JP5101769B2 - 生体の酸化防止または予防剤 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、生体の酸化防止または予防剤に関し、特に食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等に配合して活性酸素消去酵素の活性を促進することにより皮膚をはじめとする生体の酸化傷害や老化にその有効性を発揮する生体の酸化防止または予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内には活性酸素消去酵素が存在しており、その能力を超える活性酸素が発生しないかぎり活性酸素の傷害から皮膚細胞を防衛している。ところが、皮膚細胞内活性酸素消去酵素の活性は加齢とともに低下することが知られており、活性酸素による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。また、皮膚以外の臓器においても、その活性酸素消去能を越える活性酸素に曝されたとき、機能低下が起こり老化してゆくと考えられる。そこで、活性酸素による傷害からの防御を目的として特開平９−１１８６３０や特開平９−２０８４８４などのように活性酸素消去剤や抗酸化剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質などの活性酸素消去剤や抗酸化剤を配合した食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等が開発されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素は安定性に問題があり、活性酸素消去剤や抗酸化剤は、その効果が充分でないものが多いため、安定性に優れ、効果の高い生体の酸化防止または予防剤が求められている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
このような事情により、本発明者らは活性酸素による傷害からの防御作用に優れた内用および外用剤を得るために鋭意検討した結果、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの中から一種または二種以上選ばれる抽出物が、安定かつ細胞が本来持っている活性酸素消去酵素の活性を高めることにより優れた生体の酸化防止または予防作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
本発明で用いられる生体の酸化防止または予防剤は、上記の通り皮膚をはじめとする生体の細胞が持つ活性酸素消去酵素の活性を高めることを目的としたものである。さらに詳しくは、酸化防止とは紫外線や加齢などにより弱まった活性酸素消去酵素の活性を高めることで、細胞の酸化を受け難くすることを意味している。また、酸化予防とは活性酸素消去系が正常に機能している場合にはその機能を正常のまま維持させ、少々の紫外線や加齢では機能を低下させ難くするという意味で用いる。
【０００６】
すなわち、本発明は、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの中から一種または二種以上選ばれる抽出物を含有する生体の酸化防止または予防剤である。
【０００７】
マンネンタケ属は、担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）、ヒダナシタケ目（Ａｐｈｙｌｌｏｐｈｏｒａｌｅｓ）、サルノコシカケ科（Ｐｏｌｙｐｏｒａｃｅａｅ）、マンネンタケ族（Ｇａｎｏｄｅｒｍｅａｅ）に属し、マンネンタケ、マゴジャクシ、シママンネンタケ、ツノマンネンタケ、オオマンネンタケ、コウモリマンネンタケ、ツガノマンネンタケなどが含まれる。また、マンネンタケとしては、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫芝、青芝、黄芝、白芝などが神農本草経に記載されている。これらの学名は、文献［Ａｃｔａ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ １９（３），２６５−２７９，１９７９］によると、霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）、黒霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ａｔｒｕｍ）、紫芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｓｉｎｅｎｓｅ）に分類されているが、それに限定されるものではない。
【０００８】
本発明で用いられる黒霊芝（黒芝）は、主に南中国（上海以南）において、カエデ科の樹木に生育する。効能について、神農本草経によれば、黒霊芝は、尿閉や排尿困難で、下腹部が脹満する症状の治療をし、排尿を促し、腎臓の機能を高めると記載されている。
【０００９】
本発明で用いられる霊芝（赤芝）は、広葉樹に広く生育する。効能について、神農本草経によれば、霊芝（赤芝）は主に結胸（心下痛があり、しこりのある病症）を治療し、心臓の機能を強め、活力を補い、思考力を増強して物忘れを防ぐと記載されている。
【００１０】
本発明で用いられるマゴジャクシ（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｎｅｏｊａｐｏｎｉｃｕｍ）は、マンネンタケとは分類上、区別されている。
【００１１】
以上マンネンタケ属に属するキノコのなかでも、マンネンタケやマゴジャクシが好ましい。
【００１２】
本発明で用いられるトリュフ（学名：Ｔｕｂｅｒ ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ）は、セイヨウショウロ目（Ｔｕｂｅｒａｌｅｓ）、セイヨウショウロ科（Ｔｕｂｅｒａｃｅａｅ）に属する子嚢菌であり、塊状で地中に発生し、子実層は外に開いていない。子実体の多くは強い香りを持ち、リスやウサギのような動物が掘り出して食用とする。トリュフは、世界３大珍味のひとつであり高級フランス料理に使用される。また、欧米では美味な食用キノコであり、ブラック・ダイヤモンドとも呼ばれている。
【００１３】
本発明で使用するマンネンタケ属に属するキノコの抽出物とは、マンネンタケ属に属するキノコの子実体から抽出して得られるものである。トリュフの抽出物とは、トリュフの子実体、菌体等から抽出して得られるものである。その調製方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。また、上記抽出物の中には市販されているものもあり、これらを用いることができる。
