JP5254682B2 - 経口摂取用皮膚性状改善剤 - Google Patents
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この外的因子の代表的なものとしては、紫外線を例示することができる。紫外線は、従来、生体内での骨形成に関与するビタミンDの生成に必要とされていたが、紫外線の過剰な暴露が皮膚の炎症や免疫抑制、酸化、DNA損傷等を引き起こし、その結果、特定の皮膚癌を誘導したり、或いはシワ形成や弾力性の低下を招くなど、皮膚の老化を速めるといった種々の問題を引き起こすことが報告されるようになり、これを防止する方法の必要性が生じている。
例えば、皮膚の免疫機能のバランスを保つためにラクトバチルス・ジョンソニイやラクトバチルス・パラカゼイ等乳酸菌を使用する方法(特許文献3)が知られている。
また、皮膚の光防護のために、ラクトバチルス・ジョンソニイやラクトバチルス・パラカゼイの乳酸菌とカロテノイド誘導体又は酵母とを併用した経口摂取可能な組成物、更に当該乳酸菌等にビフィドバクテリウム・アドレセンティスを配合した経口用組成物が報告されているが、これら組成物の薬理試験方法及び薬理データは全く示されていない(特許文献4及び5)。
また、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ クレモリスH−61株の乳酸菌を含有する皮膚潰瘍発生抑制剤(特許文献6)、ラクトバチルス・ヘルベティカスにより乳を発酵させて得られる発酵乳ホエーを有効成分として含む経口摂取用保湿剤(特許文献7)等が知られている。
また、本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌がビフィドバクテリウム・ブレーベである上記記載の皮膚性状改善剤を提供するものである。
また、本発明は、ビフィドバクテリウム属細菌が、ビフィドバクテリウム・ブレーベYIT4065株(FERM BP-6223)である上記記載の皮膚性状改善剤を提供するものである。
また、本発明の皮膚性状改善剤は、経口摂取可能なビフィドバクテリウム属細菌を有効成分として含有しているので安全性が高く、継続的な摂取を実現可能とし、しかもその菌の状態は生死に関係なく上記作用効果を発揮するので様々な指向に応じて摂取時の形態を設定することができ、経口用医薬品や飲食品として有用である。
本発明の皮膚性状改善剤の有効成分として用いるビフィドバクテリウム属細菌としては、所望の皮膚性状改善効果、特に紫外線の照射を受けることによって生じる各皮膚障害に対する改善または予防効果を有するものであって、経口的に摂取可能であれば特に制限されることはない。
上記紫外線による皮膚障害の改善または予防としては、具体的には、皮膚の肥厚、皮膚の弾力性の低下、皮膚のキメの減少、皮膚のシワ形成及び経表皮水分蒸散量の増加等に対する抑制、改善や予防が挙げられる。
このビフィドバクテリウム・ブレーベYIT4065株は、ヒトの腸内から単離され、整腸作用などの生理活性を有し、古くから発酵乳等の製造に用いられてきたものである。また、同菌株は、独立行政法人特許微生物寄託センターにFERM BP-6223として寄託されている(原寄託日:平成8(1996)年2月29日)。
例えば、本発明に用いるビフィドバクテリウム属細菌は、当該細菌の種菌を増殖可能な培地に接種して培養し、培養後遠心分離やろ過等の菌体を単離・精製する手段を用いて調製することができる。また、前記したとおり、当該細菌は、得られる生菌体をそのままで使用できる他、菌体を凍結乾燥した物、生菌体に加熱処理やアルコール処理等を施した死菌体或いは更にそれらを粉砕等の加工した物に調製し、使用できる。
また、ビフィドバクテリウム属細菌の調製の際に増殖可能な培地として経口的に摂取可能な培地を用いる場合には、当該細菌を含む培養物をそのまま或いは加熱処理などの加工処理を施したものを本発明の皮膚性状改善剤の有効成分として使用してもよい。
また、本発明に用いるビフィドバクテリウム属細菌は、後記実施例に示すように、生菌体及び/又は死菌体の状態に関係なく、経口的に摂取することにより、上記所望の効果を得ることができる。そのため、本発明で用いるビフィドバクテリウム属細菌は、必ずしも全て生菌体として用いる必要はなく、保存等による内外的な要因により、死滅した菌体を用いても上記所望の効果を得ることができるので、種々の加工を施した医薬用または飲食用の形態とすることができる。
