JP2021084899A - 皮膚用保湿機能剤 - Google Patents
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Abstract
【課題】 本質的に皮膚の保湿機能を向上させることができる皮膚用保湿機能剤を提供すること。【解決手段】 豆乳を用いた培地で乳酸菌を共棲培養して生成される乳酸菌生産物質であって、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質のいずれかを含む乳酸菌生産物質からなる皮膚用保湿機能剤によって皮膚の保湿機能が高まり、経表皮水分損失量が減少して角層水分量が保たれ、乾燥肌を改善することができる。【選択図】 図１
Description
この発明は、皮膚の保湿機能を高めるための皮膚用保湿機能剤に関する。
表皮の水分量が低減すると、皮膚のバリア機能が低下してアトピー性皮膚炎を起こしたりするなど、様々な不具合が発生することは知られている。そのため、表皮からの水分の蒸発を抑制するために皮膚表面に軟膏などの外用剤を塗布することが行なわれている。
上記のような外用剤は、皮膚表面を覆って表皮層から外部への水分の通過を物理的に遮断するのであって、対処療法に過ぎなかった。そのため、外用剤は乾燥肌の本質的な治療にはなっていなかった。
この発明は、乾燥肌の本質的な改善ができる皮膚用保湿機能剤を提供することである。
この発明は、乾燥肌の本質的な改善ができる皮膚用保湿機能剤を提供することである。
第１の発明の皮膚用保湿機能剤を構成する乳酸菌生産物質は、豆乳培地で乳酸菌を共棲培養して得られたもので、その中に、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質のうち少なくともいずれか１つが含まれたものである。
なお、この乳酸菌生産物質には、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質のいずれかが含まれていればよく、ビタミンやアミノ酸などの機能性物質や担体、賦形剤、添加剤等が含まれていてもよい。
また、この発明の皮膚用保湿機能剤は、経口，非経口のいずれで摂取してもよい。非経口による摂取とは、静脈、筋肉、皮下、経鼻等による摂取であって経口以外の摂取をいう。
なお、この乳酸菌生産物質には、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質のいずれかが含まれていればよく、ビタミンやアミノ酸などの機能性物質や担体、賦形剤、添加剤等が含まれていてもよい。
また、この発明の皮膚用保湿機能剤は、経口，非経口のいずれで摂取してもよい。非経口による摂取とは、静脈、筋肉、皮下、経鼻等による摂取であって経口以外の摂取をいう。
第２の発明の皮膚用保湿機能剤を構成する乳酸菌生産物質には、トリリノレイン、ジアシルグリセロール及びリン脂質が含まれている。
これらトリリノレイン、ジアシルグリセロール及びリン脂質が相乗的に機能して、保湿機能を高めることができる。
これらトリリノレイン、ジアシルグリセロール及びリン脂質が相乗的に機能して、保湿機能を高めることができる。
第３の発明の皮膚用保湿機能剤を構成する乳酸菌生産物質は、１６種の乳酸菌の中から選択された共棲培養可能な複数の菌を用いて生成されたものである。
なお、上記１６種の乳酸菌を共棲培養した乳酸菌生産物質には、上記トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールのすべてが含まれていた。ただし、１６種のうちのどの乳酸菌が機能してトリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールを生成したのかは必ずしも明らかではない。この第３の発明では上記１６種の中から選択された乳酸菌を２種以上用いることが条件であって、トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールのすべてあるいはいずれかが含まれていればよい。
なお、上記１６種の乳酸菌を共棲培養した乳酸菌生産物質には、上記トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールのすべてが含まれていた。ただし、１６種のうちのどの乳酸菌が機能してトリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールを生成したのかは必ずしも明らかではない。この第３の発明では上記１６種の中から選択された乳酸菌を２種以上用いることが条件であって、トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールのすべてあるいはいずれかが含まれていればよい。
