CN112842988A - 一种含动物胎盘外泌体的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本申请属于生物技术领域,尤其涉及一种含动物胎盘外泌体的组合物及其制备方法和应用。本申请提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,按照质量百分比计算,包括:0.05~5%的动物胎盘外泌体冻干粉;1~20%的保湿剂;0.05~5%的微囊包裹物;0.01~2%的维生素E衍生物;水余量;其中,所述微囊包裹物选自大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、羟基化卵磷脂、环糊精和羟丙基环糊精中的一种或多种。本申请提供了一种含动物胎盘外泌体的组合物及其制备方法和应用,在储运过程中保留完好的动物胎盘外泌体囊泡结构;并且在使用过程中缓慢释放动物胎盘外泌体的内容物,实现动物胎盘外泌体的作用。
Description
技术领域
本申请属于生物技术领域,尤其涉及一种含动物胎盘外泌体的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
皮肤是人体表面的最大器官,直接与外界环境接触,抵抗外界氧化、干燥、紫外线等因素的侵害。又因为年龄、饮食、生活习惯和工作压力等内在因素的影响,皮肤细胞内的自由基增多,胶原蛋白流失,造成皮肤失水和营养不足,从而使得皮肤衰老,出现皱纹。一直以来,面对皮肤老化、皱纹生成的问题,人们运用各种手段来掩盖和治疗。
现代生物学、医学的相关研究发现,细胞外泌体可在人体上外用,可以透皮吸收,将功能性蛋白、天然保湿因子等物质导入细胞,能给皮肤补充充足的水分、胶原蛋白、纤维蛋白和刺激蛋白生成的细胞因子,促进胶原纤维、网状纤维、弹性纤维的形成,发挥高效、安全的促进皮肤修复、延缓皮肤衰老的作用。
由于细胞外泌体以囊泡形式存在,现有市面含有细胞外泌体的产品在生产和储运过程中,因为细胞外泌体会直接接触产品中其他成分,例如乳化剂、离子等物质,细胞外泌体的囊泡很容易发生破裂,导致其内部功效成分外流,被氧化或变性,降低护肤品功效。而使用护肤品时,细胞外泌体的囊泡结构在涂抹过程中极容易破摔,大多数细胞外泌体在短时间释放内部活性因子,会使功效成分很快被氧化或变性,导致护肤作用不能持久。此外,市场上的含细胞外泌体的产品存在低透明度的现象,无法在透明的产品中大量添加,限制其用途。
发明内容
有鉴于此,本申请提供了一种含动物胎盘外泌体的组合物及其制备方法和应用,在储运过程中保留完好的动物胎盘外泌体囊泡结构;并且在使用过程中缓慢释放动物胎盘外泌体的内容物,实现动物胎盘外泌体的作用。
本申请第一方面提供了一种含动物胎盘外泌体的组合物,按照质量百分比计算,包括:
其中,所述微囊包裹物选自大豆卵磷脂、氢化大豆磷脂、羟基化卵磷脂、环糊精和羟丙基环糊精中的一种或多种。
另一实施例中,所述微囊包裹物选自羟基化卵磷脂或/和羟丙基环糊精。
另一实施例中,所述微囊包裹物为羟基化卵磷脂。
另一实施例中,所述动物胎盘外泌体冻干粉选自马胎盘外泌体冻干粉、猪胎盘外泌体冻干粉、羊胎盘外泌体冻干粉、牛胎盘外泌体冻干粉和鹿胎盘外泌体冻干粉中的一种或多种。
另一实施例中,所述动物胎盘外泌体冻干粉选自牛胎盘外泌体冻干粉或/和羊胎盘外泌体冻干粉。
另一实施例中,所述动物胎盘外泌体冻干粉为牛胎盘外泌体冻干粉。
具体的,所述动物胎盘外泌体冻干粉为从动物胎盘中获得的外泌体冻干制得。
另一实施例中,所述保湿剂选自多元醇、植物多糖、透明质酸钠、PCA钠和神经酰胺中的一种或多种。
另一实施例中,所述保湿剂选自多元醇或/和透明质酸钠。
具体的,所述多元醇选自甘油、丁二醇、1,2-丁二醇、丙二醇、1,3-丙二醇、1,2-戊二醇、1,2-己二醇、双丙甘醇、聚乙二醇-8、聚乙二醇-10、聚乙二醇-14、聚乙二醇-32、山梨醇和葡萄糖中的一种或多种。
另一实施例中,所述保湿剂选自甘油或丁二醇。
另一实施例中,所述保湿剂为多元醇和透明质酸钠,所述多元醇和所述透明质酸钠质量比为(10~20):1。
另一实施例中,所述维生素E衍生物选自生育酚乙酸酯、生育酚磷酸酯、生育酚葡糖苷和生育酚聚醚中的一种或多种。
另一实施例中,所述维生素E衍生物选自生育酚乙酸酯或/和生育酚葡糖苷。
另一实施例中,所述维生素E衍生物为生育酚乙酸酯。
另一实施例中,所述组合物还包括氨基酸;
按照质量百分比计算,包括:
另一实施例中,所述氨基酸选自甘氨酸、色氨酸、苏氨酸、精氨酸、谷氨酸、聚谷氨酸、脯氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和丝氨酸中的一种或多种。
另一实施例中,所述组合物的透光率不低于同样测试条件下纯水透光率的60%。
