TWI653053B

TWI653053B - 包括發酵小麥胚芽萃取物之用於皮膚舒緩功效的外用組成物

Info

Publication number: TWI653053B
Application number: TW106129968A
Authority: TW
Inventors: 楊泰周; 吳漢納; 李知訓; 朴承源; 李相範; 趙成捘
Original assignee: 南韓商Ｃｊ第一製糖股份有限公司
Priority date: 2016-09-23
Filing date: 2017-09-01
Publication date: 2019-03-11
Also published as: WO2018056600A1; TW201813624A; KR20180033438A; KR101955111B1

Abstract

本揭露係關於具有傑出之舒緩皮膚功效的外用組成物。詳而言之，本揭露係關於用於舒緩皮膚之化妝品組成物，其係包含2,6-二甲氧基苯醌，或小麥胚芽之發酵產物或其萃取物；一種用於預防或治療發炎性皮膚疾病之組成物；以及用於舒緩皮膚之準藥物組成物。

Description

包括發酵小麥胚芽萃取物之用於皮膚舒緩功效的外用組成物

本揭露係關於具有傑出之舒緩(sooth)皮膚功效的外用組成物。詳而言之，本揭露係關於用於舒緩皮膚之化妝品組成物，其係包含2,6-二甲氧基苯醌，或小麥胚芽之發酵產物或其萃取物；一種用於預防或治療發炎性皮膚疾病之組成物；以及用於舒緩皮膚之準藥物組成物。

人體皮膚受到多種有害物質、長期曝露於日光中、或化妝品原材料之刺激，可造成皮膚問題如皮膚炎症、繃緊、紅點、浮腫等。

為解決此類皮膚問題，可考慮施用抗炎劑。惟，通常，最傳統之抗炎劑不能用作化妝品之原料，且其用量受限。此外，類固醇系抗炎藥物係伴隨有副作用，如皮膚萎縮、失眠、及焦慮。因此，對皮膚具有優異之安全性且對於舒緩皮膚有效之天然原材料的研發，業經得以積極開展(韓國專利公開案第10-2011-0038546號、第 10-2010-0086698號、及第10-2012-0015881號)。

於此等情形下，本發明人等業經做出大量嘗試以研發用於舒緩皮膚之化妝品組成物，該組成物係包含天然物質。結果證實，包含2,6-二甲氧基苯醌、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物之組成物係具有舒緩皮膚之效果，同時並未展現細胞毒性，從而完成本揭露。

本揭露之一目的為提供用於舒緩皮膚之化妝品組成物，該組成物係包含下式1之化合物，或小麥胚芽發酵產物或其萃取物：

本揭露之另一目的為提供用於預防或治療發炎性皮膚疾病之藥物組成物，其係包含上式1之化合物，或小麥胚芽發酵產物或其萃取物。

本揭露之又一目的為提供用於預防、改善、或治療發炎性皮膚疾病之方法，其係包含投予包含上式1 之化合物、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物之組成物至由此需要之對象。

本揭露之又一目的為提供用於舒緩皮膚之準藥物組成物，其係包含上式1之化合物，或小麥胚芽發酵產物或其萃取物。

本揭露之又一目的為提供用於舒緩皮膚之方法，其係包含投予包含上式1之化合物、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物之組成物至有此需要之對象。

為達成上揭目的，本發明之態樣係提供用於舒緩皮膚之化妝品組成物，其係包含下式1之化合物、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物。

可作為活性成分包含於本揭露之化妝品組成物中之化合物可為下式1表示之化合物：

本揭露中，式1之化合物係指2,6-二甲氧基環己-2,5-二烯-1,4-二酮，且其可互換地稱為2,6-二甲氧基苯醌(2,6-DMBQ)或二甲氧基苯醌。詳而言之，式1之化合物可為非醣苷之形式。

上式1之化合物可經化學合成或生物合成，或可購買使用彼等於市場上可得者，或可藉由自已知包括該化合物之天然產物(如，植物等)分離而得，但獲得該化合物之方法並不特別限於此。於本揭露中，式1之化合物可不僅包括式1之化合物的生理學可接受之鹽，亦可包括可自該化合物製備之溶劑合物及水合物兩者。式1之化合物可展現抗炎效果，且因此具有舒緩皮膚之功效。

本揭露之小麥胚芽可含有經乾燥產物、濃縮物、或其混合物，但並不限於此。

如使用於本文，術語「發酵」係指牽涉有機材料的藉由微生物之酶促或代謝性降解(消化)的任何活性或製程。

如使用於本文中，術語「小麥胚芽發酵產物」係指，使用微生物之小麥胚芽的酶促或代謝性降解所得之產物。

本揭露之小麥胚芽發酵產物可含有式1之化合物。

此外，於本揭露中，該小麥胚芽發酵產物可指，藉由在將微生物接種至小麥胚芽或含有小麥胚芽之培養基中後培養所得者。詳而言之，該微生物可為選自由酵母、乳酸菌、細菌、及真菌所組成之群組之至少一者。

