CN110859798A - 一种含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液及其制备方法。本发明提供了人脐带间充质干细胞分泌物在制备抗衰修护面膜液中的应用。所述的人脐带间充质干细胞分泌物，其制备方法如下：将人脐带的华通氏胶剥离，然后剪成碎片，用无血清培养基培养，待细胞长出后，获取小于7代细胞的培养液，然后经冷冻干燥得到人脐带间充质干细胞分泌物。本发明提供一种含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液及其制备方法。该面膜液含有纳米脂质体包裹的人脐带间充质干细胞分泌物，其具有良好的美白、淡化细纹，补水保湿，延缓衰老的功效。此外该面膜液不含防腐剂和香精，对皮肤温和，没有额外的刺激，具有广阔的市场应用前景。

Description

一种含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液及其制 备方法

技术领域：

本发明属于医学美容领域，具体涉及一种含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液及其制备方法。

背景技术：

皮肤覆盖于人体表面，作为一层屏障抵御来自外界环境中的各种刺激对机体的伤害。皮肤由表皮、真皮、皮下组织构成，并含有丰富的神经、血管、淋巴管，是覆盖于人体最大的器官。皮肤的最外层的角质层结构由角质死细胞和脂质构成，形成致密的砖墙结构帮助人体抵御外来各种物理、化学、生物等刺激因素的伤害，同时它也阻挡化妆品中的有效成分顺利进入皮肤深层发挥作用。

“肤如脂，凝如雪”一直是东方女性永恒的追求。近年来，随着国家科技实力和国民经济实力的快速增长，越来越多的女性为了保持皮肤的年轻态花高价购买各种美容产品。然而在琳琅满目的化妆品市场中，有的厂家为了寻求经济效益，添加国家禁用成分以达到速效的目的来博取消费者的青睐，而这些成分本身就是敏化剂，能够加速皮肤的衰老。所以越来越多的人们开始关注安全、无毒副作用的天然活性抗衰修复剂。

间充质干细胞是一类具有自我复制和多潜能分化能力的原始细胞。近年来研究发现脐带来源的间充质干细胞具有极低的免疫原性、强大的免疫调节能力和归巢特性。目前脐带来源的间充质干细胞在治疗类风湿性关节炎、风湿性关节炎、二型糖尿病、骨损伤等多种临床疾病中表现出很大潜力，并且很多机构已经尝试将脐带来源的间充质干细胞用于美容行业。但是干细胞针剂制作程序复杂，运输困难以及干细胞的活性维持短等原因限制了干细胞的大规模应用。最近间充质干细胞来源的细胞因子及外泌体等无细胞疗法亦成为目前的研究热点之一，间充质干细胞能够分泌大量的生物活性物质，介导细胞之间的物质转运和信息传递，能够模拟间充质干细胞的功能。

发明内容：

本发明的第一个目的是提供人脐带间充质干细胞分泌物在制备抗衰修护面膜液中的应用。

间充质干细胞在培养过程中能够分泌出大量的生物活性物质，然而这些生物活性物质会随着时间的推移很快降解。鉴于此，我们将获取到的细胞上清迅速冷冻，随后通过真空冷冻干燥技术得到冻干产物。最后我们用纳米脂质体包裹冻干产物。该纳米脂质体包裹技术不仅能使生物活性物质长时间保持活性，此外纳米脂质体携带的生物活性物质能够轻易地穿透致密的角质层，到达皮肤深层发挥作用。

因此，本发明提供了人脐带间充质干细胞分泌物在制备抗衰修护面膜液中的应用。

优选，所述的人脐带间充质干细胞分泌物，其制备方法如下：将人脐带的华通氏胶剥离，然后剪成碎片，用无血清培养基培养，待细胞长出后，获取小于7代细胞的培养液，然后经冷冻干燥得到人脐带间充质干细胞分泌物。

优选，所述的冷冻干燥是将培养液冷冻10h，采用真空冷冻干燥机冻干。

本发明的第二个目的是提供一种抗衰修护面膜液，其是通过以下方法制备的：

将丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶用无菌水进行溶解，形成混合液，混合液过滤除去不溶颗粒物后，再添加含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体，混匀，即得抗衰修护面膜液；

