TWI668009B

TWI668009B - 用於皮膚美白之包含經醱酵之小麥胚芽的皮膚外用劑

Info

Publication number: TWI668009B
Application number: TW106115599A
Authority: TW
Inventors: 楊泰周; 吳漢納; 李知訓; 朴承源; 李相範; 趙成捘
Original assignee: 南韓商Ｃｊ第一製糖股份有限公司
Priority date: 2016-05-11
Filing date: 2017-05-11
Publication date: 2019-08-11
Also published as: TW201808324A; KR20170128098A; AR109455A1; KR101929658B1

Abstract

本揭露內容係關於用於皮膚美白或預防、改善或治療皮膚色素過度沉積疾病之外用組成物，包含小麥胚芽之醱酵產物或其提取物作為活性成分。

Description

用於皮膚美白之包含經醱酵之小麥胚芽的皮膚外用劑

本揭露內容係關於用於皮膚美白之外用組成物，其含有小麥胚芽之醱酵產物的提取物作為活性成分。

當曝露於紫外線時，皮膚可合成黑色素並因此保護身體不受紫外線傷害。由紫外光照射造成之臨時增長的黑色素移動至相鄰之膠質細胞並於該細胞內蓄積。黑色素之合成的增長及其後續於皮膚內之蓄積可造成皮膚內之色素沉積，令皮膚呈現黑色。為了防止此色素沉積，業經提出藉由抑制該合成或酪胺酸酶(亦即，產生黑色素之酶)之活性而減少黑色素產生的方法。

習知美白成分之實例可包括材料如熊果苷(albutin)、麴酸、壬二酸、蘆薈辛(aloecin)、4-丁基間苯二酚、白藜蘆醇、腦醯胺、神經胺醇-1-磷酸酯、神經胺醇磷醯膽鹼等；氫醌(韓國專利申請案第2016-0014271號)、維生素C(L-抗壞血酸)、及其衍生物；以及源自綠茶之茶梗的提取物(韓國專利申請案第2015-0025540號)等。

惟，此等材料於下述方面具有問題：當施用於皮膚時，由於皮膚安全性課題如刺激、紅斑等之存在，其用量受限；或者，該等材料之功效微不足道，因此，實質性功效不可預期。此外，由於所加入之用來移除氫醌造成之刺激的化合物，亦存在安全問題。

據此，對於研發抑制黑素原生成之功效高於現有材料者之優異的美白成分存在需求。

這種情況下，本發明人等業經作成多種嘗試，以研發具有優異之美白功效的皮膚外用組成物，且作為結果，他們業經發現，小麥胚芽之醱酵產物的提取物不僅具有優異之安定性，而且具有優異之黑素原生成抑制效應，因此，可提供優異之美白效應，從而完成本揭露內容。

本揭露內容之一目標為提供用於皮膚美白之美容組成物，其含有小麥胚芽之醱酵產物或其提取物。

本揭露內容之另一目標為提供用於預防或治療皮膚高色素沉積疾病之醫藥組成物，其含有小麥胚芽之醱酵產物或其提取物。

本揭露內容之又一目標為提供用於預防或治療皮膚高色素沉積疾病之方法，其包括將小麥胚芽之醱酵產物或其提取物、或本揭露內容之醫藥組成物給藥至有此需要之個體。

本揭露內容之又一目標為提供用於皮膚美白之準藥物組成物，其含有小麥胚芽之醱酵產物或其提取物。

本揭露內容之又一目標為提供用於皮膚美白之方法，其包括將小麥胚芽醱酵產物或其提取物、或本揭露內容之醫藥組成物給藥至有此需要之個體。

為達成該目標，本揭露內容之一態樣係提供用於皮膚美白之美容組成物，其含有小麥胚芽之醱酵產物或其提取物。

本文中，術語「小麥胚芽」係指代小麥種子之胚芽。其係小麥籽粒之具有充分營養物質之胚芽，於將全麥處理為麵粉之研磨進程中被移除，其佔據該全麥籽粒之約2%至約3%。小麥胚芽被認知為具有豐富的維生素E(生育酚)，迄今，其業經作為抗氧化性維生素而為人所知，且根據近期研究，自經醱酵之小麥胚芽提取之天然材料被認知為具有修復受損之人體免疫功能的效果。惟，小麥胚芽於改善皮膚皺紋方面之效果尚未知悉。

