JP2020200298A

JP2020200298A - 皮膚外用剤

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Publication number: JP2020200298A
Application number: JP2019110653A
Authority: JP
Inventors: 大輔間地; Daisuke Kanchi; 央鴛海; Hiroshi Oshiumi; 拓実木戸; Takumi Kido; 澤木　茂; Shigeru Sawaki; 茂澤木; 茂豊澤木; Shigetoyo Sawaki; 容介羽田; Yousuke Haneda; 英生岩野; Hideo Iwano; 知紗松田; Chisa Matsuda
Original assignee: SAISHUNKAN SEIYAKUSHO KK; TEKUNOOBURU KK; Technoble Co Ltd
Current assignee: SAISHUNKAN SEIYAKUSHO KK; TEKUNOOBURU KK; Technoble Co Ltd
Priority date: 2019-06-13
Filing date: 2019-06-13
Publication date: 2020-12-17

Abstract

【課題】皮膚外用剤に配合可能であり、皮膚に対する美白効果、抗老化効果及び紫外線によるダメージを回復する効果を発揮する有用な新規有効成分を提供する。【解決手段】ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するニンジンの抽出物であって、ジンセノサイドＲｇ３及びＲｇ５を含むことを特徴とする皮膚外用剤用の新規有効成分。【選択図】図１

Description

本発明は、皮膚（頭皮も含む）外用剤に配合可能なウコギ科トチバニンジン属に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）の抽出物に関するものである。

従来、オタネニンジン又はその抽出物を皮膚外用剤の有効成分として利用する技術は、例えば、特許文献１〜６に記載のとおり公知である。しかし、従来のオタネニンジンの抽出物では、有効性及び安全性の点で問題があった。
特開2000-212059号特開2003-160497号特開2005-194246号特開2009-537466号国際公開公報WO2014/132430号特開2014-237633号

上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、本発明者らは、ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）から得られ、少なくともジンセノサイドＲｇ_３及びＲｇ_５を含む抽出物が、美白効果、抗老化効果、及び／又は紫外線による細胞ダメージの修復効果を有し、皮膚外用剤の有効成分として有用であることを新たに見出した。また、ジンセノサイドＲｇ_５が美白成分として有用であることも新たに見出した。

本発明は、ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）から得られ、ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物を有効成分とする美白用皮膚外用剤である。
本発明は、ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）から得られ、ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物を有効成分とする抗老化用皮膚外用剤である。
本発明は、ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）から得られ、ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物を有効成分とする紫外線による細胞損傷の修復用皮膚外用剤である。
本発明は、ジンセノサイドＲｇ_５からなる美白剤である。

本発明によれば、ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物が奏する美白効果、抗老化効果、及び紫外線ダメージ回復効果により、美白用、抗老化用又は紫外線による細胞損傷の修復用の皮膚外用剤を提供することができる。また、ジンセノサイドＲｇ_５を皮膚外用の美白成分として提供することができる。

美白効果評価試験の結果を示す図である。美白効果評価試験の結果を示す図である。美白効果評価試験の結果を示す図である。美白効果評価試験の結果を示す図である。紫外線照射後の細胞修復試験結果を示す図である。紫外線照射後の細胞内グルタチオン量の評価結果を示す図である。紫外線照射後の細胞内グルタチオン量の評価結果を示す図である。線維芽細胞賦活試験の結果を示す図である。

本発明で用いるウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）である。オタネニンジンの抽出物部位としては、特に根、ひげ根の使用が好ましい。

本発明において、ジンセノサイドＲｇ_３及びＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物は、オタネニンジン根（特に、ひげ根が好ましい。）に対して加熱などの処理を施すことによって得られる。本発明においては、Ｒｇ_３は、２０ｐｐｍ以上含まれることが好ましく、４０ｐｐｍ以上含まれることがより好ましく、さらに６０ｐｐｍ以上含まれることがより好ましい。ジンセノサイドＲｇ_５は、抽出物中に、１０ｐｐｍ以上含まれることが好ましく、１５ｐｐｍ以上含まれることがより好ましく、さらに、２５ｐｐｍ以上含まれることがより好ましい。

また、本発明に係る抽出物において、ジンセノサイドＲｇ_３とジンセノサイドＲｇ_５の含有比は、重量比で、２：１〜４：１であることが好ましい。

上記ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物は、例えば、加熱処理を施すことによって得られる。加熱温度条件としては、１００℃〜１２１℃で１時間以上加熱し、加熱後のオタネニンジンを水、低級アルコール又は多価アルコール或いはそれらの混合溶媒で抽出することで、美白効果、抗老化効果及び紫外線による細胞損傷の修復効果を奏する量のジンセノサイドＲｇ_３及びＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物を得る。また、後述する通り、美白効果の観点から、抽出物中のジンセノサイドＲｇ_１及びＲｂ_１はより少ない量であることが好ましい。少なくともジンセノサイドＲｇ_３の量より少ないことが好ましい。