【００１４】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級１価アルコール及び液状多価アルコールが良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。
【００１５】
また、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過等の処理および活性炭等による脱色、脱臭処理をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１６】
本発明の生体の酸化防止または予防剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの抽出物の効果を損なわない範囲内で、通常の食品、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤等の成分を配合することもできる。
【００１７】
本発明の生体の酸化防止または予防剤は食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、錠菓、飲料、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤などを含む）等が挙げられる。
【００１８】
本発明に用いるマンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの抽出物の配合量は、本発明の食品、化粧品、医薬部外品または医薬品全量に対し、乾固物に換算して０．０００１重量％以上が良く、好ましくは０．０００５〜１０重量％が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は発揮され難い。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は少なく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００１９】
【実施例】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、本発明の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。
【００２０】
製造例１ 黒霊芝の熱水抽出物
黒霊芝の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝の熱水抽出物を１．３ｇ得た。
【００２１】
製造例２ 霊芝（赤芝）の熱水抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝（赤芝）の熱水抽出物を１．４ｇ得た。
【００２２】
製造例３ マゴジャクシの熱水抽出物
マゴジャクシの乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してマゴジャクシの熱水抽出物を２．０ｇ得た。
【００２３】
製造例４ トリュフの熱水抽出物
トリュフの乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトリュフの熱水抽出物を１．２ｇ得た。
【００２４】
製造例５ 黒霊芝のエタノール抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、黒霊芝のエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００２５】
製造例６ 霊芝（赤芝）のエタノール抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝（赤芝）のエタノール抽出物を１．６ｇ得た。
【００２６】
製造例７ マゴジャクシのエタノール抽出物
マゴジャクシの乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、マゴジャクシのエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００２７】
製造例８ トリュフのエタノール抽出物
トリュフの乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、トリュフのエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００２８】
製造例９ 黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００２９】
製造例１０ 霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３０】
製造例１１ マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
マゴジャクシの乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３１】
製造例１２ トリュフの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
トリュフの乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、トリュフの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３２】
実施例１ クリーム１
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） ０．０５部
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３３】
実施例２ クリーム２
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物を霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例２）に置き換えたものをクリーム２とした。
【００３４】
実施例３ クリーム３
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物をマゴジャクシの熱水抽出物（製造例３）に置き換えたものをクリーム３とした。
【００３５】
実施例４ クリーム４
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物をトリュフの熱水抽出物（製造例４）に置き換えたものをクリーム４とした。
【００３６】
比較例１ 従来のクリーム
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００３７】
実施例５ 化粧水
処方 配合量
１．黒霊芝のエタノール抽出物（製造例５） ０．１部