本揭露內容之小麥胚芽可含有乾燥產物、濃縮物、或其混合物，但不限於此。

本文中，術語「醱酵」係指包括使用微生物進行之有機材料的酶促降解或代謝降解的全部活動或過程，。

本文中，術語「小麥胚芽之醱酵產物」係指使用微生物進行之小麥胚芽之酶促降解或代謝降解所得的產物。

本揭露內容中，小麥胚芽之醱酵產物可指藉由接種微生物於小麥胚芽或含有小麥胚芽之培養基內之後培養而得者。詳而言，該微生物可係選自由酵母、乳酸菌、細菌及真菌所組成之群組中的至少一者。

酵母可係啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、葡萄釀酒酵母(S.ellipsoideus)、朝鮮糖酵母(S.coreanus)、卡氏酵母(S.carlsbergensis)、巴斯德酵母(S.pastorianus)、乳酸酵母(S.lactis)、魯氏酵母(S.rouxii)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、漿醪結合酵母(Zygosaccharomyces major)、異常漢遜酵母(Hansenula anomala)、葡萄酒酒香酵母(Brettanomyces bruxellensis)、班圖酒香酵母(B.custersianus)、異常德克拉酵母(Dekkera anomala)、橄欖產色鏈黴菌(Streptomyces olivochromogenes)、或灰色鏈黴菌(S.griseus)，但並不限於此，只要該酵母可顯現作為本揭露內容之目標的皮膚美白效果即可。舉例而言，該酵母可係啤酒酵母。

該乳酸菌可係雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、片球菌屬(Pediococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)、或明串珠菌屬(Leuconostoc)之微生物，但並不限於此，只要該乳酸菌可顯現作為本揭露內容之目標的皮膚美白效果即可。舉例而言，該細菌可係兩歧雙歧桿菌(B.bifidum)、短雙歧桿菌(B.breve)、長雙歧桿菌(B.longum)、動物雙歧桿菌(B.animalis)、乳酸雙歧桿菌(B.lactis)、嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)、乾酪乳桿菌(L.casei)、加氏乳桿菌(L.gasseri)、德氏乳桿菌(L.delbrueckii spp.)、保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)、瑞士乳桿菌(L.helveticus)、醱酵乳桿菌(L.fermentum)、副乾酪乳桿菌(L.paracasei)、植物乳桿菌(L.plantarum)、羅伊氏乳桿菌(L.reuteri)、鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)、唾液乳桿菌(L.salivarius)、乳酸乳桿菌(L.lactis)、啤酒片球菌(P.cerevisiae)、乳酸片球菌(P.acidilactici)、乳酸鏈球菌(S.lactis)、嗜熱鏈球菌(S.thermophiles)、乳酪鏈球菌(S.cremoris)、或腸膜明串珠菌(L.mesenteroides)。本揭露內容中，乳桿菌及乳酸菌可作為相同意義使用。

此外，用於醱酵之真菌可包括蘑菇，但並不限於此，且該蘑菇可包括，舉例而言，香菇(Lentinus edodes)、平菇(Pleurotus ostreatus)、金針菇(Enokitake)、松茸(Matsutake)、雙孢蘑菇(Agaricus bisporus)、黑木耳(Auricularia auricula-judae)、猴頭菇(Hericium erinaceum)、靈芝(Ganoderma japonicum)、或桑黃(Phellinus linteus)，但並不限於此，只要該蘑菇可顯現作為本揭露內容之目標的皮膚美白效果即可。

用於本揭露內容之小麥胚芽發酵產物之製備的該微生物之接種量、培養溫度、培養濕度、及培養時間，可由所屬技術中具有通常知識者慮及待用於醱酵之微生物種類等而適當選擇之。本揭露內容之培養的非限制性實例可於20℃至40℃施行12小時至60小時。詳而言，本揭露內容之培養可於25℃至35℃、28℃至32℃、或30℃之溫度施行，及/或施行時間為12小時至50小時、20小時至50小時、30小時至50小時、35小時至45小時、38小時至42小時、或40小時。