上記抽出溶媒としては、有効成分の抽出及び安全性の観点から、水と多価アルコール（エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、グリセリン等）の混合溶媒が好ましい。水と多価アルコールの混合比は、７０：３０〜１０：９０が好ましい。

上述の方法で得られる抽出物は、液状の抽出物として皮膚外用剤に配合しても、又は乾燥粉末の状態で皮膚外用剤に配合しても良い。

本発明に係る抽出物又はその乾燥物は、皮膚外用剤（化粧料、医薬部外品、外用医薬品）に配合することができる。皮膚外用剤としては、例えば、乳液、クリーム、ローション、エッセンス、パック、口紅、ファンデーション、リクイドファンデーション、メイクアッププレスパウダー、ほほ紅、白粉、洗顔料、ボディシャンプー、頭皮，頭髪用シャンプー、頭髪用コンディショナー、育毛，養毛用のシャンプー又はトニック、石けん等の清浄用化粧料、さらには浴剤等が挙げられるが、本発明はこれらに限定されるものではない。

本発明に係る抽出物或いはその濃縮物又は乾燥物の配合量は、その固形分として、基礎化粧料の場合は、０．０００１〜１０．０重量％（固形分重量％、以下同じ）の範囲、メイクアップ化粧料の場合は、０．０００１〜５．０重量％の範囲、又清浄用化粧料の場合は、０．０００１〜２０．０重量％の範囲である。

本発明に係る抽出物を皮膚外用剤に利用する場合、皮膚外用剤に配合可能な成分、例えば油性成分、界面活性剤（合成系、天然物系）、乳化剤、保湿剤、増粘剤、防腐・殺菌剤、消泡剤、粉体成分、抗酸化剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、色素、香料等を必要に応じて適宜配合することができる。また、本発明に係るオタネニンジン抽出物或いはその濃縮物又は乾燥物の有効性、特長を損なわない限り、他の生理活性成分と組み合わせて配合することも何ら差し支えない。

ここで、油性成分としては、例えばハス油、バラ油、カニナバラ種子油、オリーブ油、ホホバ油、ヒマシ油、大豆油、米油、米糠油、米胚芽油、ヤシ油、カミツレ油、ローマカミツレ油、パーム油、カカオ油、メドウフォーム油、ベルガモット油、ローズヒップ油、アラビアコーヒーノキ種子油、ラベンダー油、シアーバター、ニオイテンジクアオイ油、ゴヨウマツ種子油、ティーツリー油、アボガド油、マカデミアナッツ油、バニラ油、植物由来スクワラン等の植物由来の油脂類；ミンク油、タートル油等の動物由来の油脂類；ミツロウ、カルナウバロウ、ライスワックス、ラノリン等のロウ類；流動パラフィン、ワセリン、パラフィンワックス、スクワラン等の炭化水素類；ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、イソステアリン酸、エイコセン酸等の脂肪酸類；ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール等の高級アルコール類；ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、オレイン酸ブチル、イソオクタン酸セチル、２−エチルヘキシルグリセライド、高級脂肪酸オクチルドデシル（ステアリン酸オクチルドデシル等）等の合成エステル類及び合成トリグリセライド類等が挙げられる。

また、界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル等の非イオン界面活性剤；脂肪酸塩、アルキル硫酸塩、アルキルベンゼンスルホン酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレン脂肪アミン硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸塩、ポリオキシエチレンアルキルエーテル燐酸塩、α−スルホン化脂肪酸アルキルエステル塩、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル燐酸塩等のアニオン界面活性剤；第四級アンモニウム塩、第一級〜第三級脂肪アミン塩、トリアルキルベンジルアンモニウム塩、アルキルピリジニウム塩、２−アルキル−１−アルキル−１−ヒドロキシエチルイミダゾリニウム塩、Ｎ，Ｎ−ジアルキルモルフォルニウム塩、ポリエチレンポリアミン脂肪酸アミド塩等のカチオン界面活性剤；Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−アルキル−Ｎ−カルボキシメチルアンモニオベタイン、Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリアルキル−Ｎ−アルキレンアンモニオカルボキシベタイン、Ｎ−アシルアミドプロピル−Ｎ′，Ｎ′−ジメチル−Ｎ′−β−ヒドロキシプロピルアンモニオスルホベタイン等の両性界面活性剤等を使用することができる。

また、乳化剤又は乳化助剤としては、酵素処理ステビア等のステビア誘導体、サポニン又はその誘導体、カゼイン又はその塩（ナトリウム等）、糖と蛋白質の複合体、ショ糖又はそのエステル、ラクトース、大豆由来の水溶性多糖、大豆由来蛋白質と多糖の複合体、ラノリン又はその誘導体、コレステロール、ステビア誘導体（ステビア酵素処理物等）、ケイ酸塩（アルミニウム、マグネシウム等）、炭酸塩（カルシウム、ナトリウム等）、サポニン及びその誘導体、レシチン及びその誘導体（水素添加レシチン等）、リゾレシチン又はその誘導体、乳酸菌醗酵米、乳酸菌醗酵発芽米、乳酸菌醗酵穀類（麦類、豆類、雑穀等）等を配合することもできる。

