CN111671695A - 一种皮肤修复乳液及其在皮肤修复、抗皱中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种皮肤修复乳液及其在皮肤修复、抗皱中的应用。本发明的皮肤修复乳液采用非离子乳化剂、天然油脂、海带发酵液、欧洲李发酵液、氨基酸和多元醇进行组配，属于天然来源，通过实验证明其对于受损皮肤具有较强的修复功效，能够促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移，从而促进皮肤组织的再生；同时该组合物还能够促进角质细胞的增殖，修复皮肤表皮，因此在皮肤修复、抗皱、保湿中具有良好的应用前景。

Description

一种皮肤修复乳液及其在皮肤修复、抗皱中的应用

技术领域

本发明涉及一种皮肤修复乳液及其在皮肤修复、抗皱中的应用，属于护肤品技术领域。

背景技术

随着全球“天然护肤”潮流的不断发展，开发天然、健康、功效性好的皮肤护理原料是一个重要的研发方向。目前，消费者越来越理性，对于皮肤护理原料除了关注天然、安全外，对于真正功效的追求也越来越关注，从而导致了“成分党”的出现，这类消费者关注皮肤护理原料的有效性、安全性和温和性。因此，安全、天然、真正有效的皮肤护理原料具有较好的市场前景。

海藻种类繁多，资源丰富，是重要的海洋资源。在我国，海藻主要以海带为主。海带又名昆布、纶布，常作为食品和中药原料，海带不仅含有丰富的蛋白质、维生素和矿物质，还含有如褐藻酸、褐藻糖胶、褐藻淀粉、褐藻纤维、甘露醇、海带氨酸、高不饱和脂舫酸、岩藻黄质和甾醇类化合物等丰富的生理活性物质。其中含有的褐藻糖胶具有多种重要的生理活性。褐藻糖胶是由岩藻聚糖组成的，岩藻聚糖具有多种生物活性，比如提高免疫活性、修复、抗氧化等活性，有的已用于保健品的生产，利用岩藻聚糖的某些生物活性可以开发新药，并且有的产品已经用于临床治疗。海藻采用一定的方法分解后，可以得到具有一定活性的多酚、短肽、氨基酸以及岩藻糖等，这些活性物质对皮肤具有一定的护理功效。

欧洲李果实营养丰富，富含维生素C、维生素B1、维生素E等物质，具有较高的药用价值。丝氨酸是非必需氨基酸，在医药上有着广泛用途。丝氨酸可促进脂肪和脂肪酸的新陈代谢，有助于维持免疫系统。L-丝氨酸羟基经磷酸化作用后能衍生出具重要生理功能的磷丝氨酸，是磷脂的主要成分之一，同时重要的自然保湿因子(NMF)之一，皮肤角质层保持水分的主要角色，对于修复受损皮肤的天然屏障发挥重要作用。甘氨酸能够提高皮肤的免疫功能，具有调节水分、酸碱、平衡油脂的作用，还能够激活细胞超氧化物歧化酶的活性，清除多余自由基等功效。

目前对于上述皮肤护理原料的研究多集中在单种原料的研究上，且对于其提取分离方法的研究比较少，如何得到一种综合效果较好的皮肤护理产品是当前需要解决的问题。

发明内容

本发明克服了上述现有技术的不足，提供了一种皮肤修复乳液及其在皮肤修复、抗皱中的应用。本发明的皮肤修复乳液属于天然来源，通过实验证明其对于受损皮肤具有较强的修复功效，能够促进人皮肤成纤维细胞的增殖和迁移，从而促进皮肤组织的再生；同时该组合物还能够促进角质细胞的增殖，修复皮肤表皮，因此在皮肤修复、抗皱、保湿中具有良好的应用前景。