該酵母可為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、葡萄酒酵母(S.ellipsoideus)、朝鮮糖酵母(S.coreanus)、卡氏酵母(S.carlsbergensis)、巴氏酵母(S. pastorianus)、乳酸酵母(S.lactis)、魯氏酵母(S.rouxii)、粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、漿醪結合酵母(Zygosaccharomyces major)、異常漢遜氏酵母(Hansenula anomala)、酒香酵母(Brettanomyces bruxellensis)、班圖酒香酵母(B.custersianus)、異常德克拉酵母(Dekkera anomala)、橄欖產色鏈黴菌(Streptomyces olivochromogenes)、或灰色鏈黴菌(S.griseus)，但並不限於此，只要本揭露之小麥胚芽發酵產物或其萃取物可展現舒緩皮膚之效果即可，此係本揭露之目的。舉例而言，該酵母可為釀酒酵母。

該乳酸菌可為雙歧桿菌屬(Bifidobacterium)、乳桿菌屬(Lactobacillus)、乳球菌屬(Lactococcus)、片球菌屬(Pediococcus)、鏈球菌屬(Streptococcus)或明串珠菌屬(Leuconostoc)之微生物，但並不限於此，只要本揭露之小麥胚芽之發酵產物或其萃取物可展現舒緩皮膚之功效即可，此係本揭露之目的。舉例而言，該細菌可為兩叉雙岐乳桿菌(B.bifidum)、短雙岐乳桿菌(B.breve)、長雙岐乳桿菌(B.longum)、動物雙岐乳桿菌(B.animalis)、乳酸雙岐乳桿菌(B.lactis)、嗜酸乳桿菌(L.acidophilus)、乾酪乳桿菌(L.casei)、加氏乳桿菌(L.gasseri)、德氏乳桿菌(L.delbrueckii spp.)、保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)、瑞士乳桿菌(L.helveticus)、發酵乳桿菌(L.fermentum)、副乾酪乳桿菌(L.paracasei)、植物乳桿菌(L.plantarum)、羅伊氏乳桿菌(L.reuteri)、鼠李糖乳桿菌(L.rhamnosus)、唾液乳桿菌(L.salivarius)、乳酸乳桿菌(L. lactis)、啤酒片球菌(P.cerevisiae)、乳酸片球菌(P.acidilactici)、乳酸鏈球菌(S.lactis)、嗜熱鏈球菌(S.thermophiles)、乳脂鏈球菌(S.cremoris)、或腸系膜明串珠菌(L.mesenteroides)。於本揭露中，乳桿菌與乳酸菌可作為具有相同意義而使用。

此外，該發酵中使用之真菌可包括蕈類，但並不限於此，且該蕈類可包括，舉例而言，香菇(Lentinus edodes)、糙皮側耳菌(Pleurotus ostreatus)、金針菇(Enokitake)、松茸(Matsutake)、雙孢菇(Agaricus bisporus)、黑木耳(Auricularia auricula-judae)、猴頭菇(Hericium erinaceum)、靈芝(Ganoderma japonicum)、或裂蹄木層孔菌(Phellinus linteus)，但並不限於此，只要本揭露之小麥胚芽發酵產物或其萃取物可展現舒緩皮膚之效果即可，此係本揭露之目的。

用於製備本揭露之小麥胚芽發酵產物的微生物之接種量、培養溫度、培養濕度、及培養時間可由具有該領域通常知識者適宜地選擇，慮及待用於發酵中之該微生物之種類等。本揭露之培養的非限制性實例可包括於20℃至40℃實施12小時至60小時。詳而言之，本揭露之培養可於25℃至35℃、28℃至32℃、或30℃之溫度施行，及/或施行12小時至50小時、20小時至50小時、30小時至50小時、35小時至45小時、38小時至42小時、或40小時。

如使用於本文中，術語「小麥胚芽發酵產物之萃取物」係指，藉由移除微生物而自發酵產物獲得之材料。

本揭露中之移除可包括任何方法，只要該方法可移除微生物之發酵產物中之該微生物(如，酵母菌體)即可。詳而言之，本揭露之小麥胚芽發酵產物可為藉由將本揭露之小麥胚芽發酵產物離心所得之上清液。更詳而言之，該離心可以6,000rpm(每分鐘轉速)至10,000rpm、7,000rpm至90,000rpm、7,500rpm至8,500rpm、7,800rpm至8,200rpm、或8,000rpm施行，及/或施行5分鐘至120分鐘、5分鐘至90分鐘、5分鐘至60分鐘、5分鐘至40分鐘、5分鐘至30分鐘、10分鐘至120分鐘、10分鐘至90分鐘、10分鐘至60分鐘、10分鐘至40分鐘、10分鐘至30分鐘、15分鐘至120分鐘、15分鐘至90分鐘、15分鐘至60分鐘、15分鐘至40分鐘、15分鐘至30分鐘、15分鐘至25分鐘、或20分鐘。