另一实施例中,所述组合物还包括氨基酸;按照质量百分比计算,包括:
另一实施例中,所述组合物的透光率不低于同样测试条件下纯水透光率的70%。
另一实施例中,所述组合物还包括氨基酸;按照质量百分比计算,包括:
另一实施例中,所述组合物的透光率不低于同样测试条件下纯水透光率的80%。
本申请第二方面提供了所述组合物的制备方法,包括:
将保湿剂、微囊包裹物与水加热溶解混合,降温至20~50℃,制得第一混合物;
将动物胎盘外泌体冻干粉和维生素E衍生物混合,制得第二混合物;
将所述第二混合物和所述第一混合物混合,制得含动物胎盘外泌体的组合物。
另一实施例中,所述组合物的制备方法,包括:
将保湿剂、微囊包裹物与水混合,加热搅拌,温度为60℃~80℃,固体完全溶解后,降温至20~50℃,制得第一混合物;
将动物胎盘外泌体冻干粉、氨基酸和维生素E衍生物混合均匀,制得第二混合物;将第二混合物加入到已经降温的第一混合物中,搅拌均匀,得到含动物胎盘外泌体的组合物。
本申请第三方面公开上述含动物胎盘外泌体的组合物在制备皮肤抗皱产品中的应用。
具体的,本申请上述含动物胎盘外泌体的组合物用于制备抗皱和修复化妆品。
具体的,所述化妆品选自爽肤水、精华、原液、面膜、润肤露、乳液、面霜和眼霜中的一种。
另一实施例中,所述化妆品为精华。
另一实施例中,所述精华包括水、化妆品添加剂和外泌体组合物。
具体的,所述化妆品添加剂选自保湿剂、螯合剂、增稠剂、防腐剂、保湿剂、抗敏剂、适用于化妆品的香精和适用于化妆品的植物提取物中的一种或多种。
具体的,所述化妆品添加剂选自甘油、丁二醇、乙二胺四乙酸二钠、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、羟苯甲酯、苯氧乙醇、尿囊素、库拉索芦荟(ALOE BARBADENSIS)叶提取物和乙基己基甘油中的一种或多种。
本申请提供了一种含动物胎盘外泌体的组合物,包括动物胎盘外泌体冻干粉、保湿剂、微囊包裹物、维生素E衍生物和水,其中,微囊包裹物在动物胎盘外泌体外表面上,形成微囊结构,避免外泌体囊泡结构被破坏;另外,氨基酸可以提高微囊包裹物对动物胎盘外泌体的包裹效率。从而使动物胎盘外泌体的储运更简单方便,储运成本也得以降低。从本申请提供的实验数据可知,本申请的外泌体组合物在透射电镜下,动物胎盘外泌体以完整的微囊结构存在,微囊包裹物对动物胎盘外泌体具有良好的保护作用。可见,本申请的外泌体组合物在储运过程中,微囊包裹物会附着在动物胎盘外泌体的外表面上,形成微囊结构,避免外泌体囊泡结构被破坏;另外,氨基酸可以提高微囊包裹物对动物胎盘外泌体的包裹效率。本申请的外泌体组合物有极好的透光性,透光率不低于同样测试条件下纯水透光率的60%,可以直接用于透明体系的护肤品中,不产生浑浊状态。同时,本申请的外泌体组合物的原料来源广泛,制备方法简单,适合规模化生产。
此外,本申请提供的外泌体组合物可制备成不同形态的化妆品或护肤品,对于含本申请的外泌体组合物的产品,一方面,微囊结构使护肤品中的动物胎盘外泌体的囊泡结构不被破坏,外泌体在护肤品储运过程中长期保持活性;另一方面,在涂抹护肤品时微囊没有立即全部破坏,护肤品在皮肤上驻留期间微囊结构逐渐瓦解,动物胎盘外泌体中的活性物质缓慢释放到皮肤上,发挥护肤功效。如此可以实现持久性护肤效果。
具体实施方式
本申请提供了一种含动物胎盘外泌体的组合物及其制备方法和应用,用于解决现有技术中含有细胞外泌体的产品在生产、储运和使用过程中,细胞外泌体的囊泡容易发生破裂,导致其内部功效成分外流,被氧化或变性,降低护肤品功效,导致护肤作用不能持久的技术缺陷。
下面将对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
其中,以下实施例所涉及各原料均为市售通用产品;PCA钠为吡咯烷酮羧酸钠;涉及的紫外分光光度计是日本岛津UV-2700,透射电子显微镜是日本JEM-3200FS,皮肤测试仪为美国Visia;以下实施例所用马胎盘外泌体冻干粉、猪胎盘外泌体冻干粉、羊胎盘外泌体冻干粉、牛胎盘外泌体冻干粉和鹿胎盘外泌体冻干粉为市售通用产品。
对比例1
本申请实施例提供了一种对照外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表1中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物1。
紫外分光光度计检测,组合物1的透光率为79.13%。
表1
实施例1
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体的组合物,其制备方法如下:
按照表2中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物2。