例えば、上記菌株またはその加工物等に、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸等の賦形剤、水、エタノール、プロパノール、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、リン酸カリウム、ポリビニルピロリドン等の結合剤、アルギン酸ナトリウム、カテキン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム等の崩壊剤、グリセリン、デンプン等の保湿剤、精製タルク、ステアリン酸塩、ポリエチレングリコール等の滑沢剤等を加え、常法により顆粒剤、錠剤、カプセル剤等を製造することができる。更に、錠剤については、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば、糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠或いは二重錠、多重錠とすることもできる。
このような乳酸菌としては、ラクトバチルス・アシドフィルス(Lactobacillus acidophilus)、ラクトバチルス・ブレビス(Lactobacillus brevis)、ラクトバチルス・コリニフォルミス(Lactobacillus coryniformis)、ラクトバチルス・カルバタス(Lactobacillus curvatus)、ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus casei)、ラクトバチルス・デルブルッキィ・サブスピーシーズ ラクチス(Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis)、ラクトバチルス・デルブルッキィ・サブスピーシーズ ブルガリカス(Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus)、ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus fermentum)、ラクトバチルス・ガリナラム(Lactobacillus gallinarum)、ラクトバチルス・ガセリ(Lactobacillus gasseri)、ラクトバチルス・ヘルベティカス(Lactobacillus helveticus)、ラクトバチルス・ジョンソニイ(Lactobacillus johnsonii)、ラクトバチルス・ケフィール(Lactobacillus kefiri)、ラクトバチルス・マリ(Lactobacillus mali)、ラクトバチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)、ラクトバチルス・ペントーサス(Lactobacillus pentosus)、ラクトバチルス・パラカゼイ(Lactobacillus paracasei)、ラクトバチルス・サケイ(Lactobacillus sakei)、ラクトバチルス・ゼアエ(Lactobacillus zeae)等のラクトバチルス属細菌、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ ラクチス(Lactococcus lactis subsp. lactis)、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ クレモリス(Lactococcus lactis subsp. cremoris)、ラクトコッカス・プランタラム(Lactococcus plantarum)等のラクトコッカス属細菌、ロイコノストック・メセンテロイデス・サブスピーシーズ クレモリス(Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris)、ロイコノストック・ラクチス(Leuconostoc lactis)等のロイコノストック属細菌、ストレプトコッカス・サーモフィルス(Streptococcus thermophilus)等のストレプトコッカス属細菌、ペディオコッカス・アシディラクティシ(Pediococcus acidilactici)、ペディオコッカス・ペントサセウス(Pediococcus pentosaceus)、ペディオコッカス・ハロフィラス(Pediococcus halophilus)等のペディオコッカス属細菌、エンテロコッカス・フェシウム(Enterococcus faecium)、エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis)等のエンテロコッカス属細菌を例示することができる。これらは、単独または2種以上併用してもよい。