また、保湿剤としては、例えば、グリセリン、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ポリエチレングリコール、ソルビトール、キシリトール、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、２−メタクリロイルオキシエチルホスホリルコリン・メタクリル酸ブチル共重合体液等があり、さらにトレハロース等の糖類、シロキクラゲ多糖体、ムコ多糖類（例えば、ヒアルロン酸及びその誘導体、コンドロイチン及びその誘導体、ヘパリン及びその誘導体等）、チューベロース多糖体、エラスチン及びその誘導体、コラーゲン及びその誘導体、ＮＭＦ関連物質、加水分解コンキオリン、加水分解シルク、スフィンゴモナス培養物、スフィンゴ糖脂質、セラミド（ヒト型セラミド、ユズセラミド等）、乳酸、尿素、高級脂肪酸オクチルドデシル、海藻抽出物、シラン根（白及）抽出物、各種アミノ酸及びそれらの誘導体が挙げられる。

また、増粘剤としては、例えば、アルギン酸、寒天、カラギーナン、フコイダン等の褐藻、緑藻又は紅藻由来成分；シラン根（白及）抽出物；ペクチン、ローカストビーンガム、アロエ多糖体、アルカリゲネス産生多糖体等の多糖類；キサンタンガム、トラガントガム、ローストビーンガム、グアーガム等のガム類；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース等のセルロース誘導体；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、マスチック樹脂、アクリル酸・メタクリル酸共重合体等の合成高分子類；ヒアルロン酸及びその誘導体；ポリグルタミン酸及びその誘導体等が挙げられる。

また、防腐・殺菌剤としては、例えば、尿素；パラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息香酸プロピル、パラオキシ安息香酸ブチル等のパラオキシ安息香酸エステル類；フェノキシエタノール、ジクロロフェン、ヘキサクロロフェン、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、サリチル酸、エタノール、ウンデシレン酸、フェノール類、ジャマール（イミダゾデイニールウレア）、ポリリン酸、プロパンジオール、１，２−ペンタンジオール、各種精油類、樹皮乾留物、大根発酵液、サトウキビ等の植物由来のエタノール又は１，３−ブチレングリコール等がある。

また、粉体成分としては、例えば、セリサイト、酸化チタン、タルク、カオリン、ベントナイト、酸化亜鉛、炭酸マグネシウム、酸化マグネシウム、酸化ジルコニウム、硫酸バリウム、無水ケイ酸、雲母、ナイロンパウダー、ポリエチレンパウダー、シルクパウダー、セルロース系パウダー、穀類（米、麦、トウモロコシ、キビ等）のパウダー、豆類（大豆、小豆等）のパウダー等がある。

また、紫外線吸収剤としては、例えば、パラアミノ安息香酸エチル、パラジメチルアミノ安息香酸エチルヘキシル、サリチル酸アミル及びその誘導体、パラメトキシ桂皮酸２−エチルヘキシル、桂皮酸オクチル、オキシベンゾン、２，４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸塩、４−ターシャリーブチル−４−メトキシベンゾイルメタン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、アロエ抽出物等がある。

また、消泡剤とは、例えば、エタノール、イソプロパノール、ジシロキサン、ジメチルポリシクロサン、ジメチコンケイ酸シリカ、トリシロキサン、シリル化シリカ、ジメチコン、トリメチルシロキシケイ酸、ＤＰＧイソボルニルエーテル等がある。

また、抗酸化剤としては、例えば、ブチルヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プロピル、アスタキサンチン、ムラサキシキブの抽出物、シラン根の抽出物、シャクヤク抽出物、ビタミンＥ及びその誘導体（例えば、ビタミンＥニコチネート、ビタミンＥリノレート等）等がある。

また、キレート剤としては、例えば、エチレンジアミンヒドロキシエチル三酢酸三ナトリウム、エデト酸又はその塩類、グルコン酸、フィチン酸、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、ヒドロキシエタンジホスホン酸四ナトリウム等がある。

また、ｐＨ調整剤としては、例えば、クエン酸又はその塩類、乳酸又はその塩類、グリコール酸、コハク酸、塩酸、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等がある。

また、美白剤としては、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、コウジ酸及びその誘導体、アスコルビン酸及びその誘導体、ハイドロキノン又はその誘導体、エラグ酸及びその誘導体、ニコチン酸及びその誘導体、レゾルシノール誘導体、トラネキサム酸及びその誘導体、４−メトキシサリチル酸カリウム塩、マグノリグナン（5,5'−ジプロピル−ビフェニル−2,2’−ジオール）、ヒドロキシ安息香酸及びその誘導体、ビタミンＥ及びその誘導体、α−ヒドロキシ酸、ＡＭＰ（アデノシンモノホスフェイト、アデノシン１リン酸）が挙げられ、これらを単独で配合しても、複数を組み合わせて配合しても良い。

