茶发酵液混合溶解后，加入到液体三中，形成该组合物。

优选的，所述的步骤S2中，加热温度为70-85℃。

优选的，所述的步骤S3中，高压均质的压力为10-100MPa，均质转速为8000-12000r/min，均质时间为10-20min。

上述组合物的应用，其特征是，可以添加到对熬夜后皮肤的护理产品中，比如精华、乳液、膏霜和面膜中。

本发明的组合物由天然非离子乳化剂、角鲨烷、菊粉、酵母菌绿藻发酵液、益生菌红茶发酵液、β-葡聚糖和多元醇复合而成，其中酵母菌绿藻发酵液含有酵母菌和促进细胞再生的成分，益生菌红茶发酵液含有乳酸菌和抗氧化作用的有效成分，二者复配不仅具有较好的促进增殖角质细胞增殖(图2、图3)，并且通过添加的酵母菌、乳酸菌等益生菌改善皮肤的菌群平衡，菊粉作为益生元，能够调节皮肤表面菌群结构，葡聚糖能激发机体免疫系统，角鲨烷对皮肤有较好的亲和性，天然非离子乳化剂起到乳化作用。各方面原料共同作用，使熬夜后皮肤微生态和皮肤状态得到了明显改善。

本发明通过试验证明，本发明的组合物温和无刺激，具有促进角质细胞增殖(图2、图3)，降低皮脂腺细胞内脂质含量的功效(图4)。使用含有该组合物的乳液产品28天可显著下调熬夜导致的部分细菌的丰度上升问题，有利于菌群平衡的恢复(图5、图6)，能降低经皮水分流失量(图7)，增加敏感皮肤的皮肤厚度，减少皮肤炎症与泛红(图8、图9)，有效减少面部皮肤油脂的分泌量(图10、图11)，产品质地好，香味舒适，温和无刺激，产品使用起来光滑易涂抹，易于吸收，水润，轻盈且不黏腻，深层滋润肌肤，肌肤透亮有光泽，皮肤的粗糙感改善和干燥感缓解，面部皮肤的整体感觉好(图12)。

本发明的有益效果：

1、提供了一种具有对熬夜后皮肤微生态有改善的皮肤护理组合物，功效显著，通过对熬夜人群皮肤微生态的研究和熬夜人群皮肤状态的测试，在使用该组合物的产品后，熬夜后皮肤微生态和皮肤状态得到了明显改善。

2、该组合物原料天然来源，产品粒径较小，渗透效果好，且安全温和，使用方便。

附图说明

图1为熬夜人群S1与非熬夜人群S0之间皮肤细菌物种组成差异(属水平)；其中“*”表示0.01≤P<0.05，“**”表示0.001≤P<0.01。

图2为不同测试样品和EGF对HaCat细胞存活率的影响图；

图3为不同测试样品和EGF对HaCat细胞的形态学影响图；

图4为组合物对皮脂腺细胞的影响图；

图5为使用受试产品前和使用28天后皮肤细菌物种组成(属水平)；其中YX0为产品使用前，YX1为产品使用28天后；

图6为皮肤细菌物种组成在使用受试产品前后的比较(属水平)；其中YX0为产品使用前，YX1为产品使用28天后；

图7为经皮水分流失量变化趋势图；其中，显著性标注方法：“n.s.”表示无统计学差异，p>0.05；“*”表示有显著性差异，0.01≤p<0.05，“**”表示有显著性差异，0.001≤p<0.01；“***”表示有显著性差异，p<0.001；

图8为受试者1在使用受试产品前和使用28天后红区改善情况(VISIA-CRRedAreas光源模式照片)对比图；

图9为受试者2在使用受试产品前和使用28天后红区改善情况(VISIA-CRRedAreas光源模式照片)对比图；

图10为受试者3在使用受试产品前和使用28天后油脂分泌改善情况(VISIA-CR)对比图；

图11为受试者4在使用受试产品前和使用28天后油脂分泌改善情况(VISIA-CR)对比图；

图12受试者使用产品后肌肤状况自评反馈结果。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例，实施例不应视作对本发明保护范围的限定。