本揭露之小麥胚芽發酵產物可包括本揭露之式1之化合物，但並不特別限於此。

本揭露之小麥胚芽發酵產物之萃取物係包括可使用如本揭露之小麥胚芽發酵產物自身、其稀釋物、其濃縮物、其乾燥產物、其粗純化產物、其純化產物、或其混合物的萃取物形成之所有種類之調配物的萃取物。詳而言之，本揭露之小麥胚芽發酵產物之萃取物可為經乾燥產物，更詳而言之係經凍乾之產物。

此外，本揭露之小麥胚芽發酵產物之萃取物可藉由任何方法自小麥胚芽發酵產物獲得，只要該萃取物具有舒緩皮膚之效果或預防、改善、或治療抗發炎性皮膚疾病之效果即可。用於獲得該萃取物之方法的非限制性實例可包括冷沈澱方法，該方法係包括將小麥胚芽發酵產物浸漬於溶劑中，之後於10℃至25℃之室溫萃取；熱萃取方法，該方法係藉由在40℃至100℃加熱而施行；超音波萃取方法，該方法係藉由施用超音波而施行；回流萃取方法，該方法係使用回流冷凝器等等。此等方法可單獨施行或以兩種或更多種之組合而施行。

待用於本揭露之萃取中之萃取溶劑的種類並無特別限制，可使用該領域已知之任何溶劑。本揭露之萃取溶劑的非限制性實例可包括選自由水、具有1個至4個碳原子之醇類、己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷或其混合物所組成之群組，且詳而言之，本揭露之萃取溶劑可為熱水。

本揭露之萃取物可包括其區分物。如使用本文中，術語「區分物」(fraction)係指，作為對於自包括多種組分之混合物單離特定組分或組分群組施行區分的結果所獲得之產物。

用於獲得本揭露之區分物的區分方法並無特別限制，可使用傳統上用於該領域之任何方法。該區分方法之實例可包括溶劑區分方法，該方法係使用多種溶劑施行該區分；超濾區分方法，該方法係藉由穿行透過具有固定之分子截留值之超濾膜而施行該區分；多種形式之色層分析術(其係製造用於根據尺寸、電荷、疏水性、或親和性而單離)；其組合等。待用於獲取本揭露之區分物之區分溶劑的種類並無特別限制，可使用該領域已知之任何溶劑。本揭露之區分溶劑的非限制性實例可包括極性溶劑，如水、具有1個至6個碳原子之醇類等；以及非極性溶劑，如己烷、乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷等。此等溶劑可單獨使用或以至少一種之組合而使用。

以本揭露之組成物之總重為基準計，所含有之本揭露之小麥胚芽發酵產物或其萃取物的量可為0.001wt%至10wt%，且詳而言之，以本揭露之組成物之總重為基準計，0.01wt%至7wt%、0.01wt%至5wt%、0.01wt%至3wt%、0.01wt%至2wt%、0.01wt%至1wt%、0.05wt%至10wt%、0.05wt%至7wt%、0.05wt%至5wt%、0.05wt%至3wt%、0.05wt%至2wt%、0.05wt%至1wt%、0.1wt%至10wt%、0.1wt%至7wt%、0.1wt%至5wt%、0.1wt%至3wt%、0.1wt%至2wt%、0.1wt%至1wt%、0.5wt%至10wt%、0.5wt%至7wt%、0.5wt%至5wt%、0.5wt%至3wt%、0.5wt%至2wt%、0.5wt%至1wt%、0.8wt%至10wt%、0.8wt%至7wt%、0.8wt%至5wt%、0.8wt%至3wt%、0.8wt%至2wt%、0.8wt%至1wt%、或1wt%。

本揭露之小麥胚芽發酵產物或其萃取物可以0.1μg/mL至400μg/mL之量包含於本揭露之組成物中。詳而言之，本揭露之小麥胚芽發酵產物或其萃取物可以25μg/mL至400μg/mL、50μg/mL至400μg/mL、100μg/mL至400μg/mL、或200μg/mL至400μg/mL之量包含於本揭露之組成物中。

