WO2007094312A1

WO2007094312A1 - ビタミンｃトランスポーター産生促進剤

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Publication number: WO2007094312A1
Application number: PCT/JP2007/052509
Authority: WO
Inventors: Tomohiro Chiba; Kaori Aibe; Miho Shukuri; Tetsuhito Sakurai; Naoko Yamazaki; Takamasa Hitomi
Original assignee: Fancl Corporation
Priority date: 2006-02-14
Filing date: 2007-02-13
Publication date: 2007-08-23
Also published as: TWI389707B; JPWO2007094312A1; CN101912352A; TW200800289A; JP5571897B2

Abstract

ビタミンＣトランスポーター産生促進作用を有する物質の提供。マルビイン、コレステリルベンゾエート、ウガフェリン、ラピフェリン、ゲラニルアセタート、ネロリドール、ジヒドロジャスモン、カルバクリルアセタート、グアイズレン、ジヒドロコニフェリルアルコール、ステビオシド、ＤＬ－アルファ-ピレン、ベルベナリン、１－ヘプタコサノール、４－ヒドロキシクマリン、コール酸、オレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトールの化合物、または、ホオノキ、アーモンド、アマチャ、グレープフルーツ、ジャノヒゲ、セイヨウキズタ、サボンソウ、ドクダミ、カミツレ、アセンヤク、ハマメリス、マグワ、コメヌカ、スギナの抽出物を有効成分とするビタミンＣトランスポーター産生促進剤。

Description

明細書

ビタミン Cトランスポーター産生促進剤

技術分野

[0001] 本発明は、ビタミン Cトランスポーター産生促進作用を有する化合物及び植物に関する。また、その化合物及び植物を利用したビタミン c吸収促進用組成物、該ビタミン c吸収促進用組成物を含む美白用組成物又はコラーゲン合成促進用組成物に関する。

背景技術

[0002] ビタミン Cは、生体における水溶性抗酸ィ匕物質としてスーパーォキシドア-オンやその他の活性酸素種に対して優れた抗酸化作用を持ち、細胞内における脂質成分の酸化を予防する。また、コラーゲン合成におけるプロリン残基のヒドロキシルイ匕やメラニン合成の律速酵素として知られるチロシナーゼの制御、ビタミン Cのキレート作用による鉄運搬の調整、更に酸化と還元を調節することによって様々な酵素反応に関与している。多機能を有するビタミン Cであるが、モルモット及びヒトを含む霊長類は、 L グロノラタトンォキシターゼの欠損によってビタミン C合成能力がなく、更にビタミン cは、水溶性の性質をもち、他の脂溶性ビタミンに比べ生体保持時間が短いことから、ビタミン Cの機能不足に陥りやすいことが考えられる。

[0003] ビタミン Cの欠乏によって起こる疾患として、壊血病、創傷治癒能の低下、骨や結合組織の障害、血管運動の不安定化などが挙げられる。更に、心疾患、癌、白内障、風邪などを加えた様々な疾患に対して、ビタミン Cは、予防や治療を目的として用いられてきた (非特許文献 1)。また疾患以外にも肌に対して、美白や肌のうるおい強化、更には抗老化作用を目的にしたビタミン C製剤が数多く提供されてきた。

[0004] 一方、ビタミン Cの機能やその有効性に関する知見は数多く報告されているものの、ビタミン Cの各組織への取込み機構については、依然として不明な点が多い。 1999 年 Tsukaguchiらは、ラットからビタミン Cの取込みを担う膜タンパク質のクローユングに成功し、ナトリウムイオン:ビタミン C = 2 : 1の割合にて細胞内へ輸送するナトリウム依存性ビタミン Cトランスポーター（SVCT)を見出した (非特許文献 2)。その後の研究で、ヒトにおいてもビタミン cトランスポーターが存在することが明ら力となり、また、ビタミン Cトランスポーターには 1型（SVCT1)と 2型（SVCT2)の 2種類のァイソフォーム力 Sあることが明らかとなった。 SVCT1は、主に小腸、肝臓、腎臓、大腸、子宮、前立腺などの上皮組織に分布し、 SVCT2は肺、骨格筋、目、骨、脳などの内皮組織に幅広く分布している。共にビタミン Cを特異的に輸送する力 SVCT1に比べ SVCT2の方が特異性に優れていることが速度論的解析より明らかにされている（非特許文献 3

) o

[0005] Alexanderらは加齢に伴うビタミン C保有量とビタミン Cトランスポーターの発現量の関係について調べ、ラット肝臓においてビタミン Cトランスポーター（SVCT1)の発現量低下とビタミン C保有量の減少を報告した (非特許文献 4)。ビタミン C保有量低下の予防あるいは改善の方法として、ビタミン Cの継続的な摂取が挙げられる力 MacD onaldらは過剰なビタミン Cの摂取はビタミン Cトランスポーター（SVCT1)の発現を低下させ、さらに、ビタミン Cの取込み能力を低下させることをヒト腸管モデルを用いて推測している（非特許文献 5)。これらの知見力ビタミン C保有量低下に起因するビタミン Cの機能低下に関する予防あるいは改善にビタミン Cトランスポーター産生促進剤が効果的な方法であることが考えられた。

[0006] 現在まで SVCT1及び SVCT2の発現を高める化合物や植物に関する報告は極めて少な、。 Fujitaらはマウス骨芽細胞を用いてデキサメサゾンが SVCT2の発現を高め、ビタミン Cの取込み量を上昇させることを報告している（非特許文献 6)。しかし、テキサメサゾンは、ホルモン用作用を示すため、副作用という観点から使用にあたって大きな制約となる。また、 SVCT1の発現を増強する化合物あるいは植物に関する報告は未だない。

非特許文献 1 : Molecular Membrane Biology, 2001, Vol. 18, 87- 95 非特許文献 2 : Nature, 1999, Vol. 399, 70- 75

非特許文献 3 :FEBS Letter, 1999, Vol. 460, 480-484

特許文献 4: Archives of Biochemistry and Biophysics, 2003, Vol. 41

0, 112- 120

非特許文献 5 : British Journal of Nutrition, 2002, Vol. 87, 97— 100 非特許文献 6 : British Journal of Nutrition, 2001, Vol. 86, 145— 149 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0007] 本発明は、ビタミン Cの標的組織への取込みを促進させるビタミン Cトランスポータ一産生促進剤の提供を課題とする。さらに、別の課題はそのよう促進剤を含む美白用組成物又はコラーゲン合成促進用組成物の提供である。

課題を解決するための手段

[0008] 本発明者らは、上記諸課題を解決すべく鋭意検討した結果、ビタミン Cトランスポーター産生促進作用を有する化合物及び植物等を見出し、ビタミン c吸収促進用組成物、美白用組成物、コラーゲン合成促進用組成物として極めて有用であるという知見から本発明を完成するに至った。すなわち、ここで提案する解決手段は、次の構成をとる。

(1)マルビイン、コレステリルべンゾエート、ゥガフェリン、ラビフェリン、ゲラニルァセタート、ネロリドール、ジヒドロジヤスモン、カルバタリルァセタート、グァィズレン、ジヒドロコニフェリルアルコール、ステビオシド、 DL—ァノレファ-ピレン、ベルべナリン、 1—へプタコサノール、 4ーヒドロキシクマリン、コール酸、ォレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトール力なる化合物群より選択される少なくとも 1種以上を含有することを特徴とするビタミン Cトランスポーター産生促進剤。

(2)前記（1)記載のいずれかの化合物を含む植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出物の加水分解物を含むビタミン Cトランスポーター産生促進剤。

(3)前記（1)又は（2)記載のビタミン Cトランスポーター産生促進剤と、ビタミン Cあるいはビタミン C誘導体とを組合せてなるビタミン C吸収促進用組成物。

(4)ビタミン C誘導体力 2-0- a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸である前記（3)に記載のビタミン C吸収促進用組成物。

(5)前記（3)又は (4)記載のビタミン C吸収促進用組成物を含む美白用組成物。

(6)前記（3)又は (4)記載のビタミン C吸収促進用組成物を含むコラーゲン合成促進用組成物。 (7)ホオノキ、アーモンド、アマチヤ、グレープフノレーッ、ジヤノヒゲ、セィヨウキズタ、サボンソゥ、ドクダミ、力ミツレ、ァセンャク、ハマメリス、マダワ、コメヌ力、スギナからなる群より選択される少なくとも 1種類以上の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出物の加水分解物を含有することを特徴とするビタミン Cトランスポーター産生促進剤。

(8)前記（7)記載のビタミン Cトランスポーター産生促進剤と、ビタミン Cある、はビタミン C誘導体とを組合せてなることを特徴とするビタミン C吸収促進用組成物。

(9)ビタミン C誘導体力 2-0- a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸である前記（8)に記載のビタミン C吸収促進用組成物。

(10)前記（8)又は（9)記載のビタミン C吸収促進用組成物を含むことを特徴とする美白用組成物。

(11)前記（8)又は（9)記載のビタミン C吸収促進用組成物を含むことを特徴とするコラーゲン合成促進用組成物。

(12)前記（3)、（4)、（8)又は（9)記載のビタミン C吸収促進用組成物及びダルコシダーゼ剤を含有することを特徴とする美白用組成物。

(13)ダルコシダーゼ剤がェキナセァ、酵母、ビフィズス菌、乳酸菌からなる群より選択される少なくとも 1種類以上の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物である前記（ 12)記載の美白用組成物。

発明の効果

[0009] 本発明により見出した特定の化合物及び植物を含むビタミン Cトランスポーター産生促進剤によれば、細胞を用いた解析にぉ、て SVCT1及び/又は 2の mRNAの発現を顕著に促進することが確認できた。本発明のビタミン Cトランスポーター産生促進剤は、美白用組成物、コラーゲン合成促進用組成物として利用することができ、その使用形態としては、経口用、皮膚外用、注射、化粧品、医薬などが挙げられる。図面の簡単な説明

[0010] [図 1]3次元皮膚モデルによるメラニン生成抑制試験の結果を示したグラフである。

[図 2]炎症の抑制効果を示したグラフである。

[図 3]色素沈着の改善効果を示したグラフである。

[図 4]グレープフルーツ抽出物の SVCT産生促進効果を示す図である。 [図 5]三次元皮膚モデルの顕微鏡写真を示す図である。

[図 6]三次元皮膚モデルのフォンタナ ·マッソン染色像を示す図である。

[図 7]HPLCによるァスコルビン酸（0. 5mM)の分析チャートを示す図である。

[図 8]HPLCによる細胞内のァスコルビン酸の分析チャートを示す図である。

[図 9]マウスメラノーマ B16—F10細胞におけるグレープフルーツ抽出物のビタミン C 吸収促進効果の測定結果を示す図である。

[図 10]ヒト大腸がん由来 Caco2細胞におけるグレープフルーツ抽出物のビタミン C吸収促進効果の測定結果を示す図である。

発明を実施するための最良の形態

[0011] 以下、本発明の詳細を説明する。本発明のビタミン Cトランスポーター産生促進剤に含まれる化合物としては、マルビイン、コレステリルべンゾエート、ゥガフェリン、ラビフェリン、ゲラニルァセタート、ネロリドール、ジヒドロジヤスモン、カルバタリルァセタート、グアイズレン、ジヒドロコ-フェリルアルコール、ステビオシド、 DL アルファ-ピレン、ベノレべナリン、 1 ヘプタコサノール、 4ーヒドロキシクマリン、コーノレ酸、ォレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトールなどが使用可能である。これらの化合物は、単独で 1種類用いてもよぐまた、 2種類以上を組み合わせて用いることもできる。また、これらの化合物を含有する植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物も使用できる。