２．１，３−ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００３８】
実施例６ 乳液
処方 配合量
１．霊芝（赤芝）のエタノール抽出物（製造例６） ０．５部
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ２．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３９】
実施例７ ゲル剤
処方 配合量
１．マゴジャクシのエタノール抽出物（製造例７） ０．１部
２．エタノール ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
５．香料 適量
６．１，３−ブチレングリコール ５．０
７．グリセリン ５．０
８．キサンタンガム ０．１
９．カルボキシビニルポリマー ０．２
１０．水酸化カリウム ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５と、成分６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００４０】
実施例８ 軟膏
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） １．０部
２．トリュフのエタノール抽出物（製造例８） １．０
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン １０．０
５．流動パラフィン ５．０
６．セタノール ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
８．プロピレングリコール １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００４１】
実施例９ パック
処方 配合量
１．黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 ０．１部
（製造例９）
２．霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 ０．１
（製造例１０）
３．ポリビニルアルコール １２．０
４．エタノール ５．０
５．１，３−ブチレングリコール ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．） ０．５
８．クエン酸 ０．１
９．クエン酸ナトリウム ０．３
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００４２】
実施例１０ ファンデーション
処方 配合量
１．マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 １．０部
（製造例１１）
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート １．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル ０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１１．ベントナイト ０．５
１２．プロピレングリコール ４．０
１３．トリエタノールアミン １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１５．二酸化チタン ８．０
１６．タルク ４．０
１７．ベンガラ １．０
１８．黄酸化鉄 ２．０
１９．香料 適量
２０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００４３】
実施例１１ 浴用剤
処方 配合量
１．トリュフの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 １部
（製造例１２）
２．炭酸水素ナトリウム ５０
３．黄色２０２号 適量
４．香料 適量
５．無水硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００４４】
実施例１２ 錠菓
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） ２部
２．乾燥コーンスターチ ５０
３．エリスリトール ４０
４．クエン酸 ５
５．ショ糖脂肪酸エステル ３
６．香料 適量
７．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ ｇとする。
【００４５】
実施例１３ 飲料
処方 配合量
１．霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例２） １．０部
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１及び４、５を加えて混合する。
【００４６】
実施例１４ 錠剤
処方 配合量
１．マゴジャクシの熱水抽出物（製造例３） １０部
２．トウモロコシデンプン １０
３．精製白糖 ２０
４．カルボキシメチルセルロース １０
５．微結晶セルロース ３５
６．ポリビニルピロリドン ５
７．タルク １０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤として成分７を加えて配合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠した。
【００４７】
実施例１５ 散剤
処方 配合量
１．トリュフの熱水抽出物（製造例４） １０部
２．トウモロコシデンプン ４０
３．微結晶セルロース ５０
［製造方法］上記成分を混合し、常法により散剤とした。
【００４８】
実施例１６ 注射剤
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） １．０部
２．ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油 ３．７
３．ゴマ油 ０．２
４．塩化ナトリウム ０．９
５．プロピレングリコール ４．０
６．リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．０） １０．０
７．蒸留水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１、２、３および成分５の半量を混合して約８０℃で加温溶解し、これに成分４、６と成分５の半量を予め溶解した成分７を約８０℃に加温して加え全量を１０００ｍｌの水溶液とした。この水溶液を１ｍｌのアンプルに分注して熔閉した後、加熱滅菌した。
【００４９】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００５０】