紫外分光光度计检测,组合物2的透光率为78.79%。
表2
对比例2
本申请实施例提供了一种对照外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表3中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物3。
紫外分光光度计检测,组合物3的透光率为69.79%。
表3
实施例2
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表4中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物4。
紫外分光光度计检测,组合物4的透光率为85.16%。
表4
实施例3
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表5中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物5。
紫外分光光度计检测,组合物5的透光率为82.73%。
表5
实施例4
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表6中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物6。
紫外分光光度计检测,组合物6的透光率为81.48%。
表6
实施例5
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表7中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物7。
紫外分光光度计检测,组合物7的透光率为80.99%。
表7
实施例6
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表8中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物8。
紫外分光光度计检测,组合物8的透光率为96.48%。
表8
实施例7
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表9中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物9。
紫外分光光度计检测,组合物9的透光率为63.81%。
表9
实施例8
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表10中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物10。
紫外分光光度计检测,组合物10的透光率为92.85%。
表10
实施例9
本申请实施例提供了一种含动物胎盘外泌体组合物,其制备方法如下:
按照表11中各组合物成分,将A相混合,加热至80±2℃,搅拌至完全溶解后,降温至40±2℃;将B相混合均匀,加入到已经降温的A相中,搅拌均匀,得到组合物11。
紫外分光光度计检测,组合物11的透光率为74.83%。
表11
实施例10
本申请实施例提供了对组合物1~11中外泌体囊泡数量检测,步骤如下:
对上述制得的组合物1~11在室温条件下密封避光储存15天后,在透射电子显微镜放大5000倍的视野中,观察组合物的形貌,并统计其中完整囊泡的数量,取3次观测的完整囊泡数量平均值汇总,组合物1~11中的完整囊泡数量如表12所示。
表12
样品 | 完整囊泡数量(个) |
组合物1 | 0 |
组合物2 | 18.33 |
组合物3 | 6 |
组合物4 | 12.67 |
组合物5 | 15.67 |
组合物6 | 8.67 |
组合物7 | 16.33 |
组合物8 | 19.67 |
组合物9 | 9 |
组合物10 | 10.33 |
组合物11 | 21.67 |
从表12可知,组合物1中不含牛胎盘外泌体,完整囊泡数量为0;组合物2~5相比,完整囊泡数量多少顺序是组合物2>组合物5>组合物4>组合物3,这与组合物中羟基化卵磷脂的含量多少(组合物2>组合物5>组合物4>组合物3)相对应,说明羟基化卵磷脂对牛胎盘外泌体的囊泡结构具有保护作用。组合物2、组合物6和组合物7相比,完整囊泡数量多少顺序是组合物2>组合物7>组合物6,这与组合物中氨基酸的含量多少(组合物2>组合物7>组合物6)相对应,说明氨基酸对牛胎盘外泌体的囊泡结构具有保护作用。
实施例11
本申请实施例提供了采用组合物1制成的精华产品,具体制备方法如下:
按照表13中各组合物成分,将A相混合,加热至85±2℃,搅拌至完全溶解后,恒温30min后降温至40±2℃;将B相依次加入到已经降温的A相中,搅拌均匀;冷却至室温,得到精华Ⅰ。