第４の発明の皮膚用保湿機能剤は、１６種の乳酸菌を用いて１次培養から３次培養まで培養した培養液を乳酸菌生産物質にしたので、トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールのすべてが含まれるとともに、トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロール以外の保湿機能成分が含まれると考えられる。
したがって、トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールの相乗的な機能に加えて、それら以外の保湿機能成分が機能してさらなる効果を期待できる。
したがって、トリリノレイン、リン脂質、ジアシルグリセロールの相乗的な機能に加えて、それら以外の保湿機能成分が機能してさらなる効果を期待できる。
この発明によれば、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質のうち少なくともいずれかを含む乳酸菌生産物質が皮膚の保湿機能を発揮して例えばアトピー性皮膚炎などの乾燥肌の本質的な改善ができる。
［実施形態］
この実施形態では、投与物によって６つのマウス群Ａ〜Ｆに分け、それらマウス群Ａ〜Ｆごとに経表皮水分損失量を測定するとともに、その測定結果を図１のグラフａ〜ｆに示したものであり、縦軸は経表皮水分損失量を示し、横軸は経過日数を示している。そして、グラフａはマウス群Ａの測定結果、グラフｂはマウス群Ｂの測定結果、グラフｃはマウス群Ｃの測定結果、グラフｄはマウス群Ｄの測定結果、グラフｅはマウス群Ｅの測定結果、グラフｆはマウス群Ｆの測定結果である。
この実施形態では、投与物によって６つのマウス群Ａ〜Ｆに分け、それらマウス群Ａ〜Ｆごとに経表皮水分損失量を測定するとともに、その測定結果を図１のグラフａ〜ｆに示したものであり、縦軸は経表皮水分損失量を示し、横軸は経過日数を示している。そして、グラフａはマウス群Ａの測定結果、グラフｂはマウス群Ｂの測定結果、グラフｃはマウス群Ｃの測定結果、グラフｄはマウス群Ｄの測定結果、グラフｅはマウス群Ｅの測定結果、グラフｆはマウス群Ｆの測定結果である。
なお、上記グラフにおける経表皮水分損失量とは、単位時間に単位面積の表皮から蒸散する水分量であって乾燥度を示す指標である。そして、この値が大きいほど乾燥肌であり、小さいほど健全な肌といえる。
また、マウス群Ａ〜Ｆのそれぞれは５匹のヘアレスマウスからなり、その内のマウス群Ａ〜Ｅには、乾燥肌を誘発する乾燥肌誘発飼料を４０日間給餌して乾燥肌にし、その後、以下に説明する投与物を３０日間投与したマウス群である。
一方、マウス群Ｆは標準飼料のみを給餌したマウス群である。
また、マウス群Ａ〜Ｆのそれぞれは５匹のヘアレスマウスからなり、その内のマウス群Ａ〜Ｅには、乾燥肌を誘発する乾燥肌誘発飼料を４０日間給餌して乾燥肌にし、その後、以下に説明する投与物を３０日間投与したマウス群である。
一方、マウス群Ｆは標準飼料のみを給餌したマウス群である。
上記マウス群Ａは、上記のように４０日間で乾燥肌にした後に、豆乳を培地にして後で説明する１６種の乳酸菌を共棲培養して得られた生産物質（以下「１６種生産物質」という）を３０日間投与したマウス群（以下「１６種投与マウス群Ａ」という）であって、図１のグラフａはこの１６種投与マウス群Ａの経表皮水分損失量の時系列的な推移を示している。
上記マウス群Ｂは、上記のように４０日間で乾燥肌にした後に、上記１６種生産物質からトリリノレインを主要素とする乳酸菌生産物質（以下「第１分画」という）を、３０日間投与したマウス群（以下「第１分画投与マウス群Ｂ」という）であって、図１のグラフｂは第１分画投与マウス群Ｂの経表皮水分損失量の時系列的な推移を示している。
上記マウス群Ｃは、上記のように４０日間で乾燥肌にした後に、上記１６種生産物質から抽出したジアシルグリセロールを主要素とする乳酸菌生産物質（以下「第２分画」という）を、３０日間投与したマウス群（以下「第２分画投与マウス群Ｃ」という）であって、図１のグラフｃは第２分画投与マウス群Ｃの経表皮水分損失量の時系列的な推移を示している。
上記マウス群Ｄは、上記のように４０日間で乾燥肌にした後に、上記１６種生産物質から抽出したリン脂質を主要素とする乳酸菌生産物質（以下「第３分画」という）を、３０日間投与したマウス群（以下「第３分画投与マウス群Ｄ」という）であって、図１のグラフｄは第３分画投与マウス群Ｄの経表皮水分損失量の時系列的な推移を示している。