[0012] マルビイン（CAS :465— 92— 9)を含む植物としては、シソ科-ガハツカ属のマルビゥム 'ァセタノく口サム (Marrubium acetabulosum)、マノレビゥム 'アドファイン (Marrubi um adfine)、マノレビゥム ·ァエネニイ (Marrubium aellenii)、マノレビゥム 'ァフイネ (Marru bium affine)、マルビゥム 'アフリカナム（Marrubium africanum)、マルビゥム 'アルバム (Marrubium album)、マノレビゥム 'オノレタ-テンス (Marrubium alternidens)、マノレビゥム'ァリツソづデス (Marrubium alyssoides)、マノレビ、ゥム 'ァリツソン (Marrubium alysson )、マノレビゥム ·アンダスティフォリウム（Marrubium angustifolium)、マノレビゥム ·了ニソドン (Marrubium anisodon)、マノレビゥム'ァフラム (Marrubium apulumリ、マノレビゥム' アクアティカム (Marrubium aquaticum)、マノレビゥム ·アサノレソニ (Marrubium ascherso ni)、マノレビゥム 'ァストラ力-カム (Marrubium astracanicum)、マノレビゥム 'アトランティカム (Marrubium atlanticum)、マルビゥム ·Τヤノレディィ (Marrubium ayardii)、マルビゥム ·ボロタ (Marrubium ballota 、マノレビゥム ·ペレグリナム (Marrubium ballotaeforme )、マルビゥム 'バロトイデス（Marrubium ballotoides)、マルビゥム 'バステタナム（Marr ubium bastetanum)、マノレビゥム ·ボノレンマェレリ (Marrubium bornmuelleri)、マノレヒゥム ' ノレカエイ (Marrubium bourgaei)、マルビゥム ·ブフテョドン (Marrubium brachyod on)、マノレビゥム ·カンディディシマウ (Marrubium candidissimum)、マノレビゥム ·カラリァエフオリゥム (Marrubium catariaefolium)、マノレビゥム.セノヽランタム (Marrubium cep halanthum)、マノレビゥム.シネラセンス (Marrubium cinerascens)、マノレビゥム.シネレゥム (Marrubium cinereum)、マノレビゥム ·、ノルソナタム (Marrubium circinnatum)、マノレビゥム 'シビス (Marrubium civice)、マノレビゥム 'コエノレレセンス (Marrubium coerule scens)、マノレビゥム 'コデンサタム (Marrubium condensatum)、マノレビゥム ·コノレダタム (Marrubium cordatum)、マノレビゥム ·クフンデンス (Marrubium crassidens 、マノレビゥム 'クレアィカム (Marrubium creticum)、マノレビゥム'クリスノヽム (Marrubium crispum)、マノレビゥム ·力ネアテュム (Marrubium cuneatum)、マノレビゥム ·シレネゥム (Marrubium cylleneumリ、マノレビゥム'ァノヽゥぺフタム (Marrubium depauperatum)、マノレビゥム'テザティ (Marrubium deserti)、マノレビゥム 'テユアべンセ（Marrubium duabense)、マノレビゥム ·ェキナタム (Marrubium echinatum)、マノレビゥム ·エリオセファラム (Marrubium eriocephalum)、マノレビゥム ·エリ才スタチュム (Marrubium eriostachyum)、マノレビゥム •ファゥシアンス (Marrubium faucidens)、マノレビゥム.フラノくム (Marrubium flavum)、マルビゥム ·フエキサム（Marrubium flexuosum)、マルビゥム ·フォンティアナム（Marrub ium fontianum)、マノレビゥム ·フライヮノレドス力ナム (Marrubium friwaldskyanum)、マノレビゥム'ガモドン (Marrubium gamodon)、マノレビゥム 'ケノレマ二カム (Marrubium germa nicum)、マノレビゥム 'グレコマエフオリゥム (Marrubium glechomaefolium)、マノレビゥム' グロボサム（Marrubium globosum)、マノレビゥム'ゴクスチャイカム (Marrubium goktsch aicum)、マノレビゥム 'ガイリエノレモンテイイ (Marrubium guilliermondii)、マノレビゥム 'ノヽマタム (Marrubium hamatum)、マルビゥム ·ペルモニス (Marrubium hermonis)、マルビゥム 'ヘテロクラダム (Marrubium heterocladum)、マノレビゥム ·ヘテロドン (Marrubiu m heterodon)、マノレビゥム 'ヒエラポリタ -ゥム (Marrubium hierapolitanum)、マノレビゥム'ヒノレスタム (Marrubium hirsutum)、マノレビゥム'ヒスノ -カム (Marrubium hispanicu m)、マノレビゥム 'ヒユンべノレテイイ (Marrubium humbertii)、マノレビゥム 'ヒユミレ (Marru bium humile)、マノレビゥム 'ノヽイノ口カム（Marrubium hyperleucum 、マノレビゥム 'イン力ナム（Marrubium incanum)、マノレビゥム.インシサム (Marrubium incisum)、マノレビゥム 'インティカ (Marrubium indicum)、マルビゥム'コシィ (Marrubium kotschyi)、マルビゥム ·力ノレディカム (Marrubium kurdicum)、マノレビゥム ·カスネゾィ (Marrubium kusn ezowii)、マノレビゥム ·ラミ才ィァス (Marrubium lamioides)、マノレビゥム ·ラナタム (Marr ubium lanatum)、マノレビゥム 'ラリカム (Marrubium laricum)、マノレビゥム 'ラウリフォリウム (Marrubium laurifolium)、マルビゥム ·レオ-ゥロイァス (Marrubium leonuroides 、マノレビゥム ·リノくノティカム (Marrubium libanoticum)、マノレビゥム ·リタディェレイ (Marr ubium litardierei)、マノレビゥム 'ラテセンス (Marrubium lutescens)、マノレビゥム 'マクロドン (Marrubium macrodon)、マルビゥム ·マルコルァ -ゥム (Marrubium malcolmianu m)、マノレビゥム 'マノレビアスタラム (Marrubium marrubiastrum)、マノレビゥム 'ミクランチゥム (Marrubium micranthumノ、マノレヒクムクロフイリフム (MarruDium microphylium) 、マルビゥム.モリシマム（Marrubium mollissimum)、マルビゥム.モンテネグリ-ゥム（ Marrubium montenegrmum)、マノレヒヮム 'マノレチフ'フグァ /チゥム (Marrubium multib racteatum)、マノレビゥム ·ナナム (Marrubium nanum)、マノレビゥム ·二ヮラム (Marrubiu m nigrum)、マノレビゥム 'ノエァナム (Marrubium noeanum)、マノレビゥム 'ォドラチシマム (Marrubium odoratissimum)、マノレビゥム '才リエンタレ (Marrubium orientale)、マノレビゥム'ノリダム (Marrubium pallidum)、マノレビゥム'ノヽニカラタム (Marrubium panicula tum)、マノレビゥム 'ノンノ二カム (Marrubium pannonicum)、マノレビゥム'ノレナスシカム (Marrubium parnassicum)、マノレビ、ゥム'ノヽノレヒ、、フロフム (Marrubium parviflorum)、マノレビゥム'ポゥシフロラム (Marrubium pauciflorum)、マノレビゥム 'ペレグリナム (Marr ubium peregnnum 、マノレビ、¹ノム 'へノレンカム (Marrubium persicum)、マノレビ、ゥムヽスタロザェ (Marrubium pestalozzae)、マノレビゥム'プリカタム (Marrubium plicatum)、マノレビゥム 'プラモサム (Marrubium plumosum)、マノレビゥム 'ポリオドン (Marrubium poly odon)、マノレビゥム 'プラエコックス (Marrubium praecox)、マノレビゥム 'プロセラム (Mar rubium procerum)、マノレビ、ゥム'プロピン = ユウム (Marrubium propinquum 、マノレヒ、、 ¹ノム.ぺスドアリツサム (Marrubium pseudo- alyssum)、マノレビゥム 'ぺスドジクタムナス (M arrubium pseudo— dictamnus)、マノレビゥム ·プノレフ。レゥム (Marrubium purpureum)、マノレビゥム ·ラデァタム (Marrubium radiatum)、マノレビゥム ·レモタム (Marrubium remo turn)、マルビゥム ·口タンディフオリゥム（Marrubium rotundifolium)、マルビゥム ·ラブラム (Marrubium rubrum)、マノレビゥム ·ラゴサム (Marrubium rugosum)、マノレビゥム 'スクロファラリアエフオリゥム（Marrubium scrophulariaefolium)、マルビゥム 'セゴブリセンセ (Marrubium segobricense)、マルビゥム ·セリセゥム (Marrubium senceum)、マルビゥム.セタセゥム (Marrubium setaceum)、マノレビゥム.セヮエノレゾビ (Marrubium sewerz owi)、マルビゥム 'サフルティコサム（Marrubium sulfruticosum)、マルビゥム 'サピナム (Marrubium supinum)、マノレビゥム ·セサラム（Marrubium thessalum)、マノレビゥム.トウィ二 (Marrubium thouini 、マノレビゥム 'トラキティカム（Marrubium trachyticum)、マノレビゥム ·タノレケビクジィ (Marrubium turkeviczii)、マノレビゥム 'ゥンシナタム (Marrubium uncinatum)、マノレビゥム 'アンダラタム (Marrubium undulatum)、マノレビゥム 'バイランテイイ (Marrubium vaillantii)、マノレビゥム 'ノ、不ンセ (Marrubium vanense)、マノレビゥム •ベルテナム (Marrubium velutinum)、マルビゥム-ビレスセンス (Marrubium virescens マルビゥム 'バルカ-カム（Marrubium vulcanicum)、-ガハツ力あるいは別名ホヮノヽゥンド (Marrubium vulgare)、マノレビゥム 'ベノレ不リ (Marrubium werneri)、マノレビゥム 'ウイノレコミィ（Marrubium wilkommi)、シソ科メハジキ属のコモン'マザ一ワート（Leo nurus cardiaca)、シソ科力エンキセヮタ属のカエンキセヮタ (Leonotis leonurus)などが挙げられる。

[0013] コレステリルべンゾエート（CAS : 604— 32— 0)を含む動物としては、ヨウジゥォ科のヨウジゥォ（Syngnathus acus)などが挙げられる。

[0014] ゥガフェリン（CAS : 63026— 58— 4)を含む植物としては、セリ科ォォウイキヨゥ属のフエノレラ 'ァリゴ-ィ (Ferula arrigonii)、フエノレラ 'アサホエティダ (Ferula assafoetida )、ォォウイやヨウ (Ferula communis)、フエノレフ'インボノレクフタ (Ferula involucrata 、フェルラ'クヒスタ-カ（Ferula kuhistanica)、フェルラ 'ラピドサ（Ferula lapidosa)、フエノレラ ·ラティピツナ (Ferula latipinna)、フエノレラ ·ロコグラファ (Ferula leucographa)、フエルラ ·リンキ（Ferula linkii)、フェルラ ·シナイカ（Ferula sinaica)、フェルラ'スンガリカ (Ferula soongarcia)、フエノレラ'テ二エスタ (Ferula tenuiesta)、フエノレラ'ゥガミカ (Fer ula ugamica)などが挙げられる。

[0015] ラビフェリン（CAS : 86992— 41— 8)を含む植物としては、セリ科ォォウイキヨゥ属のフエノレラ 'ァリゴ-ィ (Ferula arrigonii)、フエノレラ 'アサホエティダ (Ferula assafoetida )、ォォウイやヨウ (Ferula communis)、フエノレフ'インボノレクフタ (Ferula involucrata 、フェルラ'クヒスタ-カ（Ferula kuhistanica)、フェルラ 'ラピドサ（Ferula lapidosa)、フエノレラ ·ラティピツナ (Ferula latipinna)、フエノレラ ·ロコグラファ (Ferula leucographa)、フエルラ ·リンキ（Ferula linkii)、フェルラ ·シナイカ（Ferula sinaica)、フェルラ'スンガリカ (Ferula soongarcia)、フエノレフ · "二エスタ (Ferula tenuiesta)、フエノレフ'ゥ yミカ (Fer ula ugamica)などが挙げられる。

[0016] ゲラ-ルァセタート（CAS : 105— 87— 3)を含む植物としては、マツ科モミ属のォォシラビソ（Abies mariesii)、キク科カツコゥァザミ属のォォカツコゥァザミ（Ageratum hou stonianum)、キク科オケラ属のホソバオケラ（Atractylodes lancea)、キク科バッカリス属のバッカリス ·ドラカンカリフォリア（Baccharis dracunculifollia)、バッカリス ·ラティフォリア（Baccharis latifolia)、バッカリス ·サリシフォリア（Baccharis salicifollia)、キク科ヒナギク属のヒナギク（Bellis perennis)、キク科キンセンカ属のトウキンセン力（Calendu la officinalis)、セリ科キャラウェー属のヒメウイキヨゥ（Carum carvi)、イワヅタ科イワズタ属のスリコギッタ（Caulerpa racemosa)、ナス科キチョウジ属のヤコゥカ（Cestrum noct urnum)、セリ科カンギゥム属のミントウジン（Changium smyrnioides)、ミカン科ミカン属のフィム (し itrus aurantifolia)、ダイタィし itrus aurantium)、へノレ； yモット (Citrus berg amia)、フンタン (Citrus grandis)、ノヽッサク (し itrus nassaku)、ョカン (し itrus iyo)、ュズ（Citrus junos)、キシュゥミカン（Citrus kinokuni) ,レモン（Citrus limon)、シトロン (し itrus medica)、ナツカン (し itrus natsuaaidai)、グレ ~~プノノレ ~~ッ (Citrus paradise )、ポンカン (Citrus reticulate)、スイートオレンシ (Citrus sinensis)、力ボス (Citrus sp haerocarpa)、スダチ（Citrus sudachi)、サンポゥカン（Citrus sulcata)、タチバナ（Citr us tachibana)、ゥンシユウミカン（Citrus unshiu)、ミル科ミル属のコディウム 'トメントサム (Codium tomentosum)、セリ科クミン属のクミン (Cuminum cyminum)、イネ科ォガノレカャ属の (Cymbopogon caesius)、レモングフス (Cymbopogon citratus)、シムホホコン 'カシアナス (Cymbopogon khasianus)、ジャワシトロ不ラソゥ (Cymbopogon winterianu s)、セリ科-ンジン属の-ンジン（Daucus carota)、シソ科ムシャリンドウ属のドラコセファラム.コッシユイ（Dracocephalum kotschyi)、フトモモ科ユーカリ属のユーカリプタス' ゥロフイラ（Eucalyptus urophylla)、キク科ムギワラギク属のムギワラギク（Helichrysum bracteatum)、ドクダミ科ドクダミ属のドクダミ（Houttuynia cordata)、シキミ科シキミ属のイリシゥム ·グリフイチ（Illicium griffithii)、イリシゥム 'メリリアナム（Illicium merrillianu m)、ヒノキ科ネズミサシ属のジュ-ペラス'フォルモサナ（Juniperus formosana)、ネズ（ Juniperus rigida)、フトモモ科ネズモドキ属のレプトスぺノレム 'ジヤノく-カム (Leptosper mum javanicum)、セリ科マノレノトウキ属のリガスティカム'マテリナ (Ligusticum mutelli na)、クマッヅラ科イワダレソゥ属のリツピア 'ジャバニ力（Lippia javanica)、シソ科-ガノヽッカ属の-ガノヽッカ (Marrubium vulgare)、シソ科ノヽナノヽッカ属のォリガ-ナム 'ロタンディフォリウム（Origanum rotundifolium)、フゥ口ソゥ科テンジクァオイ属の-オイテンジクァオイ（Pelargonium graveolens)、タスノキ科タイワンィヌグス属のホーべ'ポロサ（Phoebe porosa)、ッッジ科ッッジ属のロドデンドロン.プリマレフ口ラム（Rhododend ron primulaeflorum)、バラ科バラ属のセンティフォリアバラ（Rosa centifolia)、シソ科ァキギリ属のサルビア ·タレべカンディ (Salvia clevelandii)、サルビア ·フラクチコサ (Salvi a fructicosa)、セージ (Salvia officinalis)、ォ-サノレビア (Salvia sclarea)、キク科マンジュギク属のマリーゴールド（Tagetes erecta)、シクンシ科モモタマナ属のテルミナリア' ベンゾェ（Terminalia bentzoe)、ヒノキ科クロべ属のチュジャ 'コライエンシス（Thuja ko raiensis)、シソ科イブキジヤコゥソゥ属のタイマス 'シピレアス（Thymus sipyleus)、タイマス'スラシカス（Thymus thracicus)、タイム（Thymus vulgaris)、タイマス'ジギス (Thy mus zygis)、ミカン科サンショウ属のザンソキシラム 'パンゲナム（Zanthoxylum bungea num)、ィヌザンショウ（Zanthoxylum schinifolium)などが挙げられる。