本发明的技术方案是：一种皮肤修复乳液，其特征是，其组分及重量份为：非离子乳化剂0.2-2.0份、天然油脂0.5-10.0份、海带发酵液0.1-5.0份、欧洲李发酵液0.1-4.0份、氨基酸0.001-0.05份、多元醇0.5-8.0份。

优选的，其组分及重量份为：非离子乳化剂0.5-1.5份、天然油脂1.0-3.0份、海带发酵液0.5-1.0份、欧洲李发酵液0.5-1.0份、氨基酸0.002-0.005份、多元醇5.0-8.0份。

优选的，所述的氨基酸为丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、精氨酸中的一种或几种，优选丝氨酸和丙氨酸。

优选的，所述的天然油脂为霍霍巴油、山茶籽油、白池花籽油、甜杏仁油及紫草油中的一种或几种，优选霍霍巴油或者山茶籽油。

优选的，所述的非离子乳化剂为聚山梨醇酯-80、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、聚甘油-10月桂酸酯、蔗糖月桂酸酯中的一种或两种，优选PEG-60氢化蓖麻油、聚甘油-10月桂酸酯和蔗糖月桂酸酯中的一种或两种。

优选的，所述的多元醇为甘油、辛甘醇、戊二醇、丁二醇、丙二醇、双丙甘醇和己二醇中的一种或两种。

其中海带发酵液是由枯草芽孢杆菌发酵海带，发酵液二次离心后得到的上清液。

具体如下：

1)将海带清洗、粉碎后干燥成粉，并采用辐照灭菌处理；

2)将枯草芽孢杆菌采用液体培养基培养，使培养液中枯草芽孢杆菌的活菌含量≥10⁹cfu/ml；

3)枯草芽孢杆菌培养液中按照质量比5-10％的添加量接入辐照灭菌后的海带粉，发酵40-72h；利用枯草芽孢杆菌菌体自身合成的α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类分解海带，得到发酵液；将发酵液离心，取上清液；上清液再次离心，取上清液得到最终海带发酵液。要求海带发酵液中海带多糖含量300-500mg/每100g，岩藻糖100mg-200mg/每100g(可以适当调整发酵液的含水量控制在此范围内)。

其中的海带为干燥或新采海带，优选干燥海带；所述的辐照灭菌为钴60辐照、等离子束辐照灭菌，优选的为等离子束辐照灭菌方式；辐照强度在3000-10000kGy，优选的强度为8000kGy。所述的发酵时间优选为48h。所述的离心中，转速为6000-12000r/min，优选的10000r/min。

其中欧洲李发酵液为采用乳酸菌发酵欧洲李果实，发酵液二次离心后得到的上清液。具体为：欧洲李果实胶体磨磨浆后接入乳酸菌进行发酵24-48h得到发酵液，发酵液二次离心后得到的上清液，要求欧洲李发酵液中多酚含量400-600mg(没食子酸当量)/每100g(可以适当调整发酵液的含水量控制在此范围内)。

上述的离心中，转速为6000-12000r/min，优选的10000r/min。

本发明还公开了上述皮肤修复乳液的制备方法，其特征是，包括以下步骤：

S1：按上述重量份称取各组分，将氨基酸加入到海带发酵液和欧洲李发酵液中溶解，形成液体一；

S2：将非离子乳化剂、多元醇和液体一搅拌混合，形成液体二；

S3：在一定搅拌转速下，将天然油脂缓慢加入到液体二中，形成液体三；

S4：将液体三在高速均质下，均质一定时间后，即得具有修复效果的乳液。

优选的，所述的步骤S3中，搅拌转速为300-500r/min。

优选的，所述的步骤S4中，高速均质转速为8000-10000r/min，均质时间为5-10min。

上述乳液的应用，其特征是，可以添加到具有皮肤保湿、修复的面膜、精华、乳液和膏霜等皮肤护理品中，用于皮肤修复、抗皱。

各原料及作用：

海带发酵液：本发明海带采用益生菌枯草芽孢杆菌发酵，将海带中的褐藻糖胶等物质转化成具有皮肤护理作用的海带多糖和岩藻糖等，同时结合益生菌产生的次级代谢产物，使其皮肤修复功效显著提升。