此外，以本揭露之組成物之總重為基準計，本揭露之由式1表示之化合物可以0.00001wt%至0.1wt%之量使用，且詳而言之，以本揭露之組成物之總重為基準計，可以0.00001wt%至0.01wt%、0.00001wt%至0.001wt%、0.00005wt%至0.01wt%、0.00005wt%至0.001wt%、0.00005wt%至0.001wt%、0.0001wt%至0.01wt%、0.0001wt%至0.001wt%、0.0001wt%至0.001wt%、0.0005wt%至0.01wt%、0.0005wt%至0.001wt%、0.0005wt%至0.001wt%、或0.0007wt%之量使用。

此外，本揭露之由式1表示之化合物可以15μg/mL至120μg/mL之量包含於本揭露之組成物中。詳而言之，本揭露之小麥胚芽發酵產物或其萃取物可以30μg/mL至120μg/mL或60μg/mL至120μg/mL之量包含於本揭露之組成物中。

本文中，術語「舒緩皮膚」係指，緩解及舒緩紅斑或疼痛之皮膚區域等之作用。舉例而言，舒緩皮膚可包括，較之於未使用本揭露之組成物處理者，炎症之改善或治療、經表皮之水分流失的減少、及/或發紅程度之減輕，但並不特別限於此。

於本揭露中，舒緩皮膚之肇因並無限制，只要藉由該化妝品組成物令皮膚平靜(舒緩)即可。詳而言之，皮膚可藉由使用本揭露之組成物改善皮膚炎症而得以舒緩。

本揭露之化妝品組成物可提供為選自下列所組成之群組的形式：溶液、懸浮液、乳液、糊劑、凝膠、乳霜、洗劑、粉末、皂、含有界面活性劑之潔面油、粉狀粉底、乳液粉底、蠟粉底、噴霧、及包裝物。

本揭露之化妝品組成物可復包括化妝上可接受之載劑。

可用於本揭露中之化妝品可接受之載劑的種類並無特別限制，只要該載劑不抑制其生物學活性或特徵即可，可使用傳統使用及化妝品可接受之任何載劑。該化妝品可接受之載劑的非限制性實例可包括生理鹽水、無菌水、緩衝鹽水、葡萄糖溶液、麥芽糊精溶液、甘油、乙醇等。此等載劑可單獨使用或以至少兩種之組合而使用。於本揭露中，該載劑可包括非天然出現之載劑。

本揭露之化妝品可接受之載劑可根據該化妝品組成物之調配物而變更。

當本揭露之化妝品組成物之調配物係貼劑、乳霜或凝膠之形式時，作為載劑組分，可使用動物油、植物油、蠟、石蠟、澱粉、黃芪膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、矽膠、皂土、氧化矽、滑石、氧化鋅等，但該載劑組分並不限於此。

當本揭露之化妝品組成物之調配物係粉末或噴霧之形式時，作為載劑組分，可使用乳糖、滑石、氧化矽、氫氧化鋁、矽酸鈣、聚醯胺粉末等，且特別地，當該調配物係噴霧之形式時，可額外包括推進劑如氯氟烴、丙烷/丁烷、或二甲醚，但該載劑組分並不限於此。

當本揭露之化妝品組成物之調配物係溶液或乳液之形式時，作為載劑組分，可使用溶劑、增溶劑、或乳化劑等，舉例而言，水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油類，特別是棉籽油、花生油、小麥胚芽油、橄欖油、蓖麻油及芝麻油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇類、或失水山梨醇之脂肪酸酯，但該載劑組分並不限於此。

當本揭露之化妝品組成物之調配物係懸浮液之形式時，作為載劑組分，可使用液體稀釋劑如水、乙醇、或丙二醇；懸浮劑如乙氧基化異硬脂醇類、聚氧乙烯山梨醇酯類及聚氧乙烯失水山梨醇酯類；微晶纖維素；偏氫氧化鋁；皂土；洋菜膠；或黃芪膠，但該載劑組分並不限於此。

當本揭露之化妝品組成物之調配物係皂之形式時，作為載劑組分，可使用脂肪酸之鹼金屬鹽類、脂肪酸-蛋白質水解產物、羥乙基磺酸鹽、羊毛脂衍生物、脂肪族醇類、植物油、甘油、醣類等，但該載劑組分並不限於此。

當本揭露之化妝品組成物之調配物係包裝物(pack)之形式時，可包括所有包裝物形式，如含有聚乙烯醇等之剝離式包裝物；水洗式包裝物，其中，顏料如高嶺土、滑石、氧化鋅、或二氧化鈦等係包含於通常之乳液型化妝品中；以及片式面膜包裝物，但該包裝物並不特別限於此。

該組成物可復包括傳統上作為皮膚外用劑中之組分的組分，如水、界面活性劑、保濕劑、具有1個至6個碳原子之低級醇類、螯合劑、殺菌劑、抗氧化劑、顏料、香味劑等。

本揭露之另一態樣係提供用於預防或治療發炎性皮膚疾病之藥物組成物，該組成物係含有上式1之化合物、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物。