本文中，術語「小麥胚芽醱酵產物之提取物」係指藉由移除微生物而自醱酵產物獲得者。

本揭露內容中之移除可包括任何方法，只要該方法可移除微生物醱酵產物中所含有之微生物(如，酵母菌體)即可。

詳而言，本揭露內容之小麥胚芽的醱酵產物可係藉由令本揭露內容之小麥胚芽的醱酵產物進行離心處理所得之上清液。更詳而言，該離心處理可以6,000rpm至10,000rpm、7,000rpm至9,000rpm、7,500rpm至8,500rpm、7,800rpm至8,200rpm、或8,000rpm施行，及/或施行時間為5分鐘至120分鐘、5分鐘至90分鐘、5分鐘至60分鐘、5分鐘至40分鐘、5分鐘至30分鐘、10分鐘至120分鐘、10分鐘至90分鐘、10分鐘至60分鐘、10分鐘至40分鐘、10分鐘至30分鐘、15分鐘至120分鐘、15分鐘至90分鐘、15分鐘至60分鐘、15分鐘至40分鐘、15分鐘至30分鐘、15分鐘至25分鐘、或20分鐘。

本揭露內容之小麥胚芽之醱酵產物的提取物包括，可使用該醱酵產物形成之全部種類之製劑的提取物，如本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物的提取物自身、其稀釋物、其濃縮物、其乾燥產物、其粗純化產物、其純化產物、或其混合物。詳而言，本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物的提取物可係乾燥產物，且更詳而言，係凍乾產物。

此外，本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物的提取物可藉由任何方法從小麥胚芽之醱酵產物獲得，只要該提取物具有皮膚美白效果、或預防、改善或治療皮膚色素過度沉積疾病之效果即可。用於獲得該提取物之非限制性實例可包括冷沉澱方法，其包括將小麥胚芽之醱酵產物浸沒於溶劑中，之後於10℃至25℃之室溫提取；熱提取方法，其藉由在40℃至100℃加熱而施行；超音波提取方法，其藉由施用超音波而施行；回流提取方法，其使用回流冷凝器；等。此等方法可單獨使用或以兩種或更多種之結合而使用。

待用於本揭露內容之提取過程中之提取溶劑的種類並無特別限制，可使用該技藝中習知之任何溶劑。本揭露內容之提取溶劑的非限制性實例可包括選自由水、具有1個至4個碳原子之醇、己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷所組成之群組的溶劑，詳而言，本揭露內容之提取溶劑可係熱水。

本揭露內容之提取物可包括其餾分。本文中，術語「餾分」係指作為施行用於從包括多種組分之混合物分離特定組分或組分群組之分餾的結果而獲得之產物。

本揭露內容之用於獲得餾分之分餾方法並無特別限制，可使用所屬技術領域中常規使用之任何方法。該分餾方法之實例可包括溶劑分餾方法，其使用多種溶劑實施分餾；超濾分餾方法，其藉由穿過具有恆定分子截留值之超濾膜而實施分餾；多種色層分析術(經加工用於根據尺寸、電荷、疏水性、或親和性進行分離)；其組合等。

本揭露內容之待用於獲得餾分之分餾溶劑的種類並無特別限制，可使用所屬技術領域中習知之任何溶劑。本揭露內容之分餾溶劑的非限制性實例可包括極性溶劑，如水、醇等；以及非極性溶劑，如己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等。此等溶劑可單獨使用或以至少一種之組合而使用。

所含有之本揭露內容之小麥胚芽發酵產物或其提取物的量可係，以本揭露內容之組成物之總重量為基準計，0.001wt%至10wt%；且詳而言，以本揭露內容之組成物之總重量為基準計，0.01wt%至7wt%、0.01wt%至5wt%、0.01wt%至3wt%、0.01wt%至2wt%、0.01wt%至1wt%、0.05wt%至10wt%、0.05wt%至7wt%、0.05wt%至5wt%、0.05wt%至3wt%、0.05wt%至2wt%、0.05wt%至1wt%、0.1wt%至10wt%、0.1wt%至7wt%、0.1wt%至5wt%、0.1wt%至3wt%、0.1wt%至2wt%、0.1wt%至1wt%、0.5wt%至10wt%、0.5wt%至7wt%、0.5wt%至5wt%、0.5wt%至3wt%、0.5wt%至2wt%、0.5wt%至1wt%、0.8wt%至10wt%、0.8wt%至7wt%、0.8wt%至5wt%、0.8wt%至 3wt%、0.8wt%至2wt%、0.8wt%至1wt%、或1wt%。

