JP4054730B2 - α−グルコシダーゼ活性化剤 - Google Patents
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すなわち、本発明は、
(1)エチナシ抽出物を有効成分とするα−グルコシダーゼ活性化剤、
(2)(1)記載のα−グルコシダーゼ活性化剤とアスコルビン酸誘導体を含有することを特徴とする皮膚外用剤、
(3)アスコルビン酸誘導体が2−O−α−D−グルコピラノシル−L−アスコルビン酸であることを特徴とする(2)記載の皮膚外用剤、
(4)(1)記載のα−グルコシダーゼ活性化剤を含有することを特徴とする美白剤、
に関する。
longum)、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescentis)、ビフィドバクテリウム・インファンティス(Bifidobacterium
infantis)等のビフィズス菌の表面培養物を生理食塩水で洗浄し、超音波処理により不活性化することにより得られるものである。ビフィズス菌抽出物の配合量は0.001〜20質量%、好ましくは0.01〜10質量%である。
cremolis)等の乳酸球菌、ラクトバチルス・ブルガリクス(Lactobacillus bulgaricus),ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus
casei),ラクトバチルス・プランタルム(Lactobacillus plantarum),ラクトバチルス・サリバリウス(Lactobacillus
salivarius),ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)等の乳酸桿菌などをスキムミルク、ペプトン、グルコース等、通常乳酸菌の培養に用いられる窒素源、炭素源、あるいはそれにニコチン酸またはニコチンアミド等のビタミンや酵母エキス、緩衝液等の添加剤を添加した培地を用いて培養して得る事が出来、必要に応じて遠心分離、濾過などにより固形物を除去したものや加熱などにより殺菌処理を行ったものも用いる事が出来る。また、培養物に防腐剤として多価アルコールを加えた後、澱びきしたものも用いる事が出来る。乳酸菌抽出物の配合量は0.001〜20質量%、好ましくは0.01〜10質量%である。
さらに、カミツレエキス、ユキノシタエキス、パセリエキス、バナバエキス、シャクヤクエキス、グレープフルーツエキス、スイカズラエキス、コメエキス、ブドウエキス、ホップエキス、ビワエキス、オウバクエキス、ヨクイニンエキス、センブリエキス、メリロートエキス、バーチエキス、カンゾウエキス、サボンソウエキス、ヘチマエキス、トウガラシエキス、レモンエキス、ゲンチアナエキス、シソエキス、アロエ(アロエベラ)エキス、ローズマリーエキス、セージエキス、タイムエキス、茶エキス、海藻エキス、キューカンバーエキス、チョウジエキス、ニンジンエキス、マロニエエキス、ハマメリスエキス、キウイエキス、センテラアジアチカエキス、リンゴエキス等の各種抽出物を挙げることができる。
エチナシ葉エキス、加水分解酵母エキス、酵母エキス、ボタンピエキス、セージエキスについて、α−グルコシダーゼ活性作用を以下の方法により評価した。
各抽出物に0.05%α−グルコシダーゼを添加し、α−グルコシダーゼ活性をキッコーマン株式会社製の糖化力分別定量キットにより測定した。このキットは、基質の4−ニトロフェノールα−グルコシドにα−グルコシダーゼが作用して生じる4−ニトロフェノールが400nmに吸光波長を持つことを利用し、この400nmにおける吸光度を検出することにより、α−グルコシダーゼ活性を測定するキットである。
Aは酵素と各種抽出物を添加した時の吸光度
A0は酵素と各種抽出物に反応停止液を添加した時の吸光度
A1は各種抽出物のみ添加した時の吸光度
A2は各種抽出物に反応停止液添加した時の吸光度
=(各種抽出物添加時のΔα−グルコシダーゼ活性/
コントロールのΔα−グルコシダーゼ活性)×100
ヒト表皮角化細胞を60mmφディッシュに播種し、サブコンフルエントの状態まで培養した後、アスコルビン酸誘導体及び各種抽出物を添加した培地に置換した。各種抽出物として、エチナシ葉エキス、加水分解酵母エキス、酵母エキス、セージエキス、ボタンピエキスをそれぞれ用いた。24時間培養後、培養上清を採取し、トリプシン処理によって回収した細胞の一部をコールターカウンターを用いて最終細胞数を計測すると共に、残りを10000rpm で5分間遠心分離して細胞画分を得た。細胞画分は、リン酸緩衝溶液(Ca2+Mg2+不含)を適量加えて懸濁後、再度10000rpm