上記マウス群Ｅは、上記のように４０日間で乾燥肌にした後に、保湿機能剤を投与せずに、エタノール１０〔％（w/w）〕を含む生理食塩水を３０日間投与したマウス群（以下「不健全肌マウス群Ｅ」という）であって、図１のグラフｅは不健全肌マウス群Ｅの経表皮水分損失量の時系列的な推移を示している。
また、上記マウス群Ｆは、乾燥肌を誘発しない標準飼料を給餌し、保湿機能剤を投与しない健全なマウス群（以下「健全肌マウス群Ｆ」という）であって、図１のグラフｆは健全肌マウス群Ｆの経表皮水分損失量の推移を示している。
上記図１のグラフａから、給餌前に５〔ｇ／ｍ２／ｈ〕前後だった経表皮水分損失量が、乾燥肌誘発飼料の給餌によって４０日後には３０〔ｇ／ｍ２／ｈ〕まで上昇して乾燥肌になっていることが分かる。
その後、１６種投与マウス群Ａは、１６種生産物質の投与したところ経皮水分損失量が下がり、グラフａから明らかなように３０日投与後にはグラフｆに示す健全肌マウス群に近い値に回復している。このことから上記１６種生産物質には乾燥肌を劇的に改善する保湿機能があることが分かった。
このように乾燥肌を劇的に改善できた１６種生産物質は、１６種の乳酸菌を組み合わせた複数のグループで１次培養し、その１次培養液同士で２次培養をし、さらに２次培養液を混合してその混合液を３次培養した培養液である。
その後、１６種投与マウス群Ａは、１６種生産物質の投与したところ経皮水分損失量が下がり、グラフａから明らかなように３０日投与後にはグラフｆに示す健全肌マウス群に近い値に回復している。このことから上記１６種生産物質には乾燥肌を劇的に改善する保湿機能があることが分かった。
このように乾燥肌を劇的に改善できた１６種生産物質は、１６種の乳酸菌を組み合わせた複数のグループで１次培養し、その１次培養液同士で２次培養をし、さらに２次培養液を混合してその混合液を３次培養した培養液である。
上記のように乾燥肌を劇的に改善する上記１６種生産物質は、保湿機能が備わっていることは図１のグラフａからも明らかである。そこで、この１６種生産物質中の成分を明らかにするために、上記１６種生産物質を分画した。
その結果、トリリノレインを主要素とする第１分画、ジアシルグリセロールを主要素とする第２分画、リン脂質を主要素とする第３分画を特定できた。
その結果、トリリノレインを主要素とする第１分画、ジアシルグリセロールを主要素とする第２分画、リン脂質を主要素とする第３分画を特定できた。
そこで、第１〜３分画のそれぞれを別々に、乾燥肌になったマウス群に投与し、肌の変化を測定した。
その結果は図１に示す通りである。
図１のグラフから、乾燥肌になったマウス群に各投与物を経口投与すると、第１〜３分画投与マウス群Ｂ，Ｃ，Ｄで、経表皮水分損失量の減少が確認でき、それは不健全肌マウス群Ｅより乾燥肌が改善されたことが分かるが、それらの効果はほぼ同等である。
このことからも明らかなように、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質のいずれかを投与しても保湿機能を発揮させることができる。
ただし、この経皮水分損失量の減少は、上記１６種投与マウス群Ａと、第１〜３分画投与マウス群Ｂ，Ｃ，Ｄとの間では、図１のグラフに示すように保湿効果に大きな差があることが分かる。
その結果は図１に示す通りである。
図１のグラフから、乾燥肌になったマウス群に各投与物を経口投与すると、第１〜３分画投与マウス群Ｂ，Ｃ，Ｄで、経表皮水分損失量の減少が確認でき、それは不健全肌マウス群Ｅより乾燥肌が改善されたことが分かるが、それらの効果はほぼ同等である。
このことからも明らかなように、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質のいずれかを投与しても保湿機能を発揮させることができる。
ただし、この経皮水分損失量の減少は、上記１６種投与マウス群Ａと、第１〜３分画投与マウス群Ｂ，Ｃ，Ｄとの間では、図１のグラフに示すように保湿効果に大きな差があることが分かる。
このように、第１〜３分画投与マウス群Ｂ，Ｃ，Ｄと１６種投与マウス群Ａとの効果に大きな差があるのは、上記１６生産物質がトリリノレイン、ジアシルグリセロール及びリン脂質を全て含むことからこれらの成分が相乗的に機能したか、あるいは、トリリノレイン、ジアシルグリセロール、リン脂質の相乗的な機能に加えて、１６生産物質に含まれる他の保湿機能成分が機能したものと推測することもできる。
なお、図２はマウス群Ａ〜Ｆの経過日数に対する角層水分量の推移を示すグラフであり、グラフａ〜ｆが各マウス群Ａ〜Ｆに対応する。
また、図３はマウス群Ａ〜Ｆの各投与物を３０日間投与した後の表皮厚の測定値を示すグラフである。
上記図２における角層水分量は健全性が高いほどその値が大きくなり、乾燥肌になるほどその値が小さくなる。また、図３における表皮厚は、健全性が高いほどその値が小さくなり、乾燥肌になるほど大きくなる。