如使用於本文中，術語「發炎性皮膚疾病」係指，伴隨有炎症作為主要症狀之皮膚疾病，且該發炎性皮膚疾病可為選自由脂溢性皮炎、接觸性皮炎、全身性紅斑狼瘡、痤瘡、濕疹、氯痤瘡、蕁麻疹、牛皮癬、紅斑狼瘡、慢性單純性苔蘚、擦疹、剝脫性皮、及日光皮所組成之群組，但並不限於此。

式1之化合物、小麥胚芽、小麥胚芽發酵產物、及其萃取物係如上文所揭示。

如使用於本文中，術語「預防」係指，藉由投予根據本揭露之組成物而抑制或延遲發炎性疾病之發作的所有作用。

如使用於本文中，術語「治療」係指，藉由投予本揭露之藥物組成物而緩解或改善發炎性疾病之症狀的所有作用，其中，該組成物係含有式1之化合物、小麥胚芽發酵產物、或其萃取物。

本揭露中，該藥物組成物可額外含有藥學可接受之載劑。

如使用於本文中，術語「藥學可接受之載劑」係指載劑或稀釋劑，其既不造成對有機體之顯著刺激性，亦不抑制本揭露之藥物組成物用於預防或治療發炎性皮膚疾病之活性或特徵。待配製為適用於消毒及生物相容之溶液之組成物中之藥學可接受之載劑的實例可包括，生理鹽水、無菌水、林格溶液(Ringer’s solution)、緩衝鹽水、白蛋白注射液、葡萄糖溶液、麥芽糊精溶液、甘油、及乙醇，且此等組分之至少一者可經混合而使用。必要時，可加入其他傳統添加劑如抗氧化劑、緩衝鹽水、抑菌劑等。

本揭露中，該藥學可接受之載劑可包括非天然出現之載劑。

本揭露之藥物組成物可以單劑或多劑之形式以藥學有效之量投予。

如使用於本文中，術語「藥學有效量」係指，足以預防或治療疾病且具有合理之醫療性處理適用之效益/風險比的量，且該有效劑量之程度可基於多種因素而確定，其中，該因素包括疾病之嚴重性、藥物之活性、患者之體重、健康狀況、性別、藥物敏感性、所使用之本揭露之組成物的投予時間、投予路徑及溶出速率、治療之持續時間、包括與所使用之本揭露之組成物或待同步組合使用之藥物的因素、以及醫療領域習知之其他因素。

本揭露之又一目的係提供一種預防、改善、或治療發炎性皮膚疾病之方法，該方法係包含投予上式 1、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物之組成物至有此需要之對象。

式1之化合物、小麥胚芽發酵產物、其萃取物、發炎性皮膚疾病、預防及治療係如上文揭示者。

本揭露中，疑似患有發炎性皮膚疾病之個體係指，業經或可能發展出發炎性皮膚疾病之所有動物，包括人類。此外，疑似患有發炎性皮膚疾病之個體可藉由投予本揭露之藥物組成物而予以有效治療。

如使用於本文中，術語「投予」係指藉由適宜之方法將本揭露之組成物引入疑似患有炎性皮膚病之個體，且本揭露之組成物可經由任何常規途徑投予，只要該組成物可藉由該途徑到達體內之靶標位置即可。本揭露之組成物可口服或經腸胃外投予，但並不特別限於此。詳而言之，該組成物可經腸胃外投予，更詳而言之，該組成物可藉由將該組成物施用至皮膚之方法(亦即，皮膚施用)而施用。詳而言之，本揭露之投予係每天進行1至4次、2至3次、或2次。此外，本揭露之投予係進行4週或更久、8週或更久、4週至12週、或8週至12週之時間。

本揭露之又一態樣係提供用於舒緩皮膚之準藥物組成物，係包含上式1之化合物，或小麥胚芽發酵產物或其萃取物。

式1之化合物、小麥胚芽發酵產物、其萃取物、及舒緩皮膚係如上文揭示者。

本文中，術語「準藥物」係指，用於人類或動物之疾病的診斷、治癒、改善、緩解、治療、或預防中之產物中，具有比醫療性藥物更溫和之作用的產物。舉例而言，根據韓國藥品事務法(Pharmaceutical Affairs Act of Korea)，「準藥物」係包括用於人類或動物之治療或預防之產品，且該產品係具有對於人體之溫和效果或並不直接作用於人體，並排除用作藥品之產物。