於本揭露內容之組成物中，所含有之本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物或其提取物的量可係0.1μg/mL至100μg/mL。詳而言，於本揭露內容之組成物中，所含有之本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物或其提取物的量可係0.1μg/mL至70μg/mL、0.1μg/mL至50μg/mL、0.5μg/mL至70μg/mL、0.5μg/mL至50μg/mL、0.8μg/mL至70μg/mL、0.8μg/mL至50μg/mL、1μg/mL至70μg/mL、1μg/mL至50μg/mL、5μg/mL至70μg/mL、5μg/mL至50μg/mL、8μg/mL至70μg/mL、8μg/mL至50μg/mL、10μg/mL至70μg/mL、或10μg/mL至50μg/mL。

根據本揭露內容之例示性態樣，本揭露內容之組成物可抑制酪胺酸酶之活性及/或抑制黑素原生成。

本揭露內容之組成物可呈選自由溶液、懸浮液、乳液、貼劑、凝膠、乳霜、洗劑、粉末、皂、含界面活性劑之卸妝油、粉狀粉底、粉底液、蠟狀粉底、噴劑、及面膜所組成之群組的形式而提供。

本揭露內容之美容組成物可進一步包括載劑。

本揭露內容之美容上可接受之載劑的種類並無特別限制，只要該載劑並不抑制生物活性或其特徵即可，可使用常規使用且美容上可接受之任何載劑。該美容上可接受之載劑的非限制性實例可包括鹽水、無菌水、緩衝鹽水、葡萄糖溶液、麥芽糖糊精溶液、甘油、乙醇等。此等載劑可單獨使用或以至少兩種之組合而使用。本揭露內容中，該載劑可包括非天然存在之載劑。

本揭露內容之化妝上可接受之載劑可根據美容組成物之配方而改變。

當本揭露內容之美容組成物製劑係糊劑、乳霜或凝膠之形式時，作為載劑組分，可使用礦物油、植物油、蠟、石蠟、澱粉、黃芪膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、矽膠、皂土、氧化矽、滑石、氧化鋅等，但載劑組分並不限於此。

當本揭露內容之美容組成物製劑係粉末或噴劑之形式時，作為載劑組分，可使用乳糖、滑石、氧化矽、氫氧化鋁、矽酸鈣、聚醯亞胺粉末等，特別地，當該製劑係噴劑形式時，可額外包括推進劑如氯氟烴類、丙烷/丁烷或二甲醚，但載劑組分並不限於此。

當本揭露內容之美容組成物製劑係溶液或乳液形式時，作為載劑組分，可使用溶劑、溶解劑或乳化劑等，舉例而言，可使用水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油類，特別是棉籽油、花生油、小麥胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油、甘油脂肪酸酯類、聚乙二醇類或失水山梨醇之脂肪酸酯類，但載劑組分並不限於此。

當本揭露內容之美容組成物製劑係懸浮液形式時，作為載劑組分，可使用液體稀釋劑如水、乙醇、或丙二醇；懸浮劑如乙氧基化異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇酯及聚氧乙烯失水山梨醇酯；微晶纖維素；偏氫氧化鋁；皂土；瓊脂或黃芪膠，但載劑組分並不限於此。

當本揭露內容之美容組成物製劑係皂之形式時，作為載劑組分，可使用脂肪酸之鹼金屬鹽類、脂肪酸-蛋白質水解產物、羥乙基磺酸鹽、羊毛脂衍生物、脂肪族醇類、植物油、甘油、醣類等，但載劑組分並不限於此。

當本揭露內容之美容組成物製劑係面膜之形式時，可包括全部面膜，如含有聚乙烯醇等之剝撕式面膜；洗除式面膜，其中，顏料如高嶺土、滑石、氧化鋅、氧化鈦等係包含於通用乳液型化妝品中；以及片式面膜，但面膜並未特別限制於此。