实施例1

酵母菌绿藻发酵液的制备：(1)将绿藻清洗、粉碎后干燥成粉，并用7000kGy强度的等离子束辐照灭菌；(2)将酵母菌采用麦芽汁液体培养基培养，35℃培养48h，使培养液中酵母菌的活菌含量≥10⁶cfu/ml；(3)辐照后的绿藻粉，按照5％的添加量接入酵母菌培养基中，培养60h，得到发酵液；将发酵液10000r/min离心30min取上清液；上清液再次10000r/min离心30min取上清液，得到酵母菌绿藻发酵液。

益生菌红茶发酵液的制备：(1)红茶15g，加入150g纯化水100℃高温煮沸30min后滤除茶叶，得到红茶滤液；(2)将鼠李糖乳杆菌采用MRS培养基37℃厌氧培养48h；(3)向鼠李糖乳杆菌培养液中按体积比10％添加红茶滤液厌氧发酵48h，获得发酵液；将发酵液12000r/min离心后，取上清液即为益生菌红茶发酵液。

组合物的制备：

S1:在一容器中，加入2.0g卵磷脂和2.0g戊二醇，形成液体一；

S2:将余量的纯化水和3.0gβ-葡聚糖加入到液体一，加热至80℃进行溶解，形成液体二；

S3:将4.0g角鲨烷加入到液体二中，20MPa下12000r/min均质15min，得液体三；

S4:将1.3g菊粉、2.0g酵母菌绿藻发酵液和5.0g益生菌红茶发酵液加入到液体三中，溶解后形成该组合物。

实施例2

酵母菌绿藻发酵液的制备：(1)将绿藻清洗、粉碎后干燥成粉，并用8000kGy强度的等离子束辐照灭菌；(2)将酵母菌采用麦芽汁液体培养基培养，35℃培养48h，使培养液中酵母菌的活菌含量≥10⁶cfu/ml；(3)辐照后的绿藻粉，按照7％的添加量接入酵母菌培养基中，培养60h，得到发酵液；将发酵液10000r/min离心30min取上清液；上清液再次10000r/min离心30min取上清液，得到酵母菌绿藻发酵液。

益生菌红茶发酵液的制备：(1)取红茶20g，加入200g纯化水，100℃高温煮沸30min后滤除茶叶，得到红茶滤液；(2)将鼠李糖乳杆菌采用MRS培养基37℃厌氧培养48h；向鼠李糖乳杆菌培养液中按体积比8％添加红茶滤液厌氧发酵48h，获得发酵液；将发酵液12000r/min离心30min后，取上清液即为益生菌红茶发酵液。

组合物的制备：

S1:在一容器中，加入2.0g卵磷脂、1.5g辛甘醇和0.5g己二醇，形成液体一；

S2:将余量的纯化水和2.0gβ-葡聚糖加入到液体一，加热至80℃进行溶解，形成液体二；

S3:将5.0g角鲨烷加入到液体二中，30MPa下11000r/min均质20min，得液体三；

S4:将2.5g菊粉、3.0g酵母菌绿藻发酵液和1.5g益生菌红茶发酵液加入到液体三中，溶解后形成该组合物。

试验例1：熬夜人群生理参数与皮肤微生态种属情况

根据文献调研情况，初步设定23:00以前入睡的人群为非熬夜人群，分组记为S0，23:00以后入睡的人群为熬夜人群，分组记为S1。初步选取年龄段在18-35岁的女性人群作为研究对象。其中非熬夜组48例，平均年龄为26.92岁；熬夜组60例，平均年龄为25.76岁。两组的年龄经统计学分析，P值>0.05，差异无统计学意义(表1)，具有可比性。

表1熬夜组和非熬夜组基本情况

对熬夜人群的皮肤屏障生理参数进行统计分析，对脸部的角质层含水量、TEWL(经表皮失水率)、皮脂量的数据统计分析(表2)，结果如下：

表2熬夜对皮肤屏障生理参数的影响

注：*0.01≤P＜0.05，**0.001≤P＜0.01。

(1)角质层含水量；熬夜组S1的角质层含水量66.03明显低于非熬夜组S0的角质层含水量70.03，两组相比较具有统计学意义(P＜0.01)，说明熬夜会导致脸颊部位皮肤角质层含水量的下降，导致皮肤干燥。