本揭露之準藥物組成物可製備為選自由身體清潔劑、泡沫、皂、面膜、油膏、乳霜、洗液、精華液、及噴霧所組成之群組的形式，但並不限於此。

當本揭露之式1之化合物、小麥胚芽發酵產物或小麥胚芽發酵產物之萃取物作為添加劑用於該準藥物中時，本揭露之式1之化合物、小麥胚芽發酵產物、或小麥胚芽發酵產物之萃取物可原樣加入或與其他準藥物或準藥物組分合用，且可根據傳統方法適宜地使用。待混合之該活性成分之量可依據用途而適當地確定。

本揭露之又一態樣係提供用於舒緩皮膚之方法，該方法係包含投予包含上式1之化合物、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物之組成物至有此需要之個體。

上式1之化合物、小麥胚芽發酵產物、其萃取物、及舒緩皮膚之方法係如上文所揭示。

因為含有2,6-DMBQ、或小麥胚芽發酵產物或其萃取物之組成物不具細胞毒性，故其係安全者。此外，此組成物可用於預防或治療發炎性皮膚疾病或舒緩皮膚，蓋因其不僅具有抗炎效果，亦造成經表皮之水分流失及皮膚發紅程度之減輕。

第1圖係顯示依賴於小麥胚芽發酵產物之濃度的細胞毒性測試結果。

第2圖係顯示依賴於小麥胚芽發酵產物之濃度的抑制NO生產的能力。

第3圖係顯示依賴於2,6-DMBQ之濃度的細胞生存力評估結果。

第4圖係顯示依賴於2,6-DMBQ之濃度的抑制NO生產的能力。

第5圖係顯示根據實驗實施例4之經表皮之水損失(TEWL)的改變。

第6圖係顯示根據實驗實施例4之皮膚發紅(a值)之改變。

下文中，將參考例示性態樣詳細揭示本發明。惟，本文中揭露之例示性態樣係僅用於例示性說明之目的，而不應認作限制本發明之範疇。

貫穿本揭露之說明書，除非另作說明，用來指示具體物質之濃度的符號「%」係表明，固體/固體為(重量/重量)%，固體/液體為(重量/體積)%，而液體/液體為(體積/體積)%。

製備例1：小麥胚芽發酵產物之萃取物的製備

將小麥胚芽(50公克(g),CJ Cheiljedang Corp.,Korea)與水(500g)加入燒瓶內，混合均勻，於121℃殺菌15分鐘，再冷卻。隨後，基於小麥胚芽之重量，將乾燥之酵母(麵包酵母、釀酒酵母、安琪酵母(Angel yeast)5%；2.5g)接種至小麥胚芽，於30℃發酵40小時，以8000rpm離心20分鐘，以回收上清液。藉由凍乾而回收上清液，並自其製備小麥胚芽發酵產物之萃取物。

本實施例中，小麥胚芽發酵產物之萃取物係名為「CJ」。

製備例2：小麥胚芽發酵產物之萃取物的組分分析

對小麥胚芽發酵產物之該萃取物之組分的高效液相色層分析(HPLC)之結果證實，該萃取物中係含有2,6-DMBQ，且以小麥胚芽發酵產物之萃取物之凍乾產物為基準計，2,6-DMBQ之含量係700ppm。如下述者分析2,6-DMBQ之含量。將相同量之氯仿加入5g之樣本內，將該混合物攪拌一段時間，隨後離心以獲得氯仿層。這一過程係重複2至3次，隨後使用旋轉蒸發器蒸發氯仿，殘餘物溶解於氯仿中，并使用HPLC進行分析。HPLC分析係於Inertsil ODS3(GL science)管柱施行，且流動相係使用25% MeOH及UV偵檢器於290nm分析之。本文中，溶解於氯仿中之 2,6-DMBQ試劑(Sigma)係經標準化。

於下述實驗例中使用之2,6-DMBQ係購自Sigma-Aldrich。

實驗例1：小麥胚芽發酵產物之萃取物的細胞毒性的證實(MTT檢定) 實驗例1-1：細胞培養

使用細胞培養皿(100mm)及含有10%胎牛血清(FBS)及1%青黴素/鏈黴素之DMEM培養基，將鼠科動物巨噬細胞系RAW 264.7於5% CO₂孵化器中培養。達到融合之細胞係藉由使用刮刀之再次培養而得以維持。

實驗例1-2：細胞毒性之證實

存在於肝細胞中線粒體內之脫氫酶係自四唑鎓鹽(WST)產生一著色物質，亦即甲(formazan)。因此，為了證實細胞毒性，藉由量測該脫氫酶而量測當使用小麥胚芽發酵產物之萃取物處理時的肝細胞數。