本揭露內容之美容組成物的組成可進一步包括傳統上作為組分而包括於皮膚外用劑中的組分，如水、界面活性劑、保濕劑、低級醇類、螯合劑、殺菌劑、抗氧化劑、顏料、芳香劑等。

為達成本揭露內容之目標，本揭露內容之另一方面係提供用於預防或治療皮膚色素過度沉積疾病之醫藥組成物，其含有小麥胚芽之醱酵產物或其提取物。

關於本揭露內容之醫藥組成物，可對其施用小麥胚芽、其醱酵產物、或其提取物之全部者。

本文中，術語「皮膚色素過度沉積疾病」係指一疾病，其症候係藉由色素於皮膚上之過量沉積而表示，且詳而言，該皮膚色素過度沉積疾病可係黑皮病、雀斑、斑點、或黑色素瘤。

本文中，術語「預防」係指本揭露內容之醫藥組成物抑制或延遲皮膚色素過度沉積疾病之症候如黑皮病、雀斑、斑點或黑色素瘤等之出現的全部作用。

本文中，術語「治療」係指本揭露內容之醫藥組成物改善或有益地改變皮膚色素過度沉積疾病之症候如黑皮病、雀斑、斑點或黑色素瘤等之全部作用。

本揭露內容中，該醫藥組成物可進一步包括醫藥上可接受之載劑。

本文中，術語「醫藥上可接受之載劑」係指載劑或稀釋劑，其既不造成對生物體之顯著刺激，也不抑制本揭露內容之醫藥組成物對皮膚色素過度沉積疾病之症候的預防或治療活性。待配製為適用於殺菌及生物形容性之溶液之組成物中之醫藥上可接受之載劑的實例，可包括鹽水、無菌水、林格溶液、緩衝鹽水、白蛋白注射溶液、葡萄糖溶液、麥芽糊精溶液、甘油、及乙醇，且此等組分之至少一者可混合而使用。必要時，可加入其他常規添加劑如抗氧化劑、緩衝鹽水、抑菌劑等。

此外，本揭露內容之醫藥上可接受之載劑可包括非天然存在之載劑。

本揭露內容之醫藥上可接受之組成物可以醫藥有效量以單劑或多劑形式給藥。

本文中，術語「醫藥有效量」係指足以用來以適用於醫學治療之合理之效益/風險比預防或治療疾病的量，且該有效劑量之該水準可基於包括下述之因素而確定之：患病之嚴重性、藥物活性、患者體重、健康狀況、性別、藥物敏感性、所使用之本揭露內容之組成物的給藥時間、給藥途徑及溶解速率、治療之持續時間、包括將所使用之本揭露內容之組成物或待同步組合使用之一種或多種藥物混合的因素、及醫學領域習知之其他因素。

為達成上述目標，本揭露內容之另一方面係提供用於預防或治療皮膚色素過度沉積疾病之方法，該方法係包括對有此需要之個體給藥小麥胚芽醱酵產物或其提取物、或本揭露內容之醫藥組成物。

關於本揭露內容之用於預防或治療皮膚色素過度沉積疾病之方法，小麥胚芽、小麥胚芽之醱酵產物、小麥胚芽醱酵產物之提取物、及皮膚色素過度沉積疾病、預防及治療係與上文解釋者相同。

本文中，術語「給藥」係指藉由適宜之方式將特定材料引入個體體內，本揭露內容之組成物可經由任何一般路徑給藥，只要該組成物可藉由該路徑而抵達體內之靶標組織即可。本揭露內容之組成物可經口或腸道外給藥，但並不特別限制於此。詳而言，該組成物可於腸道外給藥，且更詳而言，該組成物可藉由將該組成物施用至皮膚之方法(亦即，表皮應用)而施用。詳而言，本揭露內容之給藥可每天施行1至4次、2至3次、或2次。此外，本揭露內容之給藥可施行至少4週、至少8週之時期、或4週至12週之時期、或8週至12週之時期。

為達成上揭目標，本揭露內容之又一方面係提供用於皮膚美白之準藥物組成物，其係含有小麥胚芽之醱酵產物或其提取物。

關於該準藥物組成物，該小麥胚芽、小麥胚芽之醱酵產物、及小麥胚芽醱酵產物之提取物係與上文解釋者相同。

本文中，術語「準藥物」係指具有比用於診斷、治愈、改善、緩解、治療、或預防人類或動物疾病之產物中的醫學藥物更溫和之作用的產物。舉例而言，根據韓國藥事法(the pharmaceutical affairs act of Korea)，「準藥物」係包括用於治療或預防人類及動物之產物以及對人體具有溫和效果或並不直接作用於人體的產物，但不包括作為醫療劑而使用之產物。

本揭露內容之準藥物組成物可製備為選自由沐浴露、泡沫浴、皂、面膜、軟膏、乳霜、洗液、精華液、及噴劑所組成之群組的形式，但並不限於此。

當本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物或其提取物係作為用於準藥物之添加劑而使用時，該小麥胚芽之醱酵產物或其提取物可直接加入或與其它準藥物或準藥物組分組合使用，且可根據傳統方法適宜地使用。