所述的丙二醇的添加量为无菌水质量的1％-10％、甘露聚糖的添加量为无菌水质量的0.5％-5％、尿囊素的添加量为无菌水质量的0.1％-1％、氨基酸保湿剂的添加量为无菌水质量的0.5％-2％、透明汉生胶的添加量为无菌水质量的1％-3％；所述的含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体的添加量为混合液质量的5～10％。

优选，所述的含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体是通过以下方法制备的：将大豆卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇按物质的量之比7.00∶2.00∶0.40混合后超声，超声时间5.0min，然后再加入1g冻干产物后混匀，超声5min后即可得到纳米脂质体包裹的外泌体。

所述的人脐带间充质干细胞分泌物是通过以下方法制备的：

将人脐带的华通氏胶剥离，然后剪成碎片，用无血清培养基培养，待细胞长出后，获取小于7代细胞的培养液，然后冷冻干燥得到人脐带间充质干细胞分泌物。

本发明提供一种含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液及其制备方法。该面膜液含有纳米脂质体包裹的人脐带间充质干细胞分泌物，其具有良好的美白、淡化细纹，补水保湿，延缓衰老的功效。此外该面膜液不含防腐剂和香精，对皮肤温和，没有额外的刺激，具有广阔的市场应用前景。

具体实施方式：

以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

一、制备实验

步骤1：收集健康产妇的脐带到无菌管中，4℃环境下短时间内移入生物安全柜中，洗净血液后剪成2cm左右的小段，去除两条脐动脉和一条脐静脉后分离出华通氏胶，将分离得到的华通氏胶剪成3mm左右的碎片，加入无血清培养基(PALL无血清间充质干细胞培养基，购自赛默飞公司)，移入二氧化碳培养箱中培养，温度37℃，二氧化碳浓度为5％，细胞生长至细胞融合度达到90％以上时进行传代，传代到新的无血清培养基(PALL无血清间充质干细胞培养基，购自赛默飞公司)进行培养，如此进行传代培养，直至第7代，收集1-7代的细胞的培养液。

步骤2：获取到的培养液迅速冷冻10h，然后采用真空冷冻干燥机冻干。将冻干后的产物收集到无菌容器中，放置于超低温(-80℃)冰箱保存，由此得到含人脐带间充质干细胞分泌物。

步骤3：冻干产物需要经过纳米脂质体包裹，制作方法为：将大豆卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇3350按物质的量之比7.00∶2.00∶0.40混合后超声，超声时间5.0min，得到混合物，在3ml混合物中加入步骤2的含人脐带间充质干细胞分泌物1g后混匀，超声5min后即可得到纳米脂质体包裹的外泌体，即为含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体。制备出的脂质体的粒径为50nm左右，包封率达到70％以上。

步骤四：根据丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶的性质，溶解于无菌水中，得到混合液，将所得的混合液用滤膜过滤，以除去不溶颗粒物。所述的丙二醇的添加量为无菌水质量的5％、甘露聚糖的添加量为无菌水质量的3％、尿囊素的添加量为无菌水质量的0.5％、氨基酸保湿剂的添加量为无菌水质量的1％、透明汉生胶的添加量为无菌水质量的2％。丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶均购自广州威佳生物科技有限公司。

步骤五：向上述除去不溶颗粒物的混合液中加入含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体，混匀。脂质体的添加比例为混合液质量的5％-10％，得到面膜液。

步骤六：将制备好的面膜液(含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液)进行检验，合格后进行面膜罐装。

对照组1：在混合液中未加入含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体。

实验组1：在混合液中加入含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体，脂质体的添加比例为混合液质量的3％。

实验组2：在混合液中加入含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体，脂质体的添加比例为混合液质量的8％。

二、效果实验：

挑选240名40-45岁的健康女性进行为期30天的试验。将240人随机分为三组，每组80人，分别设置为对照组(不含脂质体)、实验组1(脂质体添加量为3％)，实验组2(脂质体添加量为8％)。在专业人员的监督下隔天使用一次，30天后测验试验人员的皮肤效果。实验以如下5个标准作为衡量。

显著：皮肤较之前细纹消失，皮肤更细腻，光滑有光泽。

良好：皮肤较之前细纹淡化，皮肤较光滑。

一般：皮肤较之前光泽度稍有提升，细纹仍然存在。

无效：皮肤较之前无改善，皮肤粗糙暗沉。

过敏：用后皮肤发痒或发红，或起小皮疹。

表1

组别	显著	良好	一般	无效	过敏
						对照组	2	13	42	23	0
实验组1	23	32	18	7	0
						实验组2	57	16	6	1	0