ネロリドール（CAS： 7212— 44 4)を含む植物としては、キク科ノコギリソゥ属のノコギリソゥ（Achillea alpine)、キバナノコギリソゥ（Achillea filipendulina)、ァチレア'リグスティカ（Achillea ligustica)、セィヨウノコギリソゥ（Achillea milleifolium)、ジヤコウノコギリソゥ（Achillea moschata)、ォォバナノコギリソゥ（Achillea ptarmica)、ヒメノコギリソゥ (Achillea tomentosa)、キク科カツコゥァザミ属のカツコゥァザミ (Ageratum conyzoid es)、ォォカツコゥァザミ (Ageratum houstonianum)、ショウガ科ァモマム属のべンガノレカノレタモン (Amomum aromaticum)、ショ¹ /ズク (Amomum cardamomum)、クレ ~~タ' ~~ カノレタモン (Amomum subulatum)、ンュクンャ (Amomum xanthioides)、ショ¹ノガ (,Amo mum zingiber)、マメ科クロノくナェンジュ属のクロノくナェンジュ (Amorpha fruticosa)、ツバキ科ツバキ属のチヤ（Camellia sinensis)、マメ科ナタマメ属のタチナタマメ（Canav alia ensiformis)、ナタマメ (し anavalia gladiata)、ノヽマナタマメ (し anavalia maritima)、ナス科キテョウジ属のゃチョウン (Cestrum aurantiacum)、ヤコゥカ (Cestrum nocturnu m)、ベニテョゥシ (Cestrumpurpureum)、ミカン科ミカン J¾のフィム (Citrus aurantifolia )、ダイグィ (し itrus aurantium)、へノレ 7モット (し itrus bergamia)、ブンタン (し itrus gra ndis)、ハツサク（Citrus hassaku)、ィョカン（Citrus iyo)、ュズ（Citrus junos)、キシュゥミカン（Citrus kinokuni)、レモン（Citrus limon)、シトロン（Citrus medica)、ナツミカン（ Citrus natsudaidaリ、グレ ~~プフノレ ~~ッ (し itrus paradiseノ、ホンカン (し itrus reticulate )、スィ ~~ト才レンン (し itrus sinensis)、力ボス (Citrus sphaerocarpa 、スタチ (し itrus s udachi)、サンポゥカン（Citrus sulcata)、タチバナ（Citrus tachibana)、ゥンシユウミカン（Citrus unshiu)、トウダイグサ科ハズ属のクロトン'ァゥブレビレイ（Croton aubreville i)、カスカリラノキ（Croton eluteria)、ァカメガシヮ（Croton japonicum)、ナンキンハゼ (Croton sebiferusノ、ノヽズ (Croton tiglium)、クロトン-ザムへンカス (し roton zambesicu s)、セリ科-ンジン属の-ンジン（Daucus carota)、キヮタ科ドリアン属のドリアン（Duri 0 zibethinus)、シソ科ナギナタコウジュ属のナギナタコウジュ（Elsholtzia ciliata)、エルシヨルトチア'ラガロサ（Elsholtzia rugulosa)、ムクロジ科リュウガン属のリュウガン（Eup horia longan)、イチヨウ科イチヨウ属のイチヨウ（Ginkgo biloba)、ヒノキ科ネズミサシ属のセィヨウ不ス (Juniperus communis)、ノヽィ不ス (Juniperus conferta)、ンュ-へフス' フォルモサナ (Juniperus formosana)、ネズ (Juniperus ngida)、セリ科マルノトウ³ r属のリガスティカム'マテリナ（Ligusticum mutellina)、クマッヅラ科イワダレソゥ属のリッピァ 'アルノ（Lippia alba)、ボウシユウボタ（Lippia citriodora)ゝリツピア'ジャバニ力（Lip pia javanica )、イワグレソゥ (Lippia nodiflora)、リツヒマノレタフロフ (Lippia maltuflor a)、シソ科ノヽッカ属のべノレ力モットミント (Mentha aquatica)、ノヽッ力 (Mentha arvensis) 、メンタ 'カナデンシス（Mentha canadensis)、ホースミント（Mentha longifolia)、セィョウノヽッ力 (Mentha piperita)、ぺ-ローヤノレミント (Mentha pulegium)、ミドリノヽッ力 (Men tha spicata)、シソ科ミクロメリァ属のミクロメリァ'カルミネア（Micromeria carminea)、ァ力テツ科ミマソプス属のミマソプス 'エレンギ（Mimusops elengi)、シソ科メボウキ属のメホウキ (Ocimum basilicum)、カンホ' ~~ノレノヽンノレ (Ocimum kinmanaoscharicum)、力メボウキ (Ocimum tenuiflorum)、セリ科セリ属のセリ (Oenanthe javanica)、タコノキ科タコノキ属 (Pandanus boninensis八ァダン (Pandanus tectorius)、コショウ科コショウ J禺のコノレドンキージョ (Piper aduncum)、キンマ (Piper betle)、フトウカズラ (Piper kadsura) 、インドナガコンヨウ (Piper longum)、カノ、 (Piper methysticum 、コンヨウ (Piper nigru m)、ジャワナガコショウ（Piper retrofractum)、スベリヒュ科スベリヒュ属のマツバボタン (Portulaca grandiflora)、スベリヒュ (Portulaca oleracea)、シソ科アキギリ属のサノレビァ 'タレべカンディ（Salvia clevelandii)、サルビア'クリプタンサ（Salvia cryptantha)、サルビア'フラクチコサ（Salvia fructicosa)、セージ（Salvia officinalis)、ォ-サルビア（Sal via sclarea)、その他、精油の原料となる植物などが挙げられる。

[0018] ジヒドロジヤスモン（CAS : 1128— 08— 01)を含む植物としては、ミカン科ミカン属のフィム (し itrus aurantifolia)、ダイタィし itrus aurantium)、へノレ； yモット (Citrus berg amia)、フンタン (Citrus grandis)、ノヽッサク (し itrus nassaku)、ョカン (し itrus iyo)、ュズ（Citrus junos)、キシュゥミカン（Citrus kinokuni) ,レモン（Citrus limon)、シトロン (し itrus medica)、ナツカン (し itrus natsuaaidai)、グレ ~~プノノレ ~~ッ (Citrus paradise )、ポンカン (Citrus reticulate)、スイートオレンシ (Citrus sinensis)、力ボス (Citrus sp haerocarpa)、スダチ（Citrus sudachi)、サンポゥカン（Citrus sulcata)、タチバナ（Citr us tachibana)、ゥンシユウミカン（Citrus unshiu)、キヨゥチクトウ科カリッサ属のカリッサ (Carissa carandas)、ォォバナカリッサ（Carissa grandiflora)、その他、精油の原料となる植物などが挙げられる。

[0019] カルバタリルァセタート（CAS : 6380— 28— 5)を含む植物としては、セリ科クミン属のクミン（Cuminum cyminum)、クマッヅラ科イワダレソゥ属のボウシユウボタ（Lippia cit riodora)、リツピア 'ンヤノ - (Lippia javanica )、イワダレソゥ (Lippia nodiflora)、リツピア'マルタフロラ（Lippia maltuflora)、シソ科イブキジヤコゥソゥ属のタイマス 'デカツサタス（Thymus decassatus)、タイマス'シピレアス（Thymus sipyleus)、タイマス'スラシカス (Thymus thracicus)、タイム (Thymus vulgaris)、タイマス ·ン³ rス (Thymus zygis )、ォミナェシ科力ノコソゥ属のカノコソゥ（Valeriana fauriei)、ッノレカノコソゥ（Valeriana flaccidissima)、セィヨウカノコソゥ（Valeriana officinalis)などが挙げられる。

[0020] グアイズレン（CAS :489-84- 9)を含む植物としてはキク科ョモギ属の-ガョモ = (Artemisia absinthium)、カヮフニンシン (Artemisia apiacea)、カヮフヨモ = (Artemis ia capillaris)、タフゴン (, Artemisia aracunculus)、ブョモ (Artemisia maritime;、ョモギ（Artemisia princeps)、ヒノキ科マオゥヒバ属のブラックビネ（Callitris calcarata)、フイトヒネ (し allitns cupressiformis)、ノヽタビ /'ンナモン (し innamomum burmannリ、クスノキ (Cinnamomum camphora)、 7ンァ (Cinnamomum cassia)、ャフ -ッケ Λ (し innamo mum japonica)、コスタ' ~~ム (し innamomum parthenoxylon 、 -ッケィ (Cinnamomum se iboldii)、セィロン二ッケィ (Cinnamomum verum)、フトモモ科フトモモ属のュゲニァ' ノンダレ-シス（Eugenia banderensis)、フゥ口ソゥ科フゥロソゥ属のフゥロソゥ（Geraniu m macrorrhizum)、ゲンノショウコ (Geranium nepalense)、フジマツモ科ソゾ属のラレンシァ ·ォブタス（Laurencia obtuse)、キク科シカギク属の力ミツレ（Matricaria chamomill a)、ァオイ科ャノネボンテンカ属のパボ-ァ 'ォドラタ（Pavonia odorata)などが挙げられる。

[0021] ジヒドロコ-フェリルアルコール（CAS : 2305— 13— 7)を含む植物としては、マツ科マツ属のァ力マツ（Pinus densiflora)、チョウセンゴヨウ（Pinus koraiensis)、ハイマツ (Pinus pumila)、ヨーロッパァカマツ（Pinus sylvestris)、マツ科ィヌカラマッ属のィヌカラマツ（Pseudolarix amabilis)などが挙げられる。

[0022] ステビオシド（CAS : 57817— 89— 7)を含む植物としては、キク科ステビア属のァマハステビア（Stevia rebaudiana)などが挙げられる。

[0023] DL—アルファ-ピレン（CAS : 2437— 95— 8)を含む植物としては、フトモモ科ユーカリ厲ナガパユーカリ (Eucalyptus amygdalina)、ギ、ンマノレノユー； ^リ (Eucalyptus cine ra)、ユーカリ (Eucalyptus globulus)、ャナ³ rユーカリ (Eucalyptus leucoxylon)、セィタ力ユーカリ（Eucalyptus regnans)、その他、精油の原料となる植物などが挙げられる。

[0024] ベルべナリン（CAS : 548- 37-8)は別名コルニン（Cornin)と呼ばれることもある化合物である。ベルべナリンを含む植物としては、ミズキ科ミズキ属のヒマラヤャマボゥシ (Cornus capitata)、ゴゼンタチノナ (Cornus canadensis)、ミズキ (Cornus contro versa;、ノヽナズ³ r (Cornus florida)、ャマボウシ (Cornus kousa)、クマノズキ (Cornu s macrophylia)、セィヨウサンンュュ (し omus mas)、サンンュュ (し ornus officinalis)、ゴマノハグサ科イワブクロ属のイワブクロ（Pentstemon frutescens)、ペンステモン'グロキ-ォアイデス (Pentstemon gloxinioides)、ペンステモン · -ティダス (Pentstemon ni tidus)、クマッヅラ科クマッヅラ属のビジョザクラ（Verbena hybrida)、クマッヅラ（Verb ena officinalis)、ノ一べナ'ぺノレビアナ (Verbena peruviana)、シュッコンノ一べナ (Ve rbena rigida)、ノ一べナ'ストリクタ (Verbena stricta)、ヒメピショザクラ (Verbena tener a)などが挙げられる。

[0025] 1—ヘプタコサノール（CAS : 2004— 39— 9)を含む植物としては、リュウゼッラン科リュウゼッラン属のァオノリュウゼッラン（Agave americana)、カンタラアサ（Agave ca ntala)、ォゥヒササノユキ (Agave filifera)、へネケン (Agave fourcroydes)、ライジン (Ag ave potatorumノ、サイザノレノ'サ (Agave sisal ana)、ササノュ³ r (Agave victonae— regina e)、ゥリ科スイカ属のコ口シントウリ（Citrullus colocynthis)、スイカ（Citrullus lanatus)、マメ科ヌスビトハギ属のデスモジゥム'ラキシフロラム（Desmodium laxiflorum)、フジ力ンゾゥ (Desmodium oldhamn)、 ,レテヌスピ、トノヽ = (Desmodium paniculatum)、ヌスヒ、、トノヽギ (Desmodium padocarpum)、クヮ科ィチシク属のォオノくィチシク (Ficus auriculata )、カンテンイタビ (Ficus awkeotsang)、ベノレガノレボダイジュ (Ficus bengalensis)、シダレカシユマノレ (Ficus benjamina)、ィチシク (Ficus carica)、コノンホダイシュ (Ficus div ersifolia)、インドゴムノキ（Ficus elastoca)、ィヌワビ（Ficus erecta)、力シヮバゴムノキ（ Ficus lyrata;、刀ンュマノレ (Ficus microcarpa)、ィタビ yズフ (Ficus oxyphylla)、ォオイタビ (Ficus pumilaノ、イン rホタ Ίンュ (Ficus religiosa)、アコゥ (Ficus superba)、ェンプトイチジク（Ficus sycomorus)、キク科メナモミ属のシゲスベッキァ 'グラブレセンス（S legesbeckia glabrescens)、メナモ (Siegesbeckia onentalis)など力举けられる。

[0026] 4—ヒドロキシクマリン（CAS : 1076— 38— 6)を含む微生物としては、ァォカビ属のぺ-シリウム ·力マンべノレティ (Penicillium camembertii)、ぺ-シリウム ·ジェンセ- (Pe nicillium jenseniリ、へ-シリウム'ノタタム (Penicillium notatum 、へ-シリウム'ロックフォルティ（Penicillium roquefortii)などが挙げられる。 4ーヒドロキシクマリンを含む植物としては、マメモドキ科ァゲラエァ属のァゲラエア · -チダ (Agelaea nitida)、アグラエア'ォブリグァ（Agelea obligua)、ァゲラエア'トリフォリア（Agelea trifolia)、マメモドキ科ビルソカルパス属のビルソカルパス'コシネアス（Byrsocarpus coccineus)、マメモドキ科コネスチス属のコネスチス.コル-カラタス（Cnestis corniculatus)、コネスチス' フェルギネア（Cnestis ferruginea)、セリ科ォォウイキヨゥ属のフェルラ'ァリゴニイ（Fer ula arrigonii)、フエノレフ 'アサホェァイダ (Ferula assafoetida)、ォォウイ = ヨウ (Ferula communis)、フエノレラ 'インボノレタラタ (Ferula involucrata)、フエノレラ 'クヒスタ-カ (Fer ula kuhistanica)、フエノレラ 'ラピドサ (Ferula lapidosa)、フエノレラ 'ラティピツナ (Ferula 1 atipinna)、フエノレフ ·ロコグフノア (Ferula leucographa)、フエノレフ ·リン =r (Ferma linkn) 、フエノレフ ·ンナイ力 (Ferula sinaica)、フエノレフ'スンガリ力 (Ferula soongarcia 、フエノレラ 'テ-エスタ (Ferula tenuiesta)、フエノレラ 'ゥガミカ (Ferula ugamica)、ミカン科へンノレーダ属のコヘンノレーダ (Ruta chalepensis)、ヘンノレーダ (Ruta graveolens)など力挙げられる。