欧洲李发酵液：欧洲李果实营养丰富，富含维生素C、维生素A等物质，同时还含有高含量的多酚类物质。目前欧洲李的多酚类物质大部分都是采用水或有机溶剂提取的方法获得，部分不溶性的成分也表现出了抗氧化活性，实际上从普通提取方法来说，欧洲李的一部分抗氧化物质严重损失了。采用益生菌发酵方法来进行欧洲李部分不溶性成分的分解，获得更多的抗氧化物质。

氨基酸：丝氨酸可促进脂肪和脂肪酸的新陈代谢，有助于维持免疫系统。L-丝氨酸羟基经磷酸化作用后能衍生出具重要生理功能的磷丝氨酸，是磷脂的主要成分之一，同时重要的自然保湿因子(NMF)之一，皮肤角质层保持水分的主要角色，对于修复受损皮肤的天然屏障发挥重要作用。丙氨酸是构成蛋白质的基本单位，在化妆品中作保湿剂、皮肤调理剂和抗静电剂，能够起到强化皮肤角质层，提高皮肤保湿锁水能力。

天然油脂：具有护肤作用。其中，霍霍巴油渗透能力强，可以直接渗透进入皮肤内部，直接补充细胞新陈代谢需要的养分。增强皮肤的弹性和保湿能力，使皮肤变的柔软、细滑、滋润。山茶籽油与皮肤的亲和性很好，易于皮肤吸收，用于护肤品，可以促进皮肤柔嫩而富有弹性，具有很好的润肤护肤功效。山茶籽油富含有角鲨烯、油酸、蛋白质和维生素E等活性成份，对皮肤来说极易吸收。

除此以外，非离子乳化剂作为乳化剂，可以使水与油稳定的结合在一起；多元醇加入可以使乳化能力增强，乳化粒径减小，同时还能起到防腐的作用。

本发明对海带和欧洲李分别采用不同的益生菌进行发酵，以期获得对皮肤修复、抗皱具有良好效果的发酵成分，更具体的说，采用枯草芽孢杆菌发酵海带，获得富含海带多糖和岩藻糖的海带发酵液；采用乳酸菌发酵欧洲李获得富含多酚的欧洲李发酵液，同时益生菌产生的次级代谢产物对于皮肤修复、抗皱也具有一定的促进作用。

本发明采用非离子乳化剂、天然油脂、海带发酵液、欧洲李发酵液、氨基酸和多元醇进行组配，海带发酵液、欧洲李发酵液分别进行益生菌发酵后，具有较好的皮肤修复再生、除皱功效，且二者复配，其有效成分相互补充，使其皮肤修复再生、除皱功效更佳。氨基酸具有保湿护肤功能，天然油脂具有一定的营养护肤功效及促进吸收的功效。非离子乳化剂作为乳化剂，可以使水与油稳定的结合在一起；多元醇加入可以使乳化能力增强，乳化粒径减小，同时还能起到防腐的作用。各组分共同作用，不仅使皮肤修复再生、除皱、保湿护肤功效最佳，且能形成稳定的乳液，乳液和皮肤的结合能力较强，形成微小乳滴，和皮肤细胞磷脂双分子层结构相似，功效成分渗透性更好，更易吸收。

本发明的有益效果：

(1)提供了一种真正具有修复、抗皱功效的皮肤护理原料，功效显著，通过和成纤维细胞生长因子功效对照，其要强于生物活性物质成纤维细胞生长因子。乳液体系形成乳化粒径较小，皮肤渗透性强，功效显著。