実験例１ 表皮細胞内活性酸素消去酵素の活性促進作用
マウスケラチノサイト由来Ｐａｍ２１２細胞１×１０５個を６ｃｍディッシュに播種し、黒霊芝、霊芝（赤芝）、マゴジャクシおよびトリュフの熱水抽出物を１μｇ／ｍｌ濃度に添加した１０％ＦＣＳを含むＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭにて５％ＣＯ２、３７℃条件下で４日間培養した。次に、細胞をＰＢＳ（−）にて２回洗浄した後、ラバーポリスマンにて剥離し、５００μｌのＰＢＳ（−）とともに超音波破砕したものを酵素試料液とした。酵素試料液中のＳＯＤ活性の測定はＳＯＤテストワコー（和光純薬工業株式会社製）を用いて行った。すなわち、酵素試料液１００μｌ、発色試液４５０μｌと酵素液（キサンチンオキシダーゼ）またはブランク液（キサンチンオキシダーゼの溶解に用いたリン酸緩衝液）４５０μｌを混合し、３７℃で２０分間反応させた後、反応停止液１ｍｌを添加し、５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、カタラーゼ活性の測定は過酸化水素の分解量を指標に行った。すなわち、１０ｍＭの過酸化水素を含む５０ｍＭリン酸緩衝液１ｍｌに５０μｌの酵素試料液を添加し、２４０ｎｍにおける１分間の吸光度変化を測定した。コントロールとしては試料無添加で培養した細胞を超音波破砕したものを用いた。なお、今回の実験で培地中に添加した黒霊芝、霊芝（赤芝）、マゴジャクシおよびトリュフの熱水抽出物自体が酵素試料液のＳＯＤおよびカタラーゼ活性の測定結果に影響を及ぼさないことを確認している。
【００５１】
各試料を添加して培養した細胞のＳＯＤおよびカタラーゼ活性について、コントロールを１００とした割合を表１に示した。黒霊芝、霊芝（赤芝）、マゴジャクシおよびトリュフの熱水抽出物はマウスケラチノサイト由来Ｐａｍ２１２細胞におけるＳＯＤおよびカタラーゼ活性の促進作用を示した。
【００５２】
【表１】
【００５３】
製造例５〜１２についても同様の検討を行い、ＳＯＤおよびカタラーゼ活性の促進作用を認めた。以上実験例１により、黒霊芝およびトリュフの抽出物にカタラーゼ活性促進効果が高く、霊芝（赤芝）およびマゴジャクシの抽出物にＳＯＤ活性促進効果が高いことが判明した。
【００５４】
実験例２ サンバーンセル形成の抑制作用
サンバーンセルとは、日焼け後の表皮を病理組織学的に観察すると特徴的な所見として認められる細胞質が好酸性に濃く染まり核が濃縮した細胞である。これは表皮細胞の壊死を示す所見であり、その形成には紫外線の影響により表皮細胞内で発生する活性酸素が関与することが知られている。そこで本発明のクリーム（実施例１〜４）のサンバーンセル形成に及ぼす影響について検討した。すなわち、ＩＣＲマウス（雄、６週齢）の耳介外側皮膚に本発明のクリーム（実施例１〜４）および従来のクリームを５ｍｇ／ｃｍ２塗布した。２４時間後に光源として東芝ＦＬ２０ＳＥランプを用い、ネンブタール麻酔下にて３００ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢをマウス耳介外側皮膚に照射した。この際、２４時間前に塗布されたクリームについては、照射直前に除去した。ＵＶＢ照射２４時間後に、耳介皮膚組織を採取し、ホルマリン固定後、定法にしたがって薄切切片を作製し、ヘマトキシリン−エオジン染色を行った。各組織標本を顕微鏡下（３００倍）で観察し、任意の１０視野のサンバーンセル数の平均をその標本のサンバーンセル数とした。クリーム未塗布のコントロールマウスのサンバーンセル数との比較により各試料のサンバーンセル形成抑制率を求めた。
【００５５】
これらの試験結果を表２に示した。本発明のクリーム（実施例１〜４）を塗布することによりＵＶＢ照射によるサンバーンセル形成の抑制が認められた。一方、従来のクリーム（比較例１）を塗布した場合、クリーム未塗布の場合と同様にサンバーンセルが形成された。また、本発明のクリーム（実施例１〜４）を４０℃で一週間保存した後、同様の試験を実施したところ、同様のサンバーンセル形成の抑制作用が認められた。
【００５６】
【表２】
【００５７】
実施例５〜１１についても同様の試験を行い、同様のサンバーンセル形成の抑制作用が認められた。
【００５８】
【発明の効果】
以上のことから、本発明のマンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの中から一種または二種以上選ばれる生体の酸化防止または予防剤は安定性に優れ、優れた生体の酸化防止または予防作用を示した。また、これらを配合した食品、化粧品、医薬部外品または医薬品も優れた生体の酸化防止または予防作用を示した。
【発明の属する技術分野】
本発明は、生体の酸化防止または予防剤に関し、特に食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等に配合して活性酸素消去酵素の活性を促進することにより皮膚をはじめとする生体の酸化傷害や老化にその有効性を発揮する生体の酸化防止または予防剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
皮膚は生体の最外層に位置し、紫外線等の影響により活性酸素が発生しやすい臓器であり、絶えずその酸素ストレスに曝されている。一方、皮膚細胞内には活性酸素消去酵素が存在しており、その能力を超える活性酸素が発生しないかぎり活性酸素の傷害から皮膚細胞を防衛している。ところが、皮膚細胞内活性酸素消去酵素の活性は加齢とともに低下することが知られており、活性酸素による傷害がその防御反応を凌駕したとき、皮膚は酸化され、細胞機能が劣化して老化してゆくと考えられる。また、皮膚以外の臓器においても、その活性酸素消去能を越える活性酸素に曝されたとき、機能低下が起こり老化してゆくと考えられる。そこで、活性酸素による傷害からの防御を目的として特開平９−１１８６３０や特開平９−２０８４８４などのように活性酸素消去剤や抗酸化剤が検討され、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素、ＳＯＤ様活性物質などの活性酸素消去剤や抗酸化剤を配合した食品、化粧品、医薬部外品または医薬品等が開発されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、ＳＯＤやカタラーゼ等の活性酸素消去酵素は安定性に問題があり、活性酸素消去剤や抗酸化剤は、その効果が充分でないものが多いため、安定性に優れ、効果の高い生体の酸化防止または予防剤が求められている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