また、図３はマウス群Ａ〜Ｆの各投与物を３０日間投与した後の表皮厚の測定値を示すグラフである。
上記図２における角層水分量は健全性が高いほどその値が大きくなり、乾燥肌になるほどその値が小さくなる。また、図３における表皮厚は、健全性が高いほどその値が小さくなり、乾燥肌になるほど大きくなる。
図２，３のグラフからは、角層水分量、表皮厚ともに、１６種生産物質を投与したマウス群Ａが最も効果が大きく、第１〜３分画投与マウス群Ｂ，Ｃ，Ｄも不健全マウス群Ｅと比べて乾燥肌が改善されていることが分かる。
［実施例］
以下に、上記各マウス群Ａ〜Ｄに投与する投与物となる乳酸菌生産物質についての実施例を説明する。
上記１６種生産物質は、１６種の乳酸菌を種々組み合わせて２４のグループを作成し、これらグループで１次〜３次共棲培養を行ない、最終培養液を滅菌して皮膚用保湿機能剤とするものである。
以下に、上記各マウス群Ａ〜Ｄに投与する投与物となる乳酸菌生産物質についての実施例を説明する。
上記１６種生産物質は、１６種の乳酸菌を種々組み合わせて２４のグループを作成し、これらグループで１次〜３次共棲培養を行ない、最終培養液を滅菌して皮膚用保湿機能剤とするものである。
１６種の乳酸菌は、Ｌ．アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、Ｌ．ブレビス（Lactobacillus brevis）、Ｌ．ジェンセニイ（Lactobacillus jensenii）、Ｌ．パラカゼイ（Lactobacillus paracasei subsp． paracasei）、Ｌ．ガセリー（Lactobacillus gasseri）、Ｌ．ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp．bulgaricus）、Ｌ．ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、Ｌ．カゼイ（Lactobacillus casei subsp． casei）、Ｌ．ラモナウサス（Lactobacillus rhamnosus）、Ｌ．デルブリッキィ（Lactobacillus delbrueckii subsp． delbrueckii）、Ｓ．サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）、Ｅ．フェシウム（Enterococcus faecium）、Ｌ．ラクチス（Lactococcus lactis）、Ｂ．ロンガム（Bifidobacterium longum）、Ｂ．ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、Ｂ．アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）である。
そして、グループ作成プロセスでは、上記乳酸菌を、２４のグループに分け、それらをグループ毎に継代培養するが、そのグループ分けは図４に示す通りである。
なお、図４は、上記グループ作成プロセスから、３次培養プロセスまでの各プロセスを示した図である。そして、図中の「Ｎｏ．」はグループ番号である。
すなわち、第１グループはＥ．フェシウムおよびＬ．ヘルベティカスで構成し、第２グループは、Ｅ．フェシウムおよびＬ．アシドフィラスで構成している。第３グループはＥ．フェシウムおよびＬ．ガセリーで構成し、第４グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスで構成している。
なお、図４は、上記グループ作成プロセスから、３次培養プロセスまでの各プロセスを示した図である。そして、図中の「Ｎｏ．」はグループ番号である。
すなわち、第１グループはＥ．フェシウムおよびＬ．ヘルベティカスで構成し、第２グループは、Ｅ．フェシウムおよびＬ．アシドフィラスで構成している。第３グループはＥ．フェシウムおよびＬ．ガセリーで構成し、第４グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスで構成している。
第５グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスで構成し、第６グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラス、Ｌ．ブレビス、Ｌ．パラカゼイで構成し、第７グループは、Ｂ．アドレセンティス単体で構成している。