(2)TEWL：熬夜组S1的TEWL值21.64明显高于非熬夜组S0的TEWL值20.39，两组相比较具有统计学意义(P＜0.05)，说明熬夜会使脸颊部位皮肤的TEWL值增加，导致皮肤的屏障功能受损。

(3)皮脂量：熬夜组的S1皮脂量为75.60，明显高于非熬夜组S0的皮脂量65.90，两组相比较具有统计学意义(P＜0.05)，说明熬夜会使脸颊部位皮肤的皮脂含量增加，导致皮肤更油腻。

因此，随着入睡时间的推迟，角质层含水量明显降低，TEWL值显著升高，皮脂量也在升高。因此，可以得出结论，随着入睡时间的推迟，皮肤屏障功能受损。

通过对熬夜人群S1和非熬夜人群S0的脸颊部位皮肤上丰度排名前15的物种进行组间物种差异分析(图1)，发现两组间具有显著差异性的菌属有7种，分别是奈瑟氏球菌科下某属(norank f_Neisseriaceae)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链球菌属(Streptococcus)、寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)、不动杆菌属(Acinetobacter)、嗜血杆菌属(Haemophilus)和奈瑟氏菌属(Neisseria)，其中熬夜导致假单胞菌属的菌丰度极显著增加，而奈瑟氏球菌科下某属、链球菌属、寡养单胞菌属、不动杆菌属、嗜血杆菌属和奈瑟氏菌属的菌丰度显著降低。

熬夜导致皮肤精致度变差同时导致假单胞菌丰度升高，链球菌与含水量成正相关，与经皮水分流失量(TEWL)成负相关。丙酸杆菌(Cutibacterium)丰度的增加与皮脂分泌量的增加正相关。

试验例2：组合物在敏感皮肤上封闭型斑贴实验

1.检测依据：《化妆品安全技术规范》(2015版)，第七章第2节，人体皮肤封闭型斑贴试验方法。

人体皮肤封闭型斑贴试验方法：选用合格的斑试器，将0.020～0.025mL受试物放入斑试器小室内。将加有受试物的斑试器贴敷在受试者背部，持续24h。24小时后去除受试物斑试器，分别于去除后0.5h、24h、48h观察皮肤反应，按《化妆品安全技术规范》(2015版)中皮肤反应分级标准，记录观察结果。

皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准详见表3。

表3皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准

依据《化妆品卫生规范(2007版)》中的结果解释，皮肤封闭型斑贴试验结果的判读标准为：30例受试者中，出现1级皮肤不良反应的人数多于5例，或2级皮肤不良反应的人数多于2例，或出现任何1例3级或3级以上皮肤不良反应时，判定受试物对人体有皮肤不良反应。

2.测试信息

志愿者人数：30人；

志愿者皮肤类型：敏感性皮肤；

志愿者年龄：23～60岁；

测试区域：背部；

3.测试结果

根据表3中的分级标准，在去除斑试器后的0.5h、24h和48h对志愿者受试区域的皮肤反应进行评分，结果见表4。结果可以看出，斑贴测试评分全部为零，对于敏感性皮肤来说，该组合物温和不刺激。

表4斑贴测试评分表(0.5h、24h、48h)

试验例3：对角质细胞的促增殖作用

将处于对数生长期的HaCaT细胞以2.0×10⁵个/ml的密度接种于96孔板，于37℃，CO₂培养箱培养24h，加入不同测试样品(用10％FBS的DMEM培养液配成2mg/mL酵母菌绿藻发酵液、2mg/mL益生菌红茶发酵液、1mg/mL组合物、2mg/mL组合物)来处理细胞24h、48h，用倒置相差显微镜观察不同浓度测试样品对细胞形态的影响(图3)；采用CCK-8方法检测测试样品对细胞增殖的影响。以表皮生长因子EGF(0.3μg/mL)的DMEM培养液(10％FBS)为阳性对照，评价组合物促进增殖角质细胞增殖的效果(图2)。