[0027] コール酸（CAS : 81— 25— 4)は、多くの哺乳類の胆汁に含有されている。

[0028] ォレイン酸コレステリル（CAS : 303—43— 5)を含む微生物としては、マダニ（Derm acentor andersoni)など力挙げられる。

[0029] フラキシン（CAS : 524— 30— 1)を含む植物としては、力ェデ科力ェデ属のカラコ =Τカエテ (Acer aidzuense)、ォォモン (Acer amoenum)、アサノノヽカェデ（Acer argu turn)、トウカエテ (Acer buergerianum 、コブカエテ (Acer campestre)、テドリノキ (Ac er carpinifolium 、ゥリカエア (Acer crataegifolium 、ォ-モン (Acer diabolicum)、マノレノカェデ (Acer distylum)、チョウセンカラコギカェデ (Acer ginnala)、ハウチワカエケ (Acer japonica)、ィグャカェテ (Acer mono;、ト不リコノヽノカエテ (Acer negundo)、ブラック ·メーブノレ (Acer nigrum)、メグスリノキ (Acer nikoense)、テツカェデ (Acer nip ponicum)、イロノヽモ^ン (Acer palmatum 、ョ一口ッノ、カエテ (Acer platanoides)、セィヨウカン刀工テ (Acer pseudoplatanus)、ノヽナノキ (Acer pycnanthum)、ゥリノ、タカェテ (Acer rufinerve)、サトウカエテ (Acer saccharum)、コノヽゾテワカエテ、Acer sieboldia num)、ミネカエテ (Acer tschonoskii)、ォ！フノナ (Acer ukurunduense)、トノテキ科トチノキ属のシナトテノキ (Aesculus chinensis)、セィヨウトチノキ (Aesculus hippocastan um)、トチノキ（Aesculus turbinate)、モクセィ科トネリコ属のアメリカトネリコ（Fraxinus a mencana)、ンナトネリコ (Fraxinus chinensis)、セィヨウトネリコ (Fraxinus excelsior)、シマトネリコ (Fraxinus griffithii)、フラキナス'ヒンコフイラ (Fraxinus hynchophylla) ,ト不リコ (Fraxinus japonica)、ケォグモ (Fraxinus lanuginose)、ャチダモ (Fraxinus ma ndshurica)、マンナノキ (Fraxinus ornus)、フフ³ rナス '才キンフィフ (Fraxinus oxyphyll a)、シォン (Fraxinus spaethiana)、マノレノァオタモ (Fraxinus sieboldiana)、ッッン科スノキ属のローブッシュ 'ブルーベリー (Vaccinium angustifolium)、ラビットアイ'ブノレ ~"ベリ¹ ~~ (Vaccinium ashei 、ノヽィフッンュ 'フノレ ~~ヘリ ~~ (Vaccinium australeノ、ンャンヤンホ (Vaccinium bracteatum 、ウスノヤ (Vaccinium hirtum)、 /'クシノヽ、Vaccinium japonicum)、クフンベリ ~~ (Vaccinium macrocarpon)、ヒ.ノレベリ¹ ~~ (Vaccinium myrtillus )、ナツノヽゼ (Vaccinium oldhami)、ッノレコケモモ (Vaccinium oxycoccus)、イワッッジ ( Vaccinium praestans)、スノ³ r (Vaccinium smallii)、クロマメノ³ r (Vaccinium uliginosum u)、コケモモ（Vaccinium vitis- idaea)、スイカズラ科タ-ゥツギ属のォォベ-ゥツギ（W eigela florida)などが挙げられる。

ベルガプトール（CAS :486-60- 2)を含む植物としては、ミカン科ミカン属のライム (Citrus aurantifolia 、タダイ (Citrus aurantium 、へノレ刀モット (Citrus bergamia) 、ブンタン（Citrus grandis)、ハツサク（Citrus hassaku)、ィョカン（Citrus iyo)、ュズ（C itrus junos)、キシュゥミカン (Citrus kinokuni) ^レモン (Citrus limon)、シ卜ロン (Citrus medica)、ナツミカン（Citrus natsudaidai)、グレープフノレーッ（Citrus paradise)、ポンカン (Citrus reticulate)、スィ ~~トォレンン (し itrus sinensis)、ボス (Citrus sphaeroca rpa)、スダチ（Citrus sudachi)、サンポゥカン（Citrus sulcata)、タチバナ（Citrus tachi bana)、ゥンシユウミカン（Citrus unshiu)、クヮ科ドルステユア属のドルステ-ァ 'コントラジェノレノ (Dorstenia contrajerva)、ドノレステ-ァ 'エリプティカ (Dorstenia elliptica)、クヮ科イチジク属のォォバイチジク（Ficus auriculata)、カンテンイタビ（Ficus awkeots ang)、へノレ力ノレホダづンュ (Ficus bengalensis)、ンタレ σンユマノレ (Ficus benjamina) 、ィテシク (Ficus carica)、コノンタイシュ (Ficus diversifolia)、インドゴムノキ (Ficus elastoca)、ィヌワビ（Ficus erecta)、力シヮバゴムノキ（Ficus lyrata)、ガジュマル（Ficu s microcarpa)、ィタビ Jズフ (Ficus oxyphylla)、ォオイタヒ (Ficus pumila)、インドホダイジュ (Ficus religiosa)、アコゥ (Ficus superba)、エジプトイチンク (Ficus sycomorus) 、セリ科ノトプテリギゥム属のノトプテリギゥム 'フランチエティ（notopterygium franchetii )、キヨウ； yッ、 notopterygium incisium)、ノトプアリ³ rヮム 'リゾメス (notopterygium rhizo mes)などが挙げられる。

[0031] 本発明のビタミン Cトランスポーター産生促進剤には、ホオノキ、アーモンド、了マチャ、グレープフノレーッ、ジヤノヒゲ、セィヨウキズタ、サボンソゥ、ドクダミ、力ミツレ、ァセンャク、ハマメリス、マダワ、コメヌ力、スギナなどが使用可能である。これらは単独で 1 種類用いてもよぐまた、 2種類以上を組み合わせて用いることもできる。また、これらの植物は、その粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物のいずれも使用できる。

[0032] ホオノキ（Magnolia obovata)とは、モクレン科モクレン属の落葉高木で北海道から九州及び中国に分布し、山地に生え、庭園榭、公園榭建築剤などに植栽されているものである。学名 Magnolia hypoleucaを指すこともある。薬用部位の榭皮にはアルカロイドのマグノクラリン、マグノフロリン、リグナン類のマグノロール、ホオノキオールなどが含まれ、腹痛、下痢、吐き気などの症状緩和に用いられてきたものである。

[0033] アーモンド（Prunus dulcis)とは、バラ科サクラ属の落葉高木で、生育は夏季雨の少ない地域で温暖な風土に適し、現在、地中海沿岸諸国とアメリカカリフォルニア州が王産地とされている植物である。 ' 名 Prunus amygdalus、 Prunus communis^ Amygdal us dulcis ^ Amygdalus communis ^ Amygdalus sativusを旨すこともある。種子を圧搾して得られた油は乳化剤、マッサージオイル、香料、リキュールの製造、製菓などに利用されてきた。スイートアーモンドは青酸配糖体であるアミグダリンを含まな、ため、生食が可能で、バター、塩などで味付けしてナッツとして利用されてきた。

[0034] アマチヤ（Hydrangea macrophylla)とは、ユキノシタ科アジサイ属の落葉低木で、庭木や薬用として栽培されてきた植物である。植物体に甘味を呈し、砂糖の代用として利用されてきた。甘味成分としてフイロズルチン、イソフイロズルチンが明らかになっており、乾燥葉は甘茶として飲用されてきた。

[0035] グレープフルーツ（Citrus paradise)とは、ミカン科ミカン属の植物で、暖地で栽培される常緑高木である。果肉は柔らかぐ多汁で、クェン酸 1〜2%を含みやや酸味が強ぐリモニンにより苦味があり、大きさはナツミカン程度ある。肉色は品種により異なるが黄色力も紅色まである。紅色はリコピンによる。利用は、生食やジュースなどにする力大半は冷凍濃縮果汁に加工される。

[0036] ジヤノヒゲ（Ophiopogon jponicus)とは、ハナヤスリ科ハナヤスリ属のシダ植物で、北海道から九州及び中国、朝鮮半島に分布する植物である。別名リュウノヒゲ、根の膨大部はパクモンドウと呼ばれ、パクモンドウは滋養強壮、鎮咳、去痰などに利用されてきたものである。

[0037] セィヨウキズタ（Hedera helix)とは、ゥコギ科キズタ属で、ョ一口ッノ北アフリカに幅広く分布するつる植物である。別名イングリッシュ 'アイビ一などと呼ばれることもある。葉は結石症、黄疽などの治療に用いられてきた。

[0038] サボンソゥ（Saponiria officinalis)とは、ナデシコ科サボンソゥ属の植物で、ヨーロッパを原産とする多年草である。別名コモン'ソープワートと呼ばれることもある。また、学名 Silence saponaliaと表すこともある。薬用としては、葉や根茎を使用し湿疹などの皮膚病に用いられてきた。ヨーロッパでは古くから石鹼の代用として利用されてきた。

[0039] ドクダミ（Houttuynia cordata)とは、ドクダミ科ドクダミ属の植物で、本州、四国、九州、沖縛、及び台湾、中国、ヒマラヤ、ジャワなどに分布する多年草である。ドクダミの地上部の乾燥物は解熱、解毒、利尿、湿疹、消炎薬として用いられてきた。特有の臭気る。アジアでは薬用として利用されている力欧米では観賞用として栽培されることもある。

[0040] 力ミツレ（Matricaria chamomilla)とは、ヨーロッパを原産とするキク科シカギク属の 1 年草の植物である。別名カミルル、力ミレ、ゲルマン力ミツレ、ドイツ力ミツレ、力モミ一ルと呼ぶこともある。薬用を目的としてヨーロッパ各地をはじめ温暖な地帯で栽培され、薬用部位の頭花は、発汗、駆虫の目的に使用され、また力ミツレ力採られた精油はリキュールやタバコの香付け、香水、シャンプーに利用されてきた。

[0041] ァセンャク（uncalia gambir)とは、ァカネ科力ギカズラ属の植物で、マレー半島、スマトラ、ボルネィなどに分布し、東南アジア各地で栽培されるつる性常緑低木である。薬用部位として、葉や小枝を使用し、便血、尿血、血痢の緩和を目的に用いられている。また口内清涼剤の原料としても用いられている。同様の目的としてァセンャクノキ（Acacia catechu)の心材を用いることもある。

[0042] ハマメリス（Hamamelis virginiana)とは、北米東部から南部が原産とされるマンャク科マンャク属の植物である。葉は薬用茶としてインディアンによって利用されてきた歴史を持ち、下剤、痔疾に用いられてきた。葉ゃ榭皮にはハマメリスタンニンが含まれることが知られている。

[0043] マダワ（Morus alba)とは、東アジア原産のクヮ科クヮ属の植物で、別名トウグヮ、シログヮ、ホワイトマルべリーと呼ばれることもある。漢方では若い枝を柔枝、葉を柔葉、果実を柔椹子、根の皮を柔白皮と呼んでいる。柔枝はリウマチや神経痛などに、柔葉は解熱に、柔椹子は滋養強壮、貧血、養毛に、柔白皮は消炎性利尿、鎮咳、高血圧に用いられてきた。

[0044] コメヌ力（Oryza sativa)とは、イネ科イネ属の植物で日本の主食である米の糠を指す。

[0045] スギナ（Equisetum arvense)とは、トクサ科トクサ属のシダ植物で、栄養茎はスギナ、胞子茎はックシと呼ばれている。スギナとックシは同じ地下茎から出ており、春先にまずックシがのび、あとでスギナが展開する。スギナは薬用として利尿、止血、鎮咳、解熱に服用され、また、皮膚疾患、うるしかぶれなどに外用として用いられてきた。

[0046] 上記列挙した本発明より見出されたィ匕合物を含む植物及び本発明の植物は、葉、茎、芽、花、木質部、木皮部 (榭皮)等の地上部、及び、根、塊茎等の地下部、種子、榭脂等すベての部位が使用可能である。また、上記列挙した本発明により見出された化合物を含む微生物は、例えば、液体培養物、固体培養物を用いることができ、菌類の場合には、菌糸体、子実体などいずれも使用可能である。

[0047] 上記列挙した本発明により見出された化合物を含む植物、鉱物、微生物、動物は、原体、原体の加水分解物、抽出物、抽出物の加水分解物として使用可能である。また、これらの化合物は化学合成されたものであっても使用可能である。

[0048] 本発明の化合物を植物、鉱物、微生物、動物から得るための抽出方法としては、例えば、グレープフルーツの場合、グレープフルーツを乾燥させた乾燥物、その粉砕物、グレープフルーツを圧搾して得られる搾汁等を適当な溶媒で抽出し、場合によっては加水分解処理を施し、不溶部分を濾過等で取り除きこの液力溶媒を除去した後にカラムクロマトグラフィー等の通常の精製手段を用いて目的の化合物を得る方法が挙げられる。

[0049] 抽出に用いる溶媒としてはメタノール、エタノール、プロパノール、 1,3—ブチレングリコール等のアルコール類、エーテル、アセトン、酢酸ェチル、へキサン、シクロへキサン、ジクロロメタン、クロ口ホルム等の有機溶媒、水等が挙げられる。これらの溶媒は単独で用いても良ぐまた 2種以上混合して用いても良い。抽出条件は、特に限定されないが、例えば、温度は 5〜95°C、好ましくは 15〜85°Cで常温でも好適に抽出することが出来る。圧力は常圧、加圧、減圧の何れでも良い。抽出時間は選定した溶媒によっても異なるが数分〜数時間であり、反復抽出、振とう抽出、抽出時間の延長等により抽出効率を高めることができる。また、加水分解を行う場合、エステラーゼのような酵素による分解や、乳酸菌や酵母等の微生物による分解、塩酸、硫酸、酢酸、リン酸、クェン酸、乳酸、酒石酸、フマル酸、リンゴ酸等の酸による分解、水酸ィ匕ナトリウム、水酸ィ匕カリウム等のアルカリによる分解等が挙げられる。加水分解の条件は、特に限定されないが酵素や微生物を用いる場合は使用する酵素や微生物の至適温度、 pHに合わせ、通常、 10〜55°C、 pH3〜8、 5〜24時間程度、加水分解を行う。酸やアルカリを用いて加水分解を行う場合、通常、 2〜15重量％の濃度で常温〜 60°Cにて 0. 5〜24時間程度、加水分解を行う。