また、本発明の皮膚性状改善剤の摂取開始時期や摂取期間等は特に制限はなく、紫外線照射に伴う皮膚障害の発生前後に経口的に摂取すればよいが、十分な効果を得るためには、紫外線の照射に伴う皮膚障害の発生等の有無に問わず、継続的に経口摂取することが好ましい。
(皮膚性状改善剤の調製1)
酵母エキス1%と、リン酸一カリウム10%、リン酸ニカリウム20%、酢酸ナトリウム30%及び硫酸アンモニウム30%を含むミネラル液1%と、乳糖3%と、乳蛋白質5%とで調製した培地を2Lコルベンに1.5L作製し、121℃で15分間加熱殺菌した。この培地にビフィドバクテリウム・ブレーベYIT4065株(FERM BP-6223)を1%接種し、水酸化ナトリウムでpHを5.5に保持しながら36℃でおよそ20時間嫌気的に培養して培養液を得た。この培養液を15,000×Gで遠心分離し、ビフィドバクテリウム属細菌の菌体を集菌した。
次に、乳蛋白質8%と糖質4%を含む分散液を100ml調製し、121℃で15分間加熱殺菌した。これに、集菌したビフィドバクテリウム属細菌の菌体を湿重量当り15%分散させ、常法により凍結乾燥してビフィドバクテリウム・ブレーベYIT4065株(FERM BP-6223)の凍結乾燥菌体を得た。この凍結乾燥菌体を1.0×1010cfu/mlとなるように生理食塩水10mlに懸濁し、以下の検証に供した。
(皮膚性状改善効果の検証1)
ヘアレスマウス(Hos:HR-1、メス、5週齢)を1週間馴化させた後、5匹ずつ合計3群に分けた。なお、UV+は紫外線照射有り、UV−は紫外線照射無しと、紫外線照射の有無を示す。
1:ブランク(UV−、生食水)
2:対照群(UV+、生食水)
3:菌体投与群(UV+、菌体液)
ブランクと対照群には生理食塩水を、菌体投与群には、実施例1で調製した凍結乾燥菌体懸濁液をそれぞれ胃ゾンデにより18日間0.1ml/day経口投与した。投与開始15日目から対照群および菌体投与群には紫外線照射装置(東芝SE-FL-20)により、40mJ/cm2/dayで紫外線を4日間(投与開始15〜18日)照射した。
投与開始19日目に各群について、以下により、皮膚の厚さ、弾力性、キメ、シワ及び経表皮水分蒸散量を測定し、皮膚性状を検証した。その結果を図1〜5に示す。
なお、凍結乾燥菌体懸濁液投与期間中のマウスの体重変化は、生理食塩水を投与した群と比較して有意な差は認められなかったため、凍結乾燥菌体懸濁液投与によるマウスの生育や健康状態に対する影響はないものと考えられた。
皮膚の厚さは、thickness guage(Digimatic indicator 543,Mitutoyo)を用いて、また、皮膚の弾力性は、Cutometer SEM575(Courage+khazaka electronic GmbH)を用いてそれぞれ測定した。
マウスを台に固定し、背部皮膚から不透明の即乾性シリコンゴム(SILFLO、Flexico Developments)を塗布してネガティブレプリカを台紙に固定して作製した。次いで、常法に従って、ネガティブレプリカを30度の角度で落射照明して画像を入力し、二値化後、画像解析を行い、皮溝・皮丘数と面積比率を求めた。
なお、皮溝・皮丘数は、キメに関する指標であり、一定距離当たりにキメが何本存在するかを示す。また、面積比率は、シワに関する指標であり、一定面積当たりにシワが何%存在するかを示す。
皮膚における経表皮水分蒸散量は、Tewa meter TM210(Courage+khazaka electronic GmbH)を用いて測定した。
以上の通り、ビフィドバクテリウム属細菌を経口的に摂取することにより、紫外線照射によって生じる皮膚の肥厚、弾力性の低下、キメの減少、シワ形成及び経表皮水分蒸散量の増加等の皮膚性状の悪化を有意に改善する効果が認められた。
(皮膚性状改善効果の検証2)