このような事情により、本発明者らは活性酸素による傷害からの防御作用に優れた内用および外用剤を得るために鋭意検討した結果、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの中から一種または二種以上選ばれる抽出物が、安定かつ細胞が本来持っている活性酸素消去酵素の活性を高めることにより優れた生体の酸化防止または予防作用を示すことを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００５】
本発明で用いられる生体の酸化防止または予防剤は、上記の通り皮膚をはじめとする生体の細胞が持つ活性酸素消去酵素の活性を高めることを目的としたものである。さらに詳しくは、酸化防止とは紫外線や加齢などにより弱まった活性酸素消去酵素の活性を高めることで、細胞の酸化を受け難くすることを意味している。また、酸化予防とは活性酸素消去系が正常に機能している場合にはその機能を正常のまま維持させ、少々の紫外線や加齢では機能を低下させ難くするという意味で用いる。
【０００６】
すなわち、本発明は、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの中から一種または二種以上選ばれる抽出物を含有する生体の酸化防止または予防剤である。
【０００７】
マンネンタケ属は、担子菌類（Ｂａｓｉｄｉｏｍｙｃｅｔｅｓ）、ヒダナシタケ目（Ａｐｈｙｌｌｏｐｈｏｒａｌｅｓ）、サルノコシカケ科（Ｐｏｌｙｐｏｒａｃｅａｅ）、マンネンタケ族（Ｇａｎｏｄｅｒｍｅａｅ）に属し、マンネンタケ、マゴジャクシ、シママンネンタケ、ツノマンネンタケ、オオマンネンタケ、コウモリマンネンタケ、ツガノマンネンタケなどが含まれる。また、マンネンタケとしては、霊芝（赤芝）、黒霊芝（黒芝）、紫芝、青芝、黄芝、白芝などが神農本草経に記載されている。これらの学名は、文献［Ａｃｔａ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａ Ｓｉｎｉｃａ １９（３），２６５−２７９，１９７９］によると、霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｌｕｃｉｄｕｍ）、黒霊芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ａｔｒｕｍ）、紫芝（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｓｉｎｅｎｓｅ）に分類されているが、それに限定されるものではない。
【０００８】
本発明で用いられる黒霊芝（黒芝）は、主に南中国（上海以南）において、カエデ科の樹木に生育する。効能について、神農本草経によれば、黒霊芝は、尿閉や排尿困難で、下腹部が脹満する症状の治療をし、排尿を促し、腎臓の機能を高めると記載されている。
【０００９】
本発明で用いられる霊芝（赤芝）は、広葉樹に広く生育する。効能について、神農本草経によれば、霊芝（赤芝）は主に結胸（心下痛があり、しこりのある病症）を治療し、心臓の機能を強め、活力を補い、思考力を増強して物忘れを防ぐと記載されている。
【００１０】
本発明で用いられるマゴジャクシ（学名：Ｇａｎｏｄｅｒｍａ ｎｅｏｊａｐｏｎｉｃｕｍ）は、マンネンタケとは分類上、区別されている。
【００１１】
以上マンネンタケ属に属するキノコのなかでも、マンネンタケやマゴジャクシが好ましい。
【００１２】
本発明で用いられるトリュフ（学名：Ｔｕｂｅｒ ｍｅｌａｎｏｓｐｏｒｕｍ）は、セイヨウショウロ目（Ｔｕｂｅｒａｌｅｓ）、セイヨウショウロ科（Ｔｕｂｅｒａｃｅａｅ）に属する子嚢菌であり、塊状で地中に発生し、子実層は外に開いていない。子実体の多くは強い香りを持ち、リスやウサギのような動物が掘り出して食用とする。トリュフは、世界３大珍味のひとつであり高級フランス料理に使用される。また、欧米では美味な食用キノコであり、ブラック・ダイヤモンドとも呼ばれている。
【００１３】
本発明で使用するマンネンタケ属に属するキノコの抽出物とは、マンネンタケ属に属するキノコの子実体から抽出して得られるものである。トリュフの抽出物とは、トリュフの子実体、菌体等から抽出して得られるものである。その調製方法は特に限定されず、例えば、加熱抽出したものであっても良いし、常温抽出したものであっても良い。また、上記抽出物の中には市販されているものもあり、これらを用いることができる。
【００１４】
抽出する溶媒としては、例えば、水、低級１価アルコール類（メタノール、エタノール、１−プロパノール、２−プロパノール、１−ブタノール、２−ブタノール等）、液状多価アルコール（１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等）、ケトン類（アセトン、メチルエチルケトン等）、アセトニトリル、エステル類（酢酸エチル、酢酸ブチル等）、炭化水素類（ヘキサン、ヘプタン、流動パラフィン等）、エーテル類（エチルエーテル、テトラヒドロフラン、プロピルエーテル等）が挙げられる。好ましくは、水、低級１価アルコール及び液状多価アルコールが良く、特に好ましくは、水、エタノール、１，３−ブチレングリコール及びプロピレングリコールが良い。これらの溶媒は１種でも２種以上を混合して用いても良い。
【００１５】
また、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの抽出物は、抽出した溶液のまま用いても良く、必要に応じて、濃縮、希釈、濾過等の処理および活性炭等による脱色、脱臭処理をして用いても良い。更には、抽出した溶液を濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。
【００１６】
本発明の生体の酸化防止または予防剤には、上記抽出物をそのまま使用しても良く、マンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの抽出物の効果を損なわない範囲内で、通常の食品、化粧品、医薬部外品、医薬品に用いられる成分である油脂類、ロウ類、炭化水素類、脂肪酸類、アルコール類、エステル類、界面活性剤、金属石鹸、ｐＨ調整剤、防腐剤、香料、保湿剤、粉体、紫外線吸収剤、増粘剤、色素、酸化防止剤、美白剤、キレート剤、賦形剤、安定剤、保存剤、結合剤、崩壊剤等の成分を配合することもできる。
【００１７】
本発明の生体の酸化防止または予防剤は食品、化粧品、医薬部外品及び医薬品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、錠菓、飲料、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、坐剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤などを含む）等が挙げられる。
【００１８】