[0050] これらの抽出物や抽出物の加水分解物は、必要に応じて pH調整を行った後、凍結乾燥、減圧蒸留、減圧'真空乾燥、スプレードライ等の公知の方法で濃縮乾燥物を得ことが出来る。精製処理の方法については特に限定されないが、例えば、順相及び逆相クロマトグラフィーによる精製、再結晶、再沈殿、脱色処理、脱臭処理等を組み合わせて精製することができる。

[0051] 上記方法により抽出されたグレープフルーツの抽出物を含め、本発明で列挙された植物の抽出物及び本発明で列挙されたィ匕合物は、細胞を用いた解析においてビタミン Cトランスポーターの発現を顕著に促進することが確認できた。このことから、本発明のビタミン Cトランスポーター産生促進剤は、ビタミン C吸収用組成物、美白用組成物、更にコラーゲン産生用組成物として有用である。 [0052] 本発明における「ビタミン Cトランスポーター産生促進剤」とは、ナトリウム依存性ビタミン Cトランスポーター 1型（SVCT1)又は 2型（SVCT2)の!、ずれか一方あるいは両方の発現を高めるもの、また換言すれば、 SLC23A1、又は SLC23A2として表される遺伝子の、ずれか一方あるいは両方の産物の発現を高めるものを、う。

[0053] 本発明における「ビタミン C吸収促進用組成物」とは、ビタミン Cトランスポーター産生促進剤にビタミン Cあるいはその誘導体の少なくとも 1種類以上を組み合わせたものをいい、経口あるいは塗布によって摂取したビタミン C、あるいはその誘導体の標的臓器におけるビタミン C濃度が高まる組成物のことを指す。

[0054] 本発明における「ビタミン C誘導体」としては、 2 O— a—D—ダルコピラノシル一ァスコノレビン酸にカロえ、 L ァスコノレビン酸モノステアレート、 L ァスコノレビン酸モノパルミテート、 L ァスコルビン酸モノォレート等のァスコルビン酸モノアルキルエステル類、 Lーァスコルビン酸モノリン酸エステル、 Lーァスコルビン酸 2—硫酸等のァスコルビン酸モノエステル誘導体、 L ァスコルビン酸ジステアレート、 L ァスコルビン酸ジパルミテート、 L ァスコルビン酸ジォレート等のァスコルビン酸ジアルキルェステル類、 L ァスコルビン酸ジリン酸エステル等のァスコルビン酸ジエステル誘導体、 L ァスコルビン酸トリステアレート、 L ァスコルビン酸トリパルミテート、 L ァスコルビン酸トリオレート等のァスコルビン酸トリアルキルエステル類、 Lーァスコルビン酸トリリン酸エステル等のァスコルビン酸トリエステル誘導体等を挙げることができるがこれらに限定されるわけではない。塩としては、ァスコルビン酸と各種塩基との塩があげることができる。例えば、アルカリ金属塩 (例えばナトリウム塩等）、アルカリ土類金属塩 (例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩等)等が挙げることができるがこれらに限定されるわけではない。

[0055] 本発明における「美白用組成物」とは既成のシミ 'ソバカスに対する淡色化作用を示す糸且成物を指す。シミ 'ソバカスはメラニン生成が過剰となりその沈着によっておこる結果である力ビタミン Cは、メラニン生成に深く関与するチロシナーゼの阻害物質であり、また、酸ィ匕型濃色メラニン力も還元型淡色メラニンにする作用を亢進させることが知られている。臨床的に既成のシミ 'ソバカス等の色素沈着を改善することが報告されている（非特許文献 7 :臨皮 1967, Vol 21 (7) , 725— 729)。本発明の美白用組成物は、皮膚細胞におけるビタミン C濃度を高めることによりビタミン Cの美白作用を増強する組成物のことを指す。本発明の美白用組成物は、本発明のビタミン C 吸収促進用糸且成物を含むものであればよぐさらに、ビタミン c吸収促進作用を阻害しないものであれば他に添加物を添カ卩して調整することもできる。

[0056] 本発明における「コラーゲン産生用糸且成物」とは、ビタミン Cが有するコラーゲン産生促進作用をビタミン c濃度を高めることによって増強するものをいう。例えば、コラ一ゲン産生細胞が皮膚細胞の場合は、肌のうるおいを高める組成物のことを指し、コラーゲン産生細胞が骨形成細胞の場合、骨強度を増強する組成物のことを指す。本発明のコラーゲン産生用組成物は、本発明のビタミン c吸収促進用組成物を含むものであればよぐさらに、コラーゲン産生促進作用を阻害しないものであれば、他に添加物を添加して調整することもできる。

[0057] 本発明における「ダルコシダーゼ剤」とは、そのもの自身がダルコシダーゼ活性を有するもの、又はダルコシダーゼ活性を活性ィ匕させるものをいう。それ自身がダルコシダーゼ活性を有するものとして、例えば、酵母、ビフィズス菌、乳酸菌が挙げられ、更に、ストレプトコッカス属、ァスペルギルス属、ストレプトミセス属、リゾープス属、クロストリジューム属、ストレプトミセス属などの微生物由来のダルコシダーゼも使用することが可能であるが、これらに限定されるわけではない。また、ダルコシダーゼ活性を活性化させるものとして、キク科ェキナセァ属のェキナセァ（Echinacea purpurea, Echin acea angustifolia、 Echinacea pallida^ Echinacea simulata、 Echinacea paradoxa、 bcnin acea atrorubens)等を挙げることができるが（特許文献 1：特開 2005— 029546号公報）、これに限定されるわけではない。本発明のダルコシダーゼ剤は、上記素材をそのまま粉砕して用いることができ、また、上記素材の抽出物、抽出加水分解物を用いても良い。

[0058] 本発明の剤あるいは組成物は、食品、医薬品、化粧品等として使用できる。食品としては、通常の食品の他、栄養補助食品、機能性食品、健康食品、特定保健用食品等として使用しても良ぐ例えば、ジュースのような飲料に配合することもできる。

[0059] 医薬品においては、投与に関しては、有効成分を経口投与、非経口摂取の場合、直腸内投与、注射等の投与方法に適した固体又は液体の医薬用無毒性担体と混合して、慣用の医薬製剤の形態で投与することができる。形態としては、例えば、粉末、散剤、顆粒、錠剤、カプセノレ、等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、これらの製剤は常套手段により調製することが可能である。上記の医薬品用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マン- トール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレンダルコール、ヒドロキシエチレンデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ァミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤等の添加剤を適宜添加することも可能である。

[0060] 本発明の剤あるいは組成物において、選定された化合物の有効投与量は、対象者の年齢、体重、症状、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、等により、適宜選択決定されるが、例えば、経口用の場合、ステビオシドの投与量は、 1日あたり 1〜500 Omgが好ましぐ特に好ましくは 10〜： LOOOmgである。また、ビタミン Cとしては 1日あたり 10〜2000mg力子ましく、特に好ましくは 100〜1000mgである。これを 1日に数回に分けて投与しても良い。

[0061] 本発明の剤あるいは組成物において、選定された植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、乾燥物、抽出物、抽出加水分解物の有効投与量は、対象者の年齢、体重、症状、投与経路、投与スケジュール、製剤形態、素材の活性の強さ等により、適宜選択決定されるが、例えば、経口用の場合、ドクダミ抽出物の投与量は、 1日あたり 1〜50 OOOmg力好ましく、特に好ましくは 10〜： LOOOmgである。また、ビタミン Cとしては 1日あたり 10〜2000mg力 S好ましく、特に好ましくは 100〜1000mgである。これを 1日に数回に分けて投与しても良!、。

[0062] また、本発明の剤あるいは組成物は、皮膚外用として、薬事法の言う化粧品、医薬部外品、医薬品等に含まれる製品とすることができる。乳液、クリーム、ローションのようなスキンケア製品、軟膏等に用いられる。特に限定されるものではないが、その剤型は水溶液系、可溶化系、乳化系、粉末系、油液系、ゲル系、軟膏系、エアゾール系、水一油 2層系、水一油一粉末 3層系等、幅広い剤型を取り得る。

[0063] 本発明の剤あるいは組成物において、選定された化合物の皮膚外用における含有量は、症状の違いにより適宜選択される力例えば、マルビインの場合、全重量の 0. 001〜： LO重量％程度、好ましくは 0. 01〜2重量％である。また、ビタミン C誘導体として 2— O— a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸を用いた場合、全重量の 0. 001〜50重量％程度、好ましくは 0. 1〜10重量％である。これを 1〜4回 Z日に分けて塗布することももちろん差し支えな、。

[0064] 本発明の剤あるいは組成物において、選定された植物の皮膚外用における含有量は、症状の違いにより適宜選択される力例えば、グレープフルーツ抽出物の場合、全重量の 0. 001〜50重量％程度、好ましくは 0. 01〜10重量％である。また、ビタミン C誘導体として 2— 0 a D ダルコビラノシルーァスコルビン酸を用いた場合、全重量の 0. 001〜50重量⁰ /₀程度、好ましくは 0. 1〜10重量⁰ /₀である。これを 1〜4 回 Z日に分けて塗布することももちろん差し支えない。

以下に実施例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。実施例 1

[0065] (植物の抽出）

ホオノキ (Magnolia obovata)、 ~~モント (Prunus aulcis)、 7マテヤ (Hydrangea mac rophylla)、グレ ~~プノノレ ~~ッ (Citrus paradise)、ンャノヒケ (Ophiopogon jponicus)、セィヨウ =Τスタ (Hedera helix)、サボンソゥ (Saponiria officinalis)、ドクグ (Houttuynia co rdata 、力ミツレ (Matricaria chamomilla)、ァセンャク uncalia gambir)、ノヽマメリス (Ha mamelis virginiana)、マダワ (Morus alba)、コメヌ 7 (Oryza sativa)、ス³ rナ (Equisetum arvense)の乾燥物 lOOOgに 90%エタノール液 12L (リットル）を加え、 40°C、 5時間攪拌し、ろ紙によりろ液を回収した。この操作を 2回繰り返し、ろ液をエバポレーターにて減圧濃縮し、エタノール溶媒を取り除いた。その結果、ホオノキ抽出物 120. 6g 、アーモンド抽出物 150. 4g、アマチヤ抽出物 170. 9g、グレープフルーツ抽出物 12

7. 3g、ジヤノヒゲ抽出物 115. 3g、セィヨウキズタ抽出物 204. 8g、サボンソゥ抽出物 143. 7g、カボチヤ抽出物 133. 9g、力ミツレ抽出物 193. 2g、ァセンャク抽出物 16

8. 2g、ノヽマメリス抽出物 112. 0g、マダワ抽出物 103. 8g、コメヌ力抽出物 184. 7g 、スギナ抽出物 102. 7gの乾燥重量を得た。

実施例 2

[0066] (肝細胞におけるビタミン Cトランスポーター（SVCT)の産生促進活性の測定）ヒト肝癌由来 HepG2細胞 (大日本製薬株式会社製)を直径 3. 5cmのシャーレ (フアルコン社製）に 5 X 10³ cellsとなるように播種し、 10%の非働化したゥシ胎児血清（ FBS)含有 DMEM培養液 (ギブコ社製）にて、 37°C、 5%炭酸ガス存在下で 3日間培養した。 3日後、新しい培養液に置換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質であるマルビイン、コレステリルべンゾエート、ゥガフェリン、ラビフェリン、ゲラ-ルァセタート、ネロリドール、ジヒドロジヤスモン、カルバタリルァセタート、グアイズレン、ジヒドロコ-フェリルアルコール、ステビオシド、 DL—ァノレファ-ピレン、ベルべナリン、 1— ヘプタコサノール、 4ーヒドロキシクマリン、コール酸、ォレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトールは、フナコシ社より購入した。被験物質はジメチルサルフォキシド (DMSO)に溶解させ、最終濃度 100 Mとなるよう被験物質添加用の細胞に添加し、 6時間後、 TRIZOL試薬 (インビトロジェン社製)を用いて、常法に従い全 RNA を回収した。回収した全 RNAは、 First -strandcDNA Synthesis kit (アマシャムノィォサイエンス社製）を用いて cDNAに変換し、リアルタイム PCRに供した。リアルタイム PCRは、 QuantiTectSYBR Green PCRKit (キアゲン社製）に従いテンプレートを調製し、リアルタイム PCR装置（MJリサーチ社製）を用いて SVCT1、 SVC T2及びグリセルアルデヒド 3-リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH) mRNAの発現促進活性を測定した。 GAPDH遺伝子はハウスキーピング遺伝子として知られ、全ての細胞で恒常的に発現していることから、内部標準のコントロール遺伝子として広く用いられている。また、被験物質無添加（DMSO0. 1%)をコントロール群とした。 PCR用プライマー及び PCR条件を以下に示す。

<プライマー >

SVCT1用

5' -TTC TGA TTGTGC TGC TGACC— 3' (配列表配列番号 1)

5， -ATG TCA CTGTTG GCA TGAGC— 3' (配列表配列番号 2)

SVCT2用

5， -GGA ACC TCTTTG TGC TTGGA—3' (配列表配列番号 3)

5' -CCT GGG ATGGTG TTA TCCAG— 3' (配列表配列番号 4)

GAPDH 5， -CGA CCA CTTTGT CAA GCTCA—3' (配列表配列番号 5)

5' -TTC CTC TTGTGC TCT TGCTG— 3' (配列表配列番号 6) < PCRの反応条件 >

SVCT1及び SVCT2について

(i) 95。C、 15分 →(ii) 94。C、 15秒 →(iii) 55。C、 30秒 →(iv) 72。C、 30秒を 1 サイクルとして、（ii)〜(iv)を更に 35回繰り返した後、 4°Cで保存した。