第８グループは、Ｌ．デルブリッキィおよびＬ．ガセリーで構成し、第９グループはＬ．デルブリッキィ単体で構成し、第１０グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．ジェンセニイ、Ｌ．パラカゼイおよびＬ．ブレビスで構成し、第１１グループは、Ｌ．アシドフィラス単体で構成している。
第８グループは、Ｌ．デルブリッキィおよびＬ．ガセリーで構成し、第９グループはＬ．デルブリッキィ単体で構成し、第１０グループは、Ｅ．フェシウム、Ｌ．ジェンセニイ、Ｌ．パラカゼイおよびＬ．ブレビスで構成し、第１１グループは、Ｌ．アシドフィラス単体で構成している。
第１２グループは、Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーで構成し、第１３グループは、Ｌ．パラカゼイ単体で構成し、第１４グループは、Ｌ．ガセリー、Ｅ．フェシウムおよびＢ．ビフィダムで構成し、第１５グループは、Ｂ．ロンガム、Ｓ．サーモフィラスおよびＥ．フェシウムで構成している。第１６グループは、Ｌ．ガセリー単体で構成し、第１７グループは、Ｌ．ブルガリクスおよびＳ．サーモフィラスで構成している。
第１８グループは、Ｌ．ガセリー、Ｌ．ラクチス、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムで構成し、第１９グループは、Ｌ．ガセリー、Ｓ．サーモフィラスおよびＬ．ブルガリクスで構成し、第２０グループは、Ｌ．ラクチス単体で構成し、第２１グループは、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムで構成し、第２２グループは、Ｌ．ラモナウサス単体で構成し、第２３グループは、Ｌ．カゼイ単体で構成し、第２４グループは、Ｂ．ロンガム単体で構成している。
上記のようにした各グループを継代培養するとともに、それら培養液のうち、第１，２グループ同士、第３，４グループ同士、第５，６グループ同士、第７，８グループ同士、第９，１０グループ同士、第１１，１２グループ同士、第１３，１４グループ同士、第１５，１６グループ同士、第１７，１８グループ同士、第１９，２０グループ同士、第２１，２２グループ同士、第２３，２４グループ同士で共棲培養する。このプロセスが、図１中の（１）〜（１２）に示す、この発明の１次培養プロセスである。
さらに、図４の（１３）〜（１８）の２次培養プロセスで、上記第１，２グループと第３，４グループ、第５，６グループと第７，８グループ、第９，１０グループと第１１，１２グループ、第１３，１４グループと第１５，１６グループ、第１７，１８グループと第１９，２０グループ、第２１，２２グループと第２３，２４グループ同士とで共棲培養をする。
さらに、図４の（１９）の３次培養プロセスで、上記２次培養後の各グループの２次培養液を混合して、共棲培養するのが３次培養プロセスである。
さらに、図４の（１９）の３次培養プロセスで、上記２次培養後の各グループの２次培養液を混合して、共棲培養するのが３次培養プロセスである。
なお、上記グループ作成プロセスで作成した各グループの乳酸菌は次のようにして継代培養したものである。すなわち、各グループのそれぞれの乳酸菌は、それらを継代培養した場合にも、共棲状態を維持できることを予測しながら集合させたものである。
複数の乳酸菌が共棲状態を維持するとは、複数の種類の乳酸菌が同時に存在し、それぞれが活性を維持する共棲状態が存在することで、一方が、他方に影響を及ぼしたり、一方だけが生き残ったりする状態ではない。
複数の乳酸菌が共棲状態を維持するとは、複数の種類の乳酸菌が同時に存在し、それぞれが活性を維持する共棲状態が存在することで、一方が、他方に影響を及ぼしたり、一方だけが生き残ったりする状態ではない。
上記各乳酸菌グループは、様々な菌の組み合わせの中から、共棲可能な組み合わせを選択することによって形成している。
また、上記２４のグループを構成する乳酸菌の中には、同時に複数のグループに属する菌種も有る。これは、３次培養プロセスまでの共棲培養の過程で共棲状態が維持されることを考慮して菌種を組み合わせたためである。また、同一種の乳酸菌でも、株が異なるものも含まれている。
また、上記２４のグループを構成する乳酸菌の中には、同時に複数のグループに属する菌種も有る。これは、３次培養プロセスまでの共棲培養の過程で共棲状態が維持されることを考慮して菌種を組み合わせたためである。また、同一種の乳酸菌でも、株が異なるものも含まれている。
そして、各乳酸菌グループの培養培地は、日水製薬株式会社製のＧＡＭ半流動高層培地、ＢＬ寒天培地あるいは変法ＧＡＭ寒天培地からなる３種類の培地を、乳酸菌に応じて使い分けるとともに、これらの培地において、３２〔℃〕で１２時間培養した。その後、３７〔℃〕で１２時間培養し、さらに４０〔℃〕で２４時間培養した。グループ化した乳酸菌を上記のようにして継代培養するとともに、その培養液を５〔℃〕で冷蔵保存しておいた。