本発明に用いるマンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの抽出物の配合量は、本発明の食品、化粧品、医薬部外品または医薬品全量に対し、乾固物に換算して０．０００１重量％以上が良く、好ましくは０．０００５〜１０重量％が良い。０．０００１重量％未満では十分な効果は発揮され難い。１０重量％を越えて配合した場合、効果の増強は少なく不経済である。また、添加の方法については、予め加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すれば良い。
【００１９】
【実施例】
次に本発明を詳細に説明するため、実施例として本発明に用いる抽出物の製造例、本発明の処方例及び実験例を挙げるが、本発明はこれに限定されるものではない。実施例に示す配合量の部とは重量部を、％とは重量％を示す。
【００２０】
製造例１ 黒霊芝の熱水抽出物
黒霊芝の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して黒霊芝の熱水抽出物を１．３ｇ得た。
【００２１】
製造例２ 霊芝（赤芝）の熱水抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥して霊芝（赤芝）の熱水抽出物を１．４ｇ得た。
【００２２】
製造例３ マゴジャクシの熱水抽出物
マゴジャクシの乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してマゴジャクシの熱水抽出物を２．０ｇ得た。
【００２３】
製造例４ トリュフの熱水抽出物
トリュフの乾燥物２０ｇに４００ｍＬの精製水を加え、９５〜１００℃で２時間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮し、凍結乾燥してトリュフの熱水抽出物を１．２ｇ得た。
【００２４】
製造例５ 黒霊芝のエタノール抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、黒霊芝のエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００２５】
製造例６ 霊芝（赤芝）のエタノール抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、霊芝（赤芝）のエタノール抽出物を１．６ｇ得た。
【００２６】
製造例７ マゴジャクシのエタノール抽出物
マゴジャクシの乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、マゴジャクシのエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００２７】
製造例８ トリュフのエタノール抽出物
トリュフの乾燥物１００ｇに９００ｍＬのエタノールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、その濾液を濃縮乾固して、トリュフのエタノール抽出物を１．５ｇ得た。
【００２８】
製造例９ 黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
黒霊芝の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００２９】
製造例１０ 霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
霊芝（赤芝）の乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３０】
製造例１１ マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
マゴジャクシの乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３１】
製造例１２ トリュフの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物
トリュフの乾燥物１００ｇに１ｋｇの精製水及び１ｋｇの１，３−ブチレングリコールを加え、常温で７日間抽出した後、濾過し、トリュフの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物を１．９ｋｇ得た。
【００３２】
実施例１ クリーム１
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） ０．０５部
２．スクワラン ５．５
３．オリーブ油 ３．０
４．ステアリン酸 ２．０
５．ミツロウ ２．０
６．ミリスチン酸オクチルドデシル ３．５
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ベヘニルアルコール １．５
９．モノステアリン酸グリセリン ２．５
１０．香料 ０．１
１１．１，３−ブチレングリコール ８．５
１２．パラオキシ安息香酸エチル ０．０５
１３．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１４．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３３】
実施例２ クリーム２
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物を霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例２）に置き換えたものをクリーム２とした。
【００３４】
実施例３ クリーム３
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物をマゴジャクシの熱水抽出物（製造例３）に置き換えたものをクリーム３とした。
【００３５】
実施例４ クリーム４
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物をトリュフの熱水抽出物（製造例４）に置き換えたものをクリーム４とした。
【００３６】
比較例１ 従来のクリーム
実施例１において、黒霊芝の熱水抽出物を精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００３７】
実施例５ 化粧水
処方 配合量
１．黒霊芝のエタノール抽出物（製造例５） ０．１部
２．１，３−ブチレングリコール ８．０
３．グリセリン ２．０
４．キサンタンガム ０．０２
５．クエン酸 ０．０１
６．クエン酸ナトリウム ０．１
７．エタノール ５．０
８．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
９．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．） ０．１