GAPDHについて

(i) 95。C、 15分 →(ii) 94。C、 15秒 →(iii) 58。C、 30秒 →(iv) 72。C、 30秒を 1 サイクルとして、（ii)〜(iv)を更に 35回繰り返した後、 4°Cで保存した。

[0068] PCRプライマーの適正は、 PCR産物の融解曲線と RT— PCR産物の電気泳動により確認した。目的遺伝子の発現量は、 PCR産物の指数関数増幅領域の適当なところに閾値 (threshold)を設定し、閾値と PCR産物増幅曲線の交点から得られるサイクル数 (threshold cycle： Ct値)を算出し、評価した。各被験物質間における発現量の評価は、コントロール群である被験物質無添加（DMSO0. 1%)の SVCT1あるいは SVCT2の mRNAの Ct値を GAPDHの Ct値で割った値を 1とし、被験物質添カロ時の発現量と比較検討を行った。結果を表 1及び表 2に示す。

[0069] その結果、コントロール群と比べ、 SVCT1及び SVCT2の両方を発現促進する化合物がマルビインとコレステリルべンゾエートであり、 SVCT1のみを発現促進する化合物がステビオシド、 DL—アルファ-ピレン、ベルべナリン、 1—ヘプタコサノール、 4 ーヒドロキシクマリン、コール酸、ォレイン酸コレステリル、フラキシン、そしてべルガプトールであり、 SVCT2のみを発現促進する化合物がゥガフェリン、ラビフェリン、ゲラ二ルァセタート、ネロリドール、ジヒドロジヤスモン、カルバタリルァセタート、グアイズレン、そしてジヒドロコニフェリルアルコールであることが明らかとなった。

また、骨芽細胞において SVCT2の発現促進作用を有することが知られているデキサメサゾンを用いて本発明の化合物と活性の比較評価を試みた力デキサメサゾンは肝細胞にぉヽては SVCT2の発現促進作用は全く認められなカゝつた。

[0070] [表 1] 肝細胞におけるビタミン C トランスボ一ター（S V C T 1 ) の産生促進活性の測定

[0071] [表 2]

肝細胞におけるビタミン C トランスポーター（S V C T 2 ) の産生促進活性の測定

実施例 3

[0072] (メラノサイトにおけるビタミン Cトランスポーター（SVCT)の産生促進活性の測定）ヒト正常メラノサイト由来 NHEM細胞（クラボウ社製)を直径 3. 5cmのシャーレ (ファルコン社製）に⁵ X 10³cell_Sとなるように播種し、特注添加剤含有 254S培養液 (クラボウ社製）にて、 37°C、 5%炭酸ガス存在下で 8日間培養した。 8日後、新しい培養液に置換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質として実施例 1により抽出した植物、ホオノ = (Magnolia obovata)、アーモンド (Prunus dulcis)、アマチヤ (Hydrangea mac rophylla)、グレープフノレーッ (Citrus paradise)、ジヤノヒゲ (Ophiopogon jponicus)、セィヨウキス、タ (Hedera helix)、サボンソゥ（Saponiria officinalis)、ドクダミ（Houttuynia co rdata)、力ミツレ (Matricaria chamomilla)、ァセンャク (uncalia gambir)、ノヽマメリス (Ha mamelis virginiana)、マグヮ (Morus alba)、コメヌ力 (Oryza sativaリ、スナ (Equisetum arvense)を用いた。被験物質は 1%固形分となるように 50% 1,3—ブチレングリコール水に再溶解させ、その溶液が最終濃度 0. 5%となるように被験物質添加用の細胞に添加し、 6時間後、 TRIZOL試薬 (インビトロジヱン社製)を用いて、常法に従い全 RNAを回収した。 SVCT1、 SVCT2及び GAPDHのリアルタイム PCRを用いた発現評価は、実施例 2と同様の評価方法にて実施した。結果を表 3に示す。

[0073] その結果、コントロール群と比べ、実施例 1より抽出した植物抽出物は、 SVCT2の発現を促進することが明らかとなった。また、骨芽細胞において SVCT2の発現促進作用を有することが知られて、るデキサメサゾンはメラノサイトにおヽては SVCT2の発現促進作用は全く認められなかった。なお、本実施例にて用いたヒト正常メラノサイト由来 NHEM細胞は、 SVCT1の発現は認められなかったため、 SVCT1の発現促進活性については評価を実施できな力つた。

[0074] [表 3]

メラノサイトにおけるビタミン Cトランスポーター（S V C T 2 ) の産生促進活 14の測定

実施例 4

(メラニン生成抑制試験）

本発明で得られた植物とビタミン Cとの美白作用に関する併用効果を評価するため以下の試験によって、メラニン生成抑制活性を測定した。メラニンを生成する細胞として、マウス由来 B16—F10メラノーマ細胞を用いて 48ゥエルプレートの各ゥエルに 2 X 10³ cellsとなるように播種し、 FBSを終濃度 10%となるように添加したダルコサミン含有最少基礎培養液 (MEM)にて 5日間培養した。その後、培養液を 10%FBS、テオフィリン含有 MEMに交換し被験物質添加用の細胞とした。被験物質は、実施例 1で得られたホオノキ、アーモンド、アマチヤ、グレープフルーツ、ジヤノヒゲ、セィヨウキズタ、サボンソゥ、ドクダミを 1%固形分となるよう 50% 1, 3—ブチレングリコール水に再溶解させたものを用いた。添加濃度は、被験物質が最終濃度 0. 5%となるように、及び同時にビタミン Cが最終濃度 100 gZmlとなるように被験物質添加用の細胞に添加し、 3日間培養してメラニン生成抑制評価用の試料とした。メラニン量は、細胞をクレーパー処理により剥がし、遠心後、 1%ドデシル硫酸ナトリウム（SDS)により可溶ィ匕して 475nm、 260nmの吸光度を測定することにより求めた。メラニン生成抑制率は、 475nm、 260nmの吸光度における被験物質を添カ卩した培養液で培養した細胞の吸光度を S 、 S 被験物質を添加しない培養液で培養した細胞の吸光度

475 260、

を C 、C として次式 1により算出した。この結果を表 4に示す。表 4に示したように

475 260

、被験物質の単独添加では、メラニン生成抑制効果は認められないが、ビタミンじとの同時添カ卩により、ビタミン Cの単独に比べ明ら力にメラニン生成が抑制されていることがわかった。このことから、これらの被験物質とビタミン Cを含む組成物は、メラニン生成抑制機能を有し、美白作用を有することが明らかとなった。

[0076] [数]

式 1

メラニン生成抑制率 (％) = i— [(s 475 Zs 260 )/(c 475 Zc 260 )] χ ιοο

[0077] [表 4] メラニン生成抑制試験

実施例 5

(3次元皮膚モデルによるメラニン生成抑制試験）

本発明で得られたグレープフルーツ抽出物、ビタミン C誘導体である 2— 0 a D ダルコビラノシルーァスコルビン酸 (AA2G)、更にダルコシダーゼ活性化剤としてェキナセァ抽出物を用いた美白作用に関する併用効果を評価するため、以下の試験によってメラニン生成抑制活性を測定した。

評価系としてクラボウ社より発売されている正常ヒト由来メラノサイトを含む 3次元皮膚モデル (MEL— 300キット）を用いた。キットの説明に従！、培養を開始し、培養液及び被験物質は 2日ごとに新たなものに交換し、 10日間培養を行った。 10日後、リン酸塩緩衝液 (PBS)にて組織を洗浄後、 1. 5mlチューブに回収し、蒸留水 100 1を加えて超音波破砕した。更に、 Soluene— 350 (和光純薬社製）を 900 1カ卩え、 45 分、 100°Cに静置し、組織及びメラニンを可溶ィ匕し、不溶画分は遠心分離（10, 000 rpm、 10分)より除去した。メラニンの測定は、合成メラニン (シグマアルドリッチ社製）より検量線を作成し、 500nmの吸光度により算出した。被験物質は、実施例 1で得られたグレープフルーツを 1 %固形分となるよう 50% 1 , 3 ブチレングリコール水に再溶解させたもの（Gr)、 2 O— a—D—ダルコビラノシルーァスコルビン酸 (AA2G)、ェキナセァの葉の乾燥物を 30%エタノール水にて抽出したェキナセァ抽出液 (Ech) (ェキナセァ抽出物（固形物）を 0. 3%含有する）を用いた。 3次元皮膚モデルへの添加濃度は、 Grが最終濃度 0. 5%となるよう、あるいは同時に AA2Gが最終濃度 2%となるよう、あるいは同時に Echが 0. 2%となるよう添加し、それぞれが単独、併用の場合のメラニン生成抑制活性を評価した。その結果を図 1に示す。

図 1に示すように、グレープフルーツ抽出液（Gr)、 2— O— a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸 (AA2G)、ェキナセァ抽出液 (Ech)の!、ずれも単独では無添加のコントロール群と比較して有意差は認められなかった力 3つの併用によってメラ- ン生成抑制活性を有意に認めることが明らかとなった。

実施例 6

[0079] (ヒト皮膚における紫外線照射による炎症の抑制、色素沈着の改善試験）

1.被験者健康成人男性 10名（27〜35歳）の背部を用いて実験した。

2.検体ビタミン C誘導体である 2— 0 a D ダルコビラノシルーァスコルビン酸 (AA2G)とビタミン Cトランスポーター産生促進剤であるグレープフルーツ抽出物（ GFE)を用いて下記表 5に示す組成となるように検体を調製した。

以下、下記組成の検体を用いて評価試験を行った。

[0080] [表 5]

AA2G：林原製 2— O— a— D—ダルコビラノシル -ァスコルビン酸

GFE ：一丸フアルコス製グレープフルーツ果実エキスフアルコレックスグレープフルーツ Β中の固形分

1, 3 -BG : l, 3 ブチレングリコーノレ [0081] 3.試験方法

3. 1 炎症の抑制効果の評価背部に、検体ごとに 4 X 4cmの塗布領域を設定し、検体を 8週間塗布した。塗布量は 1回に 3mL、 1週間に約 4回、 8週間で約 32回（28 〜35回）塗布した。 8週間後に、その部位の L*a*b*表色系の a*値を測色し、さらに、 MEDの 1. 2倍の太陽紫外線を照射し、 2日後に、同部位の a*値を測色した。紫外線照射 2日後の a*値力紫外線照射前の a*値を差し引いて Δ a*値を求めた。 A a* 値が小さいほど、炎症の抑制効果が高い。

[0082] 3. 2 色素沈着の改善効果の評価

背部に検体ごとに 4 X 4cmの塗布領域を設定し、検体塗布前の L * a * b *表色系の L*値を測色した。次いで MEDの 1. 2倍の太陽紫外線を照射し、 2日後に同部位の L*値を測色した。 2日後の L*値を測色後から検体の塗布を開始した。塗布量は 1 回に 3mL、 1週間に約 4回、 8週間で約 32回（28〜35回）塗布した。紫外線照射 2、 4、 8週間後に同部位の L*値を測色した。紫外線照射 2日後及び紫外線照射 2、 4、 8週間後の L*値力も検体塗布前 (紫外線照射前)の L*値を差し引いて A L*値を求めた。 A L*値の負の値が小さいほど、色素沈着が改善されている。

[0083] 3. 3 測定機器

測色： MINOLTA製分光測色計 CM-800D

紫外線照射： SOLAR LIGHT CO.製 MODEL XPS 200

[0084] 4.測定結果

4. 1 炎症の抑制効果各検体塗布部位の Δ a*値を表 6、図 2に示す。

[0085] [表 6]

ビタミン Cトランスポーター産生促進剤である GFEのみ配合した比較例 2の Δ a*値は、何も配合していない比較例 3の Δ a*値とほぼ同じ値である。従って、 GFEのみでは抗炎症効果が認められないことがわ力つた。一方、 GFEとビタミン C誘導体である AA2Gを併用した実施例 6は比較例 3と比べて、有意な抗炎症効果を示した。そして、実施例 6の Δ a*値は AA2Gのみ配合した比較例 1の Δ a*値の 60%に低減している。 GFE自体の抗炎症効果は認められないので、 GFEと AA2Gを併用した実施例 6 が AA2Gを単独で配合した比較例 1と比べて優れた抗炎症効果を示すことは、予測できな、顕著な効果であると、える。

[0087] 4. 2色素沈着の改善効果

各検体塗布部位の A L*値を表 7、図 3に示す。

[0088] [表 7]

[0089] 紫外線照射 2週間後にお、て、ビタミン Cトランスポーター産生促進剤である GFE のみ配合した比較例 2の A L*値は、何も配合していない比較例 3の A L*値よりも負の値が大きくなつている。従って、 GFEのみでは色素沈着改善効果が認められないことがわ力つた。一方、 GFEとビタミン C誘導体である AA2Gを併用した実施例 6は比較例 3と比べて、有意な色素沈着改善効果を示した。そして、実施例 6の A L*値は A A2Gのみ配合した比較例 1の A L*値の負の値の 60%に低減しており、比較例 1と比べて有意な色素沈着改善効果を示した。 GFE自体の色素沈着改善効果は認められな、ので、 GFEと AA2Gを併用した実施例 6が AA2Gを単独で配合した比較例 1 と比べて優れた色素沈着改善効果を示すことは、予測できな、顕著な効果であるといえる。紫外線照射 4週間後においても、紫外線照射 2週間後とほぼ同様の傾向が認められた。紫外線照射 8週間後においても、実施例 6の色素沈着改善効果が最も優れていた。以下に処方例を挙げて、具体的に説明するが、これに限定されるものではない。

実施例 7

[0090] (グレープフルーツ抽出物によるビタミン Cトランスポーター（SVCT)の産生促進活性の測定）

マウスメラノーマ B16—F10細胞（大日本製薬株式会社製）を直径 3. 5cmのシャーレ（ファルコン社製）に 5ラ 10³ cellsとなるように播種し、 10%の非働化したゥシ胎児血清 (FBS)含有 DMEM培養液 (ギブコ社製）にて、 37、 5%炭酸ガス存在下で培養した。 3日間培養の後、新しい培地に置換し被験物質であるグレープフルーツ（ Citrus paradise)抽出物を培地中の最終濃度として 0.6, 1.8, 6, 18, 60, 180 μ g/mlとなるように添加し、 6時間後に TRIZOL試薬 (インビトロジェン社製)を用いて常法に従ヽ全 RNAを回収した。グレープフルーツ抽出物として実施例 6で用いた一丸フアルコス製グレープフルーツ果実エキスフアルコレックスグレープフルーツ B を添カ卩した。本グレープフノレーッ抽出物は、グレープフノレーッ citrus paradisi Macfa dyen(Rutaceae)の生の果実 5kgに 1, 3—ブチレングリコールを加えて浸漬し、ろ過し、このろ液 20kgに精製水 20kgを加えて混和し、ろ過することにより得られるものである。グレープフルーツ抽出物の濃度は固形物濃度に換算するとグレープフルーツ抽出液中 0. 6% (6mg/mL)である。