(2)该组合物中主要功效组分是天然来源，易于获取且安全温和，使用方便。

附图说明

图1为不同测试样品和bFGF对HaCat细胞存活率的影响(*，p<0.05；**，p<0.01)；

图2为不同测试样品和bFGF对HaCat细胞的形态学影响；

图3为不同测试样品和bFGF对HFF-1细胞存活率的影响(*，p<0.05；**，p<0.01)；

图4为不同浓度修复乳液和bFGF对HaCat细胞迁移作用；

图5为部分试用者红区减少情况(其中的点表示敏感部位)；

图6为部分试用者皱纹减少情况(其中的涂覆标记为细纹部分)。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例，实施例不应视作对本发明保护范围的限定。

海带发酵液的制备：

1)海带的预处理：

取干海带，经过浸泡、清洗表面的泥沙和盐分、超微粉碎至粒度10μm左右后干燥成粉，并采用等离子束辐照灭菌，辐照强度为8000-9000kGy；

2)枯草芽孢杆菌培养液

将枯草芽孢杆菌采用液体培养基(1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏+20g琼脂，pH＝7)培养，35℃振荡培养30-48h，使培养液中枯草芽孢杆菌的活菌含量≥10⁹cfu/ml。

3)发酵海带粉

辐照后的海带粉，按照10％的添加量接入枯草芽孢杆菌培养液中搅拌均匀后，发酵48h；利用枯草芽孢杆菌菌体自身合成的α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类分解海带，得到发酵液；将发酵液10000r/min离心30min，取上清液；上清液再次10000r/min离心30min取上清液，得到海带发酵液。经过上述方法制备的海带发酵液，海带多糖含量350mg/100g，岩藻糖120mg/100g。

欧洲李发酵液的制备：

1)欧洲李果实预处理

取欧洲李新鲜果实去核，采用胶体磨研磨成浆(粒度10μm左右)后，得到欧洲李果实发酵培养基，灭菌；

2)乳酸菌培养液

将乳酸菌采用MRS培养基37℃厌氧培养48h，使培养液中乳酸菌的活菌含量≥10⁹cfu/ml。

3)发酵欧洲李果实

将乳酸菌培养液按体积比5％的比例接入欧洲李果实发酵培养基中厌氧发酵48h，获得发酵液；将发酵液12000r/min离心30min，取上清液；上清液再次12000r/min离心30min取上清液，得到欧洲李发酵液。其欧洲李发酵液中多酚含量420mg(没食子酸当量)/每100g。

实施例1：

配比：海带发酵液0.5g、欧洲李发酵液1g、丝氨酸0.004g、聚甘油-10月桂酸酯1.5g、甘油5g、己二醇0.6g、山茶籽油1.5g。

乳液的制备：在一容器中，加入海带发酵液和欧洲李发酵液，同时加入丝氨酸进行溶解，形成液体一；将聚甘油-10月桂酸酯、甘油、己二醇和液体一搅拌混合后形成液体二；开启搅拌转速保持在500r/min，将山茶籽油缓慢加入到液体二中，混合完毕后进行9000r/min均质6min后，即得修复乳液。

实施例2

配比：海带发酵液1g、欧洲李发酵液0.5g、丝氨酸0.001g、丙氨酸0.002g、PEG-60氢化蓖麻油0.5g、双丙甘醇3g、戊二醇2g、霍霍巴油2.5g。

乳液的制备：在一容器中，加入海带发酵液和欧洲李发酵液，同时加入丝氨酸和丙氨酸进行溶解，形成液体一；将PEG-60氢化蓖麻油、双丙甘醇、戊二醇和液体一搅拌混合后形成液体二；开启搅拌转速保持在350r/min，将霍霍巴油缓慢加入到液体二中，混合完毕后进行10000r/min均质5min后，即得修复乳液。

实施例3

配比：海带发酵液1g、欧洲李发酵液0.5g、丝氨酸0.001g、丙氨酸0.002g、PEG-60氢化蓖麻油0.5g、蔗糖月桂酸酯0.5g、丁二醇4g、戊二醇2g、山茶籽油2.5g。