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜６及び１１と、成分７〜１０をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００３８】
実施例６ 乳液
処方 配合量
１．霊芝（赤芝）のエタノール抽出物（製造例６） ０．５部
２．スクワラン ５．０
３．オリーブ油 ５．０
４．ホホバ油 ５．０
５．セタノール １．５
６．モノステアリン酸グリセリン ２．０
７．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ３．０
８．ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート ２．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
９．香料 ０．１
１０．プロピレングリコール １．０
１１．グリセリン ２．０
１２．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１３．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜８を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１及び１０〜１３を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分９を加え、更に３０℃まで冷却して製品とする。
【００３９】
実施例７ ゲル剤
処方 配合量
１．マゴジャクシのエタノール抽出物（製造例７） ０．１部
２．エタノール ５．０
３．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
４．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（６０Ｅ．Ｏ．） ０．１
５．香料 適量
６．１，３−ブチレングリコール ５．０
７．グリセリン ５．０
８．キサンタンガム ０．１
９．カルボキシビニルポリマー ０．２
１０．水酸化カリウム ０．２
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５と、成分６〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００４０】
実施例８ 軟膏
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） １．０部
２．トリュフのエタノール抽出物（製造例８） １．０
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．） ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン １０．０
５．流動パラフィン ５．０
６．セタノール ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル ０．１
８．プロピレングリコール １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２及び７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００４１】
実施例９ パック
処方 配合量
１．黒霊芝の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 ０．１部
（製造例９）
２．霊芝（赤芝）の１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 ０．１
（製造例１０）
３．ポリビニルアルコール １２．０
４．エタノール ５．０
５．１，３−ブチレングリコール ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
７．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．） ０．５
８．クエン酸 ０．１
９．クエン酸ナトリウム ０．３
１０．香料 適量
１１．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００４２】
実施例１０ ファンデーション
処方 配合量
１．マゴジャクシの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 １．０部
（製造例１１）
２．ステアリン酸 ２．４
３．ポリオキシエチレンソルビタンモノステアレート １．０
（２０Ｅ．Ｏ．）
４．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．） ２．０
５．セタノール １．０
６．液状ラノリン ２．０
７．流動パラフィン ３．０
８．ミリスチン酸イソプロピル ６．５
９．パラオキシ安息香酸ブチル ０．１
１０．カルボキシメチルセルロースナトリウム ０．１
１１．ベントナイト ０．５
１２．プロピレングリコール ４．０
１３．トリエタノールアミン １．１
１４．パラオキシ安息香酸メチル ０．２
１５．二酸化チタン ８．０
１６．タルク ４．０
１７．ベンガラ １．０
１８．黄酸化鉄 ２．０
１９．香料 適量
２０．精製水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２〜９を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２０に成分１０をよく膨潤させ、続いて、成分１及び１１〜１４を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１５〜１８を加え、ホモミキサーで撹拌し７５℃に保ち水相とする。この水相に油相をかき混ぜながら加え、冷却し、４５℃で成分１９を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００４３】
実施例１１ 浴用剤
処方 配合量
１．トリュフの１，３−ブチレングリコール水溶液抽出物 １部
（製造例１２）
２．炭酸水素ナトリウム ５０
３．黄色２０２号 適量
４．香料 適量
５．無水硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜５を均一に混合し製品とする。
【００４４】
実施例１２ 錠菓
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） ２部
２．乾燥コーンスターチ ５０
３．エリスリトール ４０
４．クエン酸 ５
５．ショ糖脂肪酸エステル ３
６．香料 適量