回収した全 RNAはリアルタイム定量ワンステップ RT— PCRに供した。 QuantiTec t SYBR Green PCR Kit (キアゲン社製）に従いテンプレートを調製し、 PCR装置（MJリサーチ社製）を用いて SVCT2及びダリセルアルデヒド 3—リン酸デヒドロゲナーゼ（GAPDH) mRNAの発現促進活性を測定した。 PCR用プライマー及び、 PCR 条件を以下に示す。

[0091] <プライマー >

SVCT2用

Mm_Slc23a2_l_SG QuantiTect Primer Assay (キアゲン社製）

GAPDH用

5， -AAC TTT GGC ATT GTG GAA GG— 3' (配列表配列番号 7) 5， -AC A CAT TGG GGG TAG GAA CA—3' (配列表配列番号 8) [0092] < PCRの反応条件 >

(i) 50。C、30分 →(ii) 95。C、 15分 →(iii) 94。C、 15秒 →(iv) 55。C、 30秒 →(v ) 72°C、 30秒を 1サイクルとして、（ii)〜(v)を更に 40回繰り返した後、 4°Cで保存した。

[0093] PCRプライマーの適正は、 PCR産物の融解曲線と RT— PCR産物の電気泳動により確認した。目的遺伝子の発現量は、 PCR産物の指数関数増幅領域の適当なところに閾値を設定し、閾値と PCR産物増幅曲線の交点カゝら得られるサイクル数 (Ct値)から、以下の式にて算出し、内部標準である GAPDHの発現量に対する数値で示した

[0094] [数]

式 2

1^^発現量丫=2—⁽ひ）

[数]

式 3

SVCT2の発現量 =Y /Υ

(SVCT2) (GAPDH)

[0095] 発現量の比較評価には、被験物質無添カ卩のコントロール群の SVCT2の発現量を 1として相対値による比較を行った。結果を図 4に示す。その結果、グレープフルーツ抽出物の濃度に依存して SVCT2の発現が促進されることが明ら力となった。 PCRの原理上 Ct値の計測値から生じる誤差を考慮し、さらに実施例 3において SVCT産生促進効果が 1. 4倍以上認められた植物抽出物は、実施例 4におけるメラニン生成抑制試験においてビタミン Cと同時添加することでビタミン C単独に比べてメラニン抑制効果の増強作用を有していたことから、コントロール群に比べて 1. 4倍以上 SVCTの発現量が増加して!/、るものにっ、ては SVCT促進効果があると判断した。その結果、マウスメラノーマ B16—F10細胞においてはグレープフルーツ抽出物 18 μ g/ml 以上で SVCT2の発現促進効果があることが明ら力となった。

実施例 8

[0096] (化合物によるビタミン Cトランスポーター（SVCT)の産生促進活性の測定）

ヒト大腸がん由来 Caco2細胞 (大日本製薬株式会社製)を直径 3. 5cmのシャーレに 5 X 10³ cellsとなるように播種し、 10%の非働化したゥシ胎児血清 (FBS)含有 D MEM培養液にて、 37°C、 5%炭酸ガス存在下で培養した。 3日間培養の後、新しい培地に置換し被験物質であるステビオシド（CAS : 57817-89- 7) ,ゲラ-ルァセタート（CAS : 105— 87— 3)、ネロリドール（CAS : 7212— 44— 4)、ジヒドロジヤスモン（CAS : 1128— 08— 01)、マルビイン（CAS :465— 92— 9)、ベルべナリン（CA S： 548— 37— 8)、フラキシン (CAS： 524— 30— 1) )、ベルガプトール (CAS： 486 — 60— 2)を培地中の最終濃度として 100 /z Mとなるように添加した。被験物質添カロ力も 6時間後に TRIZOL試薬を用いて常法に従い全 RNAを回収した。回収した全 R NAはリアルタイム定量ワンステップ RT—PCRに供した。 QuantiTect SYBR Gree n PCR Kit (キアゲン社製）に従いテンプレートを調製し、 PCR装置 (MJリサーチ社製）を用いて SVCT1、 SVCT2及びグリセルアルデヒド 3—リン酸デヒドロゲナーゼ（ GAPDH) mRNAの発現促進活性を測定した。 PCR用プライマーは実施例 2で使用したものと同様のものを用いた。 PCR条件を以下に示す。

[0097] < PCRの反応条件 >

SVCT1及て SVCT2につヽて

(i) 50。C、 30分→ (ii) 95。C、 15分 →(iii) 94。C、 15秒

→(iv) 55°C、 30秒 →(v) 72°C、 30秒を 1サイクルとして、（ii)〜（v)を更に 40回繰り返した後、 4°Cで保存した。

GAPDHについて

(i) 50。C、 30分→ (ii) 95。C、 15分 →(iii) 94。C、 15秒 →(iv) 58。C、 30秒 →(v) 72°C、 30秒を 1サイクルとして、（ii)〜(iv)を更に 35回繰り返した後、 4°Cで保存した。

[0098] PCRプライマーの適正は、 PCR産物の融解曲線と RT— PCR産物の電気泳動により確認し、実施例 7と同様の算出方法で目的遺伝子の発現量の比較を行った。結果を表 8に示す。実施例 7と同様にコントロール群に比べて 1. 4倍以上 SVCTの発現量が増加しているものについては SVCT促進効果があるとすると、 SVCT1のみを発現促進する化合物はステビオシド、ゲラ-ルァセタート、ジヒドロジヤスモン、ベルべナリン、フラキシン、ベルガプトールであり、 SVCT2のみを発現促進する化合物はマルビインであった。ネロリドールは SVCT1, SVCT2の両方を発現促進することが明らかとなつた。

[0099] [表 8] /GAPDH (対コントロール比）

被験物質

SVCT1 SVCT2

ステビオシド 1.56 1.09

ゲラニルァセタート 1.57 1.12

ネロリドール 1.82 1.97

ジヒドロジヤスモン 2.03 1.33

マノレビイン 1.39 1.62

ベルべナリン 1.52 1.00

フラキシン 2.28 1.17

ベルガプトール 2.19 1.28 実施例 9

[0100] (三次元肝細胞モデルを用いたィ匕合物によるビタミン Cトランスポーター（SVCT)の産生促進活性の測定）

生体内に近、環境での評価を行うために中空糸内でヒト肝細胞を三次元培養したヒト三次元肝細胞モデル TESTLIVER™ (東洋紡社製)を用いた。ヒト三次元肝細胞モデルは 12ゥエルプレート中でヒト肝細胞無血清培地 (東洋紡社製）にて、 37°C、 5%炭酸ガス存在下に設置した振とう機上で振とう培養を行った。 3日間振とう培養の後、新しい培地に置換し被験物質であるステビオシド、ゲラニルァセタート、ネロリドール、ジヒドロジヤスモン、マルビイン、ベルべナリン、フラキシン、ベルガプトールを培地中の最終濃度として 100 Mとなるように添加した。培地の交換は 24時間毎に行い、その都度被験物質を添加した。被験物質添加から 3日後に TRIZOL試薬を用 Vヽて常法に従!、全 RNAを回収した。 SVCT2および GAPDHのリアルタイム PCRを用いた発現評価は、実施例 8と同様の評価方法にて実施した。結果を表 9に示す。実施例 7と同様にコントロール群に比べて 1. 4倍以上 SVCTの発現量が増加しているものについては SVCT促進効果があるとすると、 SVCT1のみを発現促進する化合物はゲラニルァセタート、ベルべナリンであり、 SVCT2のみを発現促進する化合物はネロリドールであった。 SVCT1, SVCT2の両方を発現促進する化合物はステビオシド、ジヒドロジヤスモン、マルビイン、フラキシン、ベルガプトールであることが明らかとなつた。

[0101] [表 9] /GAPDH (対コントロール比）被験物質

SVCT1 SVCT2

ステビオシド 1.60 1.74

ゲラニルァセタート 1.76 1.30

ネロリドール 1.37 1.54

ジヒドロジヤスモン 2.78 1.66

マルビイン 1.53 1.70

ベルべナリン 2.73 1.00

フラキシン 1.80 1.51

ベルガプトール 1.77 1.43 実施例 10

(三次元皮膚モデルによるメラニン生成抑制試験 (フォンタナ ·マッソン染色)）三次元皮膚モデル MelanoDerm (クラボウ社製）において、グレープフルーツ抽出物とビタミン Cを同時添加した際のメラニン生成抑制効果の評価及び、メラニン細胞の形態的観察を行うためフォンタナ 'マッソン染色によるメラニンの染色を行った。また、 α -ダルコシダーゼの活性を上昇させ、 2 - 0 - a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸を速やかに活性型 L ァスコルビン酸に変換させる作用を有するェキナセァ抽出物併用時についても評価を行った。三次元皮膚モデルはキットの説明に従い、培養を開始し、培地及び被験物質は 2日ごとに新たなものに交換し、被験物質は実施例 5で用いたものと同様の組み合わせで用いた。但し、グレープフルーツ抽出物は実施例 7で用いた抽出物を用いた。培養 10日目に顕微鏡による形態観察を行い、 PBSにて組織を洗浄後、常法に従いフォンタナ 'マッソン染色を行った。結果を図 5, 6に示す。

その結果、 30 μ g/mLのグレープフルーツ抽出物（GFE)、 6 μ gZmLのェキナセァ抽出物 (ECE)の単独及び両者の組み合わせではメラノサイトは活性ィ匕して！/、た力 2質量⁰ /₀の 2— O— a—D—ダルコビラノシルーァスコルビン酸 (AA2G)をカロえることでメラニン細胞は収縮し不活性ィ匕することが明らかになった。さらに、 30 μ _& mLのグレープフルーツ抽出物（GFE)と併用することでメラニン産生抑制活性が促進されることが明ら力となった。また、 2質量％の 2— O— a—D—ダルコビラノシルーァスコルビン酸 (AA2G)、 30 μ gZmLのグレープフルーツ抽出物（GFE)、 6 gZ mLのェキナセァ抽出物 (ECE)の三種類を併用することで最もメラニン生成抑制活性が高まることが明ら力となった。グレープフルーツ抽出物（GFE)は実施例 7に記載したグレープフルーツ抽出液を用いて添加した。ェキナセァ抽出物は実施例 5に記載したェキナセァ抽出液を用いて添加した。

実施例 11

(ビタミン Cの細胞内取り込み量の測定）

マウスメラノーマ B16— F10細胞およびヒト大腸がん由来 Caco2細胞をそれぞれ直径 10cmのシャーレに 1 X 10⁶cellsとなるように播種し、 10%の非働化したゥシ胎児血清 (FBS)含有 DMEM培養液にて、 37°C、 5%炭酸ガス存在下で培養した。マウスメラノーマ B16— F10細胞は培養 3日後のものを、ヒト大腸がん由来 Caco2細胞は培養 1週間後のものをビタミン C取り込み試験用の細胞とした。実施例 7に記載したグレープフルーツ抽出液を用いて、グレープフルーツ抽出物を培養液中の最終濃度として 30 μ gZmlとなるように添カ卩し 24時間後の細胞をビタミン C取り込み試験に用いた。培養液をインキュベーション用バッファー（15mM Hepes, 135mM NaCl, 5 mM KCl, 1. 8mM CaCl , 0. 8mM MgCl )で 2回洗浄を行った後、 37。C、 5%

2 2

炭酸ガス存在下で 1時間のプレインキュベーションを行った。新し、インキュベーション用バッファーに置換しビタミン Cとしてァスコルビン酸（シグマ社製） 5mMとなる様に添カロしマウスメラノーマ B16— F10細胞は 3時間、ヒト大腸がん由来 Caco2細胞は 1 時間インキュベーションの後、氷冷してお!、た PBSで 3回洗浄し反応を停止させた。 ImM EDTAを含む 70%MeOH 1mlにァスコルビン酸を溶出させた後、還元剤として 10mMジチオトレイトール (和光純薬工業株式会社製)を加え 10分間反応させて還元型ァスコルビン酸に変換し、 0. 2 mフィルター（アドバンテック社製）でフィルターろ過したものを分析に用いた。分析には高速液体クロマトグラフ (HPLC)を用い、カラムは L—カラム ODS (4. 6mm X 250mm) (化学物質評価研究機構製）、移動層には A層 (10mMテトラプチルアンモ-ゥムヒドロキシド溶液 ZlOmMリン酸二水素カリウム Z0. 5%メタノール PH = 6)と B層（50%メタノール）とを用いた。溶離条件として 0〜15分間は A層のみ、 15〜25分間は A層から B層へ、 25〜35分間は B層力 A層へとグラジェントをかけ、 35〜60分間は A層のみとした。この条件での還元型ァスコルビン酸の溶出時間は 21分であった。この時のピーク高さより、検量線を用いて細胞内のァスコルビン酸濃度を算出し、ビタミン Cの細胞内取り込み量とした。同時に細胞用タンパク質抽出試薬 (PIERCE社製)を用いて細胞力ゝらのタンパク質抽出を行った。たんぱく質定量キットとして DC Protein Assay (BIO— RAD)を用いて Lowry法により計測したタンパク質量から、細胞内へのァスコルビン酸取り込み量を補正し、ァスコルビン酸量（ mol) /タンパク質量 (mg protein)として表した。結果を図 7〜10に示す。その結果、グレープフルーツ抽出物を 30 g/ml添加することによって、細胞内へのビタミン Cの取り込み量はマウスメラノーマ B16—F10細胞では約 2. 4倍、ヒト大腸がん由来 Caco2細胞では約 1. 5倍にまで増加することが明らカゝになった。

実施例 12

[0104] (グレープフルーツ抽出物中のベルガプトールの定量分析）

実施例 6, 7, 10, 11で用いたグレープフルーツ抽出物（一丸フアルコス製グレープフルーツ果実エキスフアルコレックスグレープフルーツ B中の固形分）に含まれるべルガプトールの濃度を HPLC法により分析した。その結果、グレープフルーツ抽出物中のベルガプトールは 0. 015質量％であった。