また、上記のコウジ酸誘導体としては、例えばコウジ酸モノブチレート、コウジ酸モノカプレート、コウジ酸モノパルミテート、コウジ酸ジブチレート等のコウジ酸エステル類、コウジ酸エーテル類、コウジ酸グルコシド等のコウジ酸糖誘導体等が、アスコルビン酸誘導体としては、例えばＬ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸エステルマグネシウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルナトリウム、Ｌ−アスコルビン酸−２−硫酸エステルマグネシウム等のアスコルビン酸エステル塩類、Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド、Ｌ−アスコルビン酸−５−グルコシド、アスコルビルトコフェリルマレイン酸、アスコルビルトコフェリルリン酸Ｋ、ミリスチル３−グリセリルアスコルビン酸、カプリリル２−グリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸糖誘導体、それらアスコルビン酸糖誘導体の６位アシル化物（アシル基は、ヘキサノイル基、オクタノイル基、デカノイル基等）、Ｌ−アスコルビン酸テトライソパルミチン酸エステル、Ｌ−アスコルビン酸テトララウリン酸エステル等のＬ−アスコルビン酸テトラ脂肪酸エステル類、３−Ｏ−エチルアスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸−６−Ｏ−パルミテートナトリウム、グリセリルアスコルビン酸又はそのアシル化誘導体、ビスグリセリルアスコルビン酸等のアスコルビン酸グルセリン誘導体、Ｌ−アスコルビン酸リン酸アミノプロピル、Ｌ−アスコルビン酸のヒアルロン酸誘導体、３−Ｏ−Ｄラクトース−Ｌ−アスコルビン酸、イソステアリルアスコルビルリン酸塩等が、ハイドロキノン誘導体としては、アルブチン（ハイドロキノン−β−Ｄ−グルコピラノシド）、α−アルブチン（ハイドロキノン−α−Ｄ−グルコピラノシド）等が、トラネキサム酸誘導体としては、トラネキサム酸エステル（例えば、トラネキサム酸ラウリルエステル、トラネキサム酸ヘキサデシルエステル、トラネキサム酸セチルエステル又はその塩）、トラネキサム酸のアミド体（例えば、トラネキサム酸メチルアミド）等が挙げられ、レゾルシノール誘導体としては、例えば、４−ｎ−ブチルレゾルシノール、４−イソアミルレゾルシノール等が、２，５−ジヒドロキシ安息香酸誘導体としては、例えば２，５−ジアセトキシ安息香酸、２−アセトキシ−５−ヒドロキシ安息香酸、２−ヒドロキシ−５−プロピオニルオキシ安息香酸等が、ニコチン酸誘導体としては、例えばニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル等が、α−ヒドロキシ酸としては、例えば乳酸、リンゴ酸、コハク酸、クエン酸、α−ヒドロキシオクタン酸等がある。

また、生理活性成分としては、例えば、胎盤抽出液、ソウハクヒ抽出物、ユキノシタ抽出物、シソ抽出物、米糠抽出物又はその加水分解物、白芥子抽出物又はその加水分解物、白芥子の発酵物、シャクヤク抽出物又はその加水分解物、乳酸菌抽出物、ビフィズス菌抽出物、ムラサキシキブ抽出物、ハス種子抽出物又はその加水分解物、ハス種子発酵物、ハトムギ加水分解物、ハトムギ種子発酵物、ローヤルゼリー発酵物、ダイズ芽抽出物、酒粕抽出物又はそれに含まれるセラミド、酒粕発酵物、パンダヌス・アマリリフォリウス抽出物、アルカンジェリシア・フラバ抽出物、トウキンセンカ抽出物、カミツレ抽出物、サンゴ草抽出物、イネの葉の抽出物又はその加水分解物、ナス（ハス、長ナス、賀茂ナス、米ナス等）抽出物又はその加水分解物、アンズ果実の抽出物、カタメンキリンサイ等の海藻の抽出物、アマモ等の海産顕花植物の抽出物、豆乳発酵物、クラゲ水、米抽出物又はその加水分解物、米醗酵抽出物、発芽米抽出物又はその加水分解物、発芽米発酵物、黒豆抽出物又はその加水分解物、黒糖抽出物又はその発酵物、ダマスクバラの花の抽出物、イランイラン花抽出物、タケノコの皮の抽出物、リノール酸及びその誘導体もしくは加工物（例えばリポソーム化リノール酸等）、動物又は魚由来のコラーゲン及びその誘導体、エラスチン及びその誘導体、動物又は魚由来のプロテオグリカン、グリチルリチン酸及びその誘導体（ジカリウム塩等）、ｔ−シクロアミノ酸誘導体、ビタミンＡ及びその誘導体、アラントイン、ジイソプロピルアミンジクロロアセテート、γ−アミノ−β−ヒドロキシ酪酸、ゲンチアナ抽出物、甘草抽出物、セイヨウニンジン抽出物、オタネニンジン（白参）抽出物、オタネニンジン発酵物、ツバキ抽出物、ミツイシコンブ抽出物、ヘチマ抽出物、アナアオサ抽出物、モモ抽出物、ウメ抽出物、桃仁抽出物、キウイ抽出物、ヒマワリ抽出物、ジュアゼイロ抽出物、パウダルコ樹皮抽出物、萱草（デイリリー）抽出物または発酵物、ハイビスカスの花抽出物または発酵物、ハゴロモグサ抽出物、チェリモヤ抽出物、マンゴー抽出物、マンゴスチン抽出物、フノリ抽出物、烏龍茶抽出物、紅富貴抽出物、シラン抽出物、サツマイモ抽出物、山椒果皮又は種皮の抽出物或いはその加水分解物、ベニバナ花抽出物、カサブランカ抽出物、甘藷抽出物又はその発酵物、グアバ葉抽出物、カワラヨモギ抽出物、チョウジ抽出物、オリーブ葉抽出物、セイヨウトチノキ抽出物、ショウガ抽出物、バニラ抽出物、ドクダミ抽出物、晩白柚抽出物、アロエ抽出物、アロエベラ抽出物、チューリップ抽出物、ツボクサ抽出物、イチジク花抽出物、リンゴ抽出物、ホワイトアスパラガス抽出物、カッコン抽出物、党参抽出物又はその加水分解物等がある。