７．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１〜４及び７を混合し、顆粒成形する。成形した顆粒に成分５及び６を加えて打錠する。１粒１．０ ｇとする。
【００４５】
実施例１３ 飲料
処方 配合量
１．霊芝（赤芝）の熱水抽出物（製造例２） １．０部
２．ステビア ０．０５
３．リンゴ酸 ５．０
４．香料 ０．１
５．水にて全量を１００とする
［製造方法］成分２及び３を少量の水に溶解する。次いで、成分１及び４、５を加えて混合する。
【００４６】
実施例１４ 錠剤
処方 配合量
１．マゴジャクシの熱水抽出物（製造例３） １０部
２．トウモロコシデンプン １０
３．精製白糖 ２０
４．カルボキシメチルセルロース １０
５．微結晶セルロース ３５
６．ポリビニルピロリドン ５
７．タルク １０
［製造方法］成分１〜５を混合し、次いで成分６の水溶液を結合剤として加えて常法により顆粒化した。これに滑沢剤として成分７を加えて配合した後、１錠１００ｍｇの錠剤に打錠した。
【００４７】
実施例１５ 散剤
処方 配合量
１．トリュフの熱水抽出物（製造例４） １０部
２．トウモロコシデンプン ４０
３．微結晶セルロース ５０
［製造方法］上記成分を混合し、常法により散剤とした。
【００４８】
実施例１６ 注射剤
処方 配合量
１．黒霊芝の熱水抽出物（製造例１） １．０部
２．ポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油 ３．７
３．ゴマ油 ０．２
４．塩化ナトリウム ０．９
５．プロピレングリコール ４．０
６．リン酸緩衝液（０．１Ｍ、ｐＨ６．０） １０．０
７．蒸留水にて全量を１００とする
［製造方法］成分１、２、３および成分５の半量を混合して約８０℃で加温溶解し、これに成分４、６と成分５の半量を予め溶解した成分７を約８０℃に加温して加え全量を１０００ｍｌの水溶液とした。この水溶液を１ｍｌのアンプルに分注して熔閉した後、加熱滅菌した。
【００４９】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００５０】
実験例１ 表皮細胞内活性酸素消去酵素の活性促進作用
マウスケラチノサイト由来Ｐａｍ２１２細胞１×１０５個を６ｃｍディッシュに播種し、黒霊芝、霊芝（赤芝）、マゴジャクシおよびトリュフの熱水抽出物を１μｇ／ｍｌ濃度に添加した１０％ＦＣＳを含むＥａｇｌｅ’ｓ ＭＥＭにて５％ＣＯ２、３７℃条件下で４日間培養した。次に、細胞をＰＢＳ（−）にて２回洗浄した後、ラバーポリスマンにて剥離し、５００μｌのＰＢＳ（−）とともに超音波破砕したものを酵素試料液とした。酵素試料液中のＳＯＤ活性の測定はＳＯＤテストワコー（和光純薬工業株式会社製）を用いて行った。すなわち、酵素試料液１００μｌ、発色試液４５０μｌと酵素液（キサンチンオキシダーゼ）またはブランク液（キサンチンオキシダーゼの溶解に用いたリン酸緩衝液）４５０μｌを混合し、３７℃で２０分間反応させた後、反応停止液１ｍｌを添加し、５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。また、カタラーゼ活性の測定は過酸化水素の分解量を指標に行った。すなわち、１０ｍＭの過酸化水素を含む５０ｍＭリン酸緩衝液１ｍｌに５０μｌの酵素試料液を添加し、２４０ｎｍにおける１分間の吸光度変化を測定した。コントロールとしては試料無添加で培養した細胞を超音波破砕したものを用いた。なお、今回の実験で培地中に添加した黒霊芝、霊芝（赤芝）、マゴジャクシおよびトリュフの熱水抽出物自体が酵素試料液のＳＯＤおよびカタラーゼ活性の測定結果に影響を及ぼさないことを確認している。
【００５１】
各試料を添加して培養した細胞のＳＯＤおよびカタラーゼ活性について、コントロールを１００とした割合を表１に示した。黒霊芝、霊芝（赤芝）、マゴジャクシおよびトリュフの熱水抽出物はマウスケラチノサイト由来Ｐａｍ２１２細胞におけるＳＯＤおよびカタラーゼ活性の促進作用を示した。
【００５２】
【表１】
製造例５〜１２についても同様の検討を行い、ＳＯＤおよびカタラーゼ活性の促進作用を認めた。以上実験例１により、黒霊芝およびトリュフの抽出物にカタラーゼ活性促進効果が高く、霊芝（赤芝）およびマゴジャクシの抽出物にＳＯＤ活性促進効果が高いことが判明した。
【００５４】
実験例２ サンバーンセル形成の抑制作用
サンバーンセルとは、日焼け後の表皮を病理組織学的に観察すると特徴的な所見として認められる細胞質が好酸性に濃く染まり核が濃縮した細胞である。これは表皮細胞の壊死を示す所見であり、その形成には紫外線の影響により表皮細胞内で発生する活性酸素が関与することが知られている。そこで本発明のクリーム（実施例１〜４）のサンバーンセル形成に及ぼす影響について検討した。すなわち、ＩＣＲマウス（雄、６週齢）の耳介外側皮膚に本発明のクリーム（実施例１〜４）および従来のクリームを５ｍｇ／ｃｍ２塗布した。２４時間後に光源として東芝ＦＬ２０ＳＥランプを用い、ネンブタール麻酔下にて３００ｍＪ／ｃｍ２のＵＶＢをマウス耳介外側皮膚に照射した。この際、２４時間前に塗布されたクリームについては、照射直前に除去した。ＵＶＢ照射２４時間後に、耳介皮膚組織を採取し、ホルマリン固定後、定法にしたがって薄切切片を作製し、ヘマトキシリン−エオジン染色を行った。各組織標本を顕微鏡下（３００倍）で観察し、任意の１０視野のサンバーンセル数の平均をその標本のサンバーンセル数とした。クリーム未塗布のコントロールマウスのサンバーンセル数との比較により各試料のサンバーンセル形成抑制率を求めた。
【００５５】
これらの試験結果を表２に示した。本発明のクリーム（実施例１〜４）を塗布することによりＵＶＢ照射によるサンバーンセル形成の抑制が認められた。一方、従来のクリーム（比較例１）を塗布した場合、クリーム未塗布の場合と同様にサンバーンセルが形成された。また、本発明のクリーム（実施例１〜４）を４０℃で一週間保存した後、同様の試験を実施したところ、同様のサンバーンセル形成の抑制作用が認められた。
【００５６】
【表２】
実施例５〜１１についても同様の試験を行い、同様のサンバーンセル形成の抑制作用が認められた。
【００５８】
【発明の効果】
以上のことから、本発明のマンネンタケ属に属するキノコおよびトリュフの中から一種または二種以上選ばれる生体の酸化防止または予防剤は安定性に優れ、優れた生体の酸化防止または予防作用を示した。また、これらを配合した食品、化粧品、医薬部外品または医薬品も優れた生体の酸化防止または予防作用を示した。
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- 黒霊芝、マゴジャクシおよびトリュフの中から一種または二種以上選ばれる抽出物を含有するサンバーンセル形成抑制剤。
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