実施例1と同様の方法でビフィドバクテリウム属細菌を培養し、菌体を集菌した。この菌体を1.0×1010cfu/mlとなるように生理食塩水に懸濁し、菌体懸濁液とした。実施例1で調製した菌体懸濁液に代えてこの菌体懸濁液を用いた以外は、実施例2と同様の方法により、皮膚性状を検証した。その結果を下表1に示す。
(皮膚性状改善剤の調製2)
実施例1と同様の方法で分散液を用いて調製したビフィドバクテリウム・ブレーベYIT4065株(FERM BP-6223)の凍結乾燥菌体を得た。この凍結乾燥菌体を1.0×1010cfu/mlとなるように生理食塩水に懸濁し、生菌体液とした。また、この生菌体液を100℃で30分間加熱したものを死菌体液とし、それぞれ以下の検証に供した。
(皮膚性状改善効果の検証3)
ヘアレスマウス(Hos:HR-1、メス、5週齢)を一週間馴化させた後、5匹ずつ合計4群に分けた。なお、UV±は、前述のとおり紫外線照射の有無を示す。
1:ブランク(UV−、生食水)
2:対照群(UV+、生食水)
3:生菌投与群(UV+、生菌体液)
4:死菌投与群(UV+、死菌体液)
ブランクおよび対照群には生理食塩水を、生菌および死菌投与群には、実施例4で調製した生菌体懸濁液および死菌体懸濁液をそれぞれ胃ゾンデにより14日間0.1ml/day経口投与した。投与開始11日目から対照群、生菌および死菌投与群には紫外線照射装置(東芝SE-FL-20)により、40mJ/cm2/dayで紫外線を4日間(投与開始11〜14日)照射した。
投与開始15日目に各群について、前記実施例2と同様に、皮膚の厚さ、弾力性、キメ、シワ及び経表皮水分蒸散量を測定し、皮膚性状を検証した。その結果を図6〜10に示す。
このことから、本発明の皮膚性状改善剤は、有効成分として含有するビフィドバクテリウム属細菌の生死状態に関係なく、経口的に摂取することにより、紫外線照射によって生じる皮膚の肥厚、弾力性の低下、キメの減少、シワ形成及び経表皮水分蒸散量の増加等の皮膚性状の悪化を有意に改善する効果が得られることが確認された。
(皮膚性状改善効果の検証4)
ヘアレスマウス(Hos:HR-1、メス)を一週間馴化させた後、以下の通り、紫外線照射前の投与日数に応じた3系統で、5匹ずつ対照群と生菌投与群の2群に分けた。なお、UV+は、前述のとおり紫外線照射有りを示す。
前投与期間0日〔投与開始直後から4日間UV照射〕
1:対照群(UV+、生食)
2:生菌投与群(UV+、生菌体液)
前投与期間5日〔投与開始6日目から4日間UV照射〕
3:対照群(UV+、生食)
4:生菌投与群(UV+、生菌体液)
前投与期間10日〔投与開始11日目から4日間UV照射〕
5:対照群(UV+、生食)
6:生菌投与群(UV+、生菌体液)
対照群には生理食塩水を、生菌投与群には、実施例4で調製した生菌体懸濁液をそれぞれ胃ゾンデにより各系統の投与日数に応じて、0.1ml/day経口投与した。各群、設定した紫外線照射前の投与日数が経過した後、試料の投与と並行して紫外線照射装置(東芝SE-FL-20)により、40mJ/cm2/dayで紫外線を4日間照射した。
紫外線照射期間終了後、各群について、前記実施例2と同様に、皮膚の厚さ、弾力性、キメ、シワ及び経表皮水分蒸散量を測定し、皮膚性状を検証した。なお、皮膚性状の測定は、全ての系統でマウスが8週齢となるように行った。
その結果を図11〜15の各(A)に示す。また、紫外線照射前投与期間別に比較した結果を図11〜15の各(B)に示す。
Claims (5)
- ビフィドバクテリウム・ブレーベを有効成分として含む、紫外線照射によって引き起こされる皮膚障害に対する改善又は予防のための経口摂取用皮膚性状改善剤(ただし飲食品を除く)。
- 紫外線照射によって引き起こされる皮膚障害が、皮膚の肥厚、皮膚の弾力性低下、皮膚のキメの減少、皮膚のシワ形成及び経表皮水分蒸散量の増加から選ばれる1種以上である請求項1に記載の皮膚性状改善剤。
- 紫外線照射によって引き起こされる皮膚障害が、皮膚のシワ形成である請求項1又は2記載の皮膚性状改善剤。
- 紫外線照射によって引き起こされる皮膚障害が、経表皮水分蒸散量の増加である請求項1又は2記載の皮膚性状改善剤。
- ビフィドバクテリウム・ブレーベが、生菌体及び/又は死菌体である請求項1〜4のいずれか1項記載の皮膚性状改善剤。
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