で5分間遠心分離し、洗浄した。蒸留水200μlを得られた細胞画分に添加、懸濁したものを、超音波で10分間処置後0.45μm径PVDF膜で濾過し、ろ液を被験試料とした。被験試料中のL−アスコルビン酸量を、下記条件の高速液体クロマトグラフィー法にて定量した。
システム Class LC−10
カラム L−カラムODS
カラム温度 40℃
移動相 0.1Mリン酸−リン酸2水素ナトリウム緩衝液(pH2.0)
流量 0.7mL/min
注入量 20μl
検出器 UV240nm
メラニン生成抑制試験は、ヒト由来の表皮メラニン細胞を用いて、エチナシ葉エキス、加水分解酵母エキス、酵母エキス、セージエキス、ボタンピエキスをそれぞれ評価した。培養液としてはMedium154S・HMGS培地(倉敷紡績株式会社製)を用い、各抽出物を終濃度で10-2〜10-5重量%になるように添加したものを、それぞれ被験試料とした。60mmφディッシュに表皮メラニン細胞を播種し、CO2インキュベーター(37℃、5%CO295%飽和蒸気下)で24時間培養した。培養液を除いた後、アスコルビン酸誘導体及び各種抽出物を添加した培地又は抽出物を添加していない培養液に交換し、さらに72時間培養を続けた。尚、抽出物を添加していない培養液を適用した細胞を対照とした。培養終了後、倒立顕微鏡下で細胞内のメラニン生成を観察し、対照との比較から、下記判定基準により視感判定した。結果を表1に示す。
◎:コントロールに比べ白い(メラニン生成抑制作用に優れる)
○:コントロールに比べやや白い(メラニン生成抑制作用にやや優れる)
×:コントロールと同程度の白さ(メラニン生成抑制作用なし)
各群10人ずつのA、B2群からなる女性被験者20人による連用塗布試験を実施し、本発明の美白効果について評価した。A群は実施例1、B群は比較例1の美容液をそれぞれ用い、右半顔のみに1日2回2ヶ月間塗布した。試験開始直前及び試験開始2ヶ月後に、メグザメーター(Mexameter MX−16、C+K社製)を用いて各半顔のメラニン量を測定した。美容液を塗布した右半顔のメラニン量から、美容液を塗布していない左半顔のメラニン量を引いたものを、無塗布部を基準としたときの塗布部のメラニン量(Mr)とし、試験開始直前(Mr0)と試験開始2ヶ月後(Mr1)のM値の差をΔメラニン量として式(3)より算出し、その変化量の多少により、美白効果を評価した。
Mr0は試験開始直前のMr値
Mr1は試験開始2ヶ月後のMr値
結果を図3に示す。
31点〜50点=◎
21点〜30点=○
11点〜20点=△
0点〜10点=×
質量%
(1)精製水 81.5
(2)1,3−ブチレングリコール 6.0
(3)エタノール 3.5
(4)グリセリン 5.0
(5)アスコルビン酸2−グルコシド 2.0
(6)スクレロチウムガム 0.3
(7)アロエエキス(1) 0.1
(8)エチナシ葉エキス 0.5
(9)クエン酸三ナトリウム 0.2
(10)クエン酸 0.02
(11)ビフィズス菌発酵エキス 0.2
(12)カルボキシメチルセルロースナトリウム 0.3
(13)水酸化カリウム 0.38
[製法]室温下で、上記成分(1)〜(13)の成分を混合し攪拌溶解して得た液にシートマスクを含漬させた。
質量%
(1)精製水 74.1
(2)1,3−ブチレングリコール 7.5
(3)カルボキシビニルポリマー 0.06
(4)グリセリン 3.0
(5)1,2−ペンタンジオール 2.0
(6)トリメチルグリシン 0.5
(7)キサンタンガム 0.02
(8)アマチャエキス 0.1
(9)アスコルビン酸2−グルコシド 2.0
(10)エチナシ葉エキス 0.4
(11)酵母エキス 2.0
(12)スクワラン 2.0
(13)ホホバ油 2.0
(14)メチルポリシロキサン 3.5
(15)イソステアリン酸ソルビタン 0.3
(16)ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 0.4
(17)ショ糖脂肪酸エステル 0.02
(18)水酸化カリウム 0.1
[製法]上記成分(1)〜(11)を成分A、(12)〜(17)を成分Bとし、成分A、Bそれぞれを80℃に加熱調整し、BをAに加え、ホモミキサーで攪拌混合後、40℃まで冷却し、残りの成分(18)を添加し30℃まで冷却した。
Claims (4)
- エチナシ抽出物を有効成分とするα−グルコシダーゼ活性化剤。
- 請求項1記載のα−グルコシダーゼ活性化剤とアスコルビン酸誘導体を含有することを特徴とする皮膚外用剤。
- アスコルビン酸誘導体が2−O−α−D−グルコピラノシル−L−アスコルビン酸であることを特徴とする請求項2記載の皮膚外用剤。
- 請求項1記載のα−グルコシダーゼ活性化剤を含有することを特徴とする美白剤。
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