HPLC分析条件

(カラム： Capcell pak C18 4.6mm X 250mm (SHISEIDO)

カラム温度： 40°C

検出器： UV 315nm

溶離液：（A) 5%酢酸水溶液：（B)ァセトニトリル = 75 : 25

流速： 1. OmLZ分、

注入量： 20 レ

試料希釈溶媒： DMSOZエタノール = 2 : 18 (VZV) )。

ベルガプトール溶出時間： 9. 6分

実施例 13

[0105] (化合物群のメラニン生成抑制試験）

本発明で得られた化合物とビタミン Cとの美白作用に関する併用効果を評価するため以下の試験によって、メラニン生成抑制活性を測定した。

メラニンを生成する細胞として、マウス由来 B16—F10メラノーマ細胞を用いて 6ゥエルプレートの各ゥエルに 1 X 10⁵ cellsとなるように播種し、 DMEM + 10% FBS の培養液 (ギブコネ土製）にて 24時間培養し細胞を接着させた。その後、 DMEM + 10 % FBSにて培養液を置換し、 ΙΟΟηΜとなるよう [Nle4, D - Phe7] a— MSH (シダマアルドリッチ社製)を添加してメラニン産生を誘導した。同時に被験物質としてゥガフェリンは 25 M (0. l %DMSOを含有する）、マルビイン、ラビフェリンは 50 μ Μ (0. l %DMSOを含有する）、フラキシンは 100 /ζ Μ (0. l %DMSOを含有する）、コントロールは 0. l %DMSOとなるよう添カ卩した。被験物質単独群は、その後 48時間インキュベーションしてメラニン生成抑制評価を行った。被験物質とビタミン Cの併用群はその後、 24時間おきにビタミン C (シグマアルドリッチ社製)最終濃度 4mMを 2 回添加し (合計すると 8mM添加）、メラニン生成抑制評価を行った。

メラニン量の測定は、細胞をトリプシン処理により剥がし、 PBS洗浄を 2回繰り返し、 l %TritonX (和光純薬社製）により細胞を可溶ィ匕して 475nmの吸光度をすることにより行った。メラニン量は合成メラニン (シグマアルドリッチ社製)を用いて検量線を作成し、算出した。被験物質とビタミン Cによる併用効果は次式 4のメラニン生成抑制率より計算した。

〔式 4〕

併用効果によるメラニン生成抑制率 (％) = ( 1 ビタミン C併用時のメラニン量 Z被験物質単独時のメラニン量） X 100

但し、コントロールの被験物質単独時におけるメラニン量値とは、被験物質の溶解に用いた溶媒である DMSOを最終濃度 0. 1 %添加した時のメラニン量を意味し、コントロールのビタミン C併用時におけるメラニン量値とは、 0. 1 %DMS0とビタミン Cを併用した時のメラニン量を意味する。また、コントロールの併用効果によるメラニン生成抑制率とは、 0. 1 %DMS0を単独添カ卩した時のメラニン量に対する 0. 1 %DMS0とビタミン Cの併用添カ卩時のメラニン量をメラニン生成抑制率として表した値である。

この結果を表 10に示す。 0. 1 %DMS0とビタミン Cを併用添カ卩した場合、 0. 1 %DM SO単独添加した場合のメラニン量に対するメラニン生成抑制率は 61. 4%であった iS マルビイン、ゥガフェリン、ラビフェリン、フラキシンとビタミン cを併用するとメラ- ン生成抑制率がそれぞれ 69. 7%、 64. 6%、 68. 1%、 68. 4%に向上する。これは、 0. 1%DMS0とビタミン Cを併用添カ卩のデータ及びマルビイン、ゥガフェリン、ラピフエリン、フラキシン単独のデータからは予測できな、顕著な相乗効果である。

この相乗効果はマルビイン、ゥガフェリン、ラビフェリン、フラキシンの SVCT産生促進効果によるものと推測できる。

[0107] [表 10] マルビイン、ゥガフェリン、ラビフェリン、フラキシンのメラニン生成抑制試験

実施例 14

[0108] (化合物群のコラーゲン産生評価試験）

本発明で得られた化合物とビタミン Cとのコラーゲン産生能 (コラーゲン合成促進能ともいう）に関する併用効果を評価するため以下の試験によって、コラーゲン産生促進作用を測定した。正常ヒト皮膚由来繊維芽細胞である NHDF細胞 (Cambrex Bi o Science Walkersville社製）を 24穴マルチプレート（ファルコン社製）に 5 X 10⁴ cellsZwellとなるように播種し、 DMEM+ 10% FBSの培養液（ギブコネ土製）にて、 37°C、 5%炭酸ガス存在下で 3日間培養した。 FBM (serum free)の培養液（三光純薬会製）に置換して、被験物質としてマルビインは 50 M、ステビオシド、ベルガプトールは 100 M、コントロールは 0. l%DMSOを添カ卩し、 24時間のプレインキュペートした。プレインキュベーション後、 FBM培養液で細胞を洗浄し、 FBM培養液に置換後、ビタミン C (シグマアルドリッチ社製)を最終濃度 10 Mとなるように培養液に添加し、 1時間処理して細胞内にビタミン Cを取り込ませた。その後、 FBM培養液で細胞を洗浄し、 FBM培養液に置換して 24時間後、各ゥエル全てについて lmlの c onditioned medium (CM)を回収し type 1 collagen測定の試料とした。前記回収した CMにつ!/、て、 typel collagenC- peptide (PIP) EIA kit (タカラ社製）にてコラーゲン量を測定した (検出限界濃度； 10ngZml)。抗 PIPモノクローナル抗体プレート（96 well)にペルォキシダーゼ標識抗 PIPモノクローナル抗体 100 μ 1を各 we 11にカロえ、次にあらかじめ 1%牛血清アルブミン含有 PBSで 20倍希釈した CMを 20 1ずつ添カ卩し、 37°C、 3時間インキュベートした。その後、反応液を捨て、 200 1 PBSで 4回洗浄後、基質の TMBZ (3, 3，， 5, 5，ーテトラメチルベンジジン）を 100 1ずつ加え室温で 15分反応させた。反応終了には 1N硫酸を 100 1加え、測定は波長 450 nmの吸光度を測定した。

マルビインにつ、ての測定結果を表 11に示す。マルビインはビタミン C併用時において、コントロールと比較してコラーゲン産生促進作用が認められた。

ステビオシド、ベルガプトールの結果を表 12に示す。ステビオシド、ベルガプトールはビタミン C併用時において、コントロールと比較してコラーゲン産生促進作用が認められた。

[表 11] マルビィンのコラーゲン産生促進作用

被験物質単独時ビタミン C併用時比率

(ng コラーゲン (ng コラーゲン (ビタミン C併用時/ /10⁵cells) /10⁵cells) 被験物質単独時）コントロール

1440 2242 1. 56

(0.脚 so)

マノレビィン

1510 2567 1. 70

(50 μ Μ) [0110] [表 12] ステビオシド、ベルガプトールのコラーゲン産生促進作用

[0111] 処方例 1

[錠剤の製造]

ドクダミ抽出物及びビタミン Cを用いて常法に従って、下記組成の錠剤を製造した。

(組成） (配合；重量％) ドクダミ抽出物 1 4. 39

才リーブ葉抽出加水分解物 4. 66

シスチン 1 6. 00

ナイァシンアミド 1 . 2

ビタミン C 24. 45

セルロース 26. 80

でん, ん 4. 00

食用卵殻粉 6. 00

ショ糖エステル 2. 50

[0112] 処方例 2

[ジュースの製造]

ステビオシドを含むアマハステビア抽出物及びビタミン Cを用いて常法に従って、下記組成のジュースを製造した。 (組成）（配合；重量％)

果糖ブトゥ糖液糖 15.00

クェン酸 10.40

ビタミン C 0.50

香料 0.02

色素 0.10

アマハステビア抽出物 10.00

精製水 63.98 処方例 3

[軟膏の製造]

マルビイン及びビタミン Cを用いて常法に従って、下記組成の軟膏を製造した。

(組成）（配合；重量％) 白色ワセリン 24.00

プロピレングリコール 12.00

ステアリルアルコール 20.00

パラ才キシ安息香酸メチル 0.05

ビタミン C 2.00

マルビイン 2.00

香料 0.10

精製水 39.85 処方例 4

[化粧水の製造]

グレープフルーツ抽出物、 2-0- a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸 (AA 2G)、ェキナセァ抽出物を用いて常法に従って、下記組成の化粧水を製造した。

(組成） (配合；重量％)

1， 3—ブチレングリコール 5. 00

エタノール 4. 50

グリセリン 10. 00

ェキナセァ抽出物 0. 50

A A 2 G 2. 00

グレープフルーツ抽出物 0. 50

ジプロピレングリコール 2. 00

グリチルリチン酸ジカリウム 0. 10

水酸化カリウム 0. 40

精製水 75. 0

[0115] 処方例 5

[シートマスクの製造]

グレープフルーツ抽出物、 2-0- a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸 (AA 2G)、ェキナセァ抽出物を用いて常法に従って、下記組成のシートマスクを製造した

(組成） (配合；重量％)

1， 3—ブチレングリコ一ル 6. 00

エタノール 3. 50

グリセリン 5. 00

A A 2 G 2. 00

スクレロチウムガ厶 0. 30

ォリーブ葉抽出加水分解物 1 . 00

ェキナセァ抽出物 0. 20

クェン酸ナトリウム 0. 20

クェン酸 0. 02

グレープフルーツ抽出物 0. 5

シスチン 0. 08

カルボキシメチルセルロース 0. 30

水酸化カリウム 0. 40

精製水 80. 50

[0116] 処方例 6

し液の製造] グレープフルーツ抽出物、 2-0- a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸 (AA 2G)、ェキナセァ抽出物を用いて常法に従って、下記組成の乳液を製造した。

(組成） (配合；重量％)

A A 2 G 2. 00

水酸化カリウム 0. 38

グリチルリチン 2カリウム 0. 10

キサンタンガム 0. 14

アル力リゲネス産生多糖体 0. 07

グリセリン 2. 00

メチルグリコ一ル 3. 00

ペンチレングリコ一ル 2. 00

レシチン 1 . 00

バチルアルコール 0. 10

ジメチコン 1 . 50

エタノール 4. 50

ェキナセァ抽出物 0. 20

ホホバ葉抽出物 0. 10

ォリーブ葉抽出加水分解物 1 . 00

グレープフルーツ抽出物 0. 50

シスチン 0. 01

クェン酸 0. 02

クェン酸ナトリウム 0. 15

精製水 81 . 23 処方例 7

[化粧水の製造]

ゲラ-ルァセタート、ネロリドール、ジヒドロジヤスモン、ベルカプトール、 2— 0— a —D—ダルコビラノシル—ァスコルビン酸 (AA2G)、ェキナセァ抽出物を用いて常法に従って、下記組成の化粧水を製造した。 (組成） (配合；重量％)

1， 3—ブチレングリコール 5. 00

エタノール 4. 50

グリセリン 10. 00

ェキナセァ抽出物 0. 50

A A 2 G 2. 00

ゲラニルァセタ一卜 0. 01

ネ口リドール 0. 01

ジヒドロジヤスモン 0. 01

ベル力プトール 0. 01

ジプロピレングリコ一ル 2. 00

グリチルリチン酸ジカリウ厶 0. 10

水酸化力リウ厶 0. 40

精製水残余産業上の利用可能性

本発明のビタミン Cトランスポーター産生促進剤によれば、細胞を用いた解析にお V、て SVCT1及び Z又は SVCT2の mRNAの発現を顕著に促進することができ、これを美白用組成物又はコラーゲン合成促進用組成物として利用することができる。

Claims

請求の範囲

[I] マルビイン、コレステリルべンゾエート、ゥガフェリン、ラビフェリン、ゲラ-ルァセタート

、ネロリドール、ジヒドロジヤスモン、カルバタリルァセタート、グアイズレン、ジヒドロコニフェリルアルコール、ステビオシド、 DL—アルファ-ピレン、ベルべナリン、 1—ヘプタコサノール、 4ーヒドロキシクマリン、コール酸、ォレイン酸コレステリル、フラキシン、ベルガプトール力なる化合物群より選択される少なくとも 1種以上を含有することを特徴とするビタミン Cトランスポーター産生促進剤。

[2] 請求項 1記載の!/ヽずれかの化合物を含む植物、動物、鉱物、微生物の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出物の加水分解物を含むビタミン Cトランスポーター産生促進剤

[3] 請求項 1又は 2記載のビタミン Cトランスポーター産生促進剤と、ビタミン Cあるいはビタミン C誘導体とを組合せてなるビタミン C吸収促進用組成物。

[4] ビタミン C誘導体力 2-0- a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸である請求項 3に記載のビタミン C吸収促進用組成物。

[5] 請求項 3又は 4記載のビタミン C吸収促進用組成物を含む美白用組成物。

[6] 請求項 3又は 4記載のビタミン C吸収促進用組成物を含むコラーゲン合成促進用組成物。

[7] ホオノキ、アーモンド、アマチヤ、グレープフノレーッ、ジヤノヒゲ、セィヨウキズタ、サボンソゥ、ドクダミ、力ミツレ、ァセンャク、ハマメリス、マダワ、コメヌ力、スギナからなる群より選択される少なくとも 1種類以上の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出物の加水分解物を含有することを特徴とするビタミン Cトランスポーター産生促進剤。

[8] 請求項 7記載のビタミン Cトランスポーター産生促進剤と、ビタミン Cあるいはビタミン C 誘導体とを組合せてなることを特徴とするビタミン C吸収促進用組成物。

[9] ビタミン C誘導体力 2-0- a—D—ダルコビラノシル一ァスコルビン酸である請求項 8に記載のビタミン C吸収促進用組成物。

[10] 請求項 8又は 9記載のビタミン C吸収促進用組成物を含むことを特徴とする美白用組成物。

[II] 請求項 8又は 9記載のビタミン C吸収促進用組成物を含むことを特徴とするコラーゲン合成促進用組成物。

[12] 請求項 3、 4、 8又は 9記載のビタミン C吸収促進用組成物及びダルコシダーゼ剤を含有することを特徴とする美白用組成物。

[13] ダルコシダーゼ剤がェキナセァ、酵母、ビフィズス菌、乳酸菌からなる群より選択される少なくとも 1種類以上の粉砕物、その抽出物、あるいは抽出加水分解物である請求項 12記載の美白用組成物。