次に、製造例、試験例及び実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はそれらに限定されるものではない。なお、以下において、部はすべて重量部を、また、％はすべて重量％を意味する。

製造例１．オタネニンジン抽出物（１）の調製
オタネニンジンのひげ根１０ｇを精製水４０ｇに浸漬し、１００℃〜１２０℃で１時間加熱した。加熱後のひげ根を５０％ブチレングリコールで抽出して、オタネニンジン抽出物８６ｇ（固形分濃度１．７％）を得た。

製造例２．オタネニンジン抽出物（２）の調製
オタネニンジンのひげ根１０ｇを精製水４０ｇに浸漬し、１００℃〜１２０℃で２時間加熱した。加熱後のひげ根を５０％ブチレングリコールで抽出して、オタネニンジン抽出物８０ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。

製造例３．オタネニンジン抽出物（３）の調製
オタネニンジンのひげ根１０ｇを精製水４０ｇに浸漬し、１００℃〜１２０℃で３時間加熱した。加熱後のひげ根を５０％ブチレングリコールで抽出して、オタネニンジン抽出物９０ｇ（固形分濃度２．３％）を得た。

製造例４．オタネニンジン抽出物（４）の調製
オタネニンジンのひげ根１００ｇを精製水５００ｇに浸漬し、１００℃〜１１５℃で２時間加熱した。加熱後のひげ根を精製水に浸漬し、オタネニンジン抽出物１０００ｇ（固形分濃度２．０％）を得た。

製造例５．オタネニンジン抽出物（５）の調製
オタネニンジンのひげ根２０ｇを精製水８０ｇに浸漬し、１００℃〜１１５℃で４時間加熱した。加熱後のひげ根を７５％ブチレングリコールで抽出して、オタネニンジン抽出物２１９ｇ（固形分濃度１．８％）を得た。

比較製造例１．オタネニンジン抽出物の調製
オタネニンジンのひげ根１０ｇを精製水４０ｇに浸漬し、４０℃で抽出して、オタネニンジン抽物１０５ｇ（固形分濃度１．４５％）を得た。

試験例１．ジンセノサイドＲｇ_３及びＲｇ_５の定量試験方法
製造例１〜５及び比較製造例１を１０μＬとり、次の試験条件で液体クロマトグラフィーにより試験を行った。得られたクロマトグラムのピーク面積を求め、予め作成した検量線よりジンセノサイドＲｇ_３及びＲｇ_５の濃度を求めた。
（１）試験条件
検出器：紫外吸光光度計（測定波長：２０３ｎｍ）
カラム：内径４．６ｍｍ，長さ１５ｃｍのステンレス管に５μｍの液体クロマトグラフィー用オクタデシルシリル化シリカゲルを充填したものを使用した。
カラム温度：３０℃
移動相Ａ：アセトニトリル移動相Ｂ水
移動相の送液：移動相Ａ及び移動相Ｂの混合比を表１のように変えて濃度勾配を制御した。
［表１］
（２）検量線の作成
まず、ジンセノサイドＲｇ_３の５ｍｇを量りとり、９０％アセトニトリル水溶液を加えて２５ｍＬとして標準原液を調製した。次に、ジンセノサイドＲｇ_３標準原液２．５ｍＬ、５．０ｍＬを正確にとり、それぞれ移動相を加えて正確に１０ｍＬとし、標準溶液とした。そして、標準原液１０μＬと標準溶液１０μＬをとり、前記試験条件で液体クロマトグラフィーにより試験を行った。得られたクロマトグラムのピーク面積を横軸に、ジンセノサイドＲｇ_３の濃度（w/v ppm）を縦軸にとり、検量線を作成した。Ｒｇ_５については、５ｍｇを量りとり、９０％アセトニトリル水溶液を加えて２５ｍＬとして標準原液を調製した。次に、ジンセノサイドＲｇ_５標準原液１．０ｍＬ、２．５ｍＬ、５．０ｍＬを正確にとり、それぞれ移動相を加えて正確に１０ｍＬとし、標準溶液とした。そして、標準溶液１０μＬをとり、前記試験条件で液体クロマトグラフィーにより試験を行った。得られたクロマトグラムのピーク面積を横軸に、ジンセノサイドＲｇ_５の濃度（w/v ppm）を縦軸にとり、検量線を作成した。