从图2中可以看出，组合物在不同浓度下对HaCaT细胞具有促增殖作用，明显好于阳性对照0.3μg/mL的EGF以及2mg/mL益生菌红茶发酵液及2mg/mL酵母菌绿藻发酵液，且促进作用与浓度存在正相关性。从图3可以看出，相对于阴性对照，组合物能够显著促进HaCaT细胞的增殖，细胞密度增加。

试验例4：组合物降低皮脂腺细胞内脂质含量

人皮脂腺细胞能够分泌大量脂质，从而引起皮肤出油较多。将含10％FBS、1％PS的DMEM培养基培养的皮脂腺细胞以2×10⁴/孔接种于96孔板中，培养24h后，分别加入1.0％组合物和空白培养基，继续培养12h。采用油红O法，测定脂质含量。

结果如图4所示，1.0％组合物能够改变皮脂腺细胞的形态，同时有效抑制脂质的合成。

试验例5：组合物在熬夜人群皮肤护理产品中的应用

上述实施例1制备的组合物的应用，含有该组合物的乳液产品配方如表5所示。

表5含有对熬夜人群皮肤微生态有益组合物的乳液产品配方

制备的乳液产品对熬夜人群进行试用，并进行使用前后的皮肤生理参数和皮肤微生态细菌物种种属变化进行分析。

检测时间：使用产品前、使用产品28天；

检测设备：PCR仪、CK皮肤测试仪、VISA皮肤检测仪等。

检测结果：

1.含有该组合物的产品对熬夜人群皮肤表面菌群结构的影响

检测时间：使用产品前、使用产品28天；

检测设备：PCR仪等。

对受试者的皮肤微生物样本的16SrDNAPCR扩增产物，进行分析比对基因序列，通过分类学分析结果(图5)显示，在受试者使用受试产品前后的皮肤菌群中，在属水平上至少在一组中丰度大于0.1％的丰度排名前10的细菌物种从高到低排列为：丙酸杆菌属(Cutibacterium)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、劳尔氏菌属(Ralstonia)、红球菌属(Rhodococcus)、链球菌属(Streptococcus)、布鲁氏菌属(Brucella)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、奈瑟菌属(Neisseria)、放线菌属(Actinomycetes)等。

通过物种组间差异分析结果(图6)显示，在属水平上排名前15的细菌物种中，相较于受试产品使用前，劳尔氏菌属(Ralstonia)(p<0.01)、嗜血杆菌属(Haemophilus)(p<0.05)在产品使用28天后有显著性上升；假单胞菌属(Pseudomonas)丰度明显下降，奈瑟菌属(Neisseria)丰度明显上升，但差异均无显著性；其余物种均无显著性变化。根据前期熬夜人群皮肤微生态研究结果，发现熬夜人群假单胞菌属(Pseudomonas)的丰度显著增加；而嗜血杆菌属(Haemophilus)和奈瑟菌属(Neisseria)的丰度显著降低。因此，结果表明：使用受试产品28天可显著下调熬夜导致的部分细菌的丰度上升，有利于菌群平衡的恢复。

2.2.含有该组合物的产品使用后对皮肤生理参数的影响

(1)经皮水分流失量

检测仪器：皮肤表面水分流失测试仪TewameterTM300(Courage&Khazaka，德国)

检测时间：使用产品前、使用产品14、28天；

结果判定：产品使用14、28天后，脸颊区域经皮水分流失量显著性低于使用前(图7)，表示该测试产品具修护、肌肤屏障的效果。

(2)对炎症的修复作用

检测仪器：VISIA CR(面部图像分析仪)；

检测时间：使用产品前、使用产品28天；

结果判定：含有该组合物的乳液能够较好的修复皮肤屏障(见图8、图9)，增加敏感皮肤的皮肤厚度，减少皮肤炎症与泛红。

(3)控制油脂分泌的作用

检测仪器：VISIA CR(面部图像分析仪)；

检测时间：使用产品前、使用产品28天；

结果判定：含有该组合物的乳液能够起到较好的控制油脂分泌的作用(见图10、图11)，能够有效减少面部皮肤油脂的分泌量。

(4)受试者自我评估统计

受试者通过问卷调查形式，填写含有该组合物的乳液使用后的自我评估情况，并经过数据分析，得到使用效果统计如下(图12)，说明产品质地好，香味舒适，温和无刺激，产品使用起来光滑易涂抹，易于吸收，水润，轻盈且不黏腻，深层滋润肌肤，肌肤透亮有光泽，皮肤的粗糙感改善和干燥感缓解，面部皮肤的整体感觉好。