乳液的制备：在一容器中，加入海带发酵液和欧洲李发酵液，同时加入丝氨酸和丙氨酸进行溶解，形成液体一；将PEG-60氢化蓖麻油、蔗糖月桂酸酯、丁二醇、戊二醇和液体一搅拌混合后形成液体二；开启搅拌转速保持在500r/min，将山茶籽油缓慢加入到液体二中，混合完毕后进行10000r/min均质10min后，即得修复乳液。

以下结合试验例来说明本发明的效果，以实施例2的修复乳液进行试验。

试验例1：对角质细胞促增殖作用

将处于对数生长期的HaCaT细胞以3×10⁵个/ml的密度接种于96孔板，于37℃，CO₂培养箱培养24h，加入不同测试样品(用10％FBS的DMEM培养液配成2mg/mL海带发酵液、2mg/mL欧洲李发酵液、1mg/mL修复乳液、2mg/mL修复乳液)来处理细胞24h、48h，用倒置相差显微镜观察不同浓度修复乳液对细胞形态的影响；采用CCK-8方法检测修复乳液对细胞增殖的影响。其中修复乳液的浓度按海带发酵液和欧洲李发酵液的总量计，如1mg/mL修复乳液为1ml测试样品中含海带发酵液和欧洲李发酵液的总量为1mg，试验例2-3与此相同。

以重组牛碱性成纤维生长因子bFGF(8μl/ml)的DMEM培养液(10％FBS)为阳性对照，它是一种多功能细胞生长因子，对来源于中胚层和外胚层的细胞(如上皮细胞、真皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等)具有促进修复和再生的作用。采用CCK-8方法，评价修复乳液在HaCaT中检测其作用24h、48h对细胞的促增殖作用。

试验结果如图1-2所示。从图1可以看出：2mg/mL海带发酵液对角质细胞具有一定的促增殖作用，2mg/mL欧洲李发酵液对角质细胞的促增殖作用不是很明显，而修复乳液24h、48h对角质细胞的促增殖作用明显，其24h、48h的细胞存活率与阴性对照组有显著差异(p<0.01)，且在1mg/L、2mg/L浓度下的细胞存活率高于重组牛碱性成纤维生长因子(bFGF)。从图2可以看出：相对于阴性对照组，含有修复乳液的细胞结构形态稳定均一(健康的标志)，且细胞密度较大，也说明修复乳液对角质细胞有增殖的作用。

试验例2：对成纤维细胞促增殖作用

将处于对数生长期的HFF-1细胞以3×10⁵个/ml的密度接种于96孔板，于37℃，CO₂培养箱培养24h，加入不同测试样品(用10％FBS的DMEM培养液配成2mg/mL海带发酵液、2mg/mL欧洲李发酵液、1mg/mL修复乳液、2mg/mL修复乳液)处理细胞24h、48h，用倒置相差显微镜观察不同浓度的修复乳液对细胞形态的影响；采用CCK-8方法检测乳液对细胞增殖的影响。以重组牛碱性成纤维生长因子bFGF(8μl/ml)的DMEM培养液(10％FBS)为阳性对照。

试验结果如图3所示。从图3可以看出：相比于2mg/mL海带发酵液和2mg/mL欧洲李发酵液对成纤维细胞的作用来看，修复乳液24h、48h对成纤维细胞的促增殖作用明显，且在1mg/L、2mg/L浓度下其24h、48h的细胞存活率与阴性对照组有显著差异(p<0.01)。

试验例3：修复乳液对细胞划痕愈合的促进作用

在皮肤伤口愈合的最后阶段，角质细胞的迁移速度影响表皮新生。本研究通过角质细胞HaCaT划痕愈合实验探究修复乳液对角质细胞迁移的影响。在6孔板上，HaCaT细胞长至汇合，制作大小均一的划痕，分别采用含0.1％FBS的DMEM高糖培养基(阴性对照)、修复乳液(2mg/mL)、修复乳液(4mg/mL)、bFGF(8μl/ml)的DMEM高糖培养基(0.1％FBS)分别处理伤口划痕，在培养24h后，观察伤口愈合的情况，判断修复乳液对成角质细胞迁移的影响。