為達成上述目標，本揭露內容之又一方面係提供用於皮膚美白之方法，該方法係包括對有此需要之個體給藥本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物、其提取物、或本揭露內容之組成物。

關於本揭露內容之用於皮膚美白之方法，該小麥胚芽、小麥胚芽之醱酵產物、該醱酵產物之提取物、本揭露內容之組成物、及給藥係與上文解釋者相同。

本揭露內容之小麥胚芽醱酵產物、其提取物、或本揭露內容之組成物可以有效量給藥至有此需要之個體。

該有效量之水準可由所屬技術領域中具有通常知識者基於一般知識確定為顯現皮膚美白效果之程度。

第1圖係顯示例示性說明於Melan-a細胞上施行之根據本揭露內容之例示性態樣的小麥胚芽醱酵產物之提取物(標註為「CJ」)之細胞毒性測試結果的圖。

第2圖係顯示例示性說明根據本揭露內容之例示性態樣之小麥胚芽醱酵產物之提取物(CJ)的酪胺酸酶抑制活性之程度的圖。

第3圖係顯示例示性說明根據本揭露內容之例示性態樣之小麥胚芽醱酵產物之提取物(CJ)的黑素原生成抑制活性之程度的圖。

第4係顯示，根據本揭露內容之例示性態樣，於使用含有小麥胚芽醱酵產物之提取物的產品(CJD乳霜)與陰性對照產品(對照乳霜)後，根據時間點進行之皮膚顏色之裸眼評估的百分比變化。

第5圖係顯示，根據本揭露內容之例示性態樣，於使用含有小麥胚芽醱酵產物之提取物的產品(CJD乳霜)與陰性對照產品(對照乳霜)後，根據時間點進行之皮膚黑色素指數(MI)之裸眼評估的百分比變化。

[本發明之有益效果]

本揭露內容之組成物無毒，具有優異之安定性，亦顯現抑制酪胺酸酶活性及黑色素合成以及改善色素沉積之效果，因此可作為用於皮膚美白或預防、改善或治療皮膚色素過度沉積疾病之外用劑而使用。

[本發明之詳細說明]

後文中，將參考下述實施例更詳細揭示本揭露內容。惟，此等實施例係僅用於例示性說明之目的，且本發明不欲為此等實施例所限。

製備實施例1：小麥胚芽醱酵產物之提取物的製備

將小麥胚芽(50g，韓國希傑集團(CJ Cheiljedang Corp.,Korea))及水(500g)加入燒瓶中，混合均勻，於121℃殺菌15分鐘，冷卻。隨後，以小麥胚芽之重量為基準，接種乾燥酵母(麵包酵母、啤酒酵母、安琪酵母，5%；2.5g)至小麥胚芽內，於30℃醱酵40小時，於8000rpm離心處理20分鐘，回收上清液。藉由凍乾回收上清液，并自該上清液製備小麥胚芽醱酵產物之提取物。

本實施例中，小麥胚芽醱酵產物之提取物係命名為「CJ」。

實驗實施例1：小麥胚芽醱酵產物之提取物 的細胞存活率檢定

關於製備實施例1之小麥胚芽醱酵產物的提取物，於melan-a細胞中施行細胞存活率檢定。

詳而言，將melan-a細胞以等量小樣置於96孔板中，濃度為5×10⁴細胞/孔，於RPMI 1640培養基中、37℃、10% CO₂條件下培養24小時，其中，該培養基中加入胎牛血清(FBS)、50U/mL青黴素、50μg/mL鏈黴素、及200nM佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-醋酸酯(PMA)。

培養之後，細胞係於飢餓狀態維持12小時，根據濃度分別將製備實施例1之小麥胚芽醱酵產物的提取物(實驗組)及不進行補充之RPMI 1640培養液(對照組)加入該細胞中，培養24小時。隨後，對於細胞存活率之量測，將水溶性四唑鹽-1(WST-1,Roche)反應溶液以1：10之比率稀釋於不進行補充之培養液中，將經稀釋之反應溶液加載至每一孔(100μL/孔)，令其反應1小時，量測其在450nm之吸光度。隨後，獲得經支部實施例1之小麥胚芽醱酵產物之提取物(CJ)處理的melan-a細胞(實驗組)相對於僅使用不進行補充之培養基處理之melan-a細胞的相對細胞存活率。結果證實，於以100μg/mL或更低濃度之小麥胚芽醱酵產物的提取物處理中，未顯示特別的細胞毒性(第1圖)。據此，對於後續之體外實施例及實驗實施例，小麥胚芽醱酵產物之提取物的濃度係設定為50μg/mL或更低。