このようにして乳酸菌のグループを継代培養するとともに、グループ毎に同定をしたが、その同定試験は社団法人日本食品分析センターに依頼した。そして、その同定試験の概要は、各グループの検体を寒天平板培地に直接接種・培養し、優勢に生育した形状の異なる集落を釣菌してグループ毎に乳酸菌を分離し、この分離菌について形態観察、生理的性状試験および菌体内ＤＮＡのＧＣ含有量の測定を行い、次の文献を参考に同定したものである。
１．Sneath,P．H．A.,Mair,N．S.,Sharpe,M．Ｅ． and Holt,J．G． ： “Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology” Vol．2, （1986） Williams & Wilkins．
２．Holt,J．G., Krieg,N．R., Sneath,P．H．A., Staley,J．T． and Williams,S．T． ： “Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology”Ninth Edition（1994）Williams & Wilkins．
３．光岡知足：“腸内菌の世界”,（1984）叢文社．
４．辨野義巳：微生物6,3-14（1990）．
５．厚生省生活衛生局監修：“食品衛生検査指針-微生物編-”（1990）日本食品衛生協会．
６．Schleifer,K．H． and Kilpper-Balz,R. : Int.J.Syst.Bacteriol.,34,31-34（1984）．
２．Holt,J．G., Krieg,N．R., Sneath,P．H．A., Staley,J．T． and Williams,S．T． ： “Bergey’s Manual of Determinative Bacteriology”Ninth Edition（1994）Williams & Wilkins．
３．光岡知足：“腸内菌の世界”,（1984）叢文社．
４．辨野義巳：微生物6,3-14（1990）．
５．厚生省生活衛生局監修：“食品衛生検査指針-微生物編-”（1990）日本食品衛生協会．
６．Schleifer,K．H． and Kilpper-Balz,R. : Int.J.Syst.Bacteriol.,34,31-34（1984）．
上記同定の結果、図４に示す１６種の菌とその菌株とが特定され、それらが各グループ内で共棲状態を維持していることが確認された。
上記のようにして継代培養した２４のグループのうち、図４で隣り合うグループの乳酸菌を合わせて（１）〜（１２）の１次培養プロセスの共棲培養を行なった。そして、この１次培養プロセスでは、日水製薬株式会社製のＧＡＭ半流動高層培地、ＢＬ寒天培地あるいは変法ＧＡＭ寒天培地からなる３種類の培地を、１次培養用培地として使用するとともに、これら１次培養用培地を、乳酸菌に応じて使い分けた。
上記のようにして継代培養した２４のグループのうち、図４で隣り合うグループの乳酸菌を合わせて（１）〜（１２）の１次培養プロセスの共棲培養を行なった。そして、この１次培養プロセスでは、日水製薬株式会社製のＧＡＭ半流動高層培地、ＢＬ寒天培地あるいは変法ＧＡＭ寒天培地からなる３種類の培地を、１次培養用培地として使用するとともに、これら１次培養用培地を、乳酸菌に応じて使い分けた。
上記３種類のいずれかの１次培養用培地に対して、グループ化した乳酸菌を添加して１次培養を行なったが、例えば、上記のようにグループ化した乳酸菌の培地が、流動性が高い培地の場合であって、しかも、ビフィドバクテリウム菌属の菌を含んでいる場合には、１次共棲培養用培地に対して１〜１０〔％（w/w）〕の乳酸菌を添加した。ビフィドバクテリウム菌属の菌を含んでいないグループの場合には、同じく１次培養用培地に対して１〜１０〔％（w/w）〕の乳酸菌を添加した。
なお、上記１次培養用培地に対して乳酸菌を添加する場合に、図４の乳酸菌１〜２４の乳酸菌グループの培地が、固形性の高い培地の場合には、白金耳でつり上げた１回の量を１次培養用培地に添加した。
そして、上記のように乳酸菌を添加した１次培養用培地が３７〔℃〕でｐＨ値が４．６になるまで約６〜１２時間、乳酸菌を培養した。これが１次培養プロセスである。
なお、上記１６菌種のうちビフィドバクテリウム菌属に属する菌は、Ｂ．ロンガム、Ｂ．ビフィダム、Ｂ．アドレセンティスである。
そして、上記のように乳酸菌を添加した１次培養用培地が３７〔℃〕でｐＨ値が４．６になるまで約６〜１２時間、乳酸菌を培養した。これが１次培養プロセスである。