製造例１〜５の抽出物及び比較製造例１の抽出物中に含まれるジンセノサイドＲｇ_３及びＲｇ_５の測定結果を表２に示す。
［表２］

試験例２．メラニン生成抑制評価試験
（１）Ｂ１６細胞の培養
Ｂ１６細胞（マウスメラノーマ細胞）を１０％ＦＢＳ(fetal bovine serum)、１００units/ml penicillin及び１００μg/ml streptomycin (Wako, Osaka, Japan)含有のＤＭＥＭ（Dulbecco’s modified Eagle’s medium (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)を用いて、５％ＣＯ_２、温度３７℃にて培養した。
（２）試験溶液処理
上記（１）と同様の培養法にて、６wellマルチプレートに５×１０^４個/wellにてＢ１６細胞を播種した。その２４時間後、各wellにメラニンの誘導剤として3-isobutyl−1−methylxanthine (IBMX)及び試験溶液と２ｍＬの１０％ＦＢＳ、１００units/ml penicillin及び１００μg/ml streptomycin含有のＤＭＥＭの混合溶液を調製し、培養液と入れ替え、５％ＣＯ_２、温度３７℃にて培養した。試験溶液としては、製造例１〜３の抽出物とその比較対照（比較製造例１の抽出物）を１．０％（溶液としての濃度）になるように調整したものと、製造例４，５の抽出物及びその比較対照（比較製造例１の抽出物）を０．５％（溶液としての濃度）になるように調整したものを準備した。また、ＩＢＭＸを添加せず、試験溶液に代えて０．７５％又は０．５％の１，３−ブチレングリコール(BG)を添加した培養液で培養した場合をコントロール（−ＩＢＭＸ）として設定し、さらに、ＩＢＭＸを添加すると共に試験溶液に代えて０．７５％又は０．５％のＢＧを添加した場合の培養をコントロール（＋ＩＢＭＸ）として設定した。
（３）メラニン量の測定
サンプル処理72時間後、培養液を除去し、各wellを２ｍＬのＰＢＳで洗浄後、５０μＬの１％TritonX-100(SIGMA)、２５０μＬの１ＮＮａＯＨの順に加え、十分に混和し１．５ｍＬチューブに回収した。回収したチューブを９８℃、３０分でインキュベートし、細胞溶解液を作製した。溶解液を十分に混和し、９６wellマルチプレートに８０μＬ/well加え、４０５ｎｍの吸光度を、マイクロプレートリーダーを用いて測定した(ARVO^TM X3)。
（４）タンパク量の測定
上記（３）にて作製した細胞溶解液をPierce BCA Protein Assay Kit（Thermo Scientific）を用いて、マニュアルに従い行った。５６０ｎｍの吸光度を、マイクロプレートリーダーを用いて測定した (ARVO^TM X3)。
（５）メラニン産生量評価
上記した方法にてメラニンおよびタンパク質量を算出し、メラニン／タンパク質量からメラニン産生量評価を行った。評価値は、コントロール（−ＩＢＭＸ）を１００としたときの相対値で算出した。

試験例２の結果を図1及び図２に示す。図１及び図２に示すように、製造例１〜５に係る抽出物は、比較製造例１の抽出物と比較して、格段にすぐれたメラニン生成抑制効果を発揮することが確認された。

試験例３．ジンセノサイドＲｇ_３、Ｒｇ_５、Ｒｂ_１及びＲｇ_１の美白評価試験
試験溶液として、試験例２の製造例１〜５及び比較製造例１に代えて、ジンセノサイドＲｇ_３、Ｒｇ_５、Ｒｂ_１及びＲｇ_１の溶液を使用した。ＩＢＭＸを溶解する溶媒としてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を使用し、ＩＢＭＸを添加せず、ジンセノサイドに代えてＤＭＳＯを添加した培養液で培養した場合をコントロール（−ＩＢＭＸ）として設定し、さらに、ＩＢＭＸを添加すると共に試験溶液に代えてＤＭＳＯを添加した場合の培養をコントロール（＋ＩＢＭＸ）として設定した。ＤＭＳＯの終濃度は０．１％となるように調整した。

試験例３の結果を図３及び図４に示す。図３に示すように、Ｒｇ_３及びＲｇ_５は低濃度でメラニン生成抑制効果を発揮する一方、図４に示すように、Ｒｂ_１及びＲｇ_１は、メラニンの生成を促すことが確認された。