實驗實施例2：美白效果之評估

2-1：抑制酪胺酸酶活性之實驗

將0.1M磷酸鹽緩衝液(220μL)、製備實施例1之小麥胚芽醱酵產物之提取物於漢克斯平衡鹽溶液(HBSS,Sigma-Aldrich,20μL)中之稀釋液、及蘑菇酪胺酸酶溶液(1500U/mL,20μL)以此加入試管中，將1.5mM酪胺酸溶液(40μL)加至其中以製備樣本溶液，於37℃反應10分鐘至15分鐘。隨後，使用ELISA閱讀器於490nm量測生成物之吸光度。作為空白樣本溶液，使用0.1M磷酸鹽緩衝液(pH 6.5)替代HBSS稀釋液。隨後，藉由下述等式1計算抑制率。

[等式1]酪胺酸酶活性之抑制率(%)=100-[(b-b’)/(a-a’)]×100

a：空白樣本溶液於反應後之吸光度

b：樣本溶液於反應後之吸光度

a’、b’：使用緩衝溶液替換酪胺酸酶後量測之吸光度

結果證實，小麥胚芽醱酵產物之提取物(CJ)於10μg/mL及50μg/mL之濃度時具有對酶之強烈抑制活性，此係類似於熊果苷之水準(陽性對照；1mM，於該圖中係標註為「+」)(第2圖)。

2-2：對於黑色素原生成之抑制實驗

將Melan-a細胞以等量小樣置於24孔板中，濃度為3×10⁴細胞/孔，於細胞孵化器內於RPMI 1640培養基中培養24小時，為此，細胞能很好地附著於該板上。隨後，將製備實施例1之小麥胚芽醱酵產物的提取物(CJ)溶解於RPMI 1640培養基中，并以多種濃度加入(1μg/mL、10μg/mL、及50μg/mL)，處理兩次，亦即，每3天一次，共計6天。隨後，該等細胞於細胞裂解緩衝液(Bio-rad)中裂解，藉由在17000rpm離心30分鐘而回收上清液。藉由BCA方法將該上清液中存在之蛋白質定量之後，將1N NaOH加至其中，於405nm量測生成物之吸光度，並計算黑色素之量相對於所量測之蛋白質的量。

結果證實，小麥胚芽醱酵產物之提取物係顯現優異之對於黑色素原生成之抑制效應，尤其在10μg/mL或更高之濃度，以及，與使用熊果苷(1mM)處理之群組(陽性對照；於該圖中係標註為「+」)相比，該活性更為優異(第3圖)。

實施例1：含有小麥胚芽醱酵產物之美容乳霜的製備

1-1. 美容乳霜之製備

根據常規方法，將含有製備實施例1之小麥胚芽醱酵產物之提取物的美容乳霜製備為具有如下表1中顯示之組成(wt%)。

1-2：美容乳霜之美白效果的臨床評估

1-2-1：實驗概述

藉由與陰性對照(一種乳霜，其係含有等量蒸餾水替代上表1之組成中的小麥胚芽醱酵產物之提取物，後文中稱為「對照乳霜」)之皮膚美白效果比較，而施行對實施例1-1中製備之美容乳霜(後文中稱為「CJD乳霜」)之皮膚美白效果的臨床評估。進行該評估之個體係22位年齡為30至55歲之具有深膚色及皮膚上具有色素沉積的韓國成年女性。

首先，藉由區組隨機化指定施用「對照乳霜」及「CJD乳霜」之部位，並令其使用12週。隨後，於下述時間點施行裸眼評估、使用裝置之量測(皮膚黑色素指數之量測)、及安全性評估：使用前(0週)、使用4週後、使用8週後、及使用12週後，並因此評估含有小麥胚芽醱酵產物之提取物的乳霜對於人類皮膚之皮膚美白的有效性。樣本及其施用方法之具體訊息係總結於下表2中。

進行臨床評估之個體於潔面後，令其在無空氣流動且無直接日射之維持恆溫恆濕(22±2℃，50±5%)條件的空間內休息20分鐘，以進行皮膚安定化，且個體係參與每一量測及評估。結果及評估過程係總結於下表3中。