於96孔細胞培養板中，將濃度為1×10⁴個細胞/孔之RAW 264.7細胞於以10% FBS及1%青黴素/鏈黴素補充之DMEM培養基中培養24小時。之後，以製備例1中獲得之不同濃度(25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、及400μg/mL)的小麥胚芽發酵產物之萃取物處理所培養之RAW 264.7細胞24小時。隨後，加入含有MTT溶液(5mg/mL)之DMEM培養基，並於5% CO₂孵化器內於37℃培養48小時。之後，自該培養基移除MTT試劑，將DMSO(100μL)加至各孔，隨後溶解甲。使用ELISA偵檢器於540nm量測吸光度之後，藉由下述等式1測得細胞存活率。

[等式1]細胞存活率=(加入樣品之細胞的吸光度/未處理之細胞的吸光度)* 100

結果證實，直至達到400μg/mL之濃度為止，小麥胚芽發酵產物之萃取物係顯示無細胞毒性(第1圖)。

實驗例2：小麥胚芽發酵產物之萃取物之抗炎功效的證實

將巨噬細胞RAW 264.7加至含有10% FBS之DMEM培養基中，隨後於5% CO₂之條件下於37℃培養。隨後將5×10⁴個細胞/孔之RAW 264.7巨噬細胞置於96孔板。24小時之後，分別使用濃度為25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、及400μg/mL之小麥胚芽發酵產物之萃取物於37℃在5% CO₂之條件下處理1小時。隨後，為了誘導發炎性反應，所得物分別以1μg/ml之脂多醣(LPS)處理24小時。作為結果，未誘導出NO之產生。

抗炎效能之評估(NO檢定)係基於革利士(Griess)反應而量測使用NO偵檢套組(內含子(intron))。詳而言之，將1%胺苯磺胺與0.1% N-(1-萘基)伸乙二胺二鹽酸鹽以1：1之比混合，以製備一試劑，隨後，將使用小麥胚芽發酵產物之萃取物處理之該96孔板中之上清液與上述試劑以1：1之比混合，並令其於室溫反應。之後，透過ELISA閱讀器於540nm量測NO之產生。藉由使用1M NaNO₂(亞硝酸鈉)作成標準曲線而計算NO產生的量。

作為結果，對NO產生之抑制效果係以濃度依賴模式予以展現。特別地，當以200μg/mL之小麥胚芽發酵產物之萃取物處理時，該抑制活性係45.9%；而當以400μg/mL之小麥胚芽發酵產物之萃取物處理時，該抑制活性係99.1%(第2圖)。IC₅₀值，NO產生之量被抑制50%時之濃度，係215.5μg/mL，且其係使用每一濃度之抑制結果中數據之趨勢線(約50%)而計算者。

實驗例3：2,6-DMBQ之細胞毒性及抗炎功效的證實 實驗例3-1：細胞培養

以與實驗例1-1中相同之模式實施細胞培養。

實驗例3-2：細胞毒性之證實

在5% CO₂之條件下，使用補充有10% FBS及1%青黴素/鏈黴素之DMEM培養基，將濃度為1×10⁴個細胞/孔之RAW 264.7細胞於96孔板中於37℃培養24小時。之後，將2,6-DMBQ(Sigma)替換為含有多種濃度(亦即，15μg/mL、30μg/mL、60μg/mL、及120μg/mL)之DMEM培養基，並於37℃在5%CO₂之條件下培養48小時。藉由量測於450nm之吸光度，且在所培養之細胞中使用EZ-CYTOX試劑，使用上述等式1測定細胞存活率。

結果證實，直至2,6-DMBQ之濃度達到120μg/mL為止，其係顯示無細胞毒性(第3圖)。

實驗例3-3：抗炎功效之證實

將RAW 264.7細胞以2×10⁶個細胞/盤之密度置於板(60mm)，令該細胞黏附至該板24小時。為了誘導發炎性反應，將含有LPS(1μg/mL)及各種濃度(亦即，15μg/mL、30μg/mL、60μg/mL、及120μg/mL)之2,6-DMBQ(實驗樣本)之新培養基加至該等細胞，培養24小時，隨後獲得培養基。之後，以與實驗例2中相同之模式量測每一培養基中NO產生之量。

結果證實，2,6-DMBQ亦具有以濃度依賴模式抑制NO產生之能力(第4圖)。

實驗例4：藉由使用小麥胚芽發酵產物之萃取物舒緩皮膚之效果的證實

業經使用多種方法來量測對皮膚刺激性反應之舒緩效果，而最敏感且精確之已知方法係量測經表皮之水分流失(TEWL)及皮膚發紅程度(a-值)。詳而言之，若使用貼劑施用濃度為1%至2%之十二烷基硫酸鈉(SLS)24小時，則已知TEWL於移除該貼劑後之2天或3天內繼續增加。此外，已知當於此期間內施用具有抗皮膚刺激性之舒緩效果的外用劑時，TEWL係通常不再增加，或TEWL及a-值降低。就此而言，TEWL與a-值之測量值業經用於評估對皮膚刺激性反應之舒緩效果的實驗中。據此，如下述者，使用TEWL測量值評估小麥胚芽發酵產物之萃取物的皮膚舒緩效果。