Claims (10)

1.一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其特征是，其组分及重量份为：天然非离子乳化剂0.2-2.0份，角鲨烷0.5-10.0份，菊粉0.5-3.0份，酵母菌绿藻发酵液1.0-5.0份，益生菌红茶发酵液0.5-10.0份，β-葡聚糖0.5-8.0份，多元醇0.5-8.0份，纯化水补足100份。

2.如权利要求1所述的一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其特征是，其组分及重量份为：天然非离子乳化剂1.0-2.0份，角鲨烷3.0-5.0份，菊粉1.0-2.5份，酵母菌绿藻发酵液1.0-3.0份，益生菌红茶发酵液1.0-5.0份，β-葡聚糖2.0-3.0份，多元醇1.0-3.0份，纯化水补足100份。

3.如权利要求1或2所述的一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其特征是，

所述的酵母菌绿藻发酵液，由下述方法制备而成：

(1)将绿藻清洗、粉碎后干燥成粉，并采用辐照灭菌处理；

(2)将酵母菌采用麦芽汁液体培养基培养，使培养液中酵母菌的活菌含量≥10⁶cfu/ml；

(3)酵母菌培养液中按照质量比2-10％添加量接入辐照后的绿藻粉，发酵48-72h，得到发酵液；将发酵液离心，取上清液；上清液再次离心，取上清液得到最终绿藻发酵液。

4.如权利要求3所述的一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其特征是，

所述的绿藻为干燥或新采绿藻；

所述的辐照灭菌为钴60辐照或者等离子束辐照灭菌，所述等离子束辐照灭菌的辐照强度5000-8000kGy；

所述离心，转速为6000-12000r/min。

5.如权利要求1或2所述的一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其特征是，

所述的益生菌红茶发酵液，由下述方法制备而成：

(1)取红茶加入其质量10-15倍的纯化水，进行高温加热；

(2)滤除茶叶，获得红茶滤液；

(3)将乳酸杆菌采用MRS培养基厌氧培养；然后向乳酸杆菌培养液中按体积比5-12％添加红茶滤液厌氧发酵24-48h，获得发酵液；

(4)将上述发酵液进行固液离心分离，上清液即为益生菌红茶发酵液。

6.如权利要求5所述的一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其特征是，

所述乳酸杆菌为德氏乳杆菌保加利亚亚种、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、格氏乳杆菌、瑞士乳杆菌中的任一种；

所述高温加热为：煮沸20-40min；

所述乳酸杆菌厌氧培养为：37℃厌氧培养24-48h；

所述发酵液进行固液离心分离为10000-12000r/min离心30min。

7.如权利要求1或2所述的一种对熬夜后皮肤微生态有益的组合物，其特征是，

所述的天然非离子乳化剂为卵磷脂、氢化卵磷脂中的一种；

所述的多元醇为辛甘醇、戊二醇、丁二醇、丙二醇、双丙甘醇和己二醇中的一种或两种。

8.权利要求1或2所述的组合物的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

S1:根据上述重量份称取各组分；将天然非离子乳化剂加入到多元醇中，形成液体一；

S2:将纯化水、液体一和β-葡聚糖加热溶解，形成液体二；

S3:将角鲨烷加入到液体二中，高压均质，形成液体三；

S4:将菊粉、酵母菌绿藻发酵液和益生菌红茶发酵液混合溶解后，加入到液体三中，形成该组合物。

9.如权利要求8所述的组合物的制备方法，其特征是，

所述的步骤S2中，加热温度为70-85℃。

所述的步骤S3中，高压均质的压力为10-100MPa，均质转速为8000-12000r/min，均质时间为10-20min。

10.权利要求1或2所述的组合物在制备对熬夜后皮肤的护理产品中的应用。

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