試験例４・紫外線による細胞損傷の修復評価試験
（１）細胞（HaCaT）培養
ＨａＣａＴ細胞（ヒトケラチノサイト細胞）を５％ＦＢＳ(fetal bovine serum)、１００units/mL penicillin及び１００μg/mL streptomycin (Wako, Osaka, Japan)含有のDMEM（Dulbecco’s modified Eagle’s medium (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA)を用いて、５％ＣＯ_２、温度３７℃にて培養した。
（２）試験溶液処理
上記（１）と同様の培養法にて、６wellマルチプレートに１×１０^５個/wellにてＨａＣａＴ細胞を播種した。その２４時間後、各wellに試験溶液と２ｍＬの１０％ＦＢＳ、１００units/ml penicillin及び１００μg/mL streptomycin含有のＤＭＥＭの混合溶液を調製し、培養液と入れ替え、５％ＣＯ_２、温度３７℃にて培養した。ここで、細胞生存率の修復評価の試験溶液として、製造例１〜３及びその比較対象（比較製造例１の抽出物）を０．５％（溶液としての濃度）になるように調整した。また、細胞内のグルタチオン産生促進評価の試験溶液として、製造例１，２，５の抽出物とその比較対象（比較製造例１の抽出物）を１．０％（溶液としての濃度）になるように調整した。また、試験溶液に代えて０．２５％又は１．０％のＢＧを添加した培養液で培養した場合をコントロールとして設定した。
（３）ＵＶ−Ｂ処理（HaCaT細胞）
試験溶液処理５時間後、ＵＶＢ照射器（TL20W/12RS lamp, デルマレイ200;Muranaka）を用いてＵＶ−Ｂ（60mJ）を暴露した。ＵＶ強度の測定は紫外線量計センサー（UVX- 31;TGK）を用いて測定した。ＵＶ−Ｂ暴露後は５％ＣＯ_２、温度３７℃にて培養した。比較対象として、ＵＶ−Ｂを照射していないコントロール（UV-）を設定した。
（４）細胞生存率評価（HaCaT細胞）
The Cell Counting Kit-8 (CCK8; Dojindo) を用いて、マニュアルに従い行った。マニュアルからの改変点は以下の通りである。ＵＶ−Ｂ暴露をした２４時間後、培養液を除き、ＣＣＫ８溶液を各wellに加え、５％ＣＯ_２、温度３７℃にて１時間インキュベートした。ＣＣＫ８溶液を９６wellプレートに回収し、４５０ｎｍの吸光度を、マイクロプレートリーダーを用いて測定した (ARVO^TM X3)。評価値は、ＵＶ−Ｂ未照射のコントロール（UV-）を１００としたときの相対値で算出した。
（５−１）グルタチオン（GSH）測定（HaCaT細胞）
ＵＶ−Ｂ暴露２４時間後、培養液を除去し、各wellを２ｍＬのＰＢＳで洗浄後、３００μＬの０．０５％ Trypsin-EDTA（Gibco）を加え、５％ＣＯ_２、温度３７℃、５分インキュベートした。３００μＬのＤＭＥＭを加え１．５ｍＬチューブに回収した。さらに各wellに５００μＬのＰＢＳを加え、同チューブに回収し、遠心し（2000rpm、3分）、上清液を除去した。１ｍＬのＰＢＳを加え、遠心し（2000rpm、3分）、上清液を除去した。０．５％Triton-X100を２５０μＬ加え、ボルテックス、超音波による破砕を十分に行い、遠心し（13200rpm、10分）、上清液を回収した。回収した上清液をGSSG/GSH Quantification Kit（Dojindo）を用いて、マニュアルに従い、行った。４０５ｎｍの吸光度を、マイクロプレートリーダーを用いて測定した(ARVO^TM X3)。
（５−２）タンパク量測定（HaCaT細胞）
上記「グルタチオン測定」にて回収した上清液をPierce BCA Protein Assay Kit（Thermo Scientific）を用いて、マニュアルに従い行った。５６０ｎｍの吸光度を、マイクロプレートリーダーを用いて測定した (ARVO^TM X3)。
（５−３）グルタチオン量評価（HaCaT細胞）
上記した方法にてグルタチオン（GSH）およびタンパク質量を算出し、グルタチオン/タンパク質量からグルタチオン量評価を行った。評価値は、ＵＶ−Ｂ未照射のコントロール（UV-）を１００としたときの相対値で算出した。

試験例４の結果を図５〜図７に示す。図５に示す通り、本発明に係る抽出物は、比較製造例１と比較して、紫外線から損傷した細胞を修復する顕著な効果を発揮することが確認された。また、図６及び図７に示す通り、本発明に係る抽出物は、比較製造例１と比較して、紫外線照射により減少した細胞内グルタチオン量を回復させる顕著な効果を有することも確認した。