1-2-2：藉由裸眼評估膚色

膚色(包括色素沉積)之評估係由兩名測試人員基於下表4中顯示之裸眼評估標準分為0至9級別。

結果，如表5中所示，當與施用產品前比較時，對於使用CJD乳霜者，於使用該產品8週後，藉由裸眼評估的該群組之膚色存在統計學顯著之下降，因此，無疑觀察到了皮膚美白效果(p<0.05)。

同時，作為群組間比較之結果，如下表6及第4圖中所示，於使用該產品8週後之時間點，使用該乳霜之群組係顯示藉由裸眼評估膚色之評級的統計學顯著下降，因此觀察到皮膚美白效果(p<0.05)。

1-2-3：黑色素指數之量測

於下述時間點量測進行臨床評估之個體左右面頰的黑色素指數及膚色：使用前(0週)、使用4週後、使用8週後、及使用12週後。

Mexameter^® MPA580(C+K,Germany)係使用光吸收之原理來量測黑色素及血紅素之量的裝置，該等量係決定膚色之主要因素。黑色素指數係藉由在兩個不同區域之波長的吸光率而量測之。紅斑指數係藉由一定區域之波長的皮膚吸光率而量測之，其中，該區域係可排除血紅素之吸收峰以及其他顏色如膽紅素之顏色干擾。皮膚於每一波長區域之吸光度係經數字化且標註為黑色素指數(MI)及紅斑指數(EI)。本研究中，對於每次評估，測試區域(面頰及色素沉積區域)係重複量測3次，以獲得準確之測量值，計算黑色素指數之平均值並分析之。

與使用該產品前之時間點相比，使用該CJD乳霜之群組係於使用該產品4週及8週後之時間點顯示，面頰區域及色素沉積區域兩者處之黑色素指數(MI)的統計學顯著性降低(p<0.05)(第5圖)。同時，使用該對照乳霜之群組係於使用該產品8週後顯示，僅面頰區域之黑色素指數(MI)的統計學顯著性降低(p<0.05)。根據時間點之黑色素指數的變化係總結於下表7中。

同時，作為群組間比較之結果，於使用產品4週後之時間點，使用該CJD之群組係顯示比使用該對照乳霜之群組統計學顯著性降低(改善)的皮膚黑色素指數(MI)(p<0.05)。群組間根據時間點之關於皮膚黑色素指數的比較資料係顯示於下表8中。

6-2-4：安全性評估

於使用測試產品(CJD乳霜及對照乳霜)4週、8週、及12週後，觀察進行臨床評估之個體的皮膚狀況，藉由與該個體之研究性問答證實因應主觀及客觀刺激的皮膚狀況，記錄結果並評估之。結果證實，於進行臨床評估之全部個體中均未出現不良反應(表9)。

熟識本揭露內容所屬技術領域者能夠自前述者理解，本揭露內容可藉由其他具體形式例示之而不改變本揭露內容之技術概念或本質特征。就此而言，本文中揭露之例示性態樣係僅用於例示性說明之用，且不應解釋為限制本揭露內容之範疇。反之，本揭露內容係傾向於不僅覆蓋該等例示性態樣，亦覆蓋可包括於如藉由後附申請專利範圍定義者之本揭露內容之精神及範疇內的多種變更、修飾、等價物、及其他態樣。

Claims

一種小麥胚芽之醱酵產物或小麥胚芽之醱酵產物之提取物的用途，其係用以製造用於皮膚美白之美容組成物，其中該小麥胚芽之醱酵產物係藉由接種啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)於小麥胚芽或含有該小麥胚芽之培養基內，之後將其進行培養於20℃至40℃施行12小時至60小時而獲得。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，以該組成物之總量為基準計，所包含之該小麥胚芽之醱酵產物或該小麥胚芽之醱酵產物之提取物的量為0.001wt%至10wt%。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該皮膚美白係藉由抑制酪胺酸酶之活性、抑制黑色素之合成或二者而獲得。
一種小麥胚芽之醱酵產物或小麥胚芽之醱酵產物之提取物的用途，其係用以製造用於治療皮膚色素過度沉積疾病之醫藥，其中該小麥胚芽之醱酵產物係藉由接種啤酒酵母於小麥胚芽或含有該小麥胚芽之培養基內，之後將其進行培養於20℃至40℃施行12小時至60小時而獲得。
如申請專利範圍第4項所述之用途，其中，該皮膚色素過度沉積疾病係黑皮病、雀斑、斑點或黑色素瘤。