试验结果如图4所示，与阴性对照组相比，实验组修复乳液(2mg/mL、4mg/mL)可显著促进HaCaT细胞的迁移，bFGF有轻微促进HaCaT细胞迁移的作用。

试验例4：修复乳液在皮肤保湿、修复产品中的应用效果

上述实施例3中制备组合物的应用，含有该组合物的精华产品配方如下表1所示。

表1含有修复乳液的精华产品配方

制备的精华产品进行人体皮肤功效测试，寻求皮肤屏障受损的试用人员进行产品测试。

检测时间：试用产品28天、56天；

检测设备：VISA皮肤检测仪；

测试结果：

1.使用该产品后，96％的皮肤较为敏感、屏障受损试用者得到的明显的修复，红区(敏感区)减少平均约55％，功效情况见图5。

2.使用该产品后，80％的有一定细纹的测试人员，其细纹数量明显减少，具体见图6。

通过以上结果表明：含有修复乳液的精华能够修复受损皮肤、抵抗细纹，且安全性好，用于护肤品中具有显著的效果。

Claims (10)

1.一种皮肤修复乳液，其特征是，其组分及重量份为：非离子乳化剂0.2-2.0份、天然油脂0.5-10.0份、海带发酵液0.1-5.0份、欧洲李发酵液0.1-4.0份、氨基酸0.001-0.05份、多元醇0.5-8.0份。

2.如权利要求1所述的一种皮肤修复乳液，其特征是，其组分及重量份为：非离子乳化剂0.5-1.5份、天然油脂1.0-3.0份、海带发酵液0.5-1.0份、欧洲李发酵液0.5-1.0份、氨基酸0.002-0.005份、多元醇5.0-8.0份。

3.如权利要求1或2所述的一种皮肤修复乳液，其特征是，所述的氨基酸为丝氨酸、甘氨酸、丙氨酸、精氨酸中的一种或几种。

4.如权利要求1或2所述的一种皮肤修复乳液，其特征是，所述的天然油脂为霍霍巴油、山茶籽油、白池花籽油、甜杏仁油及紫草油中的一种或几种。

5.如权利要求1或2所述的一种皮肤修复乳液，其特征是，

所述的非离子乳化剂为聚山梨醇酯-80、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、聚甘油-10月桂酸酯、蔗糖月桂酸酯中的一种或两种；

所述的多元醇为甘油、辛甘醇、戊二醇、丁二醇、丙二醇、双丙甘醇和己二醇中的一种或两种。

6.如权利要求1或2所述的一种皮肤修复乳液，其特征是，所述欧洲李发酵液为采用乳酸菌发酵欧洲李果实，发酵液二次离心后得到的上清液。

7.如权利要求1或2所述的一种皮肤修复乳液，其特征是，所述海带发酵液是由枯草芽孢杆菌发酵海带，发酵液二次离心后得到的上清液。

8.权利要求1或2所述的皮肤修复乳液的制备方法，其特征是，

S1：按重量份称取各组分，将氨基酸加入到海带发酵液和欧洲李发酵液中溶解，形成液体一；

S2：将非离子乳化剂、多元醇和液体一搅拌混合，形成液体二；

S3：在一定搅拌转速下，将天然油脂缓慢加入到液体二中，形成液体三；

S4：将液体三在高速均质下，均质一定时间后，即得皮肤修复乳液。

9.权利要求1或2所述的皮肤修复乳液在皮肤修复、抗皱中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征是，添加到具有皮肤保湿修复的面膜、精华、乳液或者膏霜的皮肤护理品中。

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