試験例５．線維芽細胞賦活効果の評価試験
ヒト真皮由来線維芽細胞ＮＢ１ＲＧＢを、０．５％ＮＣＳ含有イーグル最少必須培地を入れた９６wellマイクロプレートに１×１０^４個／well播種し、３７℃,５．０％ＣＯ_２の条件下に１日間プレ培養した後、製造例４，５及び比較製造例１の抽出物をそれぞれ試料溶液として、０．５％の濃度（溶液として）となるように培地に添加し、同条件でさらに３日間培養した。次に、培地を除去し、０．０３％のＭＴＴを添加して３７℃に１時間保持した後、生成したホルマザンをイソプロパノールで抽出し、マイクロプレートリーダー(Model 680、バイオラッド社製)を用いて波長５７０−６３０ｎｍでＭＴＴ値を測定した。試料溶液に代えてPBS(-)を添加した試料無添加の場合（対照）についても上記と同様の操作を行い、ここに得られたＭＴＴ値に対する各試料添加時のＭＴＴ値の相対値を求め、線維芽細胞ＭＴＴ活性率（％）とした。また、試験系が正常に機能しているかを確認するために、試料溶液の代わりに陽性対照として１００ｍＭのグルコースを添加した場合についても、同様の試験を行った。

試験例５の結果を図８に示す。図８に示す通り、本発明に係る抽出物は、比較製造例１と比較して、顕著な線維芽細胞賦活効果を発揮することが確認された。

処方例１．化粧水
［成分］部
ラベンダー油１．０
カプリル酸グリセリル３．０
ラウリル酸ポリグリセリル−１０３．０
メチルパラベン０．１
製造例１の抽出物２．０
白参エキス２．０
オタネニンジン発酵エキス２．０
サツマイモ発酵エキス１．０
グアバ葉エキス１．０
水溶性コラーゲン１．０
加水分解コラーゲン１．０
水ナスエキス１．０
イチゴ花エキス１．０
グリセリン２．０
１，３−ブチレングリコール５．０
クエン酸ナトリウム０．２
精製水全量が１００部となる量

処方例２．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例２の抽出物２．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例３．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例３の抽出物２．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例４．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例４の抽出物２．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例５．化粧水
処方例１に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例５の抽出物２．０部を用いるほかは、処方例１と同様にして化粧水を得た。

処方例６．乳液
［成分］部
スクワラン５．０
ヘキサラン３．０
ノバラ油１．０
ツバキ油１．５
ラウリン酸ポリグリセリル１．０
親油型ステアリン酸グリセリル１．０
ビサボロール１．０
ベヘニルアルコール３．０
水添大豆レシチン１．５
製造例５の抽出物２．０
白参エキス２．０
オタネニンジン発酵エキス２．０
Ｌ−アスコルビン酸−２−グルコシド２．０
サツマイモ発酵エキス１．０
月桃葉エキス１．０
グアバ葉エキス１．０
甘草抽出物１．０
党参加水分解エキス１．０
水溶性コラーゲン１．０
加水分解コラーゲン１．０
水酸化カリウム０．５
グリセリン３．０
１，３−ブチレングリコール２．０
カルボキシメチルセルロース０．３
キサンタンガム０．２
ヒアルロン酸ナトリウム０．０１
精製水全量が１００部となる量

処方例７．クリーム
［成分］部
オリーブ油５．０
ホホバ油５．０
メドウフォーム油５．０
スクワラン５．０
ベヘニルアルコール２．０
パルミチン酸２．５
乳酸菌発酵米２．０
水素添加レシチン０．５
ステアリル酸グリセリル３．０
製造例１の抽出物２．０
白参エキス２．０
オタネニンジン発酵エキス２．０
サツマイモ発酵エキス１．０
月桃葉エキス１．０
グアバ葉エキス１．０
加水分解米エキス２．０
水溶性コラーゲン１．０
加水分解コラーゲン１．０
キサンタンガム１．０
精製水全量が１００部となる量

処方例８．クリーム
処方例７に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例２の抽出物２．０部を用いるほかは、処方例１と同様にしてクリームを得た。

処方例９．クリーム
処方例７に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例３の抽出物２．０部を用いるほかは、処方例１と同様にしてクリームを得た。

処方例１０．クリーム
処方例７に含まれる製造例１の抽出物に代えて、製造例４の抽出物２．０部を用いるほかは、処方例１１と同様にしてクリームを得た。

処方例１１．洗顔料
［成分］部
ヤシ油２．０
ステアリル酸ステアリル２．０
カプリル酸グリセリル２．０
製造例１の抽出物２．０
白参エキス２．０
オタネニンジン発酵エキス２．０
水溶性コラーゲン１．０
グリセリン２．０
イチジク樹皮エキス１．０
ハトムギ種子エキス１．０
チョウジエキス１．０

Claims

ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）から得られ、ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物を有効成分とする美白用皮膚外用剤。
ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）から得られ、ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物を有効成分とする抗老化用皮膚外用剤。
ウコギ科（Araliaceae）トチバニンジン属（Panax）に属するオタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）から得られ、ジンセノサイドＲｇ_３及びジンセノサイドＲｇ_５を含むオタネニンジン抽出物を有効成分とする紫外線による細胞損傷の修復用皮膚外用剤。
ジンセノサイドＲｇ_５からなる美白剤。