表14
实施例12
本申请实施例提供了采用组合物2制成的精华产品,具体制备方法参照实施例11,区别在于本实施例中B相序号为8的原料替换为组合物2,其余步骤与实施例11一致,得到精华Ⅱ。
实施例13
本申请实施例提供了采用组合物3制成的精华产品,具体制备方法参照实施例12,区别在于本实施例B相序号为8的原料替换为组合物3,其余步骤与实施例11一致,得到精华Ⅲ。
实施例14
本申请实施例提供了采用组合物4制成的精华产品,具体制备方法参照实施例12,区别在于本实施例B相序号为8的原料替换为组合物4,其余步骤与实施例11一致,得到精华Ⅳ。
实施例15
本申请实施例提供了对上述四种精华的抗皮肤老化观察试验,具体步骤如下:
1、取上述实施例制得的精华Ⅰ、精华Ⅱ、精华Ⅲ和精华Ⅳ作为待测化妆品。
2、筛选80名皮肤出现皱纹的女性受试志愿者,年龄29~45岁,平均年龄34岁,均为同一写字楼的室内文职人员。受试期间志愿者不使用其他抗皱产品。选择受试者双脸颊的内眼角、嘴角与太阳穴三点连线范围作为试验区域。
3、由技术人员使用Visia皮肤测试仪,测定志愿者面部试验区域在涂抹化妆品前的皮肤皱纹、平整度。
4、随机将受试者均分为4组,每组20例。分别在试验区域使用实施例12~15的精华,每种精华每次使用量约0.8g,每天晚上20:00~22:00使用,至少驻留8小时。
5、受试者在连续使用化妆品的10、20和30天后,使用Visia皮肤测试仪测试皮肤纹理度。
6、统计受试者实验部位每次测得的数值,以第0天作为基准,对比分析皮肤皱纹、平整度,评价精华对皮肤纹理的改善情况。分别使用精华Ⅰ、精华Ⅱ、精华Ⅲ和精华Ⅳ30天后,数据统计的情况如表15所示。
表15
从表15的测试结果可以看出,精华Ⅱ和精华Ⅲ对皮肤的皱纹改善率和平整度改善率优于精华Ⅰ,说明本申请的含牛胎盘外泌体的组合物具有更明显的抗皱效果。精华Ⅱ对皮肤的皱纹改善率和平整度改善率优于精华Ⅲ,说明羟基化卵磷脂可以提高体系的抗皱效果。精华Ⅱ、精华Ⅲ和精华Ⅳ对皮肤的皱纹改善率和平整度改善率优劣顺序为精华Ⅱ>精华Ⅳ>精华Ⅲ,而精华Ⅱ中的羟基化卵磷脂多于精华Ⅳ,精华Ⅲ不含羟基化卵磷脂,说明羟基化卵磷脂可以提高体系的抗皱效果。
综上所述,本申请实施例给提供的组合物具有极好的透光性,透光率不低于同样测试条件下纯水透光率的60%,可以直接用于透明体系的护肤品中,不产生浑浊状态;相比于组合物1,组合物2~11中含有外泌体囊泡结构;相比于组合物3,组合物2和组合物4~11中外泌体囊泡结构完整,外泌体囊泡的保留率显著提高;相比于精华Ⅰ,精华Ⅱ、精华Ⅲ和精华Ⅳ对皱纹改善和平滑具有显著提高作用。
以上所述仅是本申请的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本申请原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本申请的保护范围。
Claims (10)
2.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述动物胎盘外泌体冻干粉选自马胎盘外泌体冻干粉、猪胎盘外泌体冻干粉、羊胎盘外泌体冻干粉、牛胎盘外泌体冻干粉和鹿胎盘外泌体冻干粉中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述动物胎盘外泌体冻干粉的蛋白含量不低于1000mg/kg。
4.根据权利要求1所述的组合物,其特征在于,所述保湿剂选自多元醇、植物多糖、透明质酸钠、PCA钠和神经酰胺中的一种或多种;所述维生素E衍生物选自生育酚乙酸酯、生育酚磷酸酯、生育酚葡糖苷和生育酚聚醚中的一种或多种。
5.根据权利要求1至4任意一项所述的组合物,其特征在于,还包括氨基酸;所述氨基酸的质量百分比为0.1~5%。
6.根据权利要求5所述的组合物,其特征在于,所述氨基酸选自甘氨酸、色氨酸、苏氨酸、精氨酸、谷氨酸、聚谷氨酸、脯氨酸、赖氨酸、瓜氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、亮氨酸和丝氨酸中的一种或多种。
9.一种权利要求1至8任意一项所述组合物的制备方法,其特征在于,包括:
将保湿剂、微囊包裹物与水加热溶解混合,降温至20~50℃,制得第一混合物;
将动物胎盘外泌体冻干粉和维生素E衍生物混合,制得第二混合物;
将所述第二混合物和所述第一混合物混合,制得外泌体组合物。
10.权利要求1至8任意一项所述含动物胎盘外泌体的组合物或权利要求9所述制备方法制得的组合物在皮肤抗皱中的应用。
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