なお、上記１６菌種のうちビフィドバクテリウム菌属に属する菌は、Ｂ．ロンガム、Ｂ．ビフィダム、Ｂ．アドレセンティスである。
２次培養プロセスは、図４に示す（１３）〜（１８）のプロセスである。
この２次培養プロセスでは、２次培養用培地として豆乳にブドウ糖０．５〔％（w/w）〕、酵母エキス０．４〔％（w/w）〕を添加した。
この２次培養用培地に、上記１次培養プロセスが終了した乳酸菌を１次培養用培地ごと投入し、３７〔℃〕でｐＨ値が４．５５になるまで約６〜１０時間培養を行なう。上記１次培養用培地の投入量は１〜１０〔％（w/w）〕である。
なお、図４の（１３）〜（１８）のプロセスそれぞれで、上記２次培養用培地を用いるが、その２次培養用培地や添加要素は、どの乳酸菌グループについても全て同じにした。
この２次培養プロセスでは、２次培養用培地として豆乳にブドウ糖０．５〔％（w/w）〕、酵母エキス０．４〔％（w/w）〕を添加した。
この２次培養用培地に、上記１次培養プロセスが終了した乳酸菌を１次培養用培地ごと投入し、３７〔℃〕でｐＨ値が４．５５になるまで約６〜１０時間培養を行なう。上記１次培養用培地の投入量は１〜１０〔％（w/w）〕である。
なお、図４の（１３）〜（１８）のプロセスそれぞれで、上記２次培養用培地を用いるが、その２次培養用培地や添加要素は、どの乳酸菌グループについても全て同じにした。
また、図４に（１９）で示す３次培養プロセスでも、３次培養用培地として豆乳にブドウ糖０．５〔％（w/w）〕、酵母エキス０．４〔％（w/w）〕を添加した。このようにした３次培養用培地に、２次培養が終了した全ての乳酸菌を２次培養用培地ごと投入した。このとき、投入する２次培養用培地は、３次培養用培地に対して１〜１０〔％（w/w）〕である。
そして、３２〔℃〕で２４時間し、次に４０〔℃〕で４８時間、さらに３７〔℃〕で４８時間培養した。
そして、３２〔℃〕で２４時間し、次に４０〔℃〕で４８時間、さらに３７〔℃〕で４８時間培養した。
上記のようにして３次培養プロセスを終了した乳酸菌と培地とからなる最終培養液を、８５〔℃〕以上で加熱して滅菌した。このように滅菌された最終培養液が上記１６種生産物質である。
このようにした１６種生産物質を上記マウス群Ａに投与し、その結果、図１〜３のグラフに示す効果を確認した。
このようにした１６種生産物質を上記マウス群Ａに投与し、その結果、図１〜３のグラフに示す効果を確認した。
また、上記１６種生産物質から分画したトリリノレインを主要素とする第１分画を上記マウス群Ｂに３０日間投与し、その結果、図１〜３のグラフに示す効果を確認した。
さらに、上記１６種生産物質から分画したジアシルグリセロールを主要素とする第２分画を上記マウス群Ｃに３０日間投与し、その結果、図１〜３のグラフに示す効果を確認した。
また、上記１６種生産物質から分画したリン脂質を主要素とする第３分画を上記マウス群Ｄに３０日間投与し、その結果、図１〜３のグラフに示す効果を確認した。
なお、マウス群に給餌する上記乾燥肌誘発飼料には日本農産製の飼料ＨＲ−ＡＤを用い、標準飼料には日本農産製のＭＲストックを用いた。
さらに、上記１６種生産物質から分画したジアシルグリセロールを主要素とする第２分画を上記マウス群Ｃに３０日間投与し、その結果、図１〜３のグラフに示す効果を確認した。
また、上記１６種生産物質から分画したリン脂質を主要素とする第３分画を上記マウス群Ｄに３０日間投与し、その結果、図１〜３のグラフに示す効果を確認した。
なお、マウス群に給餌する上記乾燥肌誘発飼料には日本農産製の飼料ＨＲ−ＡＤを用い、標準飼料には日本農産製のＭＲストックを用いた。
乾燥肌の本質的な改善をする、アトピー性皮膚炎などの保湿機能剤として最適である。
Claims (4)
- 豆乳を培地として乳酸菌を共棲培養し、トリリノレイン、ジアシルグリセロール及びリン脂質のうちの少なくともいずれかを含む乳酸菌生産物質からなる皮膚用保湿機能剤。
- 上記乳酸菌生産物質は、トリリノレイン、ジアシルグリセロール及びリン脂質を含む請求項１に記載の皮膚用保湿機能剤。
- 上記乳酸菌は、
Ｂ．ロンガム（Bifidobacterium longum）、Ｂ．ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、Ｂ．アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、