1)第0天

使用標準洗滌劑清潔對象之手臂，移除水，隨後，在前臂上距離腕關節為5cm或更遠之點處，分出兩個部位。於每個部位，使用照度色度計量測TEWL₀及a₀-值，且此測量係進5次。

之後，使用芬蘭小杯(Finn chamber)(8mm)調製1%十二烷基硫酸鈉(SLS)貼劑。

2)第1天

施用該貼劑24小時後，移除該貼劑，以水洗滌該部位並乾燥之。隨後，量測測試部位及對照部位之TEWL₁及a₁-值，且此測量係進行5次。

之後，將兩個部位隨機分配為測試部位及對照部位。將含有1%小麥胚芽發酵產物之萃取物的貼劑(15μL)於該測試部位黏附24小時，而將不含該小麥胚芽發酵產物之萃取物的貼劑黏附於該對照部位。

3)第2天

移除該貼劑，以水洗滌該部位並乾燥之。隨後，量測測試部位及對照部位之TEWL₂及a₂-值，且此測量係進行5次。

之後，將含有1%小麥胚芽發酵產物之萃取物的貼劑(15μL)於測試部位黏附24小時，而對照部位不施用任何物質。

4)第3天

移除該貼劑，以水洗滌該部位並乾燥之。隨後，量測測試部位及對照部位之TEWL₃及a₃-值，且此測量係進行5次。

於每一天量測之TEWL及a-值係分別顯示於表1及表2中。

表1係證實該測試部位與對照部位於測試前之均勻性的表。由於在黏附含有1% SLS溶液之貼劑之前及之後的第0天及第1天，該測試部位與對照部位之間無統計學顯著之差異，該測試部位與對照部位於樣品治療之前的均勻性可得以證實。

表2係顯示，當含有小麥胚芽發酵產物之萃取物的貼劑黏附於部位時的TEWL及a-值之效果，其中，該部位之TEWL與a-值係由於將含有1% SLS溶液之貼劑黏附24小時至48小時而有所增加。結果證實，小麥胚芽發酵產物之萃取物係具有舒緩皮膚之功效，蓋因增加之TEWL及a-值全部被降低至與對照部位相比統計學上顯著之水準(p<0.05)。

處方例：含有小麥胚芽發酵產物之萃取物的化妝水之處方例

下文中，基於上述實驗例之結果，製備含有2,6-DMBQ或小麥胚芽發酵產物之化妝品。於含有小麥胚芽發酵產物之萃取物之化妝品的化妝水之處方例係如下。

處方例1：化妝水

化妝品中含有小麥胚芽發酵產物之萃取物之化妝水的處方例係如下。

處方例2：精華液

化妝品中含有小麥胚芽發酵產物之精華液的處方例係如下。

處方例3：乳液

化妝品中含有小麥胚芽發酵產物之乳液的處方例係如下。

具有本發明所屬領域通常知識之人士自前述者可理解，本發明可以其他具體形式予以體現而不改變本發明之技術概念或本質特徵。就此而言，本文中揭露之例示性態樣僅用於例示性說明之目的，而不應認作限制本發明之範疇。相反，本發明係意圖不僅涵蓋該等例示性態樣，而且涵蓋包括於本發明之藉由後附申請專利範圍所界定之精神及範疇內的多種改變、修飾、等效物、及其他態樣。

Claims

一種用途，係將下式1之化合物，或小麥胚芽之發酵產物或其萃取物：用於製備舒緩皮膚之化妝品組成物。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該小麥胚芽發酵產物或其萃取物係包含上式1之化合物。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該式1之化合物係非醣苷。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該小麥胚芽發酵產物係藉由將酵母接種至小麥胚芽中或含有小麥胚芽之培養基中，之後培養而獲得。
如申請專利範圍第4項所述之用途，其中，該酵母係釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
如申請專利範圍第4項所述之用途，其中，該培養係於20℃至40℃施行12小時至60小時。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，以該化妝品組成物之總量為基準計，所包含之該小麥胚芽發酵產物或其萃取物的量係0.001wt%至10wt%。
如申請專利範圍第1項所述之用途，其中，該皮膚舒緩係藉由皮膚炎症之改善而得以達成。
一種用途，係將式1之化合物、或小麥胚芽之發酵產物或其萃取物：用於預防或治療發炎性皮膚疾病之藥物。
如申請專利範圍第9項所述之用途，其中，該發炎性疾病係脂溢性皮炎、接觸性皮炎、全身性紅斑狼瘡、慢性單純性苔蘚、擦疹、剝脫性皮炎、或日光皮炎。