将得到的上述实验数据用平均数±标准差

表示，组间比较使用t检验，均使用SPSS20.0软件进行统计学处理。结果如表1所示，通过比较发现，上述实验数据具有明显的统计学差异，也就是说本发明的含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液具有良好的补水保湿，淡化细纹，延缓衰老的功效。脐带间充质干细胞上清中有很多成分，在本专利中发明人提取出上清中的最有效成分，并且通过做成脂质体。使得有效成分能长久保存，并且能够穿透皮肤发挥作用。

实施例2：

根据丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶的性质，溶解于无菌水中，得到混合液，其中丙二醇的添加量为无菌水质量的1％、甘露聚糖的添加量为无菌水质量的5％、尿囊素的添加量为无菌水质量的0.1％、氨基酸保湿剂的添加量为无菌水质量的2％、透明汉生胶的添加量为无菌水质量的1％。将所得的混合液用滤膜过滤，以除去不溶颗粒物。丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶均购自广州威佳生物科技有限公司。

步骤五：向上述去除不溶颗粒物的混合液中加入实施例1制备的含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体，混匀。脂质体的添加比例为混合液质量的5％，得到面膜液。

步骤六：将制备好的面膜液(含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液)进行检验，合格后进行面膜罐装。

实施例3：

根据丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶的性质，溶解于无菌水中，得到混合液，其中丙二醇的添加量为无菌水质量的10％、甘露聚糖的添加量为无菌水质量的0.5％、尿囊素的添加量为无菌水质量的1％、氨基酸保湿剂的添加量为无菌水质量的0.5％、透明汉生胶的添加量为无菌水质量的3％。将所得的混合液用滤膜过滤，以除去不溶颗粒物。丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶均购自广州威佳生物科技有限公司。

步骤五：向上述除去不溶颗粒物的混合液中加入实施例1制备的含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体，混匀。脂质体的添加比例为混合液质量的10％，得到面膜液。

步骤六：将制备好的面膜液(含人脐带间充质干细胞分泌物的抗衰修护面膜液)进行检验，合格后进行面膜罐装。

Claims (6)

1.人脐带间充质干细胞分泌物在制备抗衰修护面膜液中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的人脐带间充质干细胞分泌物，其制备方法如下：将人脐带的华通氏胶剥离，然后剪成碎片，用无血清培养基培养，待细胞长出后，获取小于7代细胞的培养液，然后经冷冻干燥得到人脐带间充质干细胞分泌物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的冷冻干燥是将培养液冷冻10h，采用真空冷冻干燥机冻干。

4.一种抗衰修护面膜液，其特征在于，是通过以下方法制备的：

将丙二醇、甘露聚糖、尿囊素、氨基酸保湿剂、透明汉生胶用无菌水进行溶解，形成混合液，混合液过滤除去不溶颗粒物后，再添加含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体，混匀，即得抗衰修护面膜液；

所述的丙二醇的添加量为无菌水质量的1％-10％、甘露聚糖的添加量为无菌水质量的0.5％-5％、尿囊素的添加量为无菌水质量的0.1％-1％、氨基酸保湿剂的添加量为无菌水质量的0.5％-2％、透明汉生胶的添加量为无菌水质量的1％-3％；所述的含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体的添加量为混合液质量的5～10％。

5.根据权利要求4所述的抗衰修护面膜液，其特征在于，所述的含人脐带间充质干细胞分泌物的脂质体是通过以下方法制备的：将大豆卵磷脂、胆固醇和聚乙二醇按物质的量之比7.00∶2.00∶0.40混合后超声，超声时间5.0min，然后再加入1g人脐带间充质干细胞分泌物后混匀，超声5min后即可得到纳米脂质体包裹的外泌体。

6.根据权利要求4所述的抗衰修护面膜液，其特征在于，所述的人脐带间充质干细胞分泌物是通过以下方法制备的：将人脐带的华通氏胶剥离，然后剪成碎片，用无血清培养基培养，待细胞长出后，获取小于7代细胞的培养液，然后冷冻干燥得到人脐带间充质干细胞分泌物。