Ｌ．アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、Ｌ．ブレビス(Lactobacillus brevis)、Ｌ．ジェンセニイ（Lactobacillus jensenii）、Ｌ．パラカゼイ(Lactobacillus paracasei subsp. paracasei)、Ｌ．ガセリー（Lactobacillus gasseri）、Ｌ．ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus）、Ｌ．ヘルベティカス（Lactobacillus helveticus）、Ｌ．カゼイ（Lactobacillus casei subsp. casei）、Ｌ．ラモナウサス（Lactobacillus rhamnosus）、Ｌ．デルブリッキィ（Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii）、
Ｓ．サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）、Ｅ．フェシウム(Enterococcus faecium)、Ｌ．ラクチス（Lactococcus lactis）の１６菌種のいずれかであって共棲培養可能な複数の乳酸菌である請求項１または２に記載の皮膚用保湿機能剤。 - 上記乳酸菌生産物質は、
Ｅ．フェシウムおよびＬ．ヘルベティカスを第１グループ、
Ｅ．フェシウムおよびＬ．アシドフィラスを第２グループ、
Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーを第３グループ、Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスを第４グループ、
Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラスおよびＬ．ブレビスを第５グループ、
Ｅ．フェシウム、Ｌ．アシドフィラス、Ｌ．ブレビス、Ｌ．パラカゼイを第６グループ、
Ｂ．アドレセンティス単体を第７グループ、
Ｌ．デルブリッキィおよびＬ．ガセリーを第８グループ、
Ｌ．デルブリッキィ単体を第９グループ、
Ｅ．フェシウム、Ｌ．ジェンセニイ、Ｌ．パラカゼイおよびＬ．ブレビスを第１０グループ、
Ｌ．アシドフィラス単体を第１１グループ、
Ｅ．フェシウムおよびＬ．ガセリーを第１２グループ、
Ｌ．パラカゼイ単体を第１３グループ、
Ｌ．ガセリー、Ｅ．フェシウムおよびＢ．ビフィダムを第１４グループ、
Ｂ．ロンガム、Ｓ．サーモフィラスおよびＥ．フェシウムを第１５グループ、
Ｌ．ガセリーを単体で第１６グループ、
Ｌ．ブルガリクスおよびＳ．サーモフィラスを第１７グループ、
Ｌ．ガセリー、Ｌ．ラクチス、Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムを第１８グループ、
Ｌ．ガセリー、Ｓ．サーモフィラスおよびＬ．ブルガリクスを第１９グループ、
Ｌ．ラクチスを単体で第２０グループ、
Ｌ．ガセリーおよびＥ．フェシウムを第２１グループ、
Ｌ．ラモナウサスを単体で第２２グループ、
Ｌ．カゼイを単体で第２３グループ、
Ｂ．ロンガムを単体で第２４グループとし、
それぞれのグループ毎の培養液のうち、第１，２グループ同士、第３，４グループ同士、第５，６グループ同士、第７，８グループ同士、第９，１０グループ同士、第１１，１２グループ同士、第１３，１４グループ同士、第１５，１６グループ同士、第１７，１８グループ同士、第１９，２０グループ同士、第２１，２２グループ同士、第２３，２４グループ同士で１次培養し、
第１，２グループと第３，４グループ、第５，６グループと第７，８グループ、第９，１０グループと第１１，１２グループ、第１３，１４グループと第１５，１６グループ、第１７，１８グループと第１９，２０グループ、第２１，２２グループと第２３，２４グループ同士とで２次培養し、
上記２次培養後の各２次培養液を混合した混合液を用いて３次培養した培養液である請求項１または２に記載の皮膚用保湿機能剤。
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|---|
| アグリバイオ, vol. 3, no. 9, JPN6023015172, 31 August 2019 (2019-08-31), pages 886 - 895, ISSN: 0005038399 * |
| 日 本薬学会年会要旨集(CD-ROM), vol. 139, JPN6023015173, 5 March 2019 (2019-03-05), pages 23 - 258, ISSN: 0005038400 * |
| 日 本薬学会年会要旨集(CD-ROM), vol. 139, JPN6023015174, 5 March 2019 (2019-03-05), pages 21 - 02, ISSN